DE2008493C3 - Hematological control fluid - Google Patents
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Description
Die Erfindung betrifft eine hämatologische Kontroll- jo flüssigkeit zur Verwendung bei hämatologischen Diagnosen, insbesondere als Bezugskontrollmittel für eine Reihe von hämatologischen Routinebestimmungen.The invention relates to a hematological control jo liquid for use in hematological diagnoses, in particular as a reference control agent for a Series of routine haematological determinations.
Bisher bestand in der Hämatologie ein Mangel an stabilen Kontrollmitteln für hämatologische Bestimmungen. Mit dem Aufkommen von automatisierten Vorrichtungen, die in der Lage sind, hämatologische Mehrfachbestimmungen durchzuführen, entwickelte sich ein Bedarf an Bezugsproben für manuelle und maschinelle Analysen. miHeretofore, there has been a lack of stable control means for hematological determinations in hematology. With the advent of automated devices that are capable of hematological To carry out multiple determinations, a need developed for reference samples for manual and machine analysis. mi
In der US-PS 34 06 121 wird eine stabile Suspension roter menschlicher Blutzellen zur Verwendung als Zählstandard beschrieben, worin ein Stabilisierungsmedium verwendet wird, das im wesentlichen aus einer Osmiumtetraxid enthaltenden Kochsalzlösung besteht. > Eine solche Flüssigkeit kann jedoch nicht als Bezugskontrolle zum Zählen von weißen menschlichen Blutzellen dienen.In US-PS 34 06 121 is a stable suspension human red blood cells for use as a counting standard, wherein a stabilizing medium is used, which consists essentially of a saline solution containing osmium tetraxide. > However, such a liquid cannot be used as a reference control for counting white human Serve blood cells.
In der US-PS 3412 037 wird ein Verfahren zur Herstellung eines stabilisierten Standards zur Kalibrierung einer Blutzählapparatur beschrieben, worin das Stabilisierungsmittelmedium eine Kochsalzlösung von Hefe ist Hefe ist jedoch ein blutfremdes Material, während man bestrebt ist Bezugskontrollen zu verwenden, die möglichst der Zusammensetzung von normalem, menschlichem Blut entsprechen.In US-PS 3412 037 a method for Preparation of a stabilized standard for calibrating a blood counting apparatus described, wherein the Stabilizer medium is a saline solution of yeast, however, yeast is a non-blood material, while striving to use reference controls that match the composition of normal, correspond to human blood.
Aufgabe der Erfindung war es, eine stabilisierte hämatologische Kontrollflüssigkeit für Mehrfachanalysen zu schaffen, mit der auch weiße Blutzellen bestimmt werden können, die annährend der Zusammensetzung von normalem, menschlichem Blut entspricht und praktisch keine blutfremden Mine) enthältThe object of the invention was to provide a stabilized hematological control fluid for multiple analyzes to create, with which also white blood cells can be determined, which approximate the composition of normal human blood and contains practically no non-blood mine)
Gelöst wird diese Aufgabe durch eine hämatologische Kontrollflüssigkeit mit den Merkmalen gemäß dem kennzeichnenden Teil des Patentanspruchs ί.This problem is solved by a hematological control fluid with the features according to characterizing part of claim ί.
Vorteilhafte Weiterbildungen der erfindungsgemäßen hämatologischen Kontrollflüssigkeit sind in den Patentansprüchen 2—8 beschrieben.Advantageous further developments of the hematological control fluid according to the invention are shown in Claims 2-8 described.
Durch die Erfindung wird ein stabiles Kontrollmittel für Mehrfachanalysen geschaffen, das in einem einzigen Mittel Bezugskontrollen zum Zählen von roten und weißen Blutzellen, zur Bestimmung des Hämoglobingehaltes und zur Hämatokritbestimmung vereinigt, und das eine mathematische Berechnung des mittleren Volumens, der mittleren Hämoglobinkonzentration und des mittleren Hämoglobinwertes der Blutkörperchen ermöglichtThe invention provides a stable control means for multiple analyzes is created in a single Means reference controls for counting red and white blood cells, for determining the hemoglobin content and combined to determine the hematocrit, and that a mathematical calculation of the mean Volume, mean hemoglobin concentration and mean hemoglobin value of the blood cells enables
Die erfindungsgemäße hämatologische Kontrollflüssigkeit besteht in einer stabilen Zellsuspension, die annährend der Zusammensetzung von normalem, menschlichen Blut entspricht Dagegen hat mit Oxal- oder Zitronensäure behandeltes menschliches Blut nur eine begrenzte Lagerstabilität Die roten Blutzellen hämolysieren allmählich und verändern sich in Größe und Gestalt Desgleichen erfahren weiße Blutzellen degenerierende Veränderungen. Die weißen Blutzellen des Menschen sind für Kontrollzwecke nicht geeignet besonders nicht in Gegenwart roter Blutzellen, da sie nicht beständig sind und ein Lysozym-Enzym ausscheiden, das die roten Blutzellen angreift Rote Blutzellen von Vögeln hingegen sind größer als die menschlichen roten Blutzellen und haben etwa die Form und Größe der menschlichen weißen Blutzellen. Es zeigte sich, daß rote Blutzellen von Geflügel wie Gänse, Hühner, Enten und vorzugsweise die roten Blutzellen des Truthahns in Form und Größe den menschlichen weißen Blutzellen am ähnlichsten sind und sich für das ei rindungsgemäße Verfahren zur Stabilisierung mit Tannin (tanning process) seht gut eignen. Diese stabilisierten »simulierten« weißen Biutzellen sind ein guter Ersatz für menschliche weiße Blutzellen in dem erfindungsgemäßen KontrollproduktThe hematological control fluid according to the invention consists of a stable cell suspension which approximately corresponds to the composition of normal human blood On the other hand, with oxaline or citric acid-treated human blood has limited storage stability The red blood cells Gradually hemolyze and change in size and shape. White blood cells experience the same degenerative changes. The white blood cells of humans are not suitable for control purposes especially not in the presence of red blood cells as they are not persistent and secrete a lysozyme enzyme, that attacks the red blood cells Red blood cells from birds, on the other hand, are larger than human ones red blood cells and are roughly the shape and size of human white blood cells. It turned out that red blood cells from poultry such as geese, chickens, ducks and preferably the turkey's red blood cells in Shape and size are most similar to human white blood cells and are natural to the egg Process for stabilization with tannin (tanning process) is very suitable. These stabilized "simulated" white blood cells are a good substitute for human white blood cells in the present invention Control product
Es wurde gefunden, daß frische, menschliche rote Blutzellen, die durch Suspension in menschlichem Plasma oder Serum mit einem Zusatz an metallischem Konservierungsmittel stabilisiert sind, brauchbare rote Blutzellen als Bestandteil für das erfindungsgemäße Gemisch darstellen. Plasma oder Serum liefern einige Elektrolyte und Proteine, die für die metabolische Stabilität der roten Blutzellen erforderlich sind. Ausgewählte Purine oder Pyrimidine können als zusätzliches Konservierungsmittel zugesetzt werden. Die nicht mit Tannin stabilisierten roten Blutzellen können vor der Bestimmung der Zahl der weißen Blutzellen und zur anschließenden Hämoglobinbestimmung sehr leicht hämolysiert werden.It has been found that fresh human red blood cells produced by suspension in human Plasma or serum stabilized with an addition of metallic preservatives are useful red Represent blood cells as a component for the mixture according to the invention. Plasma or serum provide some Electrolytes and proteins necessary for the metabolic stability of red blood cells. Selected purines or pyrimidines can be added as additional preservatives. The red blood cells that have not been stabilized with tannin can before the determination of the number of white ones Blood cells and for the subsequent hemoglobin determination are very easily hemolyzed.
Suspensionen von menschlichen roten Blutzellen und »simulierten« weißen Blutzellen werden in einem solchen Verhältnis gemischt, daß die endgültige Zahl der roten und weißen Blutzellen, der Hämoglobingehalt und das Ergebnis der Hämatokritbestimmung in den für menschliches Blut als normal angesehenen Bereich fallen.Suspensions of human red blood cells and "simulated" white blood cells are combined into one such ratio mixed that the final number of red and white blood cells, the hemoglobin content and the result of the hematocrit determination in the for human blood fall within the normal range.
Im menschlichen Blut liegt die Zahl der roten Blutzellen normalerweise im Bereich vonThe number of red blood cells in human blood is usually in the range of
4 000 000-5 000 000 Zellen/mnv» und die Zahl der weißen Blutzellen zwischen 5000 und 10 000 Zellen/ mm3. Der Hämoglobingehalt beträgt normalerweise 12 —16 g/100 mL Der Begriff »Hämatokrit« bedeutet das Verhältnis des Volumens der verdichteten (packed) roten Blutzeilen zum Volumen des gesamten Blutes. Das normale Verhältnis ist beim Menschen etwa 45%. Das mittlere Volumen der Blutkörperchen ist das Verhältnis des Volumens der verdichteten roten Blutzellen in ml/1 Blut zu der Zahl der roten Blutzellen in Million pro m3. Die mittlere Hämoglobinkonzentration der Blutkörperchen ist ein Index für das mittlere oder durchschnittliche Gewicht des Hämoglobins pro 100 ml der verdichteten roten Blutzellen in Prozenten. Der mittlere Hämoglobinwert ist das Verhältnis des Hämoglobingehalts in g/l zu der Anzahl der roten Blutzellen in Million pro mm3.4,000,000-5,000,000 cells / mnv »and the number of white blood cells between 5,000 and 10,000 cells / mm 3 . The hemoglobin content is usually 12-16 g / 100 mL. The term "hematocrit" means the ratio of the volume of the packed red blood cells to the volume of the whole blood. The normal ratio in humans is around 45%. The mean volume of blood cells is the ratio of the volume of compacted red blood cells in ml / 1 blood to the number of red blood cells in millions per m 3 . The mean hemoglobin concentration of blood cells is an index of the mean or average weight of hemoglobin per 100 ml of densified red blood cells as a percentage. The mean hemoglobin value is the ratio of the hemoglobin content in g / l to the number of red blood cells in millions per mm 3 .
Es ist offensichtlich, daß ein KontroUprodukt auf Vergleichsbasis genau das anzeigen muß, woraus eine Versuchsblutprobe in bezug auf die vorstehend beschriebenen Bestimmungen besteht Es ist weiterhin offensichtlich, wie wichtig es ist, daß das Kontrollprodukt eine Nachbildung unbehandelter Zellen ist. Wenn ein KontroUprodukt beispielsweise Z Jlen von wesentlich verschiedener Größe enthsHt, sind die Versuchsergebnisse ungenau, wenn nicht vollkomrcn bedeutungslos. Die nach dem hier beschriebenen Verfahren behandelten Zellen liefern ein ausgezeichnetes Kontroll- und Ausgleichsystem, das bei hämatologischen Bestimmungen unbedingt erforderlich istIt is obvious that a comparison-based control product must show exactly what a comparison product is made of Experimental blood sample for the determinations described above passes. It is still obviously how important it is to have the control product is a replica of untreated cells. if a control product, for example, items of essential importance different sizes are the test results imprecise, if not completely meaningless. The cells treated according to the method described here provide an excellent control and compensation system, which is absolutely necessary for hematological determinations
Im folgenden wird zur Erläuterung der Erfindung ein Beispiel für die Herstellung einer hämatologischen Kontrollflüssigkeit beschrieben.The following is an example of the production of a hematological to illustrate the invention Control fluid described.
Der nachstehend verwendete Begriff »Salzlösung« kann eine der folgenden drei Lösungen bedeuten: eine 0,9 gew.-%ige wäßrige Natriumchloridlösung, die als »Lösung A« bezeichnet wird; eine O,45°/oige wäßrige Natriumchloridlösung, genannt »Lösung B« oder eine gepufferte Salzlösung (Lösung C). Bei der Herstellung der »simulierten« weißen Blutzellen als Kontrollsubstanz ist es wichtig, daß die 0,45%ige Lösung (Lösung B) verwendet wird, weil bei dieser Konzentration die gewöhnlich ovale Form der roten Blutzellen von Geflügel in vorteilhafter Weise in eine mehr runde Form, wie sie die menschlichen weißen Blutzellen aufweisen, umgewandelt wird.The term "saline solution" as used below can mean one of the following three solutions: one 0.9% strength by weight aqueous sodium chloride solution, referred to as "Solution A"; an O, 45% aqueous Sodium chloride solution called "solution B" or a buffered saline solution (solution C). In the preparation of of the "simulated" white blood cells as a control substance, it is important that the 0.45% solution (solution B) is used because at this concentration the usually oval shape of the red blood cells of Poultry advantageously in a more rounded shape, like human white blood cells have, is converted.
Die erste Stufe des Verfahrens zur Stabilisierung der roten Blutzellen von Geflügel besteht darin, daß die roten Blutzellen in der Salzlösung zu einer Suspension mit einer Konzentration bis zu 50 VoI.-% suspendiert werden. Obwohl eine Konzentration von 50% brauchbar ist, wird vorzugsweise eine Konzentration von etwaThe first step in the process of stabilizing poultry red blood cells is to have the red blood cells are suspended in the saline solution to form a suspension with a concentration of up to 50% by volume will. While a concentration of 50% is useful, a concentration of about
5 bis 10 Vol.-%, insbesondere von 8%, verwendet Diese Suspension wird mit einem gleichen Volumen einer 1-bis 3 gew.-%igen Lösung von Quecksilber^I)-chlorid in Salzlösung gemischt5 to 10% by volume, in particular 8%, used these Suspension is mixed with an equal volume of a 1 to 3% strength by weight solution of mercury (I) chloride in Saline solution mixed
Die zweite Stufe besteht aus einem mindestens 12stündigem, vorzugsweise etwa 19- bis 20stündigen Erhitzen des entstandenen Gemisches bei 37°C. Die festen Stoffe werden durch Zentrifugieren und Abtrennen gewonnen und anschließend erneut in Salzlösung zu einer 2- bis 6%igen und vorzugsweise 4%igen Suspension suspendiertThe second stage consists of at least 12 hours, preferably about 19 to 20 hours Heat the resulting mixture at 37 ° C. The solids are removed by centrifugation and separation recovered and then again in salt solution to a 2 to 6% and preferably 4% Suspension suspended
In der dritten Stufe wird die vorstehend beschriebene Suspension unter sorgfältigem Mischen mit einem gleichen Volumen einer 0,0025%igen (Gewicht/Volumen) Lösung von wäßrigem Tannin in Salzlösung vereinigt; anschließend wird das entstandene Geirisch inkubiert und das feste Gemisch durch Zentrifugieren ίο und Abtrennen gewonnen. Die Tannin enthaltende Salzlösung ist eine gepufferte Salzlösung mit einem pH-Wert von 7,2 und ist die vorstehend erwähnte »Lösung C«. Sie besteht aus folgenden Bestandteilen in den angegebenen Mengenverhältnissen (pro Liter):In the third stage, the suspension described above is mixed carefully with a equal volume of a 0.0025% (weight / volume) Solution of aqueous tannin in salt solution combined; then the resulting Geirisch incubated and the solid mixture obtained by centrifugation ίο and separation. Containing the tannin Saline is a buffered saline solution with a pH of 7.2 and is that mentioned above "Solution C". It consists of the following components in the specified proportions (per liter):
0,9%ige Salzlösung 500 ml0.9% saline solution 500 ml
0,15molare Dinatriumphosphatlösung 385 ml
0,15molare Kaliumphosphatlösung 115 ml0.15 molar disodium phosphate solution 385 ml
0.15 molar potassium phosphate solution 115 ml
Salzlösung gewaschen und anschließend in steriler Alsever-Lösung rekonstituiertWashed saline and then reconstituted in sterile Alsever solution
Die Herstellung der Suspension der menschlichen roten Blutzellen wird unter sterilen Bedingungen durchgeführt Rote Blutzellen von jeder Blutart können dafür verwendet werden, jedoch wird vorzugsweise die Blutgruppe 0 verwendende sich für diese Gruppe leicht Spender finden lassen. Das in einer antikoagulierend wirkenden sauren Citrat-Dextroselösung gesammelte Blut der Gruppe 0 wird zentrifugiert; die überstehende Flüssigkeit wird entfernt und beiseite gestellt die Pufferschicht der weißen Blutzellen entfernt und verworfen. Die verdichteten roten Blutzellen werden mehrmals mit Alsever-Lösung gewaschen, in Alsever-Lösung rekonstituiert und bei 2—8° C gelagertThe preparation of the suspension of human red blood cells is carried out under sterile conditions Red blood cells of any type of blood can be used for this, but preferably the Blood group 0 can easily be used to find donors for this group. That in an anticoagulant group 0 blood collected using acidic citrate dextrose solution is centrifuged; the protruding Fluid is removed and the white blood cell buffer layer is removed and set aside discarded. The compacted red blood cells are washed several times with Alsever solution, in Alsever solution reconstituted and stored at 2-8 ° C
Das für die endgültige Suspension der menschlichen roten Blutzellen verwendete resuspendierende Medium wird aus einem defibrinierten Plasma hergestellt, das mit den suspendierten menschlichen roten Blutzellen serologisch verträglich ist d. h. Bhitzellen der Gruppe A mit Plasma der Gruppe A, Blutzellen der Gruppe B mit Plasma der Gruppe B und Blutzellen der Gruppe 0 mit Plasma der Gruppe 0. Defibriniertes Plasma der Gruppe AB (fehlende Antikörper A und B) ist verträglich mit roten Blutzellen der Gruppe A, B und 0. Die überstehende Plasmaflüsrigkeit wird durch Behandlung mit Rinderthrombin defibriniert und anschließend im Verhältnis 1 :3 mit Alsever-Lösung verdünnt.The resuspending medium used for the final human red blood cell suspension is made from a defibrinated plasma that contains suspended human red blood cells is serologically compatible d. H. Group A heart cells with plasma of group A, blood cells of group B with Group B plasma and group 0 blood cells with group 0 plasma. Defibrinated group plasma AB (missing antibodies A and B) is compatible with red blood cells of groups A, B and 0. The Supernatant plasma fluid is defibrinated by treatment with bovine thrombin and then im Ratio 1: 3 diluted with Alsever solution.
Zur weiteren Stabilirierung des aus frischen Blutzellen bestehenden Bestandteils der endgültigen Zellsus-For further stabilization of the fresh blood cells existing component of the final cell composition
>o pension wird das suspendierende Medium mit einem Surin oder Pyrimidin als metabolischem Konservierungsmittel (metabolic preservative) in solcher Menge versetzt, daß eine Endkonzentration von etwa 34—35 mg pro ml der Zellsuspension erhalten wird. Ein besonders wirksames Konservierungsmittel ist Adenin (6-Aminopurin oder ein pharmazeutisch verträgliches> o pension is the suspending medium with a Surine or pyrimidine as a metabolic preservative in such an amount added so that a final concentration of about 34-35 mg per ml of the cell suspension is obtained. A Adenine (6-aminopurine or a pharmaceutically acceptable one is particularly effective preservative
ι·! Erläuterung der Erfindung.ι · ! Explanation of the invention.
In einem wäßrigen sauren Citrat-Dextrose-Antikoagulant gesammeltes Blut der Gruppe 0 wurde unter : sterilen Bedingungen mit 200 Upm 20 Minuten zentrifugiert Die überstehende Flüssigkeit wurde vorsichtig abgesaugt wobei darauf geachtet wurde, daß in dem Grenzbereich zwischen den roten Zellen und derIn an aqueous acidic citrate-dextrose anticoagulant Group 0 blood collected was centrifuged under sterile conditions at 200 rpm for 20 minutes The supernatant liquid was carefully suctioned off, taking care that in the Border area between the red cells and the
Oberstehenden Flüssigkeit keine roten Zellen oder die weiße Pufferschicht in die überstehende Flüssigkeit abgezogen wurden. Die überstehende Flüssigkeit wurde zur nachstehend beschriebenen Verdünnung mit Alsever-Lösung und Verwendung als resuspendierendes Mittel aufbewahrtThe supernatant fluid has no red cells or the white buffer layer was drawn into the supernatant liquid. The supernatant liquid was for dilution with Alsever's solution described below and use as a resuspending Means kept
Die Pufferschicht (weiße Blutzellen) wurde vorsichtig über den verdichteten roten Blutzellen entfernt, wobei gegebenenfalls eine dünne Schicht der roten Zellen mit abgezogen wird. Die verdichteten roten Zellen wurden zweimal mit AIsever-Lösung gewaschen, zentrifugiert und bei 2—80C bis zum Mischen mit stabilisierten »simulierten« weißen Bhtzellen gelagertThe buffer layer (white blood cells) was carefully removed over the compacted red blood cells, a thin layer of the red cells being removed if necessary. The packed red cells were washed twice with AIsever solution, centrifuged and stored at 2-8 0 C until mixing with stabilized "" white Bhtzellen simulated supported
1515th
Rote Blutzellen von Geflügel, vorzugsweise eines Truthaiins, wurden viermal mit Salzlösung (Lösung A) gewaschen (wobei sie nach jedem Waschen 20 Minuten bei 3300 Upm zentrifugiert wurden) und nach dem letzten Waschen zu einer 8voL°/oigen Suspension in Salzlösung (Lösung A) resuspendiert 1OO ml dieser 8%igen Suspension wurden mit 100 ml einer 1 gew.%igen Lösung von Quecksilber(II)-ch!orid in Salzlösung (Lösung A) versetzt; die erhaltene Suspension wurde sorgfältig gemischt Anschließend wurde sie 19 Stunden bei 37° C inkubiert, viermal mit destilliertem Wasser gewaschen (obei sie nach jedem Waschen 5 Minuten bei 1200 upm zentrifugiert wurde) und in Salzlösung (Lösung A) zu einer 4voL%igen Suspension resuspendiert Diese 4%ige Suspension wurde mit einem gleichen Volumen einer 0,0025%igen (Gewicht pro Volumen) Lösung von Tannin in gepufferter Salzlösung (Lösung C) versetzt, und das entstandene Gemisch wurde sorgfältig gemixt 30 Minuten bei 500C inkubiert, zentrifugiert und dreimal mit destilliertem Wasser gewaschen.Red blood cells from poultry, preferably from a turkeyin, were washed four times with saline solution (solution A) (after each wash they were centrifuged for 20 minutes at 3300 rpm) and after the last wash to an 8vol% suspension in saline solution (solution A) resuspended 100 ml of this 8% suspension were mixed with 100 ml of a 1% by weight solution of mercury (II) chloride in saline solution (solution A); the resulting suspension was carefully mixed. It was then incubated for 19 hours at 37 ° C., washed four times with distilled water (although it was centrifuged at 1200 rpm for 5 minutes after each wash) and resuspended in saline (solution A) to form a 4% by volume suspension This 4% suspension was mixed with an equal volume of a 0.0025% (weight per volume) solution of tannin in buffered saline solution (solution C), and the resulting mixture was carefully mixed, incubated for 30 minutes at 50 ° C., centrifuged and washed three times with distilled water.
Das überstehende Plasma, das aus dem in einem wäßrigen sauren Citrat-Dextrose-Antikoagulant ge- 4n sammelten Blut der Gruppe 0 erhalten wurde, wurde im Verhältnis 1 :3 mit AIsever-Lösung verdünnt Das verdünnte Plasma wurde unter Zusatz von Rinderthrombin (hergestellt von Parke-Davis % Co, Detroit, Michigan) in einer Konzentration von 1 Einheit/ml defibriniert und 1 Stunde bei 37" C inkubiert Das klumpige Material wurde heftig geschüttelt und die Klumpen aufzubrechen und durch ein Filter (Whatman Nr. 50), das sich auf einem Büchner-Trichter über einer Saugflasche befand, filtriert Adeninsulfat wurde in einer Konzentration von 70 mg/100 ml zugesetzt; zur Beschleunigung der Auflösung wurde das Gemisch auf 37° C erhitzt; anschließend wurde die Lösung nacheinander durch Filterkörper mit einer Porengröße von 0,45 und 0,22 Milliporen (0,45 und 0,22 Millipore filter pads) filtriertThe supernatant plasma, the overall from the acid in an aqueous citrate-dextrose anticoagulant 4n collected blood of the group was obtained 0 was the diluted 1: 3 with AIsever solution, the diluted plasma was prepared with addition of bovine thrombin (Parke -Davis% Co, Detroit, Michigan) defibrinated at a concentration of 1 unit / ml and incubated for 1 hour at 37 "C. The lumpy material was shaken vigorously and the lump was broken up and passed through a filter (Whatman No. 50) a Buchner funnel over a suction bottle, filtered adenine sulfate was added at a concentration of 70 mg / 100 ml; to accelerate the dissolution, the mixture was heated to 37 ° C; then the solution was successively passed through filter bodies with a pore size of 0.45 and 0.22 millipores (0.45 and 0.22 millipore filter pads) filtered
Die Arbeitsweise von Beispiel III wurde wiederholt, wobei das Plasma der Gruppe 0 durch Plasma der Gruppe AB ersetzt wurde.The procedure of Example III was repeated with the plasma of group 0 replaced by plasma of the Group AB was replaced.
Beispie! VExample! V
Die nach Beispiel II hergestellten »simulierten« weißen Blutzeilen wurden in steriler Alsever-Lö^ung bis zu einem Hämatikritwert von etwa 24% rekonstituiert Diese Lösung enthäItetwa750 000- 800 000 Zellen/mm3. Zwei ml dieser Suspension wurden unter Zusatz von 100 ml des nach Beispiel III oder IV hergestellten resuspendierenden Mittels weiter verdünntThe "simulated" white blood cells produced according to Example II were reconstituted in sterile Alsever solution to a hematite crit value of about 24%. This solution contains about 750,000-800,000 cells / mm 3 . Two ml of this suspension were further diluted with the addition of 100 ml of the resuspending agent prepared according to Example III or IV
Ein Volumen der nach Beispiefl hergestellten, verdichteten menschlichen Blutzellen der Gruppe 0 (etwa 90% Hämatokrit) wurde mit einem gleichen Volumen der verdünnten Suspension der »simulierten« weißen Blutzellen versetztA volume of the compressed human blood cells of group 0 prepared according to Example (about 90% hematocrit) was with an equal volume of the diluted suspension of the "simulated" white blood cells
Die als Endprodukt erhaltene Zellsuspension mit einem Gehalt von etwa 34—35 mg Adenin pro 100 ml wies etwa 4 000000—5 000000 rote Blutzellen pro mm3,5000 -10 000 weiße Blutzellen pro mm3,12 -16 g Hämaglobin pro 100 ml und43-47% Hämatokrit auf.The cell suspension obtained as the end product with a content of about 34-35 mg adenine per 100 ml had about 4,000,000-5,000,000 red blood cells per mm 3 , 5000-10,000 white blood cells per mm 3 , 12-16 g hemaglobin per 100 ml and43 -47% hematocrit.
Aliquote Teile (2^5 ml) der Endsuspension in Glasfläschchen verteilt hielten sich bei Lagerung bei 2-8° C etwa 4 Wochen.Aliquots (2 ^ 5 ml) of the final suspension in glass vials distributed, kept for about 4 weeks when stored at 2-8 ° C.
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