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Die
Erfindung betrifft substituierte Triazolotriazine und Triazolopyrazine
und Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung zur Herstellung
von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten,
insbesondere von hämatologischen Erkrankungen, vorzugsweise
von Leukopenien und Neutropenien.
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Glykogen
Synthase Kinase 3 (GSK3) gehört zur Familie der Serine/Threonin-Kinasen.
Spezifische Substrate sind unter anderem Zytoskelettproteine und
Transkriptionsfaktoren. Zwei Isoformen, GSK3α und GSK3β,
wurden bisher identifiziert (Woodgett JR., Trends Biochem.
Sci. (1991), 16(5), 177-81). Beide Isoformen sind in vornehmlich
ruhenden, nicht proliferierenden Zellen konstitutiv aktiv.
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GSK3β kommt
eine zentrale Bedeutung innerhalb des Wnt/Wingless-Signaltransduktionsweges
zu. Dieser stellt einer der wichtigsten, evolutionärkonservierten
Signalsysteme dar. Wnt-Signale kontrollieren sehr frühe
musterbildende Prozesse während der Embryogenese, sie induzieren
Mesodermbildung und viele Organe, und sie steuern die Proliferation
und Differenzierung von Stammzellen (Wodarz A., Nusse R.,
Annu. Rev. Cell Dev. Biol. (1998), 14, 59-88; Kirstetter
et al., Nat Immunol. (2006), 7(10), 1048-56). Der Wnt-Signalweg
ist intrazellulär aufgegliedert, wodurch unterschiedlichste
Prozesse gesteuert werden können. Innerhalb der Wnt-Kaskade
ist die Glykogen Synthase Kinase 3 Bestandteil eines Multiproteinkomplexes,
zu dem u. a. das Strukturmoleküle Axin, das Tumorsuppressor-Protein
APC sowie der Transkriptionskofaktor β-Catenin gehören.
(β-Catenin ist dabei das wichtigste Substrat der GSK3β.
Die Konsequenz dieser GSK3β-vermittelten Phophorylierung
ist der proteasomale Abbau von β-Catenin. Inhibition der
GSK3-Aktivität führt zu einer Akkumulation des β-Catenins
in der Zelle mit einer sich anschließenden Translokation
in den Zellkern. Dort fungiert β-Catenin als ein Kofaktor
in Transkriptionskomplexe und damit für die Expression
definierter Zielgene mit verantwortlich.
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Strahlen-
oder Chemotherapien gehören zu den Standardansätzen
bei der Krebsbekämpfung. Beide Therapieformen sind im Bezug
auf ihre Zielzellen unspezifisch, d. h. es werden nicht nur Tumorsondern
auch nicht-transformierte, proliferierende Zellen getroffen. Zu
diesen nicht-transformierten, proliferienden Zellen gehören
auch hämatopoetische Vorläuferzellen, die sich
u. a. zu neutrophilen Granulozyten entwickeln. Eine signifikante
Verringerung der Anzahl an Neutrophilen wird als Neutropenie bezeichnet.
Eine durch Chemo- oder Strahlentherapie induzierte Neutropenie resultiert
klinisch in einer erhöhten Infektanfälligkeit.
Bei ausgeprägter Neutropenie erhöht sich die Morbidität
und unter Umständen auch die Mortalität einer
Therapie (O'Brien et al., British Journal of Cancer (2006),
95, 1632-1636).
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Inhibition
der GSK3-Aktivität führt zu einer gesteigerten
Proliferations- und Differenzierungsrate hämatopoetischer
Stammzellen und kann dementsprechend zur therapeutischen Intervention
hinsichtlich einer therapieinduzierten Neutropenie genutzt werden.
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WO 2006/044687 beschreibt
unter anderem Triazolotriazine als Kinase Inhibitoren zur Behandlung von
Krebs und Erkrankungen des zentralen Nervensystems.
WO 2007/138072 beschreibt die
Verwendung von 6-Alkyl-substituierten Triazolopyrazinen zur Behandlung
von degenerativen und inflammatorischen Erkrankungen.
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Eine
Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist daher die Bereitstellung
neuer Verbindungen als GSK3β-Inhibitoren zur Behandlung
von hämatologischen Erkrankungen, vorzugsweise von Neutropenie
bei Menschen und Tieren.
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Gegenstand
der Erfindung sind Verbindungen der Formel
in welcher
entweder
U
für N steht,
V für CR
12 steht,
W
für N steht,
A für CR
15 steht,
oder
U
für N steht,
V für N steht,
W für
CR
16 steht,
A für N steht,
wobei
R
12 für Wasserstoff, Hydroxy, Amino,
Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, Trifluormethyl, Trifluormethoxy,
Cyano, C
1-C
4-Alkyl,
C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino,
C
1-C
4-Alkylcarbonyl,
C
1-C
4-Alkoxycarbonyl,
C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl,
C
1-C
4-Alkylcarbonylamino,
C
1-C
4-Alkylsulfonylamino,
5- oder 6-gliedriges Heterocyclylcarbonyl, -CH
2R
13 oder -CH
2 CH
2R
14 steht,
wobei
Heterocyclylcarbonyl substituiert sein kann mit 1 bis 3 Substituenten,
wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt
werden aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Oxo, C
1-C
4-Alkyl, C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino, C
1-C
4-Alkylcarbonyl, C
1-C
4-Alkoxycarbonyl und C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl,
und
wobei
Alkoxy, Alkylamino, Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, Alkylaminocarbonyl,
Alkylcarbonylamino und Alkylsulfonylamino substituiert sein können
mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt
wird aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Hydroxycarbonyl,
Aminocarbonyl, C
1-C
4-Alkoxy,
C
1-C
4-Alkylamino,
C
1-C
4-Alkoxycarbonyl,
C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl,
C
1-C
4-Alkylcarbonylamino,
5- oder 6-gliedriges Heterocyclyl und Phenyl,
worin Phenyl
substituiert sein kann mit 1 bis 3 Substituenten, wobei die Substituenten
unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der
Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy,
Aminocarbonyl, C
1-C
4-Alkyl,
C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino,
C
1-C
4-Alkylcarbonyl,
C
1-C
4-Alkoxycarbonyl,
C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl
und C
1-C
4-Alkylcarbonylamino,
und
worin
Heterocyclyl substituiert sein kann mit 1 bis 3 Substituenten, wobei
die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt
werden aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Oxo, C
1-C
4-Alkyl, C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino, C
1-C
4-Alkylcarbonyl, C
1-C
4-Alkoxycarbonyl und C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl,
und
wobei
R
13 für Hydroxy, Amino, Cyano, Hydroxycarbonyl,
Aminocarbonyl, C
1-C
4-Alkoxy,
C
1-C
4-Alkylamino,
C
1-C
4-Alkoxycarbonyl,
C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl,
C
1-C
4-Alkylcarbonylamino
oder 5- oder 6-gliedriges Heterocyclyl steht,
worin Alkoxy,
Alkylamino, Alkoxycarbonyl, Alkylaminocarbonyl und Alkylcarbonylamino
substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei
der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend
aus Hydroxy, Amino, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino, C
1-C
4-Alkoxycarbonyl, C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl und C
1-C
4-Alkylcarbonylamino,
und
worin
Heterocyclyl substituiert sein kann mit 1 bis 3 Substituenten, wobei
die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt
werden aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Oxo, C
1-C
4-Alkyl, C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino, C
1-C
4-Alkylcarbonyl, C
1-C
4-Alkoxycarbonyl und C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl,
und
wobei
R
14 für Hydroxy, Amino, Cyano, Hydroxycarbonyl,
Aminocarbonyl, C
1-C
4-Alkoxy,
C
1-C
4-Alkylamino,
C
1-C
4-Alkoxycarbonyl,
C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl,
C
1-C
4-Alkylcarbonylamino
oder 5- oder 6-gliedriges Heterocyclyl steht,
worin Alkoxy,
Alkylamino, Alkoxycarbonyl, Alkylaminocarbonyl und Alkylcarbonylamino
substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei
der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend
aus Hydroxy, Amino, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino, C
1-C
4-Alkoxycarbonyl, C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl und C
1-C
4-Alkylcarbonylamino,
und
worin
Heterocyclyl substituiert sein kann mit 1 bis 3 Substituenten, wobei
die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt
werden aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Oxo, C
1-C
4-Alkyl, C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino, C
1-C
4-Alkylcarbonyl, C
1-C
4-Alkoxycarbonyl und C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl,
R
15 für
Wasserstoff, Halogen, Cyano, Trifluormethyl, C
1-C
3-Alkyl, Methoxy, Methylthio oder Cyclopropyl
steht,
R
16 für Wasserstoff
oder Methyl steht,
R
1 für
eine Gruppe der Formel
steht,
wobei
*
die Anknüpfstelle an den Heterocyclus bedeutet,
n
für die Zahl 0 oder 1 steht,
X für NR
10, S oder O steht,
worin
R
10 für Wasserstoff, C
1-C
3-Alkyl oder Cyclopropyl steht,
Y für
NR
11 oder S steht,
worin
R
11 für Wasserstoff, C
1-C
3-Alkyl oder Cyclopropyl steht,
R
3 für 2-Pyridyl, Pyrimid-2-yl, 2-Aminopyrimid-4-yl,
2-(Mono-C
1-C
4-Alkylamino)pyrimid-4-yl,
2-(Mono-C
3-C
4-Cycloalkylamino)pyrimid-4-yl,
Pyridazin-3(2H)-on-6-yl, 1,3-Oxazol-2-yl, 1,3-Oxazol-4-yl, 1,2,4-Oxadiazol-3-yl, 1,2,3-Oxadiazol-4-yl,
1,3-Thiazol-2-yl, 1,3-Thiazol-4-yl, 1H-1,2,4-Triazol-5-yl, 2,4-Dihydro-3H-1,2,4-triazol-3-on-5-yl
oder 1,2-Pyrazol-5-yl steht,
wobei 2-Pyridyl, Pyrimid-2-yl,
1,3-Oxazol-2-yl, 1,3-Oxazol-4-yl, 1,3-Thazol-2-yl und 1,3-Thazol-4-yl
substituiert sind mit 1 oder 2 Substituenten, wobei die Substituenten
unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe
bestehend aus Halogen, Cyano, Nitro, Amino, Trifluormethyl, Trifluormethoxy,
Aminocarbonyl, Trifluormethylcarbonyl, C
1-C
4-Alkyl, C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino, C
3-C
4-Cycloalkylamino, C
1-C
4-Alkylcarbonyl, C
1-C
4-Alkoxycarbonyl, C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl und C
3-C
6-Cycloalkylcarbonyl,
worin Alkyl, Alkoxy,
Alkylamino, Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, Alkylaminocarbonyl und
Cycloalkylcarbonyl substituiert sein können mit einem Substituenten,
wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend
aus Halogen, Cyano, Hydroxy, Amino, Trifluormethyl und C
3-C
6-Cycloalkyl,
und
wobei
2-Aminopyrimid-4-yl, 2-(Mono-C
1-C
4-Alkylamino)pyrimid-4-yl, 2-(Mono-C
3-C
4-Cycloalkylamino)pyrimid-4-yl,
Pyridazin-3(2H)-on-6-yl, 1,2,4-Oxadiazol-3-yl, 1,2,3-Oxadiazol-4-yl,
1H-1,2,4-Triazol-5-yl, 2,4-Dihydro-3H-1,2,4-triazol-3-on-5-yl und
1,2-Pyrazol-5-yl substituiert sein können mit einem Substituenten,
wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend
aus Halogen, Cyano, Nitro, Amino, Trifluormethyl, Trifluormethoxy,
Aminocarbonyl, Trifluormethylcarbonyl, C
1-C
4-Alkyl, C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino, C
3-C
4-Cycloalkylamino, C
1-C
4-Alkoxycarbonyl, C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl und C
3-C
6-Cycloalkylcarbonyl,
R
4 für
Wasserstoff, C
1-C
3-Alkyl
oder Cyclopropyl steht,
R
5 für
Wasserstoff oder C
1-C
3-Alkyl
steht,
R
6 für Wasserstoff,
C
1-C
3-Alkyl oder
Cyclopropyl steht,
R
7 für
Wasserstoff oder C
1-C
3-Alkyl
steht,
R
8 für Wasserstoff,
C
1-C
3-Alkyl oder
Cyclopropyl steht,
R
9 für
Wasserstoff oder C
1-C
3-Alkyl
steht,
R
2 für C
6-C
10-Aryl oder 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl
steht,
wobei Aryl und Heteroaryl substituiert sein können
mit 1 bis 3 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig
voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend
aus Hydroxy, Hydroxymethyl, Amino, Halogen, Cyano, Trifluormethyl,
Trifluormethoxy, Aminocarbonyl, C
1-C
4-Alkyl, C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkoxymethyl, C
1-C
4-Alkylamino, C
1-C
4-Alkylaminomethyl, C
1-C
4-Alkylcarbonyl, C
1-C
4-Alkoxycarbonyl, C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl, C
1-C
4-Alkylcarbonylamino, C
1-C
4-Alkylsulfonyl, C
1-C
4-Alkylsulfonylamino, C
1-C
4-Alkylaminosulfonyl, Phenyl, Benzyloxy,
5- oder 6-gliedrigem Heterocyclyl, 5- oder 6-gliedrigem Heterocyclylcarbonyl,
5- oder 6-gliedrigem Heterocyclylmethyl und 5- oder 6-gliedrigem
Heteroaryl,
worin Phenyl, Benzyloxy, Heterocyclyl, Heterocyclylcarbonyl,
Heterocyclylmethyl und Heteroaryl substituiert sein können
mit 1 bis 3 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig
voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend
aus Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Aminocarbonyl,
C
1-C
4-Alkyl, C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino,
C
1-C
4-Alkylcarbonyl,
C
1-C
4-Alkoxycarbonyl,
C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl
und C
1-C
4-Alkylcarbonylamino,
oder
zwei
der Substituenten am Aryl zusammen mit den Kohlenstoffatomen, an
die sie gebunden sind, ein 1,3-Dioxolan oder 1,4-Dioxan bilden,
und
ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
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Erfindungsgemäße
Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I) und deren Salze,
Solvate und Solvate der Salze, sowie die von Formel (I) umfassten,
nachfolgend als Ausführungsbeispiel(e) genannten Verbindungen
und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, soweit es sich bei
den von Formel (I) umfassten, nachfolgend genannten Verbindungen
nicht bereits um Salze, Solvate und Solvate der Salze handelt.
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Die
erfindungsgemäßen Verbindungen können
in Abhängigkeit von ihrer Struktur in stereoisomeren Formen
(Enantiomere, Diastereomere) existieren. Die Erfindung umfasst deshalb
die Enantiomeren oder Diastereomeren und ihre jeweiligen Mischungen.
Aus solchen Mischungen von Enantiomeren und/oder Diastereomeren
lassen sich die stereoisomer einheitlichen Bestandteile in bekannter
Weise isolieren.
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Sofern
die erfindungsgemäßen Verbindungen in tautomeren
Formen vorkommen können, umfasst die vorliegenden Erfindung
sämtliche tautomere Formen.
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Als
Salze sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung physiologisch unbedenkliche
Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen bevorzugt.
Umfasst sind aber auch Salze, die für pharmazeutische Anwendungen
selbst nicht geeignet sind aber beispielsweise für die
Isolierung oder Reinigung der erfindungsgemäßen Verbindungen
verwendet werden können.
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Physiologisch
unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen
umfassen Säureadditionssalze von Mineralsäuren,
Carbonsäuren und Sulfonsäuren, z. B. Salze der
Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure,
Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure,
Toluolsulfonsäure, Benzolsulfonsäure, Naphthalindisulfonsäure,
Essigsäure, Trifluoressigsäure, Propionsäure,
Milchsäure, Weinsäure, Äpfelsäure,
Zitronensäure, Fumarsäure, Maleinsäure
und Benzoesäure.
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Physiologisch
unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen
umfassen auch Salze üblicher Basen, wie beispielhaft und
vorzugsweise Alkalimetallsalze (z. B. Natrium- und Kaliumsalze),
Erdalkalisalze (z. B. Calcium- und Magnesiumsalze) und Ammoniumsalze,
abgeleitet von Ammoniak oder organischen Aminen mit 1 bis 16 C-Atomen,
wie beispielhaft und vorzugsweise Ethylamin, Diethylamin, Triethylamin,
Ethyldiisopropylamin, Monoethanolamin, Diethanolamin, Triethanolamin,
Dicyclohexylamin, Dimethylaminoethanol, Prokain, Dibenzylamin, N-Methylmorpholin,
Arginin, Lysin, Ethylendiamin, N-Methylpiperidin und Cholin.
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Als
Solvate werden im Rahmen der Erfindung solche Formen der erfindungsgemäßen
Verbindungen bezeichnet, welche in festem oder flüssigem
Zustand durch Koordination mit Lösungsmittelmolekülen
einen Komplex bilden. Hydrate sind eine spezielle Form der Solvate,
bei denen die Koordination mit Wasser erfolgt.
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Außerdem
umfasst die vorliegende Erfindung auch Prodrugs der erfindungsgemäßen
Verbindungen. Der Begriff „Prodrugs" umfaßt Verbindungen,
welche selbst biologisch aktiv oder inaktiv sein können,
jedoch während ihrer Verweilzeit im Körper zu
erfindungsgemäßen Verbindungen umgesetzt werden
(beispielsweise metabolisch oder hydrolytisch).
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Im
Rahmen der vorliegenden Erfindung haben die Substituenten, soweit
nicht anders spezifiziert, die folgende Bedeutung:
Alkyl per
se und "Alk" und "Alkyl" in Alkoxy, Alkylamino, Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, Alkylaminocarbonyl,
Alkylcarbonylamino, Alkylsulfonyl, Alkylsulfonylamino und Alkylaminosulfonyl
stehen für einen linearen oder verzweigten Alkylrest mit
1 bis 4 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für
Methyl, Ethyl, n-Propyl, iso-Propyl, n-Butyl und tert-Butyl.
Alkoxy
steht beispielhaft und vorzugsweise für Methoxy, Ethoxy,
n-Propoxy, iso-Propoxy, n-Butoxy und tert-Butoxy.
Alkylamino
steht für einen Alkylaminorest mit einem oder zwei (unabhängig
voneinander gewählten) Alkylsubstituenten, beispielhaft
und vorzugsweise für Methylamino, Ethylamino, n-Propylamino,
iso-Propylamino, tert-Butylamino, N,N-Dimethylamino, N,N-Diethylamino,
N-Ethyl-N-methylamino, N-Methyl-N-n-propylamino, N-iso-Propyl-N-n-propylamino
und N-tert-Butyl-N-methylamino. C1-C4-Alkylamino steht beispielsweise für
einen Monoalkylaminorest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder für
einen Dialkylaminorest mit jeweils 1 bis 4 Kohlenstoffatomen pro
Alkylsubstituent.
Mono-Alkylamino steht für einen
Alkylaminorest mit einem linearen oder verzweigten Alkylsubstituenten,
beispielhaft und vorzugsweise für Methylamino, Ethylamino,
n-Propylamino, iso-Propylamino und tert-Butylamino.
Mono-Cycloalkylamino
steht für einen Cycloalkylaminorest mit einem Cycloalkyl-Substituenten
und der weitere Substituent am Aminorest ist Wasserstoff, beispielhaft
und vorzugsweise für Cyclopropylamino und Cyclobutylamino.
Alkylcarbonyl
steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylcarbonyl,
Ethylcarbonyl, n-Propylcarbonyl, iso-Propylcarbonyl, n-Butylcarbonyl
und tert-Butylcarbonyl.
Alkoxycarbonyl steht beispielhaft und
vorzugsweise für Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, n-Propoxycarbonyl, iso-Propoxycarbonyl,
n-Butoxycarbonyl und tert-Butoxycarbonyl.
Alkylaminocarbonyl
steht für einen Alkylaminocarbonylrest mit einem oder zwei
(unabhängig voneinander gewählten) Alkylsubstituenten,
beispielhaft und vorzugsweise für Methylaminocarbonyl,
Ethylaminocarbonyl, n-Propylaminocarbonyl, iso-Propylaminocarbonyl,
tert-Butylaminocarbonyl, N,N-Dimethylaminocarbonyl, N,N-Diethylaminocarbonyl,
N-Ethyl-N-methylaminocarbonyl, N-Methyl-N-n-propylaminocarbonyl,
N-iso-Propyl-N-n-propylaminocarbonyl und N-tert-Butyl-N-methylaminocarbonyl.
C1-C4-Alkylaminocarbonyl
steht beispielsweise für einen Monoalkylaminocarbonylrest
mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder für einen Dialkylaminocarbonylrest
mit jeweils 1 bis 4 Kohlenstoffatomen pro Alkylsubstituent.
Alkylcarbonylamino
steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylcarbonylamino,
Ethylcarbonylamino, n-Propylcarbonylamino, iso-Propylcarbonylamino,
n-Butylcarbonylamino und tert-Butylcarbonylamino.
Alkylsulfonyl
steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylsulfonyl,
Ethylsulfonyl, n-Propylsulfonyl, iso-Propylsulfonyl, n-Butylsulfonyl
und tert-Butylsulfonyl.
Alkylaminosulfonyl steht für
einen Alkylaminosulfonylrest mit einem oder zwei (unabhängig
voneinander gewählten) Alkylsubstituenten, beispielhaft
und vorzugsweise für Methylaminosulfonyl, Ethylaminosulfonyl, n-Propylaminosulfonyl,
iso-Propylaminosulfonyl, tert-Butylaminosulfonyl, N,N-Dimethylaminosulfonyl, N,N-Diethylaminosulfonyl,
N-Ethyl-N-methylaminosulfonyl, N-Methyl-N-n-propylaminosulfonyl,
N-iso-Propyl-N-n-propylaminosulfonyl und N-tert-Butyl-N-methylaminosulfonyl.
C1-C4-Alkylaminosulfonyl
steht beispielsweise für einen Monoalkylaminosulfonylrest
mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder für einen Dialkylamino-sulfonylrest
mit jeweils 1 bis 4 Kohlenstoffatomen pro Alkylsubstituent.
Alkylsulfonylamino
steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylsulfonylamino,
Ethylsulfonylamino, n-Propylsulfonylamino, iso-Propylsulfonylamino,
n-Butylsulfonylamino und tert-Butylsulfonylamino.
Cycloalkyl
steht für eine monocyclische Cycloalkylgruppe mit in der
Regel 3 bis 6 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für
Cycloalkyl seien genannt Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl und
Cyclohexyl.
Heterocyclyl steht für einen monocyclischen,
heterocyclischen Rest mit 5 oder 6 Ringatomen und bis zu 3, vorzugsweise
bis zu 2 Heteroatomen und/oder Heterogruppen aus der Reihe N, O,
S, SO, SO2, wobei ein Stickstoffatom auch
ein N-Oxid bilden kann. Die Heterocyclyl-Reste können gesättigt
oder teilweise ungesättigt sein. Bevorzugt sind 5- oder
6-gliedrige, monocyclische gesättigte Heterocyclylreste
mit bis zu zwei Heteroatomen aus der Reihe O, N und S, beispielhaft
und vorzugsweise für Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl,
Pyrrolinyl, Tetrahydrofuranyl, Tetrahydrothienyl, Pyranyl, Piperidin-1-yl,
Piperidin-2-yl, Piperidin-3-yl, Piperidin-4-yl, Thiopyranyl, Morpholin-1-yl,
Morpholin-2-yl, Morpholin-3-yl, Piperazin-1-yl, Piperazin-2-yl.
Heteroaryl
steht für einen aromatischen, mono- oder bicyclischen Rest
mit in der Regel 5 bis 10, vorzugsweise 5 oder 6 Ringatomen und
bis zu 5, vorzugsweise bis zu 4 Heteroatomen aus der Reihe S, O
und N, wobei ein Stickstoffatom auch ein N-Oxid bilden kann, beispielhaft
und vorzugsweise für Thienyl, Furyl, Pyrrolyl, Thiazolyl,
Oxazolyl, Oxadiazolyl, Pyrazolyl, Imidazolyl, Pyridyl, Pyrimidyl,
Pyridazinyl, Pyrazinyl, Indolyl, Indazolyl, Benzofuranyl, Benzothiophenyl, Chinolinyl,
Isochinolinyl, Benzoxazolyl, Benzimizolyl.
Halogen steht für
Fluor, Chlor, Brom und Jod, vorzugsweise für Fluor und
Chlor.
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In
den Formeln der Gruppe, die für R1 stehen
kann, steht der Endpunkt der Linie, neben der jeweils ein * steht,
nicht für ein Kohlenstoffatom beziehungsweise eine CH2-Gruppe sondern ist Bestandteil der Bindung
zu dem Atom, an das R1 gebunden ist.
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Bevorzugt
sind Verbindungen der Formel (I), in welcher
entweder
U
für N steht,
V für CR
12 steht,
W
für N steht,
A für CR
15 steht,
oder
U
für N steht,
V für N steht,
W für
CR
16 steht,
A für N steht,
wobei
R
12 für Wasserstoff, Hydroxycarbonyl,
Aminocarbonyl, C
1-C
4-Alkyl,
C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino,
C
1-C
4-Alkylcarbonyl,
C
1-C
4-Alkoxycarbonyl,
C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl,
C
1-C
4-Alkylcarbonylamino,
5- oder 6-gliedriges Heterocyclylcarbonyl, -CH
2R
13 oder -CH
2 CH
2R
14 steht,
wobei
Heterocyclylcarbonyl substituiert sein kann mit 1 bis 3 Substituenten,
wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt
werden aus der Gruppe bestehend aus Oxo, C
1-C
4-Alkyl, C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino, C
1-C
4-Alkylcarbonyl, C
1-C
4-Alkoxycarbonyl und C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl,
und
wobei
Alkoxy, Alkylamino, Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, Alkylaminocarbonyl
und Alkylcarbonylamino substituiert sein können mit einem
Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus
der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl,
C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino und
5- oder 6-gliedriges Heterocyclyl,
worin Heterocyclyl substituiert
sein kann mit 1 bis 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig
voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend
aus Oxo, C
1-C
4-Alkyl,
C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino,
C
1-C
4-Alkylcarbonyl,
C
1-C
4-Alkoxycarbonyl
und C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl,
und
wobei
R
13 für Hydroxy, Amino, Hydroxycarbonyl,
Aminocarbonyl, C
1-C
4-Alkoxy,
C
1-C
4-Alkylamino,
C
1-C
4-Alkoxycarbonyl,
C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl,
C
1-C
4-Alkylcarbonylamino
oder 5- oder 6-gliedriges Heterocyclyl steht,
worin Alkoxy,
Alkylamino, Alkoxycarbonyl, Alkylaminocarbonyl und Alkylcarbonylamino
substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei
der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend
aus Hydroxy, Amino, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino, C
1-C
4-Alkoxycarbonyl, C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl und C
1-C
4-Alkylcarbonylamino,
und
worin
Heterocyclyl substituiert sein kann mit 1 bis 2 Substituenten, wobei
die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt
werden aus der Gruppe bestehend aus Oxo, C
1-C
4-Alkyl, C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino, C
1-C
4-Alkylcarbonyl, C
1-C
4-Alkoxycarbonyl und C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl,
und
wobei
R
14 für Hydroxy, Amino, Hydroxycarbonyl,
Aminocarbonyl, C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino,
C
1-C
4-Alkoxycarbonyl,
C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl,
C
1-C
4-Alkylcarbonylamino
oder 5- oder 6-gliedriges Heterocyclyl steht,
worin Alkoxy,
Alkylamino, Alkoxycarbonyl, Alkylaminocarbonyl und Alkylcarbonylamino
substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei
der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend
aus Hydroxy, Amino, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino, C
1-C
4-Alkoxycarbonyl, C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl und C
1-C
4-Alkylcarbonylamino,
und
worin
Heterocyclyl substituiert sein kann mit 1 bis 2 Substituenten, wobei
die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt
werden aus der Gruppe bestehend aus Oxo, C
1-C
4-Alkyl, C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino, C
1-C
4-Alkylcarbonyl, C
1-C
4-Alkoxycarbonyl und C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl,
R
15 für
Wasserstoff, Halogen, Cyano oder Trifluormethyl steht,
R
16 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R
1 für eine Gruppe der Formel
steht,
wobei
*
die Anknüpfstelle an den Heterocyclus bedeutet,
n
für die Zahl 0 oder 1 steht,
X für NR
10, S oder O steht,
worin
R
10 für Wasserstoff oder Methyl steht,
Y
für NR
11 oder S steht,
worin
R
11 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R
3 für 2-Pyridyl, Pyrimid-2-yl, 2-Aminopyrimid-4-yl,
1,3-Oxazol-2-yl, 1,3-Oxazol-4-yl, 1,2,4-Oxadiazol-3-yl, 1,2,3-Oxadiazol-4-yl,
1,3-Thiazol-2-yl oder 1,3-Thiazol-4-yl steht,
wobei 2-Pyridyl,
Pyrimid-2-yl, 1,3-Oxazol-2-yl, 1,3-Oxazol-4-yl, 1,3-Thiazol-2-yl
und 1,3-Thiazol-4-yl substituiert sind mit 1 oder 2 Substituenten,
wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt
werden aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Nitro, Amino,
Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Aminocarbonyl, Trifluormethylcarbonyl
Methyl, Ethyl, Methoxy, Ethoxy, C
1-C
4-Alkylamino, Methylcarbonyl, Ethylcarbonyl,
Cyclopropylcarbonyl, Methoxycarbonyl und Ethoxycarbonyl,
und
wobei
2-Aminopyrimid-4-yl, 1,2,4-Oxadiazol-3-yl und 1,2,3-Oxadiazol-4-yl
substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei
der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend
aus Halogen, Cyano, Nitro, Amino, Trifluormethyl, Trifluormethoxy,
Aminocarbonyl, Trifluormethylcarbonyl, Methyl, Ethyl, Methoxy, Ethoxy, C
1-C
4-Alkylamino,
Methylcarbonyl, Ethylcarbonyl, Cyclopropylcarbonyl, Methoxycarbonyl
und Ethoxycarbonyl,
R
4 für
Wasserstoff oder Methyl steht,
R
5 für
Wasserstoff oder Methyl steht,
R
6 für
Wasserstoff oder Methyl steht,
R
7 für
Wasserstoff oder Methyl steht,
R
8 für
Wasserstoff oder Methyl steht,
R
9 für
Wasserstoff oder Methyl steht,
R
2 für
C
6-C
10-Aryl, Thienyl,
Furyl, Pyrrolyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Oxadiazolyl, Pyrazolyl, Imidazolyl,
Pyridyl, Pyrimidyl, Pyridazinyl, Pyrazinyl, Indolyl, Indazolyl,
Chinolinyl, Benzfuranyl oder Benzoxazolyl steht,
wobei Aryl,
Thienyl, Furyl, Pyrrolyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Oxadiazolyl, Pyrazolyl,
Imidazolyl, Pyridyl, Pyrimidyl, Pyridazinyl, Pyrazinyl, Indolyl,
Indazolyl, Chinolinyl, Benzfuranyl und Benzoxazolyl substituiert
sein können mit 1 bis 3 Substituenten, wobei die Substituenten
unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der
Gruppe bestehend aus Hydroxy, Hydroxymethyl, Amino, Halogen, Cyano,
Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Aminocarbonyl, C
1-C
4-Alkyl, C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkoxymethyl, C
1-C
4-Alkylamino, C
1-C
4-Alkylaminomethyl, C
1-C
4-Alkylcarbonyl, C
1-C
4-Alkoxycarbonyl, C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl, C
1-C
4-Alkylcarbonylamino, C
1-C
4-Alkylsulfonyl, C
1-C
4-Alkylsulfonylamino, C
1-C
4-Alkylaminosulfonyl, Phenyl, Benzyloxy,
5- oder 6-gliedrigem Heterocyclyl, 5- oder 6-gliedrigem Heterocyclylcarbonyl,
5- oder 6-gliedrigem Heterocyclylmethyl und 5- oder 6-gliedrigem
Heteroaryl,
worin Phenyl, Benzyloxy, Heterocyclyl, Heterocyclylcarbonyl,
Heterocyclylmethyl und Heteroaryl substituiert sein können
mit 1 bis 3 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig
voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend
aus Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Aminocarbonyl,
C
1-C
4-Alkyl, C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino,
C
1-C
4-Alkylcarbonyl,
C
1-C
4-Alkoxycarbonyl,
C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl
und C
1-C
4-Alkylcarbonylamino,
und
ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
-
Bevorzugt
sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher
entweder
U
für N steht,
V für CR
12 steht,
W
für N steht,
A für CR
15 steht,
oder
U
für N steht,
V für N steht,
W für
CR
16 steht,
A für N steht,
wobei
R
12 für Wasserstoff, Hydroxycarbonyl,
Aminocarbonyl, Methyl, Ethyl, C
1-C
4-Alkylcarbonyl, C
1-C
4-Alkoxycarbonyl, C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl, C
1-C
4-Alkylcarbonylamino, Pyrrolidinylcarbonyl,
Piperidinylcarbonyl, Piperazinylcarbonyl, Mopholinylcarbonyl oder
-CH
2R
13 steht,
wobei
Pyrrolidinylcarbonyl, Piperidinylcarbonyl, Piperazinylcarbonyl und
Mopholinylcarbonyl substituiert sein können mit 1 bis 2
Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander
ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Oxo, Methyl
und Ethyl,
und
wobei Alkylcarbonyl, C
2-C
4-Alkoxycarbonyl und C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl substituiert sein können
mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt
wird aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, C
1-C
4-Alkylamino, Pyrrolidinyl, Piperidinyl,
Piperazinyl und Morphlinyl,
worin Pyrrolidinyl, Piperidinyl,
Piperazinyl und Morphlinyl substituiert sein können mit
1 bis 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig
voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend
aus Oxo, Methyl und Ethyl,
und
wobei
R
13 für
Hydroxy, Amino, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkylamino, Pyrrolidinyl, Piperidinyl,
Piperazinyl oder Morphlinyl steht,
worin Pyrrolidinyl, Piperidinyl,
Piperazinyl und Morphlinyl substituiert sein können mit
1 bis 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig
voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend
aus Oxo, Methyl und Ethyl,
R
15 für
Wasserstoff steht,
R
16 für
Wasserstoff steht,
R
1 für
eine Gruppe der Formel
steht,
wobei
*
die Anknüpfstelle an den Heterocyclus bedeutet,
n
für die Zahl 0 steht,
X für NR
10 steht,
worin
R
10 für Wasserstoff steht,
Y
für NR
11 steht,
worin
R
11 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R
3 für 2-Pyridyl, Pyrimid-2-yl, 2-Aminopyrimid-4-yl,
1,3-Thiazol-2-yl oder 1,3-Thiazol-4-yl steht,
wobei 2-Pyridyl,
Pyrimid-2-yl, 1,3-Thiazol-2-yl und 1,3-Thiazol-4-yl substituiert
sind mit 1 oder 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig
voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend
aus Fluor, Chlor, Cyano, Nitro, Amin und Trifluormethyl,
und
wobei
2-Aminopyrimid-4-yl substituiert sein kann mit einem Substituenten,
wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend
aus Fluor, Chlor, Cyano, Nitro, Amino und Trifluormethyl,
R
4 für Wasserstoff steht,
R
5 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R
6 für Wasserstoff steht,
R
7 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R
8 für Wasserstoff steht,
R
9 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R
2 für Phenyl, Thienyl, Pyrazolyl
oder Pyridyl steht,
wobei Phenyl, Thienyl, Pyrazolyl und Pyridyl
substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, wobei
die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt
werden aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy,
Aminocarbonyl, C
1-C
4-Alkyl,
C
1-C
4-Alkoxy, C
1-C
4-Alkoxycarbonyl,
C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl,
Pyrrolidinyl, Piperidinyl, Morpholinyl und Morpholinylcarbonyl,
und
ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
-
Besonders
bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), in welcher
entweder
U
für N steht,
V für CR
12 steht,
W
für N steht,
A für CR
15 steht,
oder
U
für N steht,
V für N steht,
W für
CR
16 steht,
A für N steht,
wobei
R
12 für Wasserstoff, Hydroxycarbonyl,
Methyl, Ethyl, Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, C
1-C
4-Alkylaminocarbonyl, Piperidinylcarbonyl
oder Mopholinylcarbonyl steht,
wobei Piperidinylcarbonyl und
Mopholinylcarbonyl substituiert sein können mit einem Substituenten,
wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend
aus Methyl und Ethyl,
und
wobei C
2-C
4-Alkylaminocarbonyl substituiert sein kann
mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt
wird aus der Gruppe bestehend aus C
1-C
4-Alkylamino, Piperazinyl und Morphlinyl,
worin
Piperazinyl und Morphlinyl substituiert sein können mit
einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird
aus der Gruppe bestehend aus Methyl und Ethyl,
R
15 für
Wasserstoff steht,
R
16 für
Wasserstoff steht,
R
1 für
eine Gruppe der Formel
steht,
wobei
*
die Anknüfstelle an den Heterocyclus bedeutet,
n für
die Zahl steht,
X für X
10 steht,
worin
R
10 für Wasserstoff steht, Y für
X
11 steht,
worin
R
11 für
Wasserstoff oder Methyl steht,
R
3 für
eine Gruppe der Formel
steht,
wobei
#
die Anknüpfstelle an Y bedeutet,
L für Cyano,
Nitro oder Trifluormethyl steht,
M für Wasserstoff
oder Amino steht,
R
4 für Wasserstoff
steht,
R
5 für Wasserstoff
oder Methyl steht,
R
6 für
Wasserstoff steht,
R
7 für
Wasserstoff oder Methyl steht,
R
8 für
Wasserstoff steht,
R
9 für
Wasserstoff steht,
R
2 für
Phenyl steht,
wobei Phenyl substituiert sein kann mit 1 bis
2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander
ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Fluor, Chlor,
Trifluormethyl, Trifluormethoxy, C
1-C
3-Alkyl, Methoxy, Methoxycarbonyl und Ethoxycarbonyl,
und
ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
-
Bevorzugt
sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher U für
N, V für CR12, W für N
und A für CR15 steht,
wobei
R12 für Wasserstoff, Hydroxycarbonyl,
Methyl, Ethyl, Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, C1-C4-Alkylaminocarbonyl, Piperidinylcarbonyl
oder Mopholinylcarbonyl steht,
wobei Piperidinylcarbonyl und
Mopholinylcarbonyl substituiert sein können mit einem Substituenten,
wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend
aus Methyl und Ethyl,
und
wobei C2-C4-Alkylaminocarbonyl substituiert sein kann
mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt
wird aus der Gruppe bestehend aus C1-C4-Alkylamino, Piperazinyl und Morphlinyl,
worin
Piperazinyl und Morphlinyl substituiert sein können mit
einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird
aus der Gruppe bestehend aus Methyl und Ethyl,
und
R15 für Wasserstoff steht.
-
Bevorzugt
sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher U für
N, V für CR12, W für N
und A für CR15 steht, wobei R12 und R15 für
Wasserstoff stehen.
-
Bevorzugt
sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher U für
N, V für N, W für CR16 und
A für N steht, wobei R16 für
Wasserstoff steht.
-
Bevorzugt
sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R1 für
-NHCH2CH2NH-R3 steht, wobei R3 für
5-Cyanopyrid-2-yl steht.
-
Bevorzugt
sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher n für
die Zahl 0 steht.
-
Bevorzugt
sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher X für
NR10 steht, wobei R10 für
Wasserstoff steht.
-
Bevorzugt
sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher Y für
NR11 steht, wobei R11 für
Wasserstoff steht.
-
Bevorzugt
sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R3 für
5-Cyanopyrid-2-yl steht.
-
Bevorzugt
sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R4,
R5, R6, R7, R8 und R9 für Wasserstoff stehen.
-
Gegenstand
der Erfindung ist weiterhin ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen
der Formel (I), oder ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate
ihrer Salze, wobei
die Verbindungen der Formel
in welcher
A, U, V,
W und R
2 die oben angegebene Bedeutung haben,
und
X
1 für Halogen, bevorzugt Chlor oder
Fluor, steht,
mit Verbindungen der Formel
R1-H (III),in welcher
R
1 die oben angegebene Bedeutung hat,
umgesetzt
werden.
-
Die
Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln,
gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, gegebenenfalls in einer
Mikrowelle, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 50°C
bis 200°C bei Normaldruck bis 3 bar.
-
Basen
sind beispielsweise beispielsweise Alkalicarbonate, wie z. B. Natrium-,
Kalium- oder Caesiumcarbonat, oder organische Basen wie Trialkylamine,
z. B. Triethylamin, N-Methylmorpholin, N-Methylpiperidin, 4-Dimethylaminopyridin
oder Diisopropylethylamin, oder andere Basen wie beispielsweise
Natriumhydrid oder Kalium-tert.-butylat, bevorzugt ist Diisopropylethylamin
oder Natriumhydrid.
-
Inerte
Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe
wie Methylenchlorid oder Trichlormethan, Alkohole wie Methanol,
Ethanol, n-Propanol oder Isopropanol, oder Ether wie Dioxan oder
Tetrahydrofuran, oder andere Lösungsmittel wie beispielsweise
Dimethylsulfoxid, Dimethylformamid oder N-Methylpyrrolidon, oder
Gemische dieser Lösungsmittel, bevorzugt ist Isopropanol
oder Dimethylsulfoxid.
-
Die
Verbindungen der Formel (I) sind bekannt, lassen sich nach bekannten
Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren
oder können analog den im Beispielteil (Beispiel 3A bis
10A und Beispiel 18A bis 20A) beschriebenen Verfahren oder analog
zu
J. Org. Chem. (2005), 70 (18), 7331-7337 und
WO 03/000693 hergestellt
werden.
-
Die
Verbindungen der Formel (III) sind bekannt, lassen sich nach bekannten
Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren
oder können analog den im Beispielteil (Beispiel 1A bis 2A,
Beispiel 11A bis 17A und Beispiel 21A bis 24A) beschriebenen Verfahren
hergestellt werden.
-
Die
Herstellung der Ausgangsverbindungen und der Verbindungen der Formel
(I) kann durch die folgenden Syntheseschemata verdeutlicht werden.
-
Schema
1: Herstellung von Triazolo[3,4-f][1,2,4]triazinen
-
Schema
2: Herstellung von Triazolo[1,5-a]pyrazinen
-
Die
erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen ein nicht
vorhersehbares, wertvolles pharmakologisches und pharmakokinetisches
Wirkspektrum.
-
Sie
eigenen sich daher zur Verwendung als Arzneimittel zur Behandlung
und/oder Prophylaxe von Krankheiten bei Menschen und Tieren.
-
Weiterer
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist der Einsatz der erfindungsgemäßen
Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen,
vorzugsweise hämatologischen Erkrankungen, insbesondere
von Leukopenien und Neutropenie.
-
Die
erfindungsgemäßen Verbindungen eignen sich daher
zur Prophylaxe und/oder Behandlung von neurodegenerativen Erkrankungen
wie z. B. Alzheimer, Parkinson, Schizophrenie, Degeneration, Dementia, Depressionen;
Aggression, zerebrovaskulär Ischämie, Schlafstörungen,
Huntington-Chorea, neurotraumatische Erkrankungen wie z. B. Schlaganfall;
Typ 2 Diabetes Mellitus und assoziierte Erkrankungen wie z. B. das metabolische
Syndrom oder Fettleibigkeit, Typ 1 Diabetes Mellitus, Diabetische
Nephrophatie, Diabetische Neurophatie, Diabetische Retinophatie,
Glomerulonephritis, Hyperkalzämie, Hyperglykämie,
Hyperlipidimie, Glukose-Galaktose-Malabsorption, allgemeine endokrine
Dysfunktionen wie z. B. Pankreatitis; hämatologische Erkrankungen,
wie zum Beispiel erworbene und angeborene Neutropenie, medikamentös
induzierte Neutropenie, parasitär induzierte Neutropenie,
Chemotherapie-induzierte Neutropenie, Granulozytopenie, erworbene
und angeborene Leukopenie, erworbene und angeborene Anämie,
hämolytische Anämie, Sichelzellenanämie,
erworbene und angeborenen Thrombozytopenie, Leukozytenfunktionssörungen,
Störungen der Blutgerinnung, ex vivo Vermehrung embryonaler
und adulter Stammzellen, ex vivo Differenzierung embryonaler und
adulter Stammzellen, Knochenmarks, Graft-versus-host-Reaktion; Krebs,
wie zum Beispiel Glaukom, Mammakarzinom, Kolontumor, gastrointestinale
Tumore, Hodgkin-Lymphom, Non-Hodgkin-Lymphom, Kaposisarkom, Lebertumor,
Pankreastumor, Hauttumor, Knochenmarkstumor, Leukämien
wie z. B. akute lymphatische Leukämie, akute myeloische
Leukämie, chronische myeloische Leukämie, chronische
lymphatische Leukämie, Prostatatumore, Lungenkrebs, Nierentumore;
Asthma, progrediente, nicht vollständig reversible Obstruktion
der Atemwege, Lungenentzündug, Lungenfehlfunktion; Entzündungserkrankungen
wie z. B. Autoimmunerkrankungen wie Multiple Sklerose, rheumatoide
Arthritis, Infektionen durch gram-negative und gram-positive Bakterien,
virale Infektionen, Pilzinfektionen wie z. B. durch Candida albicans,
HIV- und HIV-assoziierte Infektionen, Hepatitis der Typen A, B und
C, parasitäre Infektionen; Haarausfall, verminderte Beweglichkeit
von Spermien, Wundheilung; Osteoporose, Knochenmarkserkrankungen,
Knochen- und Gelenkserkrankungen; Herzkreislauferkrankungen wie
z. B. Herzfehler, Herzinsuffizienz, Herzfibrose, Herzrhythmusstörungen,
Myokardinfarkt, Medikamenten- oder Substanzinduzierte Kardiotoxizität,
Atherosklerose, Bluthochdruck.
-
Die
erfindungsgemäßen Verbindungen eignen sich besonders
zur Prophylaxe und/oder Behandlung von neurodegenerativen Erkrankungen
wie z. B. Alzheimer und Schizophrenie, von Typ 2 Diabetes Mellitus und
assoziierten Erkrankungen, von Krebs, von Leukopenien und/oder von
Neutropenien.
-
Die
erfindungsgemäßen Verbindungen können
darüber hinaus auch zur effizienten ex vivo Vermehrung
von adulten hämatopoetischen Stammzellen aus dem Knochenmark,
aus peripherem Blut oder Nabelschnurblut eingesetzt werden.
-
Diese
so expandierten Zellen können dann zur Verkürzung
der durch myeloablative Therapien induzierten Zytopenien oder im
Rahmen von therapeutischen Transplantationsverfahren oder bei hämatologischen Systemerkrankungen,
wie z. B. Leukämien, oder mit nach der Expansion gentechnisch
veränderter Zellen für Gentherapien verwendet
werden.
-
Weiterer
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen
Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen,
insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.
-
Weiterer
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen
Verbindungen zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung
und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten
Erkrankungen.
-
Weiterer
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung
und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten
Erkrankungen, unter Verwendung einer therapeutisch wirksamen Menge
einer erfindungsgemäßen Verbindung.
-
Weiterer
Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, enthaltend
eine erfindungsgemäße Verbindung und einen oder
mehrere weitere Wirkstoffe.
-
Weiterer
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur ex vivo
Vermehrung von adulten hämatopoetischen Stammzellen aus
dem Knochenmark, aus peripherem Blut oder Nabelschnurblut, das dadurch
gekennzeichnet ist, dass eine wirksame Menge der erfindungsgemäßen
Verbindung zugegeben wird.
-
Die
erfindungsgemäßen Verbindungen können
systemisch und/oder lokal wirken. Zu diesem Zweck können
sie auf geeignete Weise appliziert werden, wie z. B. oral, parenteral,
pulmonal, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal,
conjunctival, otisch oder als Implantat bzw. Stent.
-
Für
diese Applikationswege können die erfindungsgemäßen
Verbindungen in geeigneten Applikationsformen verabreicht werden.
-
Für
die orale Applikation eignen sich nach dem Stand der Technik funktionierende
schnell und/oder modifiziert die erfindungsgemäßen
Verbindungen abgebende Applikationsformen, die die erfindungsgemäßen Verbindungen
in kristalliner und/oder amorphisierter und/oder gelöster
Form enthalten, wie z. B. Tabletten (nicht überzogene oder überzogene
Tabletten, beispielsweise mit magensaftresistenten oder sich verzögert auflösenden
oder unlöslichen Überzügen, die die Freisetzung
der erfindungsgemäßen Verbindung kontrollieren),
in der Mundhöhle schnell zerfallende Tabletten oder Filme/Oblaten,
Filme/Lyophylisate, Kapseln (beispielsweise Hart- oder Weichgelatinekapseln),
Dragees, Granulate, Pellets, Pulver, Emulsionen, Suspensionen, Aerosole
oder Lösungen.
-
Die
parenterale Applikation kann unter Umgehung eines Resorptionsschrittes
geschehen (z. B. intravenös, intraarteriell, intrakardial,
intraspinal oder intralumbal) oder unter Einschaltung einer Resorption
(z. B. intramuskulär, subcutan, intracutan, percutan oder
intraperitoneal). Für die parenterale Applikation eignen
sich als Applikationsformen u. a. Injektion- und Infusionszubereitungen
in Form von Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Lyophilisaten
oder sterilen Pulvern.
-
Bevorzugt
ist die orale Applikation.
-
Für
die sonstigen Applikationswege eignen sich z. B. Inhalationsarzneiformen
(u. a. Pulverinhalatoren, Nebulizer), Nasentropfen, -lösungen,
-sprays; lingual, sublingual oder buccal zu applizierende Tabletten,
Filme/Oblaten oder Kapseln, Suppositorien, Ohren- oder Augenpräparationen,
Vaginalkapseln, wässrige Suspensionen (Lotionen, Schüttelmixturen),
lipophile Suspensionen, Salben, Cremes, transdermale therapeutische
Systeme (wie beispielsweise Pflaster), Milch, Pasten, Schäume,
Streupuder, Implantate oder Stents.
-
Die
erfindungsgemäßen Verbindungen können
in die angeführten Applikationsformen überführt
werden. Dies kann in an sich bekannter Weise durch Mischen mit inerten,
nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen geschehen.
Zu diesen Hilfsstoffen zählen u. a. Trägerstoffe
(beispielsweise mikrokristalline Cellulose, Laktose, Mannitol),
Lösungsmittel (z. B. flüssige Polyethylenglycole),
Emulgatoren und Dispergier- oder Netzmittel (beispielsweise Natriumdodecylsulfat,
Polyoxysorbitanoleat), Bindemittel (beispielsweise Polyvinylpyrrolidon),
synthetische und natürliche Polymere (beispielsweise Albumin),
Stabilisatoren (z. B. Antioxidantien wie beispielsweise Ascorbinsäure),
Farbstoffe (z. B. anorganische Pigmente wie beispielsweise Eisenoxide)
und Geschmacks- und/oder Geruchskorrigentien.
-
Weiterer
Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, die mindestens
eine erfindungsgemäße Verbindung, vorzugsweise
zusammen mit einem oder mehreren inerten nichttoxischen, pharmazeutisch
geeigneten Hilfsstoff enthalten, sowie deren Verwendung zu den zuvor
genannten Zwecken.
-
Im
Allgemeinen hat es sich als vorteilhaft erwiesen, bei parenteraler
Applikation Mengen von etwa 5 bis 500 mg je 24 Stunden zur Erzielung
wirksamer Ergebnisse zu verabreichen. Bei oraler Applikation beträgt die
Menge etwa 5 bis 500 mg je 24 Stunden.
-
Trotzdem
kann es gegebenenfalls erforderlich sein, von den genannten Mengen
abzuweichen, und zwar in Abhängigkeit von Körpergewicht,
Applikationsweg, individuellem Verhalten gegenüber dem
Wirkstoff, Art der Zubereitung und Zeitpunkt bzw. Intervall, zu
welchem die Applikation erfolgt.
-
Die
Prozentangaben in den folgenden Tests und Beispielen sind, sofern
nicht anders angegeben, Gewichtsprozente; Teile sind Gewichtsteile.
Lösungsmittelverhältnisse, Verdünnungsverhältnisse
und Konzentrationsangaben von flüssig/flüssig-Lösungen
beziehen sich jeweils auf das Volumen. Die Angabe "w/v" bedeutet "weight/volume"
(Gewicht/Volumen). So bedeutet beispielsweise "10% w/v": 100 ml
Lösung oder Suspension enthalten 10 g Substanz.
-
A) Beispiele
-
Abkürzungen:
-
-
- abs.
- absolut
- Boc
- tert-Butoxycarbonyl
- CDCl3
- Deuterochloroform
- d
- Tag
- DIEA
- N,N-Diisopropylethylamin
- DMAP
- 4-N,N-Dimethylaminopyridin
- DMF
- Dimethylformamid
- DMSO
- Dimethylsulfoxid
- d. Th.
- der Theorie
- EDC
- N'-(3-Dimethylaminopropyl)-N-ethylcarbodiimid × HCl
- eq.
- Äquivalent
- ESI
- Elektrospray-Ionisation
(bei MS)
- ges.
- gesättigt
- h
- Stunde
- HOBt
- 1-Hydroxy-1H-benzotriazol × H2O
- HPLC
- Hochdruck-, Hochleistungsflüssigchromatographie
- konz.
- konzentriert
- LC-MS
- Flüssigchromatographie-gekoppelte
Massenspektrometrie
- min.
- Minuten
- MS
- Massenspektrometrie
- MW
- Molekulargewicht [g/mol]
- NMR
- Kernresonanzspektroskopie
- OAc
- Acetat
- OEt
- Ethoxy
- p. a.
- zur Analyse
- PyBOP
- 1-Benzotriazolyloxy-tripyrrolidinophosphoniumhexafluorophosphat
- Rf
- Retentionsindex (bei
DC)
- RP-HPLC
- Reverse Phase HPLC
- RT
- Raumtemperatur
- Rt
- Retentionszeit (bei
HPLC)
- TBTU
- (Benzotriazol-1-yloxy)bisdimethylaminomethyliumfluoroborat
- TFA
- Trifluoressigsäure
- THF
- Tetrahydrofuran
-
LC-MS Methoden:
-
- Methode 1: Instrument: Micromass Quattro LCZ mit HPLC Agilent
Serie 1100; Säule: Phenomenex Synergi 2.5 μ MAX-RP
100 A Mercury 20 mm × 4 mm; Eluent A: 1 l Wasser + 0.5
ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 l Acetonitril + 0.5
ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A → 0.1
min 90% A → 3.0 min 5% A → 4.0 min 5% A → 4.1
min 90% A; Fluss: 2 ml/min; Ofen: 50°C; UV-Detektion: 208–400
nm.
- Methode 2: Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp
HPLC: Waters Alliance 2795; Säule: Merck Chromolith SpeedROD
RP-18e 100 mm × 4.6 mm; Eluent A: Wasser + 500 μl
50%ige Ameisensäure/l; Eluent B: Acetonitril + 500 μl
50%ige Ameisensäure/l; Gradient: 0.0 min 10% B → 7.0
min 95% B → 9.0 min 95% B; Ofen: 35°C; Fluss:
0.0 min 1.0 ml/min → 7.0 min 2.0 ml/min → 9.0
min 2.0 ml/min; UV-Detektion: 210 nm
- Methode 3: Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp
HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; Säule: Phenomenex Gemini
3 μ 30 mm × 3.00 mm; Eluent A: 1 l Wasser + 0.5
ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 l Acetonitril + 0.5
ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A → 2.5
min 30% A → 3.0 min 5% A → 4.5 min 5% A; Fluss:
0.0 min 1 ml/min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min. 2 ml/min; Ofen: 50°C;
UV-Detektion: 210 nm.
- Methode 4: Instrument: Micromass Platform LCZ mit HPLC Agilent
Serie 1100; Säule: Thermo Hypersil GOLD 3 μ 20
mm × 4 mm; Eluent A: 1 l Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure,
Eluent B: 1 l Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure;
Gradient: 0.0 min 100% A → 0.2 min 100% A → 2.9
min 30% A → 3.1 min 10% A → 5.5 min 10% A; Ofen:
50°C; Fluss: 0.8 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.
- Methode 5: Gerätetyp MS: Waters ZQ; Gerätetyp
HPLC: Waters Alliance 2795; Säule: Phenomenex Onyx Monolithic
C18, 100 mm × 3 mm; Eluent A: 1 l Wasser + 0.5 ml 50%ige
Ameisensäure, Eluent B: 1 l Acetonitril + 0.5 ml 50%ige
Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A → 2 min
65% A → 4.5 min 5% A → 6 min 5% A; Fluss: 2 ml/min;
Ofen: 40°C; UV-Detektion: 210 nm.
- Methode 6: Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp
HPLC: Waters Alliance 2795; Säule: Phenomenex Synergi 2.5 μ MAX-RP
100 A Mercury 20 mm × 4 mm; Eluent A: 1 l Wasser + 0.5
ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 l Acetonitril + 0.5
ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A → 0.1
min 90% A → 3.0 min 5% A → 4.0 min 5% A → 4.01
min 90% A; Fluss: 2 ml/min;; Ofen: 50°C; UV-Detektion:
210 nm.
- Methode 7: Instrument: Micromass Quattro LCZ mit HPLC Agilent
Serie 1100; Säule: Phenomenex Onyx Monolithic C18, 100
mm × 3 mm. Eluent A: 1 l Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure,
Eluent B: 1 l Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure;
Gradient: 0.0 min 90% A → 2 min 65% A → 4.5 min
5% A → 6 min 5% A; Fluss: 2 ml/min; Ofen: 40°C;
UV-Detektion: 208–400 nm.
- Methode 8: Instrument: Micromass QuattroPremier mit Waters UPLC
Acquity; Säule: Thermo Hypersil GOLD 1.9 μ 50
mm × 1 mm; Eluent A: 1 l Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure,
Eluent B: 1 l Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure;
Gradient: 0.0 min 100% A → 0.1 min 100% A → 1.5
min 10% A → 2.2 min 10% A; Ofen: 50°C; Fluss:
0.33 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.
- Methode 9: Instrument: Micromass Quattro Micro MS mit HPLC Agilent
Serie 1100; Säule: Thermo Hypersil GOLD 3 μ 20
mm × 4 mm; Eluent A: 1 l Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure,
Eluent B: 1 l Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure;
Gradient: 0.0 min 100% A → 3.0 min 10% → 4.0 min
10% A → 4.01 min 100% A → 5.00 min 100% A; Fluss:
0.0 min/3.0 min/4.0 min/4.01 min 2.5 ml/min, 5.00 min 2 ml/min;
Ofen: 50°C; UV-Detektion: 210 nm.
-
Ausgangsverbindungen
-
Beispiel 1A
-
tert-Butyl-{2-[(5-cyanopyridin-2-yl)amino]ethyl}carbamat
-
5.5
g (39.7 mmol) 6-Chlornicotinsäurenitril werden in 70 ml
DMSO gelöst, und mit 10.2 g (63.5 mmol) N-Boc-Ethylendiamin
und 11 g (79.4 mmol) Kaliumcarbonat versetzt. Es wird 12 h bei 90°C
nachgerührt. Der Rückstand wird in einem Gemisch
von Wasser und Essigsäureethylester aufgenommen. Die organische
Phase wird mit gesättigter wässriger Natriumchloridlösung
gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und am Rotationsverdampfer
eingeengt. Der Rückstand wird an Kieselgel 60 chromatographiert
(Laufmittel: Cyclohexan/Essigsäureethylester 10:1 bis 2:1).
Es werden 7.9 g (77% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.
LCMS
(Methode 6): Rt = 1.46 min. (m/z = 263 (M+H)+)
1H-NMR (400
MHz, DMSO-d6): δ = 8.37 (d, 1H),
7.66 (d, 1H) 7.6 (s, 1H), 6.87 (t, 1H), 6.53 (d, 1H), 3.32 (q, 2H), 3.09
(q, 2H), 1.37 (s, 9H).
-
Beispiel 2A
-
6-[(2-Aminoethyl)amino]nicotinnitril
Dihydrochlorid
-
7.9
g (30 mmol) tert-Butyl-{2-[(5-cyanopyridin-2-yl)amino]ethyl}carbamat
(Beispiel 1A) werden in 100 ml 4 N Chlorwasserstoff in Dioxan gelöst
und 30 min nachgerührt. Man engt das Reaktionsgemisch um
die Hälfte ein und gibt den gleichen Teil an Diethylether
zu. Das Reaktionsgemisch wird 20 min nachgerührt und das
Produkt abfiltriert und mit Diethylether nachgewaschen. Es werden
7 g (94% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.
LCMS
(Methode 4): Rt = 0.51 min. (m/z = 162 (M+H)+)
1H-NMR (400
MHz, DMSO-d6): δ = 8.44 (s, 1H),
7.76 (d, 1H), 6.67 (d, 1H), 3.58 (t, 2H), 2.98 (q, 2H).
-
Beispiel 3A
-
2,4-Dichlor-N'-4H-1,2,4-triazol-4-ylbenzolcarboximidamid
-
1.37
g (0.059 mol) Natrium werden in 50 ml Ethanol gelöst und
mit 5 g (0.059 mol) 4-Amino-4H-1,2,4-triazol, sowie 10.23 g (0.059
mol) 2,6-Dichlorbenzonitril versetzt. Es wird 5 h unter Rückfluß nachgerührt.
Nach dem Abkühlen wird der anfallende Feststoff abfiltriert
und das Filtrat einrotiert. Der Feststoff wird in 120 ml Wasser
15 min unter Rückfluß gerührt. Der Feststoff
wird heiß abgesaugt und getrocknet. Die Mutterlauge wird
verworfen. Das einrotierte Filtrat wird in 150 ml Wasser aufgenommen
im Ultraschallbad suspendiert und 15 min unter Rückfluß nachgerührt.
Der Feststoff wird heiß abgesaugt und getrocknet. Die Mutterlauge
wird verworfen. Beide Feststoffe werden vereinigt und es werden
12.99 g (74% d. Th.) des Produktes erhalten.
LCMS (Methode
3): Rt = 1.34 min. (m/z = 256 (M+H)+).
1H-NMR (400
MHz, DMSO-d6): δ = 8.44 (s, 2H),
7.76 (s, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.55 (d, 1H).
-
Beispiel 4A
-
N'-4H-1,2,4-Triazol-4-yl-4-(trifluormethyl)benzolcarboximidamid
-
Die
Verbindung wird analog zu Beispiel 3A hergestellt. Als Edukt wird
4-(Trifluormethyl)benzonitril anstatt 2,6-Dichlorbenzonitril verwendet.
LCMS
(Methode 3): Rt = 1.55 min. (m/z = 256 (M+H)+).
1H-NMR (400
MHz, DMSO-d6): δ = 8.5 (s, 2H),
8.11 (d, 2H), 7.87 (d, 2H), 7.56 (br, s, 2H).
-
Beispiel 5A
-
Butyl-[(Z)-(2,4-dichlorphenyl)(4H-1,2,4-triazol-4-ylimino)methyl]carbamat
-
808
mg (35.1 mmol) Natrium werden in 50 ml 1-Butanol gelöst
und mit 6 g (23.4 mmol) 2,4-Dichlor-N'-4H-1,2,4-triazol-4-ylbenzolcarboximidamid
(Beispiel 3A), sowie 6.2 ml (51.5 mmol) Diethylcarbonat versetzt.
Es wird 2 h unter Rückfluß nachgerührt.
Nach Abkühlung wird Essigsäureethylester und Wasser
zugegeben, und mit konzentrierter Salzsäure auf einen pH-Wert
5 eingestellt. Die Phasen werden getrennt, und die organische Phase
wird über Magnesiumsulfat getrocknet und am Rotationsverdampfer
eingeengt. Man chromatographiert das Reaktionsgemisch an Kieselgel
(Laufmittel Dichlormethan/Methanol 100:1 → 50:1). Es werden
4.8 g (56% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.
LCMS
(Methode 8): Rt = 1.08 min. (m/z = 356 (M+H)+).
-
Beispiel 6A
-
Butyl-{(Z)-(4H-1,2,4-triazol-4-ylimino)[4-(trifluormethyl)phenyl]methyl}carbamat
-
Die
Verbindung wird analog zu Beispiel 5A aus N'-4H-1,2,4-Triazol-4-yl-4-(trifluormethyl)benzolcarboximidamid
(Beispiel 4A) hergestellt.
LCMS (Methode 6): Rt =
1.73 min. (m/z = 356 (M+H)+).
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ =
10.75 (s, 1H), 8.8 (s, 2H), 7.91 (d, 2H), 7.87 (d, 2H), 3.97 (t,
2H), 1.45 (q, 2H), 1.2 (m, 2H), 0.83 (t, 3H).
-
Beispiel 7A
-
6-(2,4-Dichlorphenyl)[1,2,4]triazolo[3,4-f][1,2,4]triazin-8(7H)-on
-
4.7
g (13.4 mmol) Butyl-[(Z)-(2,4-dichlorphenyl)(4H-1,2,4-triazol-4-ylimino)methyl]carbamat
(Beispiel 5A) werden in 25 ml Phenol 5 h unter Rückfluß gerührt.
Das Reaktionsgemisch wird mit Dichlormethan verdünnt. Man
chromatographiert das Reaktionsgemisch an Kieselgel (Laufmittel
Dichlormethan/Methanol 100% → 50:1). Es werden 3.1 g (78%
d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.
LCMS (Methode
3): Rt = 1.62 min. (m/z = 282 (M+H)+).
1H-NMR (400
MHz, DMSO-d6): δ = 13.0 (s, 1H),
9.5 (s, 1H), 7.99 (ss, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.65 (dd, H).
-
Beispiel 8A
-
6-[4-(Trifluormethyl)phenyl][1,2,4]triazolo[3,4-f][1,2,4]triazin-8(7H)-on
-
Die
Verbindung wird analog zu Beispiel 7A aus Butyl-{(Z)-(4H-1,2,4-triazol-4-ylimino)[4-(trifluormethyl)phenyl]methyl}carbamat
(Beispiel 6A) hergestellt.
LCMS (Methode 9): Rt =
0.87 min. (m/z = 282 (M+H)+).
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ =
13.05 (br, s, 1H), 9.52 (s, 1H), 8.16 (d, 2H), 7.97 (d, 2H).
-
Beispiel 9A
-
8-Chlor-6-(2,4-dichlorphenyl)[1,2,4]triazolo[3,4-f][1,2,4]triazin
-
4.7
g (13.4 mmol) 6-(2,4-Dichlorphenyl)[1,2,4]triazolo[3,4-f][1,2,4]triazin-8(7H)-on
(Beispiel 7A) werden in 20 ml Phosphorylchlorid vorgelegt und mit
4.8 g (21.7 mmol) Benzyltriethylammoniumchlorid versetzt. Es wird
2 h bei 120°C gerührt. Das Reaktionsgemisch wird
auf 150 ml gesättigte Natriumhydrogencarbonat-Lösung
gegossen und so lange mit festem Natriumhydrogencarbonat versetzt,
bis der pH-Wert 7 erreicht wird. Der ausfallende Feststoff wird
abgesaugt und getrocknet. Es werden 1.3 g (75% d. Th.) des Produktes
als Feststoff erhalten.
LCMS (Methode 3): Rt =
2.23 min. (m/z = 300 (M+H)+).
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ =
9.51 (s, 1H), 7.9 (ss, 1H), 7,71 (d, 1H), 7.66 (dd, 1H).
-
Beispiel 10A
-
8-Chlor-6-[4-(trifluormethyl)phenyl][1,2,4]triazolo[3,4-f][1,2,4]triazin
-
Die
Verbindung wird analog zu Beispiel 9A aus 6-[4-(Trifluormethyl)phenyl][1,2,4]triazolo[3,4-f][1,2,4]triazin-8(7H)-on
(Beispiel 8A) hergestellt.
LCMS (Methode 3): Rt =
2.3 min. (m/z = 300 (M+H)+).
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ =
9.52 (s, 1H), 8.16 (d, 1H), 7.97 (d, 1H).
-
Beispiel 11A
-
tert-Butyl-(6-chlorpyridin-2-yl)carbamat
-
23.4
g (181.8 mmol) 2-Chlor-5-aminopyridin werden unter Argon mit 150
ml THF versetzt und auf 0°C gekühlt. Es werden
73.3 g (400 mmol) Bis-(trimethylsilyl)-natriumamid und 43.65 g (200
mmol) Di-tert-butyldicarbonat, gelöst in 150 ml THF, zugetropft.
Nach 15 min wird das Kühlbad entfernt und weitere 15 min
bei RT nachgerührt. Das THF wird abrotiert und der Rückstand
mit Essigsäureethylester und 0.5 N Salzsäure versetzt und
extrahiert. Die organische Phase wird abgetrennt, über
Magnesiumsulfat getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt.
Man chromatographiert das Reaktionsgemisch an Kieselgel (Laufmittel
Dichlormethan/Methanol 100% → 100:3). Es werden 36.54 g
(88% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.
LCMS (Methode
3): Rt = 2.41 min. (m/z = 175 (M+H)+).
1H-NMR (400
MHz, DMSO-d6): δ = 10.11 (s, 1H),
7.78 (d, 2H), 7.1 (t, 1H), 1.47 (s, 9H).
-
Beispiel 12A
-
tert-Butyl-(6-chlor-3-formylpyridin-2-yl)carbamat
-
Die
Reaktionsapparatur wird ausgeheizt, und die Reaktion erfolgt unter
Argon und wird gerührt. 15 g (65.6 mmol) tert-Butyl-(6-chlorpyridin-2-yl)carbamat
(Beispiel 11A) und 19 g (164 mmol) 1,2-Bis(dimethylamino)ethan werden
in 270 ml THF vorgelegt und auf –78°C abgekühlt.
Es werden 102.5 ml (164 mmol) Butyllithium (1.6 N) zugetropft. Nach
Beendigung des Zutropfens wird die Reaktion langsam auf –10°C
erwärmt und bei –10°C für 2
h gehalten. Dann wieder auf –78°C abgekühlt,
und es werden 10 ml (131 mmol) DMF dazugegeben. Die Reaktion wird
langsam auf RT erwärmt und das Reaktionsgemisch wird auf
1 l Essigsäureethylester und 350 ml 1 N Salzsäure
gegeben, 15 min nachgerührt und die organische Phase wird
abgetrennt. Es wird mit Wasser und gesättigter Natriumhydrogencarbonat-Lösung
gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und am Rotationsverdampfer
eingeengt. Der Rückstand wird mit Diethylether versetzt
und der Feststoff wird abgesaugt und nachgetrocknet. Es werden 12.3
g (73% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.
LCMS (Methode
3): Rt = 2.19 min. (m/z = 255 (M+H)–).
1H-NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ = 10.37 (s,
1H), 9.83 (s, 1H), 8.2 (d, 1H), 7.42 (d, 1H), 1.46 (s, 9H).
-
Beispiel 13A
-
tert-Butyl-{6-chlor-3-[(hydroxyimino)methyl]pyridin-2-yl}carbamat
-
15.45
g (60.2 mmol) tert-Butyl-(6-chlor-3-formylpyridin-2-yl)carbamat
(Beispiel 12A) wird in 750 ml Ethanol vorgelegt und mit einer Lösung
aus 225 ml Wasser und 9.38 g (120.4 mmol) Natriumacetat versetzt und
5 min gerührt. Eine Lösung aus 225 ml Wasser und
8.36 g (114.4 mmol) Hydroxylamin Hydrochlorid wird zugegeben und
4 h bei RT gerührt. Bei 20°C wird das Reaktionsgemisch
am Rotationsverdampfer eingeengt. Der Rückstand wird in
Essigsäureethylester aufgenommen, zweimal mit gesättigter
Natriumhydrogencarbonat-Lösung und einmal mit gesättiger
Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Die organische Phase wird
abgetrennt, über Magnesiumsulfat getrocknet und bei 20°C
am Rotationsverdampfer eingeengt. Es werden 15.5 g (80% d. Th.)
des Produktes als Feststoff erhalten.
LCMS (Methode 3): Rt = 2.08 min. (m/z = 270 (M+H)–).
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ =
11.71 (s, 1H), 9.91 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.02 (d, 1H), 7.3 (d,
1H), 1.49 (s, 9H).
-
Beispiel 14A
-
2-Amin-6-chlorpyridin-3-carbaldehydoxim
Hydrochlorid
-
15.5
g (57 mmol) tert-Butyl-{6-chlor-3-[(hydroxyimino)methyl]pyridin-2-yl}carbamat
(Beispiel 13A) werden in 285 ml 4 N Chlorwasserstoff in Dioxan gelöst
und 30 min nachgerührt. Man engt das Reaktionsgemisch um
die Hälfte ein und gibt den gleichen Teil an Diethylether
zu. Das Reaktionsgemisch wird 20 min nachgerührt und das
Produkt abfiltriert und mit Diethylether nachgewaschen. Es werden
11 g (94% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.
LCMS
(Methode 6): Rt = 1.09 min. (m/z = 172 (M+H)+)
1H-NMR (400
MHz, DMSO-d6): δ = 8.27 (s, 1H),
7.61 (d, 1H), 6.65 (d, 1H).
-
Beispiel 15A
-
2-Amino-6-chlorpyridin-3-carbonitril
-
11.15
g ( 53.6 mmol) 2-Amin-6-chlorpyridin-3-carbaldehydoxim Hydrochlorid
(Beispiel 14A) werden in Dioxan vorgelegt, mit 13 ml (161 mmol)
Pyridin versetzt und auf 0°C abgekühlt. Es werden
8.3 ml (58.95 mmol) Trifluoressigsäureanhydrid zugegeben,
man erwärmt die Reaktion auf RT und rührt anschließend
2 h bei 60°C. Das Reaktionsgemisch wird in einem Gemisch
von Essigsäureethylester und Natriumhydrogencarbonat-Lösung
aufgenommen. Die organische Phase wird mit gesättigter
wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, über
Magnesiumsulfat getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt.
Der Rückstand wird in Dichlormethan:Diethylether 3:1 suspendiert,
und der Feststoff wird abgesaugt und getrocknet. Es werden 5.56
g (66% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.
LCMS (Methode
6): Rt = 1.0 min. (m/z = 154 (M+H)+).
1H-NMR (400
MHz, DMSO-d6): δ = 7.91 (d, 1H),
7.38 (s, 2H), 6.69 (d, 1H).
-
Beispiel 16A
-
tert-Butyl-{2-[(6-amino-5-cyanopyridin-2-yl)amino]ethyl}carbamat
-
2
g (13 mmol) 2-Amino-6-chlorpyridin-3-carbonitril (Beispiel 15A)
werden in 15 ml DMSO vorgelegt und mit 2.71 g (16.93 mmol) N-Boc-Ethylenamin
und 3.4 ml (19.54 mmol) N,N-Diisopropylethylamin versetzt. Das Reaktionsgemisch
wird 1.5 h bei 115°C in dem Mikrowellenreaktor bestrahlt.
Das Reaktionsgemisch wird in einem Gemisch von Essigsäureethylester
und Wasser aufgenommen. Die organische Phase wird mit gesättigter
wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, über
Magnesiumsulfat getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt.
Es werden 23.38 g (88% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.
LCMS
(Methode 3): Rt = 1.7 min. (m/z = 278 (M+H)+).
1H-NMR (400
MHz, DMSO-d6): δ = 7.3 (s, 1H),
7.0 (br, s, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.25 (s, 2H), 5.78 (d, 1H), 3.25
(q, 2H), 3.06 (q, 2H), 1.36 (s, 9H).
-
Beispiel 17A
-
2-Amino-6-[(2-aminoethyl)amino]pyridin-3-carbonitril
Dihydrochlorid
-
6.76
g (24.38 mmol) tert-Butyl-{2-[(6-amino-5-cyanopyridin-2-yl)amino]ethyl}carbamat
(Beispiel 16A) werden in 122 ml 4 N Chlorwasserstofflösung
in Dioxan gelöst und 30 min nachgerührt. Man engt
das Reaktionsgemisch um die Hälfte ein und gibt den gleichen
Teil an Diethylether zu. Das Reaktionsgemisch wird 20 min nachgerührt
und das Produkt abfiltriert und mit Diethylether nachgewaschen.
Es werden 5.43 g (89% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.
LCMS
(Methode 6): Rt = 0.92 min. (m/z = 177 (M+H)+)
1H-NMR (400
MHz, DMSO-d6): δ = 8.1 (s, 2H),
7.5 (d, 1H), 5.96 (d, 1H), 3.53 (q, 2H), 3.0 (q, 2H).
-
Beispiel 18A
-
Methyl-1-[2-(2,4-dichlorphenyl)-2-oxoethyl]-1H-1,2,4-triazol-5-carboxylat
-
4.3
g (33.8 mmol) Methyl-1H-1,2,4-triazol-3-carboxylat werden in 58
ml Aceton vorgelegt und mit 7.9 g (35.4 mmol) 2'-Chlor-2,4-dichloracetophenon
und 5.3 g (38.9 mmol) Kaliumcarbonat versetzt. Bei RT wird 20 h
nachgerührt. Anschließend wird das Reaktionsgemisch
bei 20°C am Rotationsverdampfer eingeengt. Der Rückstand
wird in Dichlormethan aufgenommen, zweimal mit Wasser und einmal
mit gesättigter Natriumchlorid-Lösung gewaschen.
Die organische Phase wird abgetrennt, über Magnesiumsulfat
getrocknet und bei 20°C am Rotationsverdampfer eingeengt.
Man chromatographiert das Reaktionsgemisch an Kieselgel (Laufmittel Dichlormethan/Ethanol
100:1). Es werden 1.47 g (10% d. Th.) des Produktes als Feststoff
erhalten.
LCMS (Methode 8): Rt = 1.08
min. (m/z = 314 (M+H)+)
1H-NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.27 (s,
1H), 8.00 (d, 1H), 7.85 (ss, 1H), 7.68 (dd, 1H), 6.12 (s, 2H), 3.85 (s,
3H).
-
Beispiel 19A
-
6-(2,4-Dichlorphenyl)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyrazin-8(7H)-on
-
1.44
g (3.5 mmol) Methyl-1-[2-(2,4-dichlorphenyl)-2-oxoethyl]-1H-1,2,4-triazol-5-carboxylat
(Beispiel 18A) und 2.7 g (35 mmol) Ammoniumacetat werden in Eisessig
24 h unter Rückfluß gerührt. Das Reaktionsgemisch
wird abgekühlt und in Eiswasser gegeben. Mit Natrimnhydrogencarbonat
wird der pH-Wert auf 4 eingestellt und der ausfallende Feststoff
wird abgesaugt und getrocknet. Es werden 460 mg (47% d. Th.) des
Produktes als Feststoff erhalten.
LCMS (Methode 6): Rt = 1.32 min. (m/z = 281 (M+H)+)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ =
12.23 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.84 (ss, 1H), 7.64 (d,
1H), 7.59 (dd, 1H).
-
Beispiel 20A
-
8-Chlor-6-(2,4-dichlorphenyl)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyrazin
-
460
mg (1.6 mmol) 6-(2,4-Dichlorphenyl)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyrazin-8(7H)-on
(Beispiel 19A) werden in 18 ml Phosphorylchlorid vorgelegt und mit
1.1 g (4.9 mmol) Benzyltriethylammoniumchlorid versetzt. Es wird 2
h bei 120°C nachgerührt. Das Reaktionsgemisch
wird auf 150 ml gesättigte Natriumhydrogencarbonat-Lösung
gegossen und so lange mit festem Natriumhydrogencarbonat versetzt
bis der pH-Wert 7 erreicht wird. Der ausfallende Feststoff wird
abgesaugt und getrocknet. Es werden 360 mg (73% d. Th.) des Produktes
als Feststoff erhalten.
LCMS (Methode 6): Rt =
1.97 min. (m/z = 299 (M+H)+)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ =
8.5 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 7.85 (ss, 1H), 7.72 (d, 1H), 7.63 (dd,
1H).
-
Beispiel 21A
-
4-(Trifluoracetyl)morpholin
-
15
g (172 mmol) Morpholin werden in 750 ml Dichlormethan vorgelegt,
und es werden bei 0°C 29 ml (206 mmol) Trifluoressigsäureanhydrid
und 119 ml (688 mmol) N,N-Diisopropylethylamin zugegeben. Das Reaktionsgemisch
wird auf RT erwärmt und 3 h bei RT nachgerührt.
Das Reaktionsgemisch wird eingeengt und der Rückstand in
Essigsäureethylester aufgenommen und nacheinander mit wässriger
Natriumhydrogencarbonat-Lösung, 1 N Salzsäure
und wieder mit wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung
gewaschen. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat
getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt. Es werden 28 g
(88% d. Th.) des Produktes als Öl erhalten.
LCMS (Methode
9): Rt = 1.22 min. (m/z = 184 (M+H)+)
1H-NMR (400
MHz, DMSO-d6): δ = 3.65 (m, 2H),
3.56 (m, 2H).
-
Beispiel 22A
-
tert-Butyl-[6-chlor-3-(trifluoracetyl)pyridin-2-yl]carbamat
-
8
g (35 mmol) tert-Butyl-(6-chlorpyridin-2-yl)carbamat (Beispiel 11A)
werden in 100 ml THF vorgelegt und auf –50°C gekühlt.
Es werden 55 ml (87 mmol) Butyllithium (1.6 N) zugetropft. Nach
Beendigung des Zutropfens wird die Reaktion langsam auf –10°C
erwärmt und bei 0°C für 2 h gerührt.
Anschließend wird wieder auf –40°C abgekühlt,
und es werden 12.8 g (70 mmol) 4-(Trifluoracetyl)morpholin (Beispiel
21A), gelöst in 4 ml THF, zugegeben. Die Reaktionslösung
wird 1 h bei –40°C nachgerührt, danach
bei –40°C auf 1 l Essigsäureethylester
und 350 ml Ammoniumchloridlösung gegossen und extrahiert.
Die organische Phase wird abgetrennt, über Magnesiumsulfat
getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt. Man chromatographiert
das Reaktionsgemisch an Kieselgel (Laufmittel Cyclohexan/Essigsäureethylester
10:1). Es werden 9 g (79% d. Th.) des Produktes als Öl
erhalten.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 10.96 (s, 1H), 7.99 (d,
1H), 7.4 (d, 1H), 1.43 (s, 9H).
-
Beispiel 23A
-
tert-Butyl-[6-({2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]ethyl}amino)-3-(trifluoracetyl)pyridin-2-yl]carbamat
-
5
g (15.4 mmol) tert-Butyl-[6-chlor-3-(trifluoracetyl)pyridin-2-yl]carbamat
(Beispiel 22A) werden in 37.5 ml DMSO vorgelegt und mit 3.2 g (20
mmol) N-Boc-Ethylendiamin und 4 ml (23 mmol) N,N-Diisopropylethylamin
versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 0.5 h bei 90°C in dem
Mirkrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wird in einem
Gemisch von Essigsäureethylester und Wasser aufgenommen.
Die organische Phase wird mit gesättigter wässriger
Natriumchlorid-Lösung gewaschen, über Magnesiumsulfat
getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt. Man chromatographiert
das Reaktionsgemisch an Kieselgel (Laufmittel Cyclohexan/Essigsäureethylester
5:1 → 1:1). Es werden 2.5 g (34% d. Th.) des Produktes
als Feststoff erhalten.
LCMS (Methode 6): Rt =
2.44 min. (m/z = 449 (M+H)+).
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ =
10.75 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.70 (d, 1H), 6.77 (s, 1H), 6.28 (d,
1H), 3.48 (br, s, 2H), 3.17 (br, s, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.30 (s,
9H).
-
Beispiel 24A
-
1-{2-Amin-6-[(2-aminoethyl)amino]pyridin-3-yl}-2,2,2-trifluorethanon
Hydrochlorid
-
2.5
g (5.57 mmol) tert-Butyl-[6-({2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]ethyl}amino)-3-(trifluoracetyl)pyridin-2-yl]carbamat
(Beispiel 23A) in 15 ml 4 N Chlorwasserstofflösung in Dioxan
gelöst und 20 h nachgerührt. Man engt das Reaktionsgemisch
um die Hälfte ein und gibt den gleichen Teil an Diethylether
zu. Das Reaktionsgemisch wird 20 min nachgerührt und das
Produkt abfiltriert und mit Diethylether nachgewaschen. Es werden
1.4 g (89% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.
LCMS
(Methode 6): Rt = 0.73 min. (m/z = 249 (M+H)+).
-
Ausführungsbeispiele
-
Beispiel 1
-
6-[(2-{[6-(2,4-Dichlorphenyl)[1,2,4]triazolo[3,4-f][1,2,4]triazin-8-yl]amino}ethyl)amino]pyridin-3-carbonitril
-
100
mg (0.33 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichlorphenyl)[1,2,4]triazolo[3,4-f][1,2,4]triazin
(Beispiel 7A), 70 mg (0.43 mmol) 6-[(2-Aminoethyl)amino]pyridin-3-carbonitril
Dihydrochlorid (Beispiel 2A) und 0.08 ml (0.5 mmol) N,N-Diisopropylethylamin
werden in 2 ml DMSO vorgelegt. Es wird bei 80°C 16 h nachgerührt.
Man gibt zu dem Reaktionsgemisch Essigsäureethylester und
10%ige Zitronensäure und extrahiert. Die organische Phase
wird mit Natriumchloridlösung gewaschen und über
Magnesiumsulfat getrocknet. Man erhält nach Reinigung mittels
präparativer HPLC 16 mg (12% d. Th.) des Produktes als
Feststoff.
LCMS (Methode 3): Rt = 1.16
min. (m/z = 426 (M+H)+)
1H-NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.76 (t,
1H), 9.56 (s, 1H), 8.34 (ss, 1H), 7.74 (br, s 1H), 7.62 (d, 1H), 7.57-7.50
(m, 2H), 6.52-6.41 (br, s, 1H), 3.76 (q, 2H), 3.62 (q, 2H).
-
Beispiel 2
-
2-Amin-6-[(2-{[6-(2,4-dichlorphenyl)[1,2,4]triazolo[3,4-f][1,2,4]triazin-8-yl]amino}ethyl)amino]pyridin-3-carbonitril
-
300
mg (0.99 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichlorphenyl)[1,2,4]triazolo[3,4-f][1,2,4]triazin
(Beispiel 7A), 274.65 mg (1.09 mmol) 2-Amino-6-[(2-aminoethyl)amino]pyridin-3-carbonitril
Dihydrochlorid (Beispiel 17A) und 1.4 ml (8 mmol) N,N-Diisopropylethylamin
werden in 5 ml DMSO vorgelegt. Es wird bei 80°C 16 h nachgerührt.
Man gibt zu dem Reaktionsgemisch Essigsäureethylester und
10%ige Zitronensäure und extrahiert. Die organische Phase
wird mit Natriumchloridlösung gewaschen und über
Magnesiumsulfat getrocknet. Das Reaktionsgemisch wird mittels präparativer
HPLC gereinigt. Man erhält 120 mg (27% d. Th.) des Produktes als
Feststoff.
LCMS (Methode 3): Rt = 2.24
min. (m/z = 440 (M+H)+)
1H-NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.8 (t,
1H), 9.57 (s, 1H), 7.73 (ss, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.53 (dd, 1H), 7.37
(br, s, 1H), 5.81 (br, s, 1H), 3.77 (s, 2H), 3.65 (s, 2H).
-
Beispiel 3
-
6-[4-(Trifluormethyl)phenyl][1,2,4]triazolo{3,4-f][1,2,4]triazin-8(7H)-on
-
65
mg (0.22 mmol) 8-Chlor-6-[4-(trifluormethyl)phenyl][1,2,4]triazolo[3,4-f][1,2,4]triazin
(Beispiel 10A), 60 mg (0.24 mmol) 2-Amino-6-[(2-aminoethyl)amino]pyridin-3-carbonitril Dihydrochlorid
(Beispiel 17A) und 0.3 ml (1.75 mmol) N,N-Diisopropylethylamin werden
in 2 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wird für 30 min
bei 140°C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Es wird
mittels präparativer HPLC gereinigt. Man erhält 17
mg (18% d. Th.) des Produktes als Feststoff.
LCMS (Methode
3): Rt = 2.33 min. (m/z = 441 (M+H)+)
1H-NMR (400
MHz, DMSO-d6): δ = 9.77 (t, 1H),
9.57 (s, 1H), 8.27 (d, 2H), 7.82 (d, 2H), 7.63 (br, s, 1H), 7.24 (br,
s, 1H), 5.73 (br, s, 1H), 3.92 (d, 2H), 3.63 (d, 2H).
-
Beispiel 4
-
6-{[2-({6-[4-(Trifluormethyl)phenyl][1,2,4]triazolo[3,4-f][1,2,4]triazin-8-yl}amino)ethyl]amino}pyridin-3-carbonitril
-
60
mg (0.2 mmol) 8-Chlor-6-[4-(trifluormethyl)phenyl][1,2,4]triazolo[3,4-f][1,2,4]triazin
(Beispiel 10A), 39 mg (0.24 mmol) 6-[(2-Aminoethyl)amino]pyridin-3-carbonitril
Dihydrochlorid (Beispiel 2A) und 0.1 ml (0.6 mmol) N,N-Diisopropylethylamin
werden in 2 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wird für
30 min bei 140°C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt.
Man erhält nach Reinigung mittels präparativer
HPLC 40 mg (47% d. Th.) des Produktes als Feststoff.
LCMS (Methode
3): Rt = 2.33 min. (m/z = 426 (M+H)+)
1H-NMR (400
MHz, DMSO-d6): δ = 9.71 (t, 1H),
9.56 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.21 (d, 2H), 7.81 (d, 3H), 7.50 (br, s,
1H), 6.41 (br, s, 1H), 3.92 (q, 2H), 3.68 (q, 2H).
-
Beispiel 5
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6-[(2-{[6-(2,4-Dichlorphenyl)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyrazin-8-yl]amino}ethyl)amino]pyridin-3-carbonitril
-
45
mg (0.15 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichlorphenyl)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyrazin
(Beispiel 20A), 35 mg (0.18 mmol) 6-[(2-Aminoethyl)amino]pyridin-3-carbonitril
Dihydrochlorid (Beispiel 2A) und 0.2 ml (1.2 mmol) N,N-Diisopropylethylamin
werden in 0.8 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wird für
30 min bei 140°C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt.
Man erhält nach Reinigung mittels präparativer
HPLC 30 mg (47% d. Th.) des Produktes als Feststoff.
LCMS (Methode
6): Rt = 2.05 min. (m/z = 425 (M+H)+)
1H-NMR (400
MHz, DMSO-d6): δ = 8.56 (s, 1H),
8.41 (s, 1H), 8.35 (ss, 1H), 8.22 (br, s 1H), 7.74 (ss, 1H), 7.71 (br,
s, 1H), 6.62 (d, 1H), 7.56 (dd, 1H), 7.51 (dd, 1H), 6.50 (br, s,
1H), 3.72-3.56 (m, 4H).
-
Beispiel 6
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1-{2-Amin-6-[(2-{[6-(2,4-dichlorphenyl)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyrazin-8-yl]amino}ethyl)amino]pyridin-3-yl}-2,2,2-trifluorethanon
-
160
mg (0.53 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichlorphenyl)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyrazin
(Beispiel 20A), 182 mg (0.64 mmol) 1-{2-Amin-6-[(2-aminoethyl)amino]pyridin-3-yl}-2,2,2-trifluorethanon
Hydrochlorid (Beispiel 24A) und 0.74 ml (4.2 mmol) N,N-Diisopropylethylamin
werden in 3 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wird für
30 min bei 140°C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt.
Man erhält nach Reinigung mittels präparativer HPLC
186 mg (68% d. Th.) des Produktes als Feststoff.
LCMS (Methode
6): Rt = 2.39 min. (m/z = 511 (M+H)+)
1H-NMR (400
MHz, DMSO-d6): δ = 8.58 (s, 1H),
8.43 (s, 1H), 8.34 (br, s, 1H), 8.13 (br, s, 1H), 7.71 (ss, 1H), 7.64
(d, 1H), 7.46 (t, 2H), 5.9 (d, 1H), 3.71 (t, 2H), 3.66 (t, 1H).
-
B) Bewertung der physiologischen Wirksamkeit
-
Die
Eignung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur
Behandlung von hämatologischen Erkrankungen kann in folgenden
Assaysystemen gezeigt werden:
-
In vitro Assay
-
Die
inhibitorische Aktivität von Wirksubstanzen wird in einem
biochemischen Assay bestimmt. Die dazu benötigten Bestandteile
werden in einer schwarzen 384-Loch-Mikrotitterplatte mit transparentem
Boden (Firma Greiner, Katalognummer 781092) gemischt. Benötigt
werden dabei pro Loch der 384-Loch-Mikrotitterplatte 5 nM GSK3β (Firma
Upstate, Katalognummer xy), 40 μM GSK3β-Substrat
GSM (Sequenz H-RRRPASVPPSPSLSRHS-(pS)-HQRR, Firma Upstate, Katalognummer
2-533), 30 μM Nicotinsäureamid-Adenin-Dinucleotid
NADH (Roche Diagnostics, Katalognummer 10107735), 50 μM
Adenosin-triphoshat ATP (Firma Sigma, Katalognummer A7966), und
2 mM Phosphoenolpyruvat (Firma Roche, Katalognummer 128112). Der
benötigte Reaktionspuffer, in dem die biochemische Reaktion
abläuft, besteht aus 50 mM Trizma Hydrochlorid Tris-HCl
pH: 7,5 (Firma Sigma, Katalognummer T3253), 5 mM Magnesiumchlorid
MgCl2 (Firma Sigma, Katalognummer M8266),
0,2 mM DL-Dithiothreitol DTT (Firma Sigma, Katalognummer D9779),
2 mM Ethylendiaminethertetrasäure EDTA (Firma Sigma, Katalognummer
E6758), 0.01% Triton X-100 (Firma Sigma, Katalognummer T8787) und
0.05% Bovines Serumalbumin BSA (Firma Sigma, Katalognummer B4287).
-
Wirksubstanzen
werden in Dimethylsulfoxid DMSO (Firma Sigma, Katalognummer D8418)
in einer Konzentration von 10 mM gelöst. Wirksubstanzen
werden in Konzentrationsreihen von 10 μM, 1 μM,
0.1 μM, 0.01 μM, 0.001 μM, 0.0001 μM,
0.00001 μM, 0.000001 μM zu den Ansätzen
der biochemischen Reaktion zugegeben. Als Kontrolle wird statt Substanz
Dimethylsulfoxid in einer Endkonzentration von 0.1 % zugesetzt.
-
Die
Reaktion wird für 2 Stunden bei 30°C inkubiert
und anschließend die entstandene Fluoreszenz in einem Tecan
Safire-XFLUOR4-Gerät, Version V4.50 (Serienummer 12901300283)
unter den Spezifikationen: Messmodus-Fluoreszenz, von unten gemessen,
Extinktionswellenlänge 340 nm, Emissionswellenlänge
465 nm, Spaltbreite Extinktion 5 nm, Spaltbreite Emission 5 nm,
Verstärkermodus 120, Verzögerung 0 μs,
Anzahl Lichtblitze pro Messung 3, und einer Integrationszeit von
40 μs gemessen.
-
Die
Aktivität der GSK3β wird in Fluoreszenz-Einheiten
ermittelt, wobei die Werte von nicht-inhibierter Kinase gleich 100%
und vollständig inhibierter Kinase gleich 0% gesetzt werden.
Die Aktivität der Wirksubstanzen wird auf diese 0% und
100% verrechnet.
-
CD34+-Proliefrationsassays zur Testung
von GSK3β-Inhibitoren
-
Adulte
hämatopoetische Stammzellen sind durch die spezifische
Ausprägung von membranständigen Proteinen gekennzeichnet.
Entsprechend ihrem Molekulargewicht sind diese Oberflächenmarker
mit einer entsprechenden Nummer versehen. Zu dieser Klasse gehört
auch das als CD34 bezeichnete Molekül, welches zur Identifizierung,
Charakterisierung und Isolierung von adulten hämtopoetischen
Stammzellen dient. Diese Stammzellen können dabei aus dem
Knochenmark, dem peripheren Blut oder aus Nabelschnurblut isoliert werden.
In in vitro-Kulturen sind diese Zellen begrenzt lebensfähig,
können aber durch unterschiedlichste Zusätze zum
Kulutrmedium zu Proliferation und Differenzierung angeregt werden.
CD34-positive Zellen werden hier verwendet, um den Einfluss von
Substanzen auf die Aktivität der Glykogen Synthase Kinase
3 zu testen. Zu diesem Zweck werden in einem ersten Schritt über
differentielle Zentrifugationsschritte mononukleare Zellen aus Nabelschnurblut
isoliert.
-
Dazu
wird Nabelschnurblut 1:4 mit Phosphat-gepufferter Salzlösung
verdünnt. 50 Milliliter Zentrifugationgefäße
werden mit 17 Milliliter Ficoll (Dichte 1.077, Ficoll Paque Plus;
Pharmacia, Katalognummer 17-1440-02) beschickt. Darauf werden 30
Milliliter des 1:4 verdünnten Nabelschnurblutes aufgeschichtet
und anschließend für 30 Minuten bei 400 × g
bei Raumtemperatur zentrifuigert. Die Bremsen der Zentrifuge sind dabei
ausgeschaltet. Die mononukleären Zellen sammeln sich durch
die Zentrifugation in der Interphase. Diese wird mit Hilfe einer
30 Milliliter-Pipette abgenommen und in ein neues 50 Milliliter
Zentrifugationsgefäß überführt
und das Volumen anschließend mit der Phosphat-gepufferten
Salzlösung auf 30 ml aufgefüllt. Diese Zellen
werden für 10 Minuten bei Raumtemperatur mit eingeschalteter
Bremse bei 300 × g zentrifuigert. Der Überstand
wird verworfen und das entstandene Zellpellet in 30 Milliliter Phosphat-gepufferter
Salzlösung resuspendiert. Diese Zellen werden erneut für
15 Minuten bei 20°C bei 200 × g und eingeschalteter
Bremse zentrifugiert.
-
Zur
Isolierung der CD34-positiven Zellen aus die angereicherten mononukleären
Zellen in einer Konzentration von 1 × 108 Zellen
pro 300 Mikroliter MACS-Puffer (0.5% Endotoxin-freies bovines Serumalbumin in
Phosphat-gepufferter Salzlösung) resuspendiert. Es erfolgt
die Zugabe von 100 Mikrolitern FCR Blocking Reagenz (Miltenyi Biotec,
Katalognummer 130-046-702) sowie 100 Mikrolitern an CD34 Micro Beads
(Miltenyi Biotec, Katalognummer 130-046-702). Diese Suspension wird
für 30 Minuten bei 4°C inkubiert. Anschließend werden
die Zellen mit dem 20-fachem Volumen MACS Puffer verdünnen
und 10 Minuten bei 300 × g zentrifugiert. Der Überstand
wird verworfen und die Zellen in 500 Mikrolitern MACS Puffer resuspendiert.
Die so behandelten Zellen werden auf einer LS-Säule (Miltenyi
Biotec, katalognummer 130-042-401) aufgetragen und unter Verwendung
eines Midi MACS Magneten (Miltenyi Biotec, Katalognummer 130-042-303)
aufgereinigt.
-
Die
Anzahl an CD34-positiven Zellen wird über das auszählen
der Zellen unter Verwendung einer Neubauer-Kammer durchgeführt.
Die Bestimmung der Reinheit der Zellen erfolgt nach Standardprotokollen
unter Verwendung der Fluorescent Activated Cell Sorting-Methode
(Becton Dickinson, BD FACSTM Sample Prep
Assistant SPAR Upgrade Kit, Katalognummer 337642).
-
Zur
Bestimmung des Einflusses einer Modulation der GSK3-Aktivität
werden CD34-positive Zellen über 7 Tage in einer 96-Loch-Mikrotitterplatte
bei 37°C und 5% Kohlendioxid inkubiert und anschließend
die Proliferationsraten anhand der Zellzahlen bestimmt.
-
Zu
diesem Zweck werden 5000 CD34-positive Zellen pro Loch einer 96-U-Boden-Loch-Mikrotitterplatte
(Greiner Bio-One, Katalognummer 650 180) in 100 Mikroliter IMDM-Medium
(Life Technology, Katalognummer 12440-046), 10% fetales Kälberserum
(Life Technology, Katalognummer 10082-139) und 20 Nanogramm pro
Milliliter Stem Cell Factor (R&D,
Katalognummer 255-SC-010) aufgenommen. Zusätzlich werden
die Zellen noch unterschiedlichen Konzentrationen an mit Dimethylsulfoxid
(Sigma Aldrich, Katalognummer D5879-1L) gelösten Substanzen
versetzt. Dabei werden jeweils 4 Löcher mit der angegebenen
Zellzahl von 5000 CD34-positiven Zellen pro Loch mit 10 Mikromol,
4 Löcher mit 5 Mikromol, 4 Löcher mit 2.5 Mikromol,
4 Löcher mit 1.25 Mikromol, 4 Löcher mit 0.625
Mikromol, 4 Löcher mit 0.3125 Mikromol, 4 Löcher
mit 0.156 Mikromol, 4 Löcher mit 0.078 Mikromol und als
Kontrolle 4 Löcher mit 0.1% Dimethylsulfoxid als Endkonzentration
versehen.
-
Diese
so behandelten Zellen werden für 7 Tage in einem Zellkultur-Brutschrank
bei 37°C und 5% Kohlendioxid inkubiert. Durch erneutes
zählen der Zellen unter Verwendung einer Neubauer-Zählkammer
wird die Proliferationsrate bestimmt, wobei die nur mit dem Stem
Cell Factor versehenen Zellen als 100%-Wert gesetzt und alle anderen
Werte auf diesen Wert bezogen sind.
-
In-vivo Assay
-
Die
Untersuchungen der in vivo-Wirkung der erfindungsmäßigen
Verbindungen erfolgt unter Verwendung von 6 Wochen alten, 18–22
g schweren, männlichen C57BL/6-Mäusen (Charles
River, Sulzfeld, Deutschland). Diese Tiere werden artgerecht mit
12-stündigen Licht- und Dunkelzyklen unter konstanten klimatischen Bedingungen
gehalten und mit Wasser und Mausfutter ad libitum ernährt.
Die Konzentrationen an verwendeten Chemotherapeutika werden den
Tieren gemäß den Angaben der Hersteller mittels
intra-peritonealen (i. p.) Injektionen im kaudalen Drittel des Bauches
verabreicht. Gleichermaßen wird mit den erfindungsrelevanten Substanzen
verfahren. Blutabnahmen erfolgen mit Hilfe von Pasteur-Pipetten
aus dem retrobulbären Venenplexus. Die Bestimmung der Anzahl
neutrophiler Granulozyten erfolgt vollautomatisch unter Verwendung
von Durchflußzytometriesystemen.
-
CYP-Inhibitionstest
-
Die
Fähigkeit von Substanzen, CYP1A2, CYP2C8, CYP2C9, CYP2D6
und CYP3A4 im Menschen inhibieren zu können, wird untersucht
mit gepoolten Human-Lebermikrosomen als Enzymquelle in Gegenwart von
Standardsubstraten (s. u.), die CYP-Isoform-spezifische Metaboliten
bilden. Die Inhibitionseffekte werden bei sechs verschiedenen Konzentrationen
der Testverbindungen untersucht (1.5, 3.1, 6.3, 12.5, 25 sowie 50 μM),
mit dem Ausmaß der CYP-Isoform-spezifischen Metabolitenbildung
der Standardsubstrate in Abwesenheit der Testverbindungen verglichen
und die entsprechenden IC50-Werte berechnet.
Ein Standard-Inhibitor, der eine einzelne CYP-Isoform spezifisch
inhibiert, dient als Kontrolle der erhaltenen Ergebnisse.
-
Durchführung:
-
Die
Inkubation von Phenacetin, Amodiaquin, Diclofenac, Dextromethorphan
oder Midazolam mit Human-Lebermikrosomen in Gegenwart von jeweils
sechs verschiedenen Konzentrationen einer Testverbindung (als potentiellem
Inhibitor) wird auf einer Workstation durchgeführt (Tecan,
Genesis, Crailsheim, Deutschland). Standard-Inkubationsgemische
enthalten 1.3 mM NADP, 3.3 mM MgCl2 × 6
H2O, 3.3 mM Glukose-6-phosphat, Glukose-6-phosphat-Dehydrogenase
(0.4 U/ml) und 100 mM Phosphat-Puffer (pH 7.4) in einem Gesamtvolumen
von 200 μl. Testverbindungen werden bevorzugt in Acetonitril
gelöst. 96-Lochplatten werden eine definierte Zeit bei
37°C mit gepoolten Human-Lebermikrosomen inkubiert. Die
Reaktionen werden durch Zugabe von 100 μl Acetonitril,
worin sich ein geeigneter interner Standard befindet, abgestoppt.
Gefällte Proteine werden durch Zentrifugation abgetrennt,
die Überstände werden vereinigt und mittels LC-MS/MS
analysiert.
-
Bestimmung der Löslichkeit
-
Benötigte Reagenzien:
-
- • PBS-Puffer pH 6.5: 61.86 g Natriumchlorid
p. a. (z. B. Fa. Merck, Art.-Nr. 1.06404.1000), 39.54 g Natriumdihydrogenphosphat
p. a. (z. B. Fa. Merck, Art.-Nr. 1.06346.1000) und 83.35 g 1 N Natriumhydroxid-Lösung (z.
B. Fa. Bernd Kraft GmbH, Art.-Nr. 01030.4000) in einen 1 Liter-Messkolben
einwiegen, mit Wasser auffüllen und ca. 1 Stunde rühren.
Von dieser Lösung 500 ml in einen 5 Liter-Messkolben geben
und mit Wasser auffüllen. Mit 1 N Natriumhydroxid-Lösung
auf pH 6.5 einstellen.
- • Dimethylsulfoxid (z. B. Fa. Baker, Art.-Nr. 7157.2500)
- • destilliertes Wasser
- • Acetonitril Chromasolv (z. B. Riedel-de Haen Art.
Nr. 34851)
- • 50%ige Ameisensäure p. a. (z. B. Fluka Art.
Nr. 09676)
-
Herstellung der Ausgangslösung:
-
Mindestens
1.5 mg der Testsubstanz werden in ein Wide Mouth 10 mm Screw V-Vial
(Fa. Glastechnik Gräfenroda GmbH, Art.-Nr. 8004-WM-H/V15 μ)
mit passender Schraubkappe und Septum genau eingewogen, mit Dimethylsulfoxid
zu einer Konzentration von 50 mg/ml versetzt und 30 Minuten mittels
eines Vortexers geschüttelt.
-
Herstellung der Kalibrierlösungen:
-
Die
notwendigen Pipettierschritte erfolgen in 1.2 ml 96er Deep Well
Plate (DWP) (z. B. HJ-Bioanalytik GmbH Art.-Nr. 850289) mittels
eines Liquid-Handling-Roboters. Als Lösemittel wird ein
Gemisch aus Acetonitril Chromasolv/destilliertem Wasser 8:2 verwendet.
-
Herstellung der Ausgangslösung
für Kalibrierlösungen (Stammlösung):
-
10 μl
der Ausgangslösung werden mit 833 μl des Lösemittelgemisch
versetzt (Konzentration = 600 μg/ml) und homogenisiert.
Es werden von jeder Testsubstanz zwei 1:100 Verdünnungen
in separaten DWP's hergestellt und wiederum homogenisiert. Eine
der 1:100 Verdünnungen wird für die Herstellung
der Kalibrierlösungen verwendet, die zweite Verdünnung
wird für die Optimierung der MS/MS-Parameter verwendet.
Kalibrierlösung
5 (600 ng/ml): 30 μl der Stammlösung werden mit
270 μl Lösemittelgemisch versetzt und homogenisiert.
Kalibrierlösung
4 (60 ng/ml): 30 μl der Kalibrierlösung 5 werden
mit 270 μl Lösemittelgemisch versetzt und homogenisiert.
Kalibrierlösung
3 (12 ng/ml): 100 μl der Kalibrierlösung 4 werden
mit 400 μl Lösemittelgemisch versetzt und homogenisiert.
Kalibrierlösung
2 (1.2 ng/ml): 30 μl der Kalibrierlösung 3 werden
mit 270 μl Lösemittelgemisch versetzt und homogenisiert.
Kalibrierlösung
1 (0.6 ng/ml): 150 μl der Kalibrierlösung 2 werden
mit 150 μl Lösemittelgemisch versetzt und homogenisiert.
-
Herstellung der Probenlösungen:
-
Die
notwendigen Pipettierschritte erfolgen in 1.2 ml 96er DWP (z. B.
HJ-Bioanalytik GmbH Art.-Nr. 850289) mittels eines Liquid-Handling-Roboters.
-
10.1 μl
der Stammlösung werden mit 1000 μl PBS-Puffer
pH 6.5 versetzt.
-
Durchführung:
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Die
notwendigen Pipettierschritte erfolgen in 1.2 ml 96er DWP (z. B.
HJ-Bioanalytik GmbH Art.-Nr. 850289) mittels eines Liquid-Handling-Roboters.
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Die
so hergestellten Probenlösungen werden 24 Stunden bei 1400
rpm mittels eines temperierbaren Schüttlers (z. B. Fa.
Eppendorf Thermomixer comfort Art.-Nr. 5355 000.011) bei 20°C
geschüttelt. Von diesen Lösungen werden jeweils
180 μl abgenommen und in Beckman Polyallomer Centrifuge
Tubes (Art.-Nr. 343621) überführt. Diese Lösungen
werden 1 Stunde mit ca. 223.000 × g zentrifugiert (z. B.
Fa. Beckman Optima L-90K Ultracentrifuge mit Type 42.2 Ti Rotor
bei 42.000 rpm). Von jeder Probenlösung werden 100 μl
des Überstandes abgenommen und 1:10 und 1:1000 mit PBS-Puffer
6.5 verdünnt.
-
Analytik:
-
Die
Proben werden mittels HPLC/MS-MS analysiert. Quantifiziert wird über
eine Fünf-Punkt-Kalibrationskurve der Testverbindung. Die
Löslichkeit wird in mg/l ausgedrückt. Analysensequenz:
1) Blank (Lösemittelgemisch); 2) Kalibrierlösung
0.6 ng/ml; 3) Kalibrierlösung 1.2 ng/ml; 4) Kalibrierlösung
12 ng/ml; 5) Kalibrierlösung 60 ng/ml; 6) Kalibrierlösung
600 ng/ml; 7) Blank (Lösemittelgemisch); 8) Probenlösung
1:1000; 7) Probenlösung 1:10.
-
HPLC/MS-MS Methode
-
HPLC:
Agilent 1100 , quat. Pumpe (G1311A), Autosampler CTC HTS PAL, Degaser
(G1322A) und Säulenthermostat (G1316A); Säule:
Oasis HLB 20 mm × 2.1 mm, 25 μ; Temperatur: 40°C;
Eluent A: Wasser + 0.5 ml Ameisensäure/l; Eluent B: Acetonitril
+ 0.5 ml Ameisensäure/l; Flussrate: 2.5 ml/min; Stoptime
1.5 min; Gradient: 0 min 95% A, 5% B; Rampe: 0–0.5 min
5% A, 95% B; 0.5–0.84 min 5% A, 95% B; Rampe: 0.84–0.85 min
95% A, 5% B; 0.85–1.5 min 95% A, 5% B.
MS/MS:WATERS
Quattro Micro Tandem MS/MS; Z-Spray API-Interface; HPLC-MS- Eingangssplitter
1:20; Messung im ESI-Mode
-
Die
Geräteparameter werden für jede Testsubstanz durch
Injektion der weiter oben beschriebenen Stammlösung (zweite
1:100 Verdünnung) mittels der MassLynx/QuanOptimize-Software
automatisch optimiert.
-
C) Ausführungsbeispiele für
pharmazeutische Zusammensetzungen
-
Die
erfindungsgemäßen Substanzen können folgendermaßen
in pharmazeutische Zubereitungen überführt werden:
-
Tablette:
-
Zusammensetzung:
-
100
mg der Verbindung des Beispiels 1, 50 mg Lactose (Monohydrat), 50
mg Maisstärke, 10 mg Polyvinylpyrolidon (PVP 25) (Fa. BASF,
Deutschland) und 2 mg Magnesiumstearat.
Tablettengewicht 212
mg. Durchmesser 8 mm, Wölbungsradius 12 mm.
-
Herstellung:
-
Die
Mischung aus der Verbindung des Beispiels 1, Lactose und Stärke
wird mit einer 5%-igen Lösung (m/m) des PVPs in Wasser
granuliert. Das Granulat wird nach dem Trocknen mit dem Magnesiumstearat
für 5 min. gemischt. Diese Mischung wird mit einer üblichen
Tablettenpresse verpresst (Format der Tablette siehe oben).
-
Orale Suspension:
-
Zusammensetzung:
-
1000
mg der Verbindung des Beispiels 1, 1000 mg Ethanol (96%), 400 mg
Rhodigel (Xanthan gum) (Fa. FMC, USA) und 99 g Wasser.
-
Einer
Einzeldosis von 100 mg der erfindungsgemäßen Verbindung
entsprechen 10 ml orale Suspension.
-
Herstellung:
-
Das
Rhodigel wird in Ethanol suspendiert, die Verbindung des Beispiels
1 wird der Suspension zugefügt. Unter Rühren erfolgt
die Zugabe des Wassers. Bis zum Abschluss der Quellung des Rhodigels
wird ca. 6 h gerührt.
-
Intravenös applizierbare Lösung:
-
Zusammensetzung:
-
1
mg der Verbindung von Beispiel 1, 15 g Polyethylenglykol 400 und
250 g Wasser für Injektionszwecke.
-
Herstellung:
-
Die
Verbindung von Beispiel 1 wird zusammen mit Polyethylenglykol 400
in dem Wasser unter Rühren gelöst. Die Lösung
wird sterilfiltriert (Porendurchmesser 0.22 μm) und unter
aseptischen Bedingungen in hitzesterilisierte Infusionsflaschen
abgefüllt. Diese werden mit Infusionsstopfen und Bördelkappen
verschlossen.
-
ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG
-
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keinerlei Haftung für etwaige Fehler oder Auslassungen.
-
Zitierte Patentliteratur
-
- - WO 2006/044687 [0006]
- - WO 2007/138072 [0006]
- - WO 03/000693 [0035]
-
Zitierte Nicht-Patentliteratur
-
- - Woodgett JR.,
Trends Biochem. Sci. (1991), 16(5), 177-81 [0002]
- - Wodarz A., Nusse R., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. (1998), 14,
59-88 [0003]
- - Kirstetter et al., Nat Immunol. (2006), 7(10), 1048-56 [0003]
- - O'Brien et al., British Journal of Cancer (2006), 95, 1632-1636 [0004]
- - J. Org. Chem. (2005), 70 (18), 7331-7337 [0035]
steht, wobei * die Anknüpfstelle an den Heterocyclus bedeutet, n für die Zahl oder 1 steht, X für NR10, S oder O steht, worin R10 für Wasserstoff, C1-C3-Alkyl oder Cyclopropyl steht, Y für NR11 oder S steht, worin R11 für Wasserstoff, C1-C3-Alkyl oder Cyclopropyl steht, R3 für 2-Pyridyl, Pyrimid-2-yl, 2-Aminopyrimid-4-yl, 2-(Mono-C1-C4-Alkylamino)pyrimid-4-yl, 2-(Mono-C3-C4-Cycloalkylamino)pyrimid-4-yl, Pyridazin-3(2H)-on-6-yl, 1,3-Oxazol-2-yl, 1,3-Oxazol-4-yl, 1,2,4-Oxadiazol-3-yl, 1,2,3-Oxadiazol-4-yl, 1,3-Thazol-2-yl, 1,3-Thazol-4-yl, 1H-1,2,4-Triazol-5-yl, 2,4-Dihydro-3H-1,2,4-triazol-3-on-5-yl oder 1,2-Pyrazol-5-yl steht, wobei 2-Pyridyl, Pyrimid-2-yl, 1,3-Oxazol-2-yl, 1,3-Oxazol-4-yl, 1,3-Thiazol-2-yl und 1,3-Thazol-4-yl substituiert sind mit 1 oder 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Nitro, Amino, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Aminocarbonyl, Trifluormethylcarbonyl, C1-C4-Alkyl, C1-C4-Alkoxy, C1-C4-Alkylamino, C3-C4-Cycloalkylamino, C1-C4-Alkylcarbonyl, C1-C4-Alkoxycarbonyl, C1-C4-Alkylaminocarbonyl und C3-C6-Cycloalkylcarbonyl, worin Alkyl, Alkoxy, Alkylamino, Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, Alkylaminocarbonyl und Cycloalkylcarbonyl substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Hydroxy, Amino, Trifluormethyl und C3-C6-Cycloalkyl, und wobei 2-Aminopyrimid-4-yl, 2-(Mono-C1-C4-Alkylamino)pyrimid-4-yl, 2-(Mono-C3-C4-Cycloalkylamino)pyrimid-4-yl, Pyridazin-3(2H)-on-6-yl, 1,2,4-Oxadiazol-3-yl, 1,2,3-Oxadiazol-4-yl, 1H-1,2,4-Triazol-5-yl, 2,4-Dihydro-3H-1,2,4-triazol-3-on-5-yl und 1,2-Pyrazol-5-yl substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Nitro, Amino, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Aminocarbonyl, Trifluormethylcarbonyl, C1-C4-Alkyl, C1-C4-Alkoxy, C1-C4-Alkylamino, C3-C4-Cycloalkylamino, C1-C4-Alkoxycarbonyl, C1-C4-Alkylaminocarbonyl und C3-C6-Cycloalkylcarbonyl, R4 für Wasserstoff, C1-C3-Alkyl oder Cyclopropyl steht, R5 für Wasserstoff oder C1-C3-Alkyl steht, R6 für Wasserstoff, C1-C3-Alkyl oder Cyclopropyl steht, R7 für Wasserstoff oder C1-C3-Alkyl steht, R8 für Wasserstoff, C1-C3-Alkyl oder Cyclopropyl steht, R9 für Wasserstoff oder C1-C3-Alkyl steht, R2 für C6-C10-Aryl oder 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl steht, wobei Aryl und Heteroaryl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Hydroxymethyl, Amino, Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Aminocarbonyl, C1-C4-Alkyl, C1-C4-Alkoxy, C1-C4-Alkoxymethyl, C1-C4-Alkylamino, C1-C4-Alkylaminomethyl, C1-C4-Alkylcarbonyl, C1-C4-Alkoxycarbonyl, C1-C4-Alkylaminocarbonyl, C1-C4-Alkylcarbonylamino, C1-C4-Alkylsulfonyl, C1-C4-Alkylsulfonylamino, C1-C4-Alkylaminosulfonyl, Phenyl, Benzyloxy, 5- oder 6-gliedrigem Heterocyclyl, 5- oder 6-gliedrigem Heterocyclylcarbonyl, 5- oder 6-gliedrigem Heterocyclylmethyl und 5- oder 6-gliedrigem Heteroaryl, worin Phenyl, Benzyloxy, Heterocyclyl, Heterocyclylcarbonyl, Heterocyclylmethyl und Heteroaryl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Aminocarbonyl, C1-C4-Alkyl, C1-C4-Alkoxy, C1-C4-Alkylamino, C1-C4-Alkylcarbonyl, C1-C4-Alkoxycarbonyl, C1-C4-Alkylaminocarbonyl und C1-C4-Alkylcarbonylamino, oder zwei der Substituenten am Aryl zusammen mit den Kohlenstoffatomen, an die sie gebunden sind, ein 1,3-Dioxolan oder 1,4-Dioxan bilden, oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
steht, wobei # die Anknüpfstelle an Y bedeutet, L für Cyano, Nitro oder Trifluormethyl steht, M für Wasserstoff oder Amino steht, R4 für Wasserstoff steht, R5 für Wasserstoff oder Methyl steht, R6 für Wasserstoff steht, R7 für Wasserstoff oder Methyl steht, R8 für Wasserstoff steht, R9 für Wasserstoff steht, R2 für Phenyl steht, wobei Phenyl substituiert sein kann mit 1 bis 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Fluor, Chlor, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, C1-C3-Alkyl, Methoxy, Methoxycarbonyl und Ethoxycarbonyl, oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
