CS266630B1 - Device for automatic production of peptides on solid carrier - Google Patents
Device for automatic production of peptides on solid carrier Download PDFInfo
- Publication number
- CS266630B1 CS266630B1 CS883219A CS321988A CS266630B1 CS 266630 B1 CS266630 B1 CS 266630B1 CS 883219 A CS883219 A CS 883219A CS 321988 A CS321988 A CS 321988A CS 266630 B1 CS266630 B1 CS 266630B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- reactors
- valves
- automatic
- boc
- peptides
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Zařízení je tvořeno reakčními, odpadními, odměřovacími nádobami, soustavou ventilů a potrubí a podstata řešení spočívá v tom, že zásobníky s kapilárními odměrkami jsou přes automatické ventily a vícecestný ventil spojeny s paralelně zapojenými reaktory, které jsou přes ventily a uzavírací kohouty spojeny s odpadními nádobami. Některé odpadní nádoby jsou přes regenerační odparky a automatický dávkovač spojeny zpět se zásobníky. Reaktory jsou opatřeny přívodem inertního plynu a jsou napojeny na aktivační reaktor, přičemž automatický chod je zajištěn počítačovým ovládačem.The equipment consists of reaction, waste, measuring vessels, system valves and pipes and the essence of the solution lies in that the capillary trays measuring cups are through automatic valves and the multipath valve is connected in parallel connected reactors, which are through valves and shut-off valves connected to the waste containers. Some waste containers are via regenerative evaporators and automatic the dispenser connected back to the trays. The reactors are provided with an inert gas inlet gas and are connected to the activation reactor, with automatic operation computer driver.
Description
Vynález se týká zařízení pro automatickou výrobu peptidů na pevném nosiči v provozním měřítku. .The invention relates to a device for the automatic production of peptides on a solid support on an operational scale. .
Výhody syntézy peptidických látek na pevném polymerhím nosiči byly již jednoznačně prokázány, o čemž přesvědčivě, svědčí odborná literatura z druhé poloviny sedmdesátých a z osmdesátých let. Nová metoda syntézy peptidů na pevném nosiči umožnila získávat velmi kvalitní syntetické produkty ve vysokých výtěžcích a ve velmi krátkém čase. Odpadly průběžné extrakce, krystalizace, sušení produktů a dalSÍ časově náročné operace. Fakt, že se čas potřebný k provedení jednotlivých stupňů zkrátil ze dnů na hodiny, ovlivnil významně nejen přípravu peptidických látek v malém laboratorním měřítku pro vědeckovýzkumné účely, ale i provozní výrobu biologicky aktivních peptidů pro farmaceutické zpracování.The advantages of the synthesis of peptides on a solid polymeric support have already been clearly demonstrated, as is convincingly evidenced by the literature from the second half of the 1970s and 1980s. The new method of synthesis of peptides on a solid support made it possible to obtain high-quality synthetic products in high yields and in a very short time. Continuous extractions, crystallization, drying of products and other time-consuming operations were eliminated. The fact that the time required to perform the individual steps was reduced from days to hours significantly affected not only the preparation of peptide substances on a small laboratory scale for scientific research purposes, but also the operational production of biologically active peptides for pharmaceutical processing.
Pro přípravu peptidických látek na pevném nosiči byly v zahraničí zkonstruovány různé přístroje, od nej jednodušších až po plně automatizované. Také u nás byly na některých pracovištích dle zahraničních vzorů zkonstruovány a improvizovaně sestrojeny přístroje pro semipreparativní syntézu peptidických látek na pevném nosiči.Various devices have been designed abroad for the preparation of peptide substances on a solid support, from the simplest to fully automated. In our country, too, devices for the semi-preparative synthesis of peptide substances on a solid support were constructed and improvisedly constructed at some workplaces according to foreign models.
Cílem autorů vynálezu bylo zkonstruovat zařízení pro výrobu biologicky aktivních peptidů v provozním měřítku a přitom odstranit hlavní nevýhody dosud známých a komerčně dostupných zařízení, jimiž jsou předevšímThe aim of the inventors was to design a device for the production of biologically active peptides on an operational scale, while eliminating the main disadvantages of the hitherto known and commercially available devices, which are mainly
- optoelektromagnetické odměřování jednotlivých reagencií a roztoků, které i při zdvojení (případně ztrojení) čidel není pro výrobní účely zcela spolehlivé a kromě toho nepočítá s přpadnými výpadky v dodávce elektrického proudu,- optoelectromagnetic metering of individual reagents and solutions, which, even when the sensors are doubled (or tripled), is not completely reliable for production purposes and, in addition, does not take into account possible power outages,
- přetlačování roztoků a reagencií do reaktorů skleněnými součástmi přístroje pomocí tlakového dusíku, což nevyhovuje platným bezpečnostním předpisům,- extrusion of solutions and reagents into the reactors by the glass components of the apparatus using pressurized nitrogen, which does not comply with the applicable safety regulations,
- způsob míchání polymerního nosiče (pryskyřice) mechanickým míchadlem nebo pohybem reaktoru, čímž dochází k narušení struktury pryskyřice a k vytváření jemných částic, které pak znesnadňují promývání a filtraci pevného nosiče v reaktoru,- a method of mixing the polymeric support (resin) with a mechanical stirrer or by moving the reactor, thereby disrupting the structure of the resin and forming fine particles, which then make it difficult to wash and filter the solid support in the reactor,
- nekomplexnost a nevhodnost zařízení pro výrobní a provozní účely a pro práci ve velkých násadách, protože neumožňuje souběžnou přípravu aktivovaných složek chráněných aminokyselin a pokud plně nezreagují, jejich zachycování a regeneraci, neřeší také regeneraci použitých rozpouštědel a oddělené jímání dalších roztoků, určených podle jejich charakteru rovněž k regeneraci anebo k likvidaci.- non-complexity and unsuitability of equipment for production and operational purposes and for work in large batches, as it does not allow simultaneous preparation of activated components of protected amino acids and if they do not fully react, their capture and regeneration, also does not solve regeneration of used solvents and separate collection of other solutions also for regeneration or disposal.
Uvedené nevýhody odstraňuje zařízení pro automatickou výrobu peptidů na pevném nosiči^ skládající se z nádob reakčních, zásobních, odpadních a odměřovačích, soustavy ventilů a potrubí podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že zásobníky s kapilárními odměrkami jsou přes automatické ventily a vícecestný ventil spojeny s paralelně zapojenými reaktory, které jsou přes ventily a uzavírací kohouty spojeny s odpadními nádobami. Některé z odpadních nádob jsou přes regenerační odparky a automatický dávkovač spojeny zpět se zásobníky. Reaktory jsou opatřeny přívodem inertního plynu - míchacího média - a jsou napojeny na aktivační reaktor, přičemž automatický chod zařízení je zajištěn počítačovým ovladačem.These disadvantages are eliminated by a device for the automatic production of peptides on a solid support, consisting of reaction, storage, waste and metering vessels, a valve system and a pipe according to the invention, the essence of which consists in that the capillary measuring containers are connected via automatic valves and a multipath valve. with reactors connected in parallel, which are connected to waste vessels via valves and shut-off valves. Some of the waste containers are connected back to the tanks via regenerative evaporators and an automatic dispenser. The reactors are equipped with an inert gas supply - a stirring medium - and are connected to an activation reactor, while the automatic operation of the device is ensured by a computer controller.
Zařízení podle vynálezu se dále vyznačuje tím, že reaktory mají kulový tvar a jsou opatřeny automatickým oplachovačem stěn mezi plnicími hrdly, umístěnými v horní části reaktorů. Uvnitř reaktorů je u dna frita a v dolní části jsou opatřeny uzavíracím kohoutem, pod kterým je přívod inertního míchacího média.The device according to the invention is further characterized in that the reactors have a spherical shape and are provided with an automatic wall rinser between the filling nozzles located in the upper part of the reactors. Inside the reactors, there is a frit at the bottom and in the lower part they are equipped with a shut-off valve, under which there is an supply of inert mixing medium.
Zařízení podle vynálezu je dále vyznačeno tím, že kapilární odměrka je tvořena systémem dvou spojených nádob, přičemž do menší kalibrované nádoby je zavedena kapilára, ve které je výška hladiny roztoku shodná s výškou hladiny ve větší nádobě.The device according to the invention is further characterized in that the capillary measuring cup is formed by a system of two connected vessels, a capillary being introduced into a smaller calibrated vessel in which the level of the solution is the same as the level in the larger vessel.
Zařízení podle vynálezu zcela eliminuje nebo podstatně omezuje uvedené nevýhody dosud zkonstruovaných přístrojů pro syntézu peptidů na pevném polymerním nosiči. Kromě toho řeší nově i otázku ztrátových časů v činnosti vlastního reaktoru tím, že je vybaveno dvěma, třemiThe device according to the invention completely eliminates or substantially reduces the stated disadvantages of the hitherto constructed devices for the synthesis of peptides on a solid polymeric support. In addition, it now addresses the issue of downtime in the operation of the reactor itself by equipping it with two or three
CS 266 630 Bl i více reaktory, zapojenými paralelně, které pracují s výhodou ve střídavém rytmu. V reaktorech o užitečném obsahu 6 až 20 litrů je pak možno zpracovávat násady přes 1 kg pryskyřice. Přitom jsou až na minimum sníženy ztrátové časy, potřebné například k odštěpování chránících skupin, k neutralizaci reakčních směsí, k mnohonásobnému promývání polymerního nosiče apod., takže výkon zařízení se zvyšuje o 100 % i více, a přiměřeně se podstatně snižuje i pracnost obsluhy aparatury.CS 266 630 B1 and more reactors, connected in parallel, which preferably operate in an alternating rhythm. In reactors with a useful content of 6 to 20 liters, it is then possible to process batches of over 1 kg of resin. At the same time, the loss times required, for example, for removing the protecting groups, for neutralizing the reaction mixtures, for washing the polymer support several times, etc. are reduced to a minimum, so that the device performance increases by 100% or more and the laborious operation of the apparatus is reduced accordingly.
Příklad konstrukce zařízení podle vynálezu je znázorněn na připojených výkresech, kde obr. 1 představuje schéma celého zařízení, obr. 2 představuje detail odměřovacího systému a z obr. 3 je patrné provedení vlastního reaktoru. Pro názornost je na obr. 1 silnou čárou znázorněn tok hlavních surovin, slabou čárou tok regenerovaných surovin a přerušovanou čárou přívod míchacího inertního média.An example of the construction of the device according to the invention is shown in the accompanying drawings, where Fig. 1 shows a diagram of the whole device, Fig. 2 shows a detail of the metering system and Fig. 3 shows an embodiment of the reactor itself. For the sake of clarity, the flow of the main raw materials is shown in FIG. 1, the flow of the regenerated raw materials and the dashed line shows the supply of the mixing inert medium.
Jak vyplývá z obr. 1, jsou zásobníky na jednotlivé reagencie 2 uloženy na nejvyšším místě aparatury. Zásobníky jsou na dně opatřeny uzavíracími dálkově ovládanými teflonovými ventily 2· Po<^ zásobníky je umístěn dávkovači (odměřovací) systém, tzv. kapilární odměrka 2· Její funkce je zřejmá z obr. 2. Pracuje na principu spojených nádob za spolupůsobení zemské gravitace, nezávisle na dodávce elektrického proudu, s přesností 2 až 5 promile a odměřovaná množství reagencií lze plynule měnit posouváním kapiláry 19 podle množství zpracovávaného polymerního nosiče. Odměřená reagencie nebo rozpouštědlo stéká samospádem přes ručně ovládaný ventil 2 střídavě do vlastních reaktorů 2· Reaktory 2 mají stěny upraveny silikonováním a na.dně jsou opatřeny skleněnou fritou dále uzavíracím kohoutem 1_ Pro možnost přerušení práce v libovolném okamžiku, přetlakovou přípojkou pro přívod inertního míchacího média, zejména dusíku 8., kterým je obsah reaktorů 2 2e spodu míchán a samočinným oplachovačem stěn 2· Na své dolní části jsou reaktory 2 opatřeny kulovými zábrusy 10, kterými dosedají na kulové plochy dalších teflonových ventilů 11, ovládajících vypouštění reakčních zplodin z reaktorů 2· 2a spodním teflonovým ventilem 11 se nalézá odbočka 12, osazená dalším teflonovým ventilem 13, která slouží k odebírání roztoků derivátů nezreagovaných aminokyselin k případné regeneraci. Za odbočkou jsou postupně umístěny jednotlivé odpadní nádoby 14 s rozpouštědly určenými bud k regeneraci na odparce 15 s automatickým dávkovačem 16,nebo ke spálení. Zařízení je dále vybaveno aktivačním reaktorem 17 umístěným v termostatu 18, což umožňuje automatizovanou souběžnou přípravu aktivovaných složek chráněných aminokyselin, které pak lze ve zvoleném okamžiku automaticky převést do příslušného reaktoru 2·As can be seen from FIG. 1, the containers for the individual reagents 2 are placed at the highest point of the apparatus. Tanks are provided on the bottom closure remote controlled teflon valve 2 · After <^ reservoir is positioned dosing (metering). Called capillary scoop 2 · Its function is evident from Fig. 2. It works on the principle of communicating vessels in interaction with gravitational force, independently on the power supply, with an accuracy of 2 to 5 per mille, and the metered amounts of reagents can be varied continuously by moving the capillary 19 according to the amount of polymeric carrier being processed. Measured reagent or solvent flows down by gravity through a manually operated valve 2 alternately into their two reactors · Reactor 2 having walls adapted na.dně siliconizing and are provided with glass frit further stopcock 1_ P ro, discontinuation of work at any time, pressure connection for the supply of inert mixing media, in particular nitrogen 8, by which the contents of the reactors 2e are mixed from below and by an automatic wall rinser 2. 2a, through the lower Teflon valve 11, there is a branch 12, fitted with another Teflon valve 13, which serves to remove solutions of unreacted amino acid derivatives for eventual regeneration. Behind the branch, individual waste containers 14 with solvents intended for regeneration either on an evaporator 15 with an automatic dispenser 16 or for incineration are successively placed. The device is further equipped with an activation reactor 17 located in the thermostat 18, which enables automated simultaneous preparation of activated components of protected amino acids, which can then be automatically transferred to the respective reactor 2 at the selected moment.
Na obr. 3 j-e znázorněn reaktor 2* který je skleněný a kulovitého tvaru. Jednotlivé roztoky přicházejí do reaktoru 2 přívodem 21 přes oplachovací zařízení £ anebo plnicím hrdlem 22, které může být spojeno s pomocným reaktorem 17 pro přípravu aktivovaných aminokyselin. Ve dně reaktoru je vtavená skleněná frita 6^, kterou je oddělen polymerní nosič od dalších částí aparatury a která umožňuje odsávání pevné pryskyřice od kapalných reagencií a rozpouštědel v reaktoru 2· Reaktor je v horní části vybaven pojistkou přetlaku míchaného média 23. K míchání reagujících komponent v reaktoru 2 se jako míchací médium používá nejčastěji dusík, jehož přívod 2 j® umístěn pod uzavíracím kohoutem 2· Reaktor 2 dosedá kulovým zábrusem 10 na kulovou plochu vypouštěcího teflonového ventilu 11.Fig. 3 shows a reactor 2 * which is glassy and spherical in shape. The individual solutions enter the reactor 2 via an inlet 21 via a rinsing device 6 or via a filling nozzle 22, which can be connected to an auxiliary reactor 17 for the preparation of activated amino acids. At the bottom of the reactor there is a fused glass frit 6, which separates the polymer carrier from other parts of the apparatus and which allows suction of solid resin from liquid reagents and solvents in reactor 2. The reactor is equipped with a mixed medium overpressure fuse 23. in the reactor 2 , nitrogen is most often used as the stirring medium, the inlet 2 of which is located below the shut-off valve 2. The reactor 2 rests with a ball joint 10 on the spherical surface of the Teflon discharge valve 11.
V průběhu vyhledávání nejvhodnější konstrukce a rozměrů reaktorů 2 se nejlépe osvědčil kulový reaktor s poměrem největšího průřezu ku ploše spodní frity 2 4:1 (viz obr. 3). Při tomto poměru dochází při míchání dusíkem k dokonalému horizontálnímu promíchání obsahu reaktoru během několika sekund, nevzniká nežádoucí tzv. pístový efekt” (častý u válcovitých reaktorů), velmi křehký polymerní nosič je mechanicky minimálně namáhán a nedochází k jeho drcení na malé částečky, které by ucpávaly frity reaktorů a znesnadňovaly filtraci.During the search for the most suitable construction and dimensions of the reactors 2, a spherical reactor with the ratio of the largest cross-section to the area of the lower frit 2 4: 1 proved to be the best (see Fig. 3). At this ratio, nitrogen mixing results in perfect horizontal mixing of the reactor contents within a few seconds, there is no undesired so-called piston effect ”(common in cylindrical reactors), a very brittle polymer carrier is mechanically minimally stressed and is not crushed into small particles that would clogged reactor frits and made filtration difficult.
Autory nálezu bylo zjištěno, že na vícecestný ventil 2 může být napojeno tolik reaktorů, kolikacestný ventil to je. Celé zařízení podle vynálezu je vybaveno regulačními teflonovými ventily 2 tuzemské výroby, ovládanými stlačeným vzduchem. To umožňuje poloautomatické ovládání všech důležitých součástí, zařízení je však možno i plně automatizovat připojením na výstup poměrně jednoduchého programovatelného ovla'daČe 22' nebo je lze za mimořádnýchThe authors of the finding found that as many reactors as the two- way valve can be connected to a 2 m multiway valve. The whole device according to the invention is equipped with domestic-made Teflon control valves 2, controlled by compressed air. This allows semi-automatic control of all important components, but the device can also be fully automated by connecting to the output of a relatively simple programmable controller 22 'or can be used in exceptional cases.
CS 266 630 BlCS 266 630 Bl
Zařízení podle vynálezu pracuje tímto způsobem: Nejprve seThe device according to the invention works in the following way: First
PříkladExample
Sled kroků v jednom syntetickém cyklu okolností ovládat i ručně, například v případě přerušení dodávky umožňuje dokončit syntézu i ve výjimečných případech a zabránitThe sequence of steps in one synthetic cycle of circumstances can also be controlled manually, for example in the event of a supply interruption, it is possible to complete the synthesis even in exceptional cases and prevent
Tabulka 1 elektrického proudu. To tak statisícovým škodám.Table 1 of electric current. That's hundreds of thousands of damages.
naplní všechny zásobníky jL potřebnými roztoky, hladiny roztoků kapilárních odměrek _3 se nastaví do vypočtené výše, reaktory £ se naplní odváženým množstvím polymerního nosiče, zapne se proud a otevře se přívod stlačeného vzduchu do ovla‘dače 19, otevře se přívod dusíku f), určeného k míchání obsahu reaktorů 5 a spustí se chlazení termostatu 18. Pomocí tlačítek ovladače 19 se pneumaticky otvírají teflonové ventily 2 a obsah zásobníků 5^ zaplní odměrky 3 na požadované objemy, jejichž velikost je dána úrovní zasunutí odměřovacích kapilár 20. Tato úroveň zůstává obvykle během jedné syntézy konstantní. Odměrná množství roztoků a rozpouštědel stékají v předem stanoveném sledu do reaktorů _5, kde se proudem dusíku polymerní nosič promíchá s odměřeným roztokem. Po provedení každého syntetického kroku se na povel z ovladače 19 . odsaje pomocí teflonových pneumatických ventilů 11 zreagovaný roztok (podle druhu odpadu) do příslušné odpadní nádoby 14.fill all reservoirs 1L with the required solutions, set the levels of capillary measuring cups 3 to the calculated amount, fill the reactors with a weighed amount of polymeric carrier, turn on the flow and open the compressed air supply to the controller 19, open the nitrogen supply f) to stir the contents of the reactors 5 and start cooling the thermostat 18. By means of the control buttons 19 the Teflon valves 2 are pneumatically opened and the contents of the reservoirs 5 are filled with measuring cups 3 to the required volumes, the size of which is determined by synthesis constant. Volumetric amounts of solutions and solvents flow down in a predetermined sequence into reactors 5, where the polymeric carrier is mixed with the metered solution with a stream of nitrogen. After each synthetic step, the command 19 is commanded. sucks the reacted solution (according to the type of waste) into the respective waste container 14 by means of Teflon pneumatic valves 11.
Zařízení podle vynálezu bylo prozatím vyzkoušeno k provozní výrobě některých syntetických peptidů, například k výrobě Desmopresinu, Carbetocinu a oxytocinu, a to v násadách 450 až 1 000 g polymerního nosiče. Ze získaných zkušeností je zřejmé, že.celé zařízení je možno v případě potřeby dále zvětšovat podle požadované velikosti výroby. Celé zařízení je z bezpečnostních důvodů zakryto bezpečnostními skly a opatřeno výkonným odtahem.The device according to the invention has so far been tested for the production of certain synthetic peptides, for example for the production of Desmopressin, Carbetocin and Oxytocin, in batches of 450 to 1000 g of polymeric carrier. It is clear from the experience gained that the whole device can be further enlarged, if necessary, according to the required size of production. For safety reasons, the entire device is covered with safety glass and equipped with a powerful exhaust.
Přínosem zařízení, podle vynálezu pro provozní výrobu peptidů jsou hlavně tyto efekty:The advantages of the device according to the invention for the operational production of peptides are mainly the following effects:
- podstatné zjednodušení obsluhy a snížení fyzické námahy pracovníků,- substantial simplification of operation and reduction of physical effort of workers,
- zvýšení produktivity práce v porovnání se známými zahraničními přístroji i více procent,- increase of labor productivity in comparison with known foreign devices even more percent,
- zvýšení bezpečnosti práce obsluhy uplatněním nových konstrukčních prvků,- increasing the safety of the operator's work by applying new structural elements,
- maximální univerzálnost a komplexnost zařízení pro použití při syntézách - snížení spotřeby surovin a energie.- maximum versatility and complexity of equipment for use in syntheses - reduction of raw material and energy consumption.
Další výhodou zařízení podlé vynálezu je to, že je řešeno komplexně, takže o 100 peptidů, umožňuje provádět vedle vlastní syntézy peptidického řetězce souběžně i některé s tím související pomocné operace, jako např. automatizovanou přípravu aktivovaných složek aminokyselin, regeneraci rozpouštědel a zachycování i regeneraci nezreagovaných derivátů chráněných aminokyselin. Nová konstrukce reaktorů 5^ umožňuje dále dokonalé míchání polymerního nosiče a přitom snižuje na nejnižší míru nebezpečí jeho mechanického poškození. Vlastní reaktory 5, jsou zdvojeny a pracují paralelně, takže odstraněním ztrátových časů se zvyšuje výkon zařízení prakticky na dvojnásobek, přičemž je v závislosti na vícecestném ručním ventilu _4 možné zapojit i více reaktorů 5^ Nové jednoduché odměřování roztoků zajišťuje maximální spolehlivost s vysokou přesností 2 až 5 promile.Another advantage of the device according to the invention is that it is designed comprehensively, so that 100 peptides allow to perform in addition to the actual synthesis of the peptide chain simultaneously some related auxiliary operations, such as automated preparation of activated amino acid components, solvent regeneration and capture and regeneration of unreacted protected amino acid derivatives. Furthermore, the new design of the reactors 5 allows a perfect mixing of the polymer support and at the same time reduces to a minimum the risk of its mechanical damage. The reactors 5 themselves are doubled and operate in parallel, so that by eliminating the downtime the power of the plant is practically doubled, while depending on the multi-way manual valve 4 it is possible to connect more reactors 5. 5 per mille.
Zařízení podle vynálezu je doloženo následujícími příklady provedení, aniž by jimi bylo omezeno.The device according to the invention is illustrated by the following non-limiting examples.
Benzylthiopropionyl-tyrosýl fenylalanyl-glutaminil-asparaginyl-S-benzylcysteinyl-prolyl-tosyl-D-arginyl-glycyl-copoly(1%-divinylbenzen-styren)Benzylthiopropionyl-tyrosyl phenylalanyl-glutaminil-asparaginyl-S-benzylcysteinyl-prolyl-tosyl-D-arginyl-glycyl-copoly (1% -divinylbenzene-styrene)
CS 266 630 B1CS 266 630 B1
Tabulka 1 pokračováníTable 1 continued
Do reakční nádoby pro syntézu peptidů v pevné fázi se umístí 100 g esterifikované pryskyřice, obsahující cca 1,0 mmol Boc-Gly/g pryskyřice. Přidávkujeme 800 ml CH2C12, suspenze se promíchá proudem vzduchu a ponechá v klidu 2 min. CH2C12 se odsaje a promývání se opakuje 3x550 ml CH2C12. Po odsátí CH2C12 pryskyřice nabobtnalá a je připravena pro vlastní syntézu. Syntéza zahrnuje 8 cyklů, každý cyklus sestává z těchto kroků: štěpení chránících skupin, promývání, neutralizace, promývání, kondenzace a promývání. Sled jednotlivých kroků v jednom cyklu je uveden v tab. 1. Jednotlivé cykly se od sebe liší pouze v jednom kroku, kdy je kondenzována chráněná aminokyselina. Každý krok se skládá z přídav'kování 550 ml kapaliny, promíchání proudem vzduchu, ponechání v Klidu po dobu uvedenou v tabulce 1 a odsátí kapaliny. Pokud je reakční doba delší než 5 min, je nutno každých cca 5 min reakční suspenzi promíchat proudem vzduchu. Při odštěpování chránících skupin plynným HC1 je nutno zavádět proud HC1 do reakční suspenze po celou dobu štěpení, jinak se koncentrace HC1 v DCM snižuje a štěpení Boc skupin probíhá neúměrně dlouho. HOBt ester pro kondenzaci se připraví tímto způsobem:100 g of esterified resin containing about 1.0 mmol Boc-Gly / g resin are placed in a reaction vessel for solid phase peptide synthesis. 800 ml of CH2Cl2 are added, the suspension is stirred with a stream of air and left to stand for 2 minutes. The CH2Cl2 is filtered off with suction and the washing is repeated with 3x550 ml of CH2Cl2. After suction filtration with CH 2 Cl 2, the resin swells and is ready for its own synthesis. The synthesis involves 8 cycles, each cycle consisting of the following steps: cleavage of the protecting groups, washing, neutralization, washing, condensation and washing. The sequence of individual steps in one cycle is given in tab. 1. The individual cycles differ from each other only in one step, when the protected amino acid is condensed. Each step consists of adding 550 ml of liquid, stirring with a stream of air, leaving to stand for the time indicated in Table 1 and aspirating the liquid. If the reaction time is longer than 5 minutes, the reaction suspension must be stirred with a stream of air every approx. 5 minutes. When cleaving the protecting groups with HCl gas, it is necessary to introduce a stream of HCl into the reaction suspension throughout the cleavage, otherwise the concentration of HCl in DCM decreases and the cleavage of the Boc groups takes a disproportionately long time. The HOBt ester for condensation is prepared as follows:
potřebné množství roztoku DCC v CH2C12 (zásobní roztok se připraví rozpuštěním 250 g DCC v 500 ml CH2C12) se vychladí na 0 °C a přilije se k vychlazenému roztoku (0¾) Boc-aminokyseliny a HOBt tak, aby vznikl roztok aktivní komponenty právě v 500 ml směsi DCM-DMF. Reakční směs se míchá při 0 °C 60 až 90 minut, přičemž se reakční teplota nechá vystoupit plynule na teplotu místnosti. Vyloučená DCHM se odsaje a roztok takto aktivované Boc-aminokyseliny se použije bezprostředně pro kondenzaci.the required amount of DCC solution in CH2Cl2 (stock solution is prepared by dissolving 250 g DCC in 500 ml CH2Cl2) is cooled to 0 ° C and added to the cooled solution (0¾) of Boc-amino acid and HOBt so that a solution of the active component is formed in 500 ml of a DCM-DMF mixture. The reaction mixture was stirred at 0 ° C for 60-90 minutes, allowing the reaction temperature to rise continuously to room temperature. The precipitated DCHM is filtered off with suction and the Boc-amino acid solution thus activated is used immediately for the condensation.
Průběh štěpení chránících skupin a kondenzace se sleduje ninhydrinovým testem. Reakční dobu je nutno prodloužit, je-li test pozitivní. Pokračovat v syntéze lze tehdy, až je test negativní (bezbarvý nebo mírně narůžovělý).The cleavage of the protecting groups and the condensation are monitored by the ninhydrin test. The reaction time must be extended if the test is positive. The synthesis can be continued until the test is negative (colorless or slightly pinkish).
CS 266 630 BlCS 266 630 Bl
Po ukončené syntéze se peptidyl-pryskyřice promyje 3xCH2C12 a 3xMeOH a vysuší se volně na vzduchu. Výtěžek: 183,1 až 216,6 g, to je 82 až 97% peptidyl-pryskyřiceAfter completion of the synthesis, the peptidyl resin was washed 3xCH 2 Cl 2 and 3xMeOH and air dried. Yield: 183.1 to 216.6 g, i.e. 82 to 97% peptidyl resin
Příklad 2Example 2
N-benzyloxykarbonyl-izoleucyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcysteinyl-prolyl-leucyl-glycyl-copoly(1%-divinylbenzen-styren)N-benzyloxycarbonyl-isoleucyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcysteinyl-prolyl-leucyl-glycyl-copoly (1% -divinylbenzene-styrene)
Příprava aktivovaného derivátu aminokyseliny při jednotlivých kopulacích:Preparation of activated amino acid derivative in individual couplings:
Do reakční nádoby pro syntézu peptidů v pevné fázi se umístí 100 g esterifikované pryskyřice, obsahující cca 1,0 mmol Boc-Gly/g pryskyřice. Další postup je analogický jako v příkladu 1. Výtěžek: 147 až 174 g, to je 82 až 97% peptidyl-pryskyřice.100 g of esterified resin containing about 1.0 mmol Boc-Gly / g resin are placed in a reaction vessel for solid phase peptide synthesis. The further procedure is analogous to Example 1. Yield: 147 to 174 g, i.e. 82 to 97% of peptidyl resin.
Příklad 3Example 3
N-benzyloxykarbonyl-S-benzylcysteinyl-O-methyltyrosyl-izoleucyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcysteinyl-prolyl- leucyl-glycyl-copoly(1%-divinylbenzen-styren).N-benzyloxycarbonyl-S-benzylcysteinyl-O-methyltyrosyl-isoleucyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcysteinyl-prolyl-leucyl-glycyl-copoly (1% -divinylbenzene-styrene).
Do reakční nádoby pro syntézu peptidů v pevné fázi se umístí 100 g esterifikované pryskyřice, obsahující cca 1,0 mmol Boc-Gly/g pryskyřice. Další postup je analogický jako v příkladu 1. Výtěžek: 177,4 až 209,8 g, to je 82 až 97% peptidyl-pryskyřice.100 g of esterified resin containing about 1.0 mmol Boc-Gly / g resin are placed in a reaction vessel for solid phase peptide synthesis. The further procedure is analogous to Example 1. Yield: 177.4 to 209.8 g, i.e. 82 to 97% of peptidyl resin.
Zkratky a symboly použité v textuAbbreviations and symbols used in the text
Pokud není uvedeno jinak, jsou všechny aminokyseliny konfigurace L- a jejich zkratky odpovídají používanému názvosloví.Unless otherwise indicated, all amino acids in the L- configuration and their abbreviations correspond to the nomenclature used.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS883219A CS266630B1 (en) | 1988-05-12 | 1988-05-12 | Device for automatic production of peptides on solid carrier |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS883219A CS266630B1 (en) | 1988-05-12 | 1988-05-12 | Device for automatic production of peptides on solid carrier |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS321988A1 CS321988A1 (en) | 1989-04-14 |
| CS266630B1 true CS266630B1 (en) | 1990-01-12 |
Family
ID=5371644
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS883219A CS266630B1 (en) | 1988-05-12 | 1988-05-12 | Device for automatic production of peptides on solid carrier |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS266630B1 (en) |
-
1988
- 1988-05-12 CS CS883219A patent/CS266630B1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS321988A1 (en) | 1989-04-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3311760B2 (en) | Method for multiple synthesis of peptides on a solid support and apparatus for carrying out this method | |
| ZUCKERMANN et al. | Design, construction and application of a fully automated equimolar peptide mixture synthesizer | |
| EP0208641B1 (en) | Multi-synthetizer and semi-automatic synthesis process of peptides in the solid phase | |
| MELDAL et al. | Multiple column peptide synthesis, Part 2 (1, 2) | |
| EP0529504B1 (en) | Apparatus for the simultaneous synthesy of different peptides | |
| JPH0272193A (en) | Repeating chemical treatment apparatus and method | |
| JP2009292839A (en) | Apparatus for synthesis of oligomer, especially peptoid, with reagent recycling | |
| WO1992021968A2 (en) | Automated column equilibration, column loading, column washing and column elution | |
| JP7415022B2 (en) | Triple resin reactor peptide synthesizer | |
| WO1990002605A1 (en) | An apparatus and a method for the synthesis of peptides | |
| EP2814941B1 (en) | Plant infiltration device | |
| CN106824037B (en) | The continuous flowing reaction tube of air pressure driving, reactor, reaction unit and its application | |
| CN102702304B (en) | Multipath pre-activating device, peptide nucleic acid preparation system, and pre-activating and synthetizing method | |
| EP0558050B1 (en) | Apparatus and method for isolation of synthetic peptide without loss of reagents | |
| DK173633B1 (en) | Method and cannula for pipetting robot for fully automatic simultaneous synthesis of multiple polypeptides | |
| CS266630B1 (en) | Device for automatic production of peptides on solid carrier | |
| CN114929376B (en) | Apparatus and method for iterative polymer synthesis | |
| US6403379B1 (en) | Reactor plate washing station | |
| JPH063233A (en) | Agricultural chemicals residue automatic preliminary treatment device | |
| WO2007104766A1 (en) | A dissolution sample preparation apparatus and method with both mechanical and ultrasonic homogenisation | |
| US20220064208A1 (en) | Process for solid-phase peptide synthesis and device | |
| US4211747A (en) | System for measuring radioactivity of labelled biopolymers | |
| Gausepohl et al. | Automated synthesis of solid-phase bound peptides | |
| CS262081B1 (en) | Device for automatic preparing peptides by synthesis on solid phase | |
| CS252167B1 (en) | Equipment for liquid and solid phases automatic separation |