CN106360614A - 一种利用美味牛肝菌深层发酵菌丝体制备美味牛肝菌精粉的方法 - Google Patents

一种利用美味牛肝菌深层发酵菌丝体制备美味牛肝菌精粉的方法 Download PDF

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张伟伟
李秉业
李洪久
刘杨
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Abstract

本发明涉及本发明涉及一种利用美味牛肝菌深层发酵菌丝体制备美味牛肝菌精粉的方法,步骤如下:⑴深层发酵菌丝体;⑵菌丝体破碎;⑶酶解;⑷浓缩;⑸喷雾干燥,即得美味牛肝菌精粉。本方法利用深层发酵技术培养菌丝体,克服了美味牛肝菌不能完全人工栽培而限制其应用的缺点,并结合定向生物酶解技术,得到美味牛肝菌精粉的肽基氮达到80‑90%,小肽(相对分子质量在1000D以下)含量丰富,在80%以上,美味牛肝菌精粉鲜味饱满、醇厚。

Description

一种利用美味牛肝菌深层发酵菌丝体制备美味牛肝菌精粉的 方法
技术领域
本发明属于食品加工技术领域,尤其是一种利用美味牛肝菌深层发酵菌丝体制备美味牛肝菌精粉的方法。
背景技术
美味牛肝菌是优良的野生食用菌,其菌肉厚而细软、味道鲜美,是人们最喜爱的野生食用菌之一。含有人体所必需的8种氨基酸,还含有腺嘌呤、胆碱和腐胺等生物碱,是一种世界范围内分布的食药兼用经济价值较高的真菌。长期食用能增强机体免疫力,具抗肿瘤、抗突变、降血脂、抗病毒等作用。美味牛肝菌是菌根菌,目前不能完全人工栽培,野生产量远远不能满足人们的需要,从而限制了其更深一步的加工与利用。
深层发酵技术属于现代生物技术之一,具有生产周期短、生长条件易控制、产量高、可以实现大规模产业化等优点。将此技术应用于生产美味牛肝菌菌丝体,有利于美味牛肝菌进一步深加工,提高附加值。
通过检索,尚未发现与本发明专利申请相关的专利公开文献。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处,提供一种利用美味牛肝菌深层发酵菌丝体制备美味牛肝菌精粉的方法,该方法利用深层发酵技术培养菌丝体,克服了美味牛肝菌不能人工栽培而限制其应用的缺点,并结合定向生物酶解技术,得到的美味牛肝菌精粉的肽基氮达到80-90%,小肽(相对分子质量在1000D以下)含量丰富,在80%以上,美味牛肝菌精粉鲜味饱满、醇厚。
本发明解决其技术问题是采取以下技术方案实现的:
一种利用美味牛肝菌深层发酵菌丝体制备美味牛肝菌精粉的方法,步骤如下:
⑴深层发酵菌丝体:以美味牛肝菌为菌种,进行深层发酵,得包含菌丝体的发酵液;
⑵菌丝体破碎:利用高速组织捣碎机将包含菌丝体的发酵液打碎,转速8000~12000rpm,时间5~20min,再过胶体磨,进行匀浆;
⑶酶解:使用1mol/L食品级盐酸溶液调节pH至4.5~6.5,加入菌丝体重量0.01~0.1%的酶制剂A,45~65℃酶解1~3h,再用1mol/L食品级氢氧化钠溶液调节pH至6.0~8.0,加入菌丝体重量0.01~0.1%的酶制剂B,45~65℃酶解1~3h,升温至85~100℃,保持5~15min,得酶解液;
⑷浓缩:将步骤⑶得到的酶解液过滤,然后采用低温真空浓缩法浓缩滤液,浓缩液质量为浓缩前的1/2,浓缩温度为40~70℃,得浓缩后酶解液;
⑸喷雾干燥:将浓缩后酶解液进行喷雾干燥,工艺参数为进风温度190℃,出风温度85℃,料液流量为30ml/min,即得美味牛肝菌精粉。
而且,所述步骤⑶中酶制剂A为纤维素酶与β-葡聚糖酶的混合物,纤维素酶:β-葡聚糖酶的质量比为1:1。
而且,所述步骤⑶中酶制剂B为中性蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶中的任意两种的混合物,二者的质量比为1:1。
而且,所述步骤⑷过滤时使用200目的滤布过滤。
而且,所述步骤⑴的具体操作步骤为:
①菌种活化:从母种培养基上取1cm2的菌块,在无菌操作环境下转接到经121℃灭菌30min的斜面培养基上,置于恒温培养箱中,20~30℃培养3~7天,挑取菌丝健壮、洁白、铺满斜面的菌种,以此为出发菌种进行后续制作;
②液体种子培养:取1cm2活化的斜面菌种,接入种子培养基中,20~30℃培养,转速50~200r/min,培养时间3~10天,得到液体种子;
③发酵培养:将液体种子倒入发酵培养基,发酵条件为:接种量4~14%,初始pH值5.0~7.0,装液量20~70%,装液量指占容器的体积比,培养温度20~30℃,转速50~200r/min,培养时间3~10d,即得包含菌丝体的发酵液。
而且,所述斜面培养基为:PDA培养基:马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,水1000ml,pH自然;
所述种子培养基为:马铃薯200g,葡萄糖10g,硫酸镁1.5g,磷酸二氢钾1g,水1000ml,pH自然;
所述发酵培养基为:葡萄糖30g,酵母浸出膏7g,磷酸二氢钾2g,硫酸镁1g,维生素B1 0.01mg,碳酸钙2g,水1000ml。
本发明的优点和积极效果是:
1、本发明方法利用深层发酵技术培养菌丝体,克服了美味牛肝菌不能人工栽培而限制其应用的缺点,并结合定向生物酶解技术,得到的美味牛肝菌精粉的肽基氮达到80-90%,小肽(相对分子质量在1000D以下)含量丰富,在80%以上,美味牛肝菌精粉鲜味饱满、醇厚。
2、本发明方法采用深层发酵技术获得美味牛肝菌菌丝体,克服了美味牛肝菌不能完全人工栽培,野生资源有限,不利于大规模产业化的缺点,扩大了美味牛肝菌的加工和利用范围。
具体实施方式
下面结合实施例,对本发明进一步说明;下述实施例是说明性的,不是限定性的,不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
本发明中所使用的原料,如无特殊说明,均为常规的市售产品;本发明中所使用的方法,如无特殊说明,均为本领域的常规方法。
实施例1
一种利用美味牛肝菌深层发酵菌丝体制备美味牛肝菌精粉的方法,步骤如下:
⑴深层发酵菌丝体:以美味牛肝菌为菌种,进行深层发酵,得包含菌丝体的发酵液;
⑵菌丝体破碎:利用高速组织捣碎机将包含菌丝体的发酵液打碎,转速8000rpm,时间5min,再过胶体磨,进行匀浆;
⑶酶解:使用1mol/L食品级盐酸溶液调节pH至4.5,加入菌丝体重量0.01%的酶制剂A,45℃酶解1h,再用1mol/L食品级氢氧化钠溶液调节pH至6.0,加入菌丝体重量0.01%的酶制剂B,45℃酶解1h,升温至85℃,保持5min,得酶解液;
⑷浓缩:将步骤⑶得到的酶解液过滤,然后采用低温真空浓缩法浓缩滤液,浓缩液质量为浓缩前的1/2,浓缩温度为40℃,得浓缩后酶解液;
⑸喷雾干燥:将浓缩后酶解液进行喷雾干燥,工艺参数为进风温度190℃,出风温度85℃,料液流量为30ml/min,即得美味牛肝菌精粉。
其中,所述步骤⑶中酶制剂A为纤维素酶与β-葡聚糖酶的混合物,纤维素酶:β-葡聚糖酶的质量比为1:1。
所述步骤⑶中酶制剂B为中性蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶中的任意两种的混合物,二者的质量比为1:1。
所述步骤⑴的具体操作步骤为:
①菌种活化:从母种培养基上取1cm2的菌块,在无菌操作环境下转接到经121℃灭菌30min的斜面培养基上,置于恒温培养箱中,20℃培养3天,挑取菌丝健壮、洁白、铺满斜面的菌种,以此为出发菌种进行后续制作;
②液体种子培养:取1cm2活化的斜面菌种,接入种子培养基中,20℃培养,转速50r/min,培养时间3天,得到液体种子;
③发酵培养:将液体种子倒入发酵培养基,发酵条件为:接种量4%,初始pH值5.0,装液量20%,装液量指占容器的体积比,培养温度20℃,转速50r/min,培养时间3d,即得包含菌丝体的发酵液。
所述斜面培养基为:PDA培养基:马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,水1000ml,pH自然;
所述种子培养基为:马铃薯200g,葡萄糖10g,硫酸镁1.5g,磷酸二氢钾1g,水1000ml,pH自然;
所述发酵培养基为:葡萄糖30g,酵母浸出膏7g,磷酸二氢钾2g,硫酸镁1g,维生素B1 0.01mg,碳酸钙2g,水1000ml。
实施例2
一种利用美味牛肝菌深层发酵菌丝体制备美味牛肝菌精粉的方法,步骤如下:
⑴深层发酵菌丝体:以美味牛肝菌为菌种,进行深层发酵,得包含菌丝体的发酵液;
⑵菌丝体破碎:利用高速组织捣碎机将包含菌丝体的发酵液打碎,转速10000rpm,时间10min,再过胶体磨,进行匀浆;
⑶酶解:使用1mol/L食品级盐酸溶液调节pH至5.5,加入菌丝体重量0.05%的酶制剂A,55℃酶解2h,再用1mol/L食品级氢氧化钠溶液调节pH至7.0,加入菌丝体重量0.05%的酶制剂B,55℃酶解2h,升温至90℃,保持10min,得酶解液;
⑷浓缩:将步骤⑶得到的酶解液过滤,然后采用低温真空浓缩法浓缩滤液,浓缩液质量为浓缩前的1/2,浓缩温度为60℃,得浓缩后酶解液;
⑸喷雾干燥:将浓缩后酶解液进行喷雾干燥,工艺参数为进风温度190℃,出风温度85℃,料液流量为30ml/min,即得美味牛肝菌精粉。
其中,所述步骤⑶中酶制剂A为纤维素酶与β-葡聚糖酶的混合物,纤维素酶:β-葡聚糖酶的质量比为1:1。
所述步骤⑶中酶制剂B为中性蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶中的任意两种的混合物,二者的质量比为1:1。
所述步骤⑷过滤时使用200目的滤布过滤。
所述步骤⑴的具体操作步骤为:
①菌种活化:从母种培养基上取1cm2的菌块,在无菌操作环境下转接到经121℃灭菌30min的斜面培养基上,置于恒温培养箱中,25℃培养5天,挑取菌丝健壮、洁白、铺满斜面的菌种,以此为出发菌种进行后续制作;
②液体种子培养:取1cm2活化的斜面菌种,接入种子培养基中,25℃培养,转速100r/min,培养时间6天,得到液体种子;
③发酵培养:将液体种子倒入发酵培养基,发酵条件为:接种量9%,初始pH值6.0,装液量50%,装液量指占容器的体积比,培养温度25℃,转速100r/min,培养时间7d,即得包含菌丝体的发酵液。
所述斜面培养基为:PDA培养基:马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,水1000ml,pH自然;
所述种子培养基为:马铃薯200g,葡萄糖10g,硫酸镁1.5g,磷酸二氢钾1g,水1000ml,pH自然;
所述发酵培养基为:葡萄糖30g,酵母浸出膏7g,磷酸二氢钾2g,硫酸镁1g,维生素B1 0.01mg,碳酸钙2g,水1000ml。
实施例3
一种利用美味牛肝菌深层发酵菌丝体制备美味牛肝菌精粉的方法,步骤如下:
⑴深层发酵菌丝体:以美味牛肝菌为菌种,进行深层发酵,得包含菌丝体的发酵液;
⑵菌丝体破碎:利用高速组织捣碎机将包含菌丝体的发酵液打碎,转速12000rpm,时间20min,再过胶体磨,进行匀浆;
⑶酶解:使用1mol/L食品级盐酸溶液调节pH至6.5,加入菌丝体重量0.1%的酶制剂A,65℃酶解3h,再用1mol/L食品级氢氧化钠溶液调节pH至8.0,加入菌丝体重量0.1%的酶制剂B,65℃酶解3h,升温至100℃,保持15min,得酶解液;
⑷浓缩:将步骤⑶得到的酶解液过滤,然后采用低温真空浓缩法浓缩滤液,浓缩液质量为浓缩前的1/2,浓缩温度为70℃,得浓缩后酶解液;
⑸喷雾干燥:将浓缩后酶解液进行喷雾干燥,工艺参数为进风温度190℃,出风温度85℃,料液流量为30ml/min,即得美味牛肝菌精粉。
其中,所述步骤⑶中酶制剂A为纤维素酶与β-葡聚糖酶的混合物,纤维素酶:β-葡聚糖酶的质量比为1:1。
所述步骤⑶中酶制剂B为中性蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶中的任意两种的混合物,二者的质量比为1:1。
所述步骤⑷过滤时使用200目的滤布过滤。
所述步骤⑴的具体操作步骤为:
①菌种活化:从母种培养基上取1cm2的菌块,在无菌操作环境下转接到经121℃灭菌30min的斜面培养基上,置于恒温培养箱中,30℃培养7天,挑取菌丝健壮、洁白、铺满斜面的菌种,以此为出发菌种进行后续制作;
②液体种子培养:取1cm2活化的斜面菌种,接入种子培养基中,30℃培养,转速200r/min,培养时间10天,得到液体种子;
③发酵培养:将液体种子倒入发酵培养基,发酵条件为:接种量14%,初始pH值7.0,装液量70%,装液量指占容器的体积比,培养温度30℃,转速200r/min,培养时间10d,即得包含菌丝体的发酵液。
所述斜面培养基为:PDA培养基:马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,水1000ml,pH自然;
所述种子培养基为:马铃薯200g,葡萄糖10g,硫酸镁1.5g,磷酸二氢钾1g,水1000ml,pH自然;
所述发酵培养基为:葡萄糖30g,酵母浸出膏7g,磷酸二氢钾2g,硫酸镁1g,维生素B1 0.01mg,碳酸钙2g,水1000ml。
本发明方法利用深层发酵技术培养菌丝体,克服了美味牛肝菌不能人工栽培而限制其应用的缺点,并结合定向生物酶解技术,得到的美味牛肝菌精粉的肽基氮达到80-90%,小肽(相对分子质量在1000D以下)含量丰富,在80%以上,美味牛肝菌精粉鲜味饱满、醇厚。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例而已,并非对本发明的技术方案作任何形式上的限制。凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明的技术方案的范围内。

Claims (6)

1.一种利用美味牛肝菌深层发酵菌丝体制备美味牛肝菌精粉的方法,其特征在于:步骤如下:
⑴深层发酵菌丝体:以美味牛肝菌为菌种,进行深层发酵,得包含菌丝体的发酵液;
⑵菌丝体破碎:利用高速组织捣碎机将包含菌丝体的发酵液打碎,转速8000~12000rpm,时间5~20min,再过胶体磨,进行匀浆;
⑶酶解:使用1mol/L食品级盐酸溶液调节pH至4.5~6.5,加入菌丝体重量0.01~0.1%的酶制剂A,45~65℃酶解1~3h,再用1mol/L食品级氢氧化钠溶液调节pH至6.0~8.0,加入菌丝体重量0.01~0.1%的酶制剂B,45~65℃酶解1~3h,升温至85~100℃,保持5~15min,得酶解液;
⑷浓缩:将步骤⑶得到的酶解液过滤,然后采用低温真空浓缩法浓缩滤液,浓缩液质量为浓缩前的1/2,浓缩温度为40~70℃,得浓缩后酶解液;
⑸喷雾干燥:将浓缩后酶解液进行喷雾干燥,工艺参数为进风温度190℃,出风温度85℃,料液流量为30ml/min,即得美味牛肝菌精粉。
2.根据权利要求1所述的利用美味牛肝菌深层发酵菌丝体制备美味牛肝菌精粉的方法,其特征在于:所述步骤⑶中酶制剂A为纤维素酶与β-葡聚糖酶的混合物,纤维素酶:β-葡聚糖酶的质量比为1:1。
3.根据权利要求1所述的利用美味牛肝菌深层发酵菌丝体制备美味牛肝菌精粉的方法,其特征在于:所述步骤⑶中酶制剂B为中性蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶中的任意两种的混合物,二者的质量比为1:1。
4.根据权利要求1所述的利用美味牛肝菌深层发酵菌丝体制备美味牛肝菌精粉的方法,其特征在于:所述步骤⑷过滤时使用200目的滤布过滤。
5.根据权利要求1至4任一项所述的利用美味牛肝菌深层发酵菌丝体制备美味牛肝菌精粉的方法,其特征在于:所述步骤⑴的具体操作步骤为:
①菌种活化:从母种培养基上取1cm2的菌块,在无菌操作环境下转接到经121℃灭菌30min的斜面培养基上,置于恒温培养箱中,20~30℃培养3~7天,挑取菌丝健壮、洁白、铺满斜面的菌种,以此为出发菌种进行后续制作;
②液体种子培养:取1cm2活化的斜面菌种,接入种子培养基中,20~30℃培养,转速50~200r/min,培养时间3~10天,得到液体种子;
③发酵培养:将液体种子倒入发酵培养基,发酵条件为:接种量4~14%,初始pH值5.0~7.0,装液量20~70%,装液量指占容器的体积比,培养温度20~30℃,转速50~200r/min,培养时间3~10d,即得包含菌丝体的发酵液。
6.根据权利要求5所述的利用美味牛肝菌深层发酵菌丝体制备美味牛肝菌精粉的方法,其特征在于:所述斜面培养基为:PDA培养基:马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,水1000ml,pH自然;
所述种子培养基为:马铃薯200g,葡萄糖10g,硫酸镁1.5g,磷酸二氢钾1g,水1000ml,pH自然;
所述发酵培养基为:葡萄糖30g,酵母浸出膏7g,磷酸二氢钾2g,硫酸镁1g,维生素B10.01mg,碳酸钙2g,水1000ml。
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