CN108330080B - 一种含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂及其制备方法和应用 - Google Patents
一种含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108330080B CN108330080B CN201711124247.4A CN201711124247A CN108330080B CN 108330080 B CN108330080 B CN 108330080B CN 201711124247 A CN201711124247 A CN 201711124247A CN 108330080 B CN108330080 B CN 108330080B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fermentation
- stage
- lactobacillus buchneri
- percent
- lactobacillus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000004460 silage Substances 0.000 title claims abstract description 89
- 241000186679 Lactobacillus buchneri Species 0.000 title claims abstract description 67
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 title claims abstract description 44
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 19
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 150
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 149
- 241000193749 Bacillus coagulans Species 0.000 claims abstract description 40
- 229940054340 bacillus coagulans Drugs 0.000 claims abstract description 40
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 claims abstract description 39
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 claims abstract description 39
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 claims abstract description 39
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims abstract description 31
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims abstract description 29
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims abstract description 29
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims abstract description 29
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 28
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 63
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 47
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 45
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 42
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 38
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims description 31
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 30
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 30
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 30
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 claims description 22
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 22
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 20
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 19
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 19
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 19
- 239000010802 sludge Substances 0.000 claims description 18
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 16
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 claims description 16
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 claims description 16
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 claims description 16
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 16
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 16
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 15
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 15
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 14
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 12
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 12
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 12
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 9
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 9
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 8
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 8
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 8
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 8
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 8
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 8
- 229910000357 manganese(II) sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 8
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 8
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 claims description 8
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 7
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 7
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 6
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 claims description 5
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 5
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 claims description 4
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 4
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 4
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 4
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 claims description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 4
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 claims description 4
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 claims description 4
- 239000005862 Whey Substances 0.000 claims description 4
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 claims description 4
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 claims description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 4
- FRHBOQMZUOWXQL-UHFFFAOYSA-L ammonium ferric citrate Chemical compound [NH4+].[Fe+3].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O FRHBOQMZUOWXQL-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 claims description 4
- 229960004642 ferric ammonium citrate Drugs 0.000 claims description 4
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 4
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 4
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000004313 iron ammonium citrate Substances 0.000 claims description 4
- 235000000011 iron ammonium citrate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 4
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 4
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 claims description 4
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 claims description 4
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 claims description 4
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 claims description 4
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 claims description 4
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 claims description 4
- 235000008939 whole milk Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims description 2
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 4
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 14
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 9
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 abstract description 7
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 abstract description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 4
- 241001057636 Dracaena deremensis Species 0.000 abstract description 3
- 241000235342 Saccharomycetes Species 0.000 abstract description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 25
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 18
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 9
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 6
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 6
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 5
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 5
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 5
- 210000004767 rumen Anatomy 0.000 description 5
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 235000021049 nutrient content Nutrition 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 3
- 241001416150 Bos indicus x Bos taurus Species 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 description 2
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 2
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 2
- XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N ammonia nh3 Chemical compound N.N XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000036449 good health Effects 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- OBMBUODDCOAJQP-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-4-phenylquinoline Chemical compound C=12C=CC=CC2=NC(Cl)=CC=1C1=CC=CC=C1 OBMBUODDCOAJQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 1
- 230000000507 anthelmentic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 235000021050 feed intake Nutrition 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000004459 forage Substances 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229940059442 hemicellulase Drugs 0.000 description 1
- 108010002430 hemicellulase Proteins 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006996 mental state Effects 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019629 palatability Nutrition 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000022676 rumination Effects 0.000 description 1
- 208000015212 rumination disease Diseases 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 235000019614 sour taste Nutrition 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K30/00—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs
- A23K30/10—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder
- A23K30/15—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder using chemicals or microorganisms for ensilaging
- A23K30/18—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder using chemicals or microorganisms for ensilaging using microorganisms or enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/169—Plantarum
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Fodder In General (AREA)
Abstract
本发明提供一种含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂,所述青贮剂包括布氏乳杆菌、植物乳杆菌和凝结芽孢杆菌;所述布氏乳杆菌于2017年8月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC NO.14508,分类命名为Lactobacillus buchneri,所述植物乳杆菌于2016年5月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC NO.12554,分类命名为Lactobacillus plantarum;所述凝结芽孢杆菌于2016年5月27日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.12553,分类命名为Bacillus coagulans。本发明的饲料青贮剂应用于全株玉米青贮,可明显降低玉米青贮的pH值,乙酸和乳酸的含量明显增多,乳酸菌含量也明显提高,而霉菌和酵母菌含量则低于检测限,从而提高玉米青贮的发酵品质。
Description
技术领域
本发明属于青贮饲料领域,特别涉及一种含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂及其制备方法和应用。
背景技术
青贮饲料是将新鲜的青绿饲料进行适当的加工处理后,在厌氧条件下经过乳酸菌等微生物的发酵作用而调制保存的多汁饲料,其不仅能够很好地保持原料青绿多汁的特性,而且具有特殊的酸香气味,质地柔软,营养丰富,适口性好。近年来,随着畜牧经济的快速发展,采用青贮全年均衡供应青绿多汁饲料,已成为奶业健康发展的重要手段。为了获得理想的发酵品质,青贮饲料中的乳酸菌数量应达到105cfu/g或以上。然而,在一般情况下,饲料作物上附着的乳酸菌数量不足,青贮早期繁殖缓慢,而有害微生物繁殖较快,导致难以获得品质优良的青贮饲料。因此,需额外添加优质乳酸菌制剂,以保证青贮发酵初期的乳酸菌数量及乳酸菌发酵能力。
公开号为CN1409985A的中国专利申请公开了一种青贮专用乳酸菌接种剂,含两种活性干菌粉,纤维素酶,半纤维素酶,碳水化合物,硫酸锰,硅藻土等。该青贮饲料在短时间内的发酵力度不够,使青贮速度达到pH值为4的时间较长,并且对杂菌的抑制力度缺乏,容易造成营养物质的损失。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂和其制备方法及应用。
为了达成上述的目的,本发明提供一种含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂,所述青贮剂包括由布氏乳杆菌(Lactobacillusbuchneri)、植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)和凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)。
进一步地,其中所述布氏乳杆菌(Lactobacillusbuchneri)HEW-A666已于2017年8月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC,地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,邮政编码:100101),保藏编号为CGMCCNO.14508,分类命名为布氏乳杆菌(Lactobacillusbuchneri)。植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)HEW-A490已于2016年5月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC NO.12554。凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)HEW-B379已于2016年5月27日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCCNo.12553。
进一步地,其中,按重量百分比计,所述布氏乳杆菌、植物乳杆菌和凝结芽孢杆菌三者之间的比例为(0.1-1.0):(0.1-0.5):0.1;所述青贮剂中布氏乳杆菌活性达1×1010-1×1011CFU/g,植物乳杆菌活性达1×1010-5×1010CFU/g,凝结芽孢杆菌活性为1×1010CFU/g。
进一步地,所述饲料青贮剂的制备方法,包括以下步骤:
⑴菌株扩大培养:布氏乳杆菌、植物乳杆菌和凝结芽孢杆菌分别进行一级、二级和三级培养,最终获得它们的发酵液;
⑵活性菌泥的收集:分别将获得的布氏乳杆菌、植物乳杆菌和凝结芽孢杆菌发酵液在8000-14000r/m的转速下离心20-30min,获得它们的活性菌泥;
⑶青贮剂的制备:将离心获得的三种菌的活性菌泥与保护剂按比例混合,通过真空冷冻干燥技术冻干成粉末,制得含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂。
进一步地,其中步骤⑴中所述布氏乳杆菌HEW-A666发酵采用的一级种子培养基的组成(按重量百分比计)为:葡萄糖0.5-2.5%,乳糖0.5-2.5%,酵母提取物0.2-2.0%,蛋白胨0.5-2.0%,硫酸镁0.01-1.0%,磷酸氢二钾0.01-0.5%,碳酸钙0.05-0.5%,氯化钠0.05-1.0%,硫酸锰0.01-0.5%,余量为水,pH6.8±0.2;优选地,上述种子培养基的组成:葡萄糖1.5%,乳糖0.5%,酵母提取物0.4%,蛋白胨1.5%,硫酸镁0.05%,磷酸氢二钾0.02%,碳酸钙0.15%,氯化钠0.2%,硫酸锰0.02%,余量为水,pH6.8±0.2。
进一步地,其中步骤⑴中所述布氏乳杆菌HEW-A666发酵采用的二级和三级发酵培养基的组成相同,其组分(按重量百分比计)为:葡萄糖0.5-3.0%,乳糖0.5-2.5%,酵母粉0.5-2.5%,胰蛋白胨0.5-2.0%,硫酸镁0.01-0.25%,磷酸氢二钾0.01-0.2%,碳酸钙0.05-0.5%,氯化钠0.1-2.0%,硫酸锰0.01-0.1%,余量为水,pH6.8±0.2。优选为:葡萄糖2%,乳糖1%,酵母粉1.6%,胰蛋白胨0.8%,硫酸镁0.04%,磷酸氢二钾0.01%,碳酸钙0.1%,氯化钠0.3%,硫酸锰0.05%,余量为水,pH6.8±0.2。
进一步地,其中步骤⑴中所述植物乳杆菌发酵时采用的一级种子培养基的组成(按重量百分比计)为:乳糖0.5-3%,蔗糖0.5-2%,全脂奶粉01-1.%,豆粕粉0.5-2%,酵母浸粉0.5-3.%,NaH2PO40.1-0.7%,KH2PO40.1-0.7%,氯化镁0.01-0.1%,柠檬酸铁铵0.01-0.1%,MnSO40.01-0.1%,氯化钙0.05-1%,余量为水,pH5.8-7.2;优选为乳糖1.25%,蔗糖0.8%,全脂奶粉0.5%,豆粕粉1.5%,酵母浸粉0.85%,NaH2PO40.4%,KH2PO40.6%,氯化镁0.05%,柠檬酸铁铵0.04%,MnSO40.04%,氯化钙0.1%,余量为水,pH6.4±0.2。
进一步地,其中步骤⑴中所述植物乳杆菌发酵时采用的二级和三级发酵培养基的组成相同,其组分(按重量百分比计)为:蔗糖1-4%,玉米淀粉0.5-2.0%,玉米浆干粉1-3%,酵母提取物0.5-3%,磷酸氢二钾0.01-0.15%,硫酸镁0.01-0.2%,氯化钠0.1-0.5%,碳酸钙0.05-0.4%,硫酸锰0.01-0.05,余量为水,pH6.8±0.2;优选为蔗糖1.5%,玉米淀粉2.0%,玉米浆干粉1.2%,酵母提取物1.4%,磷酸氢二钾0.08%,硫酸镁0.05%,氯化钠0.2%,碳酸钙0.15%,硫酸锰0.03%,余量为水,pH6.8±0.2。
进一步地,其中步骤⑴中所述凝结芽孢杆菌的一级、二级种子培养基的组成(按重量百分比计)为:红糖1%-5%,大豆蛋白胨0.5%-1.5%,酵母膏0.3%-1.0%,NaCl 0.1%-0.5%,K2HPO40.2%-0.5%,硫酸镁0.01%-0.1%,MnSO40.05%-0.15%,余量为水,pH7.0±0.2;优选地,凝结芽孢杆菌发酵时采用的一级、二级种子培养基的组成为:红糖3%,大豆蛋白胨1%,酵母膏0.5%,NaCl 0.5%,K2HPO40.3%,硫酸镁0.05%,MnSO40.1%,余量为水,pH7.0±0.2。三级发酵培养基为:1-25%麸皮浸出液(将小麦麸皮与水按照1:4的比例混合均匀,煮沸20分钟,过滤除去麸皮即得)、1-5%淀粉、1-5%豆粕、1-5%玉米浆干粉、0.05-0.1%磷酸氢二钾、0.05-0.5%硫酸镁、0.1-2.0%氯化钠、0.01-0.05%硫酸锰、0.1-1.0%碳酸钙,余量为水,pH6.0-8.0。
进一步地,其中步骤⑴中所述布氏乳杆菌的发酵方法为:将甘油管保藏的布氏乳杆菌HEW-A666在MRS平板上划线,30℃,48h,从平板上挑取单菌落于100mL种子培养基中,30℃,180r/min震荡培养24h,获得HEW-A666种子液;可取种子液1-5mL(种子液其活菌浓度以109CFU/mL计),接种到300mL培养基中,进行摇瓶发酵培养,发酵温度25-40℃,转速为120-200r/min,发酵时间15-30h;优选为:发酵温度30℃,转速为180r/min,发酵时间24h。将一级种子液转接到50L发酵罐二级种子培养基中,发酵3.5-5h后,将二级种子液转接于三级发酵培养基中,发酵完成后获得三级发酵液,二级和三级培养发酵条件为装液量为35-65%,接种量为0.5-4%,发酵温度为25-40℃,搅拌转速为80-150r/min,二级发酵时间为3-10h,三级发酵时间为16-30h。优选为:装液量为60%,接种量为1%,发酵温度为30℃,搅拌转速为110r/min,二级发酵时间为5h,三级发酵时间为24h,三级发酵活菌数可达2.0×1010CFU/mL。
进一步地,其中步骤⑴中所述植物乳杆菌的发酵方法为:将植物乳杆菌HEW-A490在MRS斜面上划线,37℃培养20h,将斜面加入2mL灭菌生理盐水制成菌悬液,将菌悬液转接于300mL种子培养基中进行摇瓶发酵培养,37℃、180r/min震荡15h,制成种子液。可取种子液1-5mL(种子液其活菌浓度以109CFU/mL计),接种到300mL培养基中,进行摇瓶发酵培养获得一级种子液,发酵温度30-45℃,转速为150-220r/m,发酵时间5-20h;优选为:发酵温度37℃,转速为180r/m,发酵时间15h。将一级种子液转接于二级种子培养基中,发酵温度为30-45℃,发酵时间5-20h,搅拌转速100-220r/min;优选为发酵温度为37℃,搅拌转速120r/min,发酵时间10h,获得二级种子液。将二级种子液转接于三级发酵培养基中,装液量为2T-4T培养基,接种量为20-40L二级培养液,发酵温度为30-45℃,发酵时间10-25h,搅拌转速100-220r/min。其中,优选为:装液量为3.5T培养基,接种量为30L,发酵温度为37℃,搅拌转速110r/min,发酵时间20h。活菌数可达2.5×1010CFU/mL。
进一步地,其中步骤⑴中所述凝结芽孢杆菌的发酵方法为:取凝结芽孢杆菌甘油管保藏的菌种,接种于300mL一级种子培养基中,进行摇瓶发酵培养,发酵温度为37±5℃、转速200r/min,发酵时间15-25h,得到一级种子液(活菌浓度为109CFU/mL)。将一级种子液转接到50L发酵罐二级种子培养基中,接种量为2%,装液量为20L、发酵温度为37±5℃、搅拌转速150r/min,培养7-15h得到二级种子液。将二级种子液转接于三级发酵培养基中,接种量为35mL,发酵温度为40℃,pH值6.8,搅拌转速150r/min,发酵时间30h获得三级发酵液,活菌数可达5.0×1010CFU/mL。
进一步地,其中步骤⑶中所述三种菌的活性菌泥与保护剂按比例混合,是将布氏乳杆菌活性菌泥、植物乳杆菌活性菌泥、凝结芽孢杆菌活性菌泥和保护剂按照(0.5-1):(0.5-1):(0.1-0.5):(1-2.5)的重量百分比混合,优选比例为0.75:0.5:0.2:1.45。
进一步地,其中步骤⑶中所述保护剂按照重量份数计的组成为:0.1-8.0份海藻糖、1-5份山梨醇、0.1-3.0份丙三醇、1-10份明胶、2-20份脱脂奶粉、0.5-2份聚乙烯吡咯酮、0.1-2.0份维生素E、0.1-2.0份维生素C、2-8份脱脂乳清粉、水20-50份。优选为:4.5份海藻糖、1.0份山梨醇、0.5份丙三醇、2.5份明胶、8份脱脂奶粉、1.2份聚乙烯吡咯酮、0.5份维生素E、0.5份维生素C、2.5份脱脂乳清粉、24.5份水;将各成分依次加入水中,边溶解边搅拌,搅拌20min后完成。
本发明提供了一种上述含有布氏乳杆菌(Lactobacillusbuchneri)HEW-A666的饲料青贮剂在用于制备动物饲料中的应用。
本发明提供的布氏乳杆菌HEW-A666可用于全株玉米青贮,提高了全株玉米青贮的感官品质和有氧稳定性,且营养成分高,有利于动物对青贮玉米的饲用。
本发明具有以下有益效果:
1.本发明提供的含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂应用于全株玉米青贮,可明显降低玉米青贮的pH值,乙酸和乳酸的含量明显增多,乳酸菌含量也明显提高,而霉菌和酵母菌含量则低于检测限,从而提高玉米青贮的发酵品质。在青贮中添加布氏乳杆菌青贮剂可消耗淀粉,提高中性洗涤纤维含量,有利于奶牛等瘤胃动物维持瘤胃正常发酵功能;还可有效提高全株玉米青贮的感官品质和有氧稳定性,且营养成分高。
2.本发明提供的全株玉米青贮饲喂肉牛(西门塔尔杂交牛),当其添加比例为50%时,肉牛日增重最高,显著高于对照组(P<0.05),提高了6.57%,降低料肉比0.38。
具体实施方式
下面结合实施例解释本发明,实施案例仅用于说明本发明。除非特别说明,本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外,实施方案应理解为说明性的,而非限制本发明的范围,本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言,在不背离本发明实质和范围的前提下,对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。
本发明中涉及到的百分号“%”,若未特别说明,是指重量百分比;但溶液的百分比,除另有规定外,是指100mL溶液中含有溶质的克数。
实施例1活性菌泥和保护剂的制备
⑴布氏乳杆菌HEW-A666活性菌泥的制备
将甘油管保藏的菌株HEW-A666在MRS平板上划线培养,30℃,48h,从平板上挑取单菌落于100mL种子培养基中,30℃,180r/min震荡培养24h,获得HEW-A666种子液,活性达4.0×109CFU/mL;
取活菌浓度以109CFU/mL计的种子液1-5mL,接种到300mL培养基中,进行摇瓶发酵培养获得HEW-A666一级种子液;
将HEW-A666一级种子液转接到50L发酵罐的二级种子培养基中,进行二级发酵,发酵5h后得HEW-A666二级种子液;
将HEW-A666二级种子液转接于5T发酵罐的三级发酵培养基中,进行三级发酵,发酵24h后获得HEW-A666三级发酵液,活性达到2.0×1010CFU/mL;
将HEW-A666三级发酵液通过碟式离心机离心(6000r/m)获得HEW-A666菌泥,活性(活菌数)达到8.0×1011CFU/g。
其中,二级和三级发酵的共同条件如下,装液量为60%(v/v),接种量为1%(v/v),发酵温度为30℃,搅拌转速为110r/min,三级发酵活菌数达到2.0×1010CFU/mL;
种子培养基由下述组分组成(按重量百分比计):葡萄糖1.5%,乳糖0.5%,酵母提取物0.4%,蛋白胨1.5%,硫酸镁0.05%,磷酸氢二钾0.02%,碳酸钙0.15%,氯化钠0.2%,硫酸锰0.02%,余量为水,pH6.8±0.2。摇瓶发酵的条件为:发酵温度30℃,转速为180r/min,发酵时间24h。
二级和三级发酵培养基相同,按重量百分比计,均为葡萄糖2%,乳糖1%,酵母粉1.6%,胰蛋白胨0.8%,硫酸镁0.04%,磷酸氢二钾0.01%,碳酸钙0.1%,氯化钠0.3%,硫酸锰0.05%,余量为水,pH6.8±0.2。
⑵植物乳杆菌HEW-A490活性菌泥的制备
将菌株HEW-A490(保藏编号为CGMCC NO.12554,其在公开号为CN106399196A的中国专利申请中已保藏)在MRS斜面上划线,37℃培养20h,将斜面加入2mL,0.85wt%的灭菌生理盐水制成菌悬液,将菌悬液转接于300mL种子培养基中进行摇瓶发酵培养,37℃、180r/min震荡15h,制成HEW-A490种子液,检测种子液活菌数为5.4×109CFU/mL,种子液于4℃保存在冰箱内备用;
取活菌浓度以109CFU/mL计的种子液1-5mL,接种到300mL一级种子培养基中,进行摇瓶发酵培养获得HEW-A490一级种子液,发酵温度37℃,转速为180r/m,发酵时间15h;
将HEW-A490一级种子液转接到50L发酵罐的二级种子培养基中,进行二级发酵,发酵10h后得HEW-A490二级种子液;
将HEW-A490二级种子液转接于5T发酵罐的三级发酵培养基中,进行三级发酵,发酵20h后获得HEW-A490三级发酵液;
将三级发酵液通过碟式离心机离心(6000r/m)获得HEW-A490菌泥,活性达6.5×1011CFU/g。
其中,二级和三级发酵的共同条件如下,装液量为70%(v/v),接种量为60%(v/v),发酵温度为37℃,搅拌转速110r/min;三级活菌数可达2.5×1010CFU/mL;
其中,一级种子培养基由下述组分组成(按重量百分比计):乳糖1.25%,蔗糖0.8%,全脂奶粉0.5%,豆粕粉1.5%,酵母浸粉0.85%,NaH2PO40.4%,KH2PO40.6%,氯化镁0.05%,柠檬酸铁铵0.04%,MnSO40.04%,氯化钙0.1%,余量为水,pH6.8±0.2。摇瓶发酵的条件为:发酵温度37℃,转速为180r/m,发酵时间15h。
二级和三级发酵培养基相同,按重量百分比计,均为蔗糖1.5%,玉米淀粉2.0%,玉米浆干粉1.2%,酵母提取物1.4%,磷酸氢二钾0.08%,硫酸镁0.05%,氯化钠0.2%,碳酸钙0.15%,硫酸锰0.03%,余量为水,pH6.8±0.2。
⑶凝结芽孢杆菌HEW-B379活性菌泥的制备
取甘油管保藏的凝结芽孢杆菌菌种HEW-B379(保藏编号为CGMCC No.12553,其在公开号为CN106011036A的中国专利申请中已保藏),接种于300mL一级种子培养基中,进行摇瓶发酵培养,发酵温度为40℃、pH6.8、转速200r/min,发酵时间10h,得到活菌浓度为109CFU/mL的HEW-B379一级种子液;
将HEW-B379一级种子液转接到50L发酵罐的二级种子培养基中,接种量为2%(v/v),装液量为0.4%(v/v)、发酵温度为40℃、搅拌转速150r/min,pH值6.8,培养10h得到HEW-B379二级种子液;
将HEW-B379二级种子液转接于500L发酵罐的三级培养基中,控制罐压0.02-0.05MpB,装液量为60%(v/v),接种量为0.6%(v/v),发酵温度为40℃,pH值6.8,搅拌转速150r/min,发酵30h,获得HEW-B379三级发酵液,发酵结束后,经检测发酵液活菌数为6.1×1010CFU/mL;
将三级发酵液通过碟式离心机离心(6000r/m)获得HEW-B379菌泥,活性达1.0×1012CFU/g。
其中,一级、二级种子培养基的组成(按重量百分比计)为:红糖3%,大豆蛋白胨1%,酵母膏0.5%,NaCl 0.5%,K2HPO40.3%,硫酸镁0.05%,MnSO40.1%,余量为水,pH7.0±0.2;
三级发酵培养基成分(按重量百分比计)为:2.5%麸皮浸出液、1.25%淀粉、2.5%豆粕、1.48%玉米浆干粉、0.08%磷酸氢二钾,0.12%硫酸镁,0.56%氯化钠,0.03%硫酸锰、0.24%碳酸钙,余量为水,pH6.0-8.0。
⑷保护剂的制备
保护剂(按重量份数计)的组成为:4.5份海藻糖、1.0份山梨醇、0.5份丙三醇、2.5份明胶、8份脱脂奶粉、1.2份聚乙烯吡咯酮、0.5份维生素E、0.5份维生素C、2.5份脱脂乳清粉、24.5份水;将各成分依次加入水中,边溶解边搅拌,搅拌20min后完成。
实施例2一种含有布氏乳杆菌HEW--A666的饲料青贮剂的制备
将实施例1中所述的三种菌的活性菌泥与保护剂按比例混合,即布氏乳杆菌活性菌泥、植物乳杆菌活性菌泥、凝结芽孢杆菌活性菌泥和保护剂按照0.75:0.5:0.2:1.45的比例(重量百分比)混合均匀。
三种菌的活性菌泥与保护剂混合均匀后,-80℃预冻3-6h,然后进行冷冻干燥30-48h,获得一种含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂,该饲料青贮剂中布氏乳杆菌活性为5.0×1010cfu/g、植物乳杆菌活性为3.0×1010cfu/g,凝结芽孢杆菌活性为2.0×1010cfu/g。
实施例3一种含有布氏乳杆菌HEW--A666的饲料青贮剂的制备
与实施例2的区别在于布氏乳杆菌活性菌泥、植物乳杆菌活性菌泥、凝结芽孢杆菌活性菌泥和保护剂按照0.5:0.2:0.1:1.25的比例(重量百分比)混合均匀。
三种菌的活性菌泥与保护剂混合均匀后,-80℃预冻3-6h,然后进行冷冻干燥30-48h,获得一种含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂,该饲料青贮剂中布氏乳杆菌活性为3.5×1010cfu/g、植物乳杆菌活性为1.8×1010cfu/g,凝结芽孢杆菌活性为5.0×109cfu/g。
实施例4一种含有布氏乳杆菌HEW--A666的饲料青贮剂的制备
与实施例2的区别在于布氏乳杆菌活性菌泥、植物乳杆菌活性菌泥、凝结芽孢杆菌活性菌泥和保护剂按照0.75:0.5:0.2:0.8的比例(重量百分比)混合均匀。
三种菌的活性菌泥与保护剂混合均匀后,-80℃预冻3-6h,然后进行冷冻干燥30-48h,获得一种含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂,该饲料青贮剂中布氏乳杆菌活性为8.5×1010cfu/g、植物乳杆菌活性为6.8×1010cfu/g,凝结芽孢杆菌活性为4.5×1010cfu/g。
实施例5一种含有布氏乳杆菌HEW--A666的饲料青贮剂的制备
与实施例2的区别在于布氏乳杆菌活性菌泥、植物乳杆菌活性菌泥、凝结芽孢杆菌活性菌泥和保护剂按照0.6:0.6:0.4:1.45比例(重量百分比)混合均匀。
三种菌的活性菌泥与保护剂混合均匀后,-80℃预冻3-6h,然后进行冷冻干燥30-48h,获得一种含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂,该饲料青贮剂中布氏乳杆菌活性为4.5×1010cfu/g、植物乳杆菌活性为4.0×1010cfu/g,凝结芽孢杆菌活性为3.5×1010cfu/g。
实施例6一种含有布氏乳杆菌HEW--A666的饲料青贮剂的制备
与实施例2的区别在于布氏乳杆菌活性菌泥、植物乳杆菌活性菌泥、凝结芽孢杆菌活性菌泥和保护剂按照0.25:0.5:0.2:0.6比例(重量百分比)混合均匀。
三种菌的活性菌泥与保护剂混合均匀后,-80℃预冻3-6h,然后进行冷冻干燥30-4混合8h,获得一种含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂,该饲料青贮剂中布氏乳杆菌活性为2.7×1010cfu/g、植物乳杆菌活性为7.0×1010cfu/g,凝结芽孢杆菌活性为5.0×1010cfu/g。
实施例7饲料青贮剂在全株玉米青贮中的应用
试验组:刈割后的全株玉米(无腐烂变质),切至2-3cm段,作为青贮原料,将含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂与0.85wt%的生理盐水按照10%的比例混合使其完全溶解后,均匀地喷洒在青贮原料上,使布氏乳杆菌活性为105CFU/g的青贮原料、植物乳杆菌活性为105CFU/g的青贮原料及凝结芽孢杆菌活性为104CFU/g的青贮原料,填装压实,要确保青贮桶的周围及边角充分压实,封膜并踩实封严,25℃厌氧发酵4个月,得到青贮饲料。
对照组:用等量的灭菌生理盐水作对照。
青贮结束后,观察青贮饲料品质,检测青贮饲料中各营养成分(干物质、可溶性碳水化合物、淀粉、粗蛋白、中性和酸性洗涤纤维、氨态氮)含量、有机酸含量、霉菌、酵母菌含量及有氧稳定性(表1)。
表1青贮剂对全株玉米青贮营养成分的影响
营养成分 | 对照组 | 试验组 |
气味 | 有霉臭味 | 无丁酸臭味,有芳香味 |
结构 | 茎叶结构较差 | 茎叶结构保持良好 |
颜色 | 变色严重 | 接近于原料原色 |
pH | 4.68±0.12 | 3.54±0.05 |
干物质(占总重)% | 32.67±0.87<sup>a</sup> | 36.12±1.24<sup>b</sup> |
可溶性碳水化合物(占干物质)% | 0.98±0.02 | 1.08±0.01 |
淀粉(占干物质)% | 18.62±0.22 | 15.88±0.14 |
粗蛋白(占干物质)% | 6.82±0.04 | 6.32±0.02 |
中性洗涤纤维(占干物质)% | 40.67±1.25<sup>a</sup> | 48.06±2.17<sup>b</sup> |
酸性洗涤纤维(占干物质)% | 24.15±0.69 | 26.52±0.74 |
氨态氮(占干物质)% | 7.17±0.11 | 6.24±0.08 |
水分% | 76.24±1.02 | 70.68±0.36 |
霉菌CFU/g | 1.4×10<sup>4</sup> | 无检出 |
酵母菌CFU/g | 7.8×10<sup>3</sup> | 无检出 |
乳酸菌CFU/g | 2.1×10<sup>4</sup> | 6.4×10<sup>6</sup> |
注:同行数据肩标不同字母表示差异显著(P<0.05),肩标相同字母或无肩标表示差异不显著(P>0.05)。
与对照组相比,试验组全株玉米青贮品质更佳,有较弱的酸味,淡淡的芳香味,柔软松散不粘手,黄绿色。由表1可知,在青贮中添加青贮剂可消耗淀粉,提高中性洗涤纤维含量,有利于奶牛等瘤胃动物维持瘤胃的正常发酵功能。
青贮结束,开封第0和7天,检测全株玉米有氧变败的饲料品质,结果如表2所示,可知,添加青贮剂的青贮饲料在接触氧气第7天时,pH仍然很低,与对照组相比,仍有较多的乳酸和乙酸,提高了饲料品质;添加青贮剂的全株玉米青贮刚开封时未检出霉菌,在第7天时仍未超过104CFU/g。
表2青贮剂对全株玉米青贮饲料品质的影响
综上所述,添加青贮剂可有效提高全株玉米青贮的感官品质和有氧稳定性,且营养成分高。
实施例8饲用全株玉米青贮饲喂肉牛试验
选择体况相近、健康、膘情较好且个体大小一致的肉牛(西门塔尔杂交牛)120头,随机分为对照组和试验组,在试验现有肉牛颗粒饲料(基础日粮)配方基础上各试验组通过固定能量、蛋白、干物质采食量、精饲料来设计日粮配方,(根据经验和预实验结果来设计,用全株玉米青贮来替代对照组中玉米秸秆)试验组以饲喂全株玉米青贮占粗饲料的最终比例(干物质比例)来设计5个试验组A组(30%)、B组(50%)、C组(70%)、D组(90%)、E组(100%),对照组为基础日粮(如表3所示)。
表3肉牛颗粒饲料(基础日粮)配方及其配比
本试验先进行预实验2周,正式试验期10周。根据养殖场的管理规定,饲喂方式采用日喂2次的方式,即早上8:00和下午17:00各1次,按先精后粗的顺序添料,并保证饮水。试验前对牛舍进行消毒。对试验牛进行编号、分组、驱虫、健胃、适应环境等,并严格执行当地疫控部门制定的疫病防治制度及免疫接种程序。试验牛的日常管理按试验场管理规定执行。
试验期间,每日记录牛舍内温度、湿度,并观察记录各组牛只个体的身体健康情况、反刍情况及精神状态。试验预期结束后,测定并记录每头试验牛早晨空腹时的体重;试验期结束后,测定并记录每头试验牛早晨空腹时的体重;试验期间,测定并记录每次投料量和下次投料前的剩余量等(表4)。
表4不同比例全株玉米青贮对肉牛生长性能的影响
组别 | 初始体重(kg) | 日增重(kg/d) | 料重比 |
对照组 | 495.67±25.21<sup>a</sup> | 1.37±0.24<sup>a</sup> | 6.42±2.11 |
试验A组 | 502.43±20.33<sup>a</sup> | 1.35±0.15<sup>a</sup> | 6.31±1.25 |
试验B组 | 498.26±18.57<sup>a</sup> | 1.46±0.36<sup>b</sup> | 6.04±1.04 |
试验C组 | 489.88±21.68<sup>a</sup> | 1.43±0.12<sup>b</sup> | 6.29±2.03 |
试验D组 | 507.12±19.85<sup>a</sup> | 1.36±0.20<sup>a</sup> | 6.57±3.3 |
试验E组 | 500.39±23.62<sup>a</sup> | 1.21±0.32<sup>b</sup> | 6.74±1.76 |
注:同列数据肩标不同字母表示差异显著(P<0.05),肩标相同字母或无肩标表示差异不显著(P>0.05)。
从表4中可以看出,试验期间,除E组肉牛出现食欲不振,其余各组肉牛健康状况良好,无厌食情况发生。全株玉米青贮比例在50%时(B组)肉牛日增重最高,且显著高于对照组(P<0.05),料重比最低,比对照组降低0.38。全株玉米青贮可显著提高肉牛的日增重,降低料重比。
虽然,上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。
Claims (9)
1.一种含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂,其特征在于,所述青贮剂包括布氏乳杆菌、植物乳杆菌和凝结芽孢杆菌;其中,所述布氏乳杆菌已于2017年8月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC NO.14508,分类命名为Lactobacillus buchneri,所述植物乳杆菌已于2016年5月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC NO.12554,分类命名为Lactobacillus plantarum;所述凝结芽孢杆菌已于2016年5月27日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.12553,分类命名为Bacillus coagulans;
按重量百分比计,所述布氏乳杆菌、植物乳杆菌和凝结芽孢杆菌三者之间的比例为(0.1-1.0):(0.1-0.5):0.1; 所述青贮剂中布氏乳杆菌活性达1×1010-1×1011CFU/g,植物乳杆菌活性达1×1010-5×1010CFU/g,凝结芽孢杆菌活性为1×1010-3×1010CFU/g。
2.一种权利要求1所述的含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
⑴菌株扩大培养:布氏乳杆菌、植物乳杆菌和凝结芽孢杆菌分别进行一级、二级和三级
培养,最终获得它们的发酵液;
⑵活性菌泥的收集:分别将获得的布氏乳杆菌、植物乳杆菌和凝结芽孢杆菌的三级发酵液在8000-14000r/m的转速下离心20-30min,获得它们的活性菌泥;
⑶青贮剂的制备:将离心获得的三种菌的活性菌泥与保护剂按比例混合,通过真空冷冻干燥技术冻干成粉末,制得含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂。
3.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,在步骤⑴中,
所述布氏乳杆菌的发酵方法为:将甘油管保藏的布氏乳杆菌在MRS平板上划线,30℃,48h,从平板上挑取单菌落于100mL种子培养基中,30℃,180r/min震荡培养24h,获得种子液;取活菌浓度以109CFU/mL计的种子液1-5mL,接种到300mL培养基中,进行摇瓶发酵培养获得一级种子液,发酵温度25-40℃,转速为120-200r/min,发酵时间15-30h;将一级种子液转接到50L发酵罐的二级种子培养基中,进行二级发酵,得二级种子液,将二级种子液转接于5T发酵罐的三级发酵培养基中,进行三级发酵,得三级发酵液;其中二级和三级培养发酵条件如下,装液量为35-65%(v/v),接种量为0.5-4%(v/v),发酵温度为25-40℃,搅拌转速为80-150r/min,二级发酵时间为3-10h,三级发酵时间为16-30h;
所述植物乳杆菌的发酵方法为:将植物乳杆菌在MRS斜面上划线,37℃培养20h,将斜面加入2mL,0.85wt%灭菌生理盐水制成菌悬液,将菌悬液转接于300mL种子培养基中进行摇瓶发酵培养,37℃、180r/min震荡15h,制成种子液;取活菌浓度以109CFU/mL计的种子液1-5mL,接种到300mL一级种子培养基中,进行摇瓶发酵培养获得一级种子液,其中发酵温度30-45℃,转速为150-220r/m,发酵时间5-20h;将一级种子液转接于50L发酵罐的二级种子培养基中,进行二级发酵,获得二级种子液;将二级种子液转接于5T发酵罐的三级发酵培养基中,进行三级发酵,得三级发酵液;二级和三级培养发酵条件如下,装液量为40-80%(v/v),接种量为40-80%(v/v),发酵温度为30-45℃,搅拌转速100-220r/min,二级发酵时间5-20h,三级发酵时间10-25h;
所述凝结芽孢杆菌的发酵方法为:取甘油管保藏的凝结芽孢杆菌菌种,接种于300mL一级种子培养基中,进行摇瓶发酵培养,发酵温度为37-40℃、转速200r/min,发酵时间15-25h,得到活菌浓度为109 CFU/mL的一级种子液;将一级种子液转接到50L发酵罐的二级种子培养基中,接种量为2%,装液量为0.4%(v/v)、发酵温度为37-40℃、搅拌转速150 r/min,培养7-15h得到二级种子液;将二级种子液转接于500L发酵罐的三级培养基中,装液量为60%(v/v),接种量为0.6%(v/v),发酵温度为37-40℃,pH值6.8,搅拌转速150r/min,发酵时间30h,获得三级发酵液,活菌数达到6.1×1010CFU/mL。
4.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,在步骤⑴中,
所述布氏乳杆菌发酵采用的一级种子培养基按重量百分比计的具体组成为:葡萄糖0.5-2.5%,乳糖0.5-2.5%,酵母提取物0.2-2.0%,蛋白胨0.5-2.0%,硫酸镁0.01-1.0%,磷酸氢二钾0.01-0.5%,碳酸钙0.05-0.5%,氯化钠0.05-1.0%,硫酸锰0.01-0.5%,余量为水,pH6.8±0.2;
所述布氏乳杆菌发酵采用的二级和三级发酵培养基的组成相同,其按重量百分比计的具体组成为:葡萄糖0.5-3.0%,乳糖0.5-2.5%,酵母粉0.5-2.5%,胰蛋白胨0.5-2.0%,硫酸镁0.01-0.25%,磷酸氢二钾0.01-0.2%,碳酸钙0.05-0.5%,氯化钠0.1-2.0%,硫酸锰0.01-0.1%,余量为水,pH6.8±0.2。
5.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,在步骤⑴中,
所述植物乳杆菌发酵时采用的一级种子培养基按重量百分比计的具体组成为:乳糖0.5-3%,蔗糖0.5-2%,全脂奶粉01-1.%,豆粕粉0.5-2%,酵母浸粉0.5-3.%,NaH2PO4 0.1-0.7%,KH2PO4 0.1-0.7%,氯化镁0.01-0.1%,柠檬酸铁铵0.01-0.1%,MnSO4 0.01-0.1%,氯化钙0.05-1%,余量为水,pH5.8-7.2;
所述植物乳杆菌发酵时采用的二级和三级发酵培养基的组成相同,其按重量百分比计的具体组成为:蔗糖1-4%,玉米淀粉0.5-2.0%,玉米浆干粉1-3%,酵母提取物0.5-3%,磷酸氢二钾0.01-0.15%,硫酸镁0.01-0.2%,氯化钠0.1-0.5%,碳酸钙0.05-0.4%,硫酸锰0.01-0.05,余量为水,pH6.8±0.2。
6.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,在步骤⑴中,
所述凝结芽孢杆菌的一级、二级种子培养基的组成为:红糖1%-5%,大豆蛋白胨0.5%-1.5%,酵母膏0.3%-1.0%,NaCl 0.1%-0.5%,K2HPO4 0.2%-0.5%,硫酸镁0.01%-0.1%,MnSO40.05%-0.15%,余量为水,pH7.0±0.2;
所述凝结芽孢杆菌的三级发酵培养基的组成为:1-25%麸皮浸出液、1-5%淀粉、1-5%豆粕、1-5%玉米浆干粉、0.05-0.1%磷酸氢二钾、0.05-0.5%硫酸镁、0.1-2.0%氯化钠、0.01-0.05%硫酸锰、0.1-1.0%碳酸钙,余量为水,pH6.0-8.0。
7.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,在步骤⑶中,
所述的三种菌的活性菌泥与保护剂按比例混合,是将布氏乳杆菌活性菌泥、植物乳杆菌活性菌泥、凝结芽孢杆菌活性菌泥和保护剂按照(0.5-1):(0.5-1):(0.1-0.5):(1-2.5)混合。
8.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,在步骤⑶中,
所述保护剂按照重量份数计的组成为0.1-8.0份海藻糖、1-5份山梨醇、0.1-3.0份丙三醇、1-10份明胶、2-20份脱脂奶粉、0.5-2份聚乙烯吡咯酮、0.1-2.0份维生素E、0.1-2.0份维生素C、2-8份脱脂乳清粉、水20-50份;将各成分依次加入水中,边溶解边搅拌,搅拌20min后完成。
9.一种权利要求1所述的含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂在用于制备动物饲料中的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201711124247.4A CN108330080B (zh) | 2017-11-14 | 2017-11-14 | 一种含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201711124247.4A CN108330080B (zh) | 2017-11-14 | 2017-11-14 | 一种含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂及其制备方法和应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN108330080A CN108330080A (zh) | 2018-07-27 |
CN108330080B true CN108330080B (zh) | 2021-05-18 |
Family
ID=62922126
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201711124247.4A Active CN108330080B (zh) | 2017-11-14 | 2017-11-14 | 一种含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN108330080B (zh) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109666597A (zh) * | 2018-09-19 | 2019-04-23 | 润盈生物工程(上海)有限公司 | 一种发酵青贮黄贮饲料的复合微生物处理剂及其制备方法 |
CN109929771A (zh) * | 2018-11-14 | 2019-06-25 | 山东卓华生物科技有限公司 | 青贮剂及其制备方法 |
CN109609410B (zh) * | 2019-01-08 | 2021-07-30 | 天津市农业科学院 | 一种苜蓿青贮发酵剂及苜蓿青贮的制备方法 |
CN110468064A (zh) * | 2019-04-22 | 2019-11-19 | 河南中微生物科技研究院(有限合伙) | 一种苜蓿青贮剂及其制备方法 |
CN110205276A (zh) * | 2019-06-21 | 2019-09-06 | 厦门惠盈动物科技有限公司 | 一种植物乳杆菌液体发酵培养基及其培养方法和应用 |
CN114908017B (zh) * | 2022-05-31 | 2023-03-14 | 四川农业大学 | 一种植物乳杆菌及其在青贮中的应用 |
CN116376777A (zh) * | 2023-04-26 | 2023-07-04 | 甘肃普诺贝康生物科技有限责任公司 | 一种植物乳杆菌冻干粉剂及其制备方法 |
CN116790574B (zh) * | 2023-07-06 | 2024-04-30 | 中科阿尔诺(深圳)生物科技有限公司 | 一种开菲尔乳杆菌固定化菌剂、开菲尔乳杆菌冻干粉及其制备方法 |
CN117070427B (zh) * | 2023-10-13 | 2024-01-05 | 山东健源生物科技有限公司 | 一株布氏乳杆菌及其青贮饲料发酵剂 |
CN117778278B (zh) * | 2024-02-27 | 2024-05-03 | 山东中科嘉亿生物工程有限公司 | 一种复合乳酸菌青贮添加剂及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101449752B (zh) * | 2007-11-30 | 2011-04-27 | 河南农业大学 | 玉米青贮用复合微生物接种剂及其使用方法 |
NZ702681A (en) * | 2012-06-12 | 2017-03-31 | Pioneer Hi Bred Int | Yeast-containing silage inoculants for the enhancement of silage digestion and fermentation in the rumen |
CN104351588A (zh) * | 2014-11-11 | 2015-02-18 | 广西壮族自治区水牛研究所 | 用布氏乳杆菌和植物乳杆菌制备甘蔗尾青贮饲料的方法 |
CN104450566A (zh) * | 2014-11-14 | 2015-03-25 | 山西省农业科学院畜牧兽医研究所 | 一种秸秆处理微生态制剂及其制备方法 |
CN104365995B (zh) * | 2014-11-22 | 2019-03-01 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一种用于制备青贮饲料的微生物添加剂 |
CN105002155B (zh) * | 2015-05-26 | 2018-06-29 | 北京好实沃生物技术有限公司 | 一种猪用益生菌剂及其制备方法 |
CN105146231A (zh) * | 2015-06-19 | 2015-12-16 | 广州市普淳环保科技有限公司 | 一种籽粒苋饲草裹包青贮方法及籽粒苋青贮饲料 |
CN105567585A (zh) * | 2015-12-16 | 2016-05-11 | 天津市畜牧兽医研究所 | 一种青贮用复合微生物菌剂及其在全株玉米青贮中的应用 |
CN106011036B (zh) * | 2016-08-04 | 2019-05-24 | 北京好实沃生物技术有限公司 | 一株具有益生作用的凝结芽孢杆菌hew-b379及其应用 |
CN106399196B (zh) * | 2016-11-04 | 2019-07-19 | 北京好实沃生物技术有限公司 | 一株植物乳杆菌hew-a490及其应用 |
CN106720997A (zh) * | 2016-12-07 | 2017-05-31 | 滨州市科学技术情报研究所 | 一种酶解发酵协同玉米全株青贮新技术 |
CN106834167B (zh) * | 2016-12-29 | 2020-11-13 | 中国农业大学 | 一种玉米秸秆青贮用复合菌剂 |
CN107259127A (zh) * | 2017-07-12 | 2017-10-20 | 华南农业大学 | 一种黄梁木青贮饲料及其制备方法与应用 |
-
2017
- 2017-11-14 CN CN201711124247.4A patent/CN108330080B/zh active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN108330080A (zh) | 2018-07-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN108330080B (zh) | 一种含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂及其制备方法和应用 | |
CN102168045B (zh) | 一种枯草芽孢杆菌制剂及其制备方法 | |
KR102255611B1 (ko) | 복합 균주를 이용한 완전배합 발효사료의 제조방법 | |
CN102696860B (zh) | 基于醋糟和杂粕的一种高效低成本的微生物饲料蛋白 | |
CN108208335B (zh) | 一种利用微生物发酵法提高棉粕饲用营养价值的工艺 | |
CN110226671A (zh) | 一种仔猪用全价发酵饲料及其生产方法 | |
CN104212735B (zh) | 一种禽用复合益生菌制剂及其制备方法 | |
CN110679728A (zh) | 一种发酵米糠饲料的制备方法及其应用 | |
CN108013248A (zh) | 一种猪用发酵纤维饲料及其制备方法 | |
CN105475624A (zh) | 微生物发酵饲料及其生产方法与应用 | |
CN109601699A (zh) | 一种功能性微生物发酵饲料及生产方法和应用 | |
CN105918615B (zh) | 一种规模化稻麦秸秆微生物饲料的生产方法 | |
CN105028897B (zh) | 一种北虫草培养基发酵饲料及其制备方法 | |
CN107535724B (zh) | 金针菇菇脚发酵物及其用途 | |
CN108531411B (zh) | 一种发酵鸡粪的组合菌制剂 | |
CN115141780B (zh) | 一种复合微生物菌剂及其应用 | |
CN106635911A (zh) | 一种复合菌种发酵剂及青贮饲料的制备方法 | |
CN105941872A (zh) | 一种布氏乳杆菌菌剂及其制备方法和应用 | |
CN105685472A (zh) | 一种微贮添加剂、其制备方法及应用 | |
CN106173225A (zh) | 一种固态发酵植物性蛋白饲料制备蛋白饲料添加剂的方法 | |
CN106720997A (zh) | 一种酶解发酵协同玉米全株青贮新技术 | |
CN102406068B (zh) | 一种能够保护猪肠道健康的微生物发酵饲料的制备方法 | |
CN101836688B (zh) | 一种不含抗生素的微生物发酵饲料的制备方法 | |
CN105543131A (zh) | 复合菌、棉粕发酵饲料及其制备方法 | |
CN101138392B (zh) | 一种饲用微生态制剂 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |