CN100418563C - 一种中药制剂的质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种中药制剂的质量控制方法，针对现有抗栓制剂存在质量控制方法落后，产品质量不易控制的缺点。我们采用照薄层色谱法对当归尾、地龙、马钱子、麝香、延胡索、蟾蜍和甘草等进行鉴别，采用高效液相色谱法对丹参酮IIA和士的宁成分进行含量测定。该质量控制方法精密度、灵敏度、稳定性均好，制剂以每日服用生药量的成品量为单位量，每单位量含丹参以丹参酮II AC19H18O3计不得少于52μg；每单位量含马钱子以士的宁C21H22N2O2计为47～86μg。
Description
技术领域：
本发明涉及一种中药制剂的质量控制方法，特别涉及抗栓制剂质量控制方法。
背景技术：
抗栓制剂原料药是由当归尾、丹参、僵蚕、壁虎、土鳖虫、蜈蚣、水蛭、蜂房、地龙、马钱子、麝香、蟾酥、甘草、土茯苓、延胡索、骨碎补、乌梢蛇、虻虫、穿山甲等十九味中药组成，国内有多种剂型上市。但经我们研究发现，现有抗栓制剂存在质量控制方法落后，产品质量不易控制的缺点。现有质量控制方法中中并没有对当归尾、地龙、马钱子、麝香、延胡索、蟾蜍和甘草进行鉴别，或对丹参酮IIA和士的宁成分进行含量测定。故现有质量控制方法不能有效控制抗栓制剂的质量，从而将影响产品的生产和保证质量。
为有效控制产品质量，我们建立了抗栓制剂的新的质量控制方法，该方法采用照薄层色谱法对当归尾、地龙、马钱子、麝香、延胡索、蟾蜍和甘草等进行鉴别，采用高效液相色谱法对丹参酮IIA和士的宁成分进行含量测定。该质量控制方法精密度、灵敏度、稳定性均好，确保产品质量的“安全、均一、稳定、有效、可控”。
发明内容：
本发明目的在于提供抗栓制剂的质量控制方法。
本发明是针对抗栓制剂提出质量控制方法的，这种抗栓制剂包括胶囊、片剂、口服液、糖浆、颗粒剂等口服制剂。
本发明的所述的抗栓制剂是由如下重量份的中药原料制成的：
当归尾200g、丹参200g、僵蚕(麸炒)100g、壁虎100g、土鳖虫200g、蜈蚣50g、水蛭200g、蜂房100g、地龙100g、马钱子(制)30g、麝香3g、蟾酥(酒制)1g、甘草100g、土茯苓200g、延胡索(醋制)100g、骨碎补(制)200g、乌梢蛇(酒制)200g、虻虫(去翅)50g、穿山甲(沙烫)50g
以上组成可制成药物制剂1000剂，所述1000剂指，制成的成品药物制剂，如制成胶囊制剂1000粒，片剂1000片，颗粒剂1000g，液体制剂1000ml等，
以上组成是按重量份作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减少，如大规模生产可以以公斤为单位，或以吨为单位。
本发明抗栓制剂的制备方法可以采用以下方法：
通过将上述配方的中药原料经过提取或其他方式加工，制成药物活性物质，随后，以该物质为原料，需要时加入药物可接受的载体，按照制剂学的常规技术制成胶囊、片剂、口服液、糖浆、颗粒剂。所述活性物质可以通过选自以下方式的方法得到，如：通过粉碎、压榨、煅烧、研磨、过筛、渗漉、萃取、水提、醇提、酯提、酮提、层析等方法得到，这些活性物质可以是浸膏形式的物质，可以是干浸膏也可以是流浸膏，还可以是高纯度提取物，根据制剂的不同需要决定制成不同的浓度。
本发明的抗栓制剂，在制成制剂时根据需要可以加入药物可接受的载体，这些载体可以是任何适合制成抗栓制剂的载体，如：苯甲酸或钾盐、甘露醇、山梨醇、山梨酸或钾盐、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、尼泊尔甲酯、尼泊尔乙酯、尼泊尔丙酯、尼泊尔丁酯、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素A、维生素C、维生素E、维生素D、氮酮、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、丙二醇、乙醇、土温60-80、司盘-80、蜂蜡、羊毛脂、液体石蜡、十六醇、没食子酸酯类、琼脂、三乙醇胺、碱性氨基酸、尿素、尿囊素、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料等。
本发明提供的是针对以上抗栓制剂的质量控制方法，为控制抗栓制剂的质量。针对的其特点及本发明配方，我们提供了如下质量控制方法：
本发明所述质量控制方法包括以下步骤：
对性状进行观察，根据药典的方法对内容物进行检查，对内容物当归尾、地龙、马钱子、麝香、延胡索、蟾蜍和甘草进行鉴别，对含有的丹参酮IIA和士的宁进行含量测定。
因此，本发明的质量控制方法主要的步骤是：
A.对本发明药物制剂中的当归尾、地龙、马钱子、麝香、延胡索、蟾蜍和甘草进行鉴别；
B.测定本发明药物制剂中丹参酮IIA和士的宁的含量；
其中A鉴别的具体步骤如下：
(1)取抗栓制剂内容物，置显微镜下观察：菌丝体近无色，细长卷曲缠结在体壁中。体壁碎片深棕色或黄色，其上着生短粗或细长刚毛，常可见刚毛脱落后的圆形毛窝。纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；具缘纹孔导管较大。草酸钙针晶束存在于黏液细胞中或散在。糊化淀粉粒团块淡黄色或近无色。角质鳞片近无色或淡黄色；横纹肌纤维可见，淡黄色或近无色，多碎断，侧面观多呈条块状。
(2)取抗栓制剂内容物3g，加正己烷20ml超声处理10-20分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取当归尾对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(6-13∶0.7-1.4)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取抗栓制剂内容物10g，加水250ml加热微沸回流0.5-1.5小时，滤过，滤液置水浴上浓缩至浸膏，加甲醇8ml，搅拌，放置1小时，滤过，滤液浓缩至0.6～0.8ml，加苯0.6ml，振摇，分取苯层作为供试品溶液。另取地龙对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(6-12∶0.7-1.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取抗栓制剂内容物8g，置500ml圆底烧瓶中，加水200ml，苯1.0ml，混匀，连接挥发油测定器及回流冷凝管，加热至沸，并保持微沸1.5-2.5小时，放冷，分取苯层作为供试品溶液。另取麝香酮对照品，加苯制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照气相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI E)，用100％甲基硅酮(OV-1)为固定相；FID检测器；弹性石英毛细管色谱柱(30m×0.25mm×0.32μm)；程序升温：200℃-1min-3℃/min-240℃-0min-20℃/min-260℃-5min。分别吸取上述两种溶液各4μl，注入气相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱中，应有与对照品色谱相同保留时间的色谱峰。
(5)取抗栓制剂内容物20g，加石油醚(30～60℃)50ml冷浸30分钟，时时振摇，弃去石油醚液，药渣挥干，加氯仿80ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇40ml溶解，滤过，滤液浓缩至约2ml，用中性氧化铝(100～200目)4g在水浴上搅拌干燥，装入中性氧化铝柱(1.5×20cm)，用氯仿50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取华蟾酥毒基、酯蟾毒配基对照品各适量，加甲醇制成每1ml含华蟾酥毒基7μg、酯蟾毒配基18μg的混合溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；水-乙腈(48-70∶26-52)为流动相；流速：1.0ml/min；检测波长296±3nm；柱温：20-60℃。理论板数以华蟾酥毒基、酯蟾毒配基峰计，应分别不低于4000。分别吸取上述两种溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱中，应有与对照品色谱相同保留时间的色谱峰。
(6)取抗栓制剂内容物10g，加水40ml，盐酸3ml加热微沸回流1-2小时，滤过，弃去滤液，药渣挥干，加乙醚30ml回流提取0.5-1.5小时，弃去乙醚液，药渣挥干，加氯仿30ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-苯-醋酸乙酯-冰醋酸(7-14∶11-30∶3-11∶0.2-1.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(7)取抗栓制剂内容物5g，加氨水适量搅拌湿润后，加乙醚40ml放置24小时，时时振摇，滤取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸50ml分三次提取(20、20、10ml)，合并醋酸层，用氨水调pH10～11，再以氯仿50ml分三次提取(20、20、10ml)，合并氯仿液，用水洗至中性，加适量无水硫酸钠，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5ml的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液5μl，对照品溶液1μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯(1.2-2.9∶0.9-2.8)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，碘熏数秒后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
其中B测定含量的具体步骤如下：
a.丹参酮IIA含量测定：
照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇-水(64-110∶9.5-22)；流速：1.0ml/min；柱温：25-55℃；检测波长270±3nm。理论板数以丹参酮II A(C19H18O3)峰计，应不低于2000。
对照品溶液的制备精密称取丹参酮II A对照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每1ml中含丹参酮IIA16μg)。
供试品溶液的制备取抗栓制剂内容物3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，放置过夜，超声处理10-60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液用滤膜(0.45μm)滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
b.士的宁含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用硅胶为填充剂；氯仿-环己烷-二乙胺(52-94∶16-33∶0.9-3.4)为流动相；流速：1.0ml/min；柱温：20-60℃；检测波长为254±2nm。理论板数按士的宁峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备 精密称取士的宁对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取抗栓制剂内容物10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加氯仿50ml与浓氨试液2-8ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置24小时，超声处理0-40分钟，放冷，再称定重量，用提取液补足减失的重量，充分振摇，滤过，精密量取续滤液25ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)提取5-9次，每次25ml，合并硫酸液，加浓氨试液调节pH值至9～10，用氯仿提取5-9次，每次30ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
以上方法中所述抗栓制剂是指本发明的成品药物如：胶囊、片剂、口服液、糖浆、颗粒剂。
本发明质量控制方法对产品的质量控制更为有效，方法精密度、灵敏度、稳定性均较高。能较好地控制产品质量，确保了产品质量的“安全、均一、稳定、有效、可控”。
本发明各实验例供试品所用制剂均可采用实施例1所述的抗栓胶囊制剂，也可用与实施例1所述的抗栓胶囊剂具有相同原料组成的其他制剂。
实验例1丹参酮II的含量测定方法研究
1.仪器与试药
1.1仪器 日本岛津LC-10ATVP高效液相色谱仪，LC-10ATvp输液泵；SPD-M10Avp二级阵列检测器；SCL-10Avp系统控制器；CTO-10ASvp恒温柱箱；CLASS-VP6.1工作站数据处理系统；微量进样器(25μl)，HAMILTON公司；超声波清洗机(250W，北京市医疗设备二厂)。
1.1.2试药 甲醇(分析纯)、水为二次重蒸馏水、丹参酮IIA对照品(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：0766-9908)；
1.2色谱条件 色谱柱：Hypersil C18(5um，250×5.0i.d.mm)大连伊利特；流动相：甲醇-水(85∶15)；检测波长：270nm；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；进样量：5μl。
1.3系统适用性试验
分别取丹参酮II A对照品对照品溶液、供试品溶液和缺丹参药材的阴性供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱。可知丹参酮IIA的保留时间(tR)约为9.2分钟，阴性样品色谱图在丹参酮IIA峰位置处无假阳性峰，理论塔板数以丹参酮IIA峰计算为5200。与其他组分峰分离度＞1.5。
1.4线性关系考察
1.4.1标准溶液的制备
精密称取丹参酮II A对照品适量，加甲醇溶解制成每1ml含丹参酮II A0.0245mg的溶液。
1.4.2标准曲线的绘制
精密量取0.0245mg的溶液2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml、10.0ml，分别置10ml棕色瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，分别精密量吸取上述五种溶液5μl注入液相色谱仪，记录色谱，见表1，以峰面积A(μV·s)对浓度C(μg/ml)进行线性回归计算，得线性回归方程为：A＝328359.82C+6495.9，r＝0.9999，精密量取0.0245mg/ml的标准溶液6.5ml，置10ml棕色瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，得对照品溶液(0.0245mg/ml)。精密量吸取该对照品溶液5μl注入液相色谱仪，所得峰面积为454684，将一供试品溶液进样分析所得峰面积分别用回归方程和一点法计算含量，结果的相对偏差0.74％，故本发明质量标准采用一点法计算含量。线性范围：4.9～245g/ml。
表1丹参酮IIA线性关系考察
1.4.3供试品溶液提取时间的选择提取方法：冷浸过夜，超声提取，测定结果见表2。
表2甲醇不同超声时间的考察(n＝3)
从表2可知，冷浸过夜，超声提取30min即可将制剂中的丹参酮IIA提取安全，故选择超声处理30min。
1.4.4精密度试验
取本品(批号20011105)内容物，按本发明质量标准中含量测定项下供试液的制备方法制备供试液，重复进样5次，测定峰面积，计算结果列入表3，平均含量0.02108，RSD为0.46％，精密度良好。
表3制剂供试品中丹参酮IIA的精密度试验
1.4.5重现性试验
取本品(批号20011105)内容物，按本发明质量标准中含量测定项下供试液的制备方法制备5份供试液，分别进样，测定峰面积，计算结果列入表4，平均含量为0.02209％，RSD为1.12％，重现性良好。
表4制剂供试品中丹参酮IIA的重现性试验
1.4.6供试品溶液中丹参酮IIA稳定性试验
取本品(批号20011105)内容物，按本发明质量标准中含量测定项下供试液的制备方法制备供试液，分别于0、1、2、4、8小时测定丹参酮IIA含量(见表5)，结果表明，供试品溶液中丹参酮IIA在8小时内相对稳定。
表5制剂供试品中丹参酮IIA的稳定性试验
1.4.7回收率试验
采用加样回收法，分别精密称取5份已测定含量的样品(批号20011105，平均含量为0.02209％)适量，置具塞锥形瓶中，精密加入丹参酮IIA对照品溶液(其中以甲醇为溶剂，0.00808mg/ml)50ml，密塞，称定重量，放置过夜，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液用滤膜(0.45um)滤过，制得供试液。分别精密吸取5ul注入液相色谱仪，记录色谱，测定含量，计算回收率(结果见表6)，平均回收率为99.21％，RSD为1.34％。
表6供试品溶液中丹参酮II A测定回收率试验
1.4.8样品测定
按质量标准制备供试液和对照品溶液，分别进样5μl，记录色谱，测定峰面积，按下式计算含量：
式中：Ai：供试品溶液峰面积
As：对照品溶液峰面积
Cs：对照品溶液浓度(μg/ml)
W：供试品称样量(mg)
W1：平均粒重(mg)
根据严格按照生产工艺制备的3批样品，测定样品中丹参酮II含量，测定结果见表7。
表7 3批样品中丹参酮II含量测定结果
制剂中丹参酮II含量限度计算如下：
丹参酮II含量低限＝制剂含丹参药材(g/g)×药材含丹参酮II量低限(药典规定)×收率＝(200/2184)×0.2％×95％＝1.740×10-4。每粒含量低限＝1.740×10-4×0.3g/粒×106＝52ug/粒。
故定本品每粒含丹参以丹参酮II(C19H18O3)不得少于52ug。根据样品测定结果，3批样品中的丹参酮II(C19H18O3)的含量均大于52ug/粒。
实验例2士的宁的含量测定方法研究
2.仪器与试药
2.1仪器 日本岛津LC-10ATVP高效液相色谱仪，LC-10ATvp输液泵；SPD-M10Avp二级阵列检测器；SCL-10Avp系统控制器；CTO-10ASvp恒温柱箱；CLASS-VP6.1工作站数据处理系统；微量进样器(25μl)，HAMILTON公司；超声波清洗机(250W，北京市医疗设备二厂)。
2.1.2试药 氯仿(分析纯)、环己烷(分析纯)、乙二胺(分析纯)、氨水(分析纯)、浓硫酸(分析纯)、醋酸乙酯(分析纯)、士的宁对照品(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：0705-200005)；
2.1.3色谱条件 色谱柱：Hypersil C18(5um，250×5.0i.d.mm)大连伊利特；流动相：甲醇-水(85∶15)；检测波长：270nm；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；进样量：5μl。
2.2系统适用性试验
分别取士的宁对照品对照品溶液、供试品溶液和缺马钱子药材的阴性供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱。可知士的宁的保留时间(tR)约为12.3分钟，阴性样品色谱图在士的宁峰位置处无假阳性峰，士的宁和相近的杂质峰分离完全(分离度＞1.5)，即本试验条件下与其他组分峰分离完全。理论塔板数以士的宁峰计算为4500。
2.3线性关系考察
2.4标准溶液的制备
精密称取士的宁对照品适量，加醋酸乙酯溶解制成每1ml含士的宁0.206mg的对照品溶液。
2.5标准曲线的绘制
精密量取对照品溶液2、4、6、8、10ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱，见表8，以峰面积A(μV·s)对质数x(μg)进行线性回归计算，得线性回归方程为：A＝1466315.7767×X+19673.9000，r＝0.9999，精密量吸取该对照品溶液5μl注入液相色谱仪，所得峰面积为1528781，将一供试品溶液进样分析所得峰面积分别用回归方程和一点法计算含量，结果的相对偏差0.045％，故本发明质量标准采用一点法计算含量。线性范围：0.412～2.06μg。
表8士的宁线性关系考察
2.6提取选择根据士的宁在碱性条件下易于被有机溶剂提取的特征，我们在试验中选择了常用于提取生物碱的氯仿-浓氨为提取液，由于制剂成分较多，所含士的宁不易提取完全，分别以氯仿-浓氨(50∶2)、氯仿-浓氨(50∶5)、氯仿-浓氨(50∶8)提取后测含量，结果见表9。试验结果表明，用氯仿-浓氨(50∶8)为提取剂能将士的宁提取完全，因此本质量标准采用氯仿-浓氨(50∶8)为提取剂。
表9不同提取溶剂对士的宁含量测定的影响(n＝2)
2.7超声提取时间的选择 提取方法：放置24小时，超声提取，测定结果见表10。
表10不同超声时间的考察(n＝3)
从表10可知，放置24小时，超声提取20min即可将制剂中的士的宁提取安全，故选择放置24小时，超声提取20min。
2.8提取样品溶液的次数与士的宁含量测定的影响结果考察 用硫酸溶液(3→100)提取合并硫酸液，加浓氨试液调解PH值至9-10，再用氯仿提取，其提取次数与士的宁含量测定的结果见表11。
表11提取样品溶液的次数与士的宁含量测定结果(n＝2)
从表可知，提取7次与8次、9次的结果无显著差异，因此本质量标准选用提取次数为7次。
2.9精密度试验
取本品(批号20011105)内容物，按本发明质量标准中含量测定项下供试液的制备方法制备供试液，重复进样5次，测定峰面积，计算结果列入表12，平均含量0.02067，RSD为0.27％，精密度良好。
表12制剂供试品中士的宁的精密度试验
2.10重现性试验
取本品(批号20011105)内容物，按本发明质量标准中含量测定项下供试液的制备方法制备5份供试液，分别进样，测定峰面积，计算结果列入表13，平均含量为0.02078％，RSD为1.72％，重现性良好。
表13制剂供试品中士的宁的重现性试验
2.11供试品溶液中士的宁稳定性试验
取本品(批号20011105)内容物，按本发明质量标准中含量测定项下供试液的制备方法制备供试液，分别于0、2、4、6、8小时测定士的宁含量(见表14)，平均含量为0.02066％，RSD为0.36％，结果表明，供试品溶液中士的宁在8小时内相对稳定。
表14制剂供试品中士的宁的稳定性试验
2.12回收率试验
采用加样回收法，分别精密称取5份已测定含量的样品(批号20011105，平均含量为0.02078％)适量，置具塞锥形瓶中，精密加入士的宁对照品溶液(其中以氯仿为溶剂，0.024mg/ml)50ml与浓氨试液8ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置24小时，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用提取液补足减失的重量，充分摇匀，滤过，制得供试液。精密量取续滤液25m，置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)提取7次，每次30ml，合并硫酸液，加浓氨试液调解PH值至9-10，再用氯仿提取7次，每次30ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，制得供试液。分别精密吸取5ul注入液相色谱仪，记录色谱，测定含量，计算回收率(结果见表15)，平均回收率为98.34％，RSD为1.60％。
表15供试品溶液中士的宁测定回收率试验
2.13样品测定
按质量标准制备供试液和对照品溶液，分别进样5μl，记录色谱，测定峰面积，按下式计算含量：
式中：Ai：供试品溶液峰面积
As：对照品溶液峰面积
Cs：对照品溶液浓度(μg/ml)
W：供试品称样量(g)
W1：平均粒重(g)
根据严格按照生产工艺制备的3批样品，测定样品中士的宁含量，测定结果见表16。
表163批样品中士的宁含量测定结果
制剂中士的宁含量限度计算如下：
士的宁含量低限＝制剂含马钱子药材(g/g)×药材含士的宁含量低限(药典规定)×收率＝(30/2184)×1.2％×95％＝1.5659×10-4。每粒含量低限＝1.5659×10-4×0.3g/粒×106＝46.98ug/粒；士的宁含量高限＝制剂含马钱子药材(g/g)×药材含士的宁含量低限(药典规定)×收率＝(30/2184)×2.2％×95％＝2.8709×10-4。每粒含量低限＝2.8709×10-4×0.3g/粒×106＝86.13ug/粒；。
故定本品每粒含马钱子以士的宁(C21H22N2O2)计为47-86ug。根据样品测定结果，3批样品中的士的宁(C21H22N2O2)的含量均在该限度范围内。
本发明的优点在于：本发明的质量控制方法保证了本发明的制剂的质量检测标准能够较全面有效控制制剂的质量特征，具有准确性和先进性，可作为质量控制和考察工艺的稳定性的有效技术手段。对提高产品质量有重大意义。
具体实施方式：
下面结合事实例对本发明作进一步的说明，下列各事实例仅用于说明本发明，对本发明并无限制。
以下发明实施例均能实现上述效果。
实施例1抗栓胶囊
[处方]当归尾200g、丹参200g、僵蚕(麸炒)100g、壁虎100g、土鳖虫200g、蜈蚣50g、水蛭200g、蜂房100g、地龙100g、马钱子(制)30g、麝香3g、蟾酥(酒制)1g、甘草100g、土茯苓200g、延胡索(醋制)100g、骨碎补(制)200g、乌梢蛇(酒制)200g、虻虫(去翅)50g、穿山甲(沙烫)50g
【制法】以上原料，除麝香、蟾酥外，其余当归尾等十七味粉碎成细粉，将麝香、蟾酥分别研细，与上述粉末配研，过筛，混匀，装入胶囊，即得。
【鉴别】
(1)取抗栓胶囊内容物2g，置显微镜下观察：菌丝体近无色，细长卷曲缠结在体壁中。体壁碎片深棕色或黄色，其上着生短粗或细长刚毛，常可见刚毛脱落后的圆形毛窝。纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；具缘纹孔导管较大。草酸钙针晶束存在于黏液细胞中或散在。糊化淀粉粒团块淡黄色或近无色。角质鳞片近无色或淡黄色；横纹肌纤维可见，淡黄色或近无色，多碎断，侧面观多呈条块状。
(2)取抗栓胶囊内容物3g，加正己烷20ml超声处理15分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取当归尾对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点子同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。(3)取本品内容物10g，加水250ml加热微沸回流1小时，滤过，滤液置水浴上浓缩至浸膏，加甲醇8ml，搅拌，放置1小时，滤过，滤液浓缩至0.6～0.8ml，加苯0.6ml，振摇，分取苯层作为供试品溶液。另取地龙对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取抗栓胶囊内容物8g，置500ml圆底烧瓶中，加水200ml，苯1.0ml，混匀，连接挥发油测定器及回流冷凝管，加热至沸，并保持微沸2小时，放冷，分取苯层作为供试品溶液。另取麝香酮对照品，加苯制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照气相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI E)，用100％甲基硅酮(OV-1)为固定相；FID检测器；弹性石英毛细管色谱柱(30m×0.25mm×0.32μm)；程序升温：200℃-1min-3℃/min-240℃-0min-20℃/min-260℃-5min。分别吸取上述两种溶液各4μl，注入气相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱中，应有与对照品色谱相同保留时间的色谱峰。
(5)取抗栓胶囊内容物20g，加石油醚(30～60℃)50ml冷浸30分钟，时时振摇，弃去石油醚液，药渣挥干，加氯仿80ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇40ml溶解，滤过，滤液浓缩至约2ml，用中性氧化铝(100～200目)4g在水浴上搅拌干燥，装入中性氧化铝柱(1.5×20cm)，用氯仿50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取华蟾酥毒基、酯蟾毒配基对照品各适量，加甲醇制成每1ml含华蟾酥毒基7μg、酯蟾毒配基18μg的混合溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；水-乙腈(60∶40)为流动相；流速：1.0ml/min；检测波长296nm；柱温：40℃。理论板数以华蟾酥毒基、酯蟾毒配基峰计，应分别不低于4000。分别吸取上述两种溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱中，应有与对照品色谱相同保留时间的色谱峰。
(6)取抗栓胶囊内容物10g，加水40ml，盐酸3ml加热微沸回流1.5小时，滤过，弃去滤液，药渣挥干，加乙醚30ml回流提取1小时，弃去乙醚液，药渣挥干，加氯仿30ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-苯-醋酸乙酯-冰醋酸(10∶20∶7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(7)取抗栓胶囊内容物5g，加氨水适量搅拌湿润后，加乙醚40ml放置24小时，时时振摇，滤取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸50ml分三次提取(20、20、10ml)，合并醋酸层，用氨水调pH10～11，再以氯仿50ml分三次提取(20、20、10ml)，合并氯仿液，用水洗至中性，加适量无水硫酸钠，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5ml的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液5μl，对照品溶液1μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯(2∶1.7)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，碘熏数秒后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
【含量测定】
a.丹参酮II A含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇-水(85∶15)；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；检测波长270nm。理论板数以丹参酮IIA(C19H18O3)峰计，应不低于2000。
对照品溶液的制备 精密称取丹参酮II A对照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每1ml中含丹参酮IIA16μg)。
供试品溶液的制备取本品内容物3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，放置过夜，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液用滤膜(0.45μm)滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本实施例本品每粒含丹参以丹参酮II A(C19H18O3)计不得少于52μg。
b.士的宁的含量测定照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用硅胶为填充剂；氯仿-环己烷-二乙胺(75∶25∶2)为流动相；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；检测波长为254nm。理论板数按士的宁峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备精密称取士的宁对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品内容物10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加氯仿50ml与浓氨试液8ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置24小时，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用提取液补足减失的重量，充分振摇，滤过，精密量取续滤液25ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)提取7次，每次25ml，合并硫酸液，加浓氨试液调节pH值至9～10，用氯仿提取7次，每次30ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
每粒含马钱子以士的宁(C21H22N2O2)计为47～86μg。
实施例2抗栓片
[处方]当归尾200g、丹参200g、僵蚕(麸炒)100g、壁虎100g、土鳖虫200g、蜈蚣50g、水蛭200g、蜂房100g、地龙100g、马钱子(制)30g、麝香3g、蟾酥(酒制)1g、甘草100g、土茯苓200g、延胡索(醋制)100g、骨碎补(制)200g、乌梢蛇(酒制)200g、虻虫(去翅)50g、穿山甲(沙烫)50g
【制法】以上原料，除麝香、蟾酥外，其余当归尾等十七味粉碎成细粉，将麝香、蟾酥分别研细，与上述粉末配研，过筛，混匀，整粒，经常规制成片剂，0.4g/片，即得。
【质量控制方法】鉴别、含量测定方法同实施例1，其中含量每片含丹参以丹参酮II A(C19H18O3)计不得少于52μg；每片含士的宁(C21H22N2O2)计为47～86μg)。
实施例3抗栓颗粒
[处方]当归尾200g、丹参200g、僵蚕(麸炒)100g、壁虎100g、土鳖虫200g、蜈蚣50g、水蛭200g、蜂房100g、地龙100g、马钱子(制)30g、麝香3g、蟾酥(酒制)1g、甘草100g、土茯苓200g、延胡索(醋制)100g、骨碎补(制)200g、乌梢蛇(酒制)200g、虻虫(去翅)50g、穿山甲(沙烫)50g
【制法】以上原料，除麝香、蟾酥外，其余当归尾等十七味粉碎成细粉，将麝香、蟾酥分别研细，与上述粉末配研，过筛，混匀，经常规制成颗粒剂，5g/袋。即得。
【质量控制方法】鉴别、含量测定方法同实施例1，其中含量每袋含丹参以丹参酮IIA(C19H18O3)计不得少于52μg；每袋含士的宁(C21H22N2O2)计为47～86μg。
实施例4抗栓胶囊
[处方]当归尾200g、丹参200g、僵蚕(麸炒)100g、壁虎100g、土鳖虫200g、蜈蚣50g、水蛭200g、蜂房100g、地龙100g、马钱子(制)30g、麝香3g、蟾酥(酒制)1g、甘草100g、土茯苓200g、延胡索(醋制)100g、骨碎补(制)200g、乌梢蛇(酒制)200g、虻虫(去翅)50g、穿山甲(沙烫)50g
【制法】以上原料，除麝香、蟾酥外，其余当归尾等十七味粉碎成细粉，将麝香、蟾酥分别研细，与上述粉末配研，过筛，混匀，装入胶囊，即得。
【鉴别】
(1)取抗栓胶囊内容物，置显微镜下观察：菌丝体近无色，细长卷曲缠结在体壁中。体壁碎片深棕色或黄色，其上着生短粗或细长刚毛，常可见刚毛脱落后的圆形毛窝。纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；具缘纹孔导管较大。草酸钙针晶束存在于黏液细胞中或散在。糊化淀粉粒团块淡黄色或近无色。角质鳞片近无色或淡黄色；横纹肌纤维可见，淡黄色或近无色，多碎断，侧面观多呈条块状。
(2)取抗栓胶囊内容物3g，加正己烷20ml超声处理10分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取当归尾对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(6∶0.7)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取抗栓制剂内容物10g，加水250ml加热微沸回流0.5小时，滤过，滤液置水浴上浓缩至浸膏，加甲醇8ml，搅拌，放置1小时，滤过，滤液浓缩至0.6～0.8ml，加苯0.6ml，振摇，分取苯层作为供试品溶液。另取地龙对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(6∶0.7)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取抗栓胶囊内容物8g，置500ml圆底烧瓶中，加水200ml，苯1.0ml，混匀，连接挥发油测定器及回流冷凝管，加热至沸，并保持微沸1.5小时，放冷，分取苯层作为供试品溶液。另取麝香酮对照品，加苯制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照气相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI E)，用100％甲基硅酮(OV-1)为固定相；FID检测器；弹性石英毛细管色谱柱(30m×0.25mm×0.32μm)；程序升温：200℃-1min-3℃/min-240℃-0min-20℃/min-260℃-5min。分别吸取上述两种溶液各4μl，注入气相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱中，应有与对照品色谱相同保留时间的色谱峰。
(5)取抗栓胶囊内容物20g，加石油醚(30～60℃)50ml冷浸30分钟，时时振摇，弃去石油醚液，药渣挥干，加氯仿80ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇40ml溶解，滤过，滤液浓缩至约2ml，用中性氧化铝(100～200目)4g在水浴上搅拌干燥，装入中性氧化铝柱(1.5×20cm)，用氯仿50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取华蟾酥毒基、酯蟾毒配基对照品各适量，加甲醇制成每1ml含华蟾酥毒基7μg、酯蟾毒配基18μg的混合溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；水-乙腈(48∶26)为流动相；流速：1.0ml/min；检测波长293nm；柱温：20℃。理论板数以华蟾酥毒基、酯蟾毒配基峰计，应分别不低于4000。分别吸取上述两种溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱中，应有与对照品色谱相同保留时间的色谱峰。
(6)取抗栓胶囊内容物10g，加水40ml，盐酸3ml加热微沸回流1小时，滤过，弃去滤液，药渣挥干，加乙醚30ml回流提取0.5小时，弃去乙醚液，药渣挥干，加氯仿30ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-苯-醋酸乙酯-冰醋酸(7∶11∶3∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(7)取抗栓胶囊内容物5g，加氨水适量搅拌湿润后，加乙醚40ml放置24小时，时时振摇，滤取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸50ml分三次提取(20、20、10ml)，合并醋酸层，用氨水调pH10～11，再以氯仿50ml分三次提取(20、20、10ml)，合并氯仿液，用水洗至中性，加适量无水硫酸钠，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5ml的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液5μl，对照品溶液1μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯(1.2∶0.9)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，碘熏数秒后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
【含量测定】
a.丹参酮IIA含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇-水(64∶9.5)；流速：1.0ml/min；柱温：25℃；检测波长273nm。理论板数以丹参酮II A(C19H18O3)峰计，应不低于2000。
对照品溶液的制备 精密称取丹参酮II A对照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每1ml中含丹参酮IIA16μg)。
供试品溶液的制备 取抗栓胶囊内容物3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，放置过夜，超声处理10分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液用滤膜(0.45μm)滤过，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每粒含丹参以丹参酮II A(C19H18O3)计不得少于52μg。
b.士的宁的含量测定照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用硅胶为填充剂；氯仿-环己烷-二乙胺(52∶16∶0.9)为流动相；流速：1.0ml/min；柱温：20℃；检测波长为252nm。理论板数按士的宁峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备 精密称取士的宁对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取抗栓胶囊内容物10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加氯仿50ml与浓氨试液2ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置24小时，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用提取液补足减失的重量，充分振摇，滤过，精密量取续滤液25ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)提取5次，每次25ml，合并硫酸液，加浓氨试液调节pH值至9～10，用氯仿提取5次，每次30ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每粒含马钱子以士的宁(C21H22N2O2)计为47～86μg。
实施例5抗栓胶囊
[处方]当归尾200g、丹参200g、僵蚕(麸炒)100g、壁虎100g、土鳖虫200g、蜈蚣50g、水蛭200g、蜂房100g、地龙100g、马钱子(制)30g、麝香3g、蟾酥(酒制)1g、甘草100g、土茯苓200g、延胡索(醋制)100g、骨碎补(制)200g、乌梢蛇(酒制)200g、虻虫(去翅)50g、穿山甲(沙烫)50g
【制法】以上原料，除麝香、蟾酥外，其余当归尾等十七味粉碎成细粉，将麝香、蟾酥分别研细，与上述粉末配研，过筛，混匀，装入胶囊，即得。
【鉴别】
(1)取抗栓胶囊内容物，置显微镜下观察：菌丝体近无色，细长卷曲缠结在体壁中。体壁碎片深棕色或黄色，其上着生短粗或细长刚毛，常可见刚毛脱落后的圆形毛窝。纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；具缘纹孔导管较大。草酸钙针晶束存在于黏液细胞中或散在。糊化淀粉粒团块淡黄色或近无色。角质鳞片近无色或淡黄色；横纹肌纤维可见，淡黄色或近无色，多碎断，侧面观多呈条块状。
(2)取抗栓胶囊内容物3g，加正己烷20ml超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取当归尾对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(13∶1.4)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取抗栓胶囊内容物10g，加水250ml加热微沸回流1.5小时，滤过，滤液置水浴上浓缩至浸膏，加甲醇8ml，搅拌，放置1小时，滤过，滤液浓缩至0.6～0.8ml，加苯0.6ml，振摇，分取苯层作为供试品溶液。另取地龙对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯12∶1.3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取抗栓胶囊内容物8g，置500ml圆底烧瓶中，加水200ml，苯1.0ml，混匀，连接挥发油测定器及回流冷凝管，加热至沸，并保持微沸2.5小时，放冷，分取苯层作为供试品溶液。另取麝香酮对照品，加苯制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照气相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI E)，用100％甲基硅酮(OV-1)为固定相；FID检测器；弹性石英毛细管色谱柱(30m×0.25mm×0.32μm)；程序升温：200℃-1min-3℃/min-240℃-0min-20℃/min-260℃-5min。分别吸取上述两种溶液各4μl，注入气相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱中，应有与对照品色谱相同保留时间的色谱峰。
(5)取抗栓胶囊内容物20g，加石油醚(30～60℃)50ml冷浸30分钟，时时振摇，弃去石油醚液，药渣挥干，加氯仿80ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇40ml溶解，滤过，滤液浓缩至约2ml，用中性氧化铝(100～200目)4g在水浴上搅拌干燥，装入中性氧化铝柱(1.5×20cm)，用氯仿50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取华蟾酥毒基、酯蟾毒配基对照品各适量，加甲醇制成每1ml含华蟾酥毒基7μg、酯蟾毒配基18μg的混合溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；水-乙腈(70∶52)为流动相；流速：1.0ml/min；检测波长299nm；柱温：60℃。理论板数以华蟾酥毒基、酯蟾毒配基峰计，应分别不低于4000。分别吸取上述两种溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱中，应有与对照品色谱相同保留时间的色谱峰。
(6)取抗栓胶囊内容物10g，加水40ml，盐酸3ml加热微沸回流2小时，滤过，弃去滤液，药渣挥干，加乙醚30ml回流提取1.5小时，弃去乙醚液，药渣挥干，加氯仿30ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-苯-醋酸乙酯-冰醋酸(14∶30∶11∶1.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(7)取抗栓胶囊内容物5g，加氨水适量搅拌湿润后，加乙醚40ml放置24小时，时时振摇，滤取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸50ml分三次提取(20、20、10ml)，合并醋酸层，用氨水调pH10～11，再以氯仿50ml分三次提取(20、20、10ml)，合并氯仿液，用水洗至中性，加适量无水硫酸钠，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5ml的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液5μl，对照品溶液1μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯(2.9∶2.8)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，碘熏数秒后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
【含量测定】
a.丹参酮II A含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇-水(110∶22)；流速：1.0ml/min；柱温：55℃；检测波长273nm。理论板数以丹参酮IIA(C19H18O3)峰计，应不低于2000。
对照品溶液的制备精密称取丹参酮II A对照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每1ml中含丹参酮II A16μg)。
供试品溶液的制备 取抗栓胶囊内容物3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，放置过夜，超声处理60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液用滤膜(0.45μm)滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每粒含丹参以丹参酮II A(C19H18O3)计不得少于52μg。
b.士的宁的含量测定照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用硅胶为填充剂；氯仿-环己烷-二乙胺(94∶33∶3.4)为流动相；流速：1.0ml/min；柱温：60℃；检测波长为256nm。理论板数按士的宁峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备 精密称取士的宁对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取抗栓胶囊内容物10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加氯仿50ml与浓氨试液8ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置24小时，超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用提取液补足减失的重量，充分振摇，滤过，精密量取续滤液25ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)提取9次，每次25ml，合并硫酸液，加浓氨试液调节pH值至9～10，用氯仿提取9次，每次30ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每粒含马钱子以士的宁(C21H22N2O2)计为47～86μg。
Claims (7)
1. 一种抗栓制剂的质量控制方法，包括对性状进行观察，根据药典的方法对内容物进行检查，对内容物当归尾、地龙、马钱子、麝香、延胡索、蟾蜍和甘草进行鉴别，对含有的丹参酮II A和士的宁进行含量测定；其特征在于，所述对内容物当归尾、地龙、马钱子、麝香、延胡索、蟾蜍和甘草进行鉴别，经过以下方法：
a.取抗栓制剂内容物3g，加正己烷20ml超声处理10-20分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取当归尾对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2000年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯6-13∶0.7-1.4为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
b.取抗栓制剂内容物10g，加水250ml加热微沸回流0.5-1.5小时，滤过，滤液置水浴上浓缩至浸膏，加甲醇8ml，搅拌，放置1小时，滤过，滤液浓缩至0.6～0.8ml，加苯0.6ml，振摇，分取苯层作为供试品溶液；另取地龙对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2000年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯6-12∶0.7-1.3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
c.取抗栓制剂内容物20g，加30～60℃石油醚50ml冷浸30分钟，时时振摇，弃去石油醚液，药渣挥干，加氯仿80ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇40ml溶解，滤过，滤液浓缩至约2ml，用100～200目中性氧化铝4g在水浴上搅拌干燥，装入1.5×20cm中性氧化铝柱，用氯仿50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取华蟾酥毒基、酯蟾毒配基对照品各适量，加甲醇制成每1ml含华蟾酥毒基7μg、酯蟾毒配基18μg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2000年版一部附录VI D高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；水-乙腈48-70∶26-52为流动相；流速：1.0ml/min；检测波长296±3nm；柱温：20-60℃；理论板数以华蟾酥毒基、酯蟾毒配基峰计，应分别不低于4000；分别吸取上述两种溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；供试品色谱中，应有与对照品色谱相同保留时间的色谱峰；
d.取抗栓制剂内容物10g，加水40ml，盐酸3ml加热微沸回流1-2小时，滤过，弃去滤液，药渣挥干，加乙醚30ml回流提取0.5-1.5小时，弃去乙醚液，药渣挥干，加氯仿30ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以30～60℃石油醚-苯-醋酸乙酯-冰醋酸7-14∶11-30∶3-11∶0.2-1.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
e.取抗栓制剂内容物5g，加氨水适量搅拌湿润后，加乙醚40ml放置24小时，时时振摇，滤取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸50ml分三次提取，每次20、20、10ml，合并醋酸层，用氨水调pH10～11，再以氯仿50ml分三次提取，每次20、20、10ml，合并氯仿液，用水洗至中性，加适量无水硫酸钠，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液5μl，对照品溶液1μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以30～60℃石油醚-醋酸乙酯1.2-2.9∶0.9-2.8为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，碘熏数秒后，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；所述对含有的丹参酮IIA和士的宁进行含量测定包括以下步骤：
照高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相∶甲醇-水64-110∶9.5-22；流速：1.0ml/min；柱温：25-55℃；检测波长270±3nm；理论板数以丹参酮II AC19H18O3峰计，应不低于2000；
对照品溶液的制备精密称取丹参酮II A对照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得每1ml中含丹参酮IIA16μg；
供试品溶液的制备取抗栓制剂内容物3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，放置过夜，超声处理10-60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液用滤膜0.45μm滤过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2. 权利要求1的方法，其特征在于，该方法中的含量测定方法为：
照高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验用硅胶为填充剂；氯仿-环己烷-二乙胺52-94∶16-33∶0.9-3.4为流动相；流速：1.0ml/min；柱温：20-60℃；检测波长为254±2nm；理论板数按士的宁峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备精密称取士的宁对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取抗栓制剂内容物10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加氯仿50ml与浓氨试液2-8ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置24小时，超声处理0-40分钟，放冷，再称定重量，用提取液补足减失的重量，充分振摇，滤过，精密量取续滤液25ml，置分液漏斗中，按3→100用硫酸溶液提取5-9次，每次25ml，合并硫酸液，加浓氨试液调节pH值至9～10，用氯仿提取5-9次，每次30ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
3. 权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法中含量测定方法为：
照高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验用硅胶为填充剂；氯仿-环己烷-二乙胺75∶25∶2为流动相；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；检测波长为254nm；理论板数按士的宁峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备精密称取士的宁对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取本品内容物10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加氯仿50ml与浓氨试液8ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置24小时，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用提取液补足减失的重量，充分振摇，滤过，精密量取续滤液25ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液3→100提取7次，每次25ml，合并硫酸液，加浓氨试液调节pH值至9～10，用氯仿提取7次，每次30ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；每粒含马钱子以士的宁C21H22N2O2计为47～86μg。
4. 权利要求1的方法，其特征在于，经过以下方法：
鉴别：
a.取抗栓制剂内容物3g，加正己烷20ml超声处理10-20分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取当归尾对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯6-13∶0.7-1.4为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
b.取抗栓制剂内容物10g，加水250ml加热微沸回流0.5-1.5小时，滤过，滤液置水浴上浓缩至浸膏，加甲醇8ml，搅拌，放置1小时，滤过，滤液浓缩至0.6～0.8ml，加苯0.6ml，振摇，分取苯层作为供试品溶液；另取地龙对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯6-12∶0.7-1.3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
c.取抗栓胶囊制剂内容物8g，置500ml圆底烧瓶中，加水200ml，苯1.0ml，混匀，连接挥发油测定器及回流冷凝管，加热至沸，并保持微沸1.5-2.5小时，放冷，分取苯层作为供试品溶液；另取麝香酮对照品，加苯制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照气相色谱法，用100％甲基硅酮OV-1为固定相；FID检测器；弹性石英毛细管色谱柱30m×0.25mm×0.32μm；程序升温：200℃-1min-3℃/min-240℃-0min-20℃/min-260℃-5min；分别吸取上述两种溶液各4μl，注入气相色谱仪，记录色谱图；供试品色谱中，应有与对照品色谱相同保留时间的色谱峰；
d.取抗栓胶囊制剂内容物20g，加30～60℃石油醚50ml冷浸30分钟，时时振摇，弃去石油醚液，药渣挥干，加氯仿80ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇40ml溶解，滤过，滤液浓缩至约2ml，用中性氧化铝100～200目4g在水浴上搅拌干燥，装入中性氧化铝柱1.5×20cm，用氯仿50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取华蟾酥毒基、酯蟾毒配基对照品各适量，加甲醇制成每1ml含华蟾酥毒基7μg、酯蟾毒配基18μg的混合溶液，作为对照品溶液；照高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；水-乙腈48-70∶26-52为流动相；流速：1.0ml/min；检测波长296±3nm；柱温：20-60℃；理论板数以华蟾酥毒基、酯蟾毒配基峰计，应分别不低于4000；分别吸取上述两种溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；供试品色谱中，应有与对照品色谱相同保留时间的色谱峰；
e.取抗栓胶囊制剂内容物10g，加水40ml，盐酸3ml加热微沸回流1-2小时，滤过，弃去滤液，药渣挥干，加乙醚30ml回流提取0.5-1.5小时，弃去乙醚液，药渣挥于，加氯仿30ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以30～60℃石油醚-苯-醋酸乙酯-冰醋酸7-14∶11-30∶3-11∶0.2-1.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
f.取抗栓胶囊制剂内容物5g，加氨水适量搅拌湿润后，加乙醚40ml放置24小时，时时振摇，滤取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸50ml分三次提取，第一次为20ml，第二次为20ml，第三次为10ml，合并醋酸层，用氨水调pH10～11，再以氯仿50ml分三次提取，每次20、20、10ml，合并氯仿液，用水洗至中性，加适量无水硫酸钠，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液5μl，对照品溶液1μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以30～60℃石油醚-醋酸乙酯1.2-2.9∶0.9-2.8为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，碘熏数秒后，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
含量测定：
a.丹参酮IIA含量测定：照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相∶甲醇-水64-110∶9.5-22；流速：1.0ml/min；柱温：25-55℃；检测波长270±3nm；理论板数以丹参酮IIAC19H18O3峰计，应不低于2000；对照品溶液的制备精密称取丹参酮II A对照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得每1ml中含丹参酮IIA16μg；供试品溶液的制备取抗栓制剂内容物3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，放置过夜，超声处理10-60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液用滤膜0.45μm滤过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
b.士的宁含量测定：照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用硅胶为填充剂；氯仿-环己烷-二乙胺52-94∶16-33∶0.9-3.4为流动相；流速：1.0ml/min；柱温：20-60℃；检测波长为254±2nm；理论板数按士的宁峰计算应不低于2000；对照品溶液的制备精密称取士的宁对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取抗栓制剂内容物10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加氯仿50ml与浓氨试液2-8ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置24小时，超声处理0-40分钟，放冷，再称定重量，用提取液补足减失的重量，充分振摇，滤过，精密量取续滤液25ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液3→100提取5-9次，每次25ml，合并硫酸液，加浓氨试液调节pH值至9～10，用氯仿提取5-9次，每次30ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
5. 权利要求1的方法，其特征在于，经过以下方法：
鉴别：
a.取抗栓胶囊制剂内容物3g，加正己烷20ml超声处理15分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取当归尾对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；取本品内容物10g，加水250ml加热微沸回流1小时，滤过，滤液置水浴上浓缩至浸膏，加甲醇8ml，搅拌，放置1小时，滤过，滤液浓缩至0.6～0.8ml，加苯0.6ml，振摇，分取苯层作为供试品溶液；另取地龙对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
b.取抗栓胶囊制剂内容物10g，加水250ml加热微沸回流1小时，滤过，滤液置水浴上浓缩至浸膏，加甲醇8ml，搅拌，放置1小时，滤过，滤液浓缩至0.6～0.8ml，加苯0.6ml，振摇，分取苯层作为供试品溶液；另取地龙对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
c.取抗栓胶囊制剂内容物8g，置500ml圆底烧瓶中，加水200ml，苯1.0ml，混匀，连接挥发油测定器及回流冷凝管，加热至沸，并保持微沸2小时，放冷，分取苯层作为供试品溶液；另取麝香酮对照品，加苯制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照气相色谱法，用100％甲基硅酮OV-1为固定相；FID检测器；弹性石英毛细管色谱柱30m×0.25mm×0.32μm；程序升温：200℃-1min-3℃/min-240℃-0min-20℃/min-260℃-5min；分别吸取上述两种溶液各4μl，注入气相色谱仪，记录色谱图；供试品色谱中，应有与对照品色谱相同保留时间的色谱峰；
d.取抗栓胶囊制剂内容物20g，加30～60℃石油醚50ml冷浸30分钟，时时振摇，弃去石油醚液，药渣挥干，加氯仿80ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇40ml溶解，滤过，滤液浓缩至约2ml，用中性氧化铝100～200目4g在水浴上搅拌干燥，装入中性氧化铝柱1.5×20cm，用氯仿50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取华蟾酥毒基、酯蟾毒配基对照品各适量，加甲醇制成每1ml含华蟾酥毒基7μg、酯蟾毒配基18μg的混合溶液，作为对照品溶液；照高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；水-乙腈60∶40为流动相；流速：1.0ml/min；检测波长296nm；柱温：40℃；理论板数以华蟾酥毒基、酯蟾毒配基峰计，应分别不低于4000；分别吸取上述两种溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；供试品色谱中，应有与对照品色谱相同保留时间的色谱峰；
e.取抗栓胶囊制剂内容物10g，加水40ml，盐酸3ml加热微沸回流1.5小时，滤过，弃去滤液，药渣挥干，加乙醚30ml回流提取1小时，弃去乙醚液，药渣挥干，加氯仿30ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以30～60℃石油醚-苯-醋酸乙酯-冰醋酸10∶20∶7∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
f.取抗栓胶囊制剂内容物5g，加氨水适量搅拌湿润后，加乙醚40ml放置24小时，时时振摇，滤取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸50ml分三次提取，每次20、20、10ml，合并醋酸层，用氨水调pH10～11，再以氯仿50ml分三次提取，每次20、20、10ml，合并氯仿液，用水洗至中性，加适量无水硫酸钠，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液5μl，对照品溶液1μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以30～60℃石油醚-醋酸乙酯2∶1.7为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，碘熏数秒后，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
含量测定：
a.丹参酮II A含量测定：照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相∶甲醇-水85∶15；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；检测波长270nm；理论板数以丹参酮IIAC19H18O3峰计，应不低于2000；对照品溶液的制备精密称取丹参酮IIA对照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得每1ml中含丹参酮IIA16μg；供试品溶液的制备取本品内容物3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，放置过夜，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液用滤膜0.45μm滤过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每粒含丹参以丹参酮II AC19H18O3计不得少于52μg；
b.士的宁的含量测定照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用硅胶为填充剂；氯仿-环己烷-二乙胺75∶25∶2为流动相；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；检测波长为254nm；理论板数按士的宁峰计算应不低于2000；对照品溶液的制备精密称取士的宁对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取本品内容物10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加氯仿50ml与浓氨试液8ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置24小时，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用提取液补足减失的重量，充分振摇，滤过，精密量取续滤液25ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液3→100提取7次，每次25ml，合并硫酸液，加浓氨试液调节pH值至9～10，用氯仿提取7次，每次30ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；每粒含马钱子以士的宁C21H22N2O2计为47～86μg。
6. 权利要求1-5的任何一项方法，其特征在于，所述抗栓制剂是口服制剂。
7. 权利要求6的方法，其特征在于，所述口服制剂是胶囊、片剂、口服液、糖浆或颗粒剂。
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