CN106479944B - 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用 - Google Patents
一种解淀粉芽孢杆菌及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106479944B CN106479944B CN201710016591.5A CN201710016591A CN106479944B CN 106479944 B CN106479944 B CN 106479944B CN 201710016591 A CN201710016591 A CN 201710016591A CN 106479944 B CN106479944 B CN 106479944B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacillus amyloliquefaciens
- culture
- culture medium
- strain
- bacterial strain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 title claims abstract description 36
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 34
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 22
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 19
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 19
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 6
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 6
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 4
- 238000010563 solid-state fermentation Methods 0.000 claims description 4
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 claims description 3
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 claims description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 abstract description 38
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 22
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 13
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 abstract description 12
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 4
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 abstract description 4
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 abstract description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000036737 immune function Effects 0.000 abstract description 3
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 39
- 239000000047 product Substances 0.000 description 18
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 14
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 6
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 6
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 6
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 6
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 6
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 6
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 6
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 235000014590 basal diet Nutrition 0.000 description 4
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine Chemical compound NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 4
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 4
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 3
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 3
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 3
- 235000013882 gravy Nutrition 0.000 description 3
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 241000726221 Gemma Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000896292 Odontothrips loti Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- 229960003624 creatine Drugs 0.000 description 2
- 239000006046 creatine Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BTNMPGBKDVTSJY-UHFFFAOYSA-N keto-phenylpyruvic acid Chemical compound OC(=O)C(=O)CC1=CC=CC=C1 BTNMPGBKDVTSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- SPFMQWBKVUQXJV-BTVCFUMJSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;hydrate Chemical compound O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O SPFMQWBKVUQXJV-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000001903 2-oxo-3-phenylpropanoic acid Substances 0.000 description 1
- FZRCKLPSHGTOAU-UHFFFAOYSA-N 6-amino-1,4-dimethylcyclohexa-2,4-diene-1-carbaldehyde Chemical compound CC1=CC(N)C(C)(C=O)C=C1 FZRCKLPSHGTOAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 241000191070 Escherichia coli ATCC 8739 Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 244000283207 Indigofera tinctoria Species 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 1
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000607265 Vibrio vulnificus Species 0.000 description 1
- 241001354836 Vibrio vulnificus NBRC 15645 = ATCC 27562 Species 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- DEDGUGJNLNLJSR-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxycinnamic acid Natural products OC(=O)C(O)=CC1=CC=CC=C1 DEDGUGJNLNLJSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- BKHZIBWEHPHYAI-UHFFFAOYSA-N chloroform;3-methylbutan-1-ol Chemical compound ClC(Cl)Cl.CC(C)CCO BKHZIBWEHPHYAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L congo red Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=CC2=C(N)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3)C3=CC=C(C=C3)/N=N/C3=C(C4=CC=CC=C4C(=C3)S([O-])(=O)=O)N)=CC(S([O-])(=O)=O)=C21 IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- DMBHHRLKUKUOEG-UHFFFAOYSA-N diphenylamine Chemical class C=1C=CC=CC=1NC1=CC=CC=C1 DMBHHRLKUKUOEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 1
- SYUXAJSOZXEFPP-UHFFFAOYSA-N glutin Natural products COc1c(O)cc2OC(=CC(=O)c2c1O)c3ccccc3OC4OC(CO)C(O)C(O)C4O SYUXAJSOZXEFPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 230000015784 hyperosmotic salinity response Effects 0.000 description 1
- 238000009654 indole test Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 239000010985 leather Substances 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- LCCNCVORNKJIRZ-UHFFFAOYSA-N parathion Chemical compound CCOP(=S)(OCC)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 LCCNCVORNKJIRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229910052573 porcelain Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 description 1
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 1
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 238000009938 salting Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 235000010334 sodium propionate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004324 sodium propionate Substances 0.000 description 1
- JXKPEJDQGNYQSM-UHFFFAOYSA-M sodium propionate Chemical compound [Na+].CCC([O-])=O JXKPEJDQGNYQSM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960003212 sodium propionate Drugs 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)SC008，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：60084。本发明还公开了上述菌株SC008在饲料中的应用。本发明公开的解淀粉芽孢杆菌SC008可用于调节动物肠内微生态平衡，具有增强非特异性免疫功能来预防疾病的作用，同时还可以提供消化酶和营养因子，促进营养物的消化吸收、促进动物生长和提高饲料转化率。
Description
技术领域
本发明属于添加剂技术领域，具体地涉及了一种解淀粉芽孢杆菌分离鉴定及在饲料中的应用。
背景技术
随着人口的增长，粮食危机进一步加剧，人畜争粮愈演愈烈。据美国世界观察研究所统计资料表明，如果全世界畜牧业饲料用量减少10％，就能维持全球人口生活26个月。近年来，畜牧业环境污染问题日益严重，环保压力越来越大。饲料中N、P等对土壤、水体和大气造成极大的危害。上述现象产生的最直接的原因在于：饲料消化利用率低。目前，业内提高饲料消化利用率的方法主要是在饲料中添加一种或多种酶制剂来提高饲料营养物质的消化利用率，然而酶制剂的稳定性是制约饲用酶制剂产品的关键问题，尤其是在饲料加工制粒过程中的高温、高压和高湿环境导致酶活损失最大，其次是在动物体内被胃酸和胰蛋白酶等分解失活。
益生菌是指能够在动物肠道内定植并且繁殖，对机体本身没有毒副作用的一类细菌。其定植在动物肠道内，产生多种抑菌物质，抑制病原菌的生长，并且在其繁殖代谢过程中，分泌多种消化酶类，促进动物对饲料的吸收利用，降低料肉比，提高动物生产性能。益生菌在畜牧业饲料上的应用受到广泛的关注和研究。
发明内容
本发明公开了一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)SC008，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：60084。
本发明还公开了上述解淀粉芽孢杆菌SC008在抑菌中的应用。
本发明还公开了上述解淀粉芽孢杆菌SC008在提高动物免疫蛋白中的应用
本发明还公开了上述解淀粉芽孢杆菌SC008在制备饲料添加剂中的应用。
本发明还公开了利用权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌SC008制备的固体发酵产品。
所述固体发酵产品的制备方法，具体为：将解淀粉芽孢杆菌SC008菌种按5％的接种量接种到高密度固态发酵培养基中，于30～40℃的条件下密闭发酵72小时，再将发酵产物于50℃烘干即可；所述高密度固态发酵培养基的配方以重量计为：为玉米粉49.8％，玉米蛋白粉6.2％，豆粕6.2％，葡萄糖0.3％和水37.5％。
本发明还公开了含有上述固体发酵产品的饲料添加剂。
本发明还公开了上述固体发酵产品在制备饲料添加剂中的应用。
本发明公开的解淀粉芽孢杆菌SC008可用于调节动物肠内微生态平衡，具有增强非特异性免疫功能来预防疾病的作用，同时还可以提供消化酶和营养因子，促进营养物的消化吸收、促进动物生长和提高饲料转化率。
保藏信息
本发明提供的一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)SC008，于2016年9月28日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏编号为GDMCC No：60084。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1：解淀粉芽孢杆菌的分离、筛选、鉴定及保存
1、目标菌株的获得
收集广东省清远市尖峰岭附近富含有机质的土壤，将样品过筛，除去石砾，草等杂物后，取1克样品于99ml无菌生理盐水中稀释到10-3～10-7，梯度稀释后涂布至筛选培养基，37℃培养至长出单菌落。刚果红染色并NaCl洗涤后观察，挑取透明圈与菌落直径比较大的菌落接种至添加20g/L葡萄糖的无琼脂筛选培养基中，培养24h后测酶活，选取酶活较高的菌株。在脱脂奶琼脂平板中就表现出较强的蛋白酶活性，且经过6次传代试验，其产生的蛋白酶活性基本保持稳定，同时，菌株代谢产生的纤维素酶，包括(羟甲基纤维素酶)CM-Case和(β-葡萄糖苷酶)β-Gase活力也较强。继续培养得到外观一致的菌株。将得到的外观一致的菌株再进行抑菌试验，采用牛津杯法，将指示菌株分别涂布于MRS琼脂平板上，每杯加入0.4mL培养24小时的菌株，恒温37℃培养箱中培养，观察培养结果，测定平皿内抑菌圈直径大小，指示菌株分别为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌。结果表明：该筛选的菌株能够明显抑制上诉3种指示菌株。
2、菌株形态学特征鉴定
取纯化菌株(命名为SC008)的单菌落，转接到营养琼脂平板上，于37℃恒温培养箱中培养24h、36h和48h，分别观察其菌落的大小、颜色、边缘、凸起、光滑度、粘性、透明度等特点。结果显示，菌株SC008在营养琼脂平板上形成边缘不整齐，表面干燥不透明的菌落。在显微镜下观察为杆状。
挑取幼龄((18-24h))培养的菌落涂抹固定后，直接用结晶紫染液染色，在显微镜下用油镜观察芽孢的形态，芽孢为椭圆形，中生或偏端生。
3、菌株的生理生化特征
3.1革兰氏染色
挑取幼龄(18-24h)培养的菌落分别涂片，自然风干后再火焰上固定。再进行革兰氏染色实验：初染(结晶紫)——媒染(碘液)——脱色(95％酒精)——复染(沙黄)。光学显微镜下，用油镜观察菌体颜色，结果显示SC008为革兰氏阳性菌。
3.2、接触酶实验
将24小时培养的斜面菌种，用接种环挑取一小环涂抹于已滴有3％过氧化氢的玻片上，结果显示：有气泡产生，为阳性。
3.3、氧化酶实验
在干净的培养皿里放置一张滤纸，滴上二甲苯对苯撑二胺的1％水溶液，仅使滤纸湿润即可，不可过湿。用灭菌玻棒取18-34小时的菌苔，涂抹在湿润的滤纸上，在10秒内涂抹的菌苔现红色者为阳性，10-60秒现红色者为延迟反应，60秒以上现红色者不计，按阴性处理。结果显示为阴性。
3.4、厌氧生长试验
接种营养肉汁固体培养基置于厌氧培养箱中适温培养，结果显示为阳性。
3.5、V-P测定
1)V-P测定用培养基；
2)试剂：为40％NaOH，肌酸；
3)培养与接种：接种试验菌于以上的培养液中，每次二个重复，置适温培养2、6天(如为阴性可适当延长培养时间)。
4)操作与观察：取培养液和40％NaOH等量相混，加少许肌酸，10min如培养液出现红色，即为试验阳性反应。
5)结果：显示为阳性。
3.6、硝酸盐还原试验
1)培养基：在肉汁胨培养基中加入0.1％硝酸钾，pH为7.0-7.6，每管分装4-5毫升，121℃灭菌15分钟。
2)试剂：格里斯氏(Griess)试剂、二苯胺试剂
3)接种：将测定菌种接种于硝酸盐液体培养基中，适温培养1,3,5天，每管做两个重复，另留两管不接种作为空白对照。
4)操作：取两支干净的空试管或在比色瓷盘小窝口中倒入少许培养1,3,5天的培养物，再各加一滴A液及B液，在对照管中同样加入A液和B液一滴。5)结果观察：当培养基中滴入A,B液后，溶液如变为红色、玫瑰红色、橙色、棕色等表示亚硝酸盐存在，为硝酸盐还原阳性。
6)结果：显示为阳性
根据以上形态特征及生理生化试验结果，查《柏杰细菌鉴定手册》第九版及《常见细菌系统鉴定手册》可知，菌株SC008属于Bacillus(芽孢杆菌属)，根据此菌种的生理生化特性，进行试验以鉴定到种。
3.7、淀粉水解实验
1)培养基：在肉汁胨中加0.2％可溶性淀粉，分装三角瓶，121℃蒸汽灭菌20分钟，倒平板备用。
2)试剂：卢哥氏碘液(与革兰氏染液中的碘液相同)。
3)接种：取新鲜斜面培养物点种于上述平板，置30℃恒温箱培养72小时。
4)观察：在平板上滴加碘液呈蓝黑色，菌落周围如有不变色透明圈，表示淀粉水解阳性；仍是蓝黑色为阴性。
5)结果：显示为阳性
3.7、明胶液化试验
1)培养基：明胶蛋白胨培养基
2)接种：取18-24小时的培养物穿刺接种，并有两管未接种的空白对照。
3)结果观察：于20℃温箱中培养2,7天。在20℃以下的室温观察的生长情况和明胶是否液化。
4)结果：显示为阳性
3.9、糖、醇类发酵试验
1)培养基：配制休和利夫二氏(半固体)培养物，加入1％的糖类，分装试管，灭菌备用。
2)接种与观察：以幼龄斜面培养物穿刺接种于上述培养基中，37℃恒温箱培养72小时后观察。如指示剂变黄，表示产酸，为阳性；不变或变蓝(紫)则为阴性。
3)结果如表1所示：
表1.菌株SC008生化鉴定结果
| 菌株名称 | SC008 |
| D-葡萄糖 | + |
| L-阿拉伯糖 | + |
| D-甘露醇 | + |
| D-木糖 | + |
| 葡萄糖产气 | - |
| 运动 | + |
(“+”表示为阳性反应，“-”表示为阴性反应)
3.10、苯丙氨酸脱氨酶试验
1)培养基：苯丙氨酸脱氨酶培养基
2)试剂：10％(W/V)的FeCl3溶液。
3)接种与培养：适当的浓度接种，37℃培养20小时测定。
4)结果观察：将试剂4滴滴到生长菌的斜面上，当斜面上和冷凝水中产生绿色时为阳性反应，即表明已形成了苯丙酮酸，不变则为阴性。结果显示为阴性。
3.11、耐盐性
1)培养基：营养琼脂加不同的浓度的NaCl(2％、5％、7％、10％)。
2)接种与观察：取幼龄菌种液接种到培养物3和7天，与未接种的对照管对比，目测生长情况。
3)结果如表2所示：
表2.对不同浓度NaCl溶液的生长情况
| 菌株名称 | 2％NaCl | 5％NaCl | 7％NaCl | 10％NaCl |
| SC008 | + | + | + | + |
(“+”表示为阳性反应，“-”表示为阴性反应)
3.12、柠檬酸盐利用
1)培养基：柠檬酸盐培养基(适用于芽孢菌)
2)接种与观察：在斜面上划线接种，适温培养3～7天。培养基为碱性(指示剂桃红色)者为阳性，否则为阴性。
3)结果：显示为阴性
3.13、生长pH试验
1)培养基：pH6.8营养肉汤、pH 5.7营养肉汤
2)结果如表3所示：
表3.两种pH值下的生长情况
| 菌株名称 | pH6.8营养肉汤 | pH 5.7营养肉汤 |
| SC008 | + | + |
(“+”表示为阳性反应，“-”表示为阴性反应)
3.14、生长温度
1)：方法：将幼龄培养物接种至营养琼脂培养基上置30℃、40℃、45℃、50℃和60℃条件下培养观察。
2)结果如表4所示：
表4.不同温度条件下的生长情况
| 菌株名称 | 30℃ | 40℃ | 45℃ | 50℃ | 60℃ |
| SC008 | + | + | + | + | - |
(“+”表示为阳性反应，“-”表示为阴性反应)
3.15、卵磷脂酶试验
1)培养基:无菌条件下取卵黄加等量的生理盐水，摇匀后，取10ml上述悬液加入到融化的约(50～55℃)的200ml肉汁胨琼脂中，混合均匀后倒入培养皿内。制成的卵黄平板过夜后即可使用。
2)步骤：取18～24小时的斜面或培养液中的菌体点种在上述平板上，点的直径约为2～3mm。适温培养18～24小时观察。如菌落四周和下面有不透明的区出现，表示卵磷脂分解生成脂肪，说明有卵磷脂酶。
3)结果：显示为阴性
3.16、吲哚试验
1)培养基：1％胰胨水溶液，调pH7.2～7.6，分装1/3试管，115℃蒸汽灭菌30分钟。
2)接种：把新鲜的菌种接种于上述培养基中，于适温培养。
3)试剂：对二甲基氨基苯甲醛试剂
4)测定：培养1,2,4,7天的培养液，沿管壁缓缓加入3～5mm高的试剂于培养液表面，在液层界面发生红色即为阳性反应(若颜色不明显可加入4～5滴的乙醚摇匀后观察)。
5)结果：显示为阴性
3.17、酪素水解试验
1)培养基：牛奶培养基
2)方法：将菌种点接在平板上，适温培养1,3,5天，记录菌落周围和下面酪素是否已被分解而呈透明。
3)结果：显示为阳性
3.18、酪氨酸水解
1)培养基：酪氨酸培养基
2)方法：将测试菌种接种于平皿上，培养7～14天，记录酪氨酸结晶是否被水解而变透明。
3)结果：显示为阴性
3.19、脲酶试验
1)培养基：尿素生化管
2)接种与观察：以幼龄斜面培养物接种于上述培养基中，30℃恒温箱培养24小时。培养基变为红色则脲酶阳性，不变色则为脲酶阴性。
3)结果：显示为阳性
3.20、丙酸盐利用
1)培养基：丙酸钠培养基
2)接种与观察：用幼龄菌种接种，适温培养1～2天，培养基由绿变蓝者为阳性，培养基不变色者为阴性。
3)结果：显示为阴性
4、菌株的分子生物学鉴定
4.1、16S rDNA测序
1)试剂与培养基的配制
TE、DNA抽提Buffer、20％SDS、氯仿：异戊醇(24:1)、70％乙醇、营养琼脂培养基。
2)分离纯培养物
在营养琼脂培养基上培养，分离纯化单菌落。
3)DNA的提取
将纯培养物接种于5ml新鲜配制的灭菌培养基，30℃恒温摇床培养1天。培养物全部转至10ml离心管中，6000r/min，室温离心5min收集菌体。弃上清，离心管倒置于干净的吸水纸上晾干残余的液体，加入2.7mlDNA抽提Buffer，充分悬浮菌体后，加入20μl10mg/ml的蛋白酶K，混匀，置恒温水浴摇床水平震荡，225r/min，37℃，30min。加入0.3ml 120％SDS，轻轻颠倒几次混匀，置恒温水浴箱静置，65℃温浴2小时。期间每隔15～20min上下颠倒几次混匀直至裂解完全后，于室温离心10min，6000r/min。将上清转至新的离心管中，加入等体积的氯仿-异戊醇(24:1)抽提10min。6000r/min，室温离心10min。重复上述3个步骤两到三次。将上清转至新的离心管中，加入0.6倍体积的异丙醇，混匀，室温静置1小时后于14000r/min，室温离心20min收集粗DNA。沉淀的粗DNA用70％冰乙醇轻轻涮洗，弃涮洗液后置于干净工作台晾干。加入100～200μl无菌超纯水(或TE)溶解DNA后，转至灭菌的1.5ml离心管中，-20℃保存备用。
4)DNA纯度和浓度检测
采用核酸/蛋白分析仪于Nucleic Acid程序下测定：用双蒸水在260,280nm两个波长下校零。取1μlDNA样品，加水至100μl，混匀。在260,280nm两个波长分别读出样品的吸光值为OD260＝0.5928，OD280＝0.3401，OD260/OD280＝1.74；由此计算核酸浓度[C]＝OD260*50*稀释倍数＝0.5928*50*100＝2964ng/μl。
5)PCR扩增
表5.PCR反应体系：(每50μl反应体积所含组分如下)：
| 成分 | 终浓度 | 实际用量(μl) |
| 浓缩反应缓冲液(10*Buffer) | 1*工作浓度 | 5 |
| dNTP混合物(10mmol) | 各0.2mmol/l | 1 |
| Taq DNA聚合酶(2.5μ/μl) | 0.5～1.0U/50μl | 0.5 |
| 氯化镁(MgCl2)(25mmol) | 1.5mmol/l | 5 |
| 上游引物(10μmol/μl) | 1μmol/l | 1 |
| 下游引物(10μmol/μl) | 1μmol/l | 1 |
| 模板(-) | 102～105拷贝/50μl | 1 |
| 无菌水 | 将反应体积补足至50μl | 35.5 |
设空白对照：空白对照中应含有除模板核酸外的所有组分。(引物为F27及R1492)
PCR反应程序：
6)凝胶电泳检测：
制备一块0.8％的琼脂糖凝胶(GoldviewDNA染料5μl/100ml)，取扩增产物5μl与1μl Loading Buffer混合，点样，5V/cm电泳45min，于UVI凝胶成像系统分析结果。
扩增产物测序：扩增产物送至上海英骏生物技术有限公司进行测序。结果见基因序列表：
7)Genbank对比：
将得到的基因序列表通过因特网在Genbank等国际核酸序列数据库内进行同源序列搜索(blastsearch)，找出该菌株与数据库中同源性最高的模式菌株或保藏于ATCC或DSM等国际菌种保藏中心的菌株。对比结果显示：菌株SC008与枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)及解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)具有最高同源性均达100％。
4.2、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)及解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)的区分：
1)选择特异性引物Bsu(Bsu-man-IF和Bsu-man-IR)\Bam(Bam-man-IF和Bam-man-IR)对目标菌进行PCR扩增。结果判别如下：
Bsu：为枯草芽孢杆菌特异引物，如能扩增出长约1300bp的但一条带，则目的菌为枯草芽孢杆菌
Bam：为解淀粉芽孢杆菌特异引物，如能扩增出长约1300bp的单一条带，则目的菌为解淀粉芽孢杆菌
2)PCR扩增：
表6.PCR反应体系：(每50μl反应体积所含组分如下)：
| 成分 | 实际用量(μl) |
| 10*Taq DNA聚合酶Buffer | 5 |
| 10pmol/μldNTP混合物 | 1 |
| 2.5U/μl Taq DNA聚合物 | 0.5 |
| 上游引物 | 1 |
| 下游引物 | 1 |
| DNA模板 | 1 |
| 无菌水(将反应体积补足至50μl) | 40.5 |
设置空白对照：空白对照中应含有除模板核酸外的所有组分。
3)PCR反应程序：
Bsu：94℃5min；94℃30s，55℃30s，72℃1min30s；35个循环；72℃10min Bam：94℃5min；94℃30s，58℃30s，72℃1min30s；35个循环；72℃10min
4)凝胶电泳检测：
制备一块0.8％的琼脂糖凝胶(含Goldview DNA染料5μl/100ml)，取扩增产物5μl与1μl Loading Buffer混合，点样，5V/cm电泳45min，于UVI凝胶成像系统分析结果，结果显示：菌株SC008用特异性引物Bsu未能扩增出相应大小的单一条带，而用特异性引物Bam能扩增出长约1300bp的单一条带，因此，菌株SC008为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)。
实施例2：菌株的功能筛选
1、耐酸性试验
将菌株SC008保藏斜面接种于装10mL PY液体培养基的试管中,37℃静置培养24小时,按10％接种量分别接种于10mL pH 2.0、3.0和4.0的人工胃液中,0小时计数作对照,2小时和6小时取样用磷酸缓冲液按10倍系列稀释,进行平板活菌计数,计算存活率。
表7.3种pH条件下分别培养2小时和6小时后的情况
2、耐胆盐试验
将菌株SC008接种装有10mL BPY液体培养基的试管中,37℃静置培养24小时,按10％接种量分别接种于10mL 0.03％、0.1％、0.2％和0.3％不同浓度的猪胆盐溶液中,0小时计数作对照,2小时和6小时取样用生理盐水按10倍系列稀释计数,进行平板活菌计数,并计算存活率。
表8.不同胆盐浓度下菌株的生长情况
备注：活菌数：(108cfu/ml)；存活率(％)
3、抑菌试验
试验菌株选取分离自肉鸡养殖场附近土壤、仔猪肠道中段及市售同类产品等来源的解淀粉芽孢杆菌，指示菌株选取大肠杆菌(Escherichia coliATCC8739)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC 6538)、伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi CMCC(B)50071)和创伤弧菌(Vibrio vulnificus ATCC27562)。采用牛津杯法，将指示菌株分别涂布于MRS琼脂平板上，每杯加入0.4mL培养24小时的解淀粉芽孢杆菌培养液，恒温37℃培养箱中培养，观察培养结果，测定平皿内抑菌圈直径大小，试验结果见表9。
表9.菌株SC008抑菌试验对比结果
注：试验设3个重复，取值为平均值。
由试验结果可知，各菌株对致病菌均有良好的抑制作用，其中菌株SC008对致病菌的抑制作用强于其他同类菌株。
实施例3：菌株SC008固体发酵产品的制备方法
1)菌种及其种子液制备
解淀粉芽孢杆菌菌株在YPD琼脂平板活化，挑取单克隆接种于YPD液体培养基中，37℃培养24小时。
YPD培养基主要成分
固体：酵母粉1％，蛋白胨2％，葡萄糖2％，琼脂粉2％
液体：酵母粉1％，蛋白胨2％，葡萄糖2％
2)接种
以5％的接种量将制备的液体种子接种到配置的固体培养基。
固体培养基配方为：玉米粉49.8％，玉米蛋白粉6.2％，豆粕6.2％，葡萄糖0.3％和水37.5％。
3)发酵
将接好菌种的培养基在30～40℃发酵72h。然后将发酵产物在50℃下烘干，即得固体发酵产品。
取上述固体发酵产品，梯度稀释，涂布YPD培养基，培养24小时后，计算菌落数，实验结果活菌数为：5.0*1010cfu/g。
实施例4：菌株SC008固体发酵产品对保育猪生产性能及成活率的影响
1、试验动物与分组
选取28日龄断奶的仔猪600头，平均分为三组，每组200头。试验设预饲期7天，正式试验为期45天，直至饲喂断奶仔猪至80日龄结束试验。试验从2016年2月20日开始至2016年4月12日结束。
2、试验设计
对照组：饲喂基础日粮；
试验组1：基础日粮添加0.1％市售同类产品；
试验组2：基础日粮添加0.1％菌株SC008固体发酵产品
3、结果与分析
3.1菌株SC008固体发酵产品对保育猪生长性能的影响见表10
表10.菌株SC008固体发酵产品对保育猪生产水平的影响
由表10可知：对照组的初始均重为9.26kg，末均重为23.56kg，日均增重317.68g；试验组1初始均重为9.18kg，末均重为23.77kg，日增重324.22g。试验组2初始均重为9.10kg，末均重为26.13kg，日增重378.40g。试验组2日增重比对照组和试验组1分别多60.72g和54.18g；在整个试验期间每头净增重比对照组和试验组1分别多2.73kg和2.44kg；料肉比：试验组2、试验组1和对照组分别为1.73、1.84和1.86，分别低于对照组和试验组1为0.13和0.11，试验组2料肉比下降明显。
3.2菌株SC008固体发酵产品对保育猪成活率的影响
表11.菌株SC008固体发酵产品对保育猪成活率的影响
| 组别 | 试验初头数 | 试验末头数 | 成活率(％) |
| 对照组 | 200 | 187 | 93.50 |
| 试验组1 | 200 | 190 | 95.00 |
| 试验组2 | 200 | 196 | 98.00 |
保育猪育成活率情况如表11所示，各试验组均选取200头断奶仔猪，试验期间试验组2、试验组1和对照组分别死亡了4头、10头和13头；成活率分别为98.00％、95.00％和93.5％。试验组2比对照组和试验组1成活率明显提高。
4、效果讨论与说明
本试验表明试验组2每头保育猪较基础日粮对照组平均体重提高了2.73kg，平均日增重提高了60.72g，死亡淘汰率降低了4.50％，料肉比降低了0.13。试验证明，菌株SC008固体发酵产品能够有效的提高保育猪的生产性能，且显著优于对比的市售同类产品。另外菌株SC008能明显提高断奶仔猪的免疫水平和抗病能力，可减少抗生素及其他药物的使用。
综上所述，本发明解淀粉芽孢杆菌可用于调节动物肠内微生态平衡，具有增强非特异性免疫功能来预防疾病的作用，同时还可以提供消化酶和营养因子，促进营养物的消化吸收、促进动物生长和提高饲料转化率。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 深圳市善成生物技术有限公司
<120> 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用
<130>
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1428
<212> DNA
<213> Bacillus amyloliquefaciens
<400> 1
ttcggcggct ggctccataa aggttacctc accgacttcg ggtgttacaa actctcgtgg 60
tgtgacgggc ggtgtgtaca aggcccggga acgtattcac cgcggcatgc tgatccgcga 120
ttactagcga ttccagcttc acgcagtcga gttgcagact gcgatccgaa ctgagaacag 180
atttgtggga ttggcttaac ctcgcggttt cgctgccctt tgttctgtcc attgtagcac 240
gtgtgtagcc caggtcataa ggggcatgat gatttgacgt catccccacc ttcctccggt 300
ttgtcaccgg cagtcacctt agagtgccca actgaatgct ggcaactaag atcaagggtt 360
gcgctcgttg cgggacttaa cccaacatct cacgacacga gctgacgaca accatgcacc 420
acctgtcact ctgcccccga aggggacgtc ctatctctag gattgtcaga ggatgtcaag 480
acctggtaag gttcttcgcg ttgcttcgaa ttaaaccaca tgctccaccg cttgtgcggg 540
cccccgtcaa ttcctttgag tttcagtctt gcgaccgtac tccccaggcg gagtgcttaa 600
tgcgttagct gcagcactaa ggggcggaaa ccccctaaca cttagcactc atcgtttacg 660
gcgtggacta ccagggtatc taatcctgtt cgctccccac gctttcgctc ctcagcgtca 720
gttacagacc agagagtcgc cttcgccact ggtgttcctc cacatctcta cgcatttcac 780
cgctacacgt ggaattccac tctcctcttc tgcactcaag ttccccagtt tccaatgacc 840
ctccccggtt gagccggggg ctttcacatc agacttaaga aaccgcctgc gagcccttta 900
cgcccaataa ttccggacaa cgcttgccac ctacgtatta ccgcggctgc tggcacgtag 960
ttagccgtgg ctttctggtt aggtaccgtc aaggtgccgc cctatttgaa cggcacttgt1020
tcttccctaa caacagagct ttacgatccg aaaaccttca tcactcacgc ggcgttgctc1080
cgtcagactt tcgtccattg cggaagattc cctactgctg cctcccgtag gagtctgggc1140
cgtgtctcag tcccagtgtg gccgatcacc ctctcaggtc ggctacgcat cgtcgccttg1200
gtgagccgtt acctcaccaa ctagctaatg cgccgcgggt ccatctgtaa gtggtagccg1260
aagccacctt ttatgtctga accatgcggt tcaaacaacc atccggtatt agccccggtt1320
tcccggagtt atcccagtct tacaggcagg ttacccacgt gttactcacc cgtccgccgc1380
taacatcagg gagcaagctc ccatctgtcc gctcgactgc atgtatag 1428
Claims (6)
1.一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)SC008，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：60084。
2.权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌SC008在制备饲料添加剂中的应用。
3.利用权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌SC008制备的固体发酵产品。
4.权利要求3所述固体发酵产品的制备方法，其特征在于：将解淀粉芽孢杆菌SC008菌种按5％的接种量接种到高密度固态发酵培养基中，于30～40℃的条件下密闭发酵72小时，再将发酵产物于50℃烘干即可；所述高密度固态发酵培养基的配方以重量计为：为玉米粉49.8％，玉米蛋白粉6.2％，豆粕6.2％，葡萄糖0.3％和水37.5％。
5.含有权利要求4所述固体发酵产品的饲料添加剂。
6.权利要求4所述固体发酵产品在制备饲料添加剂中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710016591.5A CN106479944B (zh) | 2017-01-10 | 2017-01-10 | 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710016591.5A CN106479944B (zh) | 2017-01-10 | 2017-01-10 | 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106479944A CN106479944A (zh) | 2017-03-08 |
| CN106479944B true CN106479944B (zh) | 2018-08-10 |
Family
ID=58285334
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710016591.5A Active CN106479944B (zh) | 2017-01-10 | 2017-01-10 | 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106479944B (zh) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108017447A (zh) * | 2017-12-11 | 2018-05-11 | 河南邑鸿善成生物技术有限公司 | 制备解淀粉芽孢杆菌发酵肥料的方法及其肥料的应用 |
| CN108004181B (zh) * | 2017-12-29 | 2021-05-04 | 潘韵 | 一株甲基营养型芽孢杆菌及其培养物和应用 |
| CN111004741B (zh) * | 2019-12-10 | 2021-11-16 | 枣庄市杰诺生物酶有限公司 | 一株深海来源的弯曲芽孢杆菌r29-2、微生态制剂及其应用 |
| CN112625972A (zh) * | 2021-01-05 | 2021-04-09 | 深圳市善成生物技术有限公司 | 一株解淀粉芽孢杆菌及其发酵产品和应用 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102719383A (zh) * | 2012-06-29 | 2012-10-10 | 武汉工业学院 | 一种解淀粉芽孢杆菌及其菌剂和应用 |
| CN103451117A (zh) * | 2012-06-04 | 2013-12-18 | 华中农业大学 | 一种防治土壤环境病原菌的芽胞杆菌制剂及制备方法和应用 |
| CN103589655A (zh) * | 2013-05-20 | 2014-02-19 | 山西农业大学 | 解淀粉芽孢杆菌hrh317及其抑菌物质的制备方法 |
| CN103966118A (zh) * | 2013-12-20 | 2014-08-06 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 | 解淀粉芽孢杆菌及其应用 |
| CN104830711A (zh) * | 2015-03-09 | 2015-08-12 | 浙江农林大学 | 一种解淀粉芽孢杆菌饲料添加剂的固体发酵工艺 |
| CN105219669A (zh) * | 2015-11-20 | 2016-01-06 | 华中农业大学 | 具有抗氧化能力、促进肉鸡生长发育的解淀粉芽胞杆菌tl |
| CN105567598A (zh) * | 2016-01-15 | 2016-05-11 | 西北农林科技大学 | 一种藏猪源解淀粉芽孢杆菌及其应用 |
-
2017
- 2017-01-10 CN CN201710016591.5A patent/CN106479944B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103451117A (zh) * | 2012-06-04 | 2013-12-18 | 华中农业大学 | 一种防治土壤环境病原菌的芽胞杆菌制剂及制备方法和应用 |
| CN102719383A (zh) * | 2012-06-29 | 2012-10-10 | 武汉工业学院 | 一种解淀粉芽孢杆菌及其菌剂和应用 |
| CN103589655A (zh) * | 2013-05-20 | 2014-02-19 | 山西农业大学 | 解淀粉芽孢杆菌hrh317及其抑菌物质的制备方法 |
| CN103966118A (zh) * | 2013-12-20 | 2014-08-06 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 | 解淀粉芽孢杆菌及其应用 |
| CN104830711A (zh) * | 2015-03-09 | 2015-08-12 | 浙江农林大学 | 一种解淀粉芽孢杆菌饲料添加剂的固体发酵工艺 |
| CN105219669A (zh) * | 2015-11-20 | 2016-01-06 | 华中农业大学 | 具有抗氧化能力、促进肉鸡生长发育的解淀粉芽胞杆菌tl |
| CN105567598A (zh) * | 2016-01-15 | 2016-05-11 | 西北农林科技大学 | 一种藏猪源解淀粉芽孢杆菌及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 解淀粉芽孢杆菌在畜禽养殖中的应用研究进展;栾素军等;《中国畜牧兽医》;20161231;第43卷(第10期);第2615-2620页，尤其是正文第2616页右栏至2617页左栏 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106479944A (zh) | 2017-03-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106011036B (zh) | 一株具有益生作用的凝结芽孢杆菌hew-b379及其应用 | |
| CN106479924B (zh) | 一种丁酸梭菌和丁酸梭菌活菌制剂的制备及应用 | |
| CN102876614B (zh) | 一株地衣芽孢杆菌及其应用 | |
| CN102226157B (zh) | 一株发酵乳杆菌及其应用 | |
| CN112574924B (zh) | 一种枯草芽孢杆菌菌株及其微生态制剂和应用 | |
| CN105062933A (zh) | 一种罗伊氏乳杆菌及其应用 | |
| CN102517238B (zh) | 一株产酸蜡样芽孢杆菌及其应用 | |
| CN106479944B (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用 | |
| CN104651268A (zh) | 一种植物乳杆菌及其应用 | |
| CN101463329A (zh) | 一种酿酒酵母、含有该酵母的酵母制剂、饲料、其制备方法及其用途 | |
| CN103525718B (zh) | 一种蜡状芽孢杆菌及其益生菌粉及该菌粉的制备和用途 | |
| CN104106726A (zh) | 一种新的益生菌及用其制备的益生菌发酵饲料 | |
| CN101392223A (zh) | 一种微生物饲料添加剂菌种的选育方法 | |
| CN111534459B (zh) | 一株高产淀粉酶的发酵乳杆菌及其在制备发酵饲料中的应用 | |
| CN102321552B (zh) | 一株饲用丁酸梭菌及其应用 | |
| CN111718881B (zh) | 一种暹罗芽孢杆菌及其应用 | |
| CN108094794A (zh) | 一种解酒护肝的复合微生物饮品及其制备方法 | |
| CN108587957A (zh) | 一株高产复合酶的益生地衣芽孢杆菌的筛选及应用 | |
| CN111808765B (zh) | 一株高效降解呕吐毒素的枯草芽孢杆菌及其应用 | |
| CN113549574A (zh) | 一种凝结芽孢杆菌及其应用 | |
| CN115710566B (zh) | 一种用于稻田综合种养的菌株及其应用 | |
| CN110804571B (zh) | 一种复合乳酸菌制剂及在制备成饲料添加剂中的应用 | |
| CN109609393A (zh) | 一种饲用异常威克汉姆酵母及其应用 | |
| CN112625974B (zh) | 侧孢短芽孢杆菌bl11、其发酵液及制备方法和应用 | |
| CN104872379B (zh) | 一种在玉米-豆粕型日粮中添加鱼溶浆的发酵物及其发酵方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Li Liling Inventor after: Li Kun Inventor after: Zheng Wenguan Inventor after: Pan Yun Inventor after: Li Yongxin Inventor before: Li Kun Inventor before: Zheng Wenguan Inventor before: Pan Yun Inventor before: Li Yongxin |
|
| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20180629 Address after: 516000 room 410-214, District 4, East Lake garden, Huicheng District, Huizhou, Guangdong. Applicant after: Pan Yun Address before: 518000 D76, Nanshan District, Xinghai Road, Xinghai Avenue, Shenzhen, Guangdong. Applicant before: SHENZHEN SHANCHENG BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. |
|
| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20240326 Address after: 810000, Zone C, Entrepreneurship Park, No. 9 Guinan Road, Dongchuan Industrial Park, Xining City, Qinghai Province Patentee after: QINGHAI LANHU SHANCHENG BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Country or region after: China Address before: 516000 room 410-214, District 4, East Lake garden, Huicheng District, Huizhou, Guangdong. Patentee before: Pan Yun Country or region before: China |
|
| TR01 | Transfer of patent right |