BR112020008812A2 - combinação de terapia celular e um inibidor de gama secretase - Google Patents

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BR112020008812A2
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Damian J. GREEN
Stanley R. Riddell
Melissa WORKS
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Juno Therapeutics Inc
Fred Hutchinson Cancer Research Center
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Abstract

  A presente invenção refere-se a terapias de combinação que envolvem a administração de uma imunoterapia envolvendo uma terapia celular, como uma terapia com células T e um inibidor da gama secretase. Também são fornecidos métodos para modificar, preparar e produzir as células, composições que contêm as células e/ou inibidor de gama secretase, e kits e dispositivos contendo e para usar, produzir e administrar as células e/ou inibidor de gama secretase, como de acordo com os métodos de terapia de combinação fornecidos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “COMBI- NAÇÃO DE TERAPIA CELULAR E UM INIBIDOR DE GAMA SE- CRETASE”. Referência Cruzada a Pedidos Relacionados
[001] Este pedido reivindica o benefício de prioridade ao pedido provisório de patente U.S. 62/582.308, intitulado "COMBINATION OF A THERAPY AND A GAMMA SECRETASE INHIBITOR" depositado em 6 de novembro de 2017; pedido de patente provisório 62/582.937, intitulado “COMBINATION OF A THERAPY AND A GAMMA SECRE- TASE INHIBITOR" depositado em 7 de novembro de 2017; e o pedido de patente provisório U.S. 62/665.450, intitulado "COMBINATION OF A THERAPY AND A GAMMA SECRETASE INHIBITOR" depositado em 1 de maio de 2018, cujo conteúdo é incorporado por referência na sua totalidade. Incorporação por Referência da Listagem de Sequências
[002] O presente pedido está sendo apresentado juntamente com uma Listagem de Sequências em formato eletrônico. A Listagem de sequência é fornecida como um arquivo intitulado 735042014240SegqList.TXT, criado em 6 de novembro de 2018, com tamanho de 320.126 bytes. As informações no formato eletrônico da Listagem de sequências são incorporadas por referência em sua tota- lidade. Campo
[003] A presente invenção refere-se em alguns aspectos a méto- dos, composições e usos envolvendo imunoterapias, como terapia ce- lular adotiva, por exemplo, terapia com células T e um inibidor de ga- ma secretase. Os métodos, composições e usos fornecidos incluem aqueles para terapias de combinação que envolvem a administração ou uso de um inibidor de gama secretase em conjunto com uma tera- pia de células T, como uma terapia de células T geneticamente modifi-
cadas envolvendo células modificadas com um receptor recombinante, como células T de expressão de receptor de antígeno quimérico (CAR), como células T de expressão de receptor de antígeno quiméri- co (CAR) anti-BCMA. Também são fornecidas composições, métodos de administração a indivíduos, artigos de fabricação e kits para uso nos métodos. Em alguns aspectos, as características dos métodos e células proporcionam atividade aumentada ou melhorada, eficácia, persistência, expansão e/ou proliferação de células T para terapia ce- lular adotiva ou células T endógenas recrutadas por agentes imunote- rapêuticos. Antecedente
[004] Várias estratégias estão disponíveis para imunoterapia, por exemplo, administração de células T modificadas para terapia adotiva. Por exemplo, estão disponíveis estratégias para a modificação de cé- lulas T que expressam receptores de antígeno geneticamente modifi- cados, como CARs, e para administrar composições que contêm es- sas células a indivíduos. Estratégias realçadas são necessárias para melhorar a eficácia das células, por exemplo, melhorar a persistência, atividade e/ou proliferação das células após a administração aos indi- víduos. São fornecidos métodos, composições, kits e sistemas que atendem a essas necessidades. Sumário
[005] São fornecidas no presente documento terapias de combi- nação que envolvem administração de uma imunoterapia envolvendo uma terapia celular, como uma terapia de células T, e um inibidor da gama secretase. Em alguns aspectos, os métodos fornecidos para tra- tar um indivíduo com uma doença ou distúrbio envolvem a administra- ção de uma imunoterapia ou agente imunoterapêutico, como uma composição que inclui células para terapia celular adotiva, por exem- plo, como uma terapia de células T (por exemplo, células T de expres-
são de CAR) e administração de um inibidor da gama secretase. Em algumas modalidades, a terapia celular, como células T de expressão de CAR, compreende um domínio de ligação ao antígeno que se liga a um antígeno de maturação de células B (BCMA), como o BCMA de superfície. Em algumas modalidades, o método compreende ainda a seleção de um indivíduo para tratamento, em que o indivíduo tem uma baixa expressão do BCMA de superfície em uma célula (como uma célula de tumor/câncer). Em algumas modalidades, a terapia celular compreende um receptor recombinante, como um receptor que não se liga ao BCMA. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase proíbe a clivagem intramembranar de um receptor em uma célula (co- mo uma célula de tumor/câncer), em que a terapia celular visa especi- ficamente o receptor. Em algumas modalidades, a terapia de combina- ção geralmente envolve a administração de um inibidor de gama se- cretase e a administração de uma terapia celular, como uma composi- ção que inclui células para terapia celular adotiva, por exemplo, como uma terapia de células T (por exemplo, células T de expressão de CAR), em que a administração de gama secretase é subsequente à administração de terapia celular. Em algumas modalidades, a terapia modula a atividade de uma terapia celular.
[006] São no presente documento fornecidos métodos de trata- mento que envolvem: (a) administrar uma terapia celular a um indiví- duo com uma doença ou distúrbio, a referida terapia celular compre- endendo uma dose de células geneticamente modificadas que expres- sam um receptor de antígeno quimérico (CAR) compreendendo um domínio de ligação ao antígeno que se liga especificamente ao antíge- no de maturação das células B de superfície (BCMA); e (b) administrar ao indivíduo um inibidor da gama secretase, em que a ligação do CAR ao BCMA de superfície, ou uma medida indicativa de função ou ativi- dade após a exposição a células que expressam o BCMA de superfí-
cie, não é reduzida ou bloqueada ou não é substancialmente reduzida ou bloqueada na presença de uma forma solúvel ou vertente do BCMA. Em algumas modalidades, a ligação do CAR ao BCMA de su- perfície, ou uma medida indicativa de função ou atividade após a ex- posição a células que expressam BCMA de superfície, não são redu- zidas ou bloqueadas ou não são substancialmente reduzidas ou blo- queadas na presença de uma forma solúvel ou vertente do BCMA em uma concentração ou quantidade da forma solúvel ou vertente do BCMA correspondente a uma concentração ou quantidade presente no soro ou sangue ou plasma do indivíduo ou de um paciente com mi- eloma múltiplo ou, em média, em uma população de pacientes para a doença ou distúrbio, ou em uma concentração ou quantidade do BCMA solúvel ou vertente no qual a ligação ou medida é reduzida ou bloqueada, ou é substancialmente reduzida ou bloqueada, para célu- las que expressam um CAR anti-BCMA de referência no mesmo en- saio.
[007] São fornecidos no presente documento métodos de trata- mento que envolvem: administrar uma terapia celular a um indivíduo com uma doença ou distúrbio, a referida terapia celular compreenden- do uma dose de células geneticamente modificadas que expressam um receptor de antígeno quimérico compreendendo um domínio de ligação ao antígeno que se liga ao antígeno de maturação de célula B de superfície (BCMA), em que a ligação do CAR ao BCMA de superfí- cie ou uma medida indicativa de função ou atividade, após exposição a células que expressam o BCMA de superfície, não é reduzida ou blo- queada ou não é substancialmente reduzida ou bloqueada na presen- ça de uma forma solúvel ou vertente do BCMA, opcionalmente em uma concentração ou quantidade da forma solúvel ou vertente do BCMA correspondente a uma concentração ou quantidade presente no soro ou sangue ou plasma do indivíduo ou de um paciente com mi-
eloma múltiplo ou, em média, na população de pacientes para a doen- ça ou distúrbio, ou em uma concentração ou quantidade de BCMA so- lúvel ou vertente, em que a ligação ou medida é reduzida ou bloquea- da, ou é substancialmente reduzida ou bloqueada, para células que expressam um CAR anti-BCMA de referência no mesmo ensaio, em que, no momento do início da administração da terapia celular, o indi- víduo foi previamente administrado e/ou está em tratamento com um inibidor da gama secretase.
[008] São fornecidos no presente documento métodos de trata- mento que envolvem: administração de um inibidor da gama secretase a um indivíduo com uma doença ou distúrbio, em que, no momento do início da administração do inibidor, o indivíduo foi previamente admi- nistrado e/ou está em tratamento com, uma terapia celular, a referida terapia celular compreendendo uma dose de células geneticamente modificadas que expressam um receptor de antígeno quimérico com- preendendo um domínio de ligação ao antígeno que liga especifica- mente o antígeno de maturação de células B de superfície (BCMA), em que a ligação do CAR ao BCMA de superfície ou uma medida indi- cativo de função ou atividade, após a exposição a células que expres- sam o BCMA de superfície, não é reduzida ou bloqueada ou não é substancialmente reduzida ou bloqueada na presença de uma forma solúvel ou vertente do BCMA, opcionalmente em uma concentração ou quantidade da forma solúvel ou vertente do BCMA correspondente a uma concentração ou quantidade presente no soro ou sangue ou plasma do indivíduo ou de um paciente com mieloma múltiplo, ou, em média, em uma população de pacientes para a doença ou distúrbio, ou em uma concentração ou quantidade de BCMA solúvel ou vertente, em que a ligação ou medida é reduzida ou bloqueada, ou é substanci- almente reduzida ou bloqueada, para células que expressam um CAR anti-BCMA de referência no mesmo ensaio.
[009] São fornecidos no presente documento métodos de trata- mento que envolvem: (a) selecionar um indivíduo com câncer no qual as células do câncer no indivíduo (i) expressam o CD138 de superfi- cie, o CD38 de superfície ou um marcador das células plasmáticas de superfície ou são derivadas das células plasmáticas e (ii) compreen- dem baixa expressão do antígeno de maturação das células B de su- perfície (BCMA) e/ou um nível de expressão do BCMA de superfície abaixo de um nível limiar; (b) administrar uma terapia celular ao indiví- duo selecionado em (a), a referida terapia celular compreendendo uma dose de células geneticamente modificadas que expressam um recep- tor de antígeno quimérico compreendendo um domínio de ligação ao antígeno que se liga ao antígeno de maturação de células B (BCMA); e (c) administrar ao indivíduo um inibidor da gama secretase.
[0010] São fornecidos no presente documento métodos de trata- mento que envolvem: (a) administrar um inibidor da gama secretase a um indivíduo com câncer, sendo o indivíduo selecionado como tendo células plasmáticas compreendendo baixa expressão do antígeno de maturação das células B de superfície (BCMA) e/ou um nível de ex- pressão do BCMA de superfície abaixo de um nível limiar; e (b) admi- nistrar ao indivíduo uma terapia celular para tratamento do câncer, a referida terapia celular compreendendo uma dose de células geneti- camente modificadas expressando um receptor de antígeno quimérico compreendendo um domínio de ligação ao antígeno que se liga espe- cificamente ao antígeno de maturação de células B (BCMA).
[0011] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o nível limiar de expressão do BCMA de superfície é inferior à expressão ou nível médio ou mediano do BCMA de superfície nas células plasmáticas em uma pluralidade de indivíduos controle, opcionalmente em que os indivíduos controle são um grupo de indivíduos saudáveis ou normais.
[0012] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, a baixa expressão do BCMA de su- perfície está presente quando menor que ou menor que cerca de 60%, menor que ou menor que cerca de 50%, menor ou menor que cerca de 40%, menor ou menor que cerca de 30%, menor ou menor que cerca de 20% ou menor que ou menor que cerca de 10% das células plas- máticas ou células com um marcador ou fenótipo de célula plasmática ou células cancerígenas, no indivíduo que expressa o BCMA de super- fície; ou o nível limiar do BCMA de superfície é menor ou menor que cerca de 60%, menor ou menor que cerca de 50%, menor ou menor que cerca de 40%, menor ou menor que cerca de 30%, menor ou me- nor que cerca de 20% ou menor ou menor que cerca de 10% das célu- las plasmáticas, ou células com marcador ou fenótipo de célula plas- mática ou células cancerígenas, no indivíduo que expressa BCMA de superfície.
[0013] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, a expressão do BCMA de superfície é determinada por citometria de fluxo e/ou um imunoensaio.
[0014] Em algumas modalidades de qualquer uma das modalida- des fornecidas neste documento, a ligação do CAR ao BCMA de su- perfície ou uma medida indicativa de função ou atividade, após a ex- posição a células que expressam o BCMA de superfície, não é reduzi- da ou bloqueada ou não é substancialmente reduzida ou bloqueada na presença de uma forma solúvel ou vertente do BCMA, opcionalmente em uma concentração ou quantidade da forma solúvel ou vertente do BCMA correspondente a uma concentração ou quantidade presente no soro ou sangue ou plasma do indivíduo ou de um paciente com mi- eloma múltiplo, ou em média, em uma população de pacientes para a doença ou distúrbio, ou em uma concentração ou quantidade de BCMA solúvel ou vertente, em que a ligação ou medida é reduzida ou bloqueada, ou é substancialmente reduzida ou bloqueada, para célu- las que expressam um CAR anti-BCMA de referência no mesmo en- saio.
[0015] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o domínio de ligação ao antígeno não se liga ao BCMA solúvel ou se liga ao BCMA solúvel com uma afinida- de menor que a afinidade do referido domínio de ligação ao antígeno que se liga ao BCMA de superfície. Em algumas modalidades, a afini- dade do domínio de ligação ao antígeno ao antígeno de maturação das células B de superfície (BCMA) é pelo menos 1 vez, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 ve- zes mais que a afinidade com o BCMA solúvel.
[0016] Em algumas das modalidades fornecidas, o CAR anti- BCMA é um CAR anti-BCMA, como no presente documento descrito. Entre um CAR anti-BCMA fornecido para uso nos métodos e usos no presente documento, está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno contém uma região Vx compreendendo a se- quência mencionada na SEQ ID NO: 24 ou uma sequência de amino- ácidos com pelo menos em ou cerca de 90%, em ou cerca de 91%, em ou cerca de 92%, em ou cerca de 93%, em ou cerca de 94%, em ou cerca de 95%, em ou cerca de 95%, em ou cerca de 96%, em ou cerca de 97%, em ou cerca de 98%, ou com cerca de 99% de identi- dade com a SEQ ID NO: 24; e contém uma região Vi. compreendendo a sequência mencionada na SEQ ID NO: 25 ou uma sequência de aminoácidos que possui pelo menos cerca de 90%, ou 91%, ou 92%, ou 93% ou 93%, ou cerca de 94%, a ou cerca de 95%, a ou cerca de 96%, a ou cerca de 97%, a ou cerca de 98%, ou a ou cerca de 99% de identidade com a SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, o anti- corpo ou fragmento de ligação ao antígeno do CAR fornecido contém uma região Vx que possui uma CDRH1, uma CDRH2 e uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NOS: 173, 174 e 175, respectivamente e uma região V. que possui uma CDRLI1, uma CDRL2 e uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoáci- dos da SEQ ID NOS: 183, 184 e 185, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do CAR fornecido contém uma região Vx que possui uma CDRH1, uma CDRH2 e uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NOS: 176, 177 e 175, respectivamente e uma região V. que possui uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NOS: 183, 184 e 185, respec- tivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de |i- gação ao antígeno do CAR fornecido contém uma região Vx que pos- sui uma CDRH1, uma CDRH2 e uma CDRH3 compreendendo a se- quência de aminoácidos da SEQ ID NOS: 178, 179 e 175, respectiva- mente e uma região V.L que possui uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NOS: 183, 184 e 185, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticor- po ou fragmento de ligação ao antígeno do CAR fornecido contém uma região Vu que possui uma CDRH1, uma CDRH2 e uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NOS: 180, 181 e 182, respectivamente e uma região V. que possui uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoáci- dos de SEQ ID NOS: 186, 187 e 185, respectivamente.
Em algumas modalidades, a região Vx compreende a sequência mencionada na SEQ |D NO: 24, e a região V. compreende a sequência mencionada na SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmen- to de ligação ao antígeno é um fragmento de anticorpo de cadeia úni- ca, como um scFv.
Em algumas modalidades, o scFvy compreende a sequência de aminoácidos mencionada na SEQ ID NO: 188 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90%, em ou cerca de 91%, em ou cerca de 92%, em ou cerca de 93%, em ou cer- ca de 94%, em ou cerca de 95%, em ou cerca de 96%, em ou cerca de 97%, em ou cerca de 98%, ou em ou cerca de 9 a SEQ ID NO: 188. Em algumas modalidades, o CAR anti-BCMA tem a sequência de ami- noácidos mencionada na SEQ NO: 124 ou uma sequência de aminoá- cidos pelo menos em ou cerca de 90%, em ou cerca de 91%, em ou cerca de 92%, em ou cerca de 93%, a ou cerca de 94%, a ou cerca de 95%, a ou cerca de 96%, a ou cerca de 97%, a ou cerca de 98%, ou a ou cerca de 99% de identidade com a SEQ ID NO: 124. Em algumas modalidades, o CAR anti-BCMA tem a sequência de aminoácidos mencionada na SEQ NO: 125 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90%, em ou cerca de 91%, em ou cerca de 92%, em ou cerca de 93%, a ou cerca de 94%, a ou cerca de 95%, a ou cerca de 96%, a ou cerca de 97%, a ou cerca de 98%, ou a ou cer- ca de 99% de identidade com a SEQ ID NO: 125.
[0017] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o inibidor de gama secretase inibe a clivagem intramembranar de BCMA.
[0018] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o inibidor de gama secretase inibe a clivagem intramembranar de BCMA com uma concentração inibidora semimáxima (ICso) de 0,01 nM a 10 nM, 0,01 nM a 5 nM, 0,01 nM a 1 nM, 0,01 nM a 0,5 nM, 0,01 nM a 0,35 nM, 0,01 nM a 0,25 nM, 0,01 nM a 0,1 nM, 0,01 nM a 0,05 nM, 0,05 nM a 10 nM, 0,05 nM a 5 AM, 0,05 nM a 1 NM, 0,05 nM para 0,5 nM, 0,05 nM a 0,35 nM, 0,05 nM a 0,25 nM, 0,05 nM a 0,1 nM, 0,1 NM a 10 NM, 0,1 NM a 5 NM, 0,1 NM a 1 nM, 0,1 NM, a 0,5 nM, 0,1 nM a 0,35 nM, 0,1 nM a 0,25 nM, 0,25 nM a 10 nM, 0,25 nM a 5 nM, 0,25 nM a 1 NM, 0,25 nM a 0,5 NM, 0,25 nM a 0,35 nM, 0,35 nM a 10 nM, 0,35 nM a 5 nM, 0,35 NM a 1 AM, 0,35 nM a 0,5 nM, 0,5 nM a 10 NM, 0,5 NM a 5 NM, 0,5 nMa1nM,1nMa nM, 1 NM a 5 NM ou 5 NM a 10 nM.
[0019] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o inibidor de gama secretase inibe a clivagem intramembranar de BCMA com uma concentração inibidora semimáxima (ICso) menor ou menor que cerca de 10 nM, 5 nM, 1 AM, 0,5 nM, 0,35 nM, 0,25 nM, 0,1 nM, 0,05 nM ou 0,01 nM ou menos.
[0020] São no presente documento fornecidos métodos de trata- mento que envolvem: (a) administrar uma terapia celular a um indiví- duo com uma doença ou distúrbio, compreendendo a referida terapia celular uma dose de células geneticamente modificadas que expres- sam um receptor recombinante, em que o receptor recombinante não se liga especificamente ao antígeno de maturação de células B de su- perfície (BCMA); e (b) administrar um inibidor da gama secretase.
[0021] São no presente documento fornecidos métodos de trata- mento que envolvem: administrar uma terapia celular a um indivíduo com uma doença ou distúrbio, a referida terapia celular compreenden- do uma dose de células geneticamente modificadas que expressam um receptor recombinante, em que o receptor recombinante não se liga especificamente ao antígeno de maturação de célula B de superfíi- cie (BCMA), em que, no momento do início da administração da tera- pia celular, o indivíduo foi previamente administrado e/ou está em tra- tamento com um inibidor da gama secretase.
[0022] São fornecidos no presente documento métodos de trata- mento que envolvem: administração de um inibidor da gama secretase a um indivíduo com uma doença ou distúrbio, em que, no momento do início da administração do inibidor, o indivíduo foi previamente admi- nistrado e/ou está em tratamento com uma terapia celular, a referida terapia celular compreendendo uma dose de células geneticamente modificadas que expressam um receptor recombinante, em que o re- ceptor recombinante não se liga especificamente ao antígeno de matu-
ração de células B de superfície (BCMA).
[0023] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o receptor recombinante se liga espe- cificamente a um antígeno alvo associado à doença ou distúrbio.
[0024] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o antígeno alvo é selecionado dentre anidrase carbônica 9 (CAIX), Her2/neu (erbB2 de tirosina cinase re- ceptora), LI-CAM, CD19, CD20, CD22, mesotelina, CEA e antígeno de superfície da hepatite B, receptor antifolato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, glicoproteína epitelial 2 (EPG-2), glicopro- teína epitelial 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, dímeros erbB, EGFR vill, proteína de ligação ao folato (FBP), FCRL5, FCRH5, receptor de acetilcolina fetal, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alfa, IL- 13R-alfa2, receptor de domínio de inserção de cinase (kdr), cadeia le- ve capa, Lewis Y, molécula de adesão de células L1, (LI-CAM), antí- geno associado ao melanoma (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-AG6, an- tígeno de melanoma preferencialmente expresso (PRAME), survivina, TAG72, B7-H6, receptor alfa 2 da I1L-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW- MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-Al MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, receptor-a de folato, CD44v6, CD44v7/8, integrina de avb6, 8H9, NCAM, receptores de VEGF, 5T4, AchR Foetal, ligantes de NKG2D, CD44v6, antígeno dual, antígeno câncer-testículo, mesoteli- na, CMV de murino, mucina 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY- ESO-1, MART-1, gp100, antígeno oncofetal, ROR1I, TAG72, VEGF- R2, antígeno carcinoembrionário (CEA), Her2/neu, receptor de estro- gênio, receptor de progesterona, efrinaB2, CD123, c-Met, GD-2, GD2 O-acetilado (OGD2), CE7, Tumor 1 de Wilms (WT-1), uma ciclina, ci- clina A2, CCL-1, CD138, um antígeno particular de patógeno e um an- tígeno associado a um marcador universal.
[0025] São no presente documento fornecidos métodos de trata-
mento que envolvem: (a) administrar uma terapia celular a um indiví- duo com uma doença ou distúrbio, compreendendo a referida terapia celular uma dose de células geneticamente modificadas que expres- sam um receptor recombinante; e (b) subsequentemente à administra- ção em (a) administração ao indivíduo de um inibidor da gama secre- tase.
[0026] São fornecidos no presente documento métodos de trata- mento que envolvem: administração de um inibidor da gama secretase a um indivíduo com uma doença ou distúrbio, em que, no momento do início da administração do inibidor, o indivíduo foi previamente admi- nistrado e/ou está em tratamento com uma terapia celular, a referida terapia celular compreendendo uma dose de células geneticamente modificadas que expressam receptor recombinante.
[0027] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o receptor recombinante se liga espe- cificamente a um antígeno alvo associado à doença ou distúrbio.
[0028] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o antígeno alvo é selecionado dentre antígeno de maturação de células B (BCMA), anidrase carbônica 9 (CAIX), Her2/neu (erbB2 de tirosina cinase receptora), LI-CAM, CD19, CD20, CD22, mesotelina, CEA e antígeno de superfície da hepatite B, receptor antifolato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, glicoproteína epitelial 2 (EPG-2), glicoproteína epitelial 40 (EPG-40 ), EPHa?2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, dímeros de erbB, EGFR vIlll, proteína de ligação ao folato (FBP), FCRL5, FCRHB5, receptor fetal de acetilco- lina, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alfa, IL-13R-alfa2, receptor de domínio de inserção de cinase (Kkdr), cadeia leve capa, Lewis Y, molé- cula de adesão de células L1, (L1-CAM), antígeno associado ao mela- noma (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE- A6, antígeno de melanoma pre- ferencialmente expresso (PRAME), survivina, TAG72, B7-H6, receptor alfa 2 de 11-13 (I-13Ra2)) CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, receptor-a de folato, CD44v6, CD44v7/8, integrina de avb6, 8H9, NCAM, recepto- res de VEGF, 5T4, AchR fetal, ligantes de NKG2D, CD44v6, antígeno dual, antígeno câncer-testículo, mesotelina, CMV de murino, mucina 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, antíge- no oncofetal, ROR1, TAG72, VEGF-R2, antígeno carcinoembrionário (CEA), Her2/neu, receptor de estrogênio, receptor de progesterona, efrinaB2, CD123, c-Met, GD-2, GD2 O-acetilado (OGD2 ), CE7, tumor de Wilms 1 (WT-1), uma ciclina, ciclina A2, CCL-1, CD138, um antíge- no particular de patógeno e um antígeno associado a um marcador universal. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é Muc1. Em al- gumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente docu- mento fornecidos, o antígeno alvo é o BCMA. Em algumas modalida- des, em que o BCMA é o BCMA de superfície.
[0029] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o inibidor de gama secretase inibe ou reduz ou é capaz de inibir ou reduzir a clivagem de um ou mais alvos selecionados dentre BCMA, Incisura 1, Incisura 2, Incisura 3, Incisura 4, Muc1, Efrina B2, Betaglicana (TGFBR3), CD43, CD44, CSFIR, CXCR1, CXCL16, Delta1, E-cadereína, N-caderina, HLA-A2, IFNaR?2, ILIR1, ILIR2, IL6R ou proteína precursora ameloide (APP). Em algu- mas modalidades, os um ou mais alvos cuja clivagem é reduzida ou inibida compreendem Muc1. Em algumas modalidades, os um ou mais alvos cuja clivagem é reduzida ou inibida, compreendem BCMA.
[0030] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, a clivagem de um ou mais alvos sele- cionados dentre BCMA, Incisura 1, Incisura 2, Incisura 3, Incisura 4, Muc1, Efrina B2, Betaglicana (TGFBR3), CD43, CD44, CSFIR, CXCR1, CXCL16, Delta1, E-cadereína, N-caderina, HLA-A2, IFNaR?2,
ILIR1, ILIR2, IL6R ou proteína precursora ameloide (APP) é inibida ou reduzida ou pode ser inibida ou reduzida pelo inibidor de gama se- cretase. Em algumas modalidades, os um ou mais alvos cuja clivagem é reduzida ou inibida compreendem Muc1. Em algumas modalidades, os um ou mais alvos cuja clivagem é reduzida ou inibida, compreen- dem BCMA.
[0031] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o inibidor de gama secretase inibe o alvo com uma concentração inibidora semimáxima (IC5so) de 0,01 nM a 1 UM, 0,01 nM a 100 nM, 0,01 nM a 10 nM, 0,01 nM para 5 nM, 0,01 nM a 1 nM, 0,01 NM a 0,5 nM, 0,01 nM a 0,25 nM, 0,01 nM a 0,1 AM, 0,01 nM a 0,05 nM, 0,05 nM a 1 uM, 0,05 nM a 100 nM, 0,05 nM a 10 NM, 0,05 nM a 5 nM, 0,05 NM a 1 nM, 0,05 nM a 0,5 nM, 0,05 nM a 0,25 nM, 0,05 nM a 0,1 nM, 0,1 nM a 1 UM, 0,1 nM a 100 NM, 0,1 nM a nM, 0,1 NM a 5 NM, 0,1 NM a 1 NM, 0,1 NM a 0,5 NM, 0,1 nM a 0,25 nM, 0,25 nM a 1 UM, 0,25 nM a 100 nM, 0,25 nM a 10 nM, 0,25nNMa5 NM, 0,25 NM para 1 nM, 0,25 nM a 0,5 nM, 0,5 NM a 1 UM, 0,5 NM a 100 nM, 0,5 nM a 10 nM, 0,5 nM a 5 NM, 0,5 NM a 1 AM, 1 NM a 1 UM, 1 nM a 100 nM, 1 NM a 10 nM, 1 NM a 5 NM, 5 nM a 1 UM, 5 nM a 100 NM, 5 nM a 10 nM, 10 nM a 1 UM, 10 nM a 100 nM ou 100 nM a 1 UM.
[0032] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o inibidor de gama secretase inibe o alvo com uma concentração inibidora semimáxima (ICs5o) inferior ou inferior a cerca de 1 uM, 100 nM, 10 nM, 5 nM, 1 nM, 0,5 nM, 0,35 nM, 0,25 nM, 0,1 nM, 0,05 nM ou 0,01 nM ou menos.
[0033] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o inibidor de gama secretase é um inibidor de peptídeo ou inibidor não peptídico. Em algumas modalida- des, o inibidor de gama secretase é um inibidor de peptídeo e o inibi- dor de peptídeo é selecionado dentre derivados de peptídeos aldeídos,
derivados de difluorocetonas, derivados de hidroxietileno dipeptídeo isotere, derivados de peptídeo helicoidal alfa e análogos de dipeptí- deos. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é um inibidor não peptídico e o inibidor não peptídico é um derivado de ben- zodiazepinas ou um derivado de sulfonamidas.
[0034] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o inibidor de gama secretase é um inibidor do estado de transição ou inibidor do estado de não transição.
[0035] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o inibidor de gama secretase é um fármaco anti-inflamatório não esteroide.
[0036] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o inibidor de gama secretase é sele- cionado dentre LY3039478, inibidor de secretase | (GSI |) Z-Leu-Leu- Norleucina; inibidor de y-secretase Il (GSI II); inibidor de y-secretase |lIl (GSI 1), N-Benziloxicarbonil-Leu-leucinal, N-(2-naftoil)-Val- fenilalaninal; inibidor de y-secretase Ill (GSI IV); inibidor de y-secretase Il (GSI V), N-Benziloxicarbonil-Leu-fenilalaninal; inibidor de y- secretase Ill (GSI VI), 1-(S)-endo-N-(1,3,3)-Trimetilbiciclo[2.2.1]hept-2- iI)-4-fluorofenil sulfonamida; inibidor de y-secretase III (GSI VII), Menti- loxicarbonil-LL-CHO; inibidor de y-secretase II! (GSI IX), (DAPT), t-Butil éster de N-[N-(3,5-Difluorofenacetil-L-alanil)]-S-fenilglicina; inibidor de y-secretase X (GSI X), terc-butil éster de ácido (1S-Benzil-4R-[1-(1S- carbamoil-2-fenetilcarbamoil)-1S-3-metilbutilcarbamoil]-2R-hidróxi-5- fenilpentil)kcarbâmico; inibidor de y-secretase XI (GSI XI), 7-amino-4- cloro-3-metóxi-isocumarina; inibidor de y-secretase XII (GSI XII), Z-lle- Leu-CHO; inibidor de y-secretase XIII (GSI XIII), Z-Tyr-lle-Leu-CHO; inibidor de y-secretase XIV (GSI XIV), Z-Cys(t-Bu)-lle-Leu-CHO; inibi- dor de y-secretase XVI (GSI XVI), metil éster de N-[N-3,5- difluorofenacetil]-L-alanil-S-fenilglicina; inibidor de y-secretase XVII
(GSI XVII); inibidor de y-secretase XIX (GSI XIX) ben- zo[e][1 ,4]diazepin-3-il)-butiramida; inibidor de y-secretase XX (GSI XX), (S,S)-2-[2-(3,5-Difluorofenil)acetilamino]-N-(5-metil-6-0x0-6,7-di- hidro-5H-dibenzo[b,d]azepin-7-il)propionamida; inibidor de y-secretase XXI (GSI XXI), (S,S)-2-[2-(3,5-Difluorofenil)-acetilamino]-N-(1-metil-2- ox0-5-fenil-2-,3-di-hidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-3-il)-propionamida; inibidor de Gama40 secretase |, N-trans-3,5-dimetoxicinamoil-lle- leucinal; inibidor de Gama40 secretase |l, N-terc-Butiloxicarbonil-Gly- Val-Valinal Isovaleril-V —V-Sta-A-Sta-OCH3; MK-0752; MRK-003 (Merck); semagacestate/LY450139; RO4929097; PF-03084.014; BMS- 708163; MPC-7869 (modificador da y-secretase), YO-01027 (Dibenza- zepina), Composto E ([(2S)-24[(3,5-Difluorofenil)acetilJamino]Jamino)- N-[(3S)-1-metil-2-0x0-5-fenil-2,3-di-hidro-1H-1,4-benzodiazepin-3- ilpropanamida], LY411575, L-685.458, BMS-289948 cloridrato de (4- cloro-N-(2,5-difluorofenil)-N-((1R)-(4-fluoro-2-[3-(1H-imidazo]|-1- il)propilffenil)etil)Denzenossulfonamida) e BMS-299897 ácido (4-[2- ((1R)-1-([(4-clorofenil)sulfonil]-2,5-difluoroanilino)etil)-5- fluorofenilibutanoico).
[0037] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o inibidor de gama secretase é um composto da estrutura: Composto 1 F 7 F o " é " o E
OM ou um sal farmaceuticamente aceitável do seu hidrato.
[0038] São no presente documento fornecidos métodos de trata- mento que envolvem: (a) administrar uma terapia celular a um indiví-
duo com uma doença ou distúrbio, a referida terapia celular que com- preende uma dose de células geneticamente modificadas que expres- sam um receptor recombinante; e (b) administrar ao indivíduo um composto da estrutura: Composto 1 r
F F o " RA vz Po NA o ê tm o
OM ou um sal farmaceuticamente aceitável do seu hidrato.
[0039] São fornecidos no presente documento métodos de trata- mento que envolvem: administrar terapia celular a um indivíduo com uma doença ou distúrbio, a referida terapia celular que compreende uma dose de células geneticamente modificadas que expressam um receptor recombinante, em que, no momento do início da administra- ção da terapia celular, o indivíduo foi previamente administrado e/ou está em tratamento com um composto da estrutura: Composto 1
F F. EF o FP
RA V Po gg o z o oH ou um sal farmaceuticamente aceitável do seu hidrato.
[0040] São fornecidos no presente documento métodos de trata- mento que envolvem: administração a um indivíduo com uma doença ou distúrbio um composto da estrutura:
Composto 1 F. 7 F o ms
MÁ À Z o z d oH ou um sal farmaceuticamente aceitável do seu hidrato, em que, no momento do início da administração, o indivíduo foi previamente admi- nistrado e/ou está em tratamento com uma terapia celular, a referida terapia celular que compreende uma dose de células geneticamente modificadas que expressam um receptor recombinante.
[0041] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o receptor recombinante se liga espe- cificamente a um antígeno alvo associado à doença ou distúrbio. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é selecionado dentre antígeno de maturação de células B (BCMA), anidrase carbônica 9 (CAIX), Her2/neu (erbB2 de tirosina cinase receptora), L1I-CAM, CD19, CD20, CD22, mesotelina, CEA e antígeno de superfície da hepatite B, recep- tor antifolato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, glico- proteína epitelial 2 (EPG-2), glicoproteína epitelial 40 (EPG-40), EPHa?2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, dímeros erbB, EGFR villl, proteína de ligação ao folato (FBP), FCRL5, FCRHB5, receptor de acetilcolina fetal, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alfa, IL-13R-alfa2, receptor de domínio de inserção de cinase (Kkdr), cadeia leve capa, Lewis Y, molécula de adesão de células L1, (LI-CAM), antígeno associado ao melanoma (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-AS, antígeno de melanoma preferenci- almente expresso (PRAME), survivina, TAG72, B7-H6, receptor alfa-2 da I1L-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA- AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, receptor-a de folato, CD44v6, CD44v7/8, integrina de avb6, 8H9, NCAM, receptores de VEGF, 574,
AchR Fetal, ligantes de NKG2D, CD44v6, antígeno dual, antígeno câncer-testículo, mesotelina, CMV de murino, mucina 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, antígeno onco- fetal, ROR1I, TAG72, VEGF-R2, antígeno carcinoembrionário (CEA), Her2/neu, receptor de estrogênio, receptor de progesterona, efrinaB2, CD123, c-Met, GD-2, GD2 O-acetilado (OGD2), CE7, Tumor 1 de Wilms (WT-1), uma ciclina, ciclina A2, CCL-1, CD138, um antígeno particular de patógeno e um antígeno associado a um marcador uni- versal. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é Muc1. Em algu- mas modalidades, o antígeno alvo é BCMA. Em algumas modalidades, o BCMA é o BCMA de superfície. Em algumas modalidades, o recep- tor recombinante não se liga ao BCMA solúvel ou se liga ao BCMA so- lúvel com uma afinidade menor que a afinidade do referido receptor recombinante para a ligação ao BCMA de superfície. Em algumas mo- dalidades, a afinidade do domínio de ligação ao antígeno ao antígeno de maturação das células B de superfície (BCMA) é pelo menos 1 vez, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes mais que a afinidade com o BCMA solúvel.
[0042] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o indivíduo compreende células plas- máticas ou células cancerígenas ou células de mieloma ou células que expressam marcadores de células plasmáticas, que expressam BCMA de superfície.
[0043] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o indivíduo é selecionado como tendo células que compreende baixa expressão do antígeno de maturação de células B de superfície (BCMA); e/ou selecionar um indivíduo para administração da terapia celular e/ou inibidor com base em células plasmáticas que compreende baixa expressão do BCMA de superfície.
[0044] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o alvo do inibidor de gama secretase é o antígeno alvo e o inibidor de gama secretase inibe a clivagem do antígeno alvo.
[0045] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, a administração do inibidor: diminui a clivagem ou a eliminação de BCMA das células, opcionalmente as cé- lulas plasmáticas, em mais que ou mais que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação com o nível de clivagem ou eliminação de BCMA das células no indivíduo an- tes da administração do inibidor; diminui o nível ou a quantidade de BCMA detectado no soro de um indivíduo em mais que ou mais que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação com o nível ou quantidade de BCMA no soro do indivíduo antes da administração do inibidor; e/ou aumenta a expres- são do BCMA de superfície nas células, opcionalmente, nas células plasmáticas em mais que ou mais que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação com o nível de BCMA de superfície nas células do indivíduo antes da administra- ção do inibidor.
[0046] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, a administração do inibidor: diminui a clivagem ou eliminação do alvo ou do antígeno alvo, opcionalmente BCMA ou Muc1, a partir de células, opcionalmente células plasmáti- cas, em mais que ou mais que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação com o nível de clivagem ou eliminação do antígeno alvo ou alvo das células no indiví- duo antes de administração do inibidor; diminui o nível ou a quantidade do antígeno alvo ou alvo, opcionalmente BCMA ou Muc1, detectado no soro de um indivíduo em mais que ou mais que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação com o nível ou quantidade do antígeno alvo ou alvo no soro do indiví- duo antes da administração do inibidor; e/ou aumenta a expressão do alvo de superfície ou antígeno alvo, opcionalmente BCMA ou Muc1, nas células, opcionalmente nas células plasmáticas, em mais que ou mais que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação com o nível de alvo de superfície ou an- tígeno alvo nas células do indivíduo antes da administração do inibi- dor.
[0047] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, a doença ou distúrbio é um câncer. Em algumas modalidades, o câncer é uma malignidade de células B. Em algumas modalidades, o câncer é mieloma múltiplo, plasmocitoma, um câncer de origem de células plasmáticas e/ou um câncer de ori- gem de células B.
[0048] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o inibidor é administrado por via oral, subcutânea ou intravenosa. Em algumas modalidades, o inibidor é administrado por via oral.
[0049] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o inibidor é administrado pelo menos ou administrado seis vezes ao dia, cinco vezes ao dia, quatro vezes ao dia, três vezes ao dia, duas vezes ao dia, duas vezes ao dia, uma vez ao dia, a cada dois dias, três vezes por semana, pelo menos uma vez por semana ou apenas uma vez. Em algumas modalidades, o inibidor é administrado três vezes por semana.
[0050] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, a administração do inibidor é realiza- da em um ciclo de tratamento que é pelo menos ou pelo menos cerca de ou 14 dias, pelo menos ou pelo menos cerca de ou 21 dias ou pelo menos ou pelo menos cerca de 28 dias.
[0051] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o inibidor é administrado ou cada ad- ministração do inibidor é administrada independentemente, em uma quantidade de 0,5 mg a 500 mg, 0,5 mg a 250 mg, 0,5 mg a 100 mg, 0,5 mg a 50 mg, 0,5 mg a 25 mg, 0,5 mg a 10 mg, 0,5 mg a 5,0 mg, 0,5 mg a 2,5 mg, 0,5 mg a 1,0 mg, 1,0 mg a 500 mg, 1,0 mg a 250 mg, 1,0 mg a 100 mg, 1,0 mg a 50 mg, 1,0 mg a 25 mg, 1,0 mg a 10 mg, 1,0 mg a 5,0 mg, 1,0 mg a 2,5 mg, 2,5 mg a 500 mg, 2,5 mg a 250 mg, 2,5 mg a 100 mg, 2,5 mg a 50 mg, 2,5 mg a 25 mg, 2,5 mg a 10 mg, 2,5 mg a 5,0 mg, 5,0 mg a 500 mg, 5,0 mg a 250 mg, 5,0 mg a 100 mg, 5,0 mg a 50 mg, 5,0 mg a 25 mg, 5,0 mg a 10 mg, 10 mg a 500 mg, 10 mg a 250 mg, 10 mg a 100 mg, 10 mg a 50 mg, 10 mg a 25 mg, 25 mg a 500 mg, 25 mg a 250 mg, 25 mg a 100 mg, 25 mg a 50 mg, 50 mg a 500 mg, 50 mg a 250 mg, 50 mg a 100 mg, 100 mg a 500 mg, 100 mg a 250 mg ou 250 mg a 500 mg. Em algumas modalidades, o inibidor é administrado ou cada administração do inibidor é adminis- trada independentemente, em uma quantidade que é pelo menos ou pelo menos cerca de ou é ou é cerca de 0,5 mg, 1,0 mg, 2,5 mg, 5,0 mg, 10,0 mg, 25 mg, 50 mg, 100 mg, 250 mg ou 500 mg.
[0052] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o receptor recombinante é um recep- tor de célula T transgênica (TCR) ou um receptor funcional de não cé- lula T. Em algumas modalidades, o receptor recombinante é um recep- tor quimérico, que opcionalmente é um receptor de antígeno quimérico (CAR). Em algumas modalidades, o receptor de antígeno quimérico (CAR) compreende um domínio de reconhecimento de antígeno extra- celular que se liga especificamente ao antígeno e um domínio de sina- lização intracelular que compreende um ITAM. Em algumas modalida- des, o domínio de sinalização intracelular compreende o domínio intra- celular de uma cadeia de CD3-zeta (CD36). Em algumas modalidades,
o receptor de antígeno quimérico (CAR) compreende ainda uma região de sinalização coestimuladora. Em algumas modalidades, a região de sinalização coestimuladora compreende um domínio de sinalização derivado de CD28 ou 4-1BB, opcionalmente CD28 humano ou 4-1BB humano. Em algumas modalidades, a região de sinalização coestimu- ladora é um domínio derivado de 4-1BB, opcionalmente 4-1BB huma- no.
[0053] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o indivíduo é um humano.
[0054] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o BCMA é BCMA humano ou o antí- geno alvo é um antígeno humano.
[0055] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, as células geneticamente modificadas compreendem células T ou células NK. Em algumas modalidades, a terapia celular é uma terapia de células T, e a dose de células geneti- camente modificadas compreende células T. Em algumas modalida- des, as células T são CD4+ e/ou CD8+. Em algumas modalidades, as células T são células T primárias obtidas de um indivíduo.
[0056] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, a terapia celular compreende células que são autólogas ao indivíduo.
[0057] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, a terapia celular compreende células que são alogênicas ao indivíduo.
[0058] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, a terapia celular compreende a admi- nistração de cerca de 1 x 10º a 5 x 10º células de expressão de recep- tores recombinantes totais, células T totais ou células mononucleares do sangue periférico total (PBMCs); a terapia celular compreende a administração de ou de cerca de 1 x 10º a 1 x 10º células de expres- são de receptores recombinantes totais, células T totais ou PBMCs totais; de ou de cerca de 5 x 10º a 1 x 107 células de expressão de re- ceptores recombinantes totais, células T totais ou PBMCs totais; ou de ou de cerca de 1 x 10º a 1 x 107 células de expressão de receptores recombinantes totais, células T totais ou PBMCs totais, cada uma in- clusive.
[0059] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, a terapia celular compreende a admi- nistração de não mais do que 5 x 10º células de expressão de recepto- res recombinantes totais, células T totais ou células mononucleares do sangue periférico totais (PBMCs); não mais que 2,5 x 10º células de expressão de receptores recombinantes totais, células T totais ou PBMCs totais; não mais que 1 x 108 células de expressão de recepto- res recombinantes totais, células T totais ou PBMCs totais; não mais de 1 x 10” células de expressão de receptores recombinantes totais, células T totais ou PBMCs totais; não mais do que 0,5 x 107 células de expressão de receptores recombinantes totais, células T totais ou PBMCs totais; não mais que 1 x 10º células de expressão de recepto- res recombinantes totais, células T totais ou PBMCs totais; não mais que 0,5 x 10º células de expressão de receptores recombinantes to- tais, células T totais ou PBMCs totais.
[0060] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o início da administração do inibidor é precedente, simultaneamente ou subsequentemente ao início da ad- ministração da terapia celular. Em algumas modalidades, o inibidor é administrado antes do início da administração da terapia celular. Em algumas modalidades, o início da administração do inibidor ocorre dentro de, ou cerca de, 1 hora, 2 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas ou 1 semana antes do início da adminis-
tração da terapia celular. Em algumas modalidades, o inibidor é admi- nistrado subsequentemente ao início da administração da terapia celu- lar. Em algumas modalidades, o início da administração do inibidor es- tá dentro ou dentro de cerca de 1 hora, 2 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 14 dias, 21 dias, 28 dias ou mais após o início da administração da terapia celular. Em al- gumas modalidades, o inibidor é administrado até 7 dias, 14 dias, 21 dias, 28 dias ou mais após o início da administração das células.
[0061] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o inibidor é administrado em um mo- mento em que: o número de células da terapia celular detectável no sangue do indivíduo diminui em comparação com o indivíduo em um momento precedente após iniciação da administração das células; o número de células da terapia celular detectável no sangue é menor ou menor que 1,5 vezes, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 50 vezes ou 100 vezes ou menos o número de pico ou máximo de células da terapia celular detectável no sangue do indivíduo após o início da administração da administração das células; e/ou em um momento após um nível de pico ou máximo das células da terapia celular serem detectáveis no sangue do indivíduo, o número de células ou derivado das células detectáveis no sangue do indivíduo é menor que 10%, menor que 5%, menor que 1% ou menor que 0,1% das células mono- nucleares do sangue periférico totais (PBMCs) no sangue do indivíduo.
[0062] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o método compreende ainda a admi- nistração de uma quimioterapia com linfodepletação antes da adminis- tração da terapia celular e/ou em que o indivíduo recebeu uma quimio- terapia com linfodetectomia antes da administração das células. Em algumas modalidades, a quimioterapia que destrói a linfa compreende a administração de fludarabina e/ou ciclofosfamida ao indivíduo.
[0063] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o método compreende ainda a admi- nistração de um esteroide, opcionalmente em que o esteroide é admi- nistrado antes, simultaneamente e/ou subsequentemente ao início da administração do inibidor, opcionalmente em que o esteroide é admi- nistrado durante o ciclo de tratamento com o inibidor. Em algumas modalidades, o esteroide é ou compreende dexametasona.
[0064] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, a terapia celular exibe expansão e/ou persistência aumentada ou prolongada no indivíduo em comparação com um método no qual a terapia celular é administrada ao indivíduo na ausência do inibidor de gama secretase.
[0065] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o método evita, reduz ou melhora um ou mais sintomas ou resultados da doença ou distúrbio.
[0066] São no presente documento fornecidos métodos de trata- mento que envolvem: (a) administração a um indivíduo com uma do- ença ou distúrbio, um agente terapêutico ou terapia que tem como alvo ou é específico para o antígeno de maturação de células B (BCMA); e (b) administrar um inibidor de gama secretase ao indivíduo.
[0067] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o agente ou terapia terapêutica é ou compreende um anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno, opcionalmente um anticorpo biespecífico. Em algumas modalidades, agente terapêutico ou terapia é um anticorpo biespecífico que tem co- mo alvo adicional ou se liga especificamente a um antígeno de célula T, opcionalmente CD2 ou CD3. Em algumas modalidades, o agente ou terapia terapêutica é um anticorpo biespecífico que visa ainda segundo antígeno, opcionalmente, em que o segundo antígeno é selecionado a partir de CD19, CD20, CD22, CD33, CD38, CS1, ROR1, GPC3,
CD123, IL-13R, CD138, c-Met, EGFRvIIl, GD-2, NY-ESO-1, MAGE A3 e glicolipídeo F77.
[0068] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o inibidor de gama secretase é sele- cionado dentre LY3039478, inibidor de secretase | (GSI |) Z-Leu-Leu- Norleucina; inibidor de y-secretase Il (GSI II); inibidor de y-secretase Ill (GSI 1), N-Benziloxicarbonil-Leu-leucinal, N-(2-naftoil)-Val- fenilalaninal; inibidor de y-secretase III (GSI IV); inibidor de y-secretase 1 (GSI V), N-Benziloxicarbonil-Leu-fenilalaninal; inibidor de y- secretase Ill (GSI VI), 1-(S)-endo-N-(1,3,3)-trimetilbiciclo[2.2.1]hept-2- iI)-4-fluorofenil sulfonamida; inibidor de y-secretase Ill (GSI VII), Menti- loxicarbonil-LL-CHO; inibidor de y-secretase Ill (GSI IX), (DAPT), T- Butil éster de N-[N-(3,5-Difluorofenacetil-L-alanil)]-S-fenilglicina; inibi- dor de y-secretase X (GSI X), terc-butil éster de ácido (1S-benzil-4R- [1-(1S-carbamoil-2-fenetilcarbamoil)-1S-3-metilbutilcarbamoil]-2R- hidróxi-5-fenilpentil)carbâmico; inibidor de y-secretase XI (GSI XI), 7- amino-4-cloro-3-metóxi-isocumarina; inibidor de y-secretase XII (GSI XII), Z-lle-Leu-CHO; inibidor de y-secretase XIII (GSI XIII), Z-Tyr-lle- Leu-CHO; inibidor de y-secretase XIV (GSI XIV), Z-Cys(t-Bu)-lle-Leu- CHO; inibidor de y-secretase XVI (GSI XVI), metil éster de N-[N-3,5- difluorofenacetil]-L-alanil-S-fenilglicina; inibidor de y-secretase XVII (GSI XVII); inibidor de y-secretase XIX (GSI XIX) ben- zo[e][1 ,4]diazepin-3-il)-butiramida; inibidor de y-secretase XX (GSI XX), (S,S)-2-[2-(3,5-Difluorofenil)acetilamino]-N-(5-metil-6-0x0-6,7-di- hidro-5H-dibenzo[b,d]Jazepin-7-il)propionamida; inibidor de y-secretase XXI (GSI XXI), (S,S)-2-[2-(3,5-Difluorofenil)-acetilamino]-N-(1-metil-2- ox0-5-fenil-2-,3-di-hidro-1H-benzo[e][1 ,4]diazepin-3-il)-propionamida; inibidor de Gama40 secretase |, N-trans-3,5-dimetoxicinamoil-lle- leucinal; inibidor de Gama40 secretase |l, N-terc-Butiloxicarbonil-Gly- Val-Valinal Isovaleril-V — V-Sta-A-Sta-OCH3; MK-0752; MRK-003
(Merck); semagacestate/LY450139; RO4929097; PF-03084.014; BMS- 708163; MPC-7869 (modificador da y-secretase), YO-01027 (Dibenza- zepina), Composto E ([(2S)-2-4[(3,5-Difluorofenil)acetilJamino]Jamino)- N-[(3S)-1-metil-2-0x0-5-fenil-2,3-di-hidro-1H-1,4-benzodiazepin-3- illpropanamida], LY411575, L-685.458, BMS-289948 cloridrato de (4- cloro-N-(2,5-difluorofenil)-N-((1R)-f4-fluoro-2-[3-(1H-imidazo]|-1- il)propillfenil)etil)Denzenossulfonamida) e BMS-299897 ácido (4-[2- ((1R)-1-([(4-clorofenil)sulfonil]-2,5-difluoroanilinojetil)-5- fluorofenilibutanoico).
[0069] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos, o inibidor de gama secretase é um composto da estrutura: Composto 1 e F o Ah : LZ o ã á = oH ou um sal farmaceuticamente aceitável do seu hidrato.
[0070] São fornecidas no presente documento combinações que incluem: (a) células geneticamente modificadas que expressam um receptor quimérico que compreende um domínio de ligação ao antíge- no que se liga ao antígeno de maturação de células B de superfície (BCMA); (b) um inibidor da gama secretase, em que a ligação do CAR ao BCMA de superfície ou uma medida indicativa de função ou ativi- dade, após a exposição a células que expressam o BCMA de superfí- cie, não é reduzida ou bloqueada ou não é substancialmente reduzida ou bloqueada na presença de uma forma solúvel ou vertente do BCMA, opcionalmente em uma concentração ou quantidade da forma solúvel ou vertente do BCMA correspondente a uma concentração ou quantidade presente no soro ou sangue ou plasma do indivíduo ou de um paciente com mieloma múltiplo ou, em média, em uma população de pacientes para a doença ou distúrbio, ou em uma concentração ou quantidade do BCMA solúvel ou vertente no qual a ligação ou medida é reduzida ou bloqueada, ou substancialmente reduzida ou bloqueada, para células que expressam um CAR anti-BCMA de referência no mesmo ensaio.
[0071] Em algumas modalidades de qualquer uma das combina- ções no presente documento fornecidas, o inibidor de gama secretase inibe a clivagem intramembranar de BCMA.
[0072] Em algumas modalidades de qualquer uma das combina- ções no presente documento fornecidas, o inibidor de gama secretase inibe a clivagem intramembranar de BCMA com uma concentração inibidora semimáxima (IC5so) de 0,01 nM a 10 nM, 0,01 nM a 5 nM, 0,01 nM a 1 nM, 0,01 nM a 0,5 NM, 0,01 nM a 0,35 nM, 0,01 nM a 0,25 nM, 0,01 nM a 0,1 nM, 0,01 nM a 0,05 nM, 0,05 nM a 10 nM, 0,05 nNMa5 NM, 0,05 NM à 1 NM, 0,05 NM para 0,5 nM, 0,05 nM a 0,35 nM, 0,05 nM a 0,25 nM, 0,05 nM a 0,1 nM, 0,1 NM a 10 NM, 0,1 NM a 5 NM, 0,1 NM a 1 nM, 0,1 NM, a 0,5 nM, 0,1 nM a 0,35 nM, 0,1 nM a 0,25 nM, 0,25 nM a 10 nM, 0,25 nM a 5 nM, 0,25 nM a 1 nM, 0,25 nM a 0,5 NM, 0,25 nM a 0,35 nM, 0,35 nM a 10 nM, 0,35 nM a 5 nM, 0,35 NM a 1 NM, 0,35 nM a 0,5 nM, 0,5 NM a 10 NM, 0,5 nM a 5 NM, 0,5 NM a 1 AM, 1 nM a 10 nM, 1 NM a 5 NM ou 5 NM a 10 NM. Em algumas modalida- des, o inibidor de gama secretase inibe a clivagem intramembranar de BCMA com uma concentração inibidora semimáxima (ICso) menor ou menor que cerca de 10 nM, 5 nM, 1 nM., 0,5 nM, 0,35 nM, 0,25 nM, 0,1 nM, 0,05 NM ou 0,01 nM ou menos.
[0073] São fornecidas no presente documento combinações que incluem: (a) células geneticamente modificadas que expressam um receptor recombinante, em que o receptor recombinante não se liga especificamente ao antígeno de maturação de células B de superfície (BCMA); e (b) um inibidor da gama secretase.
[0074] São fornecidas no presente documento combinações que incluem: (a) células geneticamente modificadas que expressam um receptor recombinante, em que o receptor recombinante não se liga especificamente ao antígeno de maturação de células B de superfície (BCMA); e (b) um inibidor da gama secretase, em que a ligação do CAR ao BCMA de superfície ou uma medida indicativa de função ou atividade, após a exposição a células que expressam o BCMA de su- perfície, não é reduzida ou bloqueada ou não é substancialmente re- duzida ou bloqueada na presença de uma forma solúvel ou vertente do BCMA, opcionalmente em uma concentração ou quantidade da forma solúvel ou vertente do BCMA correspondente a uma concentração ou quantidade presente no soro ou sangue ou plasma do indivíduo ou de um paciente com mieloma múltiplo ou em média em uma população de pacientes para a doença ou distúrbio, ou em uma concentração ou quantidade de BCMA solúvel ou vertente, em que a ligação ou medida é reduzida ou bloqueada, ou é substancialmente reduzida ou bloquea- da, para células que expressam um CAR anti-BCMA de referência no mesmo ensaio.
[0075] Em algumas modalidades de qualquer uma das combina- ções no presente documento fornecidas, o receptor recombinante se liga especificamente a um antígeno alvo associado à doença ou dis- túrbio. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é selecionado dentre anidrase carbônica 9 (CAIX), Her2/neu (erbB2 de tirosina cinase re- ceptora), L1-CAM, CD19, CD20, CD20, CD22, mesotelina, CEA e an- tígeno de superfície da hepatite B, receptor antifolato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, glicoproteína epitelial 2 (EPG-2), glicoproteína epitelial 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, dímeros erbB, EGFR vill, proteína de ligação ao folato (FBP), FCRLS5,
FCRHB5, receptor de acetilcolina fetal, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R- alfa, IL-13R-alfa2, receptor de domínio de inserção de cinase (Kkdr), cadeia leve capa, Lewis Y, molécula de adesão de células L1, (L1- CAM), antígeno associado ao melanoma (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-AG6, antígeno do melanoma preferencialmente expresso (PRA- ME), survivina, TAG72, B7-H6, receptor alfa-2 de I1L-13 (IL-13Ra2), CAS9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, receptor-a de folato, CD44v6, CD44v7/8, integrina de avb6, 8H9, NCAM, receptores de VEGF, 5T4, AchR fetal, ligantes de NKG2D, CD44v6, antígeno dual, antígeno câncer-testículo, mesote- lina, CMV de murino, mucina 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY- ESO-1, MART-1, gp100, antígeno oncofetal, ROR1I, TAG72, VEGF- R2, antígeno carcinoembrionário (CEA), Her2/neu, receptor de estro- gênio, receptor de progesterona, efrinaB2, CD123, c-Met, GD-2, GD2 O-acetilado (OGD2), CE7, Tumor 1 de Wilms (WT-1), uma ciclina, ci- clina A2, CCL-1, CD138, um antígeno particular de patógeno e um an- tígeno associado a um marcador universal. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é Muc1.
[0076] Em algumas modalidades de qualquer uma das combina- ções no presente documento fornecidas, o inibidor de gama secretase inibe ou reduz ou é capaz de inibir ou reduzir a clivagem de um ou mais alvos selecionados dentre BCMA, Incisura 1, Incisura 2, Incisura 3, Incisura 4, Muc1, Efrina B2, Betaglicana (TGFBR3), CD43, CD44, CSF1IR, CXCR1, CXCL16, Delta1, E-cadereína, N-caderina, HLA-A2, IFNaR2, ILIR1, ILIR2, IL6R ou proteína precursora ameloide (APP). Em algumas modalidades, os um ou mais alvos cuja clivagem é redu- zida ou inibida compreendem Muc1. Em algumas modalidades, os um ou mais alvos cuja clivagem é reduzida ou inibida produzem BCMA.
[0077] Em algumas modalidades de qualquer uma das combina- ções no presente documento fornecidas, a clivagem de um ou mais alvos selecionados dentre BCMA, Incisura 1, Incisura 2, Incisura 3, In- cisura 4, Muc1, Efrina B2, Betaglicana (TGFBR3), CD43, CD44, CSF1IR, CXCR1, CXCL16, Delta1, E-cadereína, N-caderina, HLA-A?2, IFNaR?2, ILIR1, ILIR2, IL6R ou proteína precursora ameloide (APP) é inibidor ou reduzido ou pode ser inibido ou reduzido pelo inibidor de gama secretase. Em algumas modalidades, os um ou mais alvos cuja clivagem é inibida ou reduzida compreendem Muc1. Em algumas mo- dalidades, os um ou mais alvos cuja clivagem é reduzida ou inibida produzem BCMA.
[0078] Em algumas modalidades de qualquer uma das combina- ções no presente documento fornecidas, o inibidor de gama secretase inibe o alvo com uma concentração inibidora semimáxima (ICso) de 0,01 nM a 1 UM, 0,01 nM a 100 nM, 0,01 nM a 10 nM, 0,01 nM para 5 NM, 0,01 nM a 1 NM, 0,01 nM a 0,5 NM, 0,01 NM a 0,25 nM, 0,01 nM a 0,1 nM, 0,01 nM a 0,05 nM, 0,05 nM a 1 UM, 0,05 nM a 100 nM, 0,05 NM a 10 nM, 0,05 nM a 5 nM, 0,05 nM a 1 nM, 0,05 nM a 0,5 nM, 0,05 nM a 0,25 nM, 0,05 nM a 0,1 nM, 0,1 NM a 1 UM, 0,1 NM a 100 nM, 0,1 nM a 10 nM, 0,1 NM a 5 NM, 0,1 NM a 1 NM, 0,1 NM a 0,5 NM, 0,1 nNM a 0,25 nM, 0,25 nM a 1 UM, 0,25 nM a 100 nM, 0,25 nM a 10 nM, 0,25 nM a 5 nM, 0,25 nM para 1 nM, 0,25 nM a 0,5 NM, 0,5 nM a 1 UM, 0,5 nM a 100 nM, 0,5 NM a 10 nM, 0,5 NM a 5 nM, 0,5 NM a 1 NM, 1 NM a 1 UM, 1 NM a 100 NM, 1 NM a 10 AM, 1 NM a 5 NM, 5 NM a 1 UM, 5 NM a 100 nM, 5 nM a 10 nM, 10 nM a 1 UM, 10 NM a 100 nM ou 100 nM a 1 UM. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase inibe o alvo com uma concentração inibidora semimáxima (ICso) menor ou menor que cerca de 1 uM, 100 nM, 10 nM, 5 nM, 1 nM, 0,5 nM, 0,35 NM, 0,25 nM, 0,1 NM, 0,05 nM ou 0,01 nM ou menos.
[0079] Em algumas modalidades de qualquer uma das combina- ções no presente documento fornecidas, o inibidor de gama secretase é um inibidor de peptídeo ou inibidor não peptídico. Em algumas mo-
dalidades, o inibidor de gama secretase é um inibidor de peptídeo e o inibidor de peptídeo é selecionado dentre derivados de peptídeos alde- ídos, derivados de difluorocetonas, derivados de hidroxietileno dipeptí- deo isotere, derivados de peptídeo helicoidal alfa e análogos de dipep- tídeos. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é um inibidor não peptídico e o inibidor não peptídico é um derivado de ben- zodiazepinas ou um derivado de sulfonamidas.
[0080] Em algumas modalidades de qualquer uma das combina- ções no presente documento fornecidas, o inibidor de gama secretase é um inibidor do estado de transição ou inibidor do estado de não tran- sição.
[0081] Em algumas modalidades de qualquer uma das combina- ções no presente documento fornecidas, o inibidor de gama secretase é um fármaco anti-inflamatório não esteroide.
[0082] Em algumas modalidades de qualquer uma das combina- ções no presente documento fornecidas, o inibidor de gama secretase é selecionado dentre LY 3039478, inibidor de secretase | (GSI 1) Z-Leu- Leu-Norleucina; inibidor de y-secretase Il (GSI 11I); inibidor de y- secretase Ill (GSI III), N-Benziloxicarbonil-Leu-leucinal, N-(2-naftoil)- Val-fenilalaninal; inibidor de y-secretase Ill (GSI IV); inibidor de y- secretase Ill (GSI V), N-Benziloxicarbonil-Leu-fenilalaninal; inibidor de y-secretase Ill (GSI VI), 1-(S)-endo-N-(1,3,3)-trimetilbiciclo[2.2.1]hept- 2-i1)-4-fluorofenil sulfonamida; inibidor de y-secretase III (GSI VII), Men- tiloxicarbonil-LL-CHO; inibidor de y-secretase III (GSI IX), (DAPT), T- Butil éster de N-[N-(3,5-Difluorofenacetil-L-alanil)]-S-fenilglicina; inibi- dor de y-secretase X (GSI X), terc-butil éster de ácido (1S-benzil-4R- [1-(1S-carbamoil-2-fenetilcarbamoil)-1S-3-metilbutilcarbamoil]-2R- hidróxi-5-fenilpentil)carbâmico; inibidor de y-secretase XI (GSI XI), 7- amino-4-cloro-3-metóxi-isocumarina; inibidor de y-secretase XII (GSI XII), Z-Ile-Leu-CHO; inibidor de y-secretase XIII (GSI XIII), Z-Tyr-lle-
Leu-CHO; inibidor de y-secretase XIV (GSI XIV), Z-Cys(t-Bu)-lle-Leu- CHO; inibidor de y-secretase XVI (GSI XVI), metil éster de N-[N-3,5- difluorofenacetil]-L-alanil-S-fenilglicina; inibidor de y-secretase XVII (GSI XVII); inibidor de v-secretase XIX (GSI XIX) ben- zo[e][1 4Jdiazepina-3-il)-butiramida; inibidor de y-secretase XX (GSI XX), (S,S)-2-[2-(3,5-Difluorofenil)acetilamino]-N-(5-metil-6-0x0-6,7-di- hidro-5H-dibenzo[b,d]Jazepin-7-il)propionamida; inibidor de y-secretase XXI (GSI XXI), (S,S)-2-[2-(3,5-Difluorofenil)-acetilamino]-N-(1-metil-2- ox0-5-fenil-2-,3-di-hidro-1H-benzo[e][1 ,4]diazepin-3-il)-propionamida; inibidor de Gama40 secretase |, N-trans-3,5-dimetoxicinamoil-lle- leucinal; inibidor de Gama40 secretase |l, N-terc-Butiloxicarbonil-Gly- Val-Valinal Isovaleril-V — V-Sta-A-Sta-OCH3; MK-0752; MRK-003 (Merck); semagacestate/LY450139; RO4929097; PF-03084.014; BMS- 708163; MPC-7869 (modificador da y-secretase), YO-01027 (Dibenza- zepina), Composto E ([(2S)-2x[(3,5-Difluorofenil)acetilJamino]Jamino)- N-[(3S)-1-metil-2-0x0-5-fenil-2,3-di-hidro-1H-1,4-benzodiazepin-3- illpropanamida], LY411575, L-685.458, BMS-289948 cloridrato de (4- cloro-N-(2,5-difluorofenil)-N-((1R)-f4-fluoro-2-[3-(1H-imidazol-1- iNpropil]fenil)etil)Denzenossulfonamida) e BMS-299897 ácido (4-[2- ((1R)-1-([(4-clorofenil)sulfonil]-2,5-difluoroanilino)etil)-5- fluorofenil|jbutanoico).
[0083] Em algumas modalidades de qualquer uma das combina- ções no presente documento fornecidas, o inibidor de gama secretase é um composto da estrutura: Composto 1 F. 7 F o ms
MÁ À Z o z d oH ou um sal farmaceuticamente aceitável do seu hidrato.
[0084] São fornecidas no presente documento combinações que incluem: (a) células geneticamente modificadas que expressam um receptor recombinante; e (b) um composto da estrutura: Composto 1 F 7 F o " é " o E
OM ou um sal farmaceuticamente aceitável do seu hidrato.
[0085] Em algumas modalidades de qualquer uma das combina- ções no presente documento fornecidas, o receptor recombinante se liga especificamente a um antígeno alvo associado à doença ou dis- túrbio. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é selecionado dentre antígeno de maturação de células B (BCMA), anidrase carbônica 9 (CAIX), Her2/neu (erbB2 de tirosina cinase receptora), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, mesotelina, CEA e antígeno de superfície da hepatite B, receptor antifolato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, glicoproteína epitelial 2 (EPG-2), glicoproteína epitelial 40 (EPG-40), EPHa?2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, dímeros erbB, EGFR villl, proteína de ligação ao folato (FBP), FCRL5, FCRHS5, receptor de acetilcolina fetal, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alfa, IL-13R-alfa2, receptor de domínio de inserção de cinase (Kkdr), cadeia leve capa, Lewis Y, molécula de adesão de células L1, (LI-CAM), antígeno associado ao melanoma (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-AS, antígeno de melanoma preferenci- almente expresso (PRAME), survivina, TAG72, B7-H6, receptor alfa-2 da I1L-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA- AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, receptor-a de folato, CD44v6, CD44v7/8, integrina de avb6, 8H9, NCAM, receptores de VEGF, 574,
AchR Fetal, ligantes de NKG2D, CD44v6, antígeno dual, antígeno câncer-testículo, mesotelina, CMV de murino, mucina 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, antígeno onco- fetal, ROR1I, TAG72, VEGF-R2, antígeno carcinoembrionário (CEA), Her2/neu, receptor de estrogênio, receptor de progesterona, efrinaB2, CD123, c-Met, GD-2, GD2 O-acetilado (OGD2), CE7, Tumor 1 de Wilms (WT-1), uma ciclina, ciclina A2, CCL-1, CD138, um antígeno particular de patógeno e um antígeno associado a um marcador uni- versal. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é Muc1.
[0086] Em algumas modalidades de qualquer uma das combina- ções no presente documento fornecidas, o antígeno alvo é BCMA. Em algumas modalidades, o BCMA é BCMA de superfície. Em algumas modalidades, a ligação do CAR ao BCMA de superfície ou uma medi- da indicativa de função ou atividade, após a exposição a células que expressam o BCMA de superfície, não é reduzida ou bloqueada ou não é substancialmente reduzida ou bloqueadas na presença de uma forma solúvel ou vertente do BCMA, opcionalmente em uma concen- tração ou quantidade da forma solúvel ou vertente do BCMA corres- pondente a uma concentração ou quantidade presente no soro ou no sangue ou plasma do indivíduo ou de um mieloma múltiplo paciente, ou em média em uma população de pacientes para a doença ou dis- túrbio, ou em uma concentração ou quantidade de BCMA solúvel ou vertente, em que a ligação ou medida é reduzida ou bloqueada, ou é substancialmente reduzida ou bloqueada, para células que expressam uma referência CAR anti-BCMA no mesmo ensaio. Em algumas moda- lidades, o receptor recombinante não se liga ao BCMA solúvel ou se liga ao BCMA solúvel com uma afinidade menor que a afinidade do referido receptor recombinante para ligação ao BCMA de superfície.
[0087] Em algumas modalidades de qualquer uma das combina- ções no presente documento fornecidas, o receptor recombinante é um receptor de células T transgênicas (TCR) ou um receptor de não células T funcionais. Em algumas modalidades, o receptor recombi- nante é um receptor quimérico, que opcionalmente é um receptor de antígeno quimérico (CAR). Em algumas modalidades, o receptor de antígeno quimérico (CAR) compreende um domínio de reconhecimen- to de antígeno extracelular que se liga especificamente ao antígeno e um domínio de sinalização intracelular que compreende um ITAM. Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intracelular compre- ende o domínio intracelular de uma cadeia de CD3-zeta (CD36). Em algumas modalidades, o receptor de antígeno quimérico (CAR) com- preende ainda uma região de sinalização coestimuladora. Em algumas modalidades, a região de sinalização coestimuladora compreende um domínio de sinalização derivado de CD28 ou 4-1BB, opcionalmente CD28 humano ou 4-1BB humano. Em algumas modalidades, a região de sinalização coestimuladora é um domínio derivado de 4-1BB, opci- onalmente 4-1BB humano.
[0088] Em algumas modalidades de qualquer uma das combina- ções no presente documento fornecidas, o BCMA é BCMA humano ou o antígeno alvo é um antígeno humano.
[0089] Em algumas modalidades de qualquer uma das combina- ções no presente documento fornecidas, as células geneticamente modificadas compreendem células T ou células NK. Em algumas mo- dalidades, as células geneticamente modificadas compreendem célu- las T. Em algumas modalidades, as células T são CD4+ e/ou CD8+. Em algumas modalidades, as células T são células T primárias obtidas de um indivíduo.
[0090] Em algumas modalidades de qualquer uma das combina- ções no presente documento fornecidas, as células geneticamente modificadas são formuladas como uma composição farmacêutica para administração a um indivíduo, opcionalmente em que as células são formuladas para administração em uma ou mais doses únicas para o tratamento de uma doença ou condição.
[0091] Em algumas modalidades de qualquer uma das combina- ções no presente documento fornecidas, o inibidor de gama secretase é formulado como uma composição farmacêutica para administração a um indivíduo, opcionalmente em que o inibidor de gama secretase é formulado para administração em uma ou mais doses únicas.
[0092] São fornecidos no presente documento kits que contêm: a combinação de qualquer uma das reivindicações 9 9-139 e instruções para administrar os componentes da combinação a um indivíduo com uma doença ou distúrbio.
[0093] São no presente documento fornecidos kits que contêm: (a) um reagente para detectar a expressão do antígeno de maturação das células B (BCMA) na superfície de uma célula; (b) um inibidor da gama secretase, opcionalmente formulado para administração em uma ou mais doses únicas; e (c) instruções para administrar o inibidor a um indivíduo com base nos resultados do uso do reagente para detectar BCMA na superfície das células plasmáticas de um indivíduo com câncer.
[0094] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits forneci- dos neste documento, as instruções especificam a administração do inibidor ao indivíduo se as células plasmáticas compreenderem baixa expressão do BCMA de superfície e/ou um nível de expressão do BCMA de superfície abaixo de um nível limiar. Em algumas modalida- des, o nível limiar de expressão do BCMA de superfície é menor que a expressão ou nível médio ou mediano do BCMA de superfície nas cé- lulas plasmáticas em uma pluralidade de indivíduos controle, opcio- nalmente em que os indivíduos controle são um grupo de indivíduos saudáveis ou normais. Em algumas modalidades, a baixa expressão do BCMA de superfície está presente quando menor ou menor que cerca de 60%, menor ou menor que cerca de 50%, menor ou menor que cerca de 40%, menor ou menor que cerca de 30%, menor igual ou inferior a cerca de 20% ou inferior ou inferior a cerca de 10% das célu- las plasmáticas, ou células com um marcador ou fenótipo de célula plasmática, ou as células cancerígenas no indivíduo expressam BCMA de superfície; ou o nível limiar do BCMA de superfície é menor ou me- nor que cerca de 60%, menor ou menor que cerca de 50%, menor ou menor que cerca de 40%, menor ou menor que cerca de 30%, menor ou menor que cerca de 20% ou menor ou menor que cerca de 10% das células plasmáticas, ou células com marcador ou fenótipo de célu- la plasmática ou células cancerígenas no indivíduo que expressam BCMA de superfície.
[0095] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits forneci- dos neste documento, os kits contêm ainda: células geneticamente modificadas que expressam um receptor recombinante, opcionalmente em que as células geneticamente modificadas são formuladas para administração de uma ou mais doses únicas a um indivíduo com uma doença ou condição. Em algumas modalidades, o receptor recombi- nante se liga especificamente a um antígeno alvo associado à doença ou condição.
[0096] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, as instruções especificam a administra- ção do inibidor de gama secretase, ou uma ou mais doses únicas, a um indivíduo com uma doença ou distúrbio antes, simultaneamente ou após o início da administração de uma dose das células geneticamen- te modificadas ao indivíduo, opcionalmente em que as células geneti- camente modificadas são formuladas para administração de uma ou mais doses únicas a um indivíduo com uma doença ou condição. Em algumas modalidades, as instruções especificam a administração do inibidor de gama secretase, ou uma ou mais doses únicas do mesmo,
a um indivíduo com uma doença ou distúrbio antes do início da admi- nistração de uma dose das células geneticamente modificadas ao indi- víduo. Em algumas modalidades, as instruções especificam a adminis- tração do inibidor dentro de ou cerca de 1 hora, 2 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas ou 1 semana antes do início da administração da terapia celular. Em algumas modalidades, as instruções especificam a administração do inibidor de gama secre- tase, ou uma ou mais doses únicas do mesmo, a um indivíduo com uma doença ou distúrbio após o início da administração de uma dose das células geneticamente modificadas ao indivíduo.
[0097] São fornecidos no presente documento kits que contêm: (a) um inibidor de gama secretase, opcionalmente em que o inibidor de gama secretase é formulado em uma ou mais doses únicas; e (b) ins- truções para administrar o inibidor de gama secretase a um indivíduo após o início da administração de uma terapia celular a um indivíduo, a terapia celular que compreende uma dose de células geneticamente modificadas que expressam um receptor recombinante.
[0098] São fornecidos no presente documento kits que contêm: (a) um inibidor de gama secretase, opcionalmente em que o inibidor de gama secretase é formulado em uma ou mais doses únicas; e (b) ins- truções para administrar o inibidor de gama secretase a um indivíduo após o início da administração de uma terapia celular a um indivíduo, a terapia celular que compreende uma dose de células geneticamente modificadas que expressam um receptor recombinante que compre- ende um receptor de antígeno quimérico (CAR) que compreende um domínio de ligação ao antígeno que se liga ao antígeno de maturação das células B (BCMA), em que a ligação do CAR ao BCMA da superfí- cie ou uma medida indicativa de função ou atividade, após a exposição a células que expressam o BCMA da superfície, não é reduzida ou bloqueada ou não é substancialmente reduzida ou bloqueada na pre-
sença de uma forma solúvel ou vertente do BCMA, opcionalmente em uma concentração ou quantidade da forma solúvel ou vertente do BCMA correspondente a uma concentração ou quantidade presente no soro ou sangue ou plasma do indivíduo ou de um paciente com mi- eloma múltiplo ou, em média, em uma população de pacientes para a doença ou distúrbio, ou em uma concentração ou quantidade de BCMA solúvel ou vertente, em que a ligação ou medida é reduzida ou bloqueada, ou substancialmente reduzida ou bloqueada, para células que expressam um CAR anti-BCMA de referência no mesmo ensaio.
[0099] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, o início da administração do inibidor está dentro ou dentro de cerca de 1 hora, 2 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 14 dias, 21 dias, 28 dias ou mais após o início da administração da dose de células geneti- camente modificadas.
[00100] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, as instruções especificam que o inibidor é para administração em um momento em que: o número de células da terapia celular detectável no sangue a partir do indivíduo diminui em comparação com o indivíduo em um ponto de tempo precedente após o início da administração das células; o número de células da terapia celular detectável no sangue é menor ou menor que 1,5 vezes, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 50 vezes ou 100 vezes ou menos o número de pico ou máximo de células da terapia celular detectável no sangue do indivíduo após o início da administração da administração das células; e/ou em um momento após um nível de pi- co ou máximo das células da terapia celular serem detectáveis no sangue do indivíduo, o número de células ou derivado das células de- tectáveis no sangue do indivíduo é menor que 10%, menor que 5%, menor que 1% ou menor que 0,1% das células mononucleares do sangue periférico totais (PBMCs) no sangue do indivíduo.
[00101] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, as instruções especificam que o inibidor é para administração até 7 dias, 14 dias, 21 dias, 28 dias ou mais após o início da administração das células.
[00102] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, o receptor recombinante se liga especifi- camente a um antígeno alvo associado à doença ou distúrbio. Em al- gumas modalidades, o antígeno alvo é selecionado dentre antígeno de maturação de células B (BCMA), anidrase carbônica 9 (CAIX), Her2/neu (erbB2 de tirosina cinase receptora), L1I-CAM, CD19, CD20, CD22, mesotelina, CEA e antígeno de superfície da hepatite B, recep- tor antifolato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, glico- proteína epitelial 2 (EPG-2), glicoproteína epitelial 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, dímeros erbB, EGFR vill, proteína de ligação ao folato (FBP), FCRL5, FOCRHS5, receptor de acetilcolina fetal, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alfa, IL-13R-alfa2, receptor de domínio de inserção de cinase (kdr), cadeia leve capa, Lewis Y, molécula de adesão de células L1, (LI-CAM), antígeno associado ao melanoma (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-AS, antígeno de melanoma preferenci- almente expresso (PRAME), survivina, TAG72, B7-H6, receptor alfa-2 da IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA- AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, receptor-a de folato, CD44v6, CD44v7/8, integrina de avb6, 8H9, NCAM, receptores de VEGF, 574, AchR Fetal, ligantes de NKG2D, CD44v6, antígeno dual, antígeno câncer-testículo, mesotelina, CMV de murino, mucina 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, antígeno onco- fetal, ROR1I, TAG72, VEGF-R2, antígeno carcinoembrionário (CEA), Her2/neu, receptor de estrogênio, receptor de progesterona, efrinaB2, CD123, c-Met, GD-2, GD2 O-acetilado (OGD2), CE7, Tumor 1 de
Wilms (WT-1), uma ciclina, ciclina A2, CCL-1, CD138, um antígeno particular de patógeno e um antígeno associado a um marcador uni- versal. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é Muc1, opcional- mente Muc1i humano. Em algumas modalidades de qualquer modali- dade, o antígeno alvo é um antígeno humano.
[00103] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é BCMA, opcio- nalmente humano BCMA. Em algumas modalidades, a ligação do CAR ao BCMA de superfície ou uma medida indicativa de função ou ativi- dade, após a exposição a células que expressam o BCMA de superfí- cie, não é reduzida ou bloqueada ou não é substancialmente reduzida ou bloqueada na presença de uma forma solúvel ou vertente do BCMA, opcionalmente em uma concentração ou quantidade da forma solúvel ou vertente do BCMA correspondente a uma concentração ou quantidade presente no soro ou sangue ou plasma do indivíduo ou de um paciente com mieloma múltiplo ou, em média, em uma população de pacientes para o doença ou distúrbio, ou em uma concentração ou quantidade de BCMA solúvel ou vertente, em que a ligação ou medida é reduzida ou bloqueada, ou é substancialmente reduzida ou bloquea- da, para células que expressam um CAR anti-BCMA de referência no mesmo ensaio. Em algumas modalidades, o receptor recombinante não se liga ao BCMA solúvel ou se liga ao BCMA solúvel com uma afi- nidade menor que a afinidade do referido receptor recombinante para a ligação ao BCMA de superfície.
[00104] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, o receptor recombinante é um receptor de células T transgênicas (TCR) ou um receptor de não células T fun- cionais. Em algumas modalidades, o receptor recombinante é um re- ceptor quimérico, que é um receptor de antígeno quimérico (CAR). Em algumas modalidades, o receptor de antígeno quimérico (CAR) com- preende um domínio de reconhecimento de antígeno extracelular que se liga especificamente ao antígeno e um domínio de sinalização in- tracelular que compreende um ITAM. Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intracelular compreende o domínio intracelular de uma cadeia de CD3-zeta (CD36). Em algumas modalidades, o re- ceptor de antígeno quimérico (CAR) compreende ainda uma região de sinalização coestimuladora. Em algumas modalidades, a região de si- nalização coestimuladora compreende um domínio de sinalização de- rivado de CD28 ou 4-1BB, opcionalmente CD28 humano ou 4-1BB humano. Em algumas modalidades, a região de sinalização coestimu- ladora é um domínio derivado de 4-1BB, opcionalmente 4-1BB huma- no.
[00105] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, as células geneticamente modificadas compreendem células T ou células NK. Em algumas modalidades, as células geneticamente modificadas compreendem células T. Em algu- mas modalidades, as células T são CD4+ e/ou CD8+. Em algumas modalidades, as células T são células T primárias obtidas de um indi- víduo.
[00106] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, o inibidor de gama secretase inibe ou reduz ou é capaz de inibir ou reduzir a clivagem de um ou mais alvos selecionados dentre BCMA, Incisura 1, Incisura 2, Incisura 3, Incisura 4, Muc1, Efrina B2, Betaglicana (TGFBR3), CD43, CD44, CSFI1R, CXCR1, CXCL16, Delta1, E-cadereína, N-caderina, HLA-A2, IFNaR?2, ILIR1, ILIR2, IL6R ou proteína precursora ameloide (APP). Em algu- mas modalidades, os um ou mais alvos cuja clivagem é reduzida ou inibida compromete Muc1. Em algumas modalidades, os um ou mais alvos cuja clivagem é reduzida ou inibida produzem BCMA.
[00107] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, a clivagem de um ou mais alvos selecio-
nados dentre BCMA, Incisura 1, Incisura 2, Incisura 3, Incisura 4, Muc1, Efrina B2, Betaglicana (TGFBR3), CD43, CD44, CSFIR, CXCR1, CXCL16, Delta1, E-cadereína, N-caderina, HLA-A2, IFNaR?2, ILIR1, ILIR2, IL6R ou proteína precursora ameloide (APP) é inibida ou reduzida ou pode ser inibida ou reduzida o inibidor de gama secre- tase. Em algumas modalidades, os um ou mais alvos cuja clivagem é reduzida ou inibida compromete Muc1. Em algumas modalidades, os um ou mais alvos cuja clivagem é reduzida ou inibida produzem BCMA.
[00108] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, o inibidor de gama secretase inibe o alvo com uma concentração inibidora semimáxima (ICso) de 0,01 nM a 1 UM, 0,01 nM a 100 nM, 0,01 nM a 10 nM, 0,01 nM para 5 nM, 0,01 nM a 1 nM, 0,01 nM a 0,5 nM, 0,01 nM a 0,25 nM, 0,01 nM a 0,1 nM, 0,01 NM a 0,05 nM, 0,05 nM a 1 UM, 0,05 nM a 100 nM, 0,05 nM a 10 nM, 0,05 nM a 5 nM, 0,05 nM a 1 nM, 0,05 nM a 0,5 nM, 0,05 nM a 0,25 NM, 0,05 nM à 0,1 NM, 0,1 NM a 1 uM, 0,1 NM a 100 nM, 0,1 nM a 10 NM, 0,1 nM a 5 nM, 0,1 NM a 1 NM, 0,1 NM a 0,5 NM, 0,1 nM a 0,25 nM, 0,25 nM a 1 UM, 0,25 nM a 100 nM, 0,25 nM a 10 nM, 0,25nMa5 NM, 0,25 nM para 1 nM, 0,25 nM a 0,5 nM, 0,5 NM a 1 UM, 0,5 NM a 100 nM, 0,5 nM a 10 nM, 0,5 NM a 5 NM, 0,5 NM a 1 NM, 1 NM a 1 UM, 1 nM a 100 nM, 1 NM a 10 NM, 1 NM a 5 NM, 5 nM a 1 UM, 5 NM a 100 NM, 5 nM a 10 nM, 10 nM a 1 UM, 10 nM a 100 nM ou 100 nM a 1 UM.
[00109] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, o inibidor de gama secretase inibe o alvo com uma concentração inibidora semimáxima (IC5o0) menor ou menor que cerca de 1 uM, 100 nM, 10 nM, 5 nM, 1 nM, 0,5 nM, 0,35 nM, 0,25 NM, 0,1 nM, 0,05 nM ou 0,01 nM ou menos.
[00110] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, o inibidor de gama secretase é um inibi-
dor de peptídeo ou inibidor não peptídico. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é um inibidor de peptídeo e o inibidor de peptídeo é selecionado dentre derivados de peptídeos aldeídos, deri- vados de difluorocetonas, derivados de hidroxietileno dipeptídeo isote- re, derivados de peptídeo helicoidal alfa e análogos de dipeptídeos. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é um inibidor não peptídico e o inibidor não peptídico é um derivado de benzodiaze- pinas ou um derivado de sulfonamidas.
[00111] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, o inibidor de gama secretase é um inibi- dor do estado de transição ou inibidor do estado de não transição.
[00112] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, o inibidor de gama secretase é um fár- maco anti-inflamatório não esteroide.
[00113] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, o inibidor de gama secretase é selecio- nado dentre LY3039478, inibidor de secretase | (GSI |) Z-Leu-Leu- Norleucina; inibidor de y-secretase Il (GSI II); inibidor de y-secretase |Il (GSI 1), N-Benziloxicarbonil-Leu-leucinal, N-(2-naftoil)-Val- fenilalaninal; inibidor de y-secretase Ill (GSI IV); inibidor de y-secretase 1 (GSI V), N-Benziloxicarbonil-Leu-fenilalaninal; inibidor de y- secretase Ill (GSI VI), 1-(S)-endo-N-(1,3,3)-trimetilbiciclo[2.2.1]hept-2- iI)-4-fluorofenil sulfonamida; inibidor de y-secretase III (GSI VII), Menti- loxicarbonil-LL-CHO; inibidor de y-secretase Ill (GSI IX), (DAPT), T- Butil éster de N-[N-(3,5-Difluorofenacetil-L-alanil)]-S-fenilglicina; inibi- dor de y-secretase X (GSI X), terc-butil éster de ácido (1S-benzil-4R- [1-(1S-carbamoil-2-fenetilcarbamoil)-1S-3-metilbutilcarbamoil]-2R- hidróxi-5-fenilpentil)kcarbâmico; inibidor de y-secretase XI (GSI XI), 7- amino-4-cloro-3-metóxi-isocumarina; inibidor de y-secretase XII (GSI XII), Z-Ile-Leu-CHO; inibidor de y-secretase XIII (GSI XIII), Z-Tyr-lle-
Leu-CHO; inibidor de y-secretase XIV (GSI XIV), Z-Cys(t-Bu)-lle-Leu- CHO; inibidor de y-secretase XVI (GSI XVI), metil éster de N-[N-3,5- difluorofenacetil]-L-alanil-S-fenilglicina; inibidor de y-secretase XVII (GSI XVII); inibidor de y-secretase XIX (GSI XIX) ben- zo[e][1 ,4Jdiazepin-3-il)-butiramida; inibidor de y-secretase XX (GSI XX), (S,S)-2-[2-(3,5-Difluorofenil)acetilamino]-N-(5-metil-6-0x0-6,7-di- hidro-5H-dibenzo[b,d]Jazepin-7-il)propionamida; inibidor de y-secretase XXI (GSI XXI), (S,S)-2-[2-(3,5-Difluorofenil)-acetilamino]-N-(1-metil-2- ox0-5-fenil-2-,3-di-hidro-1H-benzo[e][1 ,4]diazepin-3-il)-propionamida; inibidor de Gama40 secretase |, N-trans-3,5-dimetoxicinamoil-lle- leucinal; inibidor de Gama40 secretase |l, N-terc-Butiloxicarbonil-Gly- Val-Valinal Isovaleril-V — V-Sta-A-Sta-OCH3; MK-0752; MRK-003 (Merck); semagacestate/LY450139; RO4929097; PF-03084.014; BMS- 708163; MPC-7869 (modificador da y-secretase), YO-01027 (Dibenza- zepina), Composto E ([(2S)-2x[(3,5-Difluorofenil)acetillamino]Jamino)- N-[(3S)-1-metil-2-0x0-5-fenil-2,3-di-hidro-1H-1,4-benzodiazepin-3- illpropanamida], LY411575, L-685.458, BMS-289948 cloridrato de (4- cloro-N-(2,5-difluorofenil)-N-((1R)-f4-fluoro-2-[3-(1H-imidazo|-1- iNpropil]fenil)etil)Denzenossulfonamida) e BMS-299897 ácido (4-[2- ((1R)-1-([(4-clorofenil)sulfonil]-2,5-difluoroanilino)etil)-5- fluorofenil|jbutanoico).
[00114] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, o inibidor de gama secretase é um com- posto da estrutura: Composto 1 F. 7 F o ms
MÁ À Z o z d oH ou um sal farmaceuticamente aceitável do seu hidrato.
[00115] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, as instruções especificam a administra- ção de uma dose de células geneticamente modificadas a um indiví- duo com uma doença ou distúrbio. Em algumas modalidades, a doen- ça ou distúrbio é um câncer. Em algumas modalidades, o câncer é uma malignidade de células B. Em algumas modalidades, o câncer é mieloma múltiplo, plasmocitoma, um câncer de origem de células plasmáticas e/ou um câncer de origem de células B.
[00116] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, a dose compreende de cerca de 1 x 10º a 5 x 10º células de expressão de receptores recombinantes totais, células T totais ou células mononucleares do sangue periférico total (PBMCs); a terapia celular compreende a administração de ou de cer- ca de 1 x 10º a 1 x 10º células de expressão de receptores recombi- nantes totais, células T totais ou PBMCs totais; de ou de cerca de 5 x 10º a 1 x 107 células de expressão de receptores recombinantes totais, células T totais ou PBMCs totais; ou de cerca de 1 x 10º a 1 x 107 célu- las de expressão de receptores recombinantes totais, células T totais ou PBMCs totais, cada uma inclusive; opcionalmente, em que as ins- truções especificam a administração de uma ou de uma pluralidade de doses únicas que compreende a dose de células e/ou um volume cor- respondente a uma ou várias doses únicas que compreende a dose de células.
[00117] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, a dose compreende não mais do que 5 x 108 células de expressão de receptores recombinantes totais, células T totais ou células mononucleares do sangue periférico totais (PBMCs); não mais que 2,5 x 10º células de expressão de receptores recombi- nantes totais, células T totais ou PBMCs totais; não mais que 1 x 108 células de expressão de receptores recombinantes totais, células T totais ou PBMCs totais; não mais de 1 x 107 células de expressão de receptores recombinantes totais, células T totais ou PBMCs totais; não mais do que 0,5 x 10º células de expressão de receptores recombinan- tes totais, células T totais ou PBMCs totais; não mais que 1 x 10º célu- las de expressão de receptores recombinantes totais, células T totais ou PBMCs totais; não mais que 0,5 x 10º células de expressão de re- ceptores recombinantes totais, células T totais ou PBMCs totais; opci- onalmente, em que as instruções especificam a administração de uma ou de uma pluralidade de doses únicas que compreende a dose de células e/ou um volume correspondente a tal uma ou várias doses úni- cas que compreende a dose de células.
[00118] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, as instruções especificam a administra- ção do inibidor por via oral, subcutânea ou intravenosa. Em algumas modalidades, as instruções especificam a administração do inibidor por via oral.
[00119] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, as instruções especificam que o inibidor deve ser administrado pelo menos seis vezes ao dia, cinco vezes ao dia, quatro vezes ao dia, três vezes ao dia, duas vezes ao dia, uma vez ao dia, a cada dois dias, três vezes por semana, pelo menos uma vez por semana ou apenas uma vez. Em algumas modalidades, as instruções especificam que o inibidor é administrado três vezes por semana.
[00120] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, as instruções especificam que a adminis- tração do inibidor deve ser realizada em um ciclo de tratamento que seja pelo menos ou pelo menos cerca de ou 14 dias, pelo menos ou pelo menos cerca de ou 21 dias ou pelo menos ou pelo menos cerca de 28 dias.
[00121] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, as instruções especificam que o inibidor é administrado ou que cada administração do inibidor é administrada independentemente, em uma quantidade de 0,5 mg a 500 mg, 0,5 mg a 250 mg, 0,5 mg a 100 mg, 0,5 mg a 50 mg, 0,5 mg a 25 mg, 0,5 mg a 10 mg, 0,5 mg a 5,0 mg, 0,5 mg a 2,5 mg, 0,5 mg a 1,0 mg, 1,0mga 500 mg, 1,0 mg a 250 mg, 1,0 mg a 100 mg, 1,0 mg a 50 mg, 1,0mga mg, 1,0 mg a 10 mg, 1,0 mg a 5,0 mg, 1,0 mg a 2,5 mg, 2,5mga 500 mg, 2,5 mg a 250 mg, 2,5 mg para 100 mg, 2,5 mg a 50 mg, 2,5 mg a 25 mg, 2,5 mg a 10 mg, 2,5 mg a 5,0 mg, 5,0 mg a 500 mg, 5,0 mg a 250 mg, 5,0 mg a 100 mg, 5,0 mg a 50 mg, 5,0 mg a 25 mg, 5,0 mg a 10 mg, 10 mg a 500 mg, 10 mg a 250 mg, 10 mg a 100 mg, 10 mg a 50 mg, 10 mg a 25 mg, 25 mg a 500 mg, 25 mg a 250 mg, 25 mg a 100 mg, 25 mg a 50 mg, 50 mg a 500 mg, 50 mg a 250 mg, 50 mg à 100 mg, 100 mg a 500 mg, 100 mg a 250 mg ou 250 mg a 500 mg.
[00122] Em algumas modalidades de qualquer um dos kits no pre- sente documento fornecidos, as instruções especificam que o inibidor é administrado ou que cada administração do inibidor é administrada independentemente, em uma quantidade que é pelo menos ou pelo menos cerca de ou é ou é cerca de 0,5 mg, 1,0 mg, 2,5 mg, 5,0 mg, 10,0 mg, 25 mg, 50 mg, 100 mg, 250 mg ou 500 mg. Breve Descrição dos Desenhos
[00123] AFIG.1 mostra o nível de expressão do antígeno de matu- ração de células B de superfície (BCMA) em células OPM2, MM1s ou RPMI-8826 cocultivadas com diferentes concentrações de um inibidor representativo da gama secretase (LY3039478) após 24 horas de co- cultura. A barra próxima ao eixo X sugere a Cmax € Cmin estimadas para o inibidor.
[00124] AsFIG.2Ae FlG.2B mostram porcentagem de lise (% de morte) de células OPM?2 (FIG. 2A) ou células RPMI-8226 (FIG. 2B) co- cultivadas com células T de expressão de CAR anti-BCMA na presen- ça ou ausência de um representante do inibidor de gama secretase (LY3039478) após cerca de 150 horas de cocultura. A FIG. 2C mostra a porcentagem de lise (% de morte) de células OPM2 cultivadas com células T de expressão de CAR anti-BCMA na presença ou ausência de um inibidor representativo da gama secretase (LY 3039478). A barra próxima ao eixo X sugere a Cmax € Cmin estimadas para o inibidor.
[00125] As FIGS. 3A-3D mostram a produção de IFN-gama e IL-2 no sobrenadante de células T de expressão de CAR anti-BCMA cocul- tivadas com células OPM?2 (FIGS. 3A e 3C) ou RPMI-8226 (FIGS. 3B e 3D) na presença ou ausência de um representante do inibidor da ga- ma secretase (LY3039478) após 24 horas de cocultura. A FIG. 3E mostra a produção de IFN-gama no sobrenadante de células T de ex- pressão de CAR anti-BCMA cocultivadas com células OPM?2 e diferen- tes concentrações de um inibidor de gama secretase representativo (LY3039478). A barra próxima ao eixo X sugere a Cmax estimada e Cmin para o inibidor.
[00126] AsFIGS.4Ae4B mostram o número de células de células T de expressão de CAR anti-BCMA, originalmente obtidas de um doa- dor saudável (FIG. 4A) e um doador com mieloma múltiplo (FIG. 4B) após várias rodadas de estimulação com células MM1S durante um período de 10-17 dias na ausência de um representante do inibidor da gama secretase (LY3039478) (controle do veículo, quadrado) ou na presença do inibidor com uma concentração de 1 uM (triângulo para cima) ou 0,001 uM (triângulo para baixo).
[00127] AsSFIGS.5A e 5B mostram a produção de IFN-gama, IL2 e TNF-alfa no sobrenadante de células T de expressão de CAR anti- BCMA, obtidas originalmente de um doador saudável (FIG. 5A) e um doador com mieloma múltiplo (FIG. 5B) após uma segunda rodada de estimulação com células MM1S no dia 4 a na ausência de um repre- sentante do inibidor de gama secretase (LY3039478) (barra esquerda) ou na presença do inibidor com uma concentração de 0,001 uM (barra do meio) ou 0,001 uM (barra direita).
[00128] AFIG.6 mostra os níveis plasmáticos do inibidor de gama secretase LY3039478 em diferentes momentos após a administração oral de uma dose única de LY3039478 (3 mg/kg).
[00129] AFIG.7 mostra os níveis plasmáticos de BCMA ao longo do tempo após a administração oral de uma dose única de LY3039478 (3 mg/kg) em um modelo de xenoenxerto de camundongo para mielo- ma múltiplo humano (RPMI-8226).
[00130] AFIG.8 mostra a expressão de BCMA de superfície, avali- ada por citometria de fluxo, em células tumorais subcutâneas deriva- das de um modelo de xenoenxerto de camundongo para mieloma múl- tiplo humano (RPMI-8226) ao longo do tempo após administração oral de uma dose única de LY3039478.
[00131] As FIGS. 9A-9B mostram resultados do estudo descrito no Exemplo 5, avaliando o impacto de diferentes tratamentos em um mo- delo de xenoenxerto de camundongo para mieloma múltiplo humano. A FIG. 9A representa o volume do tumor (mm?) ao longo de dias du- rante o estudo. A seta tracejada abaixo do gráfico indica o período de tempo durante o qual LY3039478 foi administrado como descrito no Exemplo 5. A FIG. 9B mostra uma porcentagem de sobrevivência en- tre os animais tratados ao longo de 65 dias após a injeção de CAR T.
[00132] AsFIGS.10A-10B mostram contagens de sangue periférico de CD4+ CAR T+ e CD8+ CAR T+ ao longo do tempo (dias) após a injeção de CAR T (dias após a injeção de CAR T) de animais de um modelo humano de xenoenxerto de mieloma múltiplo humano tratado sob várias condições, como descrito no Exemplo 5. A FIG. 10A repre- senta as contagens de células CD4+ CAR T+ por ul de sangue ao longo do tempo. FIG. 10B representa as contagens de células CD8+ CAR T+ por ul de sangue ao longo do tempo. A barra GSI com setas indica o momento da liberação de LY3039478 (GSI) se administrado.
[00133] AFIG.11 mostra contagens de células T CD4+ (superior) e CD8+ (inferior) por 1 x 10º células de digestos por tumores satélites obtidos nos dias 7 e 15 após a injeção de baixa dose (166) de CAR T no estudo descrito no Exemplo 5.
[00134] AFIG.12A mostra os níveis séricos de BCMA nos dias 7 e após o início de diferentes regimes de tratamento, como descrito no Exemplo 5.
[00135] A FIG. 12B mostra a expressão de BCMA de superfície, avaliada por citometria de fluxo, a partir de digestos de tumores obti- dos nos dias7 e 15 após a injeção de células CAR T anti-BCMA em camundongos de vários grupos de tratamento, como descrito no Exemplo 5.
[00136] AFIG.13A mostra viabilidade celular RPMI-8226, OPM2 e MMA1.8S ao longo do tempo quando tratado com células CAR+ T anti- BCMA estimuladas cronicamente e DMSO (controle DMSO) ou o com- posto inibidor de gama secretase LY 3039478 (1 UM GSI), em um efe- tor para proporção alvo de 0,3: 1 ou quando não tratada (RPMI, OPM2 ou MM1.S sozinho).
[00137] A FIG. 13B mostra a porcentagem de morte de células RPMI-8226, OPM2 e MM1.S quando tratadas com células CAR+ T an- ti-BCMA estimuladas cronicamente e DMSO (controle DMSO) ou LY3039478 (1 uM GSI) ou quando não tratado (RPMI, OPM2 ou MM41.8S sozinho).
[00138] A FIG. 13C mostra concentrações de IL-2 sobrenadante após 24 horas de incubação de células RPMI-8226, OPM2 e MM1.S com células CAR+ T anti-BCMA T estimuladas cronicamente e LY3039478 (1 uM GSI) ou DMSO (controle DMSO) nas relações efe-
tor-alvo de 0,3:1 ou 1:1.
[00139] AFIG.14 mostra concentrações de IFNg, IL e TNFa no so- brenadante após 24 horas de incubação de células CAR+ T anti- BCMA com contas contendo BCMA em diferentes concentrações do inibidor de gama secretase LY 3039478 ou DMSO (veículo).
[00140] A FIG. 15A mostra a capacidade de ligação ao anticorpo BCMA (BCMA ABC) na superfície das células em amostras derivadas de células de pacientes com mieloma múltiplo antes (Antes do GSI) e após (Após o GSI) administração de três doses do inibidor de pequena molécula de gama secretase (GSI) LY3039478 por via oral como des- crito no Exemplo 8.
[00141] AFIG.15B mostra a porcentagem de células plasmáticas em amostras de pacientes determinadas pela expressão de BCMA de superfície mensurável, antes (antes do GSI) e após (após o GSI) ad- ministração de três doses da inibidora de pequena molécula de gama secretase (GSI) LY3039478 por via oral, como descrito no Exemplo 8) Descrição Detalhada
[00142] São fornecidas no presente documento terapias de combi- nação que envolvem administração de uma imunoterapia, como uma terapia celular, por exemplo, uma terapia com células T e um inibidor da gama secretase. Em alguns aspectos, os métodos fornecidos en- volvem a administração de um agente de imunoterapia ou imunotera- pêutico, como uma composição que inclui células para terapia celular adotiva, por exemplo, como uma terapia de células T (por exemplo, células T de expressão de CAR) e administração de um inibidor de gama secretase a um indivíduo com uma doença ou distúrbio. Em al- gumas modalidades, a gama secretase é administrada antes, simulta- neamente ou subsequentemente ao início da administração da imuno- terapia, por exemplo, terapia celular. Em algumas modalidades, o ini- bidor de gama secretase inibe ou reduz a clivagem intramembranar de um alvo de uma gama secretase, por exemplo, BCMA, em uma célula (como uma célula de tumor/câncer). Em alguns aspectos, o alvo é o mesmo que o antígeno alvo da terapia celular. Em algumas modalida- des, a terapia celular, como células T de expressão de CAR, compre- ende um domínio de ligação ao antígeno que se liga a um antígeno de maturação de células B (BCMA), como o BCMA de superfície. Em al- gumas modalidades, os métodos compreendem ainda a seleção de um indivíduo para tratamento, em que o indivíduo tem uma baixa ex- pressão do BCMA de superfície em uma célula, tal como uma célula tumoral/câncer, por exemplo, células do câncer no indivíduo que ex- pressam CD138, CD38 de superfície ou um marcador de célula plas- mática de superfície ou são derivadas de células plasmáticas. Em al- gumas modalidades, a terapia celular compreende um receptor re- combinante, como o receptor de antígeno quimérico (CAR), que se liga a um antígeno que não seja o BCMA. Em algumas modalidades, os métodos são realizados em conexão com a terapia celular adotiva.
[00143] Terapias celulares, como terapias baseadas em células T, por exemplo, terapias adotivas de células T (incluindo aquelas que en- volvem a administração de células de expressão de receptores quimé- ricos específicos para uma doença ou distúrbio de interesse, como re- ceptores de antígeno quiméricos (CARs) e/ou outros receptores de antígeno recombinante, bem como outras terapias com células imunes adotivas e com células T adotivas) podem ser eficazes no tratamento de câncer e outras doenças e distúrbios. A expressão modificada de receptores recombinantes, como receptores de antígeno quiméricos (CARs), na superfície das células T permite o redirecionamento da es- pecificidade das células T. Em estudos clínicos, as células CAR-T, por exemplo, células anti-CD19 CAR-T, produziram respostas duráveis e completas em pacientes com leucemia e linfoma (Porter et al. (2015) Sci Trans! Med., 7: 303ra139; Kochenderfer (2015) J. Clin. Oncol., 33:
540-9; Lee et al. (2015) Lancet, 385: 517-28; Maude et al. (2014) N Engl J Med, 371: 1507-17).
[00144] Em certos contextos, os métodos disponíveis para a terapia celular adotiva nem sempre são totalmente satisfatórias. Em alguns contextos, a eficácia ideal pode depender da capacidade das células administradas de reconhecer e se ligar a um alvo, por exemplo, antí- geno alvo, para trafegar, localizar e entrar com sucesso em sítios apropriados dentro do indivíduo, tumores e ambientes. Em alguns con- textos, a eficácia ideal pode depender da capacidade das células ad- ministradas de se ativar, expandir e exercer várias funções efetoras, incluindo morte citotóxica e secreção de vários fatores, como citocinas, para persistir, inclusive a longo prazo, para diferenciar, transição ou engajamento na reprogramação para certos estados fenotípicos (como memória de longa duração, estados menos diferenciados e efetores), para evitar ou reduzir as condições imunossupressoras no microambi- ente local de uma doença, para fornecer respostas efetivas e robustas de recall após a liberação e re-exposição ao ligante ou antígeno alvo e evite ou reduza a exaustão, anergia, tolerância periférica, diferencia- ção terminal e/ou diferenciação em um estado supressor.
[00145] Em algumas modalidades, a exposição e persistência de células modificadas são reduzidas ou diminuem após a administração ao indivíduo. No entanto, as observações indicam que, em alguns ca- sos, o aumento da exposição do indivíduo às células administradas que expressam os receptores recombinantes (por exemplo, número aumentado de células ou duração ao longo do tempo) pode melhorar a eficácia e os resultados terapêuticos em terapia celular adotiva. Análi- ses preliminares realizadas após a administração de diferentes células T que expressam o CAR-CD19 direcionadas a indivíduos com vários cânceres que expressam o CD19 em vários ensaios clínicos revelaram uma correlação entre maior e/ou maior grau de exposição às células que expressam o CAR e os resultados do tratamento. Tais desfechos incluíram sobrevida e remissão do paciente, mesmo em indivíduos com carga tumoral grave ou significativa.
[00146] Em alguns aspectos, os métodos e usos fornecidos propor- cionam ou alcançam respostas ou eficácia melhoradas ou mais durá- veis em comparação com certos métodos alternativos, como em gru- pos específicos de indivíduos tratados. Em algumas modalidades, os métodos são vantajosos em virtude da administração de terapia de células T, como uma composição que inclui células para terapia celular adotiva, por exemplo, como uma terapia de células T (por exemplo, células T de expressão de CAR) e um inibidor da gama secretase.
[00147] Os métodos fornecidos são com base em observações de que o inibidor de gama secretase melhora uma ou mais atividades funcionais de células de expressão de receptores recombinantes es- pecíficas para BCMA após a exposição a células que expressam BCMA na presença de um inibidor de gama secretase. Tais atividades funcionais incluem, por exemplo, atividade citolítica dependente de an- tígeno e/ou capacidade de produzir uma ou mais citocinas. Em alguns aspectos, a atividade melhorada pode ser devida ao aumento da ex- pressão ou expressão estabilizada do BCMA de superfície nas células (por exemplo, células de tumor/câncer, por exemplo, células de mi- eloma múltiplo). Em alguns aspectos, aumentar ou estabilizar a ex- pressão de um antígeno alvo, por exemplo, BCMA, nas células alvo, melhora o resultado para os pacientes que podem ser ou são baixos para a expressão do antígeno alvo, por exemplo, BCMA, de modo que esteja disponível antígeno suficiente para o direcionamento pela tera- pia celular, por exemplo, terapia com células T. Em algumas modali- dades, as modalidades fornecidas reduzem a variabilidade nos resul- tados do tratamento entre um grupo de indivíduos com expressão su- perficial variável do antígeno alvo, por exemplo, BCMA. Em algumas modalidades dos métodos fornecidos, um paciente é selecionado para administração da terapia de combinação fornecida de um inibidor de gama secretase e uma imunoterapia, como terapia celular (por exem- plo, células CAR-T) se células de um câncer no indivíduo, como célu- las de expressão de CD138, CD38 de superfície ou um marcador de célula plasmática de superfície ou são derivadas de células plasmáti- cas, apresentam baixa expressão do antígeno de maturação de célu- las B de superfície (BCMA) e/ou um nível de BCMA de superfície so- bre um nível limiar. Portanto, em alguns aspectos, o inibidor de gama secretase é administrado em uma quantidade para estabilizar a ex- pressão da superfície do BCMA, tal como reduzindo ou inibindo a cli- vagem intramembranar do BCMA.
[00148] Em algumas modalidades, os métodos fornecidos oferecem vantagens em indivíduos que não têm, ou que não são selecionados com base em altos níveis de soro ou plasma ou níveis de tumor de BCMA solúvel ou vertente. Em algumas modalidades, o paciente não é selecionado por ter altos níveis séricos ou plasmáticos ou tumorais de BCMA solúvel ou vertente. Em algumas modalidades, a terapia de combinação fornecida envolve a administração de uma terapia celular, por exemplo, células T de expressão de CAR, tendo um domínio de ligação ao antígeno que se liga ao BCMA de superfície no qual o do- mínio de ligação ao antígeno se liga ao BCMA solúvel com uma afini- dade menor que a afinidade do referido domínio de ligação ao antíge- no que se liga ao BCMA de superfície. Em alguns contextos, a terapia de combinação fornecida envolve a administração de uma terapia ce- lular, como células de expressão de receptores recombinantes, por exemplo, células T de expressão de CAR, nas quais a ligação ao BCMA de superfície pelo receptor recombinante ou CAR ou uma me- dida indicativa da função ou atividade das células de expressão de re- ceptores recombinantes (por exemplo, células de expressão de CAR),
após a exposição a células que expressam o BCMA de superfície, é não é reduzido ou bloqueado ou não é substancialmente reduzido ou bloqueado na presença de uma forma solúvel ou vertente do BCMA.
[00149] Em alguns aspectos, esses resultados são alcançados en- quanto melhoram ou melhoram a atividade, em alguns casos a ativi- dade intrínseca das células, por exemplo, células T, da terapia celular. Em alguns aspectos, isso pode ser alcançado na presença de um ini- bidor de gama secretase que exibe atividade para outros alvos além do BCMA, como atividade para clivagem de um Incisura. Um exemplo de um tal inibidor é LY3039478 ou composto 1 no presente documen- to, ou estereoisômeros, sais ou hidratos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. Em alguns aspectos, embora a sinalização de incisura possa regular a diferenciação e/ou proliferação de células T, as obser- vações no presente documento demonstram atividades melhoradas de células T na presença de um inibidor exemplar conhecido por direcio- nar a sinalização de incisura, por exemplo, LY3039478. Por exemplo, como mostrado no presente documento, em um ensaio de estimulação em série exemplar que avalia atividades de células CAR-T anti-<BCMA após estimulação repetida com células que expressam BCMA, foi ob- servada expansão e sobrevivência ou aumento de células CAR+ T aumentadas na presença do inibidor de gama secretase exemplar. Tais resultados indicam que a terapia de combinação fornecida melho- ra a função da célula T, incluindo funções relacionadas à expansão, proliferação e persistência de células T.
[00150] Os resultados fornecidos indicam que a terapia de combi- nação dos métodos inibidores da gama secretase na terapia com célu- las, como a administração de terapia com células T adotiva, alcança uma função melhorada da terapia com células T. Em algumas modali- dades, a combinação da terapia celular (por exemplo, administração de células T modificadas) com o inibidor de gama secretase melhora ou realça uma ou mais funções e/ou efeitos da terapia com células T, incluindo após o encontro com antígeno, como persistência, expansão, citotoxicidade e/ou resultados terapêuticos, por exemplo, capacidade de matar ou reduzir a carga de tumor ou outra doença ou célula-alvo. Em alguns aspectos, os métodos fornecidos aumentam a resposta ge- ral e/ou a sobrevivência em mais de 1,5 vezes, 2,0 vezes, 3,0 vezes, 4,0 vezes, 5,0 vezes, 10 vezes ou mais em comparação com um tra- tamento alternativo, como comparado a uma monoterapia envolvendo a administração da terapia com células T (por exemplo, célula CAR-T) ou um inibidor de gama secretase, ou um sal farmaceuticamente acei- tável do seu hidrato.
[00151] Em alguns aspectos, os métodos fornecidos podem realçar, aumentar ou potencializar a terapia com células T, como para superar a falta de persistência e/ou esgotamento das células T. Em algumas modalidades, um indivíduo que recebeu administração de uma terapia de células T, por exemplo, a célula CAR-T é monitorada quanto à pre- sença, ausência ou nível de células T da terapia no indivíduo, tal como em uma amostra biológica do indivíduo, por exemplo, no sangue do indivíduo. Em algumas modalidades, um inibidor de gama secretase, ou um sal farmaceuticamente aceitável do seu hidrato, é administrado a um indivíduo que recebeu a terapia com células T (por exemplo, cé- lulas CAR-T), mas em que essas células se expandiram fracamente e/ou estão em ou abaixo de um nível limiar em uma amostra do indiví- duo, por exemplo, amostra de sangue, em um momento em que uma expansão forte ou robusta das células CAR-T no indivíduo é tipica- mente observada em uma pluralidade de indivíduos que administram uma terapia com células T (por exemplo, CAR-T), em alguns casos, essa mesma terapia com células T (por exemplo, as mesmas células CAR-T). Em algumas dessas modalidades, o nível de células modifi- cadas, por exemplo, CAR+, na amostra é determinado como o número de células, por exemplo, células CAR+, por microlitro da amostra; em algumas modalidades, o nível de pico é o mais alto dessa medição após, opcionalmente, durante um período de tempo especificado após a administração das células ou terapia celular ao indivíduo. Em alguns aspectos, um inibidor de gama secretase é administrado a um indiví- duo que recebeu precedentemente uma terapia celular, se, cerca de 1 a 15 dias após o início da administração da terapia com células T ao indivíduo, menos de 10 células por uL, como menos de 5 células por ul ou menos de 1 célula por ul de células da terapia com células T, por exemplo, as células CAR-T, ou um subconjunto CD8+ ou CD3+, são detectáveis no sangue. Em algumas modalidades, um inibidor de gama secretase é administrado a um indivíduo que recebeu previa- mente uma terapia celular, se, no ou cerca de 12 a 15 dias após o iní- cio da administração da terapia de células T ao indivíduo, por exemplo, células CAR-T, menos de 10 células por uL, como menos de 5 células pers ul ou menos de 1 célula por uL dessas células, ou um subconjun- to CD8+ ou CD3+, são detectáveis no sangue.
[00152] Em certos aspectos, os métodos fornecidos podem realçar, aumentar ou potencializar a terapia com células T em indivíduos nos quais foi observada uma resposta de pico (por exemplo, presença de células T e/ou redução na carga tumoral) à terapia com células T, mas em que a resposta, por exemplo, presença de células T e/ou redução da carga tumoral, tornou-se reduzida ou não é mais detectável. Em alguns aspectos, um inibidor de gama secretase é administrado a um indivíduo dentro de uma semana, como 1, 2 ou 3 dias após: (i) o nível de pico ou máximo das células da terapia com células T são detectá- veis no sangue do indivíduo; (ii) o número de células da terapia de cé- lulas T detectáveis no sangue, após serem detectáveis no sangue, não é detectável ou é reduzido, opcionalmente reduzido em comparação com um ponto de tempo precedente após a administração da terapia de células T; (ili) o número de células da terapia de células T detectá- veis no sangue diminui em mais de 1,5 vezes, 2,0 vezes, 3,0 vezes, 4,0 vezes, 4,0 vezes, 5,0 vezes, 10 vezes ou mais em comparação com o células de número de pico ou máximo da terapia com células T detectáveis no sangue do indivíduo após o início da administração da terapia com células T; (iv) em um momento após um nível de pico ou máximo das células da terapia com células T serem detectáveis no sangue do indivíduo, o número de células ou derivado das células T detectáveis no sangue do indivíduo é menor que 10%, menor que 5%, menor que 1% ou menor que 0,1% das células mononucleares do sangue periférico totais (PBMCs) no sangue do indivíduo; (v) o indiví- duo apresenta progressão da doença e/ou recidivou após remissão após o tratamento com a terapia com células T; e/ou (v) o indivíduo exibe uma carga tumoral aumentada em comparação com a carga tu- moral em um momento antes ou após a administração das células T e antes da iniciação da administração do inibidor da gama secretase, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00153] Em algumas modalidades, um inibidor de gama secretase é administrado a um indivíduo que recebeu uma terapia celular, por exemplo, células CAR-T, mas que recaíram após o tratamento com a terapia com células T, como num momento em que a resposta, por exemplo, presença de células T e/ou redução da carga tumoral, tor- nou-se reduzida ou não é mais detectável. Em alguns aspectos, a re- caída pode ocorrer devido à perda do antígeno BCMA, o que, em al- guns casos, pode ser devido à regulação negativa do antígeno BCMA/escape do antígeno. Em alguns casos, pode ser devido à cliva- gem ou eliminação do antígeno BCMA da superfície das células. Em alguns aspectos, a perda de antígeno pode levar a uma redução nas células que apresentam um antígeno alvo (por exemplo, BCMA), dimi- nuindo ou reduzindo a atividade e/ou função das células CAR T e/ou diminuindo o número de células CAR T, por exemplo, no sangue. Em algumas modalidades, a administração de inibidor de gama secretase pode ser administrada em um momento em que o indivíduo recaiu ou está com suspeita ou provável recaída da terapia celular para reduzir ou impedir a clivagem ou eliminação do antígeno alvo (por exemplo, BCMA) da célula superfície. Em tais modalidades, a administração de inibidor de gama secretase pode revigorar ou impulsionar as células CAR T após a recaída, impedindo ou reduzindo a clivagem e/ou a libe- ração do antígeno alvo (por exemplo, BCMA).
[00154] Em algumas modalidades, os métodos fornecidos que en- volvem terapia de combinação com uma terapia celular e um inibidor de gama secretase resultam em células geneticamente modificadas com persistência aumentada e/ou melhor potência em um indivíduo ao qual é administrada em comparação à administração da terapia celular na ausência do inibidor da gama secretase. Em algumas modalidades, a persistência é aumentada pelo menos ou cerca de pelo menos 1,5 vezes, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 30 vezes, 50 vezes, 60 vezes, 70 vezes, 80 vezes, 90 vezes, 100 vezes ou mais. Em algumas modalidades, o grau ou extensão da persistência das células administradas pode ser detectado ou quantificado após administração a um indivíduo. Por exemplo, em alguns aspectos, a PCR quantitativa (PCR) é usada pa- ra avaliar a quantidade de células que expressam o receptor recombi- nante (por exemplo, células de expressão de CAR) no sangue ou soro ou órgão ou tecido (por exemplo, sítio da doença) do indivíduo. Em alguns aspectos, a persistência é quantificada como cópias de DNA ou plasmídeo que codifica o receptor, por exemplo, CAR, por micrograma de DNA, ou como o número de células de expressão de receptores, por exemplo, células de expressão de CAR, por microlitro da amostra, por exemplo, de sangue ou soro ou por número células mononuclea-
res do sangue periférico totais (PBMCs) ou glóbulos brancos ou célu- las T por microlitro da amostra. Em algumas modalidades, também podem ser realizados ensaios citométricos de fluxo que detectam célu- las que expressam o receptor geralmente usando anticorpos especiífi- cos para os receptores. Os ensaios com base em células também po- dem ser usados para detectar o número ou porcentagem de células funcionais, como células capazes de se ligar e/ou neutralizar e/ou in- duzir respostas, por exemplo, respostas citotóxicas, contra células da doença ou condição ou expressar o antígeno reconhecido pelo recep- tor. Em qualquer uma dessas modalidades, a extensão ou nível de ex- pressão de outro marcador associado ao receptor recombinante (por exemplo, células de expressão de CAR) pode ser usado para distinguir as células administradas das células endógenas em um indivíduo.
[00155] Em aspectos dos métodos no presente documento forneci- dos, a combinação de terapia celular com um inibidor de gama secre- tase que aumenta a potência e/ou promove a atividade prolongada das células CAR T permite a administração de uma dose mais baixa de células CAR T para atingir o mesmo efeito terapêutico que o observa- do com uma maior dose de células CAR T sem um inibidor de gama secretase. Em algumas modalidades, a dose de células CAR T admi- nistrada quando combinada com inibidor de gama secretase pode ser reduzida em 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% ou mais de uma dose de CAR células T administradas sem inibidor de gama secretase.
[00156] Em algumas modalidades, os métodos podem ser usados para o tratamento de uma doença ou condição, como um câncer, in- cluindo malignidade de células B ou malignidade hematológica. Em alguns aspectos, o câncer é mieloma múltiplo, plasmocitoma, um cân- cer de origem de células plasmáticas e/ou um câncer de origem de células B. Em alguns aspectos, essas doenças, condições ou maligni- dades incluem aquelas nas quais as respostas, por exemplo, a respos-
ta completa (CR) ao tratamento apenas com a terapia com células, como uma composição que inclui células para terapia celular adotiva, por exemplo, como uma terapia com células T (por exemplo, células T de expressão de CAR), é relativamente baixa em comparação com o tratamento com outras terapias com células T ou tratamento de outras doenças ou neoplasias (por exemplo, uma CR em menos de ou menos de 60%, menos de 50% ou menos de 45% dos indivíduos assim trata- dos).
[00157] Em algumas modalidades, os métodos fornecidos reduzem ou melhoram um sintoma, resultado ou carga da doença ou condição em um grau maior que a combinação de (i) o grau de redução ou me- lhoria efetuado pela administração apenas do inibidor de gama secre- tase, opcionalmente, em média, em uma população de indivíduos com a doença ou condição e (ii) o grau de redução ou melhoria pela admi- nistração da terapia de células T sozinha, opcionalmente, em média, em uma população de indivíduos com a doença ou condição. Em al- gumas modalidades, o método reduz ou melhora esses sintomas, re- sultados ou ônus da doença, por exemplo, em comparação com, em média, em uma população de indivíduos com a doença ou condição, superior ou superior a cerca de 1,5 vezes, 2,0 vezes, 3,0 vezes, 4,0 vezes, 4,0 vezes, 5,0 vezes, 6,0 vezes, 7,0 vezes, 8,0 vezes, 9,0 ve- zes, 10,0 vezes, 20,0 vezes, 30,0 vezes, 40,0 vezes, 50,0 vezes ou mais.
[00158] Também são fornecidos métodos para projetar, preparar e produzir as células (por exemplo, células T de expressão de CAR), composições que contêm as células e/ou inibidor de gama secretase e kits e dispositivos que contêm e para usar, produzir e administrar as células e/ou inibidor da gama secretase, tal como de acordo com os métodos de terapia de combinação fornecidos.
[00159] Todas as publicações, incluindo documentos de patentes,
artigos científicos e bancos de dados, mencionados neste pedido, são incorporados por referência em sua totalidade para todos os fins, na mesma extensão que se cada publicação individual fosse incorporada individualmente por referência. Se uma definição mencionada neste documento for contrária ou inconsistente com uma definição mencio- nada nas patentes, pedidos, pedidos publicados e outras publicações que são no presente documento incorporadas por referência, a defini- ção no presente documento estabelecida prevalece sobre a definição no presente documento incorporada por referência.
[00160] Os títulos das seções no presente documento usados são apenas para fins organizacionais e não devem ser interpretados como limitando o assunto descrito. |. TERAPIA DE COMBINAÇÃO
[00161] São no presente documento fornecidos métodos para tera- pia de combinação para o tratamento de uma doença ou distúrbio, por exemplo, um câncer ou doença proliferativa, que inclui administrar a um indivíduo uma terapia de combinação de 1) um inibidor de gama secretase e 2) uma imunoterapia, por exemplo, uma terapia celular, por exemplo, terapia de células T, por exemplo, célula de expressão de CAR (por exemplo, célula T). Em algumas modalidades, a terapia celular é uma terapia celular imune adotiva que compreende células T que reconhecem e/ou direcionam especificamente um antígeno asso- ciado a uma doença ou distúrbio, por exemplo, um câncer ou doença proliferativa. Também são fornecidas combinações e artigos de fabri- cação, como kits, que contêm uma composição que compreende a imunoterapia, por exemplo, terapia com células T e/ou uma composi- ção que compreende o inibidor de gama secretase e usos de tais composições e combinações para tratar ou prevenir doenças, condi- ções e distúrbios, incluindo cânceres.
[00162] Em algumas modalidades, esses métodos podem incluir a administração do inibidor da gama secretase antes, simultaneamente com, durante, durante o curso de (incluindo uma vez e/ou periodica- mente durante o curso de) e/ou subsequentemente à administração (por exemplo, iniciação da administração) da imunoterapia, por exem- plo, terapia celular (por exemplo, células T de expressão de CAR). Em algumas modalidades, as administrações podem envolver administra- ções sequenciais ou intermitentes do inibidor de gama secretase e te- rapia celular.
[00163] Em algumas modalidades, a terapia celular é terapia celular adotiva. Em algumas modalidades, a terapia celular é ou compreende uma terapia linfocítica infiltrante de tumor (TIL), uma terapia de TOR transgênica ou uma terapia celular que expressa receptores recombi- nantes (opcionalmente terapia com células T), que opcionalmente é uma terapia celular de expressão de receptor quimérico de antígeno (CAR). Em algumas modalidades, a terapia é uma terapia direcionada às células B. Em algumas modalidades, a terapia visa o antígeno de maturação das células B (BCMA). Em algumas modalidades, a terapia direciona CD19. Em algumas modalidades, a terapia direciona a muci- na 1 associada à superfície celular (MUC1). Em algumas modalidades, as células e os regimes de dosagem para administração das células podem incluir qualquer um como descrito na subseção A a seguir em "Administração de Células". Em algumas modalidades, os regimes de dosagem para administração do inibidor de gama secretase podem incluir os descritos na subseção B seguinte em "Administração de ini- bidor de gama secretase".
[00164] Em algumas modalidades, a imunoterapia, por exemplo, terapia celular (por exemplo, células T de expressão de CAR) e inibi- dor de gama secretase são fornecidos como composições farmacêuti- cas para administração ao indivíduo. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas contêm quantidades terapeuticamente efi-
cazes de um ou de ambos os agentes para terapia de combinação, por exemplo, células T para terapia celular adotiva e um inibidor de gama secretase, como descrito. Em algumas modalidades, os agentes são formulados para administração em composições farmacêuticas sepa- radas. Em algumas modalidades, qualquer uma das composições far- macêuticas no presente documento fornecidas pode ser formulada em formas de dosagem apropriadas para cada via de administração.
[00165] Em algumas modalidades, a terapia de combinação, que inclui administrar uma imunoterapia, por exemplo, terapia celular, in- cluindo células modificadas, como terapia de células CAR-T, e o inibi- dor de gama secretase é administrado a um indivíduo ou paciente com uma doença ou condição a ser tratada (por exemplo, câncer) ou em risco de ter a doença ou condição (por exemplo, câncer). Em alguns aspectos, os métodos tratam, por exemplo, melhorar um ou mais sin- tomas da doença ou condição, como diminuir a carga tumoral em um câncer que expressa um antígeno reconhecido pela imunoterapia ou agente imunoterapêutico, por exemplo, reconhecido por uma célula T modificada.
[00166] Em algumas modalidades, a doença ou condição que é tra- tada pode ser qualquer uma na qual a expressão de um antígeno este- ja associada e/ou envolvida na etiologia de uma condição de doença ou distúrbio, por exemplo, causa, exacerba ou de outro modo está en- volvida em tal doença, condição ou distúrbio. As doenças e condições exemplares podem incluir doenças ou condições associadas à malig- nidade ou transformação de células (por exemplo, câncer), doença au- toimune ou inflamatória ou uma doença infecciosa, por exemplo, cau- sada por patógenos bacterianos, virais ou outros. Antígenos exempla- res, que incluem antígenos associados a várias doenças e condições que podem ser tratadas, incluem qualquer um dos antígenos no pre- sente documento descritos. Em modalidades particulares, o receptor recombinante expresso nas células modificadas de uma terapia de combinação, incluindo um receptor de antígeno quimérico ou TCR transgênico, liga-se especificamente a um antígeno associado à doen- ça ou condição.
[00167] Em algumas modalidades, a doença ou condição é um câncer ou doença proliferativa que expressa BCMA. Em algumas mo- dalidades, os métodos fornecidos empregam uma célula que expressa o receptor recombinante (por exemplo, célula CAR-T) que direciona o BCMA. Em modalidades particulares, a doença ou condição é um mi- eloma múltiplo. Em alguns casos, o mieloma múltiplo é um mieloma múltiplo recorrente ou refratário.
[00168] Entre as doenças a serem tratadas, está qualquer doença ou distúrbio associado ao BCMA ou qualquer doença ou distúrbio no qual o BCMA seja especificamente expresso e/ou no qual o BCMA te- nha sido direcionado para o tratamento (também no presente docu- mento referido intercambiavelmente como uma "doença ou distúrbio"). Os cânceres associados à expressão de BCMA incluem neoplasias hematológicas, como mieloma múltiplo, macroglobulinemia de Wal- denstrom, bem como linfomas de Hodgkin e não Hodgkin. Veja Co- query et al., Crit Rev Immunol., 2012, 32 (4): 287-305 para uma revi- são do BCMA. Como o BCMA está implicado na mediação da sobrevi- vência das células tumorais, é um alvo potencial para a terapia do câncer. Os receptores de antígeno quimérico contendo anticorpos anti- BCMA, incluindo anticorpos de BCMA anti-humano de camundongo e anticorpos anti-humanos humanos, e células que expressam tais re- ceptores quiméricos foram descritos precedentemente. Veja Carpenter et al., Clin Cancer Res., 2013, 19 (8): 2048-2060, WO 2016/090320, WO2016090327, WO2010104949A2 e WO2017173256. CARS exem- plares contendo anticorpos anti-BCMA são no presente documento descritos.
[00169] Em algumas modalidades, antes do início da administração das células modificadas, como CAR anti-BCMA, o indivíduo recebeu uma ou mais terapias precedentes.
Em algumas modalidades, o indi- víduo recebeu pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 ou terapias mais precedentes.
Em algumas modalidades, o indivíduo recebeu pelo menos 3, 4, 5, 6,7, 8, 9, 10 ou mais terapias precedentes.
Em alguns aspectos, o indivíduo recaiu após, ou foi um tratamento refratário a, uma ou mais de, por exemplo, cada uma, individualmente, uma ou mais terapias precedentes.
Em alguns aspectos, as terapias precedentes incluem tratamento com transplante autólogo de células tronco (ASCT); um agente imunomo- dulador, por exemplo, um IMiD, um inibidor de proteassoma; e um an- ticorpo anti-CD38; a menos que o indivíduo não fosse candidato a ou fosse contra-indicado para uma ou mais terapias.
Em algumas modali- dades, o agente imunomodulador, por exemplo, um IMiD é seleciona- do entre talidomida, lenalidomida ou pomalidomida.
Em algumas mo- dalidades, o inibidor de proteassoma é selecionado dentre bortezomi- be, carfilzomibe ou ixazomibe.
Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD38 é ou compreende daratumumabe.
Em algumas modalida- des, o indivíduo deve ter passado pelo menos 2 ciclos consecutivos de tratamento para cada regime, a menos que a doença progressiva fos- se a melhor resposta ao regime.
Em alguns aspectos, um indivíduo para tratamento com o método no presente documento apresentado apresenta um mieloma que recidivou ou é refratário ao tratamento com mais de 10% de imuno-histoquímica de células plasmáticas malignas CD138+ (IHC) na biópsia do núcleo da medula óssea, após ASCT ou, se o indivíduo não for submetido à ASCT, o paciente não terá direito a transplante, por exemplo, devido à comorbidade etária, escolha do pa- ciente, estado da doença e/ou critério do médico, e tem doença que persistiu após mais de quatro ciclos de terapia de indução e/ou que é refratária ou não é tolerante à terapia com um inibidor de proteassoma e fármaco imunomodulador, por exemplo, IMiD.
[00170] Em algumas modalidades, a doença ou condição é um tu- mor, como um tumor sólido, linfoma, leucemia, tumor no sangue, tu- mor metastático ou outro tipo de câncer ou tumor.
[00171] Em algumas modalidades, o antígeno associado à doença ou distúrbio é selecionado do grupo que consiste em antígeno de ma- turação de células B (BCMA), RORI, Her2, LI2-CAM, CD19, CD20, CD22, mesotelina, CEA e antígeno de superfície da hepatite B, recep- tor antifolato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, EGP-2, EGP, EPHa2, ErbB2, 3 ou 4, dímeros erbB, EGFR viIll, FPBP, FCRL5, FCRHB5, acetilcolina fetal e receptor, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R- alfa, IL-13R-alfa2, kdr, cadeia leve capa, Lewis Y, molécula de adesão de células L1, (LI-CAM), antígeno associado ao melanoma (MAGE )- A1, MAGE-A3, MAGE-AG6, antígeno do melanoma preferencialmente expresso (PRAME), survivina, EGP2, EGP40, TAG72, B7-H6, receptor I1L-13 a2 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW- MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-Al MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, receptor-a de folato, CD44v6, CD44v7/8, integrina de avb6, 8H9, NCAM, receptores de VEGF, 5T4, AchR fetal, Ligantes de NKG2D, CD44v6, antígeno dual e um antígeno associado a um marcador universal, um antígeno câncer- testículo, mesotelina, MUC1, MUC16, PSCA, Ligantes de NKG2D, NY- ESO-1, MART-1, gp100, antígeno oncofetal, ROR1I, TAG72, VEGF- R2, antígeno carcinoembrionário (CEA), antígeno prostático especiífi- co, PSMA, Her2/neu, receptor de estrogênio, receptor de progestero- na, efrinaB2, CD123, c-Met, GD-2, GD2 O-acetilado (OGD2), CE7, Tumor 1 de Wilms (WT-1), uma ciclina, ciclina A2, CCL-1, CD138 e um antígeno particular do patógeno. Em algumas modalidades, o antígeno está associado ou é um marcador universal. Em algumas modalida- des, o antígeno associado à doença ou distúrbio é selecionado do grupo que consiste em Incisura 1, Incisura 2, Incisura 3, Incisura 4, Mucina 1 associado à superfície celular (MUC1), Efrina B2, Betaglica- na (TGFBR3), CD43, CD44, CSFIR, CX3CR1, CXCL16, Delta1, E- caderina, N-caderina, HLA-A2, IFNaR2, ILIR1, ILIR2, IL6R e proteína precursora de amiloide (APP).
[00172] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio é um dis- túrbio relacionado à célula B. Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio é uma ou mais doenças ou condições dentre glioblastoma, granulomatose linfomatoide, distúrbio linfoproliferativo pós-transplante, distúrbio imunorregulador, doença da cadeia pesada, amiloidose pri- mária ou associada a imunócitos ou gamopatia monoclonal de signifi- cado indeterminado.
[00173] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio é uma do- ença ou distúrbio autoimune. Tais doenças ou distúrbios autoimunes incluem, mas não estão limitados a, lúpus eritematoso sistêmico (LES), nefrite lúpica, doença inflamatória intestinal, artrite reumatoide (por exemplo, artristite reumatoide juvenil), vasculite associada ao ANCA, trombocitopenia púrpura idiopática (ITP), trombocitopenia púr- pura trombótica (TTP), trombocitopenia autoimune, doença de Cha- gas, doença de Grave, granulomatose de Wegener, poliarterite nodo- sa, síndrome de Sjogren, pênfigo vulgar, esclerodermia, esclerose múltipla, psoríase, nefropatia por IgA, polineuropatia por IGgM, vasculite, diabetes melito, síndrome de Reynaud, síndrome antifosfolipídica, do- ença de Goodpasture, doença de Kawasaki, anemia hemolítica autoi- mune, miastenia grave ou glomerulonefrite progressiva.
[00174] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio é uma ma- lignidade de células B. Em algumas modalidades, o câncer (por exem- plo, um câncer de expressão de BCMA) é um linfoma, uma leucemia ou uma malignidade de células plasmáticas. Os linfomas no presente documento considerados incluem, entre outros, linfoma de Burkitt (por exemplo, linfoma endêmico de Burkitt ou linfoma esporádico de Bur- kitt), linfoma não-Hodgkin (NHL), linfoma de Hodgkin, macroglobuline- mia de Waldenstrom, linfoma folicular, linfoma de pequenas células não clivadas, linfoma de tecido linfático associado à mucosa (MALT), linfoma de zona marginal, linfoma esplênico, linfoma de células B mo- nocitoide nodal, linfoma imunoblástico, linfoma de células grandes, lin- foma de células mistas difuso, linfoma angiocêntrico de células B pul- monares, linfoma linfocítico pequeno, linfoma de células B mediastino primário, linfoma linfoplasmocítico (LPL) ou linfoma de células de re- vestimento (MCL). As leucemias no presente documento consideradas incluem, mas não estão limitadas a, leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia de células plasmáticas ou leucemia linfocítica aguda (ALL). Também são consideradas no presente documento as neoplasias de células plasmáticas, incluindo, mas não se limitando a, mieloma múlti- plo (por exemplo, mieloma múltiplo não secretório, mieloma múltiplo latente) ou plasmocitoma. Em algumas modalidades, a doença ou condição é mieloma múltiplo, como mieloma múltiplo reincidente e/ou refratário. Entre as doenças, distúrbios ou condições que podem ser tratados incluem, entre outros, neuroblastoma, carcinoma de células renais, câncer de cólon, câncer colorretal, câncer de mama, câncer epitelial de células escamosas, melanoma, mieloma (por exemplo, mi- eloma múltiplo), câncer de estômago, câncer de cérebro, câncer de pulmão, câncer de pâncreas, câncer de colo de útero, câncer de ová- rio, câncer de fígado, câncer de bexiga, câncer de próstata, câncer de testículo, câncer de tireoide, câncer de útero, câncer suprarrenal e câncer de cabeça e pescoço.
[00175] Em algumas modalidades, o câncer ou doença proliferativa é uma malignidade de células B ou malignidade hematológica. Em al- gumas modalidades, o câncer ou doença proliferativa é leucemia linfo- blástica aguda (ALL), linfoma não Hodgkin (NHL) ou leucemia linfociíti-
ca crônica (CLL). Em algumas modalidades, o câncer é CLL. Em al- gumas modalidades, os métodos podem ser usados para tratar um mieloma, um linfoma ou uma leucemia. Em algumas modalidades, os métodos podem ser usados para tratar um linfoma não Hodgkin (NHL), uma leucemia linfoblástica aguda (ALL), uma leucemia linfocítica crô- nica (CLL), um linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), leucemia mieloide aguda (AML), ou um mieloma, por exemplo, um mieloma múl- tiplo (MM). Em algumas modalidades, os métodos podem ser usados para tratar um MM ou um DBCBL.
[00176] Em algumas modalidades, os métodos podem ser usados para tratar um câncer não hematológico, como um tumor sólido. Em algumas modalidades, os métodos podem ser usados para tratar bexi- ga, pulmão, cérebro, melanoma (por exemplo, pulmão de pequenas células, melanoma), mama, cervical, ovário, colorretal, pancreático, endometrial, esofágico, rim, fígado, próstata, pele, tireoide ou câncer uterino. Em algumas modalidades, o câncer ou doença proliferativa é câncer de pâncreas, câncer de bexiga, câncer colorretal, câncer de mama, câncer de próstata, câncer renal, câncer hepatocelular, câncer de pulmão, câncer de ovário, câncer cervical, câncer de pâncreas, câncer retal, câncer de tireoide, câncer uterino, câncer gástrico, câncer de esôfago, câncer de cabeça e pescoço, melanoma, câncer neuroen- dócrino, câncer no CNS, tumores cerebrais, câncer ósseo ou sarcoma de tecidos moles.
[00177] Em algumas modalidades, a doença ou condição é uma doença ou condição infecciosa, como, entre outras, infecções virais, retrovirais, bacterianas e protozoárias, imunodeficiência, citomegalovíi- rus (CMV), vírus Epstein-Barr (EBV), adenovírus, Poliomavírus BK. Em algumas modalidades, a doença ou condição é uma doença ou condi- ção autoimune ou inflamatória, como artrite, por exemplo, artrite reu- matoide (RA), diabetes tipo |, lúpus eritematoso sistêmico (SLE), do-
ença inflamatória intestinal, psoríase, esclerodermia, doença autoimu- ne da tireoide, doença de Graves, doença de Crohn, esclerose múlti- pla, asma e/ou uma doença ou condição associada ao transplante.
[00178] Paraa prevenção ou tratamento da doença, a dosagem apropriada do inibidor da gama secretase e/ou imunoterapia, como a terapia com células (por exemplo, células T de expressão de CAR), pode depender do tipo de doença a ser tratada, células e/ou recepto- res recombinantes expressos nas células, a gravidade e o curso da doença, via de administração, se o inibidor da gama secretase e/ou a terapia com células T são administrados para fins preventivos ou tera- pêuticos, terapia precedente, frequência de administração, história clí- nica e resposta do indivíduo às células e a critério do médico assisten- te. As composições e células são, em algumas modalidades, adequa- damente administradas ao indivíduo ao mesmo tempo ou durante uma série de tratamentos. Regimes e esquemas de dosagem exemplares para a terapia de combinação fornecida são descritos.
[00179] Em algumas modalidades, a imunoterapia, como terapia celular (por exemplo, terapia de células CAR-T) e o inibidor de gama secretase, é administrada como parte de um tratamento de combina- ção adicional, que pode ser administrado simultaneamente ou sequen- cialmente a, em qualquer ordem, outra intervenção terapêutica. Em alguns contextos, a imunoterapia, como a terapia celular, por exemplo, as células T modificadas, como as células T de expressão de CAR, são coadministradas com outra terapia suficientemente próximo no tempo, de modo que a terapia com células melhore o efeito de um ou mais agentes terapêuticos adicionais, ou vice-versa. Em algumas mo- dalidades, as células são administradas antes de um ou mais agentes terapêuticos adicionais. Em algumas modalidades, a terapia celular, por exemplo, células T modificadas, tais como células T de expressão de CAR, são administradas após os um ou mais agentes terapêuticos adicionais. Em algumas modalidades, os métodos de terapia de com- binação incluem ainda uma terapia de linfodepletação, como a admi- nistração de um agente quimioterapêutico. Em algumas modalidades, a terapia de combinação compreende ainda administrar outro agente terapêutico, como um agente anticâncer, um inibidor de ponto de veri- ficação ou outro agente modulador imunológico. Em algumas modali- dades, a terapia de combinação compreende ainda a administração de um esteroide, como a dexametasona. Os usos incluem usos das tera- pias de combinação em tais métodos e tratamentos, e usos de tais composições na preparação de um medicamento, a fim de realizar tais métodos de terapia de combinação. Em algumas modalidades, os mé- todos e usos desse modo tratam a doença ou condição ou distúrbio, como um câncer ou doença proliferativa, no indivíduo.
[00180] Antes de, durante ou após a administração da imunoterapia (por exemplo, terapia com células T, como terapia com células CAR-T) e/ou um inibidor de gama secretase, a atividade biológica da terapia com células T, por exemplo, a atividade biológica das populações de células modificadas, em algumas modalidades é medida, por exemplo, por qualquer um dentre vários métodos conhecidos. Os parâmetros para avaliar incluem a capacidade das células modificadas de destruir células alvo, persistência e outras medidas da atividade das células T, tal como medido usando qualquer método adequado conhecido na técnica, como ensaios descritos mais adiante na Seção Ill. Em algu- mas modalidades, a atividade biológica das células, por exemplo, célu- las T administradas para a terapia com base nas células T, é medida pelo ensaio de morte celular citotóxica, expressão e/ou secreção de uma ou mais citocinas, proliferação ou expansão, como na re- estimulação com antígeno. Em alguns aspectos, a atividade biológica é medida pela avaliação da carga da doença e/ou resultado clínico, como redução da carga ou sobrecarga tumoral ou carregar. Em algu-
mas modalidades, a administração de um ou ambos os agentes da terapia de combinação e/ou qualquer administração repetida da tera- pia, pode ser determinada com base nos resultados dos ensaios an- tes, durante, durante o curso de ou após a administração de um ou ambos os agentes da terapia de combinação.
[00181] Em algumas modalidades, o efeito combinado do inibidor de gama secretase em combinação com a terapia celular pode ser si- nérgico em comparação com tratamentos envolvendo apenas o inibi- dor de gama secretase ou monoterapia com a terapia celular. Por exemplo, em algumas modalidades, os métodos no presente docu- mento fornecidos resultam em um aumento ou uma melhoria no efeito terapêutico desejado, como um aumento ou uma melhoria na redução ou inibição de um ou mais sintomas associados ao câncer.
[00182] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase aumenta a expansão ou proliferação das células T modificadas, como as células CAR T. Em algumas modalidades, o aumento na expansão ou proliferação é observado in vivo após a administração a um indiví- duo. Em algumas modalidades, o aumento no número de células T modificadas, por exemplo, células CAR-T, é aumentada em mais que ou mais que cerca de 1,2 vezes, 1,5 vezes, 2,0 vezes, 3,0 vezes, 4,0 vezes, 4,0 vezes, 5,0 vezes, 6,0 vezes, 7,0 vezes, 8,0 vezes, 9,0 ve- zes, 10,0 vezes ou mais. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase prolonga e/ou sustenta a atividade e/ou função de células T modificadas, como células CAR T. A. ADMINISTRAÇÃO DE UMA IMUNOTERAPIA
[00183] Em algumas modalidades, uma imunoterapia que se liga ou direciona a um antígeno em uma célula imune e/ou que está envolvida em uma doença ou distúrbio é administrada de acordo com os méto- dos de terapia de combinação fornecidos. Em modalidades particula- res, a imunoterapia liga-se a e/ou reconhece um antígeno que é ex presso em ou em uma célula ou tecido. Em certas modalidades, o an- tígeno é expresso em ou sobre uma célula ou tecido. Em modalidades particulares, o antígeno é expresso na superfície de uma célula. Em algumas modalidades, a célula é uma célula B, uma célula T e/ou uma célula de tumor ou câncer. Em modalidades particulares, o antígeno é expresso em ou sobre uma célula em circulação. Em algumas modali- dades, o antígeno é expresso na superfície de uma célula em circula- ção.
[00184] Em modalidades particulares, a imunoterapia se liga e/ou reconhece pelo menos um antígeno associado a uma doença. Entre as doenças, condições e distúrbios que podem ser tratados em seres humanos com a imunoterapia estão os tumores, incluindo tumores só- lidos, malignidades hematológicas e melanomas, e incluindo tumores localizados e metastáticos, doenças infecciosas, como infecção por vírus ou outro patógeno, por exemplo, HIV, HCV, HBV, CMV, HPV e doença parasitária e doenças autoimunes e inflamatórias. Em algumas modalidades, a doença ou condição é um tumor, câncer, malignidade, neoplasma ou outra doença ou distúrbio proliferativo. Tais doenças incluem, entre outras, leucemia, linfoma, por exemplo, leucemia linfocí- tica crônica (CLL), ALL, linfoma não Hodgkin, leucemia mieloide agu- da, mieloma múltiplo, linfoma folicular refratário, linfoma de células de revestimento, linfoma indolente de células B, malignidades de células B, câncer de cólon, pulmão, fígado, mama, próstata, ovário, pele, me- lanoma, osso e câncer no cérebro, câncer de ovário, câncer epitelial, carcinoma de células renais, adenocarcinoma pancreático, linfoma de Hodgkin, carcinoma cervical, câncer colorretal, glioblastoma, neu- roblastoma, sarcoma de Ewing, meduloblastoma, osteossarcoma, sar- coma sinovial e/ou mesotelioma.
[00185] Em algumas modalidades, a imunoterapia liga-se a pelo menos um antígeno que é um alvo para a clivagem por uma gama se-
cretase. Em algumas modalidades, o antígeno é BCMA ou é mucina 1 (Muc1).
1. Agentes Terapêuticos, por exemplo, anticorpos
[00186] Em certas modalidades, a imunoterapia é um agente tera- pêutico, como um anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno. Em alguns aspectos, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo biespeciífico.
[00187] Em alguns aspectos, a imunoterapia é um agente terapêuti- co que é ou contém um ativador ou estimulador do sistema imunológi- co. Em certas modalidades, o estimulador do sistema imunológico é um agente ou terapia que ativa pelo menos uma célula imune. Em al- gumas modalidades, a célula imune é uma célula T. Em certas moda- lidades, o ativador de células imunes é IL-2, por exemplo, Proleucina; rhu-IFN-alfa-2a e/ou rhu-IFN-alfa-2b, por exemplo, Pegasys, Roferon- A, Intron-A e PEG intron; Anticorpo monoclonal anti-CD3, por exemplo, Muromonab-CD3 e/ou Orthoclone OKT 3; TGN-1412; e/ou Blinatu- momab, por exemplo, anti-CD3xCD3 BiTE.
[00188] Em algumas modalidades, a imunoterapia é ou contém uma terapia de envolvimento de células T que é ou compreende uma molé- cula de ligação capaz de se ligar a uma molécula de superfície ex- pressa em uma célula T. Em algumas modalidades, a molécula de su- perfície é um componente ativador de uma célula T, como um compo- nente do complexo receptor de células T. Em algumas modalidades, a molécula de superfície é CD3 ou é CD2. Em algumas modalidades, a terapia de envolvimento de células T é ou compreende um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, a te- rapia de envolvimento de células T é um anticorpo biespecífico con- tendo pelo menos um domínio de ligação ao antígeno que se liga a um componente ativador da célula T (por exemplo, uma molécula de su- perfície da célula T, por exemplo, CD3 ou CD2) e pelo menos um do-
mínio de ligação ao antígeno que se liga a um antígeno de superfície em uma célula alvo, como um antígeno de superfície em um tumor ou célula cancerígena, por exemplo, qualquer um dos antígenos listados como no presente documento descrito, por exemplo, BCMA ou Muc1. Em algumas modalidades, a ligação simultânea ou quase simultânea de um tal anticorpo a ambos os seus alvos pode resultar em uma inte- ração temporária entre a célula alvo e a célula T, resultando assim em ativação, por exemplo, atividade citotóxica da célula T e subsequente lise da célula alvo.
[00189] Entre esses comprometedores de células T de anticorpo biespecífico exemplares são moléculas de comprometedores de célu- las T biespecíficas (BITE), que contêm moléculas de scFv em tandem fundidas por um ligante flexível (ver, por exemplo, Nagorsen e Bauerle, Exp Cell Res 317, 1255-1260 (2011); moléculas de scFv em tandem fundidas entre si por meio de, por exemplo, um ligante flexível, e que contêm ainda um domínio Fc composto por uma primeira e uma se- gunda subunidade capazes de associação estável (WO2013026837); diacorpos e seus derivados, incluindo diacorpos em tandem (Holliger et al, Prot Eng 9, 299-305 (1996); Kipriyanov et al., J Mol Biol 293, 41- 66 (1999)); moléculas de redirecionamento de afinidade dual (DART) que podem incluir o formato do diacorpo com uma ponte dissulfeto C- terminal; ou triomabes que incluem moléculas de IgG híbridas totais de camundongo/rato (Seimetz et al, Cancer Treat Rev 36, 458-467 (2010). Em algumas modalidades, a terapia de envolvimento de célu- las T é blihatumomabe ou AMG 330. Qualquer um desses engajadores de células T pode ser usado nos métodos, composições ou combina- ções fornecidas.
[00190] Em algumas modalidades, o agente terapêutico é uma liga- ção específica ao BCMA capaz de se ligar ao BCMA e pelo menos um antígeno adicional. Em algumas modalidades, pelo menos um antíge-
no adicional CD19, CD20, CD22, CD33, CD38, CS1, ROR1, GPC3, CD123, IL-13R, CD138, c-Met, EGFRvIIl, GD-2, NY-ESO-1, MAGE A3 ou glicolipídeo F77. Exemplos de tais anticorpos biespecíficos são descritos no documento WO2017/025038.
[00191] O agente terapêutico, como imunoterapia, pode ser admi- nistrado por qualquer meio adequado, por exemplo, por infusão em bolo, por injeção, por exemplo, injeções intravenosas ou subcutâneas, injeção intraocular, injeção periocular, injeção sub-retiniana, injeção intravítrea, injeção trans-septal, injeção subscleral, injeção intracoroi- dal, injeção intracameral, injeção subconjectal, injeção subconjuntival, injeção sub Tenon, injeção retrobulbar, injeção peribulbar ou liberação justascleral posterior. Em algumas modalidades, o agente terapêutico, como imunoterapia, é administrado por administração parenteral, in- trapulmonar e intranasal e, se desejado para o tratamento local, admi- nistração intralesional. As infusões parentéricas incluem administração intramuscular, intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal, intratorácica, intracraniana ou subcutânea.
[00192] Em certas modalidades, uma ou mais doses de uma terapia de envolvimento de células T e/ou um estimulador do sistema imuno- lógico são administradas. Em modalidades particulares, são adminis- trados entre 0,001 ug -5.000 ug da terapia de ativação de células T e/ou um estimulador do sistema imunológico. Em modalidades particu- lares, entre 0,001 ug a 1.000 ug, 0,001 ug a 1 ug, 0,01 ug a 1 po, 0,1 ug a 10 ug, 0,01 ug a 1 ug, 0,1 ug a 5 pg, 0,1 ug a 50 ug, 1 ug a 100 ug, 10 ug a 100 ug, 50 ug a 500 ug, 100 ug a 1.000 ug, 1.000 ug a
2.000 ug ou 2.000 ug a 5.000 ug da terapia de envolvimento de células T. Em algumas modalidades, a dose da terapia de envolvimento de células T é ou inclui entre 0,01 ug/kg e 100 mg/kg, entre 0,1 ug/kg e 10 ug/Kkg, entre 10 ug/kg e 50 ug/kg, entre 50 pug/kg e 100 ug/Kkg, entre 0,1 mg/kg e 1 mg/kg, entre 1 mg/kg e 10 mg/kg, entre 10 mg/kg e 100 mg/kg, entre 100 mg/kg e 500 mg/kg, entre 200 mg/kg e 300 mg/kg, entre 100 mg/kg e 250 mg/kg, entre 200 mg/kg e 400 mg/kg, entre 250 mg/kg e 500 mg/kg, entre 250 mg/kg e 750 mg/kg, entre 50 mg/kg e 750 mg/kg, entre 1 mg/kg e 10 mg/kg, ou entre 100 mg/kg e 1.000 mg/kg (quantidade do agente linfodepletor sobre o peso corporal). Em algumas modalidades, a dose da terapia de envolvimento de células T é ou é cerca de 0,1 ug/kg, 0,5 ug/kg, 1 uo/ka, 5 ug/kg, 10 upg/Kkg, 20 ug/kg, 30 ug/kg, 40 upg/kg, 50 vg/kg, 60 po/kg, 70 vug/kg, 80 pg/kg, 90 ug/kg, 0,1 mg/kg, 0,5 mg/kg, 1 mg/kg, 2,5 mg/kg, 5 mg/kg, 10 mg/kg, mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 40 mg/kg, 45 mg/kg, 50 mg/kg, 55 mg/kg, 60 mg/kg, 65 mg/kg, 70 mg/kg, 75 mg/kg, 80 mg/kg, 85 mg/kg, 90 mg/kg, 95 mg/kg, 100 mg/kg, 200 mg/kg, 300 mg/kg, 400 mg/kg, 500 mg/kg, 600 mg/kg, 700 mg/kg, 800 mg/kg, 900 mg/kg ou 1.000 mg/kg. Em modalidades particulares, a terapia de en- volvimento de células T é administrada por via oral, intravenosa, intra- peritoneal, transdérmica, intratecal, intramuscular, intranasal, transmu- cosa, subcutânea ou retal.
[00193] Em algumas modalidades, a dose de células CAR T admi- nistrada pode ser reduzida em 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, ou mais de uma dose de células CAR T quando administrada em combinação com um inibidor de gama secretase. Em algumas modali- dades, a dose de células CAR T administrada quando combinada com inibidor de gama secretase pode ser reduzida em 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% ou mais de uma dose de células CAR T admi- nistradas sem inibidor de gama secretase.
2. Terapia celular
[00194] Em algumas modalidades dos métodos, composições, combinações, kits e usos no presente documento fornecidos, a terapia de combinação inclui a administração a um indivíduo de uma terapia celular imune, como uma terapia de células T (por exemplo, células T de expressão de CAR). A administração de tais terapias pode ser ini- ciada antes, subsequente ou simultaneamente à administração do ini- bidor de gama secretase, como descrito. Terapias celulares exempla- res e células modificadas para uso nos métodos, composições, combi- nações, kits e usos fornecidos no presente documento descritos são descritos na Seção |l.
[00195] Em algumas modalidades, a terapia baseada em células é ou compreende a administração de células, como células imunes, por exemplo, células T ou células NK, que têm como alvo uma molécula expressa na superfície de uma lesão, como um tumor ou um câncer. Em algumas modalidades, as células imunes expressam um receptor de célula T (TCR) ou outro receptor de ligação ao antígeno. Em algu- mas modalidades, as células imunes expressam um receptor recombi- nante, como um TCR transgênico ou um receptor de antígeno quiméri- co (CAR). Em algumas modalidades, as células são autólogas ao indi- víduo. Em algumas modalidades, as células são alogênicas ao indiví- duo.
[00196] Em alguns aspectos, a terapia celular é ou compreende uma terapia linfocítica infiltrante de tumor (TIL), uma terapia de TOR transgênica ou uma terapia de células T que compreende células ge- neticamente modificadas, como uma terapia celular que expressa re- ceptores recombinantes. Em algumas modalidades, o receptor recom- binante especificamente liga-se a um ligante, como aquele associado a uma doença ou condição, por exemplo, associado a ou expresso em uma célula de um tumor ou câncer. Em algumas modalidades, a tera- pia celular inclui a administração de células T modificadas para ex- pressar um receptor de antígeno quimérico (CAR).
[00197] Em algumas modalidades, as células fornecidas expressam e/ou são modificadas para expressar receptores, como receptores re- combinantes, incluindo aqueles que contêm domínios de ligação aos ligantes ou fragmentos de ligação dos mesmos, e receptores de célu- las T (TCRs) e componentes dos mesmos e/ou receptores de antígeno de não TCR funcionais, como receptores de antígeno quiméricos (CARs). Em algumas modalidades, o receptor recombinante contém um domínio de ligação ao ligante extracelular que se liga especifica- mente a um antígeno. Em algumas modalidades, o receptor recombi- nante é um CAR que contém um domínio de reconhecimento de antí- geno extracelular que se liga especificamente a um antígeno. Em al- gumas modalidades, o ligante, como um antígeno, é uma proteína ex- pressa na superfície das células. Em algumas modalidades, o CAR é um CAR do tipo TCR, e o antígeno é um antígeno peptídico processa- do, como um antígeno peptídico de uma proteína intracelular, que, como um TCR, é reconhecido na superfície celular no contexto de uma molécula do complexo de histocompatibilidade principal (MHC).
[00198] Entre as células modificadas, incluindo células modificadas contendo receptores recombinantes, são descritas mais adiante. Exemplos de receptores recombinantes, incluindo CARs e TCRs re- combinantes, bem como métodos para modificação e introdução de receptores nas células, incluem aqueles descritos, por exemplo, nos números de publicação de pedido de patente internacional WO200014257, WO2013126726, WO2012/129514, WO2014031687, WOZ2013/166321, WO2013/071154, WO2013/123061 números de pu- blicação do pedido de patente U.S. US2002131960, US2013287748, US20130149337, Patentes U.S. Nos: 6.451.995, 7.446.190,
8.252.592, 8.339.645, 8.398.282, 7.446.179, 6.410.319, 7.070.995,
7.265.209, 7.354.762, 7.446.191, 8.479.118, , e número de pedido de patente Europeia EP2537416 e/ou aqueles descritos por Sadelain et al., Cancer Discov. 2013 abril; 3 (4): 388-398; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8 (4): e61338; Turtle et al., Curr. Opin. Immunol., Outubro de 2012; 24 (5): 633-39; Wu et al., Cancer, 18 de março de 2012 (2): 160-
75. Em alguns aspectos, os receptores de antígeno geneticamente modificados incluem um CAR, como descrito na Patente U.S. Nº: 7,446,190, e os descritos na Publicação de Pedido de Patente Interna- cional No: WO/2014055668 A1.
[00199] Em algumas modalidades, a terapia de combinação inclui administração de células a um indivíduo, por exemplo, células T, que expressam um receptor recombinante que reconhece e/ou direciona especificamente um antígeno associado ao câncer e/ou presente em um marcador universal. Em algumas modalidades, o antígeno reco- nhecido ou direcionado pelas células T é o antígeno de maturação das células B (BCMA), ROR1, anidrase carbônica 9 (CAIX), Her2/neu (erbB2 de tirosina cinase receptora), LI-CAM, CD19, CD20, CD?2?2, mesotelina, CEA e antígeno de superfície da hepatite B, receptor anti- folato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, glicoproteína epitelial 2 (EPG-2), glicoproteína epitelial 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, dímeros erbB, EGFR vill, proteína de ligação ao folato (FBP), FOCRL5, FCRH5, receptor de acetilcolina fetal, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alfa, IL-13R -alfa2, receptor de domínio de inser- ção de cinase (kdr), cadeia leve capa, Lewis Y, molécula de adesão de células L1, (L1-CAM), antígeno associado ao melanoma (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-AG6, antígeno de melanoma preferencialmente ex- presso (PRAME), survivina, TAG72, B7-H6, receptor alfa 2 da IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, receptor-a de folato, CD44v6, CD44v7/8, integrina de avb6, 8H9, NCAM, receptores de VEGF, 574, AchR fetal, ligantes de NKG2D, CD44v6, antígeno dual, um antígeno câncer-testículo, mesotelina, CMV de murino, mucina 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, antígeno onco- fetal, ROR1I, TAG72, VEGF-R2, antígeno carcinoembrionário (CEA), Her2/neu, receptor de estrogênio, receptor de progesterona, efrinaB2,
CD123, c-Met, GD-2, GD2 O-acetilado (OGD2), CE7, tumor de Wilms 1 (WT-1), uma ciclina, ciclina A2, CCL-1, CD138, opcionalmente um antígeno humano de qualquer um dos precedentes; um antígeno es- pecífico do patógeno. Em algumas modalidades, o antígeno reconhe- cido e/ou direcionado pelas células T é selecionado do grupo que con- siste em Incisura 1, Incisura 2, Incisura 3, Incisura 4, Mucina 1 associ- ada à superfície celular (MUC1), Efrina B2, Betaglicana (TGFBR3), CD43, CD44, CSFIR, CXSCR1, CXCL16, Delta1l, E-caderina, N- caderina, HLA-A2, IFNaR2, ILIR1, ILIR2, IL6R e proteína precursora amiloide (APP).
[00200] Em algumas modalidades, o antígeno reconhecido e/direcionado pelas células T é o antígeno de maturação de células B (BCMA). São conhecidos domínios de ligação ao antígeno exemplares e CARs contendo esses domínios de ligação ao antígeno que direcio- nam ou ligam especificamente ao BCMA, veja, por exemplo, WO 2016/090320, WO2016090327, WO2010104949A2 e WO2017173256. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno é um scFv que contém uma Vu e uma V. derivadas de um anticorpo ou um fragmento de anticorpo específico para BCMA. Em algumas modalida- des, o anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga ao BCMA é ou contém uma V" e uma V. de um anticorpo ou fragmento de anticorpo mencionado nos Pedidos de Patentes Internacionais, Número de Pu- blicação WO 2016/090327 e WO 2016/090320.
[00201] Os métodos para administração de células modificadas pa- ra terapia celular adotiva são conhecidos e podem ser usados em co- nexão com os métodos e composições fornecidos. Por exemplo, os métodos de terapia de células T adotiva são descritos, por exemplo, na Publicação de Pedido de Patente US No. 2003/0170238 de Gruen- berg et al; Patente US No. 4.690.915 de Rosenberg; Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8 (10): 577-85). Veja, por exemplo, Themeli et al.,
(2013) Nat Biotechnol. 31 (10): 928-933; Tsukahara et a/l., (2013) Bio- chem Biophys Res Commun 438 (1): 84-9; Davila et a/., (2013) PLoS ONE 8 (4): e61338.
[00202] Em algumas modalidades, a terapia celular, por exemplo, terapia de células T adotiva, é realizada por transferência autóloga, na qual as células são isoladas e/ou preparadas de outro modo a partir do indivíduo que receberá a terapia celular ou a partir de uma amostra derivada de tal indivíduo. Assim, em alguns aspectos, as células são derivadas de um indivíduo, por exemplo, paciente, necessitando de um tratamento e as células, após isolamento e processamento, são admi- nistradas ao mesmo indivíduo.
[00203] Em algumas modalidades, a terapia celular, por exemplo, terapia de células T adotiva, é realizada por transferência alogênica, na qual as células são isoladas e/ou preparadas de outro modo a partir de um indivíduo que não seja aquele que deve receber ou que final- mente recebe a terapia celular, por exemplo, um primeiro indivíduo. Em tais modalidades, as células são então administradas a um indiví- duo diferente, por exemplo, um segundo indivíduo, da mesma espécie. Em algumas modalidades, o primeiro e o segundo indivíduos são ge- neticamente idênticos. Em algumas modalidades, o primeiro e o se- gundo indivíduos são geneticamente similares. Em algumas modalida- des, o segundo indivíduo expressa a mesma classe ou supertipo de HLA que o primeiro indivíduo.
[00204] As células podem ser administradas por qualquer meio adequado. As células são administradas em um regime de dosagem para obter um efeito terapêutico, como uma redução na carga tumoral. A dosagem e a administração podem depender em parte do esquema de administração do inibidor da gama secretase, que pode ser admi- nistrado antes, subsequentemente e/ou simultaneamente ao início da administração da terapia com células T. Vários esquemas de dosagem da terapia com células T incluem, mas não estão limitados a adminis- trações únicas ou múltiplas, em vários pontos de tempo, administração em bolo e infusão de pulsos. a. Composições e formulações
[00205] Em algumas modalidades, a dose de células da terapia ce- lular, uma tal terapia de células T que compreende células modificadas com um receptor de antígeno recombinante, por exemplo, CAR ou TCR, é fornecida como uma composição ou formulação, tal como uma composição ou formulação farmacêutica. Tais composições podem ser usadas de acordo com os métodos fornecidos, como na prevenção ou tratamento de doenças, condições e distúrbios.
[00206] Em algumas modalidades, a terapia celular, como células T modificadas (por exemplo, células CAR T), é formulada com um veícu- lo farmaceuticamente aceitável. Em alguns aspectos, a escolha do ve- ículo é determinada em parte pela célula ou agente particular e/ou pelo método de administração. Por conseguinte, há uma variedade de for- mulações adequadas. Por exemplo, a composição farmacêutica pode conter conservantes. Conservantes adequados podem incluir, por exemplo, metilparabeno, propilparabeno, benzoato de sódio e cloreto de benzalcônio. Em alguns aspectos, é usada uma mistura de dois ou mais conservantes. O conservante ou suas misturas estão tipicamente presentes em uma quantidade de cerca de 0,0001% a cerca de 2% em peso da composição total. Os veículos são descritos, por exemplo, pe- la Remington's Pharmaceutical Sciences 16º edição, Osol, A. Ed. (1980). Os veículos farmaceuticamente aceitáveis são geralmente não tóxicos para os receptores nas dosagens e concentrações emprega- das e incluem, mas não estão limitados a: tampões como fosfato, citra- to e outros ácidos orgânicos; antioxidantes, incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes (como cloreto de octadecildimetilbenzil amô- nio; cloreto de hexametônio; cloreto de benzalcônio; cloreto de benze-
tônio; fenol, butil ou álcool benzílico; álcool parabeno como metil ou propil parabeno; catecol; resorcinol; ciclo-hexanol; 3-pentanol; e m- cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular (menos que cerca de resíduos); proteínas, como albumina sérica, gelatina ou imunoglo- bulinas; polímeros hidrofílicos como polivinilpirrolidona; aminoácidos tais como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos, incluindo gli- cose, manose ou dextrinas; agentes quelantes tais como EDTA; açú- cares tais como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contra-íons formadores de sal, como sódio; complexos metálicos (por exemplo, complexos de proteína Zn); e/ou tensoativos não iónicos, tais como polietilenoglico| (PEG).
[00207] Agentes de tamponamento em alguns aspectos estão inclu- ídos nas composições. Os agentes de tamponamento adequados in- cluem, por exemplo, ácido cítrico, citrato de sódio, ácido fosfórico, fos- fato de potássio e vários outros ácidos e sais. Em alguns aspectos, é usada uma mistura de dois ou mais agentes de tamponamento. O agente de tamponamento ou suas misturas estão tipicamente presen- tes em uma quantidade de cerca de 0,001% a cerca de 4% em peso da composição total. São conhecidos métodos para preparar composi- ções farmacêuticas administráveis. Métodos exemplares são descritos em mais detalhes, por exemplo, em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21st ed. (1 de maio de 2005).
[00208] As formulações podem incluir soluções aquosas. A formu- lação ou composição também pode conter mais de um ingrediente ati- vo útil para a indicação, doença ou condição particular sendo preveni- da ou tratada com as células ou agentes, onde as atividades respecti- vas não afetam adversamente uma à outra. Tais ingredientes ativos estão adequadamente presentes em combinação em quantidades efi-
cazes para a finalidade pretendida. Assim, em algumas modalidades, a composição farmacêutica inclui ainda outros agentes ou medicamen- tos farmaceuticamente ativos, como agentes quimioterapêuticos, por exemplo, asparaginase, bussulfano, carboplatina, cisplatina, daunorru- bicina, doxorrubicina, fluorouracila, gemcitabina, hidroxiureia, metotre- xato, paclitaxel, rituximab, vinblastina, vincristina, etc.
[00209] A composição farmacêutica em algumas modalidades con- tém células em quantidades eficazes para tratar ou prevenir a doença ou condição, como uma quantidade terapeuticamente eficaz ou profila- ticamente eficaz. A eficácia terapêutica ou profilática em algumas mo- dalidades é monitorada por avaliação periódica dos indivíduos trata- dos. Para administrações repetidas por vários dias ou mais, depen- dendo da condição, o tratamento é repetido até ocorrer a supressão desejada dos sintomas da doença. No entanto, outros regimes de do- sagem podem ser úteis e podem ser determinados. A dosagem dese- jada pode ser entregue por uma única administração em bolo da com- posição, por múltiplas administrações em bolo da composição ou por administração de infusão contínua da composição.
[00210] As células podem ser administradas usando técnicas de administração padrão, formulações e/ou dispositivos. São fornecidas formulações e dispositivos, como seringas e frasconetes, para arma- zenamento e administração das composições. No que diz respeito às células, a administração pode ser autóloga ou heteróloga. Por exem- plo, células ou progenitores imunorresponsivos podem ser obtidos de um indivíduo e administrados ao mesmo indivíduo ou a um indivíduo compatível diferente. As células imunorresponsivas derivadas de san- gue periférico ou sua progênie (por exemplo, derivada in vivo, ex vivo ou in vitro) podem ser administradas por injeção localizada, incluindo administração por cateter, injeção sistêmica, injeção localizada, inje- ção intravenosa ou administração parentérica. Ao administrar uma composição terapêutica (por exemplo, uma composição farmacêutica contendo uma célula imunorresponsiva geneticamente modificada), ela geralmente será formulada em uma forma injetável de dosagem única (solução, suspensão, emulsão).
[00211] As formulações incluem aquelas para administração oral, intravenosa, intraperitoneal, subcutânea, pulmonar, transdérmica, in- tramuscular, intranasal, bucal, sublingual ou supositória. Em algumas modalidades, as populações de agentes ou células são administradas parentericamente. O termo "parenteral", como no presente documento usado, inclui administração intravenosa, intramuscular, subcutânea, retal, vaginal e intraperitoneal. Em algumas modalidades, as popula- ções de agentes ou células são administradas a um indivíduo usando liberação sistêmica periférica por injeção intravenosa, intraperitoneal ou subcutânea.
[00212] As composições em algumas modalidades são fornecidas como preparações líquidas estéreis, por exemplo, soluções aquosas isotônicas, suspensões, emulsões, dispersões ou composições visco- sas, que em alguns aspectos podem ser tamponadas a um pH seleci- onado. As preparações líquidas são normalmente mais fáceis de pre- parar do que os géis, outras composições viscosas e composições só- lidas. Além disso, as composições líquidas são um pouco mais conve- nientes para administrar, especialmente por injeção. As composições viscosas, por outro lado, podem ser formuladas dentro da faixa de vis- cosidade apropriada para fornecer períodos de contato mais longos com tecidos específicos. As composições líquidas ou viscosas podem compreender veículos, que podem ser um solvente ou meio de disper- são contendo, por exemplo, água, solução salina, solução salina tam- ponada com fosfato, poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol, poli- etileno glicol líquido) e suas misturas adequadas.
[00213] As soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas in-
corporando as células em um solvente, como em mistura com um veí- culo, diluente ou excipiente adequado, como água estérila, solução salina fisiológica, glicose, dextrose ou similares. As composições tam- bém podem ser liofilizadas. As composições podem conter substân- cias auxiliares, como agentes umectantes, dispersantes ou emulsifi- cantes (por exemplo, metilcelulose), agentes de tamponamento de pH, aditivos gelificantes ou realçadores de viscosidade, conservantes, agentes aromatizantes, cores e similares, dependendo da rotina de administração e da preparação desejada. Em alguns aspectos, os tex- tos padrão podem ser consultados para preparar preparações ade- quadas.
[00214] Vários aditivos que realçam a estabilidade e esterilidade das composições, incluindo conservantes antimicrobianos, antioxidan- tes, agentes quelantes e tampões, podem ser adicionados. A preven- ção da ação de microrganismos pode ser assegurada por vários agen- tes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobuta- nol, fenol, ácido sórbico e similares. A absorção prolongada da forma farmacêutica injetável pode ser realizada pelo uso de agentes que re- tardam a absorção, por exemplo, monoestearato de alumínio e gelati- na.
[00215] As formulações a serem usadas para administração in vivo são geralmente estéreis. A esterilidade pode ser facilmente alcançada, por exemplo, por filtração através de membranas de filtração estéreis.
[00216] Paraa prevenção ou tratamento da doença, a dosagem apropriada pode depender do tipo de doença a ser tratada, do tipo de agente ou agentes, do tipo de células ou receptores recombinantes, da gravidade e do curso da doença, se o agente ou as células forem ad- ministrados para fins preventivos ou terapêuticos, terapia precedente, histórico clínico e resposta do indivíduo ao agente ou às células e a critério do médico assistente. As composições estão em algumas mo-
dalidades adequadamente administradas ao indivíduo ao mesmo tem- po ou durante uma série de tratamentos.
[00217] Em alguns casos, a terapia celular é administrada como uma única composição farmacêutica que compreende as células. Em algumas modalidades, uma dada dose é administrada por uma única administração em bolo das células ou agente. Em algumas modalida- des, é administrado por várias administrações em bolo das células ou agente, por exemplo, durante um período não superior a 3 dias, ou por administração de infusão contínua das células ou agente. b. Programação e administração de dosagem
[00218] Em algumas modalidades, uma dose de células é adminis- trada a indivíduos de acordo com os métodos de terapia de combina- ção fornecidos. Em algumas modalidades, o tamanho ou o momento das doses é determinado em função da doença ou condição particular no indivíduo. Está dentro do nível de uma pessoa versada determinar empiricamente o tamanho ou o momento das doses para uma doença em particular, tendo em vista a descrição fornecida.
[00219] Em certas modalidades, as células, ou populações indivi- duais de subtipos de células, são administradas ao indivíduo a uma faixa de cerca de 0,1 milhão a cerca de 100 bilhões de células e/ou essa quantidade de células por quilograma de peso corporal do indiví- duo, tais como, por exemplo, 0,1 milhão a cerca de 50 bilhões de célu- las (por exemplo, cerca de 5 milhões de células, cerca de 25 milhões de células, cerca de 500 milhões de células, cerca de 1 bilhão de célu- las, cerca de 5 bilhões de células, cerca de 20 bilhões de células, cer- ca de 30 bilhões de células, cerca de 40 bilhões de células, ou uma faixa definida por quaisquer dois dos valores precedentes), de 1 mi- lhão a cerca de 50 bilhões de células (por exemplo, cerca de 5 milhões de células, cerca de 25 milhões de células, cerca de 500 milhões de células, cerca de 1 bilhão de células, cerca de 5 bilhões de células,
cerca de 20 bilhões de células, cerca de 30 bilhões de células, cerca de 40 bilhões de células ou uma faixa definida por dois dos valores precedentes), como cerca de 10 milhões a cerca de 100 bilhões de células (por exemplo, cerca de 20 milhões de células, cerca de 30 mi- lhões de células, cerca de 40 milhões de células, cerca de 60 milhões de células, cerca de 70 milhões de células, cerca de 80 milhões de cé- lulas, cerca de 90 milhões de células, cerca de 10 bilhões de células, cerca de 25 bilhões de células, cerca de 50 bilhões de células, cerca de 75 bilhões de células, cerca de 90 bilhões de células ou uma faixa definida por quaisquer dois dos valores precedentes) e, em alguns ca- sos, cerca de 100 milhões de células a cerca de 50 bilhões de células (por exemplo, cerca de 120 milhões de células, cerca de 250 milhões de células, cerca de 350 milhões de células, cerca de 450 milhões de células, cerca de 650 milhões de células, cerca de 800 milhões de cé- lulas, cerca de 900 milhões de células, cerca de 3 bilhões de células, cerca de 30 bilhões de células, cerca de 45 bilhões de células) ou qualquer valor entre essas faixas e/ou por quilograma de peso corporal do indivíduo. As dosagens podem variar dependendo dos atributos particulares da doença ou distúrbio e/ou paciente e/ou outros trata- mentos. Em algumas modalidades, esses valores referem-se a núme- ros de células de expressão de receptores recombinantes; em outras modalidades, eles referem-se ao número de células T ou PBMCs ou células totais administradas.
[00220] Em algumas modalidades, por exemplo, onde o indivíduo é humano, as células são administradas em uma dose de células de ex- pressão de receptores recombinantes totais (por exemplo, CAR), célu- las T ou células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) que es- tão na faixa de cerca de 1 x 10º a cerca de 1,2 x 10º tais células, como em ou cerca de 1 x 107, em ou cerca de 5 x 107, em ou cerca de 1 x 108, em ou cerca de 2 x 108, em ou cerca de 2,5 x 108, em ou cerca de
3 x 108, em ou cerca de 3,5 x 108, em ou cerca de 4 x 108, em ou cerca de 4,5 x 10º em ou cerca de 5 x 10º tais células totais, em ou cerca de 6 x 108, em ou cerca de 7 x 108, em ou cerca de 8 x 10º, em ou cerca de 9 x 10º ou em ou cerca de 1 x 10º de tais células, ou a faixa entre quaisquer dois dos valores precedentes. Em algumas modalidades, por exemplo, em que o indivíduo é humano, a dose inclui menos do que cerca ou cerca de 5 x 10º células de expressão de receptores re- combinantes totais (por exemplo, CAR), células T ou células mononu- cleares do sangue periférico (PBMCs). Em algumas modalidades, por exemplo, onde o indivíduo é humano, a dose inclui menos do que cer- ca ou cerca de 3,0 x 10º células de expressão de receptores recombi- nantes totais (por exemplo, CAR), células T ou células mononucleares do sangue periférico (PBMCs). Em algumas modalidades, por exem- plo, onde o indivíduo é um humano, a dose inclui menos do que cerca de 1,5 x 108 células de expressão de receptores recombinantes totais (por exemplo, CAR), células T ou células mononucleares do sangue periférico (PBMCs). Em algumas modalidades, por exemplo, onde o indivíduo é um humano, a dose inclui menos do que cerca de 1 x 10º células de expressão de receptores recombinantes totais (por exem- plo, CAR), células T ou células mononucleares do sangue periférico (PBMCs). Em algumas modalidades, por exemplo, onde o indivíduo é um humano, a dose inclui menos do que cerca de 5 x 107 células de expressão de receptores recombinantes totais (por exemplo, CAR), células T ou células mononucleares do sangue periférico (PBMCs).
[00221] Em algumas modalidades, a dose de células totais adminis- tradas compreende de ou de cerca de 1 x 10º a 8 x 108 células T de expressão de CAR totaia, 1 x 10º a 5 x 10º células T de expressão de CAR totais, 1 x 10º a 2,5 x 10º células T de expressão de CAR totais, 1 x 10º a 1 x 10º células T de expressão de CAR totais, 1 x 10º a 5x 107 células T de expressão de CAR totais, 1 x 10º a 2,5 x 107 células T de expressão de CAR totais, 1 x 10º a 1 x 107 células T de expressão de CAR totais, 1 x 10º a 5x 106 células T de expressão de CAR totais, 1 x 10º a 2,5 x 10º células T de expressão de CAR totais, 1 x 10º a 1 x 10º células T de expressão de CAR totais, 1 x 10º a 8 x 10º células T de expressão de CAR totais, 1 x 10º a 5 x 10º células T de expressão de CAR totaia, 1 x 106º a 2,5 x 10º células T de expressão de CAR totais, 1x 10º a 1 x 10º células T de expressão de CAR totais, 1 x 10º a 5x 107 células T de expressão de CAR totais, 1 x 10º a 2,5 x 107 células T de expressão de CAR totais, 1 x 10º a 1 x 107 células T de expressão de CAR totais, 1 x 10º a 5 x 106 células T de expressão de CAR totais, 1x 106 a 2,5 x 108 células T de expressão de CAR totais, 2,5x 10º a 8 x 10º células T de expressão de CAR totais, 2,5 x 10º a 5 x 10º células T de expressão de CAR totais, 2,5 x 10º a 2,5 x 10º células T de ex- pressão de CAR totais, 2,5 x 10º a 1 x 10º células T de expressão de CAR totais, 2,5 x 10º a 5 x 107 células T de expressão de CAR totais, 2,5 x 10º a 2,5 x 107 células T de expressão de CAR totais, 2,5 x 10º a 1 x 107 células T de expressão de CAR totais, 2,5 x 10º a 5 x 10º célu- las T de expressão de CAR totais, 5 x 10º a 8 x 10º células T de ex- pressão de CAR totais, 5 x 10º a 5 x 10º células T de expressão de CAR totais, 5 x 106 a 2,5 x 10º células T de expressão de CAR totais, 5 x 108º a 1 x 10º células T de expressão de CAR totais, 5 x 106º a 5x 107 células T de expressão de CAR totaia, 5 x 10º a 2,5 x 107 células T de expressão de CAR totais, 5 x 10º a 1 x 107 células T de expressão de CAR totais, 1 x 107 a 8 x 10º células T de expressão de CAR totais, 1 x 107 a 5x 10º células T de expressão de CAR totais, 1 x 107 a 2,5 x 10º células T de expressão de CAR totais, 1 x 107 a 1 x 10º células T de expressão de CAR totais, 1 x 107 a 5 x 107 células T de expressão de CAR totais, 1 x 107 a 2,5 x 107 células T de expressão de CAR totais, 2,5x 107 a 8 x 10º células T de expressão de CAR totais, 2,5 x 10º a 5 x 10º células T de expressão de CAR totais, 2,5 x 107 a 2,5 x 10º célu-
las T de expressão de CAR totais, 2,5 x 107 a 1 x 10º células T de ex- pressão de CAR totais, 2,5 x 107 a 5 x 107 células T de expressão de CAR totais, 5 x 107 a 8 x 10º células T de expressão de CAR totais, 5 x 107 a 5x 10º células T de expressão de CAR totais, 5 x 107 a 2,5 x 108 células T de expressão de CAR totais, 5 x 107 a 1 x 10º células T de expressão de CAR totais, 1 x 10º a 8 x 108 células T de expressão de CAR totais, 1 x 10º a 5x 108º células T de expressão de CAR totais, 1 x 10º a 2,5 x 10º células T de expressão de CAR totais, 2,5 x 10º a 8 x 108 células T de expressão de CAR totais, 2,5 x 10º a 5 x 10º células T de expressão de CAR totais, ou 5 x 10º células T de expressão de CAR totais a 8 x 10º células T de expressão de CAR totais, cada qual inclusive.
[00222] Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente modificadas compreende de ou de cerca de 50 x 106 a 800 x 10º célu- las T de expressão de CAR totais, de ou de cerca de 50 x 10º a 450 x 10º células T de expressão de CAR totais, de ou de cerca de 50 x 10º a 300 x 10º células T de expressão de CAR totais, de ou de cerca de 50 x 106 a 150 x 10º células T de expressão de CAR totais, de ou de cerca de 150 x 10º a 800 x 10º células T de expressão de CAR totais, de ou de cerca de 150 x 10º a 450 x 10º células T de expressão de CAR totais, de ou de cerca de 150 x 10º a 300 x 10º células T de ex- pressão de CAR totais, 300 x 10º a 800 x 10º células T de expressão de CAR totais, de ou de cerca de 300 x 106 a 450 x 10º células T de expressão de CAR totais, ou 450 x 10º a 800 x 10º células T de ex- pressão de CAR totais. Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente modificadas é ou é cerca de 50 x 10º células T de ex- pressão de CAR, é ou é cerca de 150 x 10º células T de expressão de CAR, é ou é cerca de 450 x 106 células T de expressão de CAR, ou é ou é cerca de 800 x 10º células T de expressão de CAR.
[00223] Em algumas de qualquer uma das modalidades, o número é com referência ao número total de CD3+, número total de CD8+ ou número total de células T CD4+ e CD8+, em algumas células de ex- pressão de receptores recombinantes (por exemplo, CAR+) dessas células.
[00224] Em algumas modalidades, a terapia celular compreende a administração de uma dose que compreende um número de células a partir de ou de cerca de 1 x 10º a 1 x 10º células de expressão de re- ceptores recombinantes totais, células T totais ou células mononuclea- res do sangue periférico totais (PBMCs); de ou de cerca de 5x 10º a 1 x 107 células de expressão de receptores recombinantes totais, células T totais ou PBMCs totais ou de ou de cerca de 1 x 10º a 1 x 107 células de expressão de receptores recombinantes totais, células T totais ou PBMCs totais), cada qual inclusive. Em algumas modalidades, a tera- pia celular compreende a administração de uma dose de células que compreende várias células pelo menos ou cerca de pelo menos 1 x 10º células de expressão de receptores recombinantes totais, células T totais ou PBMCs totais, como pelo menos ou pelo menos 1 x 108, pelo menos ou cerca de 1 x 107, pelo menos ou cerca de 1 x 10º dessas células. Em algumas modalidades, o número é com referência ao nú- mero total de CD3+ ou CD8+, em alguns casos também células de ex- pressão de receptores recombinantes (por exemplo, CAR+). Em algu- mas modalidades, a terapia celular compreende a administração de uma dose que compreende um número de células de ou de cerca de 1 x 10º a 1 x 108 CD3+ ou CD8+ células T totais ou células de expressão de receptores recombinantes CD3+ ou CD8+, de ou de cerca de 5 x 10º a 1 x 107 células T CD3+ ou CD8+ totais ou células de expressão de receptores recombinantes CD3+ ou CD8+, ou de ou de cerca de 1 x 10º a 1 x 107 células T CD3+ ou CD8+ totais ou células de expressão de receptores recombinantes CD3+ ou CD8+, cada uma inclusive. Em algumas modalidades, a terapia celular compreende a administração de uma dose que compreende um número de células de ou de cerca de 1 x 105 a 1 x 108 células CD3+/CAR+ ou CD8+/CAR+ totais, de ou de cerca de 5 x 10º a 1 x 107 células CD3+/CAR+ ou CD8+/CAR+ to- tais, ou de ou de cerca de 1 x 10º a 1 x 107 células CD3+/CAR+ ou CD8+/CAR+ totais, cada qual inclusive.
[00225] Em algumas modalidades, as células T da dose incluem células T CD4+, células T CD8+ ou células T CD4+ e CD8+.
[00226] Em algumas modalidades, por exemplo, onde o indivíduo é humano, as células T CD8+ da dose, incluindo em uma dose que inclui células T CD4+ e CD8+, incluem entre cerca de 1 x 10º e 5 x 10º célu- las CD8+ de expressão de receptores recombinantes totais (por exemplo, CAR), por exemplo, na faixa de cerca de 5 x 10º a 1 x 10º células, tais células 1 x 107, 2,5 x 107, 5x 107, 7,5 x 107, 1 x 108 ou 5x 10º tais células totais, ou a faixa entre dois dos valores precedentes. Em algumas modalidades, o paciente recebe doses múltiplas e cada uma das doses ou a dose total pode estar dentro de qualquer um dos valores precedentes. Em algumas modalidades, a dose de células compreende a administração de cerca de 1 x 107 a 0,75 x 10º células T CD8+ expressando receptores recombinantes totais, 1 x 10º a 2,5 x 107 células T CD8+ expressando receptores recombinantes totais, de ou de cerca de 1 x 107 a 0,75 x 10º células T CD8+ de expressão de receptores recombinantes totais, cada qual inclusive. Em algumas mo- dalidades, a dose de células compreende a administração de ou cerca de 1 x 107, 2,5 x 107, 5x 107 7,5 x 107, 1 x 10º ou 5 x 10º células T CD8+ de expressão de receptores recombinantes totais.
[00227] Em algumas modalidades, a terapia celular compreende a administração de uma dose que compreende um número de células que é pelo menos ou pelo menos cerca de ou é ou é cerca de 0,1 x 108º células/kg de peso corporal do indivíduo, 0,2 x 108 células/kg, 0,3 x 10º células/kg, 0,4 x 108 células/kg, 0,5 x 10º células/kg, 1 x 108 célu-
las/kg, 2,0 x 10º células/kg, 3 x 10º células/kg ou 5 x 106 células/kg.
[00228] Em algumas modalidades, a terapia celular compreende a administração de uma dose que compreende um número de células entre ou entre cerca de 0,1 x 106 células/kg de peso corporal do indiví- duo e 1,0 x 107 células/kg, entre ou entre cerca de 0,5 x 10º células/kg e 5 x 108 células/Kkg, entre ou entre cerca de 0,5 x 10º células/kg e 3 x 10º células/kg, entre ou entre cerca de 0,5 x 10º células/kg e 2 x 10º células/kg, entre ou entre cerca de 0,5 x 10º células/kg e 1 x 1086 célu- las/kg, entre ou entre cerca de 1,0 x 10º células/kg de peso corporal do indivíduo e 5 x 10º células/kg, entre ou entre cerca de 1,0 x 10º célu- las/kg e 3 x 10º células/kg, entre ou entre cerca de 1,0 x 10º células/kg e 2 x 10º células/kg, entre ou entre cerca de 2,0 x 10º células/kg de peso corporal do indivíduo e 5 x 10º células/kg, entre ou entre cerca de 2,0 x 106 células/kg e 3 x 108 células/kg, ou entre ou entre cerca de 3,0 x 10º células/kg de peso corporal do indivíduo e 5 x 106 células/Kg, ca- da qual inclusive.
[00229] Em algumas modalidades, a dose de células compreende entre a ou cerca de 2 x 10º das células/kg e a ou cerca de 2 x 10º das células/kg, como entre a ou cerca de 4 x 10º das células/kg e a ou cer- ca de 1 x 10º das células/kg ou entre a ou cerca de 6 x 10º das célu- las/kg e a ou cerca de 8 x 10º das células/kg. Em algumas modalida- des, a dose das células compreende não mais que 2 x 10º das células (por exemplo, de expressão de antígeno, como células de expressão de CAR) por quilograma de peso corporal do indivíduo (células/Kkg), como não mais do que a ou cerca de 3 x 10º células/kg, não mais que ou cerca de 4 x 10º células/kg, não mais que a ou cerca de 5 x 10º cé- lulas/kg, não mais que a ou cerca de 6 x 10º células/kg, não mais que a ou cerca de 7 x 10º células/kg, não mais que a ou cerca de 8 ou 105 células/kg, não mais que a ou cerca de 9 x 105º células/kg, não mais que a ou cerca de 1 x 10º células/Kkg, ou não mais que a ou cerca de 2 x 108 células/kg. Em algumas modalidades, a dose de células compre- ende pelo menos ou pelo menos cerca de ou a ou cerca de 2 x 10º das células (por exemplo, de expressão de antígeno, como células de ex- pressão de CAR) por quilograma de peso corporal do indivíduo (célu- las/kg), como pelo menos ou pelo menos cerca de ou a ou cerca de 3 x 10º células/kg, pelo menos ou pelo menos cerca de ou a ou cerca de 4 x 10º células/Kkg, pelo menos ou pelo menos cerca de ou a ou cerca de 5 x 10º células/kg, pelo menos ou pelo menos cerca de ou a ou cerca de 6 x 10º células/Kkg, pelo menos ou pelo menos cerca de ou a ou cerca de 7 x 10º células/kg, pelo menos ou pelo menos cerca de ou a ou cerca de 8 x 10º células/kg, pelo menos ou pelo menos cerca de ou a ou cerca de 9 x 10º células/kg, pelo menos ou pelo menos cerca de ou a ou cerca de 1 x 10º células/kg, ou pelo menos ou pelo menos cerca de ou a ou cerca de 2 x 10º células/kg.
[00230] Em algumas modalidades, a dose de células, por exemplo, células T de expressão de receptores recombinantes, é administrada ao indivíduo como uma dose única ou é administrada apenas uma vez dentro de um período de duas semanas, um mês, três meses, seis meses, | ano ou mais.
[00231] Em alguns aspectos, as composições e formulações farma- cêuticas são fornecidas como composições em forma de dose única, incluindo o número de células para administração em uma dada dose ou fração da mesma.
[00232] Em algumas modalidades, as células da dose podem ser administradas por administração de uma pluralidade de composições ou soluções, como uma primeira e uma segunda, opcionalmente mais, cada uma contendo algumas células da dose. Em alguns aspectos, a pluralidade de composições, cada uma contendo uma população dife- rente e/ou subtipos de células, é administrada separadamente ou in- dependentemente, opcionalmente dentro de um certo período de tem-
po. Por exemplo, as populações ou subtipos de células podem incluir células T CD8+ e CD4+, respectivamente, e/ou populações enriqueci- das com CD8+ e CD4+, respectivamente, por exemplo, células T CD4+ e/ou CD8+, cada uma delas individualmente, incluindo células geneticamente modificadas para expressar o receptor recombinante. Em algumas modalidades, a administração da dose compreende a administração de uma primeira composição que compreende uma do- se de células T CD8+ ou uma dose de células T CD4+ e a administra- ção de uma segunda composição que compreende a outra dose das células T CD4+ e das células T CD8+.
[00233] Em algumas modalidades, a administração da composição ou dose, por exemplo, administração da pluralidade de composições celulares, envolve a administração das composições celulares separa- damente. Em alguns aspectos, as administrações separadas são reali- zadas simultaneamente ou sequencialmente, em qualquer ordem. Em algumas modalidades, a dose compreende uma primeira composição e uma segunda composição, e as primeira composição e segunda composição são administradas de O a 12 horas separadamente, de 0 a 6 horas separadamente ou de O a 2 horas separadamente. Em algu- mas modalidades, o início da administração da primeira composição e o início da administração da segunda composição são realizados em não mais que 2 horas, não mais que 1 hora ou não mais que 30 minu- tos separadamente, não mais que 15 minutos, não mais que 10 minu- tos ou não mais que 5 minutos separadamente. Em algumas modali- dades, o início e/ou conclusão da administração da primeira composi- ção e a conclusão e/ou início da administração da segunda composi- ção são realizadas não mais que 2 horas, não mais que 1 hora, ou não mais que 30 minutos separadamente, não mais que 15 minutos, não mais que 10 minutos ou não mais que 5 minutos separadamente.
[00234] Em alguma composição, a primeira composição, por exem-
plo, primeira composição da dose, compreende células T CD4+. Em alguma composição, a primeira composição, por exemplo, primeira composição da dose, compreende células T CD8+. Em algumas mo- dalidades, a primeira composição é administrada antes da segunda composição.
[00235] Em algumas modalidades, a dose ou composição de célu- las inclui uma relação definida ou alvo de células CD4+ que expres- sam um receptor recombinante para células CD8+ que expressam um receptor recombinante e/ou de células CD4+ para células CD8+, cuja relação é opcionalmente de aproximadamente 1: 1 ou é entre aproxi- madamente 1: 3 e aproximadamente 3: 1, como aproximadamente 1:
1. Em alguns aspectos, a administração de uma composição ou dose com a relação alvo ou desejada de diferentes populações celulares (como a relação CD4+: CD8+ ou a relação CAR+ CD4+: CAR+ CD8+, por exemplo, 1: 1) envolve a administração de uma composição celular contendo uma das populações e, em seguida, administração de uma composição celular separada que compreende a outra das popula- ções, onde a administração está no ou aproximadamente no alvo ou na relação desejada. Em alguns aspectos, a administração de uma dose ou composição de células em uma relação definida leva à ex- pansão, persistência e/ou atividade antitumoral melhorada da terapia com células T.
[00236] No contexto da terapia celular adotiva, a administração de uma determinada "dose" de células abrange a administração da de- terminada quantidade ou número de células como uma composição única e/ou administração ininterrupta única, por exemplo, como uma injeção única ou infusão contínua, e também abrange a administração da determinada quantidade ou número de células como uma dose di- vidida, fornecida em várias composições ou infusões individuais, du- rante um período de tempo especificado, que não é superior a 3 dias.
Assim, em alguns contextos, a dose é uma administração única ou contínua do número especificado de células, determinada ou iniciada em um único ponto de tempo. Em alguns contextos, no entanto, a do- se é administrada em várias injeções ou infusões durante um período não superior a três dias, como uma vez ao dia por três dias ou por dois dias ou por múltiplas infusões durante um único período do dia.
[00237] Assim, em alguns aspectos, as células da dose são admi- nistradas em uma única composição farmacêutica. Em algumas moda- lidades, as células da dose são administradas em uma pluralidade de composições, contendo coletivamente as células da dose.
[00238] O termo "dose dividida" refere-se a uma dose que é dividida para que seja administrada por mais de um dia. Este tipo de dosagem é abrangido pelos presentes métodos e é considerado uma dose úni- ca. Em algumas modalidades, as células de uma dose dividida são administradas em uma pluralidade de composições, que compreende coletivamente as células da dose, durante um período não superior a três dias.
[00239] Assim, a dose de células pode ser administrada como uma dose dividida. Por exemplo, em algumas modalidades, a dose pode ser administrada ao indivíduo durante 2 dias ou durante 3 dias. Méto- dos exemplares para dosagem dividida incluem administrar 25% da dose no primeiro dia e administrar os 75% restantes da dose no se- gundo dia. Em outras modalidades, 33% da dose pode ser administra- da no primeiro dia e os 67% restantes administrados no segundo dia. Em alguns aspectos, 10% da dose é administrada no primeiro dia, 30% da dose é administrada no segundo dia e 60% da dose é admi- nistrada no terceiro dia. Em algumas modalidades, a dose dividida não é espalhada por mais de 3 dias.
[00240] Em algumas modalidades, o indivíduo recebe múltiplas do- ses, por exemplo, duas ou mais doses ou múltiplas doses consecuti-
vas, das células. Em algumas modalidades, duas doses são adminis- tradas a um indivíduo. Em algumas modalidades, o indivíduo recebe a dose consecutiva, por exemplo, segunda dose, é administrada cerca de 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou 21 dias após a primeira dose. Em algumas modalidades, várias doses conse- cutivas são administradas após a primeira dose, de modo que uma dose ou doses adicionais sejam administradas após a administração da dose consecutiva. Em alguns aspectos, o número de células admi- nistradas ao indivíduo na dose adicional é igual ou similar à primeira dose e/ou dose consecutiva. Em algumas modalidades, a dose ou do- ses adicionais são maiores que as doses precedentes.
[00241] Em alguns aspectos, o tamanho da primeira e/ou dose con- secutiva é determinado com base em um ou mais critérios, como res- posta do indivíduo ao tratamento precedente, por exemplo, quimiote- rapia, carga de doença no indivíduo, como carga tumoral, volume, ta- manho ou grau, extensão ou tipo de metástase, estágio e/ou probabili- dade ou incidência do indivíduo desenvolver resultados tóxicos, por exemplo, CRS, síndrome de ativação de macrófagos, síndrome de lise tumoral, neurotoxicidade e/ou uma resposta imune do hospedeiro con- tra as células e/ou receptores recombinantes sendo administrados.
[00242] Em alguns aspectos, o tempo entre a administração da pri- meira dose e a administração da dose consecutiva é de cerca de 9 a cerca de 35 dias, cerca de 14 a cerca de 28 dias ou 15 a 27 dias. Em algumas modalidades, a administração da dose consecutiva é em um ponto no tempo mais de cerca de 14 dias após e menos de cerca de 28 dias após a administração da primeira dose. Em alguns aspectos, o tempo entre a primeira e a dose consecutiva é de cerca de 21 dias. Em algumas modalidades, uma dose ou doses adicionais, por exem- plo, doses consecutivas, são administradas após a administração da dose consecutiva. Em alguns aspectos, a dose ou doses consecutivas adicionais são administradas pelo menos cerca de 14 e menos de cer- ca de 28 dias após a administração de uma dose precedente. Em al- gumas modalidades, a dose adicional é administrada menos de cerca de 14 dias após a dose precedente, por exemplo, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 ou 13 dias após a dose precedente. Em algumas modalidades, nenhuma dose é administrada menos de cerca de 14 dias após a dose precedente e/ou nenhuma dose é administrada mais de cerca de 28 dias após a dose precedente.
[00243] Em algumas modalidades, a dose de células, por exemplo, células de expressão de receptores recombinantes, compreende duas doses (por exemplo, uma dose dupla), que compreende uma primeira dose das células T e uma dose consecutiva das células T, em que uma ou ambas as primeira e segunda doses compreendem a adminis- tração da dose dividida de células T.
[00244] Em algumas modalidades, a dose de células é geralmente grande o suficiente para ser eficaz na redução da carga da doença.
[00245] Em algumas modalidades, as células são administradas em uma dosagem desejada, que em alguns aspectos inclui uma dose ou número desejado de células ou tipo (s) de célula e/ou uma relação de- sejada de tipos de célula. Assim, a dosagem de células em algumas modalidades é baseada em um número total de células (ou número por kg de peso corporal) e uma relação desejada das populações ou subtipos individuais, como a relação de CD4+ para CD8+. Em algumas modalidades, a dosagem de células é baseada em um número total desejado (ou número por kg de peso corporal) de células nas popula- ções individuais ou nos tipos de células individuais. Em algumas mo- dalidades, a dosagem é baseada em uma combinação de tais caracte- rísticas, como um número desejado de células totais, relação desejada e número total desejado de células nas populações individuais.
[00246] Em algumas modalidades, as populações ou subtipos de células, como células T CD8+ e CD4+, são administradas em ou den- tro de uma diferença tolerada de uma dose desejada de células totais, como uma dose desejada de células T. Em alguns aspectos, a dose desejada é um número desejado de células ou um número desejado de células por unidade de peso corporal do indivíduo ao qual as célu- las são administradas, por exemplo, células/kg. Em alguns aspectos, a dose desejada é igual ou superior a um número mínimo de células ou número mínimo de células por unidade de peso corporal. Em alguns aspectos, entre as células totais administradas na dose desejada, as populações ou subtipos individuais estão presentes em uma taxa de saída desejada ou próxima a ela (como a relação de CD4+ para CDB8+), por exemplo, dentro de uma certa diferença ou erro tolerado dessa relação.
[00247] Em algumas modalidades, as células são administradas em ou dentro de uma diferença tolerada de uma dose desejada de uma ou mais populações individuais ou subtipos de células, como uma dose desejada de células CD4+ e/ou uma dose desejada de células CD8+. Em alguns aspectos, a dose desejada é um número desejado de célu- las do subtipo ou população, ou um número desejado dessas células por unidade de peso corporal do indivíduo ao qual as células são ad- ministradas, por exemplo, células/kg. Em alguns aspectos, a dose de- sejada é igual ou superior a um número mínimo de células da popula- ção ou subtipo ou número mínimo de células da população ou subtipo por unidade de peso corporal.
[00248] Assim, em algumas modalidades, a dosagem é baseada em uma dose fixa desejada das células totais e em uma relação dese- jada, e/ou em uma dose fixa desejada de um ou mais, por exemplo, cada um dos subtipos ou subpopulações individuais. Assim, em algu- mas modalidades, a dosagem é baseada em uma dose fixa ou mínima desejada de células T e em uma relação desejada de células CD4+ para CD8+, e/ou é baseada em uma dose fixa ou mínima desejada de células CD4+ e/ou CD8+.
[00249] Em algumas modalidades, as células são administradas em ou dentro de um intervalo tolerado de uma taxa de saída desejada de várias populações ou subtipos de células, como células ou subtipos CD4+ e CD8+. Em alguns aspectos, a relação desejada pode ser uma proporção específica ou uma faixa de relações. Por exemplo, em al- gumas modalidades, a relação desejada (por exemplo, relação de cé- lulas CD4+ para CD8+) está entre ou cerca de 5:1 e cerca de ou 5:1 (ou maior que cerca de 1:5 e menor que cerca de 5:1) ou entre cerca de 1:3 e cerca de 3:1 (ou maior que cerca de 1:3 e menor que cerca de 3:1), como entre cerca de 2: | e cerca de 1:5 (ou maior que cerca de 1:5 e menor que cerca de 2:1, como em ou cerca de 5:1, 4,5:1, 4:1, 3,5:1, 3:1, 2,5:1, 2:1, 1,9:1, 1,8:1, 1,7:1, 1,6: 1, 1,5:1, 1,4:1, 1,31, 1,2:1, 1,1:1, 1:1, 1:1,1, 1:1,2, 1:1,3, 1:1,4, 1:1,5, 1:1,6, 1:1,7, 1:1,8, 1:1,9: 1:2, 1:2,5, 1:3, 1:3,5, 1:3,5, 1:4, 1:4,5 ou 1:5. Em alguns aspec- tos, a diferença tolerada é de cerca de 1%, cerca de 2%, cerca de 3%, cerca de 4% cerca de 5%, cerca de 10%, cerca de 15%, cerca de 15%, cerca de 20%, cerca de 25%, cerca de 30%, cerca de 35%, cer- ca de 40%, cerca de 45%, cerca de 50% da relação desejada, incluin- do qualquer valor entre esses intervalos.
[00250] As células podem ser administradas por qualquer meio adequado. As células são administradas em um regime de dosagem para alcançar um efeito terapêutico, como uma redução na carga tu- moral. A dosagem e administração podem depender em parte da pro- gramação da administração do composto imunomodulador, que pode ser administrado antes, subsequentemente e/ou simultaneamente com o início da administração da terapia com células T. Vários esquemas de dosagem da terapia com células T incluem, mas não estão limita- dos a administrações únicas ou múltiplas, em vários momentos, admi-
nistração em bolo e infusão de pulsos. Em certas modalidades, as cé- lulas T modificadas expressam um receptor recombinante. Em certas modalidades, as células T modificadas expressam um CAR.
[00251] Em modalidades particulares, os números e/ou concentra- ções de células referem-se ao número de células de expressão de re- ceptores recombinantes (por exemplo, CAR). Em outras modalidades, os números e/ou concentrações de células referem-se ao número ou concentração de todas as células, células T ou células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) administradas.
[00252] Em alguns aspectos, o tamanho da dose é determinado com base em um ou mais critérios, como resposta do indivíduo ao tra- tamento precedente, por exemplo, quimioterapia, carga de doença no indivíduo, como carga tumoral, volume, tamanho ou grau, extensão ou tipo de metástase, estágio e/ou probabilidade ou incidência do indiví- duo desenvolver resultados tóxicos, por exemplo, CRS, síndrome de ativação de macrófagos, síndrome de lise tumoral, neurotoxicidade e/ou uma resposta imune do hospedeiro contra as células e/ou recep- tores recombinantes sendo administrados.
[00253] Em algumas modalidades, a administração da combinação de inibidor de gama secretase com as células é capaz de aumentar, como aumentar substancialmente ou significativamente, a expansão ou proliferação das células e, portanto, uma dose mais baixa de célu- las pode ser administrada ao indivíduo. Em alguns casos, os métodos fornecidos permitem administrar uma dose mais baixa dessas células, para obter a mesma ou melhor eficácia do tratamento que a dose em um método no qual a terapia celular é administrada sem administrar o inibidor da gama secretase, como pelo menos 1,5 vezes, 2 vezes, 3 Vezes, 4 vezes, 5 vezes ou 10 vezes menos que a dose em um méto- do no qual a terapia celular é administrada sem administrar o inibidor de gamma secretase.
[00254] Em algumas modalidades, por exemplo, a dose contém en- tre 5,0 x 10º e 2,25 x 107, 5,0 x 10º e 2,0 x 107, 5,0 x 10º e 1,5 x 107, 5,0 x 10º e 1,0 x 107, 5,0 x 106º e 7,5 x 10º, 7,5 x 10º e 2,25 x 10º, 7,5x 108º e 2,0 x 107, 7,5 x 10º e 1,5 x 107, 7,5 x 10º e 1,0 x 107, 1,0 x 107 e 2,25 x 107, 1,0 x 107 e 2,0 x 107, 07 e 1,5 x 107, 1,5 x 107 e 2,25 x 107, 1,5x 107 e 2,0 x 107, 2,0 x 107 e 2,25 x 107. Em algumas modalidades, a dose de células contém um número de células, que está entre pelo menos ou pelo menos cerca de 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 108, 9 x 1086, 10 x 10º e cerca de 15 x 10º células de expressão de receptores recombinantes, tais como células de expressão de receptores recom- binantes que são CD8+. Em algumas modalidades, essa dose, como o número alvo de células, refere-se às células de expressão de recepto- res recombinantes totais na composição administrada.
[00255] Em algumas modalidades, por exemplo, a dose mais baixa contém menos de cerca de 5 x 10º células, células de expressão de receptores recombinantes (por exemplo, CAR), células T e/ou PBMCs por quilograma de peso corporal do indivíduo, como menos de cerca de 4,5 x 106, 4 x 106, 3,5 x 106, 3 x 106, 2,5 x 106, 2 x 106, 1,5 x 106, 1 x 1086, 5 x 10º, 2,5 x 10º ou 1 x 10º dessas células por quilograma de pe- so corporal do indivíduo. Em algumas modalidades, a dose mais baixa contém menos de cerca de 1 x 105, 2 x 10º, 5 x 10º ou 1 x 10º dessas células por quilograma de peso corporal do indivíduo, ou um valor den- tro do intervalo entre quaisquer dois dos valores precedentes. Em al- gumas modalidades, esses valores referem-se a números de células de expressão de receptores recombinantes; em outras modalidades, eles referem-se ao número de células T ou PBMCs ou células totais administradas.
[00256] Em algumas modalidades, uma ou mais doses subsequen- tes de células podem ser administradas ao indivíduo. Em algumas modalidades, a dose subsequente de células é administrada mais ou mais que cerca de 7 dias, 14 dias, 21 dias, 28 dias ou 35 dias após o início da administração da primeira dose de células. A dose subse- quente de células pode ser maior que, cerca da mesma ou menor que a primeira dose. Em algumas modalidades, a administração da terapia de células T, como a administração da primeira e/ou segunda dose de células, pode ser repetida.
[00257] Em algumas modalidades, início da administração da tera- pia celular, por exemplo, a dose de células ou uma primeira dose de uma dose dividida de células é administrada antes (antes de), conco- mitantemente com ou após (subsequentemente ou subsequente à) a administração do inibidor de gama secretase, ou um sal farmaceuti- camente aceitável do seu hidrato.
[00258] Em algumas modalidades, a dose de células, ou a dose subsequente de células, é administrada simultaneamente com o início da administração do inibidor de gama secretase, de acordo com os métodos de terapia de combinação. Em algumas modalidades, a dose de células ou a dose subsequente de células, é administrada no mes- mo dia do início da administração do inibidor da gama secretase de acordo com os métodos de terapia de combinação. Em algumas mo- dalidades, a dose de células, ou a dose subsequente de células, é administrada dentro de 1 dia, dentro de 2 dias, dentro de 3 dias, dentro de 4 dias, dentro de 5 dias, dentro de 6 dias ou dentro de 7 dias após o início da administração do inibidor da gama secretase, de acordo com os métodos de terapia de combinação.
[00259] Em algumas modalidades, a dose de células, ou a dose subsequente de células, é administrada antes de iniciar ou iniciar a administração do inibidor de gama secretase de acordo com a terapia de combinação fornecida. Em algumas modalidades, a dose de células é administrada pelo menos ou pelo menos cerca de 1 hora, pelo me- nos ou pelo menos cerca de 2 horas, pelo menos ou pelo menos cerca de 3 horas, pelo menos ou pelo menos cerca de 6 horas, pelo menos ou pelo menos cerca de 12 horas, pelo menos ou pelo menos cerca de 1 dia, pelo menos ou pelo menos cerca de 2 dias, pelo menos ou pelo menos cerca de 3 dias, pelo menos ou cerca de pelo menos 4 dias, pelo menos ou pelo menos cerca de 5 dias, pelo menos ou cerca de pelo menos 6 dias, pelo menos ou pelo menos cerca de 7 dias, pelo menos ou cerca de pelo menos 12 dias, pelo menos ou pelo menos cerca de 14 dias, pelo menos ou cerca de pelo menos 15 dias, pelo menos ou pelo menos cerca de 21 dias, pelo menos ou pelo menos cerca de 28 dias, pelo menos ou cerca de pelo menos 30 dias, pelo menos ou pelo menos cerca de 35 dias, pelo menos ou pelo menos cerca de 42 dias, pelo menos ou cerca de pelo menos 60 dias ou pelo menos pelo menos 90 dias antes da administração do inibidor da ga- ma secretase, de acordo com a terapia de combinação fornecida.
[00260] Em algumas modalidades, a administração do inibidor de gama secretase de acordo com a terapia de combinação fornecida é em um momento em que a administração prévia da imunoterapia (por exemplo, terapia com células T, como terapia com células CAR-T) está associada ou é provável que esteja associada a uma funcionalidade diminuída das células T em comparação com a funcionalidade das cé- lulas T no momento imediatamente antes do início da imunoterapia (por exemplo, terapia com células T, como terapia com células CAR-T) ou em um ponto de tempo precedente após o início da terapia com células T. Em algumas modalidades, o método envolve, subsequen- temente à administração da dose de células da terapia com células T, por exemplo, terapia com células T adotiva, mas antes da administra- ção do inibidor da gama secretase, a avaliação de uma amostra do indivíduo para uma ou mais funções de T células, como expansão ou persistência das células, por exemplo, como determinado pelo nível ou quantidade no sangue, ou outros fenótipos ou resultados desejados,
como no presente documento descrito, por exemplo, como os descri- tos na Seção Ill. Vários parâmetros para determinar ou avaliar o regi- me da terapia de combinação são descritos na Seção Ill. B. ADMINISTRAÇÃO DE INIBIDOR DE GAMA SECRETASE
[00261] Em algumas modalidades dos métodos, composições, combinações, kits e usos no presente documento fornecidos, a terapia de combinação pode ser administrada em uma ou mais composições, por exemplo, uma composição farmacêutica contendo um inibidor de gama secretase e/ou terapia celular, por exemplo, terapia com células T.
[00262] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase inibe ou reduz a clivagem intramembranar de um ou mais receptores na célula, por exemplo, uma célula de tumor/câncer. Em algumas mo- dalidades, a ICso da inibição da clivagem intramembranar do receptor da superfície celular na célula de câncer/tumor é inferior a cerca de 100 UM, 50 UM, 25 UM, 10 UM, 1 UM, 0,75 UM 0,5 UM, 0,25 UM, 0,1 UM, 75 nM, 50 nM, 25 nM ou 10 nM. Em algumas modalidades, o ini- bidor de gama secretase inibe a clivagem intramembranar do receptor da superfície celular na célula de câncer/tumor com uma concentração inibidora semimáxima (IC5so) de 0,01 nM a 10 nM, 0,01 nM a 5 nM, 0,01 nM a 1 NM, 0,01 NM, a 0,5 nM, 0,01 nM a 0,35 nM, 0,01 nM a 0,25 NM, 0,01 nM à 1,0 NM, 0,01 nM a 0,05 nM, 0,05 NM a 10 NM, 0,05 NMa5 NM, 0,05 nM a 1 NM, 0,05 nM, a 0,5 nM, 0,05 nM a 0,35 nM, 0,05 nM a 0,25 nM, 0,05 nM a 1,0 nM, 1,0 nM a 10 nM, 1,0 NM nM a 5 nM, 1,0 NM nM a 1 nM, 1,0 NM NM, a 0,5 NM, 1,0 NM NM a 0,35 nM, 1,0 NM NM a 0,25 nM, 0,25 nM a 10 nM, 0,25 nM a 5 nM, 0,25 nM a 1 NM, 0,25 NM, 0,5 nM, 0,25 nM a 0,35 nM, 0,35 nM para 10 nM, 0,35 nM a 5 NM, 0,35 nM a 1 NM, 0,35 NM, a 0,5 nM, 0,5 NM a 10 nM, 0,5 NM a 5 AM, 0,5 NM a 1 NM, 1 NM a 10 NM, 1 NM a 5 NM ou 5 nM a 10 nM. Em al- gumas modalidades, a IC5o da inibição da clivagem intramembranar do receptor da superfície celular na célula de câncer/tumor é de cerca de nM-25 nM, 25 nM-50 nM, 50 nM-75 nM, 75 nM-0,1 UM, 0,1 UuM-0,25 UM, 0,25 uM-0,5 uM, 0,5 uM-0,75 UM, 0,75 uM-1 UM, 1 UuM-10 UM, 10 uM-25 UM, 25 uM-50 UM, 50 uM-75 UM ou 75 uM-100 UM. Em algu- mas modalidades, o (s) receptor (es) é/são selecionado(s) do grupo que consiste em antígeno de maturação de células B (BCMA), Incisura 1, Incisura 2, Incisura 3, Incisura 4, Mucina 1 associada à superfície celular (MUC1), Efrina B2, Betaglicana (TGFBR3), CD43, CD44, CSF1IR, CX3CR1, CXCL16, Delta1, E-caderina, N-caderina, HLA-A2, IFNaR2, ILIR1, ILIR2, IL6R e proteína precursora de amiloide (APP). Em algumas modalidades, o receptor é a mucina 1 associada à super- fície celular (MUC1).
[00263] Em algumas modalidades, o inibidor da gama secretase inibe ou reduz a clivagem intramembranar de um ou mais receptores descritos acima na célula, por exemplo, uma célula de tumor/câncer, e em que a administração da gama secretase aumenta o nível da ex- pressão do receptor na célula. Em algumas modalidades, o receptor é o antígeno de maturação das células B de superfície (BCMA). Em al- gumas modalidades, o inibidor de gama secretase proíbe a clivagem intramembranar do antígeno de maturação das células B de superfície (BCMA), e em que a ICs5o da inibição da clivagem do BCMA de superfí- cie é menor que cerca de 100 uM, 50 UM, 25 uM, 10 UM, 1 UM, 0,75 UM, 0,5 UM, 0,25 uM, 0,1 uM, 75 nM, 50 nM, 25 nM ou 10 nM. Em al- gumas modalidades, a ICso da inibição da clivagem intramembranar do receptor da superfície celular na célula de câncer/tumor é de cerca de 10 nM-25 nM, 25 nM-50 nM, 50 nM-75 nM, 75 nM-0,1 UM, 0,1 UuM-0,25 HM, 0,25 UuM-0,5 UM, 0,5 uM-0,75 UM, 0,75 UM-1 UM, 1 UuM-10 UM, 10 UM-25 UM, 25 uM-50 UM, 50 UuM-75 UM ou 75 puM-100 UM. Em algu- mas modalidades, a IC5so da inibição da clivagem do BCMA de superfí- cie é inferior a 0,5 nM. Em algumas modalidades, a IC5so da inibição da clivagem do BCMA de superfície é de cerca de 0,01 nM a cerca de 0,5 NM, ou 0,01 nM a cerca de 0,5 nM ou cerca de 0,01 nM a cerca de 0,35 nM.
[00264] Em algumas modalidades, o inibidor da gama secretase tem uma baixa penetração no cérebro. Em algumas modalidades, apenas 0,1%, 0,25%, 0,5%, 0,75%, 1%, 2,5%, 5%, 7,5%, 10%, 20%, 30%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90% do inibidor da gama secretase pode penetrar no cérebro após a administração.
[00265] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase inibe ou reduz seletivamente a clivagem intramembranar de parte dos substratos da gama secretase. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase inibe ou reduz seletivamente a clivagem intramem- branar do antígeno de maturação das células B de superfície (BCMA).
[00266] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é um inibidor de peptídeo ou inibidor não peptídico. Em algumas modali- dades, o inibidor de gama secretase é um inibidor de peptídeo dentre derivados de aldeídos peptídicos, derivados de difluorocetonas, deri- vados de hidroxietileno dipeptídeo isotere, derivados de peptídeo heli- coidal alfa e análogos de dipeptídeo. Em algumas modalidades, o ini- bidor de gama secretase é um inibidor não peptídico selecionado a partir de derivados de benzodiazepinas e derivados de sulfonamidas. Em algumas modalidades, a gama secretase é um inibidor do estado de transição, por exemplo, LY-411575-l ou LY685.458. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é um inibidor de estado de não transição, como DAPT, RO4929097. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é um modulador de gama secretase. Em algumas modalidades, o modulador de gama secretase é um modula- dor do tipo fármacos anti-inflamatórios não esteroides.
[00267] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é LY3039478, inibidor de secretase | (GSI |) Z-Leu-Leu-Norleucina; inibi-
dor de y-secretase Il (GSI Il); inibidor de y-secretase Ill (GSI Ill), N- Benziloxicarbonil-Leu-leucinal, N-(2-naftoil)-Val-fenilalaninal; inibidor de y-secretase Ill (GSI IV); inibidor de y-secretase Ill (GSI V), N- Benziloxicarbonil-Leu-fenilalaninal; inibidor de y-secretase Ill (GSI VI), 1-(S)-endo-N-(1,3,3)-trimetilbiciclo[2.2.1]hept-2-il)-4-fluorofenil sulfo- namida; inibidor de y-secretase Ill (GSI VII), Mentiloxicarbonil-LL-CHO; inibidor de y-secretase Ill (GSI IX), (DAPT), T-Butil éster de N-[N-(3,5- Difluorofenacetil-L-alanil)]-S-fenilglicina; inibidor de y-secretase X (GSI XxX), terc-butil éster de ácido (1S-benzil-4R-[1-(1S-carbamoil-2- fenetilcarbamoil)-1S-3-metilbutilcarbamoil]-2R-hidróxi-5- fenilpentil)kcarbâmico; inibidor de y-secretase XI (GSI XI), 7-amino-4- cloro-3-metóxi-isocumarina; inibidor de y-secretase XII (GSI XII), Z-lle- Leu-CHO; inibidor de y-secretase XIII (GSI XIII), Z-Tyr-lle-Leu-CHO; inibidor de y-secretase XIV (GSI XIV), Z-Cys(t-Bu)-lle-Leu-CHO; inibi- dor de y-secretase XVI (GSI XVI), metil éster de N-[N-3,5- difluorofenacetil]-L-alanil-S-fenilglicina; inibidor de y-secretase XVII (GSI XVII); inibidor de y-secretase XIX (GSI XIX) ben- zo[e][1 4]diazepin-3-il)-butiramida; inibidor de y-secretase XX (GSI XX), (S,S)-2-[2-(3,5-Difluorofenil)acetilamino]-N-(5-metil-6-0x0-6,7-di- hidro-5H-dibenzo[b,d]Jazepin-7-il)propionamida; inibidor de y-secretase XXI (GSI XXI), (S,S)-2-[2-(3,5-Difluorofenil)-acetilamino]-N-(1-metil-2- ox0-5-fenil-2-,3-di-hidro-1H-benzo[e][1 ,4]diazepin-3-il)-propionamida; inibidor de Gama40 secretase |, N-trans-3,5-dimetoxicinamoil-lle- leucinal; inibidor de Gama40 secretase |l, N-terc-Butiloxicarbonil-Gly- Val-Valinal Isovaleril-V V-Sta-A-Sta-OCH3; MK-0752 (Merck); MRK- 003 (Merck); semagacestate/LY450139 (Eli Lilly; RO4929097; PF-
03084.014; BMS-708163; MPC-7869 (modificador da y-secretase), YO-01027 (Dibenzazepina), Composto E ([(28)-24[(3,5- Difluorofenil)acetilJamino]Jamino)-N-[(3S)-1-metil-2-0x0-5-fenil-2,3-di- hidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il]propanamida], disponível na Alexis
Biochemicals), LY411575 (Eli Lilly e Co.), L-685.458 (Sigma-Aldrich), BMS-289948 cloridrato de (4-cloro-N-(2,5-difluorofenil)-N-((1R)-(4- fluoro-2-[3-(1H-imidazol-1-il)propilIfenil>)etil)benzenossulfonamida) e BMS-299897 (ácido [4-[2-((1R)-1K[(4-clorofenil)sulfonil]-2,5- difluoroanilinojetil)-S-fluorofenilibutanoico)) (Bristol Myers Squibb).
[00268] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é LY3039478 ou é um estereoisômero do mesmo ou é um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável dos precedentes.
[00269] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é um composto da estrutura: Composto 1 FR 7 F o ms
MÁ À Z o z d om ou um estereoisômero do mesmo ou um sal ou hidrato farmaceutica- mente aceitável dos precedentes.
[00270] Em algumas modalidades, o composto 1 é um estereoisô- mero único, como representado. Em alguns casos, existem dois cen- tros quirais que dão origem a quatro estereoisômeros. Assim, em al- gumas modalidades, a referência ao Composto 1 também inclui mistu- ras racêmicas, incluindo o Composto 1. Os estereoisômeros especiífi- cos podem ser preparados por síntese estereoespecífica usando ma- teriais de partida enantiomericamente puros ou enriquecidos. Os este- reoisômeros específicos de materiais de partida, intermediários ou misturas racêmicas, incluindo o Composto 1, podem ser resolvidos por técnicas bem conhecidas na técnica, como as encontradas em Stereo- chemistry of Organic Compounds, E. |. Eliel e SH Wilen (Wiley 1994) e Enantiomers, Racemates and Resolutions, J., Jacques, A. Collet e SH
Wilen (Wiley 1991), incluindo cromatografia em fases estacionárias quirais, resoluções enzimáticas ou cristalização fracionária ou croma- tografia de diastereômeros formados para esse fim, como sais diaste- reoméricos.
[00271] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é um composto da estrutura:
NA SO o z E X ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato do mesmo.
[00272] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é um composto da estrutura:
F = F o o. > 7 v N
H N o A o or ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato do mesmo.
[00273] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é um composto da estrutura: AA TN 7 Y po Vem :Ê õ A on ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato do mesmo.
[00274] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é um composto da estrutura:
F o oH ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00275] Em algumas modalidades, o composto é o Composto 1. Em algumas modalidades, o Composto 1 é denominado: 4,4,4-trifluoro-N- [[18)-2-[[(7S)-5-(2-hidroxietil)-6-o0x0-7H-pirido[2,3-d][3] — benzazepin-7- ilJamino]-1-metil-2-0x0-etil] butanamida; e também pode ser chamado: N-[(18)-2-[[(7S)-6,7-di-hidro-5-(2-hidroxietil)-6-oxo-5H-pirido[3,2- al[3]benzazepin-7-ilJamino]-1-metil-2-0x0etil]-4,4,4-trifluorobutanamida; e outros nomes podem ser usados para identificar inequivocamente o Composto 1. Em algumas modalidades, o Composto 1 é conhecido como LY3039478. Veja também o Pedido PCT publicado. WO?2013/016081 para a síntese e preparação do Composto 1.
1. Composições e formulações
[00276] Em algumas modalidades dos métodos de terapia de com- binação, composições, combinações, kits e usos no presente docu- mento fornecidos, a terapia de combinação pode ser administrada em uma ou mais composições, por exemplo, uma composição farmacêuti- ca contendo um inibidor de gama secretase ou um sal de hidrato far- maceuticamente aceitável do mesmo.
[00277] Em algumas modalidades, a composição, por exemplo, uma composição farmacêutica contendo o inibidor de gama secretase, ou um sal farmaceuticamente aceitável do seu hidrato, pode incluir ve- ículos como um diluente, adjuvante, excipiente ou veículo com o qual o inibidor de gama secretase ou um sal farmaceuticamente aceitável de hidrato do mesmo e/ou células são administrados. Exemplos de veícu- los farmacêuticos adequados são descritos em "Remington's Pharma-
ceutical Sciences" por EW Martin. Tais composições conterão uma quantidade terapeuticamente eficaz do inibidor de gama secretase, ou um sal farmaceuticamente aceitável do hidrato do mesmo, geralmente na forma purificada, juntamente com uma quantidade adequada de veículo, de modo a fornecer a forma para administração adequada ao paciente. Tais veículos farmacêuticos podem ser líquidos estéreis, como água e óleos, incluindo os de petróleo, origem animal, vegetal ou sintética, como óleo de amendoim, óleo de soja, óleo mineral e óleo de gergelim. Soluções salinas e soluções aquosas de dextrose e glicerol também podem ser empregadas como veículos líquidos, particular- mente para soluções injetáveis. As composições farmacêuticas podem conter qualquer um ou mais diluente (s), adjuvante (s), antiaderente (s), aglutinante (s), revestimento (s),carga (s), aroma (s), cor (es), lubri- ficante (s), deslizante (s), conservante (s), detergente (s), sorvente (s), agente (s) emulsificante (s), excipiente (s) farmacêutico (s), agente (s) de tamponamento do pH ou adoçante (s) e uma combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica pode ser líquida, sólida, um pó liofilizado, na forma de gel e/ou combinação dos mesmos. Em alguns aspectos, a escolha do veículo é determinada em parte pelo inibidor específico e/ou pelo método de administração.
[00278] Os veículos farmaceuticamente aceitáveis são geralmente não tóxicos para os receptores nas dosagens e concentrações empre- gadas e incluem, mas não estão limitados a: tampões como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes, incluindo ácido ascór- bico e metionina; conservantes (como cloreto de octadecildimetilbenzil amônio; cloreto de hexametônio; cloreto de benzalcônio; cloreto de benzetônio; fenol, álcool butílico ou benzílico; alquil parabeno como metil ou propil parabeno; catecol; resorcinol; ciclo-hexanol; 3-pentanol; e m-cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular (menos de cerca de 10 resíduos); proteínas, como albumina sérica, gelatina ou imuno-
globulinas; polímeros hidrofílicos tais como polivinilpirrolidona; amino- ácidos tais como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos, incluin- do glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes tais como EDTA; açúcares tais como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contra-íons formadores de sal, como sódio; complexos metálicos (por exemplo, complexos de proteína Zn); e/ou tensoativos não iônicos, tais como polietilenoglicol (PEG), estabilizadores e/ou conservantes. As compo- sições contendo inibidor de gama secretase ou um sal farmaceutica- mente aceitável do hidrato do mesmo também podem ser liofilizadas.
[00279] Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas podem ser formuladas para administração por qualquer via conhecida por aqueles de experiência na técnica, incluindo injeção intramuscular, intravenosa, intradérmica, intralesional, intraperitoneal, administração subcutânea, intratumoral, epidural, nasal, oral, vaginal, retal, tópica, local, ótica, inalatória, bucal (por exemplo, sublingual) e transdérmica ou qualquer via. Em algumas modalidades, outros modos de adminis- tração também são considerados. Em algumas modalidades, a admi- nistração é por infusão em bolo, por injeção, por exemplo, injeções in- travenosas ou subcutâneas, injeção intraocular, injeção periocular, in- jeção subretiniana, injeção intravítrea, injeção trans-septal, injeção subscleral, injeção intracoroidal, injeção intracameral, injeção subcon- jectiva, injeção subconjuntival, injeção sub-Tenon, injeção retrobulbar, injeção peribulbar ou liberação justaescleral posterior. Em algumas modalidades, a administração é por via parentérica, intrapulmonar e intranasal e, se desejado para o tratamento local, administração intra- lesional. As infusões parentéricas incluem administração intramuscu- lar, intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal ou subcutânea. Em algu- mas modalidades, uma dada dose é administrada por uma única ad- ministração em bolo. Em algumas modalidades, é administrada por várias administrações em bolo, por exemplo, durante um período de não mais de 3 dias, ou por administração de infusão contínua.
[00280] Em algumas modalidades, a administração pode ser local, tópica ou sistêmica, dependendo do locus do tratamento. Em algumas modalidades, a administração local a uma área que precisa de trata- mento pode ser alcançada por, por exemplo, mas não limitado a infu- são local durante a cirurgia, aplicação tópica, por exemplo, em conjun- to com um curativo após a cirurgia, por injeção, por meio de um cate- ter, por meio de um supositório ou por meio de um implante. Em algu- mas modalidades, as composições também podem ser administradas com outros agentes biologicamente ativos, sequencialmente, intermi- tentemente ou na mesma composição. Em algumas modalidades, a administração também pode incluir sistemas de liberação controlada, incluindo formulações de liberação controlada e liberação controlada por dispositivo, como por meio de uma bomba. Em algumas modalida- des, a administração é oral.
[00281] Em algumas modalidades, os compostos farmaceuticamen- te e terapeuticamente ativos e seus derivados são tipicamente formu- lados e administrados em formas de dosagem unitárias ou formas de dosagem múltipla. Cada dose unitária contém uma quantidade prede- terminada de composto terapeuticamente ativo suficiente para produzir o efeito terapêutico desejado, em associação com o transportador, ve- ículo ou diluente farmacêutico necessário. Em algumas modalidades, as formas de dosagem unitária incluem, mas não se limitam a, com- primidos, cápsulas, pílulas, pós, grânulos, soluções ou suspensões parentéricas estéreis e soluções ou suspensões orais e emulsões orais e em óleo em água contendo quantidades adequadas dos com- postos ou seus derivados farmaceuticamente aceitáveis. As formas de dose unitária podem conter ampolas e seringas ou comprimidos ou cápsulas embalados individualmente. As formas de dose unitária po-
dem ser administradas em frações ou múltiplos das mesmas. Em al- gumas modalidades, uma forma de dose múltipla é uma pluralidade de formas de dosagem unitária idênticas embaladas em um único recipi- ente para serem administradas na forma de dose unitária segregada. Exemplos de formas de doses múltiplas incluem frasconetes, frascos de comprimidos ou cápsulas ou frascos de quartilhos ou galões.
2. Programação de Dosagem do Inibidor de Gama Secretase
[00282] Em algumas modalidades, o método de terapia de combi- nação fornecido envolve a administração ao indivíduo de uma quanti- dade terapeuticamente eficaz de um inibidor de gama secretase, ou um sal farmaceuticamente aceitável do hidrato do mesmo, e a terapia celular, como uma terapia com células T (por exemplo, células T de expressão de CAR).
[00283] Em algumas modalidades, a administração do inibidor de gama secretase, ou um sal farmaceuticamente aceitável do hidrato do mesmo, é iniciada antes de, subsequentemente, durante, durante o curso de, simultaneamente, próximo simultaneamente, sequencial- mente e/ou intermitentemente com a administração da terapia celular, como uma terapia de células T (por exemplo, células T de expressão de CAR). Em algumas modalidades, o método envolve iniciar a admi- nistração de inibidor de gama secretase, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, antes da administração da terapia com células T. Em outras modalidades, o método envolve iniciar a administração do inibidor de gama secretase, ou um sal farmaceuticamente aceitável do hidrato do mesmo, após a administração de uma terapia celular (por exemplo, uma terapia com células T de expressão de CAR). Em algu- mas modalidades, o esquema de dosagem compreende iniciar a ad- ministração do inibidor da gamma secretase ou um sal farmaceutica- mente aceitável do hidrato do mesmo, simultaneamente ou simultane- amente com a administração de uma terapia celular (por exemplo,
uma terapia com células T expressando CAR).
[00284] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase ou um sal farmaceuticamente aceitável de hidrato é administrado em um ciclo. Em algumas modalidades, o ciclo compreende um período de administração no qual o inibidor de gama secretase é administrado seguido por um período de descanso durante o qual o inibidor de ga- ma secretase não é administrado. Em algumas modalidades, o núme- ro total de dias do ciclo, por exemplo, desde o início do início da admi- nistração do inibidor da gama secretase, é maior ou maior que cerca de 1 dia, 3 dias, 7 dias, 14 dias, 14 dias, 21 dias, 28 dias, 30 dias, 40 dias, 50 dias, 60 dias ou mais.
[00285] Em algumas modalidades, a iniciação da administração do inibidor de gama secretase é realizada em pelo menos um ciclo e a iniciação da administração da terapia celular (por exemplo, células T de expressão de CAR) são realizadas no mesmo dia, opcionalmente simultaneamente. Em algumas modalidades, o início da administração do inibidor da gama secretase em pelo menos um ciclo é precedente ao início da administração da terapia celular. Em algumas modalida- des, a iniciação da administração do inibidor da gama secretase em pelo menos um ciclo é simultânea ou no mesmo dia da iniciação da administração da terapia celular. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado a partir de ou de O a 30 dias, como O a 15 dias, O a 6 dias, O a 96 horas, O a 24 horas, O a 12 horas, 0 a 6 horas ou O a 2 horas, 2 horas a 15 dias, 2 horas a 6 dias, 2 horas a 96 horas, 2 horas a 24 horas, 2 horas a 12 horas, 2 horas a 6 horas, 6 horas a 30 dias, 6 horas a 15 dias, 6 horas a 6 dias, 6 horas a 96 ho- ras, 6 horas a 24 horas, 6 horas a 12 horas, 12 horas a 30 dias, 12 ho- ras a 15 dias, 12 horas a 6 dias, 12 horas a 96 horas, 12 horas a 24 horas, 24 horas a 30 dias, 24 horas a 15 dias, 24 horas a 6 dias, 24 horas a 96 horas, 96 horas a 30 dias, 96 horas a 15 dias, 96 horas a 6 dias, 6 dias a 30 dias, 6 dias a 15 dias ou 15 dias a 30 dias antes do início da terapia celular (por exemplo, terapia com células T expres- sando CAR). Em alguns aspectos, o inibidor da gama secretase é ad- ministrado não mais do que cerca de 96 horas, 72 horas, 48 horas, 24 horas, 12 horas, 6 horas, 2 horas ou 1 hora antes do início da terapia com células T.
[00286] Em algumas dessas modalidades nas quais o inibidor de gama secretase, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é administrado antes da terapia celular (por exemplo, terapia com célu- las T, como terapia com células CAR-T), a administração da gama se- cretase inibidor, continua em intervalos regulares até o início da tera- pia celular e/ou por um tempo após o início da terapia celular.
[00287] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado, ou é administrado adicionalmente, após a administração da terapia celular (por exemplo, terapia com células T, como terapia com células CAR-T). Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado dentro de ou dentro de 1 hora, 2 horas, 6 ho- ras, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 96 horas, 4 dias, 5 dias, 6 dias ou 7 dias, 14 dias, 15 dias, 21 dias, 24 dias, 28 dias, 30 dias, 36 dias, 42 dias, 60 dias, 72 dias ou 90 dias após o início da administração da te- rapia celular (por exemplo, terapia com células T).
[00288] Em algumas modalidades, os métodos fornecidos envolvem administração continuada, como em intervalos regulares, do inibidor de gama secretase após o início da administração da terapia celular. Por exemplo, o inibidor de gama secretase é administrado em interva- los regulares diariamente, a cada dois dias, a cada três dias, três ve- zes por semana ou uma vez por semana por um período de tempo.
[00289] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado, como em intervalos regulares, como descrito, por até ou até cerca de 1 dia, até ou até cerca de 2 dias, até ou até cerca de 3 dias, até ou até cerca de 4 dias, até ou até cerca de 5 dias, até ou até cerca de 6 dias, até ou até cerca de 7 dias, até ou até cerca de 12 di- as, até ou até cerca de 12 dias, até ou até cerca de 14 dias, até ou até cerca de 21 dias, até ou até cerca de 24 dias, até ou até cerca de 28 dias, até ou até cerca de 30 dias, até ou até cerca de 35 dias, até ou até cerca de 42 dias, até ou até cerca de 60 dias ou até ou até cerca de 90 dias, até ou até cerca de 120 dias, até ou até cerca de 180 dias, até ou até cerca de 240 dias, até ou até cerca de 360 dias, até ou até cerca de 360 dias, ou até ou até cerca de 720 dias ou mais após o iní- cio da administração da terapia celular (por exemplo, terapia com célu- las T, como terapia com células CAR-T).
[00290] Em algumas dessas modalidades acima, o inibidor de gama secretase é administrado antes e após o início da administração da terapia celular (por exemplo, terapia com células T, como terapia com células CAR-T).
[00291] Em algumas modalidades, a iniciação da administração do inibidor de gama secretase é realizada em ou após, opcionalmente imediatamente após ou dentro de 1 a 3 dias após: (i) o nível de pico ou máximo das células da terapia com células T são detectáveis no san- gue do indivíduo; (ii) o número de células da terapia de células T de- tectáveis no sangue, após serem detectáveis no sangue, não é detec- tável ou é reduzido, opcionalmente reduzido em comparação com um ponto de tempo precedente após a administração da terapia de células T; (iii) o número de células da terapia com células T detectáveis no sangue diminui em mais de 1,2 vezes, 1,5 vezes, 2,0 vezes, 3,0 vezes, 4,0 vezes, 4,0 vezes, 5,0 vezes, 10 vezes ou mais o número de pico ou máximo de células da terapia com células T detectáveis no sangue do indivíduo após o início da administração da terapia com células T; (iv) em um momento após um nível de pico ou máximo das células da terapia com células T serem detectáveis no sangue do indivíduo, o número de células ou derivado das células T detectáveis no sangue do indivíduo é menor que 10%, menor que 5%, menor que 1% ou menor que 0,1% das células mononucleares do sangue periférico totais (PBMCs) no sangue do indivíduo; (v) o indivíduo exibe progressão da doença e/ou recidivou após remissão após o tratamento com a terapia com células T; e/ou (iv) o indivíduo exibe uma carga tumoral aumenta- da em comparação com a carga tumoral em um momento precedente ou após a administração das células T e antes do início da administra- ção do inibidor de gama secretase.
[00292] Em alguns aspectos, o início da administração do inibidor da gama secretase ocorre em um momento após o indivíduo ter rein- cidente ou suspeito de recaída ou provável recaída após a administra- ção da terapia celular (por exemplo, terapia com células T, como tera- pia com células CAR T). Em alguns casos, a terapia celular é uma te- rapia com células CAR-T anti-BCMA e o inibidor de gama secretase é administrado após o paciente ter reincidido ou esteja com suspeita ou provável recaída após a administração do terapia com células CAR-T anti-BCMA.
[00293] Em algumas modalidades, a iniciação da administração do inibidor de gama secretase em pelo menos um ciclo é após o início da administração da terapia celular. Em algumas modalidades, a iniciação da administração do inibidor de gama secretase é pelo menos ou cer- ca de pelo menos 1 dia, pelo menos ou cerca de pelo menos 2 dias, pelo menos ou cerca de pelo menos 3 dias, pelo menos ou cerca de pelo menos 4 dias, pelo menos ou cerca de pelo menos 5 dias, pelo menos ou cerca de pelo menos 6 dias, pelo menos ou cerca de pelo menos 7 dias, pelo menos ou cerca de pelo menos 8 dias, pelo menos ou cerca de pelo menos 9 dias, pelo menos ou cerca de pelo menos dias, pelo menos ou pelo menos cerca de 12 dias, pelo menos ou cerca de pelo menos 14 dias, pelo menos ou pelo menos cerca de 15 dias, pelo menos ou cerca de pelo menos 21 dias, pelo menos ou pelo menos cerca de 24 dias, pelo menos ou cerca de pelo menos 28 dias, pelo menos ou cerca de pelo menos 30 dias, pelo menos ou cerca de pelo menos 35 dias ou pelo menos ou cerca de 42 dias, pelo menos ou cerca de 60 dias, ou pelo menos ou cerca de pelo menos 90 dias após o início da administração da terapia celular. Em algumas modali- dades, a iniciação da administração do inibidor de gama secretase é realizada pelo menos 2 dias após, pelo menos | semana após, pelo menos 2 semanas após, pelo menos 3 semanas após ou pelo menos 4 semanas após o início da administração da terapia celular. Em al- gumas modalidades, a iniciação da administração do inibidor de gama secretase é realizada 2 a 28 dias ou 7 a 21 dias após o início da admi- nistração da terapia celular. Em algumas modalidades, a iniciação da administração do inibidor de gama secretase é realizada em um tempo maior ou maior que cerca de 14 dias, 15 dias, 16 dias, 17 dias, 18 di- as, 19, dias, 20 dias, 21 dias, 24 dias ou 28 dias após o início da ad- ministração da terapia celular.
[00294] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado várias vezes ao dia, duas vezes ao dia, diariamente, a cada dois dias, três vezes por semana, duas vezes por semana ou uma vez por semana após o início da terapia celular. Em algumas mo- dalidades, o inibidor da gama secretase é administrado diariamente. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administra- do duas vezes por dia. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado três vezes ao dia. Em outras modalidades, o inibidor da gama secretase é administrado em dias alternados.
[00295] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado diariamente. Em algumas modalidades, o inibidor de ga- ma secretase é administrado durante o período de administração por uma pluralidade de dias consecutivos, como por até 7, 8, 9, 10, 11, 12,
13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 ou mais de 30 dias consecutivos. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado por mais que ou maior que cerca de 7 dias consecutivos, mais que ou mais que cerca de 14 dias consecuti- vos, mais que ou mais que cerca de 21 dias consecutivos, mais que ou mais que cerca de 21 dias consecutivos, ou mais que ou mais que cerca de 28 dias consecutivos. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase, é administrado durante o período de administração por até 21 dias consecutivos. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado durante o período de administração por até 21 dias consecutivos, em que o ciclo compreende mais de 30 dias, começando com o início da administração do inibidor de gama secretase.
[00296] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado durante o período de administração por não mais do que cerca de 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22,23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 ou não mais que 30 dias consecutivos. Em certas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado uma vez ao dia por 14 dias durante um ciclo de tratamento de 21 dias. Em certas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado uma vez ao dia por 21 dias durante um ciclo de tratamento de 28 dias. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado durante o período de administração por não mais que 14 dias conse- cutivos.
[00297] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado em um ciclo, em que o ciclo compreende a administração do inibidor de gama secretase por uma pluralidade de dias consecuti- vos seguidos por um período de descanso durante o qual o inibidor de gama secretase não é administrado. Em algumas modalidades, o pe- ríodo de descanso é maior que cerca de 1 dia, maior que cerca de 3 dias consecutivos, maior que cerca de 5 dias consecutivos, maior que cerca de 7 dias consecutivos, maior que cerca de 8 dias consecutivos, maior que cerca de 8 dias consecutivos, maior que cerca de 9 dias consecutivos, maior que cerca de 10 dias consecutivos, maior que cerca de 11 dias consecutivos, maior que cerca de 12 dias consecuti- vos, maior que cerca de 13 dias consecutivos, maior que cerca de 14 dias consecutivos, maior que cerca de 14 dias consecutivos, maior que cerca de 15 dias consecutivos, maior que cerca de 16 dias consecuti- vos, maior que cerca de 16 dias consecutivos, maior que cerca de 17 dias consecutivos, maior que cerca de 18 dias consecutivos, maior que cerca de 19 dias consecutivos, maior que cerca de 20 dias consecuti- vos ou maior que cerca de 21 ou mais dias consecutivos. Em algumas modalidades, o período de descanso é maior que 7 dias consecutivos, maior que 14 dias consecutivos, maior que 21 dias ou maior que 28 dias. Em algumas modalidades, o período de descanso é maior que cerca de 14 dias consecutivos. Em algumas modalidades, o ciclo de administração do inibidor de gama secretase não contém um período de descanso.
[00298] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado em um ciclo, em que o ciclo é repetido pelo menos uma vez. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é admi- nistrado por pelo menos 2 ciclos, pelo menos 3 ciclos, pelo menos 4 ciclos, pelo menos 5 ciclos, pelo menos 6 ciclos, pelo menos 7 ciclos, pelo menos 8 ciclos, pelo menos 9 ciclos, pelo menos 10 ciclos, pelo menos 11 ciclos ou pelo menos 12 ciclos. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado por 1, 2, 3, 4,5, 6,7,8,9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ou 24 ciclos.
[00299] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado pelo menos seis vezes ao dia, cinco vezes ao dia, quatro vezes ao dia, três vezes ao dia, duas vezes ao dia, uma vez ao dia, a cada dois dias, a cada três dias, três vezes por semana, duas vezes por semana, uma vez semanalmente ou apenas uma vez antes ou subsequentemente ao início da administração da terapia celular. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado três vezes por semana. Em algumas modalidades, a administração do inibidor é realizada em um ciclo de tratamento que é pelo menos ou pelo menos cerca de ou 14 dias, pelo menos ou pelo menos cerca de ou 21 dias ou pelo menos ou pelo menos cerca de ou 28 dias. Em al- gumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado em doses múltiplas em intervalos regulares antes, durante, durante o cur- so e/ou após o período de administração da terapia com células. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado em uma ou mais doses em intervalos regulares antes da administra- ção da terapia celular. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado em uma ou mais doses em intervalos regula- res após a administração da terapia celular. Em algumas modalidades, uma ou mais das doses do inibidor de gama secretase, podem ocorrer simultaneamente com a administração de uma dose da terapia celular.
[00300] Em algumas modalidades, a dose, frequência, duração, tempo e/ou ordem de administração do inibidor de gama secretase é determinada, com base em limites ou critérios particulares de resulta- dos da etapa de rastreamento e/ou avaliação dos resultados do trata- mento no presente documento descritos, por exemplo, os no presente documento descritos na Seção Ill.
[00301] Em algumas modalidades, o método envolve a administra- ção da terapia celular a um indivíduo que foi previamente administrado uma quantidade terapeuticamente eficaz do inibidor de gama secre- tase. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é admi- nistrado a um indivíduo antes de administrar uma dose de células que expressam um receptor recombinante ao indivíduo. Em algumas mo-
dalidades, o tratamento com o inibidor de gama secretase ocorre ao mesmo tempo que a administração da dose de células. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado após a ad- ministração da dose de células.
[00302] Em algumas modalidades, a administração do inibidor de gama secretase é realizada por um período de administração de 2 a 28 dias, como 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 ou mais de 21 dias. Em algumas modalidades, o inibidor de secretam gama é administrado diariamente por 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15,16, 17, 18, 19, 20, 21 ou mais de 21 dias. Em algumas modalidades, o ini- bidor de gama secretase é administrado duas vezes ao dia por 7, 8,9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 ou mais de 21 dias. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado três vezes ao dia por 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 ou mais de 21 dias. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado todos os dias durante 7, 8, 9, 10, 11, 12,13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 ou mais de 21 dias. Em algumas modali- dades, o inibidor de gama secretase é administrado três vezes por semana durante 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 ou mais de 21 dias.
[00303] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado nos dias 2, 4, 7, 9, 11, 14, 16 e 18 após o início da admi- nistração da terapia celular (por exemplo, terapia com células T).
[00304] Em algumas modalidades dos métodos no presente docu- mento fornecidos, o inibidor de gama secretase e a terapia com célu- las são administrados simultaneamente ou quase simultaneamente.
[00305] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado em uma quantidade total de dosagem diária de no máxi- mo ou no máximo cerca de 50 mg/dia, 100 mg/dia, 150 mg/dia, 175 mg/dia, 175 mg/dia, 200 mg/dia, 250 mg/dia, 300 mg/dia, 350 mg/dia,
400 mg/dia, 450 mg/dia, 500 mg/dia, 600 mg/dia, 700 mg/dia, 800 mg/dia, 800 mg/dia ou menos. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado ou cada administração do inibidor é administrada independentemente, em uma quantidade de 0,5 mg a 500 mg, 0,5 mg a 250 mg, 0,5 mg a 100 mg, 0,5 mg a 50 mg, 0,5 mg para 25 mg, 0,5 mg a 10 mg, 0,5 mg a 5,0 mg, 0,5 mg a 2,5 mg, 0,5 mg a 1,0 mg, 1,0 mg a 500 mg, 1,0 mg a 250 mg, 1,0 mg a 100 mg, 1,0 mg a 50 mg, 1,0 mg a 25 mg, 1,0 mg a 10 mg, 1,0 mg a 5,0 mg, 1,0 mg a 2,5 mg, 2,5 mg a 500 mg, 2,5 mg a 250 mg, 2,5 mg a 100 mg, 2,5 mg a 50 mg, 2,5 mg a 25 mg, 2,5 mg a 10 mg, 2,5 mg a 5,0 mg, 5,0 mg a 500 mg, 5,0 mg a 250 mg, 5,0 mg a 100 mg, 5,0 mg a 50 mg, 5,0 mg a 25 mg, 5,0 mg para 10 mg, 10 mg a 500 mg, 10 mga 250 mg, 10 mg a 100 mg, 10 mg a 50 mg, 10 mg a 25 mg, 25mg a 500 mg, 25 mg a 250 mg, 25 mg a 100 mg, 25 mg a 50 mg, 50 mg à 500 mg, 50 mg a 250 mg, 50 mg a 100 mg, 100 mg a 500 mg, 100 mg a 250 mg ou 250 mg a 500 mg. Em algumas modalidades, o inibidor é administrado, o r cada administração do inibidor é administrada inde- pendentemente, em uma quantidade que é pelo menos ou pelo menos cerca de ou é ou é cerca de 0,5 mg, 1,0 mg, 2,5 mg, 5,0 mg, 10,0 mg, mg, 50 mg, 100 mg, 250 mg ou 500 mg. Em algumas modalidades, a quantidade é uma quantidade diária do inibidor de gama secretase. Essas quantidades de dosagem podem ser administradas em interva- los regulares, como descrito, como em dias alternados, a cada três dias, três vezes por semana ou uma vez por semana durante um perí- odo de administração. Em algumas modalidades, o período de admi- nistração é de 2 a 28 dias, como 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 ou mais de 21 dias.
[00306] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado em uma dosagem de cerca de 1 mg a cerca de 20 mg, por exemplo, de cerca de 1 mg a cerca de 10 mg, de cerca de 2,5 mg a cerca de 7,5 mg, de cerca de 5 mg a cerca de 15 mg, como cerca de mg, 10 mg, 15 mg ou 20 mg. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado em uma dose de cerca de 10 ug/kg a ou cerca de 5 mg/kg, como a ou cerca de 50 ug/Kkg a ou cerca de 2 mg/kg, a ou cerca de 50 ug/kg a ou cerca de 1 mg/Kg, a ou cerca de 50 ug/kg a ou cerca de 500 upg/Kg, a ou cerca de 50 ug/Kkg a ou cerca de 250 ug/Kkg, a ou cerca de 100 ug/Kkg a ou cerca de 200 ug/Kg, a ou cerca de 50 a ou cerca de 100 ug/Kkg, a ou cerca de 100 ug/Kkg a ou cerca de 2 mg/kg, a ou cerca de 100 ug/Kkg à ou cerca de 1 mg/kg, a ou cerca de 100 ug/Kkg a ou cerca de 500 ug/Kkg, a ou cerca de 100 ug/Kkg a, a ou cerca de 250 ug/Kkg, a ou cerca de 100 ug/Kkg a ou cerca de 200 ug/Kkg, à ou cerca de 100 ug/Kg, a ou cerca de 200 ug/Kkg a ou cerca de 2 mg/kg, a ou cerca de 200 ug/Kkg a, a ou cerca de 1 mg/kg, a ou cerca de 200 ug/kg a ou cerca de 500 ug/Kkg, ou cerca de 200 vg/Kg, a ou cerca de 250 ug/Kkg, ou a ou cerca de 250 ug/Kg, a ou cer- ca de 2 mg/kg, a ou cerca de 250 ug/kg a ou cerca de 1 mg/kg, a ou cerca de 250 ug/kg a ou cerca de 500 ug/kg, Em algumas modalida- des, o inibidor de gama secretase é administrado a uma dose dentre a ou cerca de 400 ug/kg a cerca de ou 600 upg/Kkg, como a ou cerca de 500 ug/kg. Em algumas modalidades, a quantidade é uma quantidade diária do inibidor de gama secretase. Tais quantidades de dosagem podem ser administradas em intervalos regulares, como descrito, co- mo em dias alternados, a cada três dias, três vezes por semana ou uma vez por semana durante um período de administração. Em algu- mas modalidades, o período de administração é de 2 a 28 dias, como 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 ou mais de 21 di- as.
[00307] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado em uma quantidade total de dosagem diária de pelo me- nos ou pelo menos cerca de 0,1 mg por dia, 0,5 mg por dia, 1,0 mg por dia, 2,5 mg por dia, 5 mg por dia, 10 mg por dia, 25 mg por dia, 50 mg por dia ou 100 mg por dia. Em algumas modalidades, a dose do inibi- dor é de cerca de 25 mg por dia. Em modalidades particulares, a dose do inibidor é ou é de cerca de 10 mg por dia. Tais quantidades de do- sagem podem ser administradas em intervalos regulares, como des- crito, como em dias alternados, a cada três dias, três vezes por sema- na ou uma vez por semana durante um n período de administração. Em algumas modalidades, o período de administração é de 2 a 28 di- as, como 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 ou mais de 21 dias.
[00308] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado em uma quantidade maior ou maior que cerca de 1 mg, 2,5 mg, 5 mg, 7,5 mg, 10 mg, 15 mg e menos de 25 mg. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado em uma quantidade maior ou maior que cerca de 1 mg por dia, 2,5 mg por dia, mg por dia, 7,5 mg por dia, 10 mg por dia, 15 mg por dia e menos de mg por dia. Tais quantidades de dosagem podem ser administradas em intervalos regulares, como descrito, como em dias alternados, a cada três dias, três vezes por semana ou uma vez por semana durante um período de administração. Em algumas modalidades, o período de administração é de 2 a 28 dias, como 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 ou mais de 21 dias.
[00309] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado nos dias 2, 4, 7, 9, 11, 14, 16 e 18 após o início da admi- nistração da terapia celular (por exemplo, terapia com células T).
[00310] Em algumas modalidades, dosagens, como dosagens diá- rias, são administradas em uma ou mais doses divididas, como 2, 3 ou 4 doses, ou em uma única formulação. O inibidor de gama secretase pode ser administrado sozinho, na presença de um veículo farmaceu- ticamente aceitável ou na presença de outros agentes terapêuticos.
[00311] Alguém versado na técnica reconhecerá que dosagens mais altas ou mais baixas do inibidor de gama secretase podem ser usadas, por exemplo, dependendo do agente específico e da via de administração. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secre- tase pode ser administrado sozinho ou na forma de uma composição farmacêutica em que o composto está em mistura ou mistura com um ou mais veículos, excipientes ou diluentes farmaceuticamente aceitá- veis. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase pode ser administrado sistemicamente ou localmente ao órgão ou tecido a ser tratado. Vias de administração exemplares incluem, mas não estão limitadas a, injeção tópica (como subcutânea, intramuscular, intradér- mica, intraperitoneal, intratumoral e intravenosa), oral, sublingual, retal, transdérmica, intranasal, vaginal e por inalação. Em algumas modali- dades, a via de administração é oral, parentérica, retal, nasal, tópica ou ocular ou por inalação. Em algumas modalidades, o inibidor de ga- ma secretase é administrado por via oral. Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado por via oral em formas de dosagem sólidas, como cápsulas, comprimidos e pós, ou em formas de dosagem líquidas, como elixires, xaropes e suspensões.
[00312] Após a melhora da doença do paciente, a dose pode ser ajustada para tratamento preventivo ou de manutenção. Por exemplo, a dosagem ou a frequência da administração, ou ambas, podem ser reduzidas em função dos sintomas, a um nível em que o efeito tera- pêutico ou profilático desejado é mantido. Se os sintomas foram alivia- dos para um nível apropriado, o tratamento pode cessar. Os pacientes podem, no entanto, exigir tratamento intermitente a longo prazo, após qualquer recorrência dos sintomas. Os pacientes também podem pre- cisar de tratamento crônico a longo prazo.
3. Terapia Adicional
[00313] Em alguns aspectos, os métodos fornecidos podem incluir ainda a administração de uma ou mais terapias que eliminam linfono- dos, como antes ou simultâneo ao início da administração da terapia celular (por exemplo, terapia com células T). Em algumas modalida- des, a terapia que destrói linfonodos compreende a administração de um fosfamida, como a ciclofosfamida. Em algumas modalidades, a te- rapia para linfodepleção pode incluir a administração de fludarabina.
[00314] Em alguns aspectos, o pré-condicionamento de indivíduos com terapias imunodepletadoras (por exemplo, linfodepletadoras) po- de melhorar os efeitos da terapia celular adotiva (ACT). O pré- condicionamento com agentes linfodepletadores, incluindo combina- ções de ciclosporina e fludarabina, tem sido eficaz para melhorar a efi- cácia das células de linfócitos infiltrantes tumoraises transferidos (TIL) na terapia celular, inclusive para melhorar a resposta e/ou persistência das células transferidas. Veja, por exemplo, Dudley et al/., Science, 298, 850-54 (2002); Rosenberg et al., Clin Cancer Res, 17 (13): 4550- 4557 (2011). Da mesma forma, no contexto das células CAR+ T, vá- rios estudos incorporaram agentes linfócitos, mais comumente ciclo- fosfamida, fludarabina, bendamustina ou combinações dos mesmos, às vezes acompanhados de irradiação em baixas doses. Veja Han et al. Journal of Hematology & Oncology, 6:47 (2013); Kochenderfer et al., Blood, 119: 2709-2720 (2012); Kalos et al., Sci Trans! Med, 3 (95): 95ra73 (2011); Registo de Estudo de Teste Clínico Nos. NCTO02315612; NCT01822652.
[00315] Esse pré-condicionamento pode ser realizado com o objeti- vo de reduzir o risco de um ou mais dos vários resultados que podem prejudicar a eficácia da terapia. Isso inclui o fenômeno conhecido co- mo "afundamento de citocinas", pelo qual células T, células B e células NK competem com TlLs para citocinas homeostáticas e ativadoras, como |IL-2, IL-7 e/ou IL-15; supressão de TlLs por células T regulado- ras, células NK ou outras células do sistema imunológico; impacto de reguladores negativos no microambiente tumoral. Muranski et a/., Nat Clin Pract Oncol. Dezembro; 3 (12): 668—681 (2006).
[00316] Assim, em algumas modalidades, o método fornecido en- volve ainda a administração de uma terapia que diminui os linfonodos ao indivíduo. Em algumas modalidades, o método envolve a adminis- tração da terapia de eliminação de linfonodos ao indivíduo antes da administração da dose de células. Em algumas modalidades, a terapia linfodepletadora contém um agente quimioterapêutico, como fludarabi- na e/ou ciclofosfamida. Em algumas modalidades, a administração das células e/ou a terapia de eliminação de linfonodos é realizada via libe- ração ambulatorial.
[00317] Em algumas modalidades, os métodos incluem a adminis- tração de um agente de pré-condicionamento, como um agente quimi- oterápico ou quimioterápico, como ciclofosfamida, fludarabina ou com- binações dos mesmos, a um indivíduo antes da administração da dose de células. Por exemplo, o indivíduo pode ser administrado um agente de pré-condicionamento pelo menos 2 dias antes, como pelo menos 3, 4, 5, 6 ou 7 dias antes, para a primeira dose ou a subsequente. Em algumas modalidades, o indivíduo recebe um agente de pré- condicionamento não mais que 7 dias antes, como não mais que 6, 5, 4, 3 ou 2 dias antes, à administração da dose de células.
[00318] Em algumas modalidades, o indivíduo é pré-condicionado com ciclofosfamida em uma dose entre ou entre cerca de 20 mg/kg e 100 mg/kg da área da superfície corporal do indivíduo, como entre ou entre cerca de 40 mg/kg e 80 mg/kg. Em alguns aspectos, o indivíduo é pré-condicionado com ou com cerca de 60 mg/kg de ciclofosfamida. Em algumas modalidades, a fludarabina pode ser administrada em uma dose única ou em uma pluralidade de doses, como as adminis- tradas diariamente, a cada dois dias ou a cada três dias. Em algumas modalidades, a ciclofosfamida é administrada uma vez ao dia por um ou dois dias. Em algumas modalidades, em que o agente linfodepletor compreende ciclofosfamida, o indivíduo recebe ciclofosfamida a uma dose entre ou entre cerca de 100 mg/m? e 500 mg/m? da superfície corporal área do indivíduo, como entre ou entre cerca de 200 mg/m? e 400 mg/m?, ou 250 mg/m? e 350 mg/m?, inclusive. Em alguns casos, o indivíduo recebe cerca de 300 mg/m? de ciclofosfamida. Em algumas modalidades, a ciclofosfamida pode ser administrada em uma dose única ou em uma pluralidade de doses, como as administradas diaria- mente, a cada dois dias ou a cada três dias. Em algumas modalida- des, a ciclofosfamida é administrada diariamente, como por 1-5 dias, por exemplo, por 2 a 4 dias. Em alguns casos, o indivíduo recebe em torno de 300 mg/m? de área de superfície corporal do indivíduo, de ci- clofosfamida, diariamente por 3 dias, antes do início da terapia celular. Em algumas modalidades, em que o agente linfodepletor compreende fludarabina, o indivíduo recebe fludarabina em uma dose entre ou cer- ca de 1 mg/m? e 100 mg/m? da área de superfície corporal do indiví- duo, como entre ou entre cerca de 10 mg/m? e 75 mg/m?, 15 mg/m? e 50 mg/m?, 20 mg/m? e 30 mg/m?, 20 mg/m? e 40 mg/m?, 24 mg/m? e mg/m?, ou 24 mg/m? e 26 mg/m?, cada um inclusive. Em alguns ca- sos, o indivíduo recebe em torno de 30 mg/m? de fludarabina. Em al- guns casos, o indivíduo recebe 25 mg/m? de fludarabina. Em algumas modalidades, a fludarabina pode ser administrada em uma dose única ou em uma pluralidade de doses, como as administradas diariamente, a cada dois dias ou a cada três dias. Em algumas modalidades, a flu- darabina é administrada diariamente, como por 1-5 dias, por exemplo, por 3 a 5 dias ou por 3-4 dias. Em alguns casos, o indivíduo recebe em torno de 30 mg/m? da superfície corporal do indivíduo, de fludarabina, diariamente por 3 dias, antes do início da terapia celular.
[00319] Em algumas modalidades, o agente linfodepletor compre- ende uma combinação de agentes, como uma combinação de ciclofos-
famida e fludarabina. Assim, a combinação de agentes pode incluir ciclofosfamida em qualquer dose ou esquema de administração, como os descritos acima, e fludarabina em qualquer dose ou esquema de administração, como os descritos acima. Por exemplo, em alguns as- pectos, o indivíduo recebe 60 mg/kg (- 2 g/m?) de ciclofosfamida e 3 a doses de 25 mg/m? de fludarabina antes da dose das células. Em alguns aspectos, o indivíduo recebe fludarabina a ou cerca de 30 mg/m? da superfície corporal do indivíduo, diariamente, e ciclofosfami- da a ou cerca de 300 mg/m? da superfície corporal do indivíduo, diari- amente, por 3 dias.
[00320] Em um regime de dosagem exemplar, antes de receber a primeira dose, os indivíduos recebem um inibidor de gama secretase 1 dia antes da administração das células e uma quimioterapia pré- condicionante de ciclofosfamida e fludarabina (CY/FLU), que é admi- nistrada pelo menos dois dias antes da antes da chegada das células de expressão de CAR e geralmente não mais que 7 dias antes da ad- ministração das células. Em outro regime de dosagem exemplar, os indivíduos recebem o inibidor de gama secretase simultaneamente com a administração de células, como no mesmo dia. Em ainda outro regime de dosagem exemplar, os indivíduos recebem os inibidores da gama secretase vários dias após a administração das células, como 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou mais de 14 dias após. Em alguns casos, por exemplo, a ciclofosfadmida é administrada 24 a 27 dias após a admi- nistração do inibidor da gama secretase. Após o pré-condicionamento do tratamento, é administrada aos indivíduos a dose de células T de expressão de CAR, como descrito acima.
[00321] Em algumas modalidades, a administração do agente de pré-condicionamento antes da infusão da dose de células melhora um resultado do tratamento. Por exemplo, em alguns aspectos, o pré- condicionamento melhora a eficácia do tratamento com a dose ou au-
menta a persistência das células de expressão de receptores recombi- nantes (por exemplo, células de expressão de CAR, como células T de expressão de CAR) no indivíduo. Em algumas modalidades, o pré- condicionamento do tratamento aumenta a sobrevida livre de doença, como a porcentagem de indivíduos que estão vivos e não exibem do- ença mínima residual ou detectável molecularmente após um determi- nado período de tempo após a dose das células. Em algumas modali- dades, o tempo para mediana da sobrevida livre de doença é aumen- tado.
[00322] Uma vez que as células são administradas ao indivíduo (por exemplo, humano), a atividade biológica das populações de célu- las modificadas em alguns aspectos é medida por qualquer um de vá- rios métodos conhecidos. Os parâmetros para avaliar incluem a liga- ção específica de uma célula T modificada ou natural ou outra célula imune ao antígeno, in vivo, por exemplo, por imagem ou ex vivo, por exemplo, por ELISA ou citometria de fluxo. Em certas modalidades, a capacidade das células modificadas para destruir as células alvo pode ser medida usando qualquer método adequado conhecido na técnica, como ensaios de citotoxicidade descritos em, por exemplo, Kochen- derfer et al., J. Imnmunotherapy, 32 (7): 689-702 (2009) e Herman et al. J. Immunological Methods, 285 (1): 25-40 (2004). Em certas modalida- des, a atividade biológica das células também pode ser medida tes- tando a expressão e/ou secreção de certas citocinas, como CD 107a, IFNy, IL-2 e TNF. Em alguns aspectos, a atividade biológica é medida pela avaliação do resultado clínico, como redução na sobrecarga ou carga tumoral. Em alguns aspectos, resultados tóxicos, persistência e/ou expansão das células e/ou presença ou ausência de uma respos- ta imune do hospedeiro são avaliados.
[00323] Em algumas modalidades, a administração do agente de pré-condicionamento antes da infusão da dose de células melhora um resultado do tratamento, como melhorando a eficácia do tratamento com a dose ou aumenta a persistência das células de expressão de receptores recombinantes (por exemplo, células de expressão de CAR, como células T de expressão de CAR) no indivíduo. Portanto, em algumas modalidades, a dose de agente de pré-condicionamento dada no método que é uma terapia de combinação com o inibidor de gama secretase e a terapia celular é maior que a dose dada no méto- do sem o inibidor de gama secretase. Il. TERAPIA CELULAR E MODIFICAÇÃO DE CÉLULAS
[00324] Em algumas modalidades, a terapia celular (por exemplo, terapia com células T) para uso de acordo com os métodos de terapia de combinação fornecidos inclui a administração de células modifica- das que expressam receptores recombinantes modificados para reco- nhecer e/ou se ligar especificamente a moléculas associadas à doença ou condição e resultar em uma resposta, como uma resposta imune contra essas moléculas após a ligação a essas moléculas. Os recepto- res podem incluir receptores quiméricos, por exemplo, receptores de antígeno quiméricos (CARs) e outros receptores de antígeno transgê- nico, incluindo receptores de células T transgênicas (TCRs).
[00325] Em algumas modalidades, as células contêm ou são modi- ficadas para conter um receptor modificado, por exemplo, um receptor de antígeno modificado, como um receptor de antígeno quimérico (CAR) ou um receptor de célula T (TCR). Também são fornecidas po- pulações dessas células, composições que contêm essas células e/ou enriquecidas para essas células, como nas quais células de um de- terminado tipo, como células T ou CD8+ ou CD4+, são enriquecidas ou selecionadas. Entre as composições estão composições e formula- ções farmacêuticas para administração, como para terapia celular ado- tiva. Também são fornecidos métodos terapêuticos para administrar as células e composições a indivíduos, por exemplo, pacientes.
[00326] Assim, em algumas modalidades, as células incluem um ou mais ácidos nucléicos introduzidos por engenharia genética e, assim, expressam produtos recombinantes ou geneticamente modificados por esses ácidos nucleicos. Em algumas modalidades, a transferência de genes é realizada estimulando primeiro as células, como combinando- as com um estímulo que induz uma resposta como proliferação, so- brevivência e/ou ativação, por exemplo, medida pela expressão de uma citocina ou marcador de ativação, seguida pela transdução das células ativadas e expansão na cultura eficiente para aplicações clíni- cas. A. RECEPTORES RECOMBINANTES
[00327] As células geralmente expressam receptores recombinan- tes, como receptores de antígenos, incluindo receptores funcionais de antígenos de não-TCR, por exemplo, receptores de antígenos quiméri- cos (CARs) e outros receptores de ligação aos antígenos, como recep- tores de células T transgênicas (TCRs). Da mesma forma os recepto- res são outros receptores quiméricos.
[00328] Em algumas modalidades dos métodos e usos fornecidos, os receptores recombinantes, incluindo receptores quiméricos, como receptores de antígeno quiméricos, contêm um ou mais domínios que combinam um domínio de ligação ao ligante (por exemplo, anticorpo ou fragmento de anticorpo) que fornece especificidade para um antí- geno desejado (por exemplo, antígeno tumoral) com domínios de sina- lização intracelular. Em algumas modalidades, o domínio de sinaliza- ção intracelular é uma porção de domínio intracelular de ativação, co- mo um domínio de ativação de células T, fornecendo um sinal de ati- vação primário. Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intracelular contém ou adicionalmente contém um domínio de sinaliza- ção coestimulador para facilitar as funções efetoras. Em algumas mo- dalidades, os receptores quiméricos, quando geneticamente modifica-
dos em células imunes, podem modular a atividade das células T e, em alguns casos, podem modular a diferenciação ou homeostase das células T, resultando em células geneticamente modificadas com me- lhor longevidade, sobrevivência e/ou persistência in vivo, tal como para uso em métodos de terapia celular adotiva.
1. Receptores de Antígeno Quiméricos (CARs)
[00329] Em algumas modalidades, são fornecidas células modifica- das, como células T, que expressam um CAR com especificidade para um antígeno particular (ou marcador ou ligante ou receptor), como um antígeno expresso na superfície de um tipo de célula específico.
[00330] Em modalidades particulares, o receptor recombinante, como um receptor quimérico, contém uma região de sinalização intra- celular, que inclui um domínio de sinalização citoplasmático (também chamado de domínio de sinalização intracelular), como uma região citoplasmática (intracelular) capaz de induzir um sinal de ativação pri- mário em uma célula T, por exemplo, um domínio de sinalização cito- plasmático de um componente do receptor de célula T (TOR) (por exemplo, um domínio de sinalização citoplasmático de uma cadeia ze- ta de uma cadeia de CD3-zeta (CD36) ou uma variante funcional ou porção de sinalização) e/ou que compreende um motivo de ativação baseado em tirosina imunorreceptora (ITAM).
[00331] Em algumas modalidades, o receptor quimérico contém ainda um domínio de ligação ao ligante extracelular que se liga especi- ficamente a um antígeno do ligante (por exemplo, antígeno). Em algu- mas modalidades, o receptor quimérico é um CAR que contém um domínio de reconhecimento de antígeno extracelular que se liga espe- cificamente a um antígeno. Em algumas modalidades, o ligante, como um antígeno, é uma proteína expressa na superfície das células. Os receptores quiméricos, como CARs, geralmente incluem um domínio de ligação ao antígeno extracelular, como uma porção de uma molécu-
la de anticorpo, geralmente uma região variável de cadeia pesada (Vr) e/ou região variável de cadeia leve (V.) do anticorpo, por exemplo, um fragmento de anticorpo scFv. Em algumas modalidades, o CAR é um CAR do tipo TCR e o antígeno é um antígeno peptídico processado, como um antígeno peptídico de uma proteína intracelular, que, como um TCR, é reconhecida na superfície celular no contexto de uma mo- lécula do complexo principal de histocompatibilidade (MHC).
[00332] Exemplos de receptores de antígeno, incluindo CARs, e métodos para modificação e introdução de tais receptores nas células, incluem aqueles descritos, por exemplo, nos números de publicação de pedido de patente internacional WO200014257, WO2013126726, WO2012/129514, WO2014031687, WO2013/166321, WO2013/071154, WO2013/123061, WO?2016/0046724, WO?2016/014789, WO?2016/090320, WO2016/094304, WO?2017/025038, WO2017/173256, números de publicação do pedido de patente U.S. US2002131960, US2013287748, US20130149337, Patentes U.S. Nos. 8.398.282, 7.446.179, 6.410.319, 7.070.995,
7.265.209, 7.354.762, 7.446.191, 8.324.353, 8.479.118 e 9.765.342, e número de pedido de patente Europeia EP2537416, e/ou descritos por Sadelain et al., Cancer Discov., 3 (4): 388. 398 (2013); Davila et al., PLoS ONE 8 (4): e61338 (2013); Turtle et al., Curr. Opin. Immunol., 24 (5): 633-39 (2012); Wu et al., Cancer, 18 (2): 160-75 (2012). Em al- guns aspectos, os receptores de antígeno incluem um CAR como des- crito na Patente US No. 7.446.190 e aqueles descritos na Publicação de Pedido de Patente Internacional No. WO/2014055668 A1. Exem- plos dos CARs incluem os CARs, como descrito em qualquer uma das publicações mencionadas, como WO2014031687, US 8.339.645, US
7.446.179, US 2013/0149337, Patente US No. 7.446.190, Patente US
8.389.282, Kochenderfer et al., Nature Reviews Clinical Oncology, 10, 267-276 (2013); Wang et al., J. Inmunother. 35 (9): 689-701 (2012); e
Brentjens et al, Sci Transl Med. 5 (177) (2013). Veja também WO2014031687, US 8.339.645, US 7.446.179, US 2013/0149337, Pa- tente U.S. No. 7.446.190, Patente US No. 8.389.282 WO 2016/090320, WO2016090327, WO2010104949A2 e WO2017173256.
[00333] Em algumas modalidades, o CAR é construído com uma especificidade para um antígeno particular (ou marcador ou ligante ou receptor), como um antígeno expresso em um tipo de célula específico a ser alvo de terapia adotiva, por exemplo, um marcador de câncer e/ou um antígeno destinado a induzir uma resposta de amortecimento, como um antígeno expresso em um tipo de célula normal ou não do- ente. Assim, o CAR inclui tipicamente em sua porção extracelular uma ou mais moléculas de ligação ao antígeno, como um ou mais fragmen- to, domínio ou porção de ligação ao antígeno, ou um ou mais domínios variáveis de anticorpo e/ou moléculas de anticorpo. Em algumas mo- dalidades, o CAR inclui uma porção ou porções de ligação ao antígeno de uma molécula de anticorpo, como um fragmento de anticorpo de cadeia única (scFv) derivado das cadeias variável pesada (Vn) e variá- vel leve (V.1) de um anticorpo monoclonal (mAb).
[00334] Em algumas modalidades, o anticorpo ou sua porção de ligação ao antígeno é expresso nas células como parte de um receptor recombinante, como um receptor de antígeno. Entre os receptores de antígeno estão receptores funcionais de antígeno de não-TCR, como receptores de antígeno quiméricos (CARs). Geralmente, um CAR con- tendo um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno que exibe especificidade do tipo TOR direcionada contra complexos de peptídeo- MHC também pode ser referido como um CAR do tipo TOR. Em algu- mas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno extracelular espe- cífico para um complexo de MHC-peptídeo de um CAR do tipo TOR está ligado a um ou mais componentes de sinalização intracelular, em alguns aspectos via ligantes e/ou domínio (s) transmembranar (s). Em algumas modalidades, essas moléculas podem tipicamente imitar ou aproximar um sinal através de um receptor de antígeno natural, como um TCR, e, opcionalmente, um sinal através desse receptor em com- binação com um receptor coestimulador.
[00335] Em algumas modalidades, o receptor recombinante, como um receptor quimérico (por exemplo, CAR), inclui um domínio de liga- ção ao ligante que se liga, como especificamente se liga, a um antíge- no (ou um ligante ou receptor). Entre os antígenos direcionados pelos receptores quiméricos estão os expressos no contexto de uma doen- ça, condição ou tipo de célula a ser direcionada através da terapia ce- lular adotiva. Entre as doenças e condições estão doenças e distúrbios proliferativos, neoplásicos e malignos, incluindo cânceres e tumores, incluindo cânceres hematológicos, cânceres do sistema imunológico, como linfomas, leucemias e/ou mielomas, como B, T e leucemias mi- eloides, linfomas e mielomas múltiplos.
[00336] Em algumas modalidades, o antígeno direcionado pelo re- ceptor é um polipeptídeo. Em algumas modalidades, é um carboidrato ou outra molécula. Em algumas modalidades, o antígeno é seletiva- mente expresso ou superexpresso nas células da doença ou condição, por exemplo, o tumor ou células patogênicas, em comparação com células ou tecidos normais ou não direcionados. Em outras modalida- des, o antígeno é expresso em células normais e/ou é expresso nas células modificadas.
[00337] Em algumas modalidades, o CAR contém um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno (por exemplo, scFv) que reco- nhece especificamente um antígeno, como um antígeno intacto, ex- presso na superfície de uma célula.
[00338] Em algumas modalidades, o antígeno (ou um ligante ou re- ceptor) é um antígeno tumoral ou marcador de câncer. Em certas mo- dalidades, o antígeno ou inclui a integrina avB6 (integrina avb6), antí-
geno de maturação de células B (BCMA), B7-H3, B7-H6, anidrase car- bônica 9 (CA9, também conhecida como CAIX ou G250), um antígeno de câncer-testículo, antígeno câncer/testículo 1B (CTAG, também co- nhecido como NY-ESO-1 e LAGE-2), antígeno carcinoembrionário (CEA), uma ciclina, ciclina A2, Ligante 1 de Quimiocina de Motivo C-C (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, proteogli- cano 4 de sulfato de condroitina (CSPGA4), proteína do fator de cresci- mento epidérmico (EGFR), mutação do receptor do fator de cresci- mento epidérmico do tipo Ill (EGFR vlll), glicoproteína epitelial 2 (EPG- 2), glicoproteína epitelial 40 (EPG-40), efrinaB2, receptor de efrina A2 (EPHa2), receptor de estrogênio, receptor de Fc similar a 5 (FCRL5; também conhecido como homólogo de receptor de Fc 5 ou FCRH5), receptor de acetilcolina fetal (AChR fetal), uma proteína de ligação ao folato (FBP), receptor alfa de folato, gangliosídeo GD2, GD2 O- acetilado (OGD2), gangliosídeo GD3, glicoproteína 100 (gp1 00), glipi- cano-3 (GPC3), Receptor Acoplado à Proteína G 5D (GPCR5D), Her2/neu (erb-B2 de tirosina cinase receptora), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), dímeros de erbB, antígeno associado ao melanoma de alto peso molecular humano (HMW-MAA), antígeno de superfície da hepa- tite B, antígeno leucocitário humano A1 (HLA-A1), antígeno leucocitá- rio humano A2 (HLA-A2), receptor alfa de I1L-22 (IL-22Ra), receptor alfa 2 de IL -13 (IL-13Ra2), receptor de domínio de inserção de cinase (kdr), cadeia leve capa, molécula de adesão de células L1 (L1-CAM), epítopo CE7 de LI-CAM, Repetição Rica em Leucina Contendo 8 Membros da Família A (LRRC8A), Lewis Y, antígeno associado ao Melanoma (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, MAGE-A10, mesotelina (MSLN), c-Met, citomegalovírus de murino (CMV), mucina 1 (MUC1), MUC16, ligantes do membro D do grupo exterminador natural 2 (NKG2D), melano A (MART-1), molécula de adesão de células neurais
(NCAM), antígeno oncofetal, antígeno de melanoma preferencialmente expresso (PRAME), receptor de progesterona, antígeno específico da próstata, antígeno de células tronco da próstata (PSCA), antígeno de membrana específico da próstata (PSMA), Tirosina Cinase Receptora como Receptor Órfão 1 (ROR1), survivina, glicoproteína trofoblástica (TPBG) também conhecida como 574), glicoproteína 72 associada ao tumor (TAG72), proteína 1 relacionada à tirosinase (TRP1, também conhecida como TYRP1 ou gp75), proteína 2 relacionada à tirosinase (TRP2, também conhecida como dopacromo tautomerase, dopacromo delta-isomerase ou DCT), receptor do fator de crescimento endotelial vascular (VEGFR), receptor do fator de crescimento endotelial vascu- lar 2 (VEGFR2), Tumor 1 de Wilms (WT-1), um antígeno específico de patógeno ou expresso por patógeno ou um antígeno associado a um marcador universal e/ou moléculas biotiniladas e/ou moléculas expres- sas por HIV, HCV, HBV ou outros patógenos. Os antígenos direciona- dos pelos receptores em algumas modalidades incluem antígenos as- sociados a uma malignidade de células B, como qualquer um de vários marcadores conhecidos de células B. Em algumas modalidades, o an- tígeno é ou inclui BCMA, CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Igcapa, Iglambda, CD79a, CD79b ou CD30.
[00339] Em algumas modalidades, o antígeno (ou um ligante) é ou inclui o receptor órfão de tirosina cinase ROR1, antígeno de maturação de células B (BCMA), anidrase carbônica 9 (CAIX), Her2/neu (erbB2 de tirosina cinase receptora), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, mesoteli- na, CEA e antígeno de superfície da hepatite B, receptor antifolato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, glicoproteína epitelial 2 (EPG-2), glicoproteína epitelial 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, dímeros de erbB, EGFR vill, proteína de ligação ao folato (FBP), FCRL5, FCRH5, receptor fetal de acetilcolina, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alfa, IL-13R-alfa2, receptor de domínio de inserção de cinase (Kdr), cadeia leve capa, Lewis Y, molécula de adesão de cé- lulas L1, (LI-CAM), antígeno associado ao melanoma (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE- A6, antígeno de melanoma preferencialmente ex- presso (PRAME), survivina, TAG72, B7-H6, receptor alfa 2 de I1L-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, receptor-a de folato, CD44v6, CD44v7/8, integrina de avb6, 8H9, NCAM, receptores de VEGF, 574, AchR fetal, ligantes de NKG2D, CD44v6, antígeno dual, antígeno cân- cer-testículo, mesotelina, CMV de murino, mucina 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, antígeno oncofetal, ROR1, TAG72, VEGF-R2, antígeno carcinoembrionário (CEA), Her2/neu, receptor de estrogênio, receptor de progesterona, efrinaB2, CD123, c-Met, GD-2, GD2 O-acetilado (OGD2), CE7, Tumor 1 de Wilms (WT-1), uma ciclina, ciclina A2, CCL-1, CD138, um antígeno específico de patógeno e um antígeno associado a um marcador uni- versal e/ou moléculas biotiniladas e/ou moléculas expressas pelo HIV, HCV, HBV ou outros patógenos. Os antígenos direcionados pelos re- ceptores em algumas modalidades incluem antígenos associados a uma malignidade de células B, como qualquer um de vários marcado- res conhecidos de células B. Em algumas modalidades, o antígeno direcionado pelo receptor é CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Igcapa, Iglambda, CD79a, CD79b ou CD30.
[00340] Os antígenos direcionados pelos receptores em algumas modalidades incluem o receptor de tirosina cinase órfão ROR1, Her2, L1-CAM, CD19, CD20, CD22, mesotelina, CEA e antígeno de superfí- cie da hepatite B, receptor antifolato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, EPHa2, ErbB2, 3 ou 4, FBP, re- ceptor e aceticolina fetal, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alfa, IL-13R- alfa2, kdr, cadeia leve capa, Lewis Y, molécula de adesão de células L1, MAGE-A1, mesotelina, MUC1, MUC16, PSCA, NKG2D Ligantes,
NY-ESO-1, MART-1, gp100, antígeno oncofetal, ROR1, TAG72, VEGF-R2, antígeno carcinoembrionário (CEA), antígeno de próstata específico, PSMA, Her2/neu, receptor de estrogênio, receptor de pro- gesterona, efrinaB2, CD123, c-Met, GD-2 e MAGE A3, CE7, tumor de Wilms 1 (WT-1), uma ciclina, como a ciclina A1 (CCNA1) e/ou molécu- las biotiniladas, e/ou moléculas expressas por HIV, HCV, HBV ou ou- tros patógenos.
[00341] Em algumas modalidades, o CAR se liga a um antígeno específico de patógenos ou expresso por patogenos. Em algumas mo- dalidades, o CAR é específico para antígenos virais (como HIV, HCV, HBV, etc.), antígenos bacterianos e/ou antígenos parasitários.
[00342] Em algumas modalidades, o CAR contém um anticorpo si- milar ao TOR, como um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antí- geno (por exemplo, scFv) que reconhece especificamente um antígeno intracelular, como um antígeno associado ao tumor, apresentado na superfície celular como um complexo de MHC-peptídeo. Em algumas modalidades, um anticorpo ou sua porção de ligação ao antígeno que reconhece um complexo de MHC-peptídeo pode ser expresso nas cé- lulas como parte de um receptor recombinante, como um receptor de antígeno. Entre os receptores de antígeno estão receptores funcionais de antígeno de não-TCR, como receptores de antígeno quiméricos (CARs). Geralmente, um CAR contendo um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno que exibe especificidade do tipo TOR direcionada contra complexos de peptídeo-MHC também pode ser referido como um CAR do tipo TCR.
[00343] A referência a "Complexo Principal de Histocompatibilida- de" (MHC) refere-se a uma proteína, geralmente uma glicoproteína, que contém um sítio de ligação de peptídeo polimórfico ou sulco de ligação que pode, em alguns casos, complexar-se com antígenos pep- tídicos de polipeptídeos, incluindo antígenos peptídicos processados pela maquinaria celular. Em alguns casos, as moléculas de MHC po- dem ser exibidas ou expressas na superfície celular, inclusive como um complexo com peptídeo, isto é, complexo de MHC-peptídeo, para apresentação de um antígeno em uma conformação reconhecível por um receptor de antígeno em células T, como TCRs ou anticorpo simi- lar ao TCR. Geralmente, as moléculas de MHC classe | são heterodí- meros que possui uma membrana que mede a cadeia a, em alguns casos com três domínios a e uma microglobulina B2 não covalente- mente associada. Geralmente, as moléculas de MHC de classe || são compostas por duas glicoproteínas transmembranares, a e BB, ambas tipicamente abrangendo a membrana. Uma molécula de MHC pode incluir uma porção eficaz de um MHC que contém um sítio ou sítios de ligação ao antígeno para a ligação de um peptídeo e as sequências necessárias para o reconhecimento pelo receptor de antígeno apropri- ado. Em algumas modalidades, as moléculas de MHC de classe | libe- ram peptídeos originários do citosol à superfície celular, onde um complexo de MHC-peptídeo é reconhecido pelas células T, como ge- ralmente células T CD8*, mas em alguns casos células T CD4*. Em algumas modalidades, as moléculas do MHC de classe Il liberam pep- tídeos originários do sistema vesicular à superfície celular, onde são tipicamente reconhecidos pelas células T CD4+. Geralmente, as molé- culas de MHC são codificadas por um grupo de loci ligados, que são coletivamente denominados H-2 no camundongo e antígeno leucocitá- rio humano (HLA) em humanos. Assim, o MHC tipicamente humano também pode ser referido como antígeno leucocitário humano (HLA).
[00344] O termo "complexo de MHC-peptídeo" ou "complexo de peptídeo-MHC" ou variações do mesmo, refere-se a um complexo ou associação de um antígeno peptídico e uma molécula de MHC, como, geralmente, por interações não covalentes do peptídeo na ligação sul- co ou fenda da molécula do MHC. Em algumas modalidades, o com-
plexo de MHC-peptídeo está presente ou exibido na superfície das cé- lulas. Em algumas modalidades, o complexo de MHC-peptídeo pode ser especificamente reconhecido por um receptor de antígeno, como um TCR, CAR tipo TCR ou porções de ligação ao antígeno do mesmo.
[00345] Em algumas modalidades, um peptídeo, como um antígeno ou epítopo peptídico, de um polipeptídeo pode se associar a uma mo- lécula de MHC, como para o reconhecimento por um receptor de antí- geno. Geralmente, o peptídeo é derivado de ou com base em um fra- gmento de uma molécula biológica mais longa, como um polipeptídeo ou proteína. Em algumas modalidades, o peptídeo normalmente tem cerca de 8 a cerca de 24 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, um peptídeo tem um comprimento de 9 a 22 aminoáci- dos para reconhecimento no complexo de MHC Classe Il. Em algumas modalidades, um peptídeo tem um comprimento de 8 a 13 aminoáci- dos para reconhecimento no complexo de MHC Classe |. Em algumas modalidades, após o reconhecimento do peptídeo no contexto de uma molécula de MHC, como o complexo de MHC-peptídeo, o receptor de antígeno, como TCR ou CAR tipo TCR, produz ou dispara um sinal de ativação para a célula T que induz uma resposta de células T, como proliferação de células T, produção de citocinas, resposta de células T citotóxicas ou outra resposta.
[00346] Em algumas modalidades, um anticorpo similar ao TOR ou uma porção de ligação ao antígeno é conhecido ou pode ser produzido por métodos conhecidos na técnica (veja, por exemplo, os pedidos pu- blicados nos EUA US 2002/0150914; US 2003/0223994; US 2004/0191260; US 2006/0034850; us 2007/00992530; US20090226474; US20090304679; e Publicação Internacional PCT Nº WO 03/068201).
[00347] Em algumas modalidades, um anticorpo ou sua porção de ligação ao antígeno que se liga especificamente a um complexo de
MHC-peptídeo, pode ser produzido imunizando um hospedeiro com uma quantidade eficaz de um imunogênio contendo um complexo es- pecífico de MHC-peptídeo. Em alguns casos, o peptídeo do complexo de MHC-peptídeo é um epítopo do antígeno capaz de se ligar ao MHC, como um antígeno tumoral, por exemplo, um antígeno universal do tumor, antígeno do mieloma ou outro antígeno. Em algumas moda- lidades, uma quantidade eficaz do imunogênio é então administrada a um hospedeiro para obter uma resposta imune, em que o imunogênio retém uma forma tridimensional do mesmo por um período de tempo suficiente para provocar uma resposta imune contra a apresentação tridimensional do peptídeo no sulco de ligação da molécula de MHC. O soro coletado do hospedeiro é então analisado para determinar se an- ticorpos desejados que reconhecem uma apresentação tridimensional do peptídeo no sulco de ligação da molécula de MHC estão sendo produzidos. Em algumas modalidades, os anticorpos produzidos po- dem ser avaliados para confirmar que o anticorpo pode diferenciar o complexo de MHC-peptídeo da molécula de MHC sozinha, apenas o peptídeo de interesse e um complexo de MHC e peptídeo irrelevante. Os anticorpos desejados podem então ser isolados.
[00348] Em algumas modalidades, um anticorpo ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a um com- plexo de MHC-peptídeo pode ser produzido empregando métodos de exibição de biblioteca de anticorpos, como bibliotecas de anticorpo de fago. Em algumas modalidades, as bibliotecas de exibição de fagos de Fab, scFv ou outras formas de anticorpo mutantes podem ser geradas, por exemplo, nas quais membros da biblioteca são mutados em um ou mais resíduos de uma CDR ou CDRs. Veja por exemplo, pedido publi- cado US No. US20020150914, US2014/0294841; e Cohen CJ. et al. (2003) J. Mol. Recogn 16: 324-332.
[00349] O termo "anticorpo" no presente documento é usado no sentido mais amplo e inclui anticorpos policlonais e monoclonais, inclu- indo anticorpos intactos e fragmentos de anticorpos funcionais (ligação ao antígeno), incluindo fragmentos de ligação ao antígeno (Fab), frag- mentos F(ab')2, fragmentos Fab', fragmentos Fv, fragmentos de IgG recombinante (rlgG), regiões variáveis de cadeia pesada (Vx) capazes de se ligar especificamente ao antígeno, fragmentos de anticorpos de cadeia única, incluindo fragmentos variáveis de cadeia única (scFv) e fragmentos de anticorpos de domínio único (por exemplo, sdAb, sdFv, nanocorpo). O termo abrange formas de imunoglobulinas genetica- mente modificadas e/ou modificadas de outra forma, tais como intra- corpos, pepticorpos, anticorpos quiméricos, anticorpos totalmente hu- manos, anticorpos humanizados e anticorpos heteroconjugados, multi- específicos, por exemplo, biespecíficos, anticorpos, diacorpos, triacor- pos e tetracorpos, di-scFv em tandem, tri-scFvy em tandem. Salvo indi- cação em contrário, o termo "anticorpo" deve ser entendido como abrangendo seus fragmentos funcionais de anticorpos. O termo tam- bém abrange anticorpos intactos ou completos, incluindo anticorpos de qualquer classe ou subclasse, incluindo IgG e suas subclasses, IgM, IgE, IgA e IgD.
[00350] Em certas modalidades, moléculas de ligação multiespeciífi- cas, por exemplo, receptores quiméricos multiespecíficos, como CARs multiespecíficos, podem conter qualquer um dos anticorpos multiespe- cíficos, incluindo, por exemplo, anticorpos biespecíficos, anticorpos multiespecíficos de cadeia única, por exemplo, diacorpos, triacorpos e tetracorpos, di-scFvs em tandem e tri-scFvs em tandem.
[00351] Em algumas modalidades, as proteínas de ligação ao antí- geno, anticorpos e seus fragmentos de ligação ao antígeno reconhe- cem especificamente um antígeno de um anticorpo de tamanho natu- ral. Em algumas modalidades, as cadeias pesada e leve de um anti- corpo podem ser de tamanho natural ou podem ser uma porção de ligação ao antígeno (um Fab, F(ab')2s, Fv ou um fragmento Fv de ca- deia única (scFv)). Em outras modalidades, a região constante da ca- deia pesada do anticorpo é escolhida entre, por exemplo, I9G1, IgG2, I19G3, I9G4, IgM, IgA1, IgA2, I1gD e IgE, particularmente escolhida den- tre, por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4, mais particularmente, I9G1 (por exemplo, I9G1 humana). Em outra modalidade, a região constan- te da cadeia leve do anticorpo é escolhida entre, por exemplo, capa ou lambda, particularmente capa.
[00352] Entre os anticorpos fornecidos estão fragmentos de anti- corpos. Um "fragmento de anticorpo" ou "fragmento de ligação ao an- tígeno" refere-se a uma molécula que não seja um anticorpo intacto que compreende uma porção de um anticorpo intacto que liga o antí- geno ao qual o anticorpo intacto se liga. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem, mas não estão limitados a, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; diacorpos; anticorpos lineares; regiões de cadeia pesada vari- ável (VH), moléculas de anticorpo de cadeia única, tais como scFvs e anticorpos únicos de Vx de domínio único; e anticorpos multiespeciífi- cos formados a partir de fragmentos de anticorpo. Em algumas moda- lidades, o domínio de ligação ao antígeno nos CARs fornecidos é ou compreende um fragmento de anticorpo que compreende uma região variável da cadeia pesada (Vnr) e uma variável da cadeia leve (V.). Em modalidades particulares, os anticorpos são fragmentos de anticorpo de cadeia única que compreende uma região variável da cadeia pesa- da e/ou uma região variável da cadeia leve, como scFvs.
[00353] O termo "região variável" ou "domínio variável" refere-se ao domínio de um anticorpo de cadeia pesada ou leve que está envolvido na ligação do anticorpo ao antígeno. Os domínios variáveis da cadeia pesada e da cadeia leve (Vr e V., respectivamente) de um anticorpo nativo geralmente têm estruturas similares, com cada domínio que compreende quatro regiões de estrutura conservadas (FRs) e três
CDRs. (Veja, por exemplo, Kindt et al. Kuby Immunology, 6º ed., WH Freeman e Co., página 91 (2007). Um único domínio Vx ou V. pode ser suficiente para conferir especificidade de ligação ao antígeno. Além disso, anticorpos que ligam um um antígeno particular pode ser isolado usando um domínio Vx ou V. de um anticorpo que liga o antí- geno para avaliar uma biblioteca de domínios complementares V. ou Vn, respectivamente. Veja, por exemplo, Portolano et al., J. Immunol. 150: 880-887 (1993); Clarkson et a/., Nature 352: 624-628 (1991).
[00354] Os termos "região determinante de complementaridade" e "CDR", sinônimo de "região hipervariável" ou "HVR", são conhecidos na técnica por se referirem a sequências não contíguas de aminoáci- dos nas regiões variáveis de anticorpos, que conferem especificidade ao antígeno e/ou afinidade de ligação. Em geral, existem três CDRs em cada região variável da cadeia pesada (CDR-H1, CDR-H2, CDR- H3) e três CDRs em cada região variável da cadeia leve (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3). "Regiões de estrutura" e "FR" são conhecidas na técnica por se referirem às porções de não CDR das regiões variáveis das cadeias pesada e leve. Em geral, existem quatro FRs em cada região variável de cadeia pesada de tamanho natural (FR-H1, FR-H2, FR-H3 e FR-H4) e quatro FRs em cada região variável de cadeia leve de tamanho natural (FR-L1, FR-L2, FR-L3 e FR-L4).
[00355] Os limites precisos da sequência de aminoácidos de uma determinada CDR ou FR podem ser facilmente determinados usando qualquer um de vários esquemas bem conhecidos, incluindo os descri- tos por Kabat et a/. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 5º ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (esquema de numeração de “Kabat”); Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948 (esquema de numeração de "Chothia"); Ma- cCallum et al., J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996), “Antibody-antigen in- teractions: Contact analysis and binding site topography, J. Mol. Biol.
262, 732-745. (Esquema de numeração de “Contact”); Lefranc MP et al., “MGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains,”, Dev Comp Im- munol, Jan. de 2003; 27 (1): 55-77 (esquema de numeração de "IMGT"); Honegger A e Pluckthun A, “Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and anal- ysis tool”, J Mol Biol, 8 de junho de 2001; 309 (3): 657-70 (esquema de numeração de “Aho”); e Martin et al., “Modeling antibody hypervariable loops: a combined algorithm", PNAS, 1989, 86 (23): 9268-9272 (es- quema de numeração de "AbM").
[00356] Os limites de um determinado CDR ou FR podem variar dependendo do esquema usado para identificação. Por exemplo, o esquema de Kabat é baseado em alinhamentos estruturais, enquanto o esquema de Chothia é baseado em informações estruturais. A nu- meração para os esquemas de Kabat e Chothia baseia-se nos com- primentos de sequência da região de anticorpo mais comuns, com in- serções acomodadas por letras de inserção, por exemplo, "30a" e ex- clusões em alguns anticorpos. Os dois esquemas colocam determina- das inserções e exclusões ("indels") em posições diferentes, resultan- do em numeração diferencial. O esquema de contato é baseado na análise de estruturas cristalinas complexas e é similar em muitos as- pectos ao esquema de numeração de Chothia. O esquema de ADM é um compromisso entre as definições de Kabat e Chothia, com base no usado pelo software de modelagem de anticorpos ADM da Oxford Mo- lecular.
[00357] A Tabela1, abaixo, lista limites de posição exemplares dos CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3 e CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, como identi- ficados pelos esquemas de Kabat, Chothia, ADM e Contact, respecti- vamente. Para CDR-H1, a numeração de resíduos é listada usando os esquemas de numeração de Kabat e Chothia. FRs estão localizadas entre CDRs, por exemplo, com FR-L1 localizado antes de CDR-L1, FR-L2 localizado entre CDR-L1 e CDR-L2, FR-L3 localizado entre CDR-L2 e CDR-L3 e assim por diante. Note-se que, como o esquema de numeração de Kabat mostrado coloca inserções em H35A e H35B, o final da alça de CDR-H1 de Chothia quando numerado usando a convenção de numeração de Kabat mostrada varia entre H32 e H34, dependendo do comprimento da alça. CDR-H1 CDR-H1 1 - Kabat et a/. (1991), “Sequences of Proteins of Immunological Inter- est,” 5a. Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Be- thesda, MD 2 - Al-Lazikani et a/., (1997) JMB 273,927-948
[00358] Assim, a menos que especificado de outra forma, uma "CDR" ou "região determinante complementar" ou CDRs especificadas individuais (por exemplo, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3) de um determi- nado anticorpo ou região do mesmo, como uma região variável deve ser entendido como abrangendo uma (ou a específica) região determi- nante complementar, como definido por qualguer um dos esquemas mencionados acima, ou outros esquemas conhecidos. Por exemplo, onde se afirma que uma CDR específica (por exemplo, uma CDR-H3) contém a sequência de aminoácidos de uma CDR correspondente em uma determinada sequência de aminoácidos de região Vx ou V., en- tende-se que essa CDR tem uma sequência da CDR correspondente (por exemplo, CDR-H3) dentro da região variável, como definido por qualquer um dos esquemas mencionados acima, ou outros esquemas conhecidos. Em algumas modalidades, sequências de CDR especiífi- cas são especificadas. Sequências de CDR exemplares de anticorpos fornecidos são descritas usando vários esquemas de numeração, em- bora seja entendido que um anticorpo fornecido pode incluir CDRs como descrito de acordo com qualquer um dos outros esquemas de numeração acima mencionados ou outros esquemas de numeração conhecidos por um técnico versado.
[00359] Da mesma forma, a menos que seja especificado de outra forma, uma FR ou FR (s) especificada (s) (por exemplo, FR-H1, FR- H2, FR-H3, FR-H4) de um determinado anticorpo ou região do mesmo, como uma região variável do mesmo, deve ser entendido como abran- gendo uma região da estrutura (ou a específica), como definido por qualquer um dos esquemas conhecidos. Em alguns casos, o esquema para identificação de uma CDR, FR ou FR ou CDR específica é espe- cificado, como a CDR, como definido pelo método de Kabat, Chothia, AbM ou Contact, ou outros esquemas conhecidos. Em outros casos, é dada a sequência de aminoácidos específica de uma CDR ou FR.
[00360] Anticorpos de domínio único (sdAbs) são fragmentos de anticorpo que compreendem a totalidade ou uma porção do domínio variável da cadeia pesada ou a totalidade ou uma porção do domínio variável da cadeia leve de um anticorpo. Em certas modalidades, um anticorpo de domínio único é um anticorpo de domínio único humano. Em algumas modalidades, o CAR compreende um domínio de cadeia pesada de anticorpo que liga especificamente o antígeno, como um marcador de câncer ou antígeno da superfície celular de uma célula ou doença a ser direcionada, como uma célula tumoral ou uma célula cancerígena, como qualquer um dos antígenos alvo no presente do- cumento descritos ou conhecidos na técnica.
[00361] Os fragmentos de anticorpos podem ser produzidos por vá-
rias técnicas, incluindo, entre outros, a digestão proteolítica de um an- ticorpo intacto, bem como a produção por células hospedeiras recom- binantes. Em algumas modalidades, os anticorpos são fragmentos produzidos de forma recombinante, como fragmentos que compreende arranjos que não ocorrem naturalmente, como aqueles com duas ou mais regiões ou cadeias de anticorpos unidas por ligantes sintéticos, por exemplo, ligantes peptídicos e/ou que podem não ser produzidos pela digestão enzimática de um anticorpo intacto de ocorrência natu- ral. Em algumas modalidades, os fragmentos de anticorpo são scFvs.
[00362] Um anticorpo "humanizado" é um anticorpo no qual todos ou substancialmente todos os resíduos de aminoácidos de CDR são derivados de CDR não humanas e todos ou substancialmente todos os resíduos de aminoácidos de FR são derivados de FRs humanas. Um anticorpo humanizado pode opcionalmente incluir pelo menos uma porção de uma região constante de anticorpo derivada de um anticor- po humano. Uma "forma humanizada" de um anticorpo não humano, refere-se a uma variante do anticorpo não humano que foi submetido à humanização, tipicamente para reduzir a imunogenicidade para seres humanos, mantendo a especificidade e afinidade do anticorpo não humano parental. Em algumas modalidades, alguns resíduos de FR em um anticorpo humanizado são substituídos por resíduos corres- pondentes de um anticorpo não humano (por exemplo, o anticorpo do qual os resíduos de CDR são derivados), por exemplo, para restaurar ou melhorar a especificidade ou afinidade do anticorpo.
[00363] Assim, em algumas modalidades, o receptor de antígeno quimérico, incluindo CARs do tipo TCR, inclui uma porção extracelular contendo um anticorpo ou fragmento de anticorpo. Em algumas moda- lidades, o anticorpo ou fragmento inclui um scFv. Em algumas modali- dades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno é um fra- gmento de anticorpo de cadeia única, como um fragmento variável de cadeia única (scFv) ou um diacorpo ou um anticorpo de domínio único (sdAb). Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo de domínio único que compreende apenas a região Vi. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um scFv que compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) e uma região variável da cadeia leve (V.).
[00364] Em algumas modalidades, o anticorpo é um fragmento de ligação ao antígeno, como um scFv, que inclui um ou mais ligantes que unem dois domínios ou regiões de anticorpo, como uma região variável de cadeia pesada (Vx) e uma região variável de cadeia leve (V.). O ligante é tipicamente um ligante peptídico, por exemplo, um |i- gante peptídico flexível e/ou solúvel. Entre os ligantes estão os ricos em glicina e serina e/ou em alguns casos treonina. Em algumas moda- lidades, os ligantes incluem ainda resíduos carregados, como lisina e/ou glutamato, que podem melhorar a solubilidade. Em algumas mo- dalidades, os ligantes incluem ainda um ou mais prolina. Em alguns aspectos, os ligantes ricos em glicina e serina (e/ou treonina) incluem pelo menos 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% desses aminoácidos. Em algumas modalidades, eles in- cluem pelo menos cerca de 50%, 55%, 60%, 70% ou 75%, glicina, se- rina e/ou treonina. Em algumas modalidades, o ligante é composto substancialmente inteiramente de glicina, serina e/ou treonina. Os |i- gantes geralmente têm entre cerca de 5 e cerca de 50 aminoácidos de comprimento, tipicamente entre cerca de 10 e cerca de 30, por exem- plo, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30 e em alguns exemplos entre 10 e 25 aminoácidos de comprimento. Ligantes exemplares incluem ligantes com vários núme- ros de repetições da sequência GGGGS (4GS; SEQ ID NO: 26) ou GGGS (3GS; SEQ ID NO: 27), como entre 2, 3, 4 e 5 repetições dessa sequência. Ligantes exemplares incluem aqueles que possuem ou consistem em uma sequência mencionada na SEQ ID NO: 28 (GGGGSGGGGSGGGGS), SEQ ID NO: 29 (GSTSGSGK- PGSGEGSTKG), SEQ ID NO: 30 (SRGEGGGSCSGESCGGGGSLEMA) ou SEQ ID NO: 38 (ASGGGGSGGRASGGGGS).
[00365] Em algumas modalidades, o CAR é um CAR anti-BCMA que é específico para BCMA, por exemplo, BCMA humano. Recepto- res de antígeno quiméricos contendo anticorpos anti-BCMA, incluindo anticorpos de BCMA anti-humano de camundongo e anticorpos de BCMA anti-humano humanos, e células que expressam esses recepto- res quiméricos foram descritos precedentemente. Veja Carpenter et al., Clin Cancer Res., 2013, 19 (8): 2048-2060, US 9.765.342, WO 2016/090320, WO2016090327, WOZ2010104949A?2, WO2016/004672A, WO?2016/014789, WO2016/090320, WO2016/094304, WO2017/025038 e WO2017173256. Em algumas modalidades, o CAR anti-BCMA contém um domínio de ligação ao an- tígeno, como um scFv, contendo uma região variável de cadeia pesa- da (Vx) e/ou variável de cadeia leve (V.) derivada de um anticorpo descrito nos documentos WO 2016/090320 ou WO2016090327. Em algumas modalidades, o CAR anti-BCMA contém um domínio de liga- ção ao antígeno, como um scFv, contendo uma região variável de ca- deia pesada (Vr) e/ou variável de cadeia leve (V.) derivada de um an- ticorpo — descrito — nos — documentos WO 2016/090320 ou WO2016090327. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno é um fragmento de anticorpo contendo uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma variável da cadeia leve (V.). Em alguns aspectos, a região Vu é ou inclui uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de região Vn definida em qualquer uma das SEQ ID NOs: 18, 20, 22, 24, 32, 34, 36, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73,75,
145, 147, 149 e 151; e/ou a região V. é ou inclui uma sequência de aminoácidos que possui pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência para a sequência de aminoácidos de região V. apresentada em qualquer uma das SEQ ID NOs: 19, 21, 23, 25, 33, 35, 37, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 146, 148, 150 e 152.
[00366] Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antíge- no, como um scFv, contém uma Vx mencionada na SEQ ID NO: 18 e uma V.L mencionada na SEQ ID NO: 19. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma Vu men- cionada na SEQ ID NO: 20 e uma V. mencionada na SEQ ID NO: 21. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma Vx mencionada na SEQ ID NO: 22 e uma Vi men- cionada na SEQ ID NO: 23. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma Vx mencionada na SEQ ID NO: 24 e uma V. mencionada na SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, con- tém uma Vw mencionada na SEQ ID NO: 32 e uma Vi. mencionada na SEQ ID NO: 33. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma Vx mencionada na SEQ ID NO: 34 e uma V.L mencionada na SEQ ID NO: 35. Em algumas modalida- des, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma Vr mencionada na SEQ ID NO: 36 e uma V. mencionada na SEQ ID NO:
37. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma Vx mencionada na SEQ ID NO: 41 e uma V. mencionada na SEQ ID NO: 42. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma Vx mencionada na SEQ ID NO: 43 e uma V. mencionada na SEQ ID NO: 44. Em al- gumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma Vu mencionada na SEQ ID NO : 45 e uma Vi. men-
cionada na SEQ ID NO: 46. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma Vx mencionada na SEQ ID NO: 47 e uma V. mencionada na SEQ ID NO: 48. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, con- tém uma Vw mencionada na SEQ ID NO: 49 e uma Vi. mencionada na SEQ ID NO: 50. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma Vx mencionada na SEQ ID NO: 51 e uma V. mencionada na SEQ ID NO: 52. Em algumas modalida- des, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma Vr mencionada na SEQ ID NO: 53 e uma V. mencionada na SEQ ID NO:
54. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um n scFv, contém uma Vx mencionada na SEQ ID NO: 55 e uma Vi mencionada na SEQ ID NO: 56. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma Vx mencionada na SEQ ID NO : 57 e uma Vi. mencionada na SEQ ID NO: 58. Em al- gumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma Vx mencionada na SEQ ID NO: 59 e uma Vi men- cionada na SEQ ID NO: 60. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma Vx mencionada na SEQ ID NO: 61 e uma V. mencionada na SEQ ID NO: 62. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, con- tém uma Vx mencionada na SEQ ID NO: 63 e uma Vi. mencionada na SEQ ID NO: 64. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma Vx mencionada na SEQ ID NO: 65 e uma V.L mencionada na SEQ ID NO: 66. Em algumas modalida- des, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma Vr mencionada na SEQ ID NO: 67 e uma V. mencionada na SEQ ID NO:
68. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma Vx mencionada na SEQ ID NO: 69 e uma Vi mencionada na SEQ ID NO: 70. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma Vx mencionada na SEQ ID NO: 71 e uma Vi mencionada na SEQ ID NO: 72. Em al- gumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma Vx mencionada na SEQ ID NO: 73 e uma Vi men- cionada na SEQ ID NO: 74. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma Vx mencionada na SEQ ID NO: 75 e uma V. mencionada na SEQ ID NO: 76. Em algumas modalidades, a ligação ao antígeno domínio, como um scFv, contém uma Vx mencionada na SEQ ID NO: 145 e uma V.L mencionada na SEQ ID NO: 146. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma Vx mencionada na SEQ ID NO: 147 e uma Vi mencionada na SEQ ID NO: 148. Em algumas modali- dades, o domínio de ligação ao antígeno, como um scFv, contém uma VH mencionada na SEQ ID NO: 149 e uma V. estabelecida em SEQ ID NO: 150. Em algumas modalidades, a caixa de antígeno o domínio ding, como um scFv, contém uma Vx mencionada na SEQ ID NO: 151 e uma V. mencionada na SEQ ID NO: 152. Em algumas modalidades, o VH ou VL possui uma sequência de aminoácidos que exibe pelo me- nos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais de identidade de sequência para qual- quer um dos as sequências Vx ou V. precedentes e retém a ligação ao BCMA. Em algumas modalidades, a região Vx é amino terminal à regi- ão V.. Em algumas modalidades, a região Vx é carbóxi-terminal à re- gião V.. Em algumas modalidades, as cadeias leves variáveis e pesa- das variáveis são conectadas por um ligante. Em algumas modalida- des, o ligante é mencionada na SEQ ID NO: 28, 29, 30 ou 38.
[00367] Entre um CAR anti-BCMA fornecido, está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno contém uma região VH que compreende a sequência mencionada na SEQ ID NO: 24 ou uma sequência de aminoácidos que possui pelo menos cerca de 90%,
ou cerca de 91%, ou cerca de 92%, ou cerca de 93%, ou cerca de 94%, ou cerca de 95%, ou cerca de 96%, ou cerca de 97%, ou cerca de 97%, ou cerca de 98%, ou cerca de 99% de identidade com a SEQ ID NO: 24; e contém uma região Vi que compreende a sequência mencionada na SEQ ID NO: 25 ou uma sequência de aminoácidos que possui pelo menos cerca de 90%, ou 91%, ou 92%, ou 93% ou 93%, ou cerca de 94%, a ou cerca de 95%, a ou cerca de 96%, a ou cerca de 97%, a ou cerca de 98%, ou a ou cerca de 99% de identidade com a SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fra- gmento de ligação ao antígeno do CAR fornecido contém uma região Vn que possui uma CDRH1, uma CDRH2 e uma CDRH3 que compre- ende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NOS: 173, 174 e 175, respectivamente e uma região Vi que possui uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NOS: 183, 184 e 185, respectivamente.
Em algumas moda- lidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do CAR for- necido contém uma região Vx que possui uma CDRH1, uma CDRH2 e uma CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NOS: 176, 177 e 175, respectivamente e uma região V. que possui uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreende a sequên- cia de aminoácidos da SEQ ID NOS: 183, 184 e 185, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao an- tígeno do CAR fornecido contém uma região Vx que possui uma CDRH1, uma CDRH2 e uma CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NOS: 178, 179 e 175, respectivamente e uma região V. que possui uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NOS: 183, 184 e 185, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou frag- mento de ligação ao antígeno do CAR fornecido contém uma região Vr que possui uma CDRH1, uma CDRH2 e uma CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NOS: 180, 181 e 182, respec- tivamente e uma região V.L que possui uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 186, 187 e 185, respectivamente. Em algumas modalidades, a região Vx compreende a sequência mencionada na SEQ ID NO: Mea região V. compreende a sequência mencionada na SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao an- tígeno é um fragmento de anticorpo de cadeia única, como um scFv. Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de amino- ácidos mencionada na SEQ ID NO: 188 ou uma sequência de aminoá- cidos pelo menos a ou cerca de 90%, a ou cerca de 91%, a ou cerca de 92%, a ou cerca de 93%, a ou cerca de 94%, a ou cerca de 95%, a ou cerca de 96%, a ou cerca de 97%, a ou cerca de 98%, ou a ou cer- ca de 99% de identidade com a SEQ ID NO: 188. Em algumas modali- dades, o CAR anti-BCMA tem a sequência de aminoácidos menciona- da na SEQ NO: 124 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos a ou cerca de 90%, a ou cerca de 91%, a ou cerca de 92%, a ou cerca de 93%, a ou cerca de 94%, a ou cerca de 95%, a ou cerca de 96%, a Ou cerca de 97%, a ou cerca de 98%, ou a ou cerca de 99% de identi- dade com a SEQ ID NO: 124. Em algumas modalidades, o CAR anti- BCMA tem a sequência de aminoácidos mencionada na SEQ NO: 125 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos a ou cerca de 90%, a ou cerca de 91%, a ou cerca de 92%, a ou cerca de 93%, a ou cerca de 94%, a ou cerca de 95%, a ou cerca de 96%, a ou cerca de 97%, a ou cerca de 98%, ou a ou cerca de 99% de identidade com a SEQ ID NO: 125.
[00368] Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antíge- no compreende um sdAb. Em algumas modalidades, o domínio de li- gação ao antígeno contém a sequência mencionada pela SEQ ID NO:
77. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno com-
preende uma sequência pelo menos ou cerca de 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% idêntica à sequência mencionada por SEQ ID NO: 77.
[00369] Em algumas modalidades, entre esses anticorpos ou domí- nios de ligação ao antígeno nos CARs fornecidos estão os anticorpos capazes de se ligar à proteína de BCMA, como a proteína de BCMA humana, com pelo menos uma certa afinidade, medida por qualquer um de vários métodos conhecidos. Em algumas modalidades, a afini- dade é representada por uma constante de dissociação de equilíbrio (Ko); em algumas modalidades, a afinidade é representada por EC50.
[00370] Em algumas modalidades, entre esses anticorpos ou domí- nios de ligação ao antígeno nos CARs fornecidos, estão anticorpos ou domínios de ligação ao antígeno ou CARs nos quais a ligação à prote- ína de BCMA solúvel ou vertente é menor ou igual a cerca de 10% da ligação do anticorpo à proteína de BCMA ligada à membrana.
[00371] Uma variedade de ensaios é conhecida por avaliar a afini- dade de ligação e/ou determinar se uma molécula de ligação (por exemplo, um anticorpo ou fragmento do mesmo) se liga especifica- mente a um ligante específico (por exemplo, um antígeno, como uma proteína de BCMA). Está dentro do nível de um técnico versado de- terminar a afinidade de ligação de uma molécula de ligação, por exemplo, um anticorpo, para um antígeno, por exemplo, BCMA. Por exemplo, em algumas modalidades, um instrumento BIAcore& pode ser usado para determinar a cinética de ligação e constantes de um complexo entre duas proteínas (por exemplo, um anticorpo ou frag- mento do mesmo e um antígeno, como uma proteína de superfície ce- lular de BCMA, proteína de BCMA solúvel), usando análise de resso- nância de plasmônio superficial (SPR) (veja, por exemplo, Scatchard et al., Ann. NY Acad. Sci. 51: 660, 1949; Wilson, Science 295: 2103, 2002; Wolff et al., Cancer Res 53: 2560, 1993; e Patentes US Nos.
5.283.173, 5.468.614, ou equivalente).
[00372] ASPR mede alterações na concentração de moléculas na superfície do sensor, à medida que as moléculas se ligam ou se disso- ciam da superfície. A mudança no sinal de SPR é diretamente propor- cional à mudança na concentração de massa próxima à superfície, permitindo assim a medição da cinética de ligação entre duas molécu- las. A constante de dissociação para o complexo pode ser determina- da pelo monitoramento de alterações no índice de refração em relação ao tempo em que o tampão é passado sobre o chip. Outros ensaios adequados para medir a ligação de uma proteína a outra incluem, por exemplo, imunoensaios, como ensaios imunossorventes ligados a en- zimas (ELISA) e radioimunoensaios (RIA), ou determinação da liga- ção, monitorando a alteração nas propriedades espectroscópicas ou ópticas das proteínas através de fluorescência, absorção de UV, dicro- ísmo circular ou ressonância magnética nuclear (RMN). Outros ensai- os exemplares incluem, mas não estão limitados a, Western blot, ELI- SA, ultracentrifugação analítica, espectroscopia, citometria de fluxo, sequenciação e outros métodos para detecção de polinucleotídeos ex- pressos ou ligação de proteínas.
[00373] Em algumas modalidades, a molécula de ligação, por exemplo, anticorpo ou fragmento do mesmo ou domínio de ligação ao antígeno de um CAR, liga-se, como especificamente se liga, a um an- tígeno, por exemplo, uma proteína de BCMA da superfície celular ou proteína de BCMA solúvel ou um epítopo nela, com uma afinidade ou Ka (ou seja, uma constante de associação de equilíbrio de uma intera- ção de ligação específica com unidades de 1/M; igual à relação entre a taxa on [kon ou Ka] e a taxa off [Kor ou ka] para este reação de associa- ção, assumindo interação bimolecular) igual ou superior a 105 M'. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento do mesmo ou domínio de ligação ao antígeno de um CAR exibe uma afinidade de ligação pa-
ra o epítopo peptídico com uma Kp (isto é, uma constante de dissocia- ção de equilíbrio de uma interação de ligação específica com unidades de M; igual à relação da taxa off [Kor ou ka] à taxa on [kKon ou Ka] para essa reação de associação, assumindo interação bimolecular) igual ou menor que 10º M. Por exemplo, a constante de dissociação de equilí- brio Kp varia de 10º M a 10º M, como 107 M a 10º M, 108 M a 10º M ou 10º M a 10º M. A taxa on (constante da taxa de associação; Kon ou ka; unidades de 1/Ms) e a taxa off (constante da taxa de dissocia- ção; kKotr OU Ka; unidades de 1/s) pode ser determinada usando qualquer um dos métodos de ensaio conhecidos na técnica, por exemplo, res- sonância de plasmônio superficial (SPR).
[00374] Em algumas modalidades, a afinidade de ligação (EC50) e/ou a constante de dissociação do anticorpo (por exemplo, fragmento de ligação ao antígeno) ou o domínio de ligação ao antígeno de um CAR a uma proteína de BCMA, como a proteína de BCMA humana, é de ou de cerca de 0,01 nM a cerca de 500 nM, de ou de cerca de 0,01 NM a cerca de 400 nM, de ou de cerca de 0,01 nM a cerca de 100 nM, de ou de cerca de 0,01 nM a cerca de 50 nM, de ou de cerca de 0,01 NM a cerca de 10 nM, de ou de cerca de 0,01 nM a cerca de 1 nM, de ou de cerca de 0,01 nM a cerca de 0,1 nM, é de ou de cerca de 0,1 nM a cerca de 500 nM, de ou de cerca de 0,1 nM a cerca de 400 nM, de ou de cerca de 0,1 nM a cerca de 100 nM, de ou de cerca de 0,1 nM a cerca de 50 nM, de ou de cerca de 0,1 nM a cerca de 10 nM, de ou de cerca de 0,1 nM a cerca de 1 nM, de ou de cerca de 0,5 nM a cerca de 200 nM, de ou de cerca de 1 nM a cerca de 500 nM, de ou de cerca de 1 NM a cerca de 100 nM, de ou de cerca de 1 nM a cerca de 50 nM, de ou de cerca de 1 nM a cerca de 10 nM, de ou de cerca de 2 nM a cer- ca de 50 nM, de ou de cerca de 10 nM a cerca de 500 nM, de ou de cerca de 10 nM a cerca de 100 nM, de ou de cerca de 10 nM a cerca de 50 nM, de ou de cerca de 50 nM a cerca de 500 nM, de ou de cerca de 50 nM a cerca de 100 nM ou de ou de cerca de 100 nM a cerca de 500 nM. Em certas modalidades, a afinidade de ligação (EC50) e/ou a constante de dissociação de equilíbrio, Ko, do anticorpo para uma pro- teína de BCMA, como a proteína de BCMA humana, é igual ou inferior a cerca de 400 nM, 300 nM, 200 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 NM, 16 nM, 15 nM, 14 NM, 13 nM, 12 NM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 NM, 7 nM, 6 NM, 5 NM, 4 NM, 3 NM, 2 nM ou 1 nM ou menos. Em algumas modalidades, os anticorpos se ligam a uma proteína de BCMA, como a proteína de BCMA humana, com uma afinidade de ligação subnanomolar, por exemplo, com uma afini- dade de ligação menor que cerca de 1 nM, como menor que cerca de 0,9 nM, cerca de 0,8 nM, cerca de 0,7 nM, cerca de 0,6 nM, cerca de 0,5 NM, cerca de 0,4 nM, cerca de 0,3 nM, cerca de 0,2 nM ou cerca de 0,1 nM ou menos.
[00375] Em algumas modalidades, a afinidade de ligação pode ser classificada como alta afinidade ou baixa afinidade. Em alguns casos, a molécula de ligação (por exemplo, anticorpo ou fragmento do mes- mo) ou o domínio de ligação ao antígeno de um CAR que exibe liga- ção de afinidade baixa a moderada exibe uma Ka de até 107 M, até 10º M, até 105 M. Em alguns casos, uma molécula de ligação (por exemplo, anticorpo ou fragmento do mesmo) que exibe uma ligação de alta afinidade a um epítopo específico interage com esse epítopo com uma Ka de pelo menos 107 M!, pelo menos 10º M, pelo menos 10º M 1, pelo menos 10º M, pelo menos 10** M, pelo menos 10º? M ou pelo menos 10º? M. Em algumas modalidades, a afinidade de ligação (EC50) e/ou a constante de dissociação de equilíbrio, Ko, da molécula de ligação, por exemplo, anticorpo anti-BCMA ou seu fragmento ou domínio de ligação ao antígeno de um CAR, a uma proteína de BCMA, é de ou de cerca de 0,01 nM a cerca de 1 uM, 0,1 nMa 1 UM, 1 NM a 1 UM, 1 nM a 500 nM, 1 nM a 100 nM, 1 NM a 50 nM, 1 NM a 10 AM, 10
NM a 500 nM, 10 nM a 100 nM, 10 nM a 50 nM, 50 nM a 500 nM, 50 NM a 100 nM ou 100 nM a 500 nM. Em certas modalidades, a afinida- de de ligação (EC50) e/ou a constante de dissociação da constante de dissociação de equilíbrio, Ko, da molécula de ligação, por exemplo, anticorpo anti-BCMA ou seu fragmento ou domínio de ligação ao antí- geno de um CAR, a uma proteína de BCMA, é igual ou inferior a 1 UM, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 NM, 16 NM, 15 nM, 14 NM, 13 NM, 12 nM, 11 nM, 10 NM, 9 nM, 8 NM, 7 NM, 6 NM, 5 NM, 4 NM, 3 NM, 2 NM ou 1 NM ou menos. O grau de afinidade de um anticorpo específico pode ser comparado com a afinidade de um anticorpo conhecido, como um anticorpo de referência (por exemplo, anticorpo de referência anti-BCMA).
[00376] Em algumas modalidades, a afinidade de ligação do anti- corpo anti-BCMA ou domínio de ligação ao antígeno de um CAR, para diferentes formas ou tipos topológicos de antígenos, por exemplo, pro- teína de BCMA solúvel ou vertente em comparação com a afinidade de ligação a um BCMA ligado à membrana, determina a ligação prefe- rencial ou afinidade relativa para uma forma ou tipo topológico especií- fico. Por exemplo, em alguns aspectos, um anticorpo anti-BCMA ou domínio de ligação ao antígeno de um CAR pode exibir ligação prefe- rencial ao BCMA ligado à membrana em comparação ao BCMA solú- vel ou vertente e/ou exibir maior afinidade de ligação ao BCMA ligado à membrana comparado BCMA solúvel ou vertente. Em algumas mo- dalidades, a constante de dissociação de equilíbrio, Kp, para diferentes formas ou tipos topológicos de proteínas de BCMA, pode ser compa- rado para determinar a ligação preferencial ou a afinidade relativa. Em algumas modalidades, a ligação preferencial ou afinidade relativa a um BCMA ligado à membrana em comparação com o BCMA solúvel ou vertente pode ser alta. Por exemplo, em alguns casos, a relação de Kp para BCMA solúvel ou vertente e a Ko para BCMA ligado à membrana é superior a 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 500, 1000, 2000 ou mais, e o anticorpo ou domínio de ligação ao antígeno se liga preferencialmente ou tem uma maior afinidade de ligação ao BCMA ligado à membrana. Em alguns casos, a relação de Ka para BCMA ligado à membrana e de Ka para BCMA solúvel ou vertente é superior a 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 500, 1000, 2000 ou mais, e o domínio de ligação ao anticorpo ou ao antíge- no se liga preferencialmente ou possui uma maior afinidade de ligação ao BCMA ligado à membrana. Em alguns casos, o anticorpo ou domí- nio de ligação ao antígeno do CAR liga BCMA solúvel ou vertente e BCMA ligado à membrana em um grau similar, por exemplo, a relação de Kp para BCMA solúvel e KD para BCMA ligado à membrana é ou é cerca de 1. Em alguns casos, o anticorpo ou domínio de ligação ao antígeno do CAR liga BCMA solúvel ou vertente e BCMA ligado à membrana em um grau similar, por exemplo, a relação de Ka para BCMA solúvel e Ka para BCMA ligado à membrana é ou é cerca de 1. O grau de ligação preferencial ou afinidade relativa para BCMA ligado à membrana ou BCMA solúvel ou vertente pode ser comparado com o de um anticorpo conhecido, como um anticorpo de referência (por exemplo, CAR anti-BCMA de referência). Em algumas modalidades, o anticorpo de referência (por exemplo, CAR anti-BCMA de referência) liga-se à proteína de BCMA solúvel ou vertente e ligada à membrana.
[00377] Em alguns aspectos, o receptor de antígeno quimérico in- clui uma porção extracelular contendo o anticorpo ou fragmento e uma região de sinalização intracelular. Em algumas modalidades, a região de sinalização intracelular compreende um domínio de sinalização in- tracelular. Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intrace- lular é ou compreende um domínio de sinalização primário, um domí- nio de sinalização que é capaz de induzir um sinal de ativação primária em uma célula T, um domínio de sinalização de um componente do receptor de célula T (TOR) e/ou um domínio de sinalização que com- preende um motivo de ativação à base de tirosina imunorreceptora (ITAM).
[00378] Em algumas modalidades, a porção de anticorpo do recep- tor recombinante, por exemplo, CAR, inclui ainda um espaçador, que pode ser ou incluir pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina ou uma versão variante ou modificada da mesma, como uma região de articulação, por exemplo, uma região de articula- ção de IgG4, uma região de articulação de I9G1, uma região de CH1/CL e/ou Fc. Em algumas modalidades, o receptor recombinante compreende ainda um espaçador e/ou uma região de articulação. Em algumas modalidades, a região ou porção constante é de uma IgG humana, como IgG4 ou IgG1. Em alguns aspectos, a porção da região constante serve como uma região espaçadora entre o componente de reconhecimento de antígeno, por exemplo, scFv e o domínio trans- membranar.
[00379] O espaçador pode ter um comprimento que forneça maior capacidade de resposta da célula após a ligação ao antígeno, em comparação com a ausência do espaçador. Espaçadores exemplares, por exemplo, regiões de articulação, incluem os descritos no número de publicação do pedido de patente internacional WO2014031687. Em alguns exemplos, o espaçador tem ou tem cerca de 12 aminoácidos de comprimento ou não tem mais de 12 aminoácidos. Espaçadores exemplares incluem aqueles que têm pelo menos cerca de 10 a 229 aminoácidos, cerca de 10 a 200 aminoácidos, cerca de 10 a 175 ami- noácidos, cerca de 10 a 150 aminoácidos, cerca de 10 a 125 aminoá- cidos, cerca de 10 a 100 aminoácidos, cerca de 10 a 75 aminoácidos, cerca de 10 a 50 aminoácidos, cerca de 10 a 40 aminoácidos, cerca de 10 a 30 aminoácidos aminoácidos, cerca de 10 a 20 aminoácidos ou cerca de 10 a 15 aminoácidos e incluindo qualquer número inteiro entre os pontos finais de qualquer um das faixas listadas. Em algumas modalidades, uma região espaçadora tem cerca de 12 aminoácidos ou menos, cerca de 119 aminoácidos ou menos ou cerca de 229 aminoá- cidos ou menos. Em algumas modalidades, o espaçador é um espa- çador que possui pelo menos um comprimento específico, como tendo um comprimento que é pelo menos 100 aminoácidos, como pelo me- nos 110, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240 ou 250 aminoácidos de comprimento. Os espaçadores exemplares incluem a articulação de IgG4 sozinha, a articulação de IgG4 ligada aos domínios ChW2 e Ch3 ou a articulação de I9G4 ligada ao domínio CH3. Espaçadores exemplares incluem articulação de IgG4 sozinha, articulação de Ig9G4 ligada aos domínios Ch2 e CH3 ou articu- lação de IgG4 ligada ao domínio Ch3. Espaçadores exemplares inclu- em articulação de I9G4 sozinha, articulação de I9G4 ligada aos domí- nios CH2 e Cx3 ou articulação de IgG4 ligada ao domínio CH3. Espa- çadores exemplares incluem, mas não estão limitados aos descritos em Hudecek et al., Clin. Cancer Res., 19: 3153 (2013), Hudecek et a/. (2015) Cancer Immunol Res. 3 (2): 125—135, número de publicação do pedido de patente internacionall WOZ2014031687, Patente US
8.822.647 ou pedido publicado No. US2014/0271635. Em algumas modalidades, o espaçador inclui uma sequência de uma região de arti- culação da imunoglobulina, uma região de Cx2 e Ch3. Em algumas modalidades, uma das mais articulações de Cr2 e Cx3 é derivada total ou parcialmente de I9gG4 ou IgG2. Em alguns casos, a articulação de Cn2 e Cx3 é derivada de IgG4. Em alguns aspectos, uma ou mais das articulações de CH2 e CH3 são quiméricas e contêm sequência deriva- da de IgG4 e IgG2. Em alguns exemplos, o espaçador contém uma articulação quimérica de IgG4/2, uma região de Cr2 de I9G2/4 e uma região de CH3 de IgG4.
[00380] Em algumas modalidades, o espaçador pode ser derivado total ou parcialmente de IgG4 e/ou IgG2 e pode conter mutações, co- mo uma ou mais mutações de aminoácidos isoladas em um ou mais domínios. Em alguns exemplos, a modificação de aminoácidos é uma substituição de uma prolina (P) por uma serina (S) na região de articu- lação de uma IgG4. Em algumas modalidades, a modificação de ami- noácidos é uma substituição de uma glutamina (Q) por uma asparagi- na (N) para reduzir a heterogeneidade da glicosilação, como uma mu- tação N177Q na posição 177, na região de Cx2, da sequência de Fc de de tamanho natural ou uma N176Q na posição 176, na região de Crn2, da sequência de Fc de IgG4 de tamanho natural.
[00381] Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência ESKYGPPCPPCP (mencionada na SEQ ID NO: 1) e é codificado pela sequência mencionada na SEQ ID NO: 2. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência mencionada na SEQ ID NO: 3. Em algu- mas modalidades, o espaçador tem a sequência mencionada na SEQ ID NO: 4. Em algumas modalidades, o espaçador codificado é ou con- tém a sequência mencionada na SEQ ID NO: 31. Em algumas modali- dades, a região constante ou porção é de IgD. Em algumas modalida- des, o espaçador tem a sequência mencionada na SEQ ID NO: 5. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência mencionada na SEQ ID NO: 89.
[00382] Outras regiões espaçadoras exemplares incluem regiões de articulação derivadas de CD8a, CD28, CTLAA4, PD-1 ou FeyRllla. Em algumas modalidades, o espaçador contém um domínio extracelular truncado ou região de articulação de uma CD8a, CD28, CTLAA4, PD-1 ou FeyRlilla. Em algumas modalidades, o espaçador é uma região de articulação de CD28 truncada. Em algumas modalidades, um ligante de oligo- ou polipeptídeo curto, por exemplo, um ligante de 2 a 10 ami- noácidos de comprimento, como um que contém alaninas ou alanina e arginina, por exemplo, tripleto de alanina (ARA) ou RAAA (SEQ ID NO:
144), está presente e forma uma ligação entre o scFv e a região espa- çadora do CAR. Em algumas modalidades, o espaçador tem a se- quência mencionada na SEQ ID NO: 78. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência mencionada na SEQ ID NO: 80. Em algu- mas modalidades, o espaçador tem a sequência mencionada em qualquer uma das SEQ ID NOs: 81-83. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência mencionada na SEQ ID NO: 84. Em algu- mas modalidades, o espaçador tem a sequência mencionada na SEQ ID NO: 86. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência mencionada na SEQ ID NO: 88.
[00383] Em algumas modalidades, o espaçador tem uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais de identidade de sequência com qualquer uma das SEQ ID NOS: 1,3, 4, 5, 31, 78, 80, 81, 82, 83, 84, 86, 88 ou 89.
[00384] Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência mencionada na SEQ ID NOS: 157-165. Em algumas modalidades, o espaçador tem uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais de identidade de sequência com qualquer uma das SEQ ID NOS: 157-165.
[00385] Esse domínio de reconhecimento de antígeno geralmente está ligado a um ou mais componentes de sinalização intracelular, como componentes de sinalização que imitam a estimulação e/ou ati- vação por meio de um complexo receptor de antígeno, como um com- plexo de TCR, no caso de um CAR, e/ou sinal via outro receptor da superfície celular. Assim, em algumas modalidades, o componente de ligação ao antígeno (por exemplo, anticorpo) está ligado a um ou mais domínios de sinalização transmembranar e intracelular. Em algumas modalidades, o receptor de antígeno quimérico inclui um domínio transmembranar ligando o domínio extracelular e o domínio de sinali- zação intracelular. Em algumas modalidades, o domínio transmembra- nar é fundido ao domínio extracelular, como ligado ou fundido entre o domínio extracelular (por exemplo, scFv) e o domínio de sinalização intracelular. Em uma modalidade, um domínio transmembranar que está naturalmente associado a um dos domínios no receptor, por exemplo, CAR, é usado. Em alguns casos, o domínio transmembranar é selecionado ou modificado por substituição de aminoácidos para evi- tar a ligação de tais domínios aos domínios transmembranares da mesma ou de diferentes proteínas da membrana superficial para mi- nimizar as interações com outros membros do complexo receptor.
[00386] O domínio transmembranar em algumas modalidades é de- rivado de uma fonte natural ou sintética. Onde a fonte é natural, em alguns aspectos, o domínio é derivado de qualquer proteína ligada à membrana ou proteína transmembranar. As regiões da membrana in- cluem aquelas derivadas de (ou seja, compreendem menos a (s) regi- ão (ões) transmembranar (es) da cadeia alfa, beta ou zeta do receptor de células T, CD28, CD3 épsilon, CD45, CD4, CD5, CD8, CD8a, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 (4- 1BB), CD154, CTLA-4 ou PD-1. Alternativamente, o domínio trans- membranar em algumas modalidades é sintético. Em alguns aspectos, o domínio transmembranar sintético compreende resíduos predomi- nantemente hidrofóbicos, como leucina e valina. Em alguns aspectos, um tripleto de fenilalanina, triptofano e valina será encontrado em cada extremidade de um domínio transmembranar sintético. Em algumas modalidades, a ligação é feita por ligantes, espaçadores e/ou domínios transmembranares. Em alguns aspectos, o domínio transmembranar contém uma porção transmembranar de CD28. Sequências exempla- res de domínios transmembranares são ou compreendem as sequên- cias mencionadas nas SEQ ID NOs: 8, 79, 85, 87, 142 ou 143.
[00387] Entreos domínios de sinalização intracelular estão aqueles que imitam ou aproximam um sinal através de um receptor de antíge- no natural, um sinal através desse receptor em combinação com um receptor coestimulador e/ou um sinal através de um receptor coestimu- lador sozinho. Em algumas modalidades, um ligante oligo- ou polipep- tídico curto, por exemplo, um ligante de 2 a 10 aminoácidos de com- primento, como um contendo glicina e serinas, por exemplo, dupleto de glicina-serina, está presente e forma uma ligação entre o domínio transmembranar e de domínio citoplasmático de sinalização do CAR.
[00388] O receptor, por exemplo, o CAR, geralmente inclui pelo menos um componente ou componentes de sinalização intracelular. Em alguns aspectos, o CAR inclui uma sequência de sinalização cito- plasmática primária que regula a ativação primária do complexo de TCR. As sequências de sinalização citoplasmáticas primárias que atu- am de maneira estimuladora podem conter motivos de sinalização que são conhecidos como motivos de ativação à base de tirosina imunor- receptora ou ITAMs. Exemplos de ITAM contendo sequências de sina- lização citoplasmáticas primárias incluem aquelas derivadas da cadeia de CD3 de TCR que mediam a estimulação e/ou ativação de células T e citotoxicidade, por exemplo, cadeia de CD3 zeta, CD3 gama, CD3 delta, CD3 épsilon, FcCR gama, FcR beta, CDS, CD22, CD79a, CD79b e CD66d. Em algumas amostras de ITAM contendo sequências de si- nalização citoplasmáticas primárias incluem aquelas derivadas da ca- deia de CD3 zeta, FcºR gama, CD3 gama, CD3 delta e CD3 delta e CD3 épsilon. Em algumas modalidades, a (s) molécula (s) de sinaliza- ção citoplasmática no CAR contém um domínio de sinalização cito- plasmática, uma porção do mesmo ou uma sequência derivada do CD3 zeta.
[00389] Em algumas modalidades, o receptor inclui um componente intracelular de um complexo de TCR, como uma cadeia de CD3 de
TCR que media a estimulação e/ou ativação de células T e citotoxici- dade, por exemplo, cadeia de CD3 zeta. Assim, em alguns aspectos, a porção de ligação ao antígeno está ligada a um ou mais módulos de sinalização celular. Em algumas modalidades, os módulos de sinaliza- ção celular incluem o domínio transmembranar de CD3, domínios de sinalização intracelular de CD3 e/ou outros domínios transmembrana- res de CD. Em algumas modalidades, o receptor, por exemplo, CAR, inclui ainda uma porção de uma ou mais moléculas adicionais, tais como o receptor de Fc y, CD8, CD4, CD25 ou CD16. Por exemplo, em alguns aspectos, o CAR ou outro receptor quimérico inclui uma molé- cula quimérica entre CD3-zeta (CD3-7) ou receptor de Fc y e CD8, CDA4, CD25 ou CD16.
[00390] Em algumas modalidades, após a ligação do CAR ou outro receptor quimérico, o domínio citoplasmático ou domínio de sinaliza- ção intracelular do receptor estimula e/ou ativa pelo menos uma das funções ou respostas efetivas normais da célula imune, por exemplo, célula T modificada para expressar o CAR. Por exemplo, em alguns contextos, o CAR induz uma função de uma célula T, como atividade citolítica ou atividade auxiliar de T, como secreção de citocinas ou ou- tros fatores. Em algumas modalidades, uma porção truncada de um domínio de sinalização intracelular de um componente receptor de an- tígeno ou molécula coestimuladora é usada no lugar de uma cadeia imunoestimuladora intacta, por exemplo, se ela transduz o sinal da função efetora. Em algumas modalidades, o domínio ou domínios de sinalização intracelular incluem as sequências citoplasmáticas do re- ceptor de células T (TOR) e, em alguns aspectos, também os de co- receptores que, no contexto natural, agem em conjunto com esses re- ceptores para iniciar a transdução de sinal após o envolvimento do re- ceptor de antígeno e/ou qualquer derivado ou variante de tais molécu- las e/ou qualquer sequência sintética que tenha a mesma capacidade funcional.
[00391] No contexto de um TCR natural, a ativação completa ge- ralmente requer não apenas sinalização através do TCR, mas também um sinal coestimulador. Assim, em algumas modalidades, para pro- mover a ativação total, um componente para gerar sinal secundário ou coestimulador também é incluído no CAR. Em outras modalidades, o CAR não inclui um componente para gerar um sinal coestimulador. Em alguns aspectos, um CAR adicional é expresso na mesma célula e fornece o componente para gerar o sinal secundário ou coestimulador.
[00392] A estimulação e/ou ativação de células T é, em alguns as- pectos, descrita como sendo mediada por duas classes de sequências de sinalização citoplasmáticas: aquelas que iniciam a estimulação e/ou ativação primária dependente de antígeno através do TCR (regiões, domínios ou sequências de sinalização citoplasmática primárias) e aquelas que agem de maneira independente do antígeno para forne- cer um sinal secundário ou coestimulador (regiões, domínios ou se- quências de sinalização citoplasmática secundárias). Em alguns as- pectos, o CAR inclui um ou ambos os componentes de sinalização.
[00393] Em algumas modalidades, o CAR inclui uma região de sina- lização e/ou porção transmembranar de um receptor coestimulador, como CD28, 4-1BB, OX40 (CD134), CD27, DAP10, DAP12, ICOS e/ou outros receptores coestimuladores. Em alguns aspectos, o mesmo CAR inclui a região de sinalização citoplasmática primária e os com- ponentes de sinalização coestimuladores. Em algumas modalidades, o receptor de antígeno quimérico contém um domínio intracelular deri- vado de uma molécula coestimuladora de células T ou sua variante funcional, tal como entre o domínio transmembranar e o domínio de sinalização intracelular. Em alguns aspectos, a molécula coestimulado- ra de células T é CD28 ou 41BB.
[00394] Em algumas modalidades, um ou mais receptores recombi-
nantes diferentes podem conter uma ou mais regiões ou domínios de sinalização intracelular diferentes. Em algumas modalidades, a região de sinalização citoplasmática primária é incluída dentro de um CAR, enquanto o componente coestimulador é fornecido por outro receptor, por exemplo, outro CAR reconhecendo outro antígeno. Em algumas modalidades, os CARs incluem CARs ativadores ou estimuladores e CARs coestimuladores, ambos expressos na mesma célula (veja, WO2014/055668).
[00395] Em alguns aspectos, as células incluem um ou mais CARs estimuladores ou ativadores e/ou um CAR estimulador. Em algumas modalidades, as células incluem ainda inibidores de CARs (iCARs, ve- ja, Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5 (215) (2013), como um CAR que reconhece um antígeno diferente daquele associado a e/ou espe- cífico para a doença ou condição pela qual um sinal de ativação libe- rado através do CAR alvo da doença é diminuído ou inibido pela liga- ção do CAR inibidor ao seu ligante, por exemplo, para reduzir os efei- tos fora do alvo.
[00396] Em algumas modalidades, os dois receptores induzem, respectivamente, um sinal de ativação e inibidor à célula, de modo que a ligação de um dos receptores ao antígeno ativa a célula ou induz uma resposta, mas a ligação do segundo receptor inibidor ao antígeno induz um sinal que suprime ou amortece essa resposta. Exemplos são combinações de CARs ativadores e inibidores de CARs (ICARs). Essa estratégia pode ser usada, por exemplo, para reduzir a probabilidade de efeitos fora do alvo no contexto em que o CAR ativador liga um an- tígeno expresso em uma doença ou condição, mas que também é ex- presso em células normais, e o receptor inibidor se liga a um antígeno separado que é expresso nas células normais, mas não nas células da doença ou condição.
[00397] Em alguns aspectos, o receptor quimérico é ou inclui um
CAR inibidor (por exemplo, iCAR) e inclui componentes intracelulares que amortecem ou suprimem uma resposta imune, como uma respos- ta promovida por ITAM e/ou coestimuladora na célula. Exemplos de tais componentes de sinalização intracelular são aqueles encontrados nas moléculas do ponto de verificação imune, incluindo receptores PD- 1, CTLA4, LAG3, BTLA, OX2R, TIM-3, TIGIT, LAIR-1, PGE2, recepto- res EP2/4 de adenosina, incluindo A2AR. Em alguns aspectos, a célu- la modificada inclui um CAR inibidor, incluindo um domínio de sinaliza- ção ou derivado de uma molécula inibidora, de modo que serve para amortecer a resposta da célula, por exemplo, aquela induzida por um CAR ativador e/ou coestimulador.
[00398] Em certas modalidades, o domínio de sinalização intracelu- lar compreende um domínio de sinalização e transmembrana de CD28 ligado a um domínio intracelular de CD3 (por exemplo, CD3-zeta). Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intracelular compre- ende um domínio coestimulador quimérico CD28 e CD137 (4-1BB, TNFRSF9), ligado a um domínio intracelular CD3 zeta.
[00399] Em algumas modalidades, o CAR abrange um ou mais, por exemplo, dois ou mais domínios coestimuladores e região de sinaliza- ção citoplasmática primária, na porção citoplasmática. Exemplos de CARs incluem componentes intracelulares, como regiões ou domínios de sinalização intracelular, de CD3-zeta, CD28, CD137 (4-1BB), OX40 (CD134), CD27, DAP10, DAP12, NKG2D e/ou ICOS. Em algumas modalidades, o receptor de antígeno quimérico contém uma região ou domínio de sinalização intracelular de uma molécula coestimuladora de células T, por exemplo, de CD28, CD137 (4-1BB), OX40 (CD134), CD27, DAP10, DAP12, NKG2D e/ou ICOS, em alguns casos, entre o domínio transmembranar e a região ou domínio de sinalização intrace- lular. Em alguns aspectos, a molécula coestimuladora de células T é uma ou mais de CD28, CD137 (4-1BB), OX40 (CD134), CD27,
DAP10, DAP12, NKG2D e/ou ICOS.
[00400] Em alguns casos, os CARs são referidos como CARs de primeira, segunda e/ou terceira geração. Em alguns aspectos, um CAR de primeira geração é aquele que apenas fornece um sinal indu- zido pela cadeia de CD3 após a ligação ao antígeno; em alguns as- pectos, um CAR de segunda geração é aquele que fornece esse sinal e sinal coestimulador, como um que inclui um domínio de sinalização intracelular de um coestimulador receptor oriio como CD28 ou CD137; em alguns aspectos, um CAR de terceira geração é aquele que inclui múltiplos domínios coestimuladores de diferentes receptores coestimu- ladores.
[00401] Em algumas modalidades, o receptor de antígeno quiméri- co inclui uma porção extracelular contendo um anticorpo ou fragmento de anticorpo. Em alguns aspectos, o receptor de antígeno quimérico inclui uma porção extracelular contendo o anticorpo ou fragmento e um domínio de sinalização intracelular. Em algumas modalidades, o anti- corpo ou fragmento inclui um scFv e o domínio intracelular contém um ITAM. Em alguns aspectos, o domínio de sinalização intracelular inclui um domínio de sinalização de uma cadeia zeta de uma cadeia de CD3-zeta (CD37). Em algumas modalidades, o receptor de antígeno quimérico inclui um domínio transmembranar ligando o domínio extra- celular e o domínio de sinalização intracelular. Em alguns aspectos, o domínio transmembranar contém uma porção transmembranar de CD28. Em algumas modalidades, o receptor de antígeno quimérico contém um domínio intracelular de uma molécula coestimuladora de células T. O domínio extracelular e o domínio transmembranar podem ser ligados direta ou indiretamente. Em algumas modalidades, o domí- nio extracelular e a transmembr da qual o domínio transmembranar é derivado, como uma porção ex- tracelular de CD28. Em algumas modalidades, o receptor de antígeno quimérico contém um domínio intracelular derivado de uma molécula coestimuladora de células T ou sua variante funcional, tal como entre o domínio transmembranar e o domínio de sinalização intracelular. Em alguns aspectos, a molécula coestimuladora de células T é CD28 ou 41BB.
[00402] Em algumas modalidades, o CAR contém um anticorpo, por exemplo, um fragmento de anticorpo, um domínio transmembranar que é ou contém uma porção transmembranar de CD28 ou uma vari- ante funcional do mesmo e um domínio de sinalização intracelular con- tendo uma porção de sinalização do CD28 ou uma variante funcional do mesmo e uma porção de sinalização de CD3 zeta ou sua variante funcional. Em algumas modalidades, o CAR contém um anticorpo, por exemplo, fragmento de anticorpo, um domínio transmembranar que é ou contém uma porção transmembranar de CD28 ou uma variante funcional do mesmo e um domínio de sinalização intracelular contendo uma porção de sinalização de um 4-1BB ou variante funcional e uma porção de sinalização de CD3 zeta ou sua variante funcional. Em al- gumas dessas modalidades, o receptor inclui ainda um espaçador con- tendo uma porção de uma molécula de lg, tal como uma molécula de Ig humana, tal como uma articulação de Ig, por exemplo, uma articula- ção de IgG4, como um espaçador apenas da articulação.
[00403] Em algumas modalidades, o domínio transmembranar do receptor recombinante, por exemplo, o CAR, é ou inclui um domínio transmembranar do CD28 humano (por exemplo, nº de acesso P10747.1) ou CD8a (nº de acesso PO01732.1), ou variante do mesmo, como um domínio transmembranar que compreende a sequência de aminoácidos mencionada na SEQ ID NO: 8, 79, 142 ou 143 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%,
88%, 89%, 90%, 291%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais identidade de sequência para SEQ ID NO: 8, 79, 142 ou 143; em algumas modalidades, a porção contendo o domínio transmembranar do receptor recombinante compreende a sequência de aminoácidos mencionada na SEQ ID NO: 9 ou uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 291%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais identidade de sequência a isto.
[00404] Em algumas modalidades, o (s) componente (s) de sinali- zação intracelular do receptor recombinante, por exemplo, o CAR, con- tém um domínio de sinalização coestimulador intracelular de CD28 humano ou uma variante funcional ou porção dele, como um domínio com uma substituição de LL a GG nas posições 186-187 de uma pro- teína CD28 nativa. Por exemplo, o domínio de sinalização intracelular pode compreender a sequência de aminoácidos mencionada na SEQ ID NO: 10 ou 11 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais identidade de sequência para SEQ ID NO: 10 ou 11. Em algumas modalidades, o domínio intracelu- lar compreende um domínio de sinalização coestimulador intracelular de 4-1BB (por exemplo, nº de acesso Q07011.1) ou variante funcional ou parte dela, como a sequência de aminoácidos mencionada na SEQ ID NO: 12 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais da identidade de sequência para SEQ ID NO:
12.
[00405] Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intrace- lular do receptor recombinante, por exemplo, o CAR, compreende um domínio de sinalização estimuladora de CD3 zeta humano ou uma va- riante funcional do mesmo, como um domínio citoplasmático 112 AA da isoforma 3 de CD37 humano (nº de acesso P20963.2) ou um domí-
nio de sinalização de CD3 zeta como descrito na Patente US No.
7.446.190 ou Patente US No. 8.911.993. Por exemplo, em algumas modalidades, o domínio de sinalização intracelular compreende a se- quência de aminoácidos, como mencionada na SEQ ID NO: 13, 14 ou ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais identidade de sequência para SEQ ID NO: 13, 14 ou 15.
[00406] Em alguns aspectos, o espaçador contém apenas uma re- gião de articulação de uma IgG, como apenas uma articulação de IgG4 ou IgG1, como o espaçador de articulação mencionado na SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 89. Em outras modalidades, o espaçador é ou contém uma articulação de lg, por exemplo, uma articulação deri- vada de IgG4, opcionalmente ligada a um domínio Ch2 e/ou CH3. Em algumas modalidades, o espaçador é uma articulação de lg, por exemplo, uma articulação de IgG4, ligada aos domínios CH2 e Cr3, como mencionada na SEQ ID NO: 4. Em algumas modalidades, o es- paçador é uma articulação de lg, por exemplo, uma articulação de IgG4, ligada apenas a um domínio CH3, tal como mencionada na SEQ ID NO: 3. Em algumas modalidades, o espaçador é ou compreende uma sequência rica em glicina-serina ou outro ligante flexível, como ligantes flexíveis conhecidos. Em algumas modalidades, o espaçador é uma articulação de CD8a, como mencionado em qualquer uma das SEQ ID NOs: 81-83, uma articulação de FeyRllla, como mencionada na SEQ ID NO: 88, uma articulação de CTLA4, como mencionado em SEQ ID NO: 84, ou uma articulação de PD-1, como mencionada na SEQ ID NO: 86.
[00407] Por exemplo, em algumas modalidades, o CAR inclui um anticorpo, como um fragmento de anticorpo, incluindo scFvs, um es- paçador, como um espaçador que contém uma porção de uma molé-
cula de imunoglobulina, como uma região de articulação e/ou uma ou mais regiões constantes de uma molécula de cadeia pesada, como um espaçador contendo articulação de lg, um domínio transmembranar contendo todo ou uma porção de um domínio transmembranar deriva- do de CD28, um domínio de sinalização intracelular derivado de CD28 e um domínio de sinalização de CD3 zeta. Em algumas modalidades, o CAR inclui um anticorpo ou fragmento, como scFv, um espaçador como qualquer um dos espaçadores que contêm articulações de lg, um domínio transmembranar derivado de CD28, um domínio de sinali- zação intracelular derivado de 4-1BB e um domínio de sinalização de- rivado de CD3 zeta.
[00408] Em algumas modalidades, o receptor de antígeno inclui ainda um marcador e/ou células que expressam o CAR ou outro re- ceptor de antígeno inclui ainda um marcador substituto, como um mar- cador de superfície celular, que pode ser usado para confirmar a transdução ou engenharia da célula para expressar o receptor. Em al- gumas modalidades, o marcador é uma molécula, por exemplo, prote- ína da superfície celular, não encontrada naturalmente nas células T ou não encontrada naturalmente na superfície das células T ou em uma porção das mesmas. Em algumas modalidades, a molécula é uma molécula não própria, por exemplo, uma proteína não própria, isto é, uma que não é reconhecida como "própria" pelo sistema imunológi- co do hospedeiro no qual as células serão transferidas adotivamente. Em algumas modalidades, o marcador não tem função terapêutica e/ou produz outro efeito além de ser usado como marcador para modi- ficação genética, por exemplo, para selecionar células modificadas com sucesso. Em outras modalidades, o marcador pode ser uma mo- lécula terapêutica ou molécula que exerce algum efeito desejado, co- mo um ligante para uma célula a ser encontrada in vivo, como uma molécula de ponto de verificação coestimuladora ou imune para me-
lhorar e/ou amortecer as respostas das células mediante transferência adotiva e encontro com ligante. Em alguns aspectos, o marcador inclui todo ou parte (por exemplo, forma truncada) de CD34, um NGFR ou receptor de fator de crescimento epidérmico, como a versão truncada desse receptor de superfície celular (por exemplo, tEGFR). Em algu- mas modalidades, o ácido nucleico que codifica o marcador está ope- racionalmente ligado a um polinucleotídeo que codifica para uma se- quência ligante, como uma sequência ligante clivável, por exemplo, T2A. Por exemplo, um marcador e, opcionalmente, uma sequência de ligação, pode ser qualquer como descrito no pedido de patente publi- cado No. WO2014031687. Por exemplo, o marcador pode ser um EGFR truncado (tEGFR) que está, opcionalmente, ligado a uma se- quência de ligante, como uma sequência de ligante clivável em T2A.
[00409] Um polipeptídeo exemplar para um EGFR truncado (por exemplo, teEGFR) compreende a sequência de aminoácidos mencio- nada na SEQ ID NO: 7 ou 166 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais de identidade de sequência para SEQ ID NO: 7 ou 166. Uma sequência de ligante T2A exemplar compreende a sequência de aminoácidos mencionada na SEQ ID NO: 6 ou 167 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais identidade de sequência para SEQ ID NO: 6 ou 167
[00410] Em algumas modalidades, as moléculas de ácido nucleico que codificam essas construções de CAR incluem ainda uma sequên- cia que codifica um elemento de salto ribossômico T2A e/ou uma se- quência de tEGFR, por exemplo, a jusante da sequência que codifica o CAR. Em algumas modalidades, a sequência codifica um elemento de salto ribossômico T2A mencionada na SEQ ID NO: 6 ou 167, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais identidade de sequência para SEQ ID NO: 6 ou 167. Em algumas modalidades, células T que expressam um receptor de antígeno (por exemplo, CAR) também pode ser gerado para expressar um EGFR truncado (EGFRt) como um epítopo de seleção não imunogênico (por exemplo, através da introdução de uma construção que codifica o CAR e EGFRt separados por um comutador de ribossomo T2A para ex- pressar duas proteínas da mesma construção), que podem ser usadas como marcador para detectar essas células (veja, por exemplo, Paten- te US No. 8.802.374). Em algumas modalidades, a sequência codifica uma sequência de tEGFR mencionada na SEQ ID NO: 7 ou 166, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 290%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais de identidade de sequência para SEQ ID NO: 7.
[00411] Em algumas modalidades, a sequência do CAR pode codi- ficada pode incluir ainda uma sequência de sinal ou peptídeo de sinal que direciona ou liberação o CAR à superfície da célula na qual o CAR é expresso. Em algumas modalidades, o peptídeo sinal é derivado de uma proteína transmembranar. Em alguns exemplos, o peptídeo sinal é derivado de CD8a, CD33 ou uma IgG. Peptídeos de sinal exempla- res incluem as sequências mencionadas nas SEQ ID NOs: 39, 40 e
153.
[00412] Em algumas modalidades, o CAR inclui um anticorpo ou fragmento anti-BCMA, como qualquer um dos anticorpos anti-BCMA humanos, incluindo sdAbs e scFvs, no presente documento descritos, um espaçador como qualquer espaçador que contenha articulação de Ig ou outros espaçadores no presente documento descritos, um domí- nio transmembranar de CD28, um domínio de sinalização intracelular de CD28 e um domínio de sinalização de CD3 zeta. Em algumas mo-
dalidades, o CAR inclui um anticorpo ou fragmento anti-BCMA, como qualquer um dos anticorpos anti-BCMA humanos, incluindo sdAbs e scFvs no presente documento descritos, um espaçador como qualquer espaçador que contenha articulação de Ig ou outros espaçadores no presente documento descritos, um domínio transmembranar de CD28, um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB e um domínio de si- nalização de CD3 zeta. Em algumas modalidades, essas construções de CAR incluem ainda um elemento de salto ribossômico T2A e/ou uma sequência de tEGFR, por exemplo, a jusante do CAR.
[00413] Os receptores recombinantes, como CARs, expressos pe- las células administradas ao indivíduo geralmente reconhecem ou se ligam especificamente a uma molécula que é expressa em, associada a e/ou específica para a doença ou condição ou células dela sendo tratada. para a molécula, por exemplo, antígeno, o receptor geralmen- te liberação um sinal imunoestimulador, como um sinal transduzido por ITAM, na célula, promovendo assim uma resposta imune direcionada à doença ou condição. Por exemplo, em algumas modalidades, as célu- las expressam um CAR que se liga especificamente a um antígeno expresso por uma célula ou tecido da doença ou condição ou associa- do à doença ou condição. Em algumas modalidades, o CAR se liga especificamente ao BCMA, como o BCMA humano, e inclui um anti- corpo ou fragmento anti-BCMA humano, como descrito. Sequências CAR exemplares não limitativas, incluindo sequências CAR anti- BCMA, são apresentadas nas SEQ ID NOs: 90-141. Em algumas mo- dalidades, um CAR anti-BCMA inclui a sequência de aminoácidos mencionada em qualquer uma das SEQ ID NOS: 90-141 ou uma se- quência de aminoácidos que exibe pelo menos cerca de 90%, 91% ou cerca de 91% 92%, ou cerca de 93%, ou cerca de 94%, ou cerca de 95%, ou cerca de 96%, ou cerca de 97%, ou cerca de 96%, ou cerca de 97%, ou cerca de 98%, com cerca de 99% de identidade de se-
quência com qualquer uma das SEQ ID NOS: 90-141 e em que o CAR se liga especificamente ao BCMA, por exemplo, BCMA humano.
2. Receptor de Auto-Anticorpo Quimérico (CAAR)
[00414] Em algumas modalidades, o receptor recombinante é um receptor de autoanticorpo quimérico (CAAR). Em algumas modalida- des, o CAAR liga, por exemplo, liga especificamente, ou reconhece, um autoanticorpo. Em algumas modalidades, uma célula que expressa o CAAR, como uma célula T modificada para expressar um CAAR, pode ser usada para se ligar e matar células de expressão de autoan- ticorpos, mas não células de expressão de anticorpos normais. Em algumas modalidades, as células de expressão de CAAR podem ser usadas para tratar uma doença autoimune associada à expressão de autoantígenos, como doenças autoimunes. Em algumas modalidades, as células de expressão de CAAR podem atingir células B que, em última análise, produzem os autoanticorpos e exibem os autoanticor- pos em suas superfícies celulares, marcam essas células B como al- vos específicos da doença para intervenção terapêutica. Em algumas modalidades, as células de expressão de CAAR podem ser usadas para direcionar e matar eficientemente as células B patogênicas em doenças autoimunes, direcionando as células B causadoras de doen- ças usando um receptor de autoanticorpo quimérico específico de an- tígeno. Em algumas modalidades, o receptor recombinante é um CA- AR, como qualquer um descrito no Pedido de Patente U.S. Pub. No. US 2017/0051035.
[00415] Em algumas modalidades, o CAAR compreende um domí- nio de ligação de autoanticorpo, um domínio transmembranar e uma ou mais região ou domínio de sinalização intracelular (também inter- cambiavelmente chamado de domínio ou região de sinalização cito- plasmática). Em algumas modalidades, a região de sinalização intrace- lular compreende um domínio de sinalização intracelular. Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intracelular é ou compreende uma região de sinalização primária, um domínio de sinalização que é capaz de estimular e/ou induzir o sinal de ativação primário em uma célula T, um domínio de sinalização de um componente receptor de célula T (TCR) (por exemplo, um domínio de sinalização intracelular ou região de uma cadeia zeta de uma cadeia de CD3-zeta (CD37) ou uma variante funcional ou parte de sinalização), e/ou um domínio de sinali- zação que compreende um motivo de ativação à base de tirosina imu- norreceptora (ITAM).
[00416] Em algumas modalidades, o domínio de ligação do autoan- ticorpo compreende um autoantígeno ou um fragmento do mesmo. À escolha do autoantígeno pode depender do tipo de autoanticorpo sen- do direcionado. Por exemplo, o autoantígeno pode ser escolhido por- que reconhece um autoanticorpo em uma célula alvo, como uma célu- la B, associada a um estado de doença específico, por exemplo, uma doença autoimune, tal como uma doença autoimune mediada por au- toanticorpos. Em algumas modalidades, a doença autoimune inclui o pênfigo vulgar (PV). Autoantígenos exemplares incluem desmogleína 1 (Dsg1) e Dsg3.
3. TCRs
[00417] Em algumas modalidades, são fornecidas células modifica- das, como células T, que expressam um receptor de célula T (TCR) ou uma porção de ligação ao antígeno que reconhece um epítopo peptí- dico ou epítopo da célula T de um polipeptídeo alvo, como um antíge- no de um tumor, proteína viral ou autoimune. Em alguns aspectos, o TCR é ou inclui um TOR recombinante.
[00418] Em algumas modalidades, um "receptor de célula T" ou "TCR" é uma molécula que contém cadeias a e B variáveis (também conhecidas como TCRa e TCRB, respectivamente) ou cadeias y e à variáveis (também conhecidas como TCRa e TCRB, respectivamente),
ou porções de ligação ao antígeno, e que é capaz de se ligar especifi- camente a um peptídeo ligado a uma molécula de MHC. Em algumas modalidades, o TCR está na forma ab. Normalmente, os TCRs que existem nas formas af e yô são geralmente estruturalmente similares, mas as células T que as expressam podem ter localizações ou fun- ções anatômicas distintas. Un TCR pode ser encontrado na superfície de uma célula ou na forma solúvel. Geralmente, um TCR é encontrado na superfície das células T (ou linfócitos T), onde geralmente é res- ponsável pelo reconhecimento de antígenos ligados às principais mo- léculas do complexo de histocompatibilidade (MHC).
[00419] Salvo indicação em contrário, o termo "TCR" deve ser en- tendido como abrangendo TCRs completos, bem como porções de ligação ao antígeno ou seus fragmentos de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, o TCR é um TCR intacto ou completo, incluindo TCRs na forma af ou yô. Em algumas modalidades, o TOR é uma porção de ligação ao antígeno que é menor que um TCR de tamanho natural, mas que se liga a um peptídeo específico ligado a uma molé- cula de MHC, como se liga a um complexo de peptídeo de MHC. Em alguns casos, uma porção ou fragmento de ligação ao antígeno de um TCR pode conter apenas uma porção dos domínios estruturais de um TCR inteiro ou intacto, mas ainda é capaz de ligar o epítopo peptídico, como o complexo de MHC-peptídeo, ao qual o TOR completo se liga. Em alguns casos, uma porção de ligação ao antígeno contém os do- mínios variáveis de um TCR, como a cadeia a variável e a cadeia B variável de um TCR, suficientes para formar um sítio de ligação para a ligação a um complexo específico de MHC-peptídeo. Geralmente, as cadeias variáveis de um TCR contêm regiões determinantes de com- plementaridade envolvidas no reconhecimento do peptídeo, MHC e/ou complexo de MHC-peptídeo.
[00420] Em algumas modalidades, os domínios variáveis do TOR contêm loops hipervariáveis, ou regiões determinantes de complemen- taridade (CDRs), que geralmente são os principais contribuintes para o reconhecimento de antígenos e capacidades e especificidade de liga- ção. Em algumas modalidades, uma CDR de um TCR ou uma combi- nação dos mesmos forma todo ou substancialmente todo o sítio de ligação ao antígeno de uma dada molécula de TCR. As várias CDRs dentro de uma região variável de uma cadeia de TCR geralmente são separadas por regiões de estrutura (FRs), que geralmente exibem me- nor variabilidade entre as moléculas de TOR em comparação com as CDRs (veja, por exemplo, Jores et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 87:9138, 1990; Chothia et al., EMBO J. 7:3745, 1988; veja, também Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27:55, 2003). Em algumas moda- lidades, a CDR3 é a principal CDR responsável pela ligação ou especi- ficidade do antígeno, ou é o mais importante entre as trêê CDRs em uma determinada região variável do TOR para reconhecimento do an- tígeno e/ou para interação com a porção peptídica processada do pep- tídeo-MHC complexo. Em alguns contextos, a CDR1 da cadeia alfa pode interagir com a parte N-terminal de certos peptídeos antigênicos. Em alguns contextos, CDR1 da cadeia beta pode interagir com a parte C-terminal do peptídeo. Em alguns contextos, a CDR2 contribui mais fortemente para ou é a principal CDR responsável pela interação ou pelo reconhecimento da porção MHC do complexo de MHC-peptídeo. Em algumas modalidades, a região variável da cadeia B pode conter uma região hipervariável adicional (CDR4 ou HVR4), que geralmente está envolvida na ligação de superantígenos e não no reconhecimento de antígenos (Kotb (1995) Clinical Microbiology Reviews, 8:411-426).
[00421] Em algumas modalidades, um TCR também pode conter um domínio constante, um domínio transmembranar e/ou uma cauda citoplasmática curta (veja, por exemplo, Janeway et al., Immunobio- logy: The Immune System in Health and Disease, 3rd Ed., Current Bio-
logy Publications, por exemplo, 4:33, 1997). Em alguns aspectos, cada cadeia do TOR pode possuir um domínio variável da imunoglobulina N-terminal, um domínio constante da imunoglobulina, uma região transmembranar e uma cauda citoplasmática curta na extremidade C- terminal. Em algumas modalidades, um TCR está associado a proteí- nas invariantes do complexo CD3 envolvidas na mediação da transdu- ção de sinal.
[00422] Em algumas modalidades, uma cadeia de TOR contém um ou mais domínios constantes. Por exemplo, a porção extracelular de uma determinada cadeia de TCR (por exemplo, cadeia a ou cadeia 8) pode conter dois domínios do tipo imunoglobulina, como um domínio variável (por exemplo, Va ou VB; tipicamente aminoácidos 1 a 116 com base no número de Kabat et a/., “Sequences of Proteins of Immunolo- gical Interest, U.S. Dept. Health and Human Services, Public Health Service National Institutes of Health, 1991, 5º ed.) e um domínio cons- tante (por exemplo, domínio constante da cadeia a ou Ca, normalmen- te posições 117 a 259 da cadeia com base na numeração de Kabat ou domínio constante da cadeia B ou CB, geralmente posições 117 a 295 da cadeia baseada em Kabat) adjacente a membrana celular. Por exemplo, em alguns casos, a porção extracelular do TCR formada pe- las duas cadeias contém dois domínios constantes distais à membrana e dois domínios variáveis distantes à membrana, cujos domínios variá- veis contêm CDRs. O TCR pode conter sequências de conexão curtas nas quais um resíduo de cisteína forma uma ligação de dissulfeto, li- gando assim as duas cadeias do TOR. Em algumas modalidades, um TCR pode ter um resíduo de cisteína adicional em cada uma das ca- deias a e B, de modo que o TCR contenha duas ligações de dissulfeto nos domínios constantes.
[00423] Em algumas modalidades, as cadeias de TOR contêm um domínio transmembranar. Em algumas modalidades, o domínio trans-
membranar é carregado positivamente. Em alguns casos, a cadeia de TCR contém uma cauda citoplasmática. Em alguns casos, a estrutura permite que o TCR se associe a outras moléculas como CD3 e suas subunidades. Por exemplo, um TCR contendo domínios constantes com uma região transmembranar pode ancorar a proteína na mem- brana celular e associar-se a subunidades invariantes do aparelho de sinalização de CD3 ou complexo. As caudas intracelulares das subu- nidades de sinalização de CD3 (por exemplo, cadeias CD3y, CD35, CD3e e CD36) contêm um ou mais motivos de ativação com base em tirosina ou imunorreceptores ou ITAM envolvidos na capacidade de sinalização do complexo de TCR.
[00424] Em algumas modalidades, o TOR pode ser um heterodíme- ro de duas cadeias a e B (ou opcionalmente y e 5) ou pode ser uma construção de TCR de cadeia única. Em algumas modalidades, o TOR é um heterodímero contendo duas cadeias separadas (cadeias a e B ou cadeias y e 5) que estão ligadas, como por uma ligação de dissulfe- to ou ligações de dissulfeto.
[00425] Em algumas modalidades, o TOR pode ser gerado a partir de uma (s) sequência (s) de TCR conhecida (s), como sequências de cadeias Va, B, para as quais uma sequência de codificação substanci- almente completa está facilmente disponível. Os métodos para obter sequências de TCR de tamanho natural, incluindo sequências da ca- deia V, de fontes celulares são bem conhecidos. Em algumas modali- dades, os ácidos nucleicos que codificam o TOR podem ser obtidos a partir de uma variedade de fontes, como por amplificação por reação em cadeia da polimerase (PCR) de ácidos nucleicos que codificam TCR dentro ou isolados de uma determinada célula ou células, ou sín- tese de sequências de DNA de TCR publicamente disponível.
[00426] Em algumas modalidades, os receptores recombinantes incluem TCRs e/ou TCRs recombinantes clonados a partir de células T de ocorrência natural. Em algumas modalidades, um clone de células T de alta afinidade para um antígeno alvo (por exemplo, um antígeno de câncer) é identificado, isolado de um paciente e introduzido nas cé- lulas. Em algumas modalidades, o clone de TOR para um antígeno alvo foi gerado em camundongos transgênicos modificados com genes do sistema imunológico humano (por exemplo, o sistema de antígeno leucocitário humano, ou HLA). Veja, por exemplo, antígenos tumorais (veja, por exemplo, Parkhurst et a/. (2009) Clin Cancer Res. 15:169— 180 e Cohen et a/. (2005) J. Immunol. 175: 5799-5808. Em algumas modalidades, exibição de fagos é usado para isolar TOCRs contra um antígeno alvo (veja, por exemplo, Varela-Rohena et al. (2008) Nat Med. 14:1390-1395 e Li (2005) Nat Biotechnol. 23: 349—354.
[00427] Em algumas modalidades, o TCR é obtido a partir de uma fonte biológica, como células de uma célula T (por exemplo, célula T citotóxica), hibridomas de células T ou outra fonte disponível publica- mente. Em algumas modalidades, as células T podem ser obtidas a partir de células isoladas in vivo. Em algumas modalidades, o TCR é um TCR timidamente selecionado. Em algumas modalidades, o TCR é um TCR restrito a neoepitopos. Em algumas modalidades, as células T podem ser um hibridoma ou clone de célula T cultivado. Em algumas modalidades, o TCR ou sua porção de ligação ao antígeno pode ser gerado sinteticamente a partir do conhecimento da sequência do TCR.
[00428] Em algumas modalidades, o TCR é gerado a partir de um TCR identificado ou selecionado a partir do rastreamento de uma bibli- oteca de TCRs candidatos contra um antígeno polipeptídico alvo ou seu epítopo de célula T alvo. As bibliotecas de TOR podem ser gera- das por amplificação do repertório de Va e VB de células T isoladas de um indivíduo, incluindo células presentes em PBMCs, baço ou outro órgão linfoide. Em alguns casos, as células T podem ser amplificadas a partir de linfócitos infiltrantes tumoraises (TILs). Em algumas modali-
dades, as bibliotecas de TOR podem ser geradas a partir de células CD4* ou CD8*. Em algumas modalidades, os TOCRs podem ser amplifi- cados a partir de uma fonte de células T de um indivíduo saudável normal, isto é, bibliotecas normais de TOR. Em algumas modalidades, os TCRs podem ser amplificados a partir de uma fonte de células T de um indivíduo doente, isto é, bibliotecas de TOR doentes. Em algumas modalidades, os iniciadores degenerados são usados para amplificar o repertório genético de Va e VB, como por RT-PCR em amostras, como células T, obtidas de seres humanos. Em algumas modalidades, as bibliotecas scTv podem ser montadas a partir de bibliotecas Va e VB virgens nas quais os produtos amplificados são clonados ou montados para serem separados por um ligante. Dependendo da fonte do indiví- duo e das células, as bibliotecas podem ser específicas do alelo HLA. Alternativamente, em algumas modalidades, as bibliotecas de TCR podem ser geradas por mutagênese ou diversificação de uma molécu- la de TCR parental ou de andaime. Em alguns aspectos, os TOCRs são indivíduos a evolução direcionada, como por mutagênese, por exem- plo, da cadeia a ou B. Em alguns aspectos, resíduos específicos nas CDRs do TCR são alterados. Em algumas modalidades, os TCRs se- lecionados podem ser modificados por maturação por afinidade. Em algumas modalidades, as células T específicas do antígeno podem ser selecionadas, como por meio de rastreamento para avaliar a atividade dos CTL contra o peptídeo. Em alguns aspectos, TOCRs, por exemplo, presente nas células T específicas do antígeno, pode ser selecionado, como por atividade de ligação, por exemplo, afinidade ou avidez parti- cular para o antígeno.
[00429] Em algumas modalidades, o TOR ou sua porção de ligação ao antígeno é aquele que foi modificado ou construído. Em algumas modalidades, métodos de evolução direcionada são usados para gerar TCRs com propriedades alteradas, como com maior afinidade para um complexo MHC-peptídeo específico. Em algumas modalidades, a evo- lução direcionada é alcançada por métodos de exibição, incluindo, mas não limitado a, exibição de leveduras (Holler et a/., (2003) Nat Immunol, 4, 55-62; Holler et a/., (2000) Proc Natl Acad Sci USA, 97, 5387-92), exibição de fagos (Li et a/., (2005) Nat Biotechnol, 23, 349- 54) ou exibição de células T (Chervin et al., (2008) J Immunol Me- thods, 339, 175 -84). Em algumas modalidades, os métodos de exibi- ção envolvem construção ou modificação de um TCR conhecido, de origem ou referência. Por exemplo, em alguns casos, um TCR do tipo selvagem pode ser usado como um modelo para produzir TORs muta- genizados nos quais em um ou mais resíduos das CDRs são mutadas, e mutantes com uma propriedade alterada desejada, como maior afi- nidade por um antígeno alvo desejado, são selecionados.
[00430] Em algumas modalidades, peptídeos de um polipeptídeo alvo para uso na produção ou geração de um TCR de interesse são conhecidos ou podem ser facilmente identificados. Em algumas moda- lidades, os peptídeos adequados para uso na geração de TCRs ou porções de ligação ao antígeno podem ser determinados com base na presença de um motivo restrito a HLA em um polipeptídeo alvo de inte- resse, como um polipeptídeo alvo no presente documento descrito. Em algumas modalidades, os peptídeos são identificados usando modelos de previsão de computador disponíveis. Em algumas modalidades, para prever sítios de ligação ao MHC classe |, esses modelos incluem, mas não estão limitados a, ProPred1 (Singh e Raghava (2001) Bioin- formatics 17 (12): 1236-1237 e SYFPEITHI (veja, Schuler et a/., (2007) Immunoinformtics Methods in Molecular Biology, 409 (1): 75-93, 2007. Em algumas modalidades, o epítopo restrito ao MHC é o HLA-A0201, que é expresso em cerca de 39-46% de todos os caucasianos e, por- tanto, representa um escolha adequada de antígeno MHC para uso na preparação de um TCR ou outra molécula de ligação ao MHC-
peptídeo.
[00431] Motivos de ligação ao HLA-A0201 e os sítios de clivagem para proteassomas e imunoproteassomas usando modelos de previ- são por computador. Para prever sítios de ligação de MHC classe |, esses modelos incluem, mas não estão limitados a, ProPred1 (descrito em mais detalhes em Singh e Raghava, ProPred: previsão de sítios de ligação a HLA-DR. BIOINFORMATICS 17 (12): 1236-1237 2001) e SYFPEITHI (veja, Schuler et al., SYFPEITHI, Database for Searching and T-Cell Epitope Prediction. in Immunoinformatics Methods in Mo- lecular Biology, vol 409 (1): 75-93 2007)
[00432] Em algumas modalidades, o TOR ou sua porção de ligação ao antígeno pode ser uma proteína natural produzida de forma recom- binante ou uma forma mutada da mesma na qual uma ou mais propri- edades, como característica de ligação, foram alteradas. Em algumas modalidades, um TCR pode ser derivado de uma de várias espécies animais, como humano, camundongo, rato ou outro mamífero. Um TCR pode estar ligado a célula ou na forma solúvel. Em algumas mo- dalidades, para fins dos métodos fornecidos, o TCR está na forma |i- gada à célula, expressa na superfície de uma célula.
[00433] Em algumas modalidades, o TOR é um TCR de tamanho natural. Em algumas modalidades, o TCR é uma porção de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, o TCR é um TCR dimérico (ATCR). Em algumas modalidades, o TOR é um TCR de cadeia única (sc-TCR). Em algumas modalidades, um dTCR ou scTCR tem as es- truturas — descritas em WO 03/0207638, WO 04/033685, WOZ2011/044186.
[00434] Em algumas modalidades, o TOR contém uma sequência correspondente à sequência transmembranar. Em algumas modalida- des, o TCR contém uma sequência correspondente às sequências ci- toplasmáticas. Em algumas modalidades, o TCR é capaz de formar um complexo de TCR com CD3. Em algumas modalidades, qualquer um dos TCRs, incluindo um dTCR ou scTCR, pode ser ligado a domí- nios de sinalização que produzem um TCR ativo na superfície de uma célula T. Em algumas modalidades, o TCR é expresso na superfície das células.
[00435] Em algumas modalidades, um dTCR contém um primeiro polipeptídeo em que uma sequência correspondente a uma sequência da região variável da cadeia a de TCR é fundida ao N-terminal de uma sequência correspondente a uma sequência extracelular da região constante da cadeia a de TCR e um segundo polipeptídeo em que uma sequência correspondente a uma sequência da região variável da cadeia B de TCR é fundida com o N-terminal uma sequência corres- pondente a uma sequência extracelular da região constante da cadeia B de TCR, sendo o primeiro e o segundo polipeptídeos ligados por uma ligação de dissulfeto. Em algumas modalidades, a ligação pode corresponder à ligação de dissulfeto intercadeia nativa presente nos aB TCRs diméricos nativos. Em algumas modalidades, as ligações de dissulfeto intercadeia não estão presentes em um TCR nativo. Por exemplo, em algumas modalidades, uma ou mais cisteínas podem ser incorporadas nas sequências extracelulares da região constante do par de polipeptídeos de dTCR. Em alguns casos, uma ligação de dis- sulfeto nativa e uma não nativa pode ser desejável. Em algumas mo- dalidades, o TOR contém uma sequência transmembranar para anco- rar na membrana.
[00436] Em algumas modalidades, um dTCR contém uma cadeia a de TCR contendo um domínio a variável, um domínio a constante e um primeiro motivo de dimerização ligado ao C-terminal do domínio a constante e uma cadeia À de TOR que compreende um domínio à va- riável, um domínio B constante e um primeiro motivo de dimerização anexado ao C-terminal do domínio B constante, em que o primeiro e o segundo motivos de dimerização interagem facilmente para formar uma ligação covalente entre um aminoácido no primeiro motivo de di- merização e um aminoácido no segundo motivo de dimerização que liga a cadeia de TCR a e a cadeia É de TCR.
[00437] Em algumas modalidades, o TOR é um scTCR. Tipicamen- te, um scTCR pode ser gerado usando métodos conhecidos, Veja, por exemplo, Soo Hoo, W. F. et al., PNAS (USA) 89, 4759 (1992); Wulfing, C. e Pluckthun, A., J. Mol. Biol. 242, 655 (1994); Kurucz, |. et al, PNAS (USA) 90 3830 (1993); PCT publicado internacional nos. WO 96/13593, WO 96/18105, WO99/60120, WO99/18129, WO 03/020763, WOZ2011/044186; e Schlueter, C.J. et al., J. Mol. Biol. 256, 859 (1996). Em algumas modalidades, um scTCR contém uma ligação intercadeia de dissulfeto não nativa introduzida para facilitar a associação das ca- deias de TCR (veja, por exemplo, a publicação internacional publicada PCT No. WO 03/020763). Em algumas modalidades, um scTCR é um TCR truncado não ligado a dissulfeto no qual zíperes de leucina hete- rólogos fundidos com seus C-terminais facilitam a associação de ca- deias (veja, por exemplo, o PCT publicado internacional No. WO99/ 60120). Em algumas modalidades, um scTCR contém um domínio va- riável de TORa covalentemente ligado a um domínio variável de TORB por meio de um ligante peptídico (veja, por exemplo, PCT publicado internacional No. WO99/18129).
[00438] Em algumas modalidades, um scTCR contém um primeiro segmento constituído por uma sequência de aminoácidos correspon- dente a uma região variável da cadeia a de TOR, um segundo seg- mento constituído por uma sequência de aminoácidos correspondente a uma sequência da região variável da cadeia B de TCR fundida ao N- terminal de um sequência de aminoácidos correspondente a uma se- quência extracelular do domínio constante da cadeia B de TOR e uma sequência ligante que liga o C-terminal do primeiro segmento ao N-
terminal do segundo segmento.
[00439] Em algumas modalidades, um scTCR contém um primeiro segmento constituído por uma sequência de região variável da cadeia a fundida ao N-terminal de uma sequência de domínio constante ex- tracelular da cadeia a e um segundo segmento constituído por uma sequência de região variável da cadeia a fundida ao N-terminal de uma sequência extracelular e constante da cadeia extracelular da se- quência B e, opcionalmente, uma sequência ligante que liga o C- terminal do primeiro segmento ao N-terminal do segundo segmento.
[00440] Em algumas modalidades, um scTCR contém um primeiro segmento constituído por uma sequência de região variável de cadeia B de TCR fundida com o N-terminal de uma sequência de domínio constante extracelular de cadeia B e um segundo segmento constituí- do por uma sequência de região variável de cadeia a fundida com o N- terminal de uma constante constante extracelular da cadeia a e se- quência transmembranar e, opcionalmente, uma sequência ligante que liga o C-terminal do primeiro segmento ao N-terminal do segundo segmento.
[00441] Em algumas modalidades, o ligante de um scTCRs que liga o primeiro e o segundo segmentos de TCR pode ser qualquer ligante capaz de formar uma fita de polipeptídeo única, mantendo a especifi- cidade de ligação ao TCR. Em algumas modalidades, a sequência do ligante pode, por exemplo, ter a fórmula -P-AA-P-, em que P é prolina e AA representa uma sequência de aminoácidos em que os aminoáci- dos são glicina e serina. Em algumas modalidades, o primeiro e o se- gundo segmentos são emparelhados, de modo que suas sequências de regiões variáveis sejam orientadas para essa ligação. Portanto, em alguns casos, o ligante tem um comprimento suficiente para abranger a distância entre o C-terminal do primeiro segmento e o N-terminal do segundo segmento, ou vice-versa, mas não é muito longo para blo-
quear ou reduzir a ligação do scTCR para o ligante alvo. Em algumas modalidades, o ligante pode conter de 10 a 45 aminoácidos ou de cer- ca de 10 a 45 aminoácidos, como 10 a 30 aminoácidos ou 26 a 41 re- síduos de aminoácidos, por exemplo, 29, 30, 31 ou 32 aminoácidos. Em algumas modalidades, o ligante tem a fórmula -PGGG-(SGGGG) 5-P- em que P é prolina, G é glicina e S é serina (SEQ ID NO: 16). Em algumas modalidades, o ligante tem a sequência GSADDAKKDAAK- KDGKS (SEQ ID NO: 17)
[00442] Em algumas modalidades, o scTCR contém uma ligação de dissulfeto covalente que liga um resíduo da região de imunoglobulina do domínio constante da cadeia a a um resíduo da região de imuno- globulina do domínio constante da cadeia B. Em algumas modalida- des, a ligação de dissulfeto intercadeia em um TCR nativo não está presente. Por exemplo, em algumas modalidades, uma ou mais cisteí- nas podem ser incorporadas nas sequências extracelulares da região constante do primeiro e do segundo segmentos do polipeptídeo ScTCR. Em alguns casos, uma ligação de dissulfeto nativa e uma não nativa pode ser desejável.
[00443] Em algumas modalidades de um dTCR ou sceTCR contendo ligações de dissulfeto intercadeias introduzidas, as ligações de dissul- feto nativas não estão presentes. Em algumas modalidades, a uma ou mais das cisteínas nativas que formam uma ligação de dissulfeto inter- cadeia nativa são substituídas por outro resíduo, como uma serina ou alanina. Em algumas modalidades, uma ligação de dissulfeto introdu- zida pode ser formada pela mutação de resíduos não-cisteína no pri- meiro e segundo segmentos em cisteína. As ligações de dissulfeto não-nativas exemplares de um TCR são descritas no PCT Internatio- nal publicado No. WOZ2006/000830.
[00444] Em algumas modalidades, o TCR ou seu fragmento de |i- gação ao antígeno exibe uma afinidade com uma constante de ligação de equilíbrio para um antígeno alvo entre ou entre cerca de 10º e 10? M e todos os valores e faixas individuais nele. Em algumas modalida- des, o antígeno alvo é um complexo de MHC-peptídeo ou ligante.
[00445] Em algumas modalidades, o ácido nucleico ou ácidos nu- cleicos que codificam um TCR, como as cadeias a e B, podem ser am- plificados por PCR, clonagem ou outros meios adequados e clonados em um vetor ou vetor de expressão adequado. O vetor de expressão pode ser qualquer vector de expressão recombinante adequado e po- de ser usado para transformar ou transfectar qualquer hospedeiro adequado. Os vetores adequados incluem aqueles modificados para propagação e expansão ou para expressão ou ambos, como plasmí- deos e vírus.
[00446] Em algumas modalidades, o vetor pode um vetor da série pUC (Fermentas Life Sciences), da série pBluescript (Stratagene, La- Jolla, Califórnia), da série pET (Novagen, Madison, Wis.), da série pGEX (Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden) ou da série pEX (Clon- tech, Palo Alto, Calif.). Em alguns casos, vetores de bacteriófagos, como AG10, AGT11, AZapll (Stratagene), AEMBL4 e ANM1149, tam- bém podem ser usados. Em algumas modalidades, os vetores de ex- pressão de plantas podem ser usados e incluem pBI01, pBI101.2, pBI101.3, pBIl121 e pBIN19 (Clontech). Em algumas modalidades, os vetores de expressão animal incluem pEUK-CI, pMAM e pMAMneo (Clontech). Em algumas modalidades, um vetor viral é usado, como um vetor retroviral.
[00447] Em algumas modalidades, os vetores de expressão recom- binantes podem ser preparados usando técnicas padrão de DNA re- combinante. Em algumas modalidades, os vetores podem conter se- quências reguladoras, como códons de iniciação e terminação da transcrição e translação, que são específicos ao tipo de hospedeiro (por exemplo, bactéria, fungo, planta ou animal) no qual o vetor deve ser introduzido, como apropriado e levando em consideração se o ve- tor é baseado em DNA ou RNA. Em algumas modalidades, o vetor po- de conter um promotor não nativo operacionalmente ligado à sequên- cia de nucleotídeos que codifica o TOR ou a porção de ligação ao an- tígeno (ou outra molécula de ligação ao peptídeo MHC). Em algumas modalidades, o promotor pode ser um promotor não viral ou um pro- motor viral, como um promotor de citomegalovírus (CMV), um promo- tor de SV40, um promotor de RSV e um promotor encontrado na repe- tição de terminal longo da célula-tronco de murino. Outros promotores conhecidos também são considerados.
[00448] Em algumas modalidades, para gerar um vetor que codifica um TCR, as cadeias a e B são amplificadas por PCR a partir de CcDONA total isolado de um clone de célula T que expressa o TCR de interesse e clonado em um vetor de expressão. Em algumas modalidades, as cadeias a e B são clonadas no mesmo vetor. Em algumas modalida- des, as cadeias a e B são clonadas em diferentes vetores. Em algu- mas modalidades, as cadeias a e B geradas são incorporadas a um retroviral, por exemplo, lentiviral, vetor.
4. Múltiplos direcionamentos
[00449] Em algumas modalidades, as células e métodos incluem estratégias de vários alvos, como a expressão de dois ou mais recep- tores geneticamente modificados na célula, cada um reconhecendo o mesmo ou um antígeno diferente e, tipicamente, cada um incluindo um componente de sinalização intracelular diferente. Essas estratégias de múltiplos direcionamentos são descritas, por exemplo, na Pub. de PCT WO 2014055668 A1 (descrevendo combinações de CARs ativadores e coestimuladores, por exemplo, direcionando dois antígenos diferentes presentes individualmente em alvo externo, por exemplo, células nor- mais, mas presentes apenas em células da doença ou condição a ser tratada) e Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5 (215) (2013) (descre-
vendo células de expressão de um CAR ativador e um inibidor, como aquelas nas quais o CAR ativador se liga a um antígeno expresso em células normais ou não doentes e nas células da doença ou condição a ser tratada, e o CAR inibidor liga-se a outro antígeno expresso ape- nas nas células normais ou células que não se deseja tratar).
[00450] Por exemplo, em algumas modalidades, as células incluem um receptor que expressa um primeiro receptor de antígeno genetica- mente modificado (por exemplo, CAR ou TCR) que é capaz de induzir um sinal de ativação na célula, geralmente mediante ligação específica ao antígeno reconhecido pelo primeiro receptor, por exemplo, um pri- meiro antígeno. Em algumas modalidades, a célula inclui ainda um se- gundo receptor de antígeno geneticamente modificado (por exemplo, CAR ou TCR), por exemplo, um receptor coestimulador quimérico, que é capaz de induzir um sinal coestimulador para a célula imune, geral- mente mediante ligação específica a um segundo antígeno reconheci- do pelo segundo receptor. Em algumas modalidades, o primeiro antí- geno e o segundo antígeno são os mesmos. Em algumas modalida- des, o primeiro antígeno e o segundo antígeno são diferentes.
[00451] Em algumas modalidades, o primeiro e/ou o segundo re- ceptores de antígeno geneticamente modificado (por exemplo, CAR ou TCR) é capaz de induzir um sinal de ativação para a célula. Em algu- mas modalidades, o receptor inclui um componente de sinalização in- tracelular contendo motivos de ITAM ou similares a ITAM. Em algumas modalidades, a ativação induzida pelo primeiro receptor envolve uma transdução de sinal ou alteração na expressão de proteínas na célula, resultando no início de uma resposta imune, como a fosforilação de ITAM e/ou o início da cascata de transdução de sinal mediada por ITAM, a formação de uma sinapse imunológica e/ou agrupamento de moléculas próximas ao receptor ligado (por exemplo, CD4 ou CDB8, etc.), ativação de um ou mais fatores de transcrição, como NF-KB e/ou
AP-1, e/ou indução da expressão gênica de fatores como citocinas, proliferação e/ou sobrevivência.
[00452] Em algumas modalidades, o primeiro e/ou o segundo re- ceptores incluem domínios de sinalização intracelular de receptores coestimuladores, como CD28, CD137 (4-1BB), OX40 e/ou ICOS. Em algumas modalidades, o primeiro e o segundo receptores incluem um domínio de sinalização intracelular de um receptor coestimulador que são diferentes. Em uma modalidade, o primeiro receptor contém uma região de sinalização coestimuladora de CD28 e o segundo receptor contém uma região de sinalização coestimuladora de 4-1BB ou vice- versa.
[00453] Em algumas modalidades, o primeiro e/ou o segundo re- ceptores incluem um domínio de sinalização intracelular contendo mo- tivos similares a ITAM ou ITAM e um domínio de sinalização intracelu- lar de um receptor coestimulador.
[00454] Em algumas modalidades, o primeiro receptor contém um domínio de sinalização intracelular contendo motivos de ITAM ou ITAM e o segundo receptor contém um domínio de sinalização intracelular de um receptor coestimulador.O sinal coestimulador em combinação com o sinal de ativação induzido na mesma célula é aquele que resul- ta em uma resposta imune, como uma resposta imune robusta e pro- longada, como aumento da expressão gênica, secreção de citocinas e outros fatores e funções efetoras mediadas por células T, como a mor- te celular.
[00455] Em algumas modalidades, nem a ligação do primeiro recep- tor isoladamente nem a ligação do segundo receptor isoladamente in- duz uma resposta imune robusta. Em alguns aspectos, se apenas um receptor é ligado, a célula torna-se tolerada ou não responde ao antí- geno, ou inibida, e/ou não é induzida a proliferar ou secretar fatores ou desempenhar funções efetoras. Em algumas dessas modalidades, no entanto, quando a pluralidade de receptores é ligada, como no encon- tro de uma célula que expressa o primeiro e o segundo antígenos, é alcançada uma resposta desejada, como ativação ou estimulação imune completa, por exemplo, como indicado pela secreção de recep- tores, uma ou mais citocinas, proliferação, persistência e/ou realização de uma função efetora imunológica, como a morte citotóxica de uma célula alvo.
[00456] Em algumas modalidades, as células de expressão do re- ceptor recombinante incluem inibidores de CARs (iICARs, veja, Fedo- rov et al., Sci. Transl. Medicine, 5 (215) (2013), como um CAR que re- conhece um antígeno diferente daquele associado a e/ou específico para a doença ou condição pela qual um sinal de ativação liberado através do CAR alvo da doença é diminuído ou inibido pela ligação do CAR inibidor ao seu ligante, por exemplo, para reduzir os efeitos fora do alvo.
[00457] Em algumas modalidades, os dois receptores induzem, respectivamente, um ativação e um sinal inibidor para a célula, de mo- do que a ligação de um dos receptores ao seu antígeno ativa a célula ou induz uma resposta, mas a ligação do segundo receptor inibidor ao seu antígeno induz um sinal que suprime ou amortece essa resposta. Exemplos são combinações de CARs ativadores e inibidores de CARs ou iCARs. Essa estratégia pode ser usada, por exemplo, na qual o CAR ativador se liga a um antígeno expresso em uma doença ou con- dição, mas que também é expresso em células normais, e o receptor inibidor se liga. a um antígeno separado que é expresso nas células normais, mas não nas células da doença ou condição.
[00458] Em alguns aspectos, o receptor quimérico é ou inclui um CAR inibidor (por exemplo, iCAR) e inclui componentes intracelulares que amortecem ou suprimem uma resposta imune, como uma respos- ta promovida por ITAM e/ou coestimuladora na célula. Exemplos de tais componentes de sinalização intracelular são aqueles encontrados nas moléculas do ponto de verificação imune, incluindo receptores de PD-1, CTLA4, LAG3, BTLA, OX2R, TIM-3, TIGIT, LAIR-1, PGEZ2, re- ceptores EP2/4 de adenosina, incluindo A2AR. Em alguns aspectos, a célula modificada inclui um CAR inibidor, incluindo um domínio de si- nalização ou derivado de uma molécula inibidora, de modo que serve para amortecer a resposta da célula, por exemplo, aquela induzida por um CAR ativador e/ou coestimulador.
[00459] Em algumas modalidades, a estratégia de segmentação múltipla é empregada em um caso em que um antígeno associado a uma doença ou condição específica é expresso em uma célula não doente e/ou é expresso na própria célula modificada, de forma transi- tória (por exemplo, mediante estimulação em associação com enge- nharia genética) ou permanentemente. Nesses casos, ao exigir a liga- ção de dois receptores de antígeno separados e individualmente es- pecíficos, a especificidade, a seletividade e/ou a eficácia podem ser melhoradas.
[00460] Em algumas modalidades, a pluralidade de antígenos, por exemplo, o primeiro e o segundo antígenos, são expressos na célula, tecido ou doença ou condição alvo, como na célula cancerígena. Em alguns aspectos, a célula, tecido, doença ou condição é mieloma múl- tiplo ou uma célula de mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, um ou mais da pluralidade de antígenos geralmente também é expresso em uma célula que não se deseja atingir com a terapia celular, como uma célula ou tecido normal ou não doente, e/ou as próprias células modificadas. Em tais modalidades, ao exigir a ligação de múltiplos re- ceptores para obter uma resposta da célula, é alcançada especificida- de e/ou eficácia. B. CÉLULAS E PREPARAÇÃO DE CÉLULAS PARA ENGENHARIA
GENÉTICA
[00461] Entre as células de expressão dos receptores e administra- das pelos métodos fornecidos estão as células modificadas. A enge- nharia genética geralmente envolve a introdução de um ácido nucleico que codifica o componente recombinante ou modificado em uma com- posição contendo as células, como por transdução, transfecção ou transformação retroviral.
[00462] Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos são heteró- logos, ou seja, normalmente não estão presentes em uma célula ou amostra obtida da célula, como uma obtida de outro organismo ou cé- lula, que por exemplo, normalmente não é encontrado na célula que está sendo modificada e/ou um organismo do qual essa célula é deri- vada. Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos não ocorrem na- turalmente, como um ácido nucleico não encontrado na natureza, in- cluindo um que compreende combinações quiméricas de ácidos nu- cleicos que codificam vários domínios de vários tipos de células dife- rentes.
[00463] As células geralmente são células eucarióticas, como célu- las de mamíferos, e tipicamente são células humanas. Em algumas modalidades, as células são derivadas do sangue, medula óssea, linfa ou órgãos linfoides, são células do sistema imunológico, como células da imunidade inata ou adaptativa, por exemplo, células mieloides ou linfoides, incluindo linfócitos, tipicamente células T e/ou células NK. Outras células exemplares incluem células tronco, como células tronco multipotentes e pluripotentes, incluindo células tronco pluripotentes induzidas (iPSCs). As células são tipicamente células primárias, como as isoladas diretamente de um indivíduo e/ou isoladas de um indivíduo e congeladas. Em algumas modalidades, as células incluem um ou mais subconjuntos de células T ou outros tipos de células, como popu- lações inteiras de células T, células CD4*, células CD8* e subpopula- ções das mesmas, como as definidas por função, estado de ativação,
maturidade, potencial para capacidade de diferenciação, expansão, recirculação, localização e/ou persistência, especificidade de antígeno, tipo de receptor de antígeno, presença em um órgão ou compartimen- to específico, perfil de secreção de marcador ou citocina e/ou grau de diferenciação. Com referência ao indivíduo a ser tratado, as células podem ser alogênicas e/ou autólogas. Entre os métodos, incluem-se métodos prontos para uso. Em alguns aspectos, como em tecnologias prontas para uso, as células são pluripotentes e/ou multipotentes, co- mo células tronco, como células tronco pluripotentes induzidas (iPSCs). Em algumas modalidades, os métodos incluem isolar células do indivíduo, preparando, processando, cultivando e/ou projetando-os e reintroduzindo-os no mesmo assunto, antes ou depois da criopreser- vação.
[00464] Entre os subtipos e subpopulações de células T e/ou CD4* e/ou CD8*, estão células T (Tv) virgens, células T efetoras (Terr), célu- las T de memória e seus subtipos, como T de memória de células tronco (TSCM), T de memória central (TCM), T de memória efetiva (TEM) ou células T de memória efetiva terminalmente diferenciada, linfócitos infiltrantes tumorais (TIL), células T imaturas, células T madu- ras, células T auxiliares, células T citotóxicas, células T invariantes as- sociadas à mucosa (CIT), células T reguladoras adaptativas e de ocor- rência natural (Treg), células T auxiliares, como células TH1, células TH2, células TH3, células TH17, células TH17, células TH9, células TH22, células T auxiliares foliculares, células T alfa/beta e células T delta/gama.
[00465] Em algumas modalidades, as células são células extermi- nadoras naturais (NK). Em algumas modalidades, as células são mo- nócitos ou granulócitos, por exemplo, células mieloides, macrófagos, neutrófilos, células dendríticas, mastócitos, eosinófilos e/ou basófilos.
[00466] Em algumas modalidades, as células incluem um ou mais ácidos nucleicos introduzidos por engenharia genética e, assim, ex- pressam produtos recombinantes ou geneticamente modificados por esses ácidos nucleicos. Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos são heterólogos, ou seja, normalmente não estão presentes em uma célula ou amostra obtida da célula, como uma obtida de outro orga- nismo ou célula, que por exemplo, normalmente não é encontrado na célula que está sendo modificada e/ou um organismo do qual essa cé- lula é derivada. Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos não ocorrem naturalmente, como um ácido nucleico não encontrado na na- tureza, incluindo um que compreende combinações quiméricas de áci- dos nucleicos que codificam vários domínios de vários tipos de células diferentes.
[00467] Em algumas modalidades, a preparação das células modifi- cadas inclui uma ou mais etapas de cultura e/ou preparação. As célu- las para introdução do ácido nucleico que codifica o receptor transgê- nico, como o CAR, podem ser isoladas de uma amostra, como uma amostra biológica, por exemplo, um obtido ou derivado de um indiví- duo. Em algumas modalidades, o indivíduo do qual a célula é isolada é aquele que tem a doença ou condição ou precisa de uma terapia celu- lar ou na qual a terapia celular será administrada. O indivíduo em al- gumas modalidades é um humano que precisa de uma intervenção terapêutica específica, como a terapia celular adotiva para a qual as células estão sendo isoladas, processadas e/ou modificadas.
[00468] “Por conseguinte, as células em algumas modalidades são células primárias, por exemplo, células humanas primárias. As amos- tras incluem tecido, fluido e outras amostras colhidas diretamente do indivíduo, bem como amostras resultantes de uma ou mais etapas de processamento, como separação, centrifugação, engenharia genética (por exemplo, transdução com vetor viral), lavagem e/ou incubação.A amostra biológica pode ser uma amostra obtida diretamente de uma fonte biológica ou de uma amostra processada. As amostras biológi- cas incluem, mas não estão limitadas a fluidos corporais, tais como sangue, plasma, soro, líquido cefalorraquidiano, líquido sinovial, urina e suor, amostras de tecidos e órgãos, incluindo amostras processadas delas derivadas.
[00469] Em alguns aspectos, a amostra da qual as células são deri- vadas ou isoladas é sangue ou é uma amostra derivada de sangue, ou é ou é derivada de um produto de aférese ou leucaférese. As amostras exemplares incluem sangue total, células mononucleares do sangue periférico (PBMCs), leucócitos, medula óssea, timo, biópsia de tecido, tumor, leucemia, linfoma, linfonodo, tecido linfoide associado ao intes- tino, tecido linfoide associado à mucosa, baço, outros tecidos linfoides, fígado, pulmão, estômago, intestino, cólon, rim, pâncreas, mama, os- so, próstata, colo do útero, testículos, ovários, amígdalas ou outro ór- gão e/ou células delas derivadas. As amostras incluem, no contexto da terapia celular, por exemplo, terapia celular adotiva, amostras de fon- tes autólogas e alogênicas.
[00470] Em algumas modalidades, as células são derivadas de |i- nhagens celulares, por exemplo, linhagens de células T. As células em algumas modalidades são obtidas a partir de uma fonte xenogênica, por exemplo, de camundongo, rato, primata não humano e porco.
[00471] Em algumas modalidades, o isolamento das células inclui uma ou mais etapas de preparação e/ou separação por células sem afinidade. Em alguns exemplos, as células são lavadas, centrifugadas e/ou incubadas na presença de um ou mais reagentes, por exemplo, para remover componentes indesejados, enriquecer para componen- tes desejados, lisar ou remover células sensíveis a reagentes especiífi- cos. Em alguns exemplos, as células são separadas com base em uma ou mais propriedades, como densidade, propriedades aderentes, tamanho, sensibilidade e/ou resistência a componentes particulares.
[00472] Em alguns exemplos, as células do sangue circulante de um indivíduo são obtidas, por exemplo, por aférese ou leucaférese. As amostras, em alguns aspectos, contêm linfócitos, incluindo células T, monócitos, granulócitos, células B, outros glóbulos brancos nucleados, glóbulos vermelhos e/ou plaquetas e, em alguns aspectos, contêm ou- tras células que não glóbulos vermelhos e plaquetas.
[00473] Em algumas modalidades, as células sanguíneas coletadas do indivíduo são lavadas, por exemplo, para remover a fração plasmá- tica e colocar as células em um tampão ou meio apropriado para as etapas de processamento subsequentes. Em algumas modalidades, as células são lavadas com solução salina tamponada com fosfato (PBS). Em algumas modalidades, a solução de lavagem não possui cálcio e/ou magnésio e/ou muitos ou todos os cátions divalentes. Em alguns aspectos, uma etapa de lavagem é realizada por uma centrífu- ga semiautomatizada de "fluxo contínuo" (por exemplo, o processador de células Cobe 2991, Baxter) de acordo com as instruções do fabri- cante. Em alguns aspectos, uma etapa de lavagem é realizada por fil- tração de fluxo tangencial (TFF) de acordo com as instruções do fabri- cante. Em algumas modalidades, as células são ressuspensas em uma variedade de tampões biocompatíveis após a lavagem, como, por exemplo, PBS livre de Ca**/Mg**. Em certas modalidades, os compo- nentes de uma amostra de células sanguíneas são removidos e as cé- lulas ressuspensas diretamente nos meios de cultura.
[00474] Em algumas modalidades, os métodos incluem métodos de separação de células com base na densidade, como a preparação de glóbulos brancos a partir de sangue periférico, lisando os glóbulos vermelhos e centrifugando através de um gradiente de Percoll ou Fi- coll.
[00475] Em algumas modalidades, os métodos de isolamento inclu- em a separação de diferentes tipos de células com base na expressão ou presença na célula de uma ou mais moléculas específicas, como marcadores de superfície, por exemplo, proteínas de superfície, mar- cadores intracelulares ou ácido nucleico. Em algumas modalidades, qualquer método conhecido para separação com base em tais marca- dores pode ser usado. Em algumas modalidades, a separação é uma separação baseada em afinidade ou imunoafinidade. Por exemplo, o isolamento em alguns aspectos inclui a separação de células e popu- lações de células com base na expressão ou nível de expressão das células de um ou mais marcadores, tipicamente marcadores de super- fície celular, por exemplo, por incubação com um anticorpo ou parceiro de ligação que se liga especificamente a esses marcadores, seguido geralmente por etapas de lavagem e separação de células que se liga- ram ao anticorpo ou parceiro de ligação, daquelas células que não se ligaram ao anticorpo ou parceiro de ligação.
[00476] Tais etapas de separação podem ser baseadas na seleção positiva, na qual as células que ligaram os reagentes são retidas para uso posterior e/ou na seleção negativa, na qual as células que não se ligam ao anticorpo ou parceiro de ligação são retidas. Em alguns exemplos, ambas as frações são retidas para uso posterior. Em alguns aspectos, a seleção negativa pode ser particularmente útil quando não há anticorpo disponível que identifique especificamente um tipo de cé- lula em uma população heterogênea, de modo que a separação seja melhor realizada com base em marcadores expressos por células que não a população desejada.
[00477] A separação não precisa resultar em 100% de enriqueci- mento ou remoção de uma determinada população de células ou célu- las de expressão de um marcador específico. Por exemplo, seleção positiva ou enriquecimento de células de um tipo específico, como aquelas que expressam um marcador, refere-se ao aumento do núme- ro ou porcentagem de tais células, mas não precisa resultar em uma ausência completa de células que não expressam o marcador. Da mesma forma, seleção negativa, remoção ou depleção de células de um tipo específico, como aquelas que expressam um marcador, refe- re-se à diminuição do número ou porcentagem dessas células, mas não precisa resultar na remoção completa de todas essas células.
[00478] Em alguns exemplos, várias rodadas de etapas de separa- ção são realizadas, onde a fração selecionada positiva ou negativa- mente de uma etapa é submetida a outra etapa de separação, como uma seleção positiva ou negativa subsequente. Em alguns exemplos, uma única etapa de separação pode esgotar as células de expressão de vários marcadores simultaneamente, como incubando células com uma pluralidade de anticorpos ou parceiros de ligação, cada uma es- pecífica para um marcador direcionado para seleção negativa. Da mesma forma, vários tipos de células podem ser simultaneamente se- lecionados positivamente incubando células com uma pluralidade de anticorpos ou parceiros de ligação expressos nos vários tipos de célu- las.
[00479] Por exemplo, em alguns aspectos, subpopulações especifi- cas de células T, como células positivas ou expressando altos níveis de um ou mais marcadores de superfície, por exemplo, células T CD28*, CD62L*, COCR7*, CD27*, CD127*, CD4*, CD8*, CD45RA* e/ou CDA45RO" são isoladas por técnicas de seleção positiva ou negativa.
[00480] Por exemplo, as células T CD3*, CD28* podem ser selecio- nadas positivamente usando contas magnéticas conjugadas CD3/CD28 (por exemplo, expansor de células TDYNABEADSO M-450 CD3/CD28).
[00481] Em algumas modalidades, o isolamento é realizado por en- riquecimento para uma população celular específica por seleção posi- tiva, ou depleção de uma população celular específica, por seleção negativa. Em algumas modalidades, a seleção positiva ou negativa é realizada incubando células com um ou mais anticorpos ou outro agente de ligação que se ligam especificamente a um ou mais marca- dores de superfície expressos ou expressos (marcador *) em um nível relativamente mais alto (marcador alto) no positivo ou no negativo cé- lulas selecionadas, respectivamente.
[00482] Em algumas modalidades, as células T são são separados de uma amostra de PBMC por seleção negativa de marcadores ex- pressos em células não-T, como células B, monócitos ou outros glóbu- los brancos, como CD14. Em alguns aspectos, uma etapa de seleção de CD4* ou CD8* é usada para separar as células T citotóxicas CD8* e auxiliares CD4*. Essas populações de CD4* e CD8* podem ser clas- sificadas em subpopulações por seleção positiva ou negativa para Marcadores expressos ou expressos em um grau relativamente mais alto em uma ou mais subpopulações de células T virgens, de memória e/ou efetoras.
[00483] Em algumas modalidades, as células CD8* são ainda enri- quecidas ou depletadas de células tronco virgens, de memória central, de memória efetiva e/ou de células tronco de memória central, como por seleção positiva ou negativa com base em antígenos de superfície associados à respectiva subpopulação. Em algumas modalidades, o enriquecimento das células T da memória central (TCM) é realizado para aumentar a eficácia, como melhorar a sobrevivência a longo pra- zo, a expansão e/ou enxerto após a administração, o que em alguns aspectos é particularmente robusto nessas subpopulações. Veja Tera- kuraet al., Blood.1: 72-82 (2012); Wang et al., J. Immunother. 35 (9): 689-701 (2012). Em algumas modalidades, a combinação de células T CD8* enriquecidas com Tcwm e células T CD4* realça ainda mais a efi- cácia.
[00484] “Nas modalidades, as células T de memória estão presentes nos subconjuntos CD62L* e CD62L' dos linfócitos do sangue periférico
CD8*. A PBMC pode ser enriquecida ou depletada das frações CD62L- CD8* e/ou CD62L*CD8*, como o uso de anticorpos anti-CD8 e anti- CD62L.
[00485] Em algumas modalidades, o enriquecimento para células T de memória central (TCM) é baseado na expressão superficial positiva ou alta de CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3 e/ou CD127; em al- guns aspectos, é baseado na seleção negativa para células que ex- pressam ou altamente expressam CD45RA e/ou granzima B. Em al- guns aspectos, o isolamento de uma população de CD8+ enriquecida para células TOM é realizado pela depleção de células que expressam CD4, CD14, CD45RA, e seleção ou enriquecimento positivo para célu- las que expressam CD62L. Em um aspecto, o enriquecimento das cé- lulas T de memória central (Tcm) é realizado começando com uma fra- ção negativa de células selecionadas com base na expressão de CDA, que é submetida a uma seleção negativa com base na expressão de CD14 e CD45RA e uma seleção positiva com base em CD62L. Estas seleções, em alguns aspectos, são realizadas simultaneamente e em outros aspectos, são realizadas sequencialmente, em qualquer ordem. Em alguns aspectos, a mesma etapa de seleção baseada em expres- são de CD4 usada na preparação da população ou subpopulação de células CD8*, também é usada para gerar a população ou subpopula- ção de células CD4*, de modo que ambas frações positivas e negati- vas da separação baseada em CD4 sejam retidas e usados nas eta- pas subsequentes dos métodos, seguindo opcionalmente uma ou mais outras etapas de seleção positivas ou negativas.
[00486] Em um exemplo específico, uma amostra de PBMCs ou outra amostra de glóbulos brancos é submetida à seleção de células CD4*, onde ambas frações positiva e negativa são mantidas. A fração negativa é, então, submetida à seleção negativa com base na expres- são de CD14 e CD45RA ou CD19 e seleção positiva com base em uma característica marcadora das células T de memória central, como CD62L ou CCR7, onde as seleções positiva e negativa são realizadas em qualquer ordem.
[00487] As células auxiliares CD4* T são classificadas em células virgens, de memória central e efetoras, identificando-se as populações de células que têm antígenos na superfície celular. Os linfócitos CD4* podem ser obtidos por métodos padrão. Em algumas modalidades, os linfócitos CD4* T virgens, são células T CD45RO-, CD45RA*, CD62L*, CD4*. Em algumas modalidades, as células CD4* de memória central são CD62L* e CD45RO*. Em algumas modalidades, as células CD4* efetoras são CD62L- e CD45RO-.
[00488] Em um exemplo, para enriquecer as células CD4* por sele- ção negativa, um coquetel de anticorpos monoclonais normalmente inclui anticorpos para CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR e CD8. Em algumas modalidades, o anticorpo ou par de ligação está ligado a um suporte ou matriz sólida, como uma conta magnética ou conta pa- ramagnética, para permitir a separação de células para seleção positi- va e/ou negativa. Por exemplo, em algumas modalidades, as células e populações de células são separadas ou isoladas usando técnicas de separação imunomagnética (ou afinidade magnética) (revisadas em Methods in Molecular Medicine, vol. 58: Metastasis Research Proto- cols, Vol. 2: Cell Behavior /n vitro and !n vivo, p 17-25 Editado por: S. A. Brooks and U. Schumacher O Humana Press Inc., Totowa, NJ).
[00489] Em alguns aspectos, a amostra ou composição de células a serem separadas é incubada com material pequeno, magnetizável ou responsivo magneticamente, como partículas ou micropartículas res- ponsivas magneticamente, como contas paramagnéticas (por exem- plo, como contas Dynalbeads ou MACS). O material responsivo mag- neticamente, por exemplo, partícula, geralmente é direta ou indireta- mente ligado a um par de ligação, por exemplo, um anticorpo que se liga especificamente a uma molécula, por exemplo, marcador de su- perfície, presente na célula, células ou população de células que se deseja separar, por exemplo, que é desejado selecionar negativamen- te ou positivamente.
[00490] Em algumas modalidades, a partícula ou conta magnética compreende um material responsivo magneticamente ligado a um membro de ligação específico, como um anticorpo ou outro par de |i- gação. Existem muitos materiais magneticamente responsivos bem conhecidos usados em métodos de separação magnética. Partículas magnéticas adequadas incluem aquelas descritas em Molday, Pat. U.S. No. 4.452.773, e na Especificação de Patente Europeia EP 452342 B, que são no presente documento incorporadas por referên- cia. Partículas de tamanho coloidal, tais como as descritas em Pat. U.S. de Owen 4.795.698 e Liberti et al., Pat. U.S. No. 5.200.084 são outros exemplos.
[00491] A incubação geralmente é realizada sob condições pelo que os anticorpos ou par de ligação, ou moléculas, como anticorpos secundários ou outros reagentes, que se ligam especificamente a es- tes anticorpos ou pares de ligação, que estão ligados à partícula ou conta magnética, se ligam especificamente a moléculas de superfície célula, se presentes nas células dentro da amostra.
[00492] Em alguns aspectos, a amostra é colocada em um campo magnético e as células que têm partículas magneticamente responsi- vas ou magnetizáveis ligadas a ele serão atraídas para o ímã e sepa- radas das células não marcadas. Para seleção positiva, as células que são atraídas para o ímã são retidas; para seleção negativa, as células que não são atraídas (células não marcadas) são retidas. Em alguns aspectos, uma combinação de seleção positiva e negativa é realizada durante a mesma etapa de seleção, onde as frações positiva e negati- va são retidas e também processadas ou submetidas a outras etapas de separação.
[00493] Em certas modalidades, as partículas magneticamente res- ponsivas são revestidas em anticorpos primários ou outros pares de ligação, anticorpos secundários, lectinas, enzimas ou estreptavidina. Em certas modalidades, as partículas magnéticas são ligadas às célu- las por meio de um revestimento de anticorpos primários específicos para um ou mais marcadores. Em certas modalidades, as células, em vez das contas, são marcadas com um anticorpo primário ou par de ligação e, em seguida, partículas magnéticas revestidas com anticorpo secundário específico do tipo de célula ou de outro par de ligação (por exemplo, estreptavidina) são adicionadas. Em certas modalidades, as partículas magnéticas revestidas com estreptavidina são usadas em conjunto com anticorpos primários ou secundários biotinilados.
[00494] Em algumas modalidades, as partículas magneticamente responsivas são deixadas ligadas às células que devem ser subse- quentemente incubadas, cultivadas e/ou modificadas; em alguns as- pectos, as partículas são deixadas ligadas às células para administra- ção a um paciente. Em algumas modalidades, as partículas magneti- záveis ou magneticamente responsivas são removidas das células. Os métodos para remover as partículas magnetizáveis das células são conhecidos e incluem, por exemplo, o uso de anticorpos não marcados competentes e partículas ou anticorpos magnetizáveis conjugados com ligantes cliváveis. Em algumas modalidades, as partículas mag- netizáveis são biodegradáveis.
[00495] Em algumas modalidades, a seleção baseada em afinidade é por meio de sistemas de Classificação Celular Ativada Magnética (MACS) (Miltenyi Biotec, Auburn, CA). Os sistemas de Classificação Celular Ativada Magnética (MACS) são capazes de seleção de alta pureza de células tendo partículas magnetizadas ligadas a eles. Em certas modalidades, o MACS opera em um modo em que as espécies não alvo e alvo são eluídas sequencialmente após a aplicação do campo magnético externo. Ou seja, as células ligadas às partículas magnetizadas são mantidas no lugar enquanto as espécies não aco- pladas são eluídas. Em seguida, após esta primeira etapa de eluição for concluída, as espécies que foram capturadas no campo magnético e foram impedidas de serem eluídas são libertadas de alguma maneira para que possam ser eluídas e recuperadas. Em certas modalidades, as células não alvo são marcadas e depletadas da população hetero- gênea de células.
[00496] Em certas modalidades, o isolamento ou separação é reali- zado usando um sistema, dispositivo ou aparelho que realiza uma ou mais das etapas de isolamento, preparação celular, separação, pro- cessamento, incubação, cultura e/ou formulação dos métodos. Em al- guns aspectos, o sistema é usado para realizar cada uma destas eta- pas em um ambiente fechado ou estérila, por exemplo, para minimizar erros, manuseio do usuário e/ou contaminação. Em um exemplo, o sistema é um sistema como descrito na Pub. PCT Número WOZ2009/072003, ou US 20110003380 A1.
[00497] Em algumas modalidades, o sistema ou aparelho realiza uma ou mais, por exemplo, todas as etapas de isolamento, processa- mento, modificação e formulação em um sistema integrado ou auto- contido, e/ou de maneira automatizada ou programável. Em alguns aspectos, o sistema ou aparelho inclui um computador e/ou programa de computador em comunicação com o sistema ou aparelho, que per- mite ao usuário programar, controlar, avaliar o resultado e/ou ajustar vários aspectos das etapas de processamento, isolamento, modifica- ção e formulação.
[00498] Em alguns aspectos, a separação e/ou outras etapas são realizadas usando o sistema CIiniMACS (Miltenyi Biotec), por exemplo, para separação automática de células em um nível de escala clínica em um sistema fechado e estérila. Os componentes podem incluir um microcomputador integrado, unidade de separação magnética, bomba peristáltica e várias válvulas de pressão. O computador integrado em alguns aspectos controla todos os componentes do instrumento e dire- ciona o sistema para realizar procedimentos repetidos em uma se- quência padronizada. A unidade de separação magnética em alguns aspectos inclui um ímã permanente móvel e um suporte para a coluna de seleção. A bomba peristáltica controla a taxa de fluxo em todo o conjunto de tubulação e, juntamente com as válvulas de pressão, ga- rante o fluxo controlado de tampão através do sistema e suspensão contínua de células.
[00499] O sistema CIliniMACS, em alguns aspectos, usa partículas magnetizáveis acopladas a anticorpos que são fornecidas em uma so- lução estérila, não pirogênica. Em algumas modalidades, após a mar- cação de células com partículas magnéticas, as células são lavadas para remover o excesso de partículas. Um saco de preparação de cé- lulas é, então, conectado ao conjunto de tubos, que por sua vez é co- nectado a um saco contendo tampão e um saco de coleta de células. O conjunto de tubos consiste em tubos estéreis pré-montados, incluin- do uma pré-coluna e uma coluna de separação, e são apenas de uso único. Após o início do programa de separação, o sistema aplica au- tomaticamente a amostra de células na coluna de separação. As célu- las marcadas são retidas dentro da coluna, enquanto as células não marcadas são removidas por uma série de etapas de lavagem. Em algumas modalidades, as populações de células para uso com os mé- todos no presente documento descritos não são não marcadas e não são retidas na coluna. Em algumas modalidades, as populações de células para uso com os métodos no presente documento descritos são marcadas e retidas na coluna. Em algumas modalidades, as popu- lações de células para uso com os métodos no presente documento descritos são eluídas da coluna após a remoção do campo magnético e são coletadas dentro do saco de coleta de células.
[00500] Em certas modalidades, a separação e/ou outras etapas são realizadas usando o sistema CIiniMACS Prodigy (Miltenyi Biotec). O sistema CIiniMACS Prodigy, em alguns aspectos, é equipado com uma unidade de processamento celular que permite lavagem e fracio- namento automatizados de células por centrifugação. O sistema Clini- MACS Prodigy também pode incluir um software de reconhecimento de imagem e câmera onboard que determina o ponto final de fracio- namento celular ideal, discernindo as camadas macroscópicas do pro- duto da célula fonte. Por exemplo, o sangue periférico é automatica- mente separado em eritrócitos, glóbulos brancos e camadas plasmáti- cas. O sistema CIliniMACS Prodigy também pode incluir uma câmara de cultivo celular integrada, que realiza protocolos de cultura celular, como, por exemplo, diferenciação e expansão celular, carregamento de antígeno e cultura celular de longo prazo. As portas de entrada po- dem permitir a remoção estéril e a reposição de meios e as células podem ser monitoradas usando um microscópio integrado. Veja, por exemplo, Klebanoíff et al., J] Immunother. 35(9): 651—660 (2012), Tera- kura et al., Blood.1:72-82 (2012) e Wang et al, J Immunother. 35(9):689-701 (2012).
[00501] Em algumas modalidades, uma população de células no presente documento descrita é coletada e enriquecida (ou depletada) por meio de citometria de fluxo, na qual as células coradas para vários marcadores de superfície celular são transportadas em uma corrente fluídica. Em algumas modalidades, uma população de células no pre- sente documento descrita é coletada e enriquecida (ou depletada) por meio da classificação em escala preparativa (FACS). Em certas moda- lidades, uma população de células no presente documento descrita é coletada e enriquecida (ou depletada) pelo uso de chips de sistemas microeletromecânicos (MEMS) em combinação com um sistema de detecção baseado em FACS (veja, por exemplo, WO 2010/033140, Cho et al., Lab Chip 10, 1567-1573 (2010) e Godin et al., J Biophoton. 1(5):355—376 (2008). Em ambos os casos, as células podem ser mar- cadas com vários marcadores, permitindo o isolamento de subconjun- tos de células T bem definidos com alta pureza.
[00502] Em algumas modalidades, os anticorpos ou pares de liga- ção são marcados com um ou mais marcadores detectáveis, para faci- litar a separação para seleção positiva e/ou negativa. Por exemplo, a separação pode ser baseada na ligação a anticorpos fluorescentemen- te marcados. Em alguns exemplos, a separação de células com base na ligação de anticorpos ou outros pares de ligação específicos para um ou mais marcadores de superfície celular é realizada em uma cor- rente fluídica, como por classificação celular ativada por fluorescência (FACS), incluindo chips de sistemas de escala preparativa (FACS) e/ou microeletromecânicos (MEMS), por exemplo, em combinação com um sistema de detecção citométrica de fluxo. Estes métodos permitem a seleção positiva e negativa com base em vários marcado- res simultaneamente.
[00503] Em algumas modalidades, os métodos de preparação in- cluem etapas para congelamento, por exemplo, criopreservação, de células, antes ou depois do isolamento, incubação e/ou modificação. Em algumas modalidades, a etapa de congelamento e descongela- mento subsequente remove granulócitos e, até certo ponto, monócitos na população celular. Em algumas modalidades, as células são sus- pensas em uma solução de congelamento, por exemplo, após uma etapa de lavagem para remover o plasma e as plaquetas. Qualquer dentre uma variedade de soluções e parâmetros de congelamento co- nhecidos em alguns aspectos pode ser usada. Um exemplo envolve o uso de PBS contendo 20% de DMSO e 8% de albumina sérica huma-
na (HSA) ou outro meio de congelamento celular adequado. Isto é, en- tão, diluído 1:1 com meios, de modo que a concentração final de DMSO e HSA seja 10% e 4%, respectivamente. As células são geral- mente congeladas a -80 ºC a uma taxa de 1º por minuto e armazena- das na fase de vapor de um tanque de armazenamento de nitrogênio líquido.
[00504] Em algumas modalidades, as células são incubadas e/ou cultivadas antes ou em conexão com a engenharia genética. As eta- pas de incubação podem incluir cultura, cultivo, estimulação, ativação e/ou propagação. A incubação e/ou engenharia podem ser realizadas em um vaso de cultura, como uma unidade, câmara, cavidade, coluna, tubo, conjunto de tubulação, válvula, frasconete, prato de cultura, saco ou outro recipiente para cultura ou cultivo de células. Em algumas mo- dalidades, as composições ou células são incubadas na presença de condições estimulantes ou de um agente estimulador. Estas condições incluem aquelas designadas para induzir a proliferação, expansão, ati- vação e/ou sobrevivência de células na população, para imitar a expo- sição aos antígenos e/ou preparar as células para engenharia genéti- ca, como para a introdução de um receptor de antígeno recombinante.
[00505] As condições podem incluir um ou mais meios específicos, temperatura, teor de oxigênio, teor de dióxido de carbono, tempo, agentes, por exemplo, nutrientes, aminoácidos, antibióticos, íons e/ou fatores estimulatórios, como citocinas, quimiocinas, antígenos, pares de ligação, proteínas de fusão, receptores solúveis recombinantes e quaisquer outros agentes projetados para ativar as células.
[00506] Em algumas modalidades, as condições ou agentes estimu- lantes incluem um ou mais agentes, por exemplo, ligante, que é capaz de ativar um domínio de sinalização intracelular de um complexo de TCR. Em alguns aspectos, o agente ativa ou inicia a cascata de sinali- zação intracelular do TOR/CD3 em uma célula T. Tais agentes podem incluir anticorpos, como aqueles específicos para um componente do TCR e/ou receptor coestimulador, por exemplo, anti-CD3, anti-CD28, por exemplo, ligado a suporte sólido, como uma conta, e/ou uma ou mais citocinas. Opcionalmente, o método de expansão pode ainda compreender a etapa de adição de anticorpo anti-CD3 e/ou anti CD28 ao meio de cultura (por exemplo, a uma concentração de pelo menos cerca de 0,5 ng/ml). Em algumas modalidades, os agentes estimulan- tes incluem IL-2 e/ou IL-15, por exemplo, uma concentração de IL-2 de pelo menos cerca de 10 unidades/mL.
[00507] Em alguns aspectos, a incubação é realizada de acordo com técnicas como as descritas na Patente US No. 6.040.177 de Rid- dell et al., Klebanoff et al., J] Immunother. 35(9): 651660 (2012), Tera- kura et al., Blood.1:72—82(2012), elou Wang et al., J Immunother. 35(9):689-701 (2012).
[00508] Em algumas modalidades, as células T são expandidas adicionando-se a uma composição iniciadoras de cultura, células ali- mentadoras, como células mononucleares de sangue periférico (PBMC) não divididas (por exemplo, de modo que a população resul- tante de células contenha pelo menos cerca de 5, 10, 20 ou 40 ou mais células alimentadoras de PBMC para cada linfócito T na popula- ção inicial a ser expandida); e incubando-se a cultura (por exemplo, por um tempo suficiente para expandir o número de células T). Em al- guns aspectos, as células alimentadoras não divididas podem com- preender células alimentadoras de PBMC gamar-irradiadas. Em algu- mas modalidades, a PBMC é irradiada com raios gama na faixa de cerca de 3000 a 3600 rads para impedir a divisão celular. Em alguns aspectos, as células alimentadoras são adicionadas ao meio de cultura antes da adição das populações de células T.
[00509] Em algumas modalidades, as condições estimulantes inclu- em temperatura adequada para o crescimento de linfócitos T huma-
nos, por exemplo, pelo menos cerca de 25 graus Celsius, geralmente pelo menos cerca de 30 graus e geralmente em ou cerca de 37 graus Celsius. Opcionalmente, a incubação pode ainda compreendem a adi- ção de células linfoblastoides transformadas por EBV não divididas (LCL) como células alimentadoras. LCL pode ser irradiado com raios gama na faixa de cerca de 6000 a 10.000 rads. As células alimentado- ras de LCL, em alguns aspectos, são fornecidas em qualquer quanti- dade adequada, como uma relação de células alimentadoras de LCL para linfócitos T iniciais de pelo menos cerca de 10:1.
[00510] Em modalidades, as células T específicas de antígeno, co- mo as células T CD4* e/ou CD8* específicas de antígeno, são obtidas estimulando-se linfócitos T virgens ou específicos de antígeno com antígeno. Por exemplo, linhagens ou clones de células T específicos de antígeno podem ser gerados para antígenos do citomegalovírus isolando-se células T de indivíduos infectados e estimulando-se as cé- lulas in vitro com o mesmo antígeno. C. ÁCIDOS NUCLEICOS, VETORES E MÉTODOS PARA ENGE-
NHARIA GENÉTICA
[00511] Em algumas modalidades, as células, por exemplo, células T, são geneticamente modificadas para expressar um receptor recom- binante. Em algumas modalidades, a modificação é realizada introdu- zindo-se moléculas de ácido nucleico que codificam o receptor recom- binante. Também são fornecidas moléculas de ácido nucleico que co- dificam um receptor recombinante e vetores ou construções que con- têm tais ácidos nucleicos e/ou moléculas de ácido nucleico.
[00512] Em alguns casos, a sequência de ácido nucleico que codifi- ca o receptor recombinante, por exemplo, receptor de antígeno quimé- rico (CAR), contém uma sequência sinal que codifica um peptídeo si- nal. Em alguns aspectos, a sequência sinal pode codificar um peptídeo sinal derivado de um polipeptídeo nativo. Em outros aspectos, a se-
quência sinal pode codificar um peptídeo sinal heterólogo ou não nati- vo. Em algumas modalidades, o peptídeo sinal é derivado de uma pro- teína de transmembrana. Em alguns exemplos, o peptídeo sinal é de- rivado de CD8a, CD33 ou uma IgG. Exemplos exemplares não limitan- tes de peptídeos sinal incluem, por exemplo, o peptídeo sinal CD33 mencionado em SEQ ID NO: 153, peptídeo sinal CD8a mencionado em SEQ ID NO: 39 ou o peptídeo de sinal mencionado em SEQ ID NO: 40 ou sua variante modificada.
[00513] Em algumas modalidades, a molécula de ácido nucleico que codifica o receptor recombinante contém pelo menos um promotor que está operacionalmente ligado à expressão controle do receptor recombinante. Em alguns exemplos, a molécula de ácido nucleico con- tém dois, três ou mais promotores operacionalmente ligados para con- trolar a expressão do receptor recombinante. Em algumas modalida- des, a molécula de ácido nucleico pode conter sequências regulado- ras, como códons de iniciação e terminação da transcrição e transla- ção, que são específicos para o tipo de hospedeiro (por exemplo, bac- téria, fungo, planta ou animal) em que a molécula de ácido nucleico deve ser introduzida, como apropriado, e levando em consideração se a molécula de ácido nucleico é baseada em DNA ou RNA. Em algu- mas modalidades, a molécula de ácido nucleico pode conter elemen- tos reguladores/de controle, como um promotor, um realçador, um ín- tron, um sinal de poliadenilação, uma sequência de consenso de Ko- zak e um aceptor ou receptor de ligação. Em algumas modalidades, a molécula de ácido nucleico pode conter um promotor não nativo ope- racionalmente ligado à sequência de nucleotídeos que codifica o re- ceptor recombinante e/ou um ou mais polipeptídeos adicionais. Em algumas modalidades, o promotor é selecionado dentre um promotor de RNA pol |, pol Il ou pol Ill. Em algumas modalidades, o promotor é reconhecido pela RNA polimerase Il (por exemplo, um CMV, região inicial de SV40 ou promotor tardio principal de adenovírus). Em outra modalidade, o promotor é reconhecido pela RNA polimerase Ill (por exemplo, um promotor U6 ou H1). Em algumas modalidades, o promo- tor pode ser um promotor não viral ou um promotor viral, como um promotor de citomegalovírus (CMV), um promotor de SV40, um promo- tor de RSV e um promotor encontrado na repetição de terminal longo do vírus de célula tronco de murino. Outros promotores conhecidos também são considerados.
[00514] Em algumas modalidades, o promotor é ou compreende um promotor constitutivo. Promotores constitutivos exemplares incluem, por exemplo, promotor inicial do vírus símio 40 (SV40), promotor ime- diato-inicial de citomegalovírus (CMV), promotor de Ubiquitina C hu- mano (UBC), promotor do fator 1a de alongamento humano (EF10a), promotor do fosfoglicerato cinase 1 do camundongo (PGK) e promotor de B-Actina de frango acoplado o realçador inicial de CMV (CAGG). Em algumas modalidades, o promotor constitutivo é um promotor sin- tético ou modificado. Em algumas modalidades, o promotor é ou com- preende um promotor de MND, um promotor sintético que contém a região U3 de uma LTR de MoMuLV modificada com realçador do vírus do sarcoma mieloproliferativo (veja, Challita et al. (1995) J. Virol. 69(2):748 -755). Em algumas modalidades, o promotor é um promotor específico de tecido. Noutra modalidade, o promotor é um promotor viral. Em outra modalidade, o promotor é um promotor não viral.
[00515] Em outra modalidade, o promotor é um promotor regulado (por exemplo, promotor indutível). Em algumas modalidades, o promo- tor é um promotor indutível ou um promotor repressível. Em algumas modalidades, o promotor compreende uma sequência de operador Lac, uma sequência de operador de tetraciclina, uma sequência de operador de galactose ou uma sequência de operador de doxiciclina, ou é um análogo do mesmo ou é capaz de ser ligado ou reconhecido por um repressor de Lac ou um repressor de tetraciclina, ou um análo- go do mesmo. Em algumas modalidades, a molécula de ácido nucleico não inclui um elemento regulador, por exemplo, promotor.
[00516] Em algumas modalidades, a molécula de ácido nucleico que codifica o receptor recombinante, por exemplo, CAR ou outro re- ceptor de antígeno, inclui ainda sequências de ácido nucleico que co- dificam um marcador e/ou células que expressam o CAR ou outro re- ceptor de antígeno inclui ainda um marcador, por exemplo, um marca- dor substituto, como um marcador de superfície celular, que pode ser usado para confirmar a transdução ou modificação da célula para ex- pressar o receptor, como uma versão truncada de um receptor de su- perfície celular, como EGFR truncado (tEGFR). Em algumas modali- dades, os um ou mais marcadores são um marcador de transdução, marcador substituto e/ou um marcador de seleção.
[00517] Em algumas modalidades, o marcador é um marcador de transdução ou um marcador substituto. Um marcador de transdução ou um marcador substituto pode ser usado para detectar células que foram introduzidas com a molécula de ácido nucleico, por exemplo, uma molécula de ácido nucleico que codifica um receptor recombinan- te. Em algumas modalidades, o marcador de transdução indicar ou confirmar a modificação de uma célula. Em algumas modalidades, o marcador substituto é uma proteína que é feita para ser coexpressa na superfície celular com o receptor recombinante, por exemplo, CAR. Em modalidades particulares, um tal marcador substituto é uma prote- ína de superfície que foi modificada para ter pouca ou nenhuma ativi- dade. Em certas modalidades, o marcador substituto é codificado na mesma molécula de ácido nucleico que codifica o receptor recombi- nante. Em algumas modalidades, a sequência de ácido nucleico que codifica o receptor recombinante está operacionalmente ligada a uma sequência de ácido nucleico que codifica um marcador, opcionalmente separado por um sítio de entrada de ribossoma interno (IRES), ou um ácido nucleico que codifica um peptídeo de autoclivagem ou um peptí- deo que causa o salto de ribossoma, como uma sequência 2A, como um T2A (por exemplo, SEQ ID NO: 6 ou 167), um P2A (por exemplo, SEQ ID NO: 168 ou 169), um E2A (por exemplo, SEQ ID NO: 170) ou um F2A (por exemplo, SEQ ID NO: 172). Genes marcadores extrínse- cos podem, em alguns casos, ser usados em conexão com células modificadas para permitir a detecção ou seleção de células e, em al- guns casos, também para promover o suicídio celular.
[00518] “Marcadores substitutos exemplares podem incluir formas truncadas de polipeptídeos de superfície celular, como formas trunca- das que não são funcionais e não transduzem ou não são capazes de transduzir um sinal ou um sinal normalmente transduzido pela forma de tamanho natural do polipeptídeo de superfície celular, e/ou não são capazes de internalizar. Polipeptídeos de superfície celular truncados exemplares, incluindo formas truncadas de fatores de crescimento ou outros receptores, como um receptor de fator de crescimento epidér- mico humano truncado 2 (tHER2), um receptor de fator de crescimento epidérmico truncado (tEGFR, sequência de tEGFR exemplar mencio- nada em SEQ ID NO: 7 ou 166) ou um antígeno de membrana especií- fico da próstata (PSMA) ou sua forma modificada. O teEGFR pode con- ter um epítopo reconhecido pelo anticorpo cetuximabe (Erbitux&O) ou outro anticorpo anti-EGFR terapêutico ou molécula de ligação, que po- de ser usado para identificar ou selecionar células que foram modifica- das com a construção de tEGFR e uma proteína exógena codificada e/ou para eliminar ou separar células que expressam a proteína exó- gena codificada. Veja Patente U.S. No. 8.802.374 e Liu et a/., Nature Biotech. 2016 April; 34(4):430-434). Em alguns aspectos, o marcador, por exemplo, marcador substituto, inclui todo ou parte (por exemplo, forma truncada) de CD34, um NGFR, um CD19 ou um CD19 truncado,
por exemplo, um CD19 não humano truncado ou receptor do fator de crescimento epidérmico (por exemplo, tEGFR). Em algumas modalida- des, o marcador é ou compreende uma proteína fluorescente, como proteína fluorescente verde (GFP), proteína fluorescente verde realça- da (EGFP), como GFP super-duplicado (síGFP), proteína fluorescente vermelha (RFP), como tdTomato, mCherry, mStrawberry, AsRed2, DsRed ou DsRed2, proteína fluorescente de ciano (CFP), proteína flu- orescente verde azul (BFP), proteína fluorescente azul realçada (EBFP) e proteína fluorescente amarela (YFP) e variantes das mes- mas, incluindo variantes de espécies, variantes monoméricas e varian- tes otimizadas por códon e/ou realçadas das proteínas fluorescentes. Em algumas modalidades, o marcador é ou compreende uma enzima, como uma luciferase, o gene lacZ de E. coli, fosfatase alcalina, fosfa- tase alcalina embrionária secretada (SEAP), cloranfenicol acetil trans- ferase (CAT). Genes repórteres emissores de luz exemplares incluem luciferase (luc), B-galactosidase, cloranfenicol acetiltransferase (CAT), B-glicuronidase (GUS) ou variantes dos mesmos.
[00519] Em algumas modalidades, o marcador é um marcador de seleção. Em algumas modalidades, o marcador de seleção é ou com- preende um polipeptídeo que confere resistência a agentes ou fárma- cos exógenos. Em algumas modalidades, o marcador de seleção é um gene de resistência a antibióticos. Em algumas modalidades, o marca- dor de seleção é um gene de resistência a antibióticos que confere re- sistência a antibióticos a uma célula de mamífero. Em algumas moda- lidades, o marcador de seleção é ou compreende um gene de resis- tência à Puromicina, um gene de resistência à Higromicina, um gene de resistência à Blasticidina, um gene de resistência à Neomicina, um gene de resistência à Geneticina ou um gene de resistência à Zeocina ou suas formas modificadas.
[00520] Em alguns aspectos, o marcador, por exemplo, marcador substituto, inclui todo ou parte (por exemplo, forma truncada) de CD34, um NGFR ou receptor de fator de crescimento epidérmico (por exem- plo, teEGFR). Em algumas modalidades, o ácido nucleico que codifica o marcador está operacionalmente ligado a um polinucleotídeo que codi- fica para uma sequência ligante, como uma sequência ligante clivável, por exemplo, T2A. Por exemplo, um marcador e, opcionalmente, uma sequência ligante, pode ser qualquer um como descrito em Pub. PCT No. WO2014031687. Por exemplo, o marcador pode ser um EGFR truncado (tEGFR) que está, opcionalmente, ligado a uma sequência ligante, como uma sequência ligante clivável em T2A. Um polipeptídeo exemplar para um EGFR truncado (por exemplo, teEGFR) compreende a sequência de aminoácidos mencionada em SEQ ID NO: 7 ou 166, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 290%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais de identidade de sequência para SEQ ID NO: 7 ou 166. Uma sequência ligante T2A exemplar compreende a sequência de aminoácidos mencionada em SEQ ID NO: 6 ou 167 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais de identidade de sequência da SEQ ID NO: 6 ou 167.
[00521] Em algumas modalidades, o marcador é uma molécula, por exemplo, proteína de superfície celular, não encontrada naturalmente nas células T ou não encontrada naturalmente na superfície das célu- las T ou em uma porção das mesmas. Em algumas modalidades, a molécula é uma molécula não própria, por exemplo, uma proteína não própria, isto é, uma que não é reconhecida como "própria" pelo siste- ma imune do hospedeiro no qual as células serão transferidas adoti- vamente.
[00522] Em algumas modalidades, o marcador não tem função te- rapêutica e/ou não produz efeito diferente de ser usado como um mar-
cador para engenharia genética, por exemplo, para selecionar células modificadas com sucesso. Em outras modalidades, o marcador pode ser uma molécula terapêutica ou molécula que exerce de outra manei- ra algum efeito desejado, como um ligante para uma célula a ser en- contrada in vivo, como uma molécula de ponto de checagem coestimu- ladora ou imune para realçar e/ou amortecer as respostas das células na transferência adotiva e encontro com ligante.
[00523] Em algumas modalidades, um único promotor pode direcio- nar a expressão de um RNA que contém, em uma única estrutura de leitura aberta (ORF), dois ou três genes separados um do outro por sequências que codificam um peptídeo de autoclivagem (por exemplo, sequências 2A) ou um sítio de reconhecimento de protease (por exemplo, furina). A ORF codifica, assim, um único polipeptídeo, que, durante (no caso de 2A) ou após a translação, é processado nas pro- teínas individuais. Em alguns casos, o peptídeo, como T2A, pode fazer com que o ribossoma salte (salto do ribossoma) a síntese de uma liga- ção peptídica no terminal C de um elemento 2A, levando à separação entre o final da sequência 2A e o próximo peptídeo a jusante (veja, por exemplo, de Felipe. Genetic Vaccines and Ther. 2:13 (2004) e deFeli- pe et al. Traffic 5:6816-626 (2004)). Muitos elementos 2A são conheci- dos na técnica. Exemplos de sequências 2A que podem ser usadas nos métodos e ácidos nucleicos no presente documento descritos, sem limitação, sequências 2A do vírus da doença pé-boca (F2A), vírus da rinite equina A (E2A), vírus Thosea asigna (T2A, por exemplo, SEQ ID NO: 6) e teschovírus-1 de porcino (P2A) como descrito na Publica- ção de Patente U.S. No. 20070116690.
[00524] A introdução das moléculas de ácido nucleico que codifi- cam o receptor recombinante na célula pode ser realizada usando qualquer de vários vetores conhecidos. Tais vetores incluem sistemas virais e não virais, incluindo sistemas lentivirais e gamarretrovirais,
bem como sistemas baseados em elementos transponíveis, como sis- temas de transferência de genes baseados em PiggyBac ou Sleeping Beauty. Métodos exemplares incluem aqueles para transferência de ácidos nucleicos que codificam os receptores, incluindo via viral, por exemplo, retroviral ou lentiviral, transdução, elementos transponíveis e eletroporação.
[00525] Em algumas modalidades, a transferência de genes é reali- zada primeiro estimulando a célula, como combinando-a com um es- tímulo que induz uma resposta como proliferação, sobrevivência e/ou ativação, por exemplo, como medido pela expressão de uma citocina ou marcador de ativação, seguido por transdução das células ativadas e expansão em cultura para números suficientes para aplicações clíni- cas.
[00526] Em algumas modalidades, antes ou durante a transferência de genes, as células são incubadas ou cultivadas na presença de um inibidor de gama secretase, incluindo qualquer um como no presente documento descrito. Em algumas modalidades, o inibidor de gama se- cretase é adicionado durante o processo de fabricação de células, por exemplo, durante o processo de modificação de células CAR-T. Em alguns aspectos, a presença do inibidor de gama secretase pode me- lhorar a qualidade da população de células produzidas. Em alguns as- pectos, o inibidor de gama secretase pode aumentar a proliferação ou expansão de células ou pode alterar uma ou mais vias de sinalização, resultando em células com um fenótipo de superfície menos diferenci- ado ou menos ativado, apesar de exibir expansão substancial e/ou função efetora.
[00527] Em alguns contextos, a superexpressão de um fator estimu- lador (por exemplo, uma linfocina ou uma citocina) pode ser tóxica pa- ra um indivíduo. Assim, em alguns contextos, as células modificadas incluem segmentos de genes que fazem com que as células sejam suscetíveis à seleção negativa in vivo, como na administração em imunoterapia adotiva. Por exemplo, em alguns aspectos, as células são modificadas para que possam ser eliminadas como resultado de uma alteração na condição in vivo do paciente ao qual são administra- das. O fenótipo selecionável negativo pode resultar da inserção de um gene que confere sensibilidade a um agente administrado, por exem- plo, um composto. Genes selecionáveis negativos incluem o gene da timidina cinase do vírus do Herpes simples tipo | (HSV-I TK) (Wigler et al., Cell 11: 223, 1977) que confere sensibilidade ao ganciclovir; o gene da hipoxantina fosforibosiltransferase celular (HPRT), o gene da ade- nina fosforibosiltransferase celular (APRT), citosina desaminase bacte- riana (Mullen et a/l., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89:33 (1992)).
[00528] Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos recombinan- tes são transferidos em células usando partículas de vírus infeccioso recombinantes, como, por exemplo, vetores derivados do vírus símio 40 (SV40), adenovírus, vírus adenoassociado (AAV). Em algumas mo- dalidades, os ácidos nucleicos recombinantes são transferidos em cé- lulas T usando vetores lentivirais recombinantes ou vetores retrovirais, como vetores gama-retrovirais (veja, por exemplo, Koste et al. (2014) Gene Therapy 2014 Apr 3. doi: 10.1038/gt.2014.25; Carlens et al. (2000) Exp Hematol 28(10): 1137-46; Alonso-Camino et a/. (2013) Mol Ther Nucl Acids 2, e93; Park et a/., Trends Biotechnol. 2011 November 29(11): 550-557.
[00529] Em algumas modalidades, o vetor retroviral tem uma se- quência de repetição terminal longa (LTR), por exemplo, um vetor re- troviral derivado do vírus da leucemia de murino Moloney (MoMLV), vírus do sarcoma mieloproliferativo (MPSV), vírus da célula tronco em- brionária de murino (MESV), vírus da célula tronco de murino (MSCV), vírus formador de foco do baço (SFFV) ou vírus adenoassociado (AAV). A maioria dos vetores retrovirais são derivados de retrovírus de murino. Em algumas modalidades, os retrovírus incluem aqueles deri- vados de qualquer fonte de células aviária ou de mamífero. Os retroví- rus são tipicamente anfotrópicos, o que significa que são capazes de infectar células hospedeiras de várias espécies, incluindo humanos. Em uma modalidade, o gene a ser expresso substitui as sequências retrovirais de gag, pol e/ou env. Um número de sistemas retrovirais ilustrativos foi descrito (por exemplo, Pat. U.S. 5.219.740; 6.207.453;
5.219.740; Miller and Rosman (1989) BioTechniques 7:980-990; Miller, A. D. (1990) Human Gene Therapy 1:5-14; Scarpa et al. (1991) Virolo- gy 180:849-852; Burns et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:8033-8037; and Boris-Lawrie and Temin (1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3:102-109.
[00530] Métodos de transdução lentiviral são conhecidos. Métodos exemplares são descritos em, por exemplo, Wang et al. (2012) J. Im- munother. 35(9): 689-701; Cooper et al. (2003) Blood. 101:1637-1644; Verhoeyen et al. (2009) Methods Mol Biol. 506: 97-114; e Cavalieri et al. (2003) Blood. 102 (2): 497-505.
[00531] Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos recombinan- tes são transferidos em células T por eletroporação (veja, por exemplo, Chicaybam et al, (2013) PLoS ONE 8(3): e60298 e Van Tedeloo et al. (2000) Gene Therapy 7(16): 1431 -1437). Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos recombinantes são transferidos em células T por transposição (veja, por exemplo, Manuri et a/. (2010) Hum Gene Ther 21(4): 427-437; Sharma et al. (2013) Molec Ther Nucl Acids 2, e74; e Huang et al. (2009) Methods Mol Biol 506: 115-126). Outros métodos de introdução e expressão de material genético em células imunes in- cluem a transfecção de fosfato de cálcio (por exemplo, como descrito em Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y.), fusão de protoplastos, transfecção mediada por liposso- mas catiônicos; bombardeio de micropartículas facilitado por partículas de tungstênio (Johnston, Nature, 346: 776-777 (1990)); e coprecipita- ção de DNA de fosfato de estrôncio (Brash et al., Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987)).
[00532] Outras abordagens e vetores para transferência dos ácidos nucleicos que codificam os produtos recombinantes são aqueles des- critos, por exemplo, no pedido de patente internacional, Publicação No.: WO2014055668, e Patente U.S. No. 7.446.190.
[00533] Em algumas modalidades, as células, por exemplo, células T, podem ser transfectadas durante ou após a expansão, por exemplo, com um receptor de células T (TCR) ou um receptor de antígeno qui- mérico (CAR). Esta transfecção para a introdução do gene do receptor desejado pode ser realizada com qualquer vetor retroviral adequado, por exemplo. A população de células geneticamente modificadas po- de, então, ser liberada do estímulo inicial (o estímulo de CD3/CD28, por exemplo) e subsequentemente ser estimulada com um segundo tipo de estímulo, por exemplo, via um receptor introduzido de novo). Este segundo tipo de estímulo pode incluir um estímulo antigênico na forma de um peptídeo/molécula de MHC, o ligante cognato (reticula- ção) do receptor geneticamente introduzido (por exemplo, ligante natu- ral de um CAR) ou qualquer ligante (como um anticorpo) que se liga diretamente à estrutura do novo receptor (por exemplo, ao reconhecer regiões constantes dentro do receptor). Veja, por exemplo, Cheadle et al, “Chimeric antigen receptors for T-cell based therapy" Methods Mol Biol. 2012; 907:645-66 or Barrett et al., Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer Annual Review of Medicine Vol. 65: 333-347 (2014).
[00534] Em alguns casos, um vetor pode ser usado o qual não re- quer que as células, por exemplo, células T, sejam ativadas. Em al- guns tais casos, as células podem ser selecionadas e/ou transduzidas antes da ativação. Assim, as células podem ser modificadas antes ou subsequente à cultura das células e, em alguns casos, ao mesmo tempo que ou durante pelo menos uma porção da cultura.
[00535] Em alguns aspectos, as células são também modificadas para promover a expressão de citocinas ou outros fatores. Entre áci- dos nucleicos adicionais, por exemplo, genes para introdução são aqueles para melhorar a eficácia da terapia, tais como promovendo a viabilidade e/ou a função das células transferidas; genes para fornecer um marcador genético para seleção e/ou avaliação das células, como para avaliar a sobrevivência ou localização in vivo; genes para melho- rar a segurança, por exemplo, tornando a célula suscetível à seleção negativa in vivo, como descrito por Lupton S. D. et al., Mol. and Cell Biol., 11:6 (1991); e Riddell et al., Human Gene Therapy 3:319-338 (1992); veja também as publicações de PCT/US91/08442 e PCT/US94/05601 por Lupton et a/. que descreve o uso de genes de fusão selecionáveis bifuncionais derivados da fusão de um marcador selecionável positivo dominante com um marcador selecionável nega- tivo. Veja, por exemplo, Riddell et a/., Patente US No. 6.040.177, nas colunas 14-17. Ill. RESULTADOS E MÉTODOS DE TRATAMENTO EXEMPLARES
PARA AVALIAÇÃO DOS MESMOS
[00536] Em algumas modalidades dos métodos, composições, combinações, kits e usos no presente documento fornecidos, a terapia de combinação fornecida resulta em um ou mais resultados de trata- mento, como um aspecto associado a qualquer um ou mais dos parâ- metros associados à terapia ou tratamento, como no presente docu- mento descrito. Em algumas modalidades, o método inclui avaliação da exposição, persistência e proliferação das células T, por exemplo, células T administradas para a terapia baseada em células T. Em al- gumas modalidades, a exposição, ou expansão e/ou persistência pro- longada das células, e/ou alterações nos fenótipos celulares ou na ati-
vidade funcional das células, por exemplo, células administradas para imunoterapia, por exemplo, terapia com células T, nos métodos no presente documento fornecidos, pode ser medida avaliando as carac- terísticas das células T in vitro ou ex vivo. Em algumas modalidades, esses ensaios podem ser usados para determinar ou confirmar a fun- ção das células T, por exemplo, terapia com células T, antes ou depois da administração da terapia de combinação no presente documento fornecida.
[00537] Em algumas modalidades, a terapia de combinação pode ainda incluir uma ou mais etapas de rastreamento para identificar indi- víduos para o tratamento com a terapia de combinação e/ou continuar a terapia de combinação e/ou uma etapa para avaliação dos resulta- dos do tratamento e/ou monitorar os resultados do tratamento. Em al- gumas modalidades, os indivíduos adequados para tratamento têm expressão de superfície baixa de BCMA. Em algumas modalidades, a baixa expressão da superfície do BCMA é determinada pela compara- ção da expressão de BCMA em um indivíduo com a expressão de BCMA de superfície média em uma população saudável de indivíduos. Em algumas modalidades, a expressão de BCMA baixa é um nível de expressão de BCMA que é menor que a média da população. Em al- gumas modalidades, a expressão de BCMA baixa é um nível de ex- pressão de BCMA que é, é cerca de, é pelo menos 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 100, 150, 200, 250 vezes ou menor do que, ou 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, ou mais abaixo, o nível de expressão de BCMA mé- dio em uma população saudável de indivíduos. Em algumas modalida- des, a baixa expressão de superfície do BCMA é determinada pela comparação da expressão do BCMA em um indivíduo contra a ex- pressão de BCMA de superfície média em uma população saudável de indivíduos. Em algumas modalidades, a expressão de BCMA baixa é um nível de expressão de BCMA que é menor que a média da popula- ção.
Em algumas modalidades, a expressão de BCMA baixa é um ní- vel de expressão de BCMA que é, é cerca de, é pelo menos 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 100, 150, 200, 250 vezes ou menor do que 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, ou ou mais abaixo, o nível de expressão de BCMA médio em uma população saudável de indivíduos.
Em algumas modalidades, a expressão de superfície baixa de BCMA é determinada comparando a expressão de BCMA em um indivíduo contra a expres- são de BCMA de superfície média em uma população de pacientes (por exemplo, população de pacientes com mieloma múltiplo). Em al- gumas modalidades, a expressão de BCMA baixa é um nível de ex- pressão de BCMA que é menor que a média da população de pacien- tes.
Em algumas modalidades, a expressão de BCMA baixa é um nível de expressão de BCMA que é, é cerca de, é pelo menos 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 100, 150, 200, 250 vezes ou menor do que, ou 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, ou mais abaixo, o nível de expressão de BCMA médio em uma população de pacientes (por exemplo, população de pacientes com mieloma múltiplo). Em algumas modalidades, a expres- são de superfície baixa de BCMA é determinada comparando a ex- pressão de BCMA em um indivíduo contra a expressão de BCMA de superfície média em uma população de pacientes (por exemplo, popu- lação de pacientes com mieloma múltiplo). Em algumas modalidades, a expressão de BCMA baixa é um nível de expressão de BCMA que é menor que a média da população de pacientes.
Em algumas modali- dades, a expressão de BCMA baixa é um nível de expressão de BCMA que é, é cerca de, é pelo menos 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 100, 150, 200, 250 vezes ou menor do que, ou 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%,
ou mais abaixo, o nível de expressão de BCMA médio em uma popu- lação de pacientes (por exemplo, população de pacientes com mielo- ma múltiplo). Em algumas modalidades, a determinação da expressão de BCMA baixa em um indivíduo pode ser determinada comparando a expressão de BCMA no indivíduo em dois ou mais pontos de tempo diferentes (por exemplo, antes do diagnóstico e após o diagnóstico, no diagnóstico e em um ponto de tempo após o diagnóstico, antes do tra- tamento e após o tratamento, etc.) Em algumas modalidades de acor- do com este método, a expressão de BCMA baixa seria considerada em cerca de ou pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais diminuição na expressão de BCMA em compara- ção ao ponto de tempo precedente.
[00538] Em algumas modalidades, a expressão de BCMA baixa é considerada expressão de BCMA abaixo de um nível limiar. Em algu- mas modalidades, o nível limiar é, é cerca de, é pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais abaixo do nível de expressão de BCMA médio ou mediano verificado a partir de uma população de indivíduos saudáveis. Em algumas modalidades, o nível limiar é, é cerca de, é pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais abaixo do nível de expressão de BCMA mé- dio ou mediano verificado a partir de uma população de pacientes (por exemplo, pacientes com mieloma múltiplo). Em algumas modalidades, o nível limiar é, é cerca de, é pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais abaixo do nível de expressão de BCMA obtido do indivíduo.
[00539] Em algumas modalidades, a etapa para avaliação dos re- sultados do tratamento pode incluir etapas para avaliar e/ou monitorar o tratamento e/ou identificar indivíduos para administração de etapas adicionais ou restantes da terapia e/ou para terapia repetida. Em al- gumas modalidades, a etapa de rastreamento e/ou avaliação dos re-
sultados do tratamento pode ser usada para determinar a dose, fre- quência, duração, tempo e/ou ordem da terapia de combinação no presente documento fornecida.
[00540] Em algumas modalidades, qualquer uma das etapas de rastreamento e/ou avaliação do tratamento dos resultados no presente documento descritos pode ser usada antes, durante, durante o curso de ou subsequente à administração de uma ou mais etapas da terapia de combinação fornecida, por exemplo, administração da terapia com células T (por exemplo, células T de expressão de CAR) e/ou um inibi- dor de gama secretase. Em algumas modalidades, a avaliação é feita antes, durante, durante o curso de ou após a realização de qualquer um dos métodos no presente documento fornecidos. Em algumas mo- dalidades, a avaliação é feita antes da realização dos métodos no pre- sente documento fornecidos. Em algumas modalidades, a avaliação é feita após a realização de uma ou mais etapas dos métodos no pre- sente documento fornecidos. Em algumas modalidades, a avaliação é realizada antes da administração de uma ou mais etapas da terapia de combinação fornecida, por exemplo, para rastrear e identificar pacien- tes adequados e/ou suscetíveis a receber a terapia de combinação. Em algumas modalidades, a avaliação é realizada durante, durante o curso de, ou subsequente à administração de uma ou mais etapas da terapia de combinação fornecida, por exemplo, para avaliar o resultado intermediário ou final do tratamento, por exemplo, para determinar a eficácia do tratamento e/ou para determinar se deve continuar ou repe- tir os tratamentos e/ou para determinar se deve administrar as etapas restantes da terapia de combinação.
[00541] Em algumas modalidades, o tratamento dos resultados in- clui a função imune melhorada, por exemplo, a função imune das célu- las T administradas para terapia baseada em células e/ou das células T endógenas no corpo. Em algumas modalidades, os resultados de tratamento exemplares incluem, porém, não estão limitados a, prolife- ração de células T realçada, atividade funcional de células T melhora- da, alterações na expressão do marcador fenotípico de célula imune, tais como aspectos sendo associados com a células T modificadas, por exemplo, células CAR-T, administradas ao indivíduo. Em algumas modalidades, resultados de tratamento exemplares incluem carga da doença diminuída, por exemplo, carga tumoral, resultados clínicos me- lhorados e/ou eficácia realçada da terapia.
[00542] Em algumas modalidades, a etapa de rastreamento e/ou avaliação do tratamento dos resultados inclui a avaliação da sobrevi- vência e/ou função das células T administradas para terapia baseada em células. Em algumas modalidades, a etapa de rastreamento e/ou avaliação do tratamento dos resultados inclui a avaliação dos níveis de citocinas ou fatores de crescimento. Em algumas modalidades, a eta- pa de rastreamento e/ou avaliação do tratamento dos resultados inclui a avaliação da carga da doença e/ou melhorias, por exemplo, a avalia- ção da carga tumoral e/ou resultados clínicos. Em algumas modalida- des, qualquer uma das etapas de rastreamento e/ou avaliação do tra- tamento dos resultados pode incluir qualquer um dos métodos de ava- liação e/ou ensaios no presente documento descritos e/ou conhecidos na técnica, e pode ser realizada uma ou mais vezes, por exemplo, an- tes de, durante, durante o curso de, ou subsequentemente à adminis- tração de uma ou mais etapas da terapia de combinação. Conjuntos exemplares de parâmetros associados a um resultado do tratamento, que podem ser avaliados em algumas modalidades dos métodos no presente documento fornecidos, incluem perfil da população de células imunes do sangue periférico e/ou carga tumoral.
[00543] Em algumas modalidades, os métodos afetam a eficácia da terapia celular no indivíduo. Em algumas modalidades, a persistência, expansão e/ou presença de células de expressão de receptores re-
combinantes, por exemplo, de expressão de CAR, no indivíduo após a administração da dose de células no método com o inibidor de gama secretase é maior em comparação com a alcançada por um método sem a administração do inibidor da gama secretase. Em algumas mo- dalidades dos métodos de imunoterapia no presente documento forne- cidos, como uma terapia com células T (por exemplo, células T de ex- pressão de CAR), a avaliação do parâmetro inclui a avaliação da ex- pansão e/ou persistência no indivíduo das células T administradas pa- ra a imunoterapia, por exemplo, terapia com células T, em compara- ção a um método no qual a imunoterapia é administrada ao indivíduo na ausência do inibidor da gama secretase. Em algumas modalidades, os métodos resultam nas células T administradas exibindo expansão e/ou persistência aumentada ou prolongada no indivíduo, em compa- ração a um método no qual a terapia com células T é administrada ao indivíduo na ausência do inibidor de gama secretase.
[00544] Em algumas modalidades, a administração do inibidor de gama secretase diminui a carga da doença, por exemplo, a carga tu- moral, no indivíduo em comparação a um método no qual a dose de células que expressam o receptor recombinante é administrada ao in- divíduo na ausência do inibidor de gama secretase. Em algumas mo- dalidades, a administração do inibidor de gama secretase diminui a medula blástica no indivíduo em comparação a um método no qual a dose de células que expressam o receptor recombinante é administra- da ao indivíduo na ausência do inibidor de gama secretase. Em algu- mas modalidades, a administração do inibidor de gama secretase re- sulta em resultados clínicos melhorados, por exemplo, taxa de respos- ta objetiva (ORR), sobrevivência livre de progressão (PFS) e sobrevi- vência global (OS), em comparação a um método em que a dose de células que expressam o receptor recombinante é administrada ao in- divíduo na ausência do inibidor de gama secretase.
[00545] Em algumas modalidades, o indivíduo pode ser rastreado antes da administração de uma ou mais etapas da terapia de combi- nação. Por exemplo, o indivíduo pode ser rastreado quanto a caracte- rísticas da doença e/ou carga da doença, por exemplo, carga tumoral, antes da administração da terapia de combinação, para determinar a adequação, responsividade e/ou suscetibilidade à administração da terapia de combinação. Em algumas modalidades, a etapa de rastre- amento e/ou avaliação dos resultados do tratamento pode ser usada para determinar a dose, frequência, duração, tempo e/ou ordem da terapia de combinação no presente documento fornecida.
[00546] Em algumas modalidades, o indivíduo pode ser rastreado após a administração de uma das etapas da terapia de combinação, para determinar e identificar indivíduos para receber as etapas restan- tes da terapia de combinação e/ou para monitorar a eficácia da tera- pia. Em algumas modalidades, o número, nível ou quantidade de célu- las T administradas e/ou proliferação e/ou atividade das células T ad- ministradas é avaliado antes da administração e/ou após a administra- ção do inibidor de gama secretase.
[00547] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado até que a concentração ou o número de células modifi- cadas no sangue do indivíduo seja (i) pelo menos em ou cerca de 10 células modificadas por microlitro, (ii) pelo menos 20%, 30%, 40% ou 50% do número células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), (iii) pelo menos ou em pelo menos cerca de 1 x 10º células modificadas; ou (iv) pelo menos 5.000 cópias de DNA codificador de receptor recombinante por microgramas de DNA; e/ou no dia 90 após o início da administração em (a), as células de expressão de CAR são detectáveis no sangue ou soro do indivíduo; e/ou no dia 90 após o iní- cio da administração (a), no sangue do indivíduo contém pelo menos 20% de células de expressão de CAR, pelo menos 10 células de ex-
pressão de CAR por microlitro ou pelo menos 1 x 10º células de ex- pressão de CAR.
[00548] Em algumas modalidades, o inibidor de gama secretase é administrado até que haja um benefício clínico para o tratamento, co- mo pelo menos ou superior a um decréscimo de 50% no volume total do tumor, uma resposta completa (CR) na qual o tumor detectável de- sapareceu, sobrevivência livre de progressão ou sobrevivência livre de doença por mais de 6 meses ou mais de 1 ano ou mais.
[00549] Em algumas modalidades, uma mudança e/ou uma altera- ção, por exemplo, um aumento, uma elevação, uma diminuição ou uma redução nos níveis, valores ou medidas de um parâmetro ou re- sultado em comparação aos níveis, valores ou medidas do mesmo pa- râmetro ou resultado em um ponto de tempo diferente da avaliação, uma condição diferente, um ponto de referência e/ou um indivíduo di- ferente é determinado ou avaliado. Por exemplo, em algumas modali- dades, uma mudança de duplicação, por exemplo, um aumento ou di- minuição, em parâmetros particulares, por exemplo, número de células T modificadas em uma amostra, em comparação ao mesmo parâmetro em uma condição diferente, por exemplo, antes ou depois da adminis- tração do inibidor de gama secretase pode ser determinado. Em algu- mas modalidades, os níveis, valores ou medidas de dois ou mais pa- râmetros determinações ou medições de dois ou mais parâmetros são determinados, e os níveis relativos são comparados. Em algumas mo- dalidades, os níveis, valores ou medições determinados de parâmetros são comparados aos níveis, valores ou medições de uma amostra controle ou de uma amostra não tratada. Em algumas modalidades, os níveis, valores ou medições determinados de parâmetros são compa- rados aos níveis de uma amostra do mesmo indivíduo, porém, em um ponto de tempo diferente. Os valores obtidos na quantificação de pa- râmetros individuais podem ser combinados para fins de avaliação da doença, por exemplo, formando uma operação aritmética ou lógica nos níveis, valores ou medições de parâmetros usando análise multipara- métrica. Em algumas modalidades, uma relação de dois ou mais pa- râmetros específicos pode ser calculada. A. Exposição, persistência e proliferação de células T
[00550] Em algumas modalidades, o parâmetro associado à terapia ou a um resultado do tratamento, que inclui parâmetros que podem ser avaliados para as etapas de rastreamento e/ou avaliação do tratamen- to dos resultados e/ou monitoramento dos resultados do tratamento, é ou inclui a avaliação da exposição, persistência e proliferação das cé- lulas T, por exemplo, células T administradas para a terapia baseada em células T. Em algumas modalidades, a exposição aumentada ou expansão prolongada e/ou persistência das células e/ou mudanças nos fenótipos celulares ou atividade funcional das células, por exem- plo, células administradas para imunoterapia, por exemplo, terapia com células T, nos métodos no presente documento fornecidos, pode ser medida avaliando as características das células T in vitro ou ex vi- vo. Em algumas modalidades, estes ensaios podem ser usados para determinar ou confirmar a função das células T usadas para a imuno- terapia, por exemplo, terapia com células T, antes ou depois da admi- nistração de uma ou mais etapas da terapia de combinação no presen- te documento fornecida.
[00551] Em algumas modalidades, a administração do inibidor de gama secretase é projetada para promover a exposição do indivíduo às células, por exemplo, células T administradas para terapia baseada em células T, como promovendo-se sua expansão e/ou persistência ao longo do tempo. Em algumas modalidades, a terapia com células T exibe expansão e/ou persistência aumentada ou prolongada no indiví- duo, em comparação a um método no qual a terapia com células T é administrada ao indivíduo na ausência do inibidor da gama secretase.
[00552] Em algumas modalidades, os métodos fornecidos aumen- tam a exposição do indivíduo às células administradas (por exemplo, número aumentado de células ou duração ao longo do tempo) e/ou melhoram a eficácia e os resultados terapêuticos da imunoterapia, por exemplo, terapia com células T. Em alguns aspectos, os métodos são vantajosos, pois um grau maior e/ou mais longo de exposição às célu- las que expressam os receptores recombinantes, por exemplo, células de expressão de CAR, melhora os resultados do tratamento em com- paração a outros métodos. Tais resultados podem incluir sobrevivência e remissão do paciente, mesmo em indivíduos com carga tumoral gra- ve.
[00553] Em algumas modalidades, a administração do inibidor de gama secretase pode aumentar a duração máxima, total e/ou da ex- posição às células, por exemplo, células T administradas para a tera- pia baseada em células T, no indivíduo, em comparação à administra- ção das células T isoladamente na ausência do inibidor de gama se- cretase. Em alguns aspectos, a administração do inibidor da gama se- cretase, no contexto de alta carga de doenças (e, portanto, maiores quantidades de antígeno) e/ou um câncer mais agressivo ou resisten- te, realça a eficácia em comparação à administração das células T iso- ladamente, na ausência do inibidor da gama secretase no mesmo con- texto, o que pode resultar em imunossupressão, anergia e/ou exaus- tão, o que pode impedir a expansão e/ou persistência das células.
[00554] Em algumas modalidades, a presença e/ou quantidade de células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, células de expressão de CAR administradas para terapia baseada em células T) no indivíduo após a administração das células T e antes, durante e/ou após a administração do inibidor da gama secretase é detectado. Em alguns aspectos, a PCR quantitativa (PCR) é usada para avaliar a quantidade de células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, células de expressão de CAR administradas para terapia ba- seada em células T) no sangue ou soro ou amostra de órgão ou tecido (por exemplo, sítio da doença por exemplo, amostra de tumor) do indi- víduo. Em alguns aspectos, a persistência é quantificada como cópias de DNA ou plasmídeo que codifica o receptor, por exemplo, CAR, por micrograma de DNA, ou como o número de células de expressão de receptor, por exemplo, de expressão de CAR, por microlitro da amos- tra, por exemplo, de sangue ou soro ou por número total de células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) ou glóbulos brancos ou células T por microlitro da amostra.
[00555] Em algumas modalidades, as células são detectadas no indivíduo em ou pelo menos em 4, 14, 15, 27 ou 28 dias após a admi- nistração das células T, por exemplo, células T de expressão de CAR. Em alguns aspectos, as células são detectadas em ou pelo menos em 2,4 ou 6 semanas após, ou 3, 6,12, 18, 24, 30 ou 36 meses, ou 1,2, 3, 4, 5 ou mais anos, após a administração das células T, por exemplo, células T de expressão de CAR e/ou inibidor de gama secretase.
[00556] Em algumas modalidades, a persistência de células de ex- pressão de receptores (por exemplo, células de expressão de CAR) no indivíduo pelos métodos, após a administração das células T, por exemplo, células T de expressão de CAR e/ou inibidor de gama secre- tase, é maior em comparação ao que seria alcançado por métodos al- ternativos, tais como aqueles que envolvem a administração da imuno- terapia isoladamente, por exemplo, administração de células T, por exemplo, células T de expressão de CAR, na ausência do inibidor de gama secretase.
[00557] A exposição, por exemplo, número de células, por exemplo, células T administradas para terapia de células T, indicativas de ex- pansão e/ou persistência, podem ser declaradas em termos de núme- ros máximos das células as quais o indivíduo está exposto, duração de células ou células detectáveis acima de um determinado número ou porcentagem, área sob a curva para número de células ao longo do tempo, e/ou combinações dos mesmos e indicaões dos mesmos. Tais resultados podem ser avaliados usando métodos conhecidos, como qPCR para detectar o número de cópias de ácidos nucleicos que codi- ficam o receptor recombinante em comparação à quantidade total de ácido nucleico ou DNA na célula particular, por exemplo, sangue, soro, plasma ou tecido, como uma amostra de tumor e/ou ensaios citométri- cos de fluxo detectando células que expressam o receptor geralmente usando anticorpos específicos para os receptores. Os ensaios basea- dos em células também podem ser usados para detectar o número ou porcentagem de células funcionais, como células capazes de se ligar e/ou neutralizar e/ou induzir respostas, por exemplo, respostas citotó- xicas, contra células da doença ou condição ou expressão do antígeno reconhecido pelo receptor.
[00558] Em alguns aspectos, a exposição aumentada do indivíduo às células inclui expansão aumentada das células. Em algumas moda- lidades, as células de expressão de receptores, por exemplo, células de expressão de CAR, expandem-se no indivíduo após a administra- ção das células T, por exemplo, células T de expressão de CAR e/ou após a administração do inibidor de gama secretase. Em alguns as- pectos, os métodos resultam em maior expansão das células em com- paração a outros métodos, como aqueles que envolvem a administra- ção das células T, por exemplo, células T de expressão de CAR, na ausência de administração do inibidor de gama secretase.
[00559] Em alguns aspectos, o método resulta em alta proliferação in vivo das células administradas, por exemplo, como medido por ci- tometria de fluxo. Em alguns aspectos, altas proporções de pico das células são detectadas. Por exemplo, em algumas modalidades, em um nível de pico ou máximo após a administração das células T, por exemplo, células T de expressão de CAR e/ou inibidor de gama secre- tase, no sangue ou sítio da doença do indivíduo ou fração de glóbulos brancos do mesmo, por exemplo, fração de PBMC ou fração de célu- las T, pelo menos cerca de 10%, pelo menos cerca de 20%, pelo me- nos cerca de 30%, pelo menos cerca de 40%, pelo menos cerca de 50%, pelo menos cerca de 60%, pelo menos cerca de 70%, pelo me- nos cerca de 80% ou pelo menos cerca de 90% das células expres- sam o receptor recombinante, por exemplo, o CAR.
[00560] Em algumas modalidades, o método resulta em uma con- centração máxima, no sangue ou soro ou outro fluido ou órgão ou te- cido corporal do indivíduo, de pelo menos 100, 500, 1000, 1500, 2000, 5000, 10.000 ou 15.000 cópias de ou ácido nucleico que codifica o re- ceptor, por exemplo, o CAR, por micrograma de DNA, ou pelo menos 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8 ou 0,9 de células de expressão de receptor, por exemplo, de expressão de CAR por número total de célu- las mononucleares de sangue periférico (PBMCs), número total de cé- lulas mononucleares, número total de células T ou número total de mi- crolitros. Em algumas modalidades, as células que expressam o re- ceptor são detectadas como pelo menos 10, 20, 30, 40, 50 ou 60% de PBMCs totais no sangue do indivíduo e/ou em um tal nível por pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 48 ou 52 semanas após as células T, por exemplo, células T de expressão de CAR e/ou o inibidor de gama secretase, ou por 1, 2, 3, 4 ou 5 ou mais anos após a administração.
[00561] Em alguns aspectos, o método resulta em um aumento de pelo menos 2 vezes, pelo menos 4 vezes, pelo menos 10 vezes ou pelo menos 20 vezes em cópias de ácido nucleico que codifica o re- ceptor recombinante, por exemplo, CAR, por micrograma de DNA, por exemplo, no soro, plasma, sangue ou tecido, por exemplo, amostra de tumor, do indivíduo.
[00562] Em algumas modalidades, as células que expressam o re- ceptor são detectáveis no soro, plasma, sangue ou tecido, por exem- plo, amostra de tumor, do indivíduo, por exemplo, por um método es- pecificado, como qPCR ou métodos de detecção baseados em citome- tria de fluxo, pelo menos 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 ou 60 ou mais dias após a adminis- tração das células T, por exemplo, células T de expressão de CAR, ou após administração do inibidor de gama secretase, por pelo menos em ou cerca de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ou 24 ou mais semanas após a administração das célu- las T, por exemplo, células T de expressão de CAR e/ou inibidor de gama secretase.
[00563] Em alguns aspectos, pelo menos cerca de 1 x 102º, pelo menos cerca de 1 x 103, pelo menos cerca de 1 x 10º, pelo menos cer- ca de 1 x 10º ou pelo menos cerca de 1 x 10º ou pelo menos cerca de x 10º ou pelo menos cerca de 1 x 107 ou pelo menos cerca de 5 x 107 ou pelo menos cerca de 1 x 10º de células de expressão de recep- tores recombinantes, por exemplo, de expressão de CAR e/ou pelo menos 10, 25, 50, 100, 200, 300, 400 ou 500, ou 1000 células de ex- pressão de receptores por microlitro, por exemplo, pelo menos 10 por microlitro, são detectáveis ou estão presentes no indivíduo ou fluido, plasma, soro, tecido ou compartimento do mesmo, como no sangue, por exemplo, sangue periférico, ou sítio da doença, por exemplo, tu- mor do mesmo. Em algumas modalidades, um tal número ou concen- tração de células é detectável no indivíduo por pelo menos cerca de 20 dias, pelo menos cerca de 40 dias ou pelo menos cerca de 60 dias ou pelo menos cerca de 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 meses, ou pelo menos 2 ou 3 anos, após a administração das células T, por exemplo, células T de expressão de CAR, e/ou após a administração do inibidor de gama secretase. Tais números de células podem ser como detec- tados por métodos baseados em PCR quantitativos ou baseados em citometria de fluxo e extrapolação para números de células totais usando métodos conhecidos. Veja, por exemplo, Brentjens et a/., Bren- tjens et al., Sci Trans! Med. 2013 5(177), Park et al, Molecular Therapy 15(4):825-833 (2007), Savoldo et al., JCI 121(5):1822-1826 (2011), Davila et a/l., (2013) PLoS ONE 8(4):e61338, Davila et al., Oncoimmu- nology 1(9):1577-1583 (2012), Lamers, Blood 2011 117:72-82, Jensen et al., Biol Blood Marrow Transplant 2010 September; 16(9): 1245 1256, Brentjens et al., Blood 2011 118(18):4817-4828.
[00564] Em alguns aspectos, o número de cópias de ácido nucleico que codifica o receptor recombinante, por exemplo, número de cópias de vetores, por 100 células, por exemplo, no sangue periférico ou me- dula óssea ou outro compartimento, como medido por imuno- histoquímica, PCR e/ou citometria de fluxo, é pelo menos 0,01, pelo menos 0,1, pelo menos 1 ou pelo menos 10, cerca de | semana, cerca de 2 semanas, cerca de 3 semanas, cerca de 4 semanas, cerca de 5 semanas ou pelo menos cerca de 6 semanas ou pelo menos cerca de 2,3,4,5,6,7, 8.9, 10, 11 ou 12 meses ou pelo menos 2 ou 3 anos após a administração das células, por exemplo, células T de expres- são de CAR e/ou o inibidor de gama secretase. Em algumas modali- dades, o número de cópias do vetor que expressa o receptor, por exemplo, CAR, por micrograma de DNA genômico é pelo menos 100, pelo menos 1000, pelo menos 5000, ou pelo menos 10.000, ou pelo menos 15.000 ou pelo menos 20.000 por vez, cerca de | semana, cer- ca de 2 semanas, cerca de 3 semanas ou pelo menos cerca de 4 se- manas após a administração das células T, por exemplo, células T de expressão de CAR ou inibidor de gama secretase, ou pelo menos 2, 3, 4,5,6,7, 8,9, 10, 11 ou 12 meses ou pelo menos 2 ou 3 anos após a administração.
[00565] Em alguns aspectos, o receptor, por exemplo, CAR, ex- presso pelas células, é detectável por PCR quantitativa (PCR) ou por citometria de fluxo no indivíduo, plasma, soro, sangue, tecido e/ou sítio da doença do mesmo, por exemplo, sítio do tumor, em um momento que seja pelo menos cerca de 3 meses, pelo menos cerca de 6 meses, pelo menos cerca de 12 meses, pelo menos cerca de 1 ano, pelo me- nos cerca de 2 anos, pelo menos cerca de 3 anos ou mais de 3 anos, após a administração das células, por exemplo, após o início da admi- nistração das células T, por exemplo, células T de expressão de CAR e/ou inibidor de gama secretase.
[00566] Em algumas modalidades, a área sob a curva (AUC) para concentração de células de expressão de receptores (por exemplo, CAR) em um fluido, plasma, soro, sangue, tecido, órgão e/ou sítio da doença, por exemplo, o Isítio do tumor, do indivíduo ao longo do tempo após a administração das células T, por exemplo, células T de expres- são de CAR e/ou inibidor de gama secretase, é maior em comparação ao alcançado por meio de um regime de dosagem alternativo em que o indivíduo recebe células T, por exemplo, células T de expressão de CAR, na ausência da administração do inibidor de gama secretase.
[00567] Em alguns aspectos, o método resulta em alta proliferação in vivo das células administradas, por exemplo, como medido por ci- tometria de fluxo. Em alguns aspectos, altas proporções de pico das células são detectadas. Por exemplo, em algumas modalidades, em um nível de pico ou máximo após as células T, por exemplo, células T de expressão de CAR e/ou inibidor de gama secretase, no sangue, plasma, soro, tecido ou sítio da doença do indivíduo ou fração de gló- bulos brancos do mesmo, por exemplo, fração de PBMC ou fração de células T, pelo menos cerca de 10%, pelo menos cerca de 20%, pelo menos cerca de 30%, pelo menos cerca de 40%, a pelo menos cerca de 50%, pelo menos cerca de 60%, pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 80% ou pelo menos cerca de 90% das células ex- pressam o receptor recombinante, por exemplo, o CAR.
[00568] “Em alguns aspectos, a expansão aumentada ou prolongada e/ou persistência da dose de células no indivíduo administrado com o inibidor de gama secretase está associada a um benefício nos resulta- dos relacionados ao tumor no indivíduo. Em algumas modalidades, o resultado relacionado ao tumor inclui uma diminuição na carga tumoral ou uma diminuição na medula blástica no indivíduo. Em algumas mo- dalidades, a carga tumoral é diminuída em ou em pelo menos em ou cerca de 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ou 100 por cento após a administração do método. Em algumas modalidades, a carga da doen- ça, o tamanho do tumor, o volume do tumor, a massa do tumor e/ou o carregamento ou carga do tumor são reduzidos após a dose das célu- las em pelo menos em ou cerca de 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação ao indivíduo que foi tratado com um método que não envolve a administração de um inibidor de gama secretase. B. Atividade Funcional das Células T
[00569] Em algumas modalidades, os parâmetros associados à te- rapia ou a um resultado do tratamento, que incluem parâmetros que podem ser avaliados para as etapas de rastreamento e/ou avaliação do tratamento dos resultados e/ou monitoramento dos resultados do tratamento, incluem um ou mais dentre atividade, fenótipo, proliferação ou função das células T. Em algumas modalidades, qualquer um dos ensaios conhecidos na técnica para avaliar a atividade, fenótipos, pro- liferação e/ou função das células T, por exemplo, células T administra- das para terapia de células T, pode ser usado. Antes e/ou subsequen- temente à administração das células e/ou inibidor da gama secretase, a atividade biológica das populações de células modificadas em algu- mas modalidades é medida, por exemplo, por qualquer um de vários métodos conhecidos. Parâmetros para avaliar incluem a ligação espe-
cífica de uma célula T modificada ou natural ou outra célula imune ao antígeno, in vivo, por exemplo, por imagem, ou ex vivo, por exemplo, por ELISA ou citometria de fluxo. Em certas modalidades, a capacida- de das células modificadas destruirem as células alvo pode ser medida usando qualquer método adequado conhecido na técnica, como en- saios de citotoxicidade descritos em, por exemplo, Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009) e Herman et al., J. Immuno- logical Methods, 285(1): 25-40 (2004). Em certas modalidades, a ativi- dade biológica das células é medida avaliando a expressão e/ou se- creção de uma ou mais citocinas, como CD107a, IFNy, IL-2, GM-CSF e TNFa, e/ou avaliando a atividade citolítica.
[00570] Em algumas modalidades, ensaios para a atividade, fenóti- pos, proliferação e/ou função das células T, por exemplo, células T administradas para terapia de células T incluem, porém, não estão |i- mitados a, ELISPOT, ELISA, proliferação celular, ensaio de linfócitos citotóxicos (CTL), ligação ao epítopo da célula T, antígeno ou ligante ou manchamento de citocina intracelular, ensaios de proliferação, en- saios de secreção de linfocinas, ensaios de citotoxicidade diretos e ensaios de diluição limitantes. Em algumas modalidades, as respostas proliferativas das células T podem ser medidas, por exemplo, por in- corporação de H-timidina, BrdU (5-bromo-2'-Desoxiuridina) ou 2'- desóxi-5-etiniluridina (EdU) em seus ensaios de diluição de corante ou DNA, usando corantes como inhibitoryl éster de succingama secretase de diacetato de carboxifluoresceína (CFSE), Violeta CellTrace ou co- rante de membrana PKH26.
[00571] Em algumas modalidades, avaliar a atividade, fenótipos, proliferação e/ou função das células T, por exemplo, células T adminis- tradas para terapia com células T, inclui medir a produção de citocinas a partir de células T e/ou medir a produção de citocinas em uma amos- tra biológica do indivíduo, por exemplo, amostras de plasma, soro,
sangue e/ou tecido, por exemplo, amostras de tumor. Em alguns ca- sos, estas citocinas medidas podem incluir, sem limitação, interleuci- na-2 (IL-2), interferon-gama (IFNy), interleucina-4 (IL-4), TNF-alfa (TNFa), interleucina-6 (IL-6), interleucina-10 (IL-10), interleucina-12 (I1L-12), fator estimulador de colônias de granulócitos e macrófagos (GM-CSF), CD107a e/ou TGF-beta (TGFB). Ensaios para medir as ci- tocinas são bem conhecidos na técnica, e incluem, porém, não estão limitados a, ELISA, manchamento de citocina intracelular, arranjo de contas citométricas, RT-PCR, ELISPOT, citometria de fluxo e bioen- saios nos quais as células responsivas à citocina relevante são testa- das quanto à responsividade (por exemplo, proliferação) na presença de uma amostra teste.
[00572] Em algumas modalidades, a avaliação da atividade, fenóti- pos, proliferação e/ou função das células T, por exemplo, células T administradas para terapia com células T, inclui a avaliação de fenóti- pos celulares, por exemplo, expressão de marcadores da superfície celular particular. Em algumas modalidades, as células T, por exem- plo, células T administradas quanto à terapia de células T, são avalia- das quanto à expressão de marcadores de ativação de células T, mar- cadores de exaustão de células T e/ou marcadores de diferenciação de células T. Em algumas modalidades, o fenótipo celular é avaliado antes da administração. Em algumas modalidades, o fenótipo celular é avaliado após a administração. Marcadores de ativação de células T, marcadores de exaustão de células T e/ou marcadores de diferencia- ção de células T para avaliação incluem quaisquer marcadores conhe- cidos na técnica para subconjuntos particulares de células T, por exemplo, CD25, CD38, antígeno leucocitário humano-DR (HLA-DR), CD69, CD44, CD137, KLRG1, CD62Lºa, COR7rax, CD71, CD?2, CD54, CD58, CD244, CD160, proteína de morte celular programada 1 (PD-1), proteína do gene 3 de ativação de linfócitos (LAG-3), domínio de imunoglobulina de células T e proteína do domínio da mucina 3 (TIM-3), antígeno-4 de linfócito T citotóxico (CTLAH4), atenuador de linfócitos T da banda (BTLA) e/ou imunoglobulina de células T e domí- nio do motivo inibidor baseado em tirosina imunorreceptora (TIGIT) (veja, por exemplo, Liu et al., Cell Death and Disease (2015) 6, e1792). Em algumas modalidades, o marcador de superfície celular avaliado é CD25, PD-1 e/ou TIM-3. Em algumas modalidades, o marcador de su- perfície celular avaliado é CD25.
[00573] Em alguns aspectos, a detecção dos níveis de expressão inclui a realização de um ensaio in vitro. Em algumas modalidades, o ensaio in vitro é um imunoensaio, um ensaio baseado em aptâmero, um ensaio histológico ou citológico ou um ensaio de nível de expres- são de mMRNA. Em algumas modalidades, o parâmetro ou parâmetros para um ou mais dentre cada um ou mais fatores, efetores, enzimas e/ou marcadores de superfície são detectados por um ensaio imunos- sorvente ligado à enzima (ELISA), imunoblotting, imunoprecipitação, radioimunoensaio (RIA), imunomanchamento, ensaio de citometria de fluxo, ressonância de plasmônio superficial (SPR), ensaio de quimio- luminescência, imunoensaio de fluxo lateral, ensaio de inibição ou en- saio de avidez. Em algumas modalidades, a detecção de citocinas e/ou marcadores de superfície é determinada usando um reagente de ligação que se liga especificamente a pelo menos um biomarcador. Em alguns casos, o reagente de ligação é um anticorpo ou seu frag- mento de ligação ao antígeno, um aptâmero ou uma sonda de ácido nucleico.
[00574] Em algumas modalidades, a administração do inibidor de gama secretase aumenta o nível de células CAR T circulantes. C. Carga da doença
[00575] Em algumas modalidades, os parâmetros associados à te- rapia ou a um resultado do tratamento, que incluem parâmetros que podem ser avaliados para as etapas de rastreamento e/ou avaliação do tratamento dos resultados e/ou monitoramento dos resultados do tratamento, incluem carga tumoral ou doença. A administração da imunoterapia, como uma terapia de células T (por exemplo, células T de expressão de CAR) e/ou inibidor de gama secretase, pode reduzir ou impedir a expansão ou a carga da doença ou condição no indiví- duo. Por exemplo, onde a doença ou condição é um tumor, os méto- dos geralmente reduzem o tamanho do tumor, volume, metástase, porcentagem de explosões na medula óssea ou câncer detectável mo- lecularmente e/ou melhoram o prognóstico ou sobrevivência ou outro sintoma associado à carga tumoral.
[00576] Em algumas modalidades, os métodos fornecidos resultam em uma carga tumoral diminuída em indivíduos tratados em compara- ção com métodos alternativos nos quais a imunoterapia, como uma terapia de células T (por exemplo, células T de expressão de CAR) é dada sem administração do inibidor de gama secretase. Não é neces- sário que a carga tumoral seja realmente reduzida em todos os indiví- duos que recebem a terapia de combinação, mas que a carga tumoral seja reduzida em média nos indivíduos tratados, como com base em dados clínicos, nos quais a maioria dos indivíduos tratados com essa terapia de combinação exibe uma carga tumoral reduzida, como pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ou mais dos indivíduos trata- dos com a terapia de combinação, exibe uma carga tumoral reduzida.
[00577] Acargada doença pode abranger um número total de célu- las da doença no indivíduo ou em um órgão, tecido ou fluido corporal do indivíduo, como o órgão ou o tecido do tumor ou outro local, por exemplo, o que indicaria metástase. Por exemplo, as células tumorais podem ser detectadas e/ou quantificadas no sangue, linfa ou medula óssea no contexto de certas malignidades hematológicas. A carga de doenças pode incluir, em algumas modalidades, a massa de um tu-
mor, o número ou extensão de metástases e/ou a porcentagem de cé- lulas blásticas presentes na medula óssea.
[00578] Em algumas modalidades, o indivíduo tem um mieloma, um linfoma ou uma leucemia. Em algumas modalidades, o indivíduo tem um linfoma não Hodgkin (NHL), uma leucemia linfoblástica aguda (ALL), uma leucemia linfocítica crônica (CLL), um linfoma difuso de célula B grandes (DLBCL) ou um mieloma, por exemplo, um múltiplo mieloma (MM). Em algumas modalidades, o indivíduo tem um MM ou um DBCBL.
[00579] Em algumas modalidades, o indivíduo tem um tumor sólido.
[00580] Em algumas modalidades, o indivíduo tem um MM. Em al- guns casos, o MM é um MM reincidente e/ou refratário. No caso de MM, parâmetros exemplares para avaliar a extensão da carga da do- ença incluem parâmetros como número de células plasmáticas clonais (por exemplo,> 10% na biópsia da medula óssea ou em qualquer quantidade em uma biópsia de outros tecidos; plasmocitoma), presen- ça de proteína monoclonal (paraproteína) no soro ou na urina, evidên- cia de lesão de órgão final sentida relacionada ao distúrbio das células plasmáticas (por exemplo, hipercalcemia (cálcio corrigido >2,75 mmol/l); insuficiência renal atribuível ao mieloma; anemia (hemoglobi- na <10 g/dl) e/ou lesões ósseas (lesões líticas ou osteoporose com fraturas por compressão)).
[00581] No caso de DLBCL, parâmetros exemplares para avaliar a extensão da carga da doença incluem parâmetros como morfologia celular (por exemplo, células centroblásticas, imunoblásticas e anaplá- Sicas), expressão gênica, expressão de miRNA e expressão de proteí- nas (por exemplo, expressão de BCL2, BCL6, MUM1, LMO2, MYC e p21).
[00582] No caso da leucemia, a extensão da carga da doença pode ser determinada pela avaliação da leucemia residual no sangue ou na medula óssea. Em algumas modalidades, um indivíduo exibe doença morfológica se houver explosões maiores ou iguais a 5% na medula óssea, por exemplo, como detectado por microscopia ótica. Em algu- mas modalidades, um indivíduo exibe remissão completa ou clínica se houver menos de 5% de explosões na medula óssea.
[00583] Em algumas modalidades, para leucemia, um indivíduo po- de exibir remissão completa, porém, uma pequena proporção de célu- las leucêmicas residuais morfologicamente indetectáveis (por técnicas de microscopia de luz) está presente. Diz-se que o indivíduo exibe do- ença residual mínima (MRD) se o indivíduo exibir menos de 5% de ex- plosões na medula óssea e exibir câncer detectável molecularmente. Em algumas modalidades, o câncer detectável molecularmente pode ser avaliado usando qualquer uma de uma variedade de técnicas mo- leculares que permitem a detecção sensível de um pequeno número de células. Em alguns aspectos, estas técnicas incluem ensaios de PCR, que podem determinar rearranjos únicos de genes de receptores de células de Ig/T ou transcrições de fusão produzidas por transloca- ções cromossômicas. Em algumas modalidades, a citometria de fluxo pode ser usada para identificar células cancerígenas com base em imunofenótipos específicos de leucemia. Em algumas modalidades, a detecção molecular do câncer pode detectar até 1 célula de leucemia em 100.000 células normais. Em algumas modalidades, um indivíduo exibe MRD que é detectável molecularmente se pelo menos ou mais de 1 célula de leucemia em 100.000 células for detectada, como por PCR ou citometria de fluxo. Em algumas modalidades, a carga da do- ença de um indivíduo é molecularmente indetectável ou MRD, de mo- do que, em alguns casos, nenhuma célula de leucemia seja capaz de ser detectada no indivíduo usando técnicas de PCR ou de citometria de fluxo.
[00584] Em algumas modalidades, os métodos e/ou administração de uma imunoterapia, como uma terapia de células T (por exemplo, células T de expressão de CAR) e/ou inibidor de gama secretase, di- minuem a carga da doença em comparação com a carga da doença imediatamente antes à administração da imunoterapia, por exemplo, terapia com células T e/ou inibidor de gama secretase.
[00585] Em alguns aspectos, a administração da imunoterapia, por exemplo, a terapia com células T e/ou inibidor de gama secretase po- de impedir um aumento na carga da doença, e isto pode ser evidenci- ado por nenhuma mudança na carga da doença.
[00586] Em algumas modalidades, o método reduz a carga da do- ença ou condição, por exemplo, número de células tumorais, tamanho do tumor, duração da sobrevivência do paciente ou sobrevivência livre de eventos, em maior grau e/ou por um período maior de tempo, em comparação à redução que seria observada com um método compa- rável usando uma terapia alternativa, como aquela na qual o indivíduo recebe imunoterapia, por exemplo, terapia com células T sozinha, na ausência da administração do inibidor de gama secretase. Em algu- mas modalidades, a carga da doença é reduzida em maior extensão ou por uma maior duração após a terapia de combinação de adminis- tração da imunoterapia, por exemplo, terapia com células T e o inibidor de gama secretase, em comparação à redução que seria efetuada pe- la administração de cada um dos agentes isoladamente, por exemplo, administração do inibidor de gama secretase a um indivíduo que não recebeu a imunoterapia, por exemplo, terapia de células T; ou adminis- tração da imunoterapia, por exemplo, terapia com células T, a um indi- víduo que não recebeu o inibidor de gama secretase.
[00587] Em algumas modalidades, a carga de uma doença ou con- dição no indivíduo é detectada, avaliada ou medida. A carga de doen- ça pode ser detectada em alguns aspectos pela detecção do número total de doenças ou células associadas a doenças, por exemplo, célu-
las tumorais, no indivíduo, ou em um órgão, tecido ou fluido corporal do indivíduo, como sangue ou soro. Em algumas modalidades, carga de doença, por exemplo, carga tumoral, é avaliada medindo a massa de um tumor sólido e/ou o número ou extensão de metástases. Em alguns aspectos, a sobrevivência do indivíduo, a sobrevivência dentro de um determinado período de tempo, a extensão da sobrevivência, a presença ou a duração da sobrevivência livre de eventos ou sem sin- tomas, ou sobrevivência livre de recaída, é avaliada. Em algumas mo- dalidades, qualquer sintoma da doença ou condição é avaliado. Em algumas modalidades, a medida da carga de doença ou condição é especificada. Em algumas modalidades, parâmetros exemplares para determinação incluem resultados clínicos particulares indicativos de melhoria ou aperfeiçoamento da doença ou condição, por exemplo, tumor. Tais parâmetros incluem: duração do controle da doença, inclu- indo resposta completa (CR), resposta parcial (PR) ou dença estável (SD) (veja, por exemplo, diretrizes de Response Evaluation Criteria Ih Solid Tumors (RECIST)), taxa de resposta objetiva (ORR), sobrevivên- cia livre de progressão (PFS) e sobrevivência global (OS). É possível definir limites específicos para os parâmetros para determinar a eficá- cia do método de terapia de combinação no presente documento for- necido.
[00588] Em alguns aspectos, a carga da doença é medida ou detec- tada antes da administração da imunoterapia, por exemplo, terapia com células T, após a administração da imunoterapia, por exemplo, terapia com células T, porém, antes da administração do inibidor de gama secretase, após a administração do inibidor de gama secretase, porém, antes da administração da imunoterapia, por exemplo, terapia com células T e/ou após a administração de ambas a imunoterapia, por exemplo, terapia com células T e inibidor de gama secretase. No contexto da administração múltipla de uma ou mais etapas da terapia de combinação, a carga da doença em algumas modalidades pode ser medida antes ou após a administração de qualquer uma das etapas, doses e/ou ciclos de administração, ou em um momento entre a admi- nistração de qualquer uma das etapas, doses e/ou ciclos de adminis- tração.
[00589] Em algumas modalidades, a carga é diminuída em ou em pelo menos em ou cerca de 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ou 100 por cento pelos métodos fornecidos em comparação com imediata- mente antes da administração do inibidor de gama secretase e imuno- terapia, por exemplo, terapia com células T. Em algumas modalidades, a carga da doença, tamanho do tumor, volume do tumor, massa do tumor e/ou carregamento ou carga de tumor é reduzida após a admi- nistração da imunoterapia, por exemplo, terapia com células T e o ini- bidor de gama secretase, em pelo menos em ou cerca de 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90% ou mais em comparação a imediatamente pre- cedente à administração da imunoterapia, por exemplo, terapia com células T e/ou inibidor de gama secretase.
[00590] Em algumas modalidades, a redução da carga de doença pelo método compreende uma indução na remissão morfológica com- pleta, por exemplo, como avaliada em 1 mês, 2 meses, 3 meses ou mais de 3 meses, após a administração de, por exemplo, início da te- rapia de combinação.
[00591] Em alguns aspectos, um teste para doença residual míni- ma, por exemplo, medido por citometria de fluxo multiparamétrica, é negativo ou o nível de doença residual mínima é menor que cerca de 0,3%, menor que cerca de 0,2%, menor que cerca de 0,1%, ou menor que cerca de 0,05%.
[00592] Em algumas modalidades, a taxa de sobrevivência livre de eventos ou a taxa de sobrevivência global do indivíduo é melhorada pelos métodos, em comparação a outros métodos. Por exemplo, em algumas modalidades, a taxa de sobrevivência livre de eventos ou a probabilidade de indivíduos tratados pelos métodos em 6 meses após o método de terapia de combinação no presente documento fornecido, é maior que cerca de 40%, maior que cerca de 50%, maior que cerca de 60%, maior que cerca de 70%, maior que cerca de 80%, maior que cerca de 90% ou maior que cerca de 95%. Em alguns aspectos, a taxa de sobrevivência global é maior que cerca de 40%, maior que cerca de 50%, maior que cerca de 60%, maior que cerca de 70%, maior que cerca de 80%, maior que cerca de 90% ou superior a cerca de 95%. Em algumas modalidades, o indivíduo tratado com os métodos exibe sobrevivência livre de eventos, sobrevivência livre de recaída ou so- brevivência por pelo menos 6 meses ou pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6,7, 8, 9, ou 10 anos. Em algumas modalidades, o tempo para progressão é melhorado, como um tempo para progressão superior a cerca de 6 meses ou pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 anos.
[00593] Em algumas modalidades, após o tratamento pelo método, a probabilidade de recaída é reduzida em comparação a outros méto- dos. Por exemplo, em algumas modalidades, a probabilidade de recaí- da aos 6 meses após o método de terapia de combinação é inferior a cerca de 80%, inferior a cerca de 70%, inferior a cerca de 60%, inferior a cerca de 50%, inferior a cerca de 40%, inferior a cerca de 30%, infe- rior a cerca de 20% ou inferior a cerca de 10%. W. ARTIGOS DE FABRICAÇÃO E KITS
[00594] “Também são fornecidos artigos de fabricação que contêm um inibidor de gama secretase e componentes para a imunoterapia, por exemplo, fragmento de ligação ao anticorpo ou antígeno do mes- mo ou terapia com células T, células modificadas e/ou composições das mesmas. Os artigos de fabricação podem incluir um recipiente e um rótulo ou encarte de embalagem em ou associado ao recipiente. Os recipientes adequados incluem, por exemplo, garrafas, frascone-
tes, seringas, sacos de solução IV, etc. Os recipientes podem ser for- mados a partir de uma variedade de materiais, como vidro ou plástico. O recipiente em algumas modalidades mantém uma composição que é por si só ou combinada com outra composição eficaz para o tratamen- to, prevenção e/ou diagnóstico da condição. Em algumas modalida- des, o recipiente tem um orifício de acesso estérila. Os recipientes exemplares incluem sacos de solução intravenosa, frasconetes, inclu- indo aqueles com tampões perfuráveis por uma agulha para injeção, ou garrafas ou frasconetes para agentes administrados por via oral. O rótulo ou encarte de embalagem pode indicar que a composição é usada para tratar uma doença ou condição.
[00595] O artigo de fabricação pode incluir (a) um primeiro recipien- te com uma composição nele contida, em que a composição inclui o anticorpo ou células modificadas usadas para a imunoterapia, por exemplo, terapia de células T; e (b) um segundo recipiente com uma composição contida nele, em que a composição inclui o segundo agente, como um inibidor de gama secretase. O artigo de fabricação pode ainda incluir uma encarte de embalagem indicando que as com- posições podem ser usadas para tratar uma condição específica. Al- ternativamente, ou adicionalmente, o artigo de fabricação pode ainda incluir outro ou o mesmo recipiente que compreende um tampão far- maceuticamente aceitável. Pode incluir ainda outros materiais, como outros tampões, diluentes, filtros, agulhas e/ou seringas. Vv. DEFINIÇÕES
[00596] A menos que definido de outra maneira, todos os termos da técnica, notações e outros termos ou terminologia técnica e científica usados aqui têm o mesmo significado que é comumente entendido por alguém versado na técnica a que a matéria objeto reivindicada perten- ce. Em alguns casos, os termos com significados comumente entendi- dos são no presente documento definidos para maior clareza e/ou pa-
ra referência imediata, e a inclusão de tais definições no presente do- cumento não deve necessariamente ser interpretada para representar uma diferença substancial em relação ao que geralmente é entendido na técnica.
[00597] “Quando no presente documento usado, um "indivíduo" é um mamífero, como um humano ou outro animal, e normalmente é humano. Em algumas modalidades, o indivíduo, por exemplo, pacien- te, a quem os polipeptídeos imunomoduladores, células modificadas ou composições, tais como contendo um composto, por exemplo, ini- bidor de gama secretase, são administrados, é um mamífero, tipica- mente um primata, como um humano. Em algumas modalidades, o primata é um macaco ou um símio. O indivíduo pode ser homem ou mulher e pode ter qualquer idade adequada, incluindo indivíduos infan- tis, juvenis, adolescentes, adultos e geriátricos. Em algumas modali- dades, o indivíduo é um mamífero não primata, como um roedor. Em modalidades particulares, o indivíduo é um humano.
[00598] “Quando no presente documento usado, "tratamento" (e va- riações gramaticais do mesmo, como "tratar" ou "tratando") refere-se à melhoria ou redução completa ou parcial de uma doença ou condição ou distúrbio, ou um sintoma, efeito ou resultado adverso ou fenótipo associado com isto. Os efeitos desejáveis do tratamento incluem, po- rém, não limitados à, prevenção da ocorrência ou recorrência da do- ença, alívio dos sintomas, diminuição de quaisquer consequências pa- tológicas diretas ou indiretas da doença, prevenção de metástases, diminuição da taxa de progressão da doença, melhoria ou paliação do estado da doença e remissão ou prognóstico melhorado. Os termos não implicam a cura completa de uma doença ou a eliminação comple- ta de qualquer sintoma ou efeito(s) em todos os sintomas ou resulta- dos.
[00599] “Quando no presente documento usado, "atrasar o desen-
volvimento de uma doença" significa adiar, impedir, reduzir, retardar, estabilizar, suprimir e/ou adiar o desenvolvimento da doença (como o câncer). Este atraso pode ser de duração variável, dependendo da his- tória da doença e/ou indivíduo a ser tratado. Como é evidente para al- guém versado na técnica, um atraso suficiente ou significativo pode, com efeito, abranger a prevenção, na medida em que o indivíduo não desenvolve a doença. Por exemplo, o câncer em estágio final, como desenvolvimento de metástase, pode ser retardado.
[00600] "“Prevenindo", quando no presente documento usado, inclui o fornecimento de profilaxia com relação à ocorrência ou recorrência de uma doença em um indivíduo que pode estar predisposto à doença, mas ainda não foi diagnosticado com a doença. Em algumas modali- dades, as células e composições fornecidas são usadas para atrasar o desenvolvimento de uma doença ou para retardar a progressão de uma doença.
[00601] “Quando no presente documento usado, "suprimir" uma fun- ção ou atividade é reduzir a função ou atividade quando comparada com as mesmas condições, exceto para uma condição ou parâmetro de interesse, ou alternativamente, em comparação com outra condi- ção. Por exemplo, as células que suprimem o crescimento tumoral re- duzem a taxa de crescimento tumoral em comparação com a taxa de crescimento tumoral na ausência das células.
[00602] Uma "quantidade eficaz" de um agente, por exemplo, uma formulação farmacêutica, células ou composição, no contexto da ad- ministração, referese a uma quantidade eficaz, em dosa- gens/quantidades e por períodos de tempo necessários, para atingir um resultado desejado, como como resultado terapêutico ou profiláti- co.
[00603] Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" de um agente, por exemplo, uma formulação farmacêutica ou células modificadas,
refere-se a uma quantidade eficaz, em dosagens e por períodos de tempo necessários, para alcançar um resultado terapêutico desejado, como para o tratamento de uma doença, condição ou distúrbio e/ou efeito farmacocinético ou farmacodinâmico do tratamento. A quantida- de terapeuticamente eficaz pode variar de acordo com fatores como o estado da doença, idade, sexo e peso do indivíduo e os polipeptídeos imunomoduladores ou células modificadas administradas. Em algumas modalidades, os métodos fornecidos envolvem a administração de po- lipeptídeos imunomoduladores, células modificadas ou composições em quantidades eficazes, por exemplo, quantidades terapeuticamente eficazes.
[00604] Uma "quantidade profilaticamente eficaz" refere-se a uma quantidade eficaz, em dosagens e por períodos de tempo necessários, para alcançar o resultado profilático desejado. Tipicamente, porém, não necessariamente, uma vez que uma dose profilática é usada em indivíduos antes ou em um estágio precedente da doença, a quantida- de profilaticamente eficaz será menor que a quantidade terapeutica- mente eficaz.
[00605] O termo "formulação farmacêutica" refere-se a uma prepa- ração que é de forma a permitir a atividade biológica de um ingrediente ativo nela contida ser eficaz, e que não contém componentes adicio- nais que sejam inaceitavelmente tóxicos para um indivíduo ao qual a formulação seria administrada.
[00606] Um "veículo farmaceuticamente aceitável" refere-se a um ingrediente em uma formulação farmacêutica, que não seja um ingre- diente ativo, que não é tóxico para um indivíduo. Um veículo farmaceu- ticamente aceitável inclui, porém, não está limitado a, um tampão, ex- cipiente, estabilizador ou conservante.
[00607] “Quando no presente documento usado, a recitação de que as posições de nucleotídeos ou aminoácidos "correspondem a" posi-
ções de nucleotídeos ou aminoácidos em uma sequência descrita, como mencionado na listagem de Sequências, refere-se a posições de nucleotídeos ou aminoácidos identificadas após o alinhamento com a sequência descrita para maximizar a identidade usando um algoritmo de alinhamento padrão, como o algoritmo GAP. Alinhando as sequên- cias, alguém versado na técnica pode identificar resíduos correspon- dentes, por exemplo, usando resíduos de aminoácidos conservados e idênticos como guias. Em geral, para identificar posições correspon- dentes, as sequências de aminoácido são alinhadas para que seja ob- tido um pareamento de mais alta ordem (veja, por exemplo: Computa- tional Molecular Biology, Lesk, AM, ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, DW, ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Se- quence Data, Part |, Griffin, A.M., e Griffin, H.G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Hein- je, G., Academic Press, 1987; and Sequence Analysis Primer, Gribs- kov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991; Carrillo et a/. (1988) SIAM J Applied Math 48:1073).
[00608] O termo "vetor", quando no presente documento usado, re- fere-se a uma molécula de ácido nucleico capaz de propagar outro ácido nucleico ao qual está ligado. O termo inclui o vetor como uma estrutura de ácido nucleico autorreplicante, bem como o vetor incorpo- rado no genoma de uma célula hospedeira na qual foi introduzido. Cer- tos vetores são capazes de direcionar a expressão de ácidos nucleicos aos quais eles estão operacionalmente ligados. Tais vetores são refe- ridos no presente documento como "vetores de expressão". Entre os vetores estão vetores virais, como retrovirais, por exemplo, vetores gamarretrovirais e lentivirais.
[00609] Os termos "célula hospedeira", "linhagem celular hospedei- ra" e "cultura de células hospedeiras" são usados alternadamente e referem-se às células nas quais o ácido nucleico exógeno foi introdu- zido, incluindo a progênie de tais células. As células hospedeiras in- cluem "transformantes" e "células transformadas", que incluem a célula transformada primária e a progênie delas derivadas sem levar em con- sideração o número de passagens. A progênie pode não ser comple- tamente idêntica no conteúdo de ácido nucleico a uma célula de ori- gem, porém, pode conter mutações. A progênie mutante que tem a mesma função ou atividade biológica como rastreada ou selecionada para a célula originalmente transformada está incluída no presente do- cumento.
[00610] “Quando no presente documento usado, uma declaração de que uma célula ou população de células é "positiva" para um marcador particular refere-se à presença detectável em ou na célula de um mar- cador particular, tipicamente um marcador de superfície. Quando refe- re-se a um marcador de superfície, o termo refere-se à presença de expressão da superfície como detectada por citometria de fluxo, por exemplo, pelo manchamento com um anticorpo que se liga especifi- camente ao marcador e pela detecção do referido anticorpo, em que o manchamento é detectável por citometria de fluxo em um nível subs- tancialmente acima do manchamento detectado executando o mesmo procedimento com um controle compatível com isotipo sob condições de outra maneira idênticas e/ou em um nível substancialmente similar ao da célula que se sabe ser positiva para o marcador e/ou em um ní- vel substancialmente mais alto do que para uma célula que se sabe ser negativa para o marcador.
[00611] “Quando no presente documento usado, uma declaração de que uma célula ou população de células é "negativa" para um marca- dor particular refere-se à ausência de presença detectável substancial em ou na célula de um marcador particular, normalmente um marcador de superfície. Quando refere-se a um marcador de superfície, o termo refere-se à ausência de expressão da superfície como detectada por citometria de fluxo, por exemplo, por manchamento com um anticorpo que se liga especificamente ao marcador e por detecção do referido anticorpo, em que o manchamento não é detectada por citometria de fluxo em um nível substancialmente acima do manchamento detectada executando o mesmo procedimento com um controle compatível com isotipo em condições idênticas, e/ou em um nível substancialmente mais baixo do que para uma célula que se sabe ser positiva para o marcador, e/ou em um nível substancialmente similar em comparação ao que para uma célula que se sabe ser negativa para o marcador.
[00612] “Quando no presente documento usado, "porcentagem (%) de identidade de sequência de aminoácido" e "porcentagem de identi- dade" quando usado em relação a uma sequência de aminoácido (se- quência de polipeptídeo de referência) é definido como a porcentagem de resíduos de aminoácido em uma sequência candidata (por exem- plo, a anticorpo ou fragmento do indivíduo) que são idênticos aos resí- duos de aminoácido na sequência de polipeptídeo de referência, após alinhar as sequências e introduzir os intervalos, se necessário, para obter a porcentagem máxima de identidade de sequência, e não con- siderar substituições conservadoras como parte da identidade de se- quência. O alinhamento para fins de determinação da porcentagem de identidade de sequência de aminoácido pode ser alcançado de várias maneiras dentro da experiência na técnica, por exemplo, usando sof- tware de computador disponível ao público, como o software BLAST, BLAST-2, ALIGN ou Megalign (DNASTAR). Os versados na técnica podem determinar parâmetros apropriados para o alinhamento de se- quências, incluindo quaisquer algoritmos necessários para alcançar o alinhamento máximo ao longo de todo o comprimento das sequências a ser comparadas.
[00613] “Quando no presente documento usado, as formas singula-
res "um", "uma" e "a/o" incluem referentes plurais, a menos que o con- texto indique claramente de outra maneira. Por exemplo, "um" ou "uma" significa "pelo menos um" ou "um ou mais". Entende-se que as- pectos e variações no presente documento descritos incluem "consis- tindo" e/ou "consistindo essencialmente em" aspectos e variações.
[00614] —Aolongo desta descrição, vários aspectos da matéria obje- to reivindicada são apresentados em um formato de faixa. Deve-se entender que a descrição no formato de faixa é meramente por conve- niência e brevidade e não deve ser interpretada como uma limitação inflexível no escopo da matéria objeto reivindicada. Por conseguinte, a descrição de uma faixa deve ser considerada como tendo descrito es- pecificamente todas as subfaixas possíveis, bem como valores numé- ricos individuais dentro deste faixa. Por exemplo, onde uma faixa de valores é fornecida, entende-se que cada valor intermediário, entre o limite superior e inferior desta faixa e qualquer outro valor declarado ou interveniente nesta faixa declarada, é abrangido pela matéria objeto reivindicada. Os limites superior e inferior destas faixas menores po- dem ser incluídos independentemente nas faixas menores, e também estão incluídos na matéria objeto reivindicada, indivíduo em qualquer limite especificamente excluído na faixa declarada. Quando a faixa de- clarada inclui um ou ambos os limites, as faixas excluindo um ou am- bos os limites incluídos também são incluídos na matéria objeto reivin- dicada. Isto se aplica independentemente da amplitude da faixa.
[00615] O termo "cerca de", quando no presente documento usado, refere-se à faixa de erro usual para o respectivo valor prontamente co- nhecido pela pessoa versada neste campo técnico. A referência a "cerca de" um valor ou parâmetro no presente documento inclui (e descreve) modalidades que são direcionadas a este valor ou parâme- tro per se. Por exemplo, a descrição referente a "cerca de X" inclui a descrição de "X".
[00616] Quando no presente documento usado, uma composição refere-se a qualquer mistura de dois ou mais produtos, substâncias ou compostos, incluindo células. Pode ser uma solução, uma suspensão, líquido, pó, uma pasta, aquosa, não aquosa ou qualquer combinação dos mesmos. VI. MODALIDADES EXEMPLARES
[00617] Entreas modalidades fornecidas estão:
1. Um método de tratamento, o método compreendendo: (a) administrar uma terapia celular a um indivíduo tendo uma doença ou distúrbio, a referida terapia celular que compreende uma dose de células geneticamente modificadas que expressam um receptor recombinante; e (b) administrar ao indivíduo LY3039478 ou um composto da estrutura: Composto 1 F. 7 “ao
RA LL Z
PENSO o = 4d E oH ou um estereoisômero ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitá- vel de quaisquer dos precedentes.
2. Um método de tratamento, o método que compreende administrar uma terapia celular a um indivíduo tendo uma doença ou distúrbio, a referida terapia celular que compreende uma dose de célu- las geneticamente modificadas que expressam um receptor recombi- nante, em que, no momento do início da administração da terapia celu- lar, o indivíduo foi previamente administrado e/ou está em tratamento com LY3039478 ou um composto da estrutura:
Composto 1
F
FR F o FP RA À 7 Po gg Oo E d E om ou um estereoisômero ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitá- vel de quaisquer dos precedentes.
3. Método de tratamento, o método que compreende a ad- ministração a um indivíduo tendo uma doença ou distúrbio LY3039478 ou um composto da estrutura: Composto 1
F
FR F o FP RA À 7 Po gg Oo E d E om ou um estereoisômero ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitá- vel de quaisquer dos precedentes, em que, no momento do início da administração, o indiví- duo foi previamente administrado e/ou está em tratamento com uma terapia celular, a referida terapia celular que compreende uma dose de células geneticamente modificadas que expressam um receptor re- combinante.
4. O método de qualquer uma das modalidades 1-3, em que o receptor recombinante se liga especificamente a um antígeno alvo associado à doença ou distúrbio.
5. O método da modalidade 4, em que o antígeno alvo é selecionado dentre antígeno de maturação de células B (BCMA), ani- drase carbônica 9 (CAIX), Her2/neu (erbB2 de tirosina cinase recepto-
ra), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, mesotelina, CEA, e antígeno de su- perfície da hepatite B, receptor antifolato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, glicoproteína epitelial 2 (EPG-2), glicoproteína epitelial 40 (EPG-40), EPHa2, dímeros erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB, EGFR vill, proteína de ligação ao folato (FBP), FCRL5, FCRHB5, recep- tor de acetilcolina fetal, GD2, GD3, HMW-MAA, 1IL-22R-alfa, IL-13R- alfa2, receptor de domínio de inserção de cinase (Kkdr), cadeia leve ca- pa, Lewis Y, molécula de adesão de células L1, (L1-CAM), Antígeno associado ao melanoma (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-AG6, Antígeno preferencialmente expresso do melanoma (PRAME), survivina, TAG72, B7-H6, receptor alfa 2 da I1L-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW- MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-Al MAGE A1, HLA- A2 NY-ESO-1, PSCA, receptor-a de folato, CD44v6, CD44v7/8, integrina de avb6, 8H9, NCAM, receptores de VEGF, 5T4, AchR fetal, ligantes de NKG2D, CD44v6, antígeno dual, um antígeno câncer-testículo, meso- telina, CMV de murino, mucina 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, antígeno oncofetal, ROR1, TAG72, VEGF-R2, antígeno carcinoembrionário (CEA), Her2/neu, receptor de estrogênio, receptor de progesterona, efrinaB2, CD123, c-Met, GD-2, GD?2 O-acetilado (OGD2), CE7, Tumor 1 de Wilms (WT-1), uma ciclina, ciclina A2, CCL-1, CD138, um antígeno específico de patógeno e um antígeno associado a um marcador universal.
6. O método da modalidade 4 ou modalidade 5, em que o antígeno alvo é Muc1.
7. O método da modalidade 4 ou modalidade 5, em que o antígeno alvo é BCMA.
8. O método da modalidade 7, em que o BCMA é o BCMA de superfície.
9. O método da modalidade 8, em que a ligação do receptor recombinante ao BCMA de superfície ou uma medida indicativa da função ou atividade das células de expressão do receptores recombi- nantes, após a exposição às células que expressam o BCMA de su- perfície, não é reduzida ou bloqueada ou não é substancialmente re- duzida ou bloqueada na presença de uma forma solúvel ou de vertente do BCMA.
10. O método da modalidade 9, em que a concentração ou quantidade da forma solúvel ou de vertente do BCMA corresponde a uma concentração ou quantidade presente no soro ou sangue ou plasma do indivíduo ou de um paciente com mieloma múltiplo ou, em média, em uma população de pacientes para a doença ou distúrbio, ou em uma concentração ou quantidade de BCMA solúvel ou de vertente, em que a ligação ou medida é reduzida ou bloqueada, ou é substanci- almente reduzida ou bloqueada, para células que expressam um re- ceptor recombinante anti-BCMA de referência, opcionalmente um CAR anti-BCMA de referência, no mesmo ensaio.
11. Método de tratamento, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) administrar uma terapia celular a um indivíduo tendo uma doença ou distúrbio, a referida terapia celular que compreende uma dose de células geneticamente modificadas que expressam um receptor de antígeno quimérico (CAR) compreende um domínio de |i- gação ao antígeno que se liga especificamente ao antígeno de matu- ração de células B de superfície (BCMA),; e (b) administrar ao indivíduo um inibidor da gama secretase, em que a ligação do CAR ao BCMA de superfície ou uma medida indi- cativa da função ou atividade das células de expressão de CAR, após a exposição a células que expressam o BCMA de superfície, não é reduzida ou bloqueada ou não é substancialmente reduzida ou blo- queada na presença de uma forma solúvel ou de vertente do BCMA, opcionalmente, em uma concentração ou quantidade da forma solúvel ou de vertente do BCMA correspondente a uma concen- tração ou quantidade presente no soro ou sangue ou plasma do indiví- duo ou de um paciente com mieloma múltiplo ou, em média, em uma população de pacientes para a doença ou distúrbio, ou em uma con- centração ou quantidade de BCMA solúvel ou de vertente, em que a ligação ou medida é reduzida ou bloqueada, ou é substancialmente reduzida ou bloqueada, para células que expressam um CAR anti- BCMA de referência no mesmo ensaio.
12. Um método de tratamento, o método que compreende a administração de uma terapia celular a um indivíduo tendo uma doen- ça ou distúrbio, a referida terapia celular que compreende uma dose de células geneticamente modificadas que expressam um receptor de antígeno quimérico que se liga especificamente ao antígeno de matu- ração de células B de superfície (BCMA), em que: a ligação do CAR ao BCMA de superfície ou uma medida indicativa da função ou atividade das células de expressão de CAR, após a exposição a células que expressam o BCMA de superfície, não é reduzida ou bloqueada ou não é substancialmente reduzida ou blo- queada na presença de uma forma solúvel ou de vertente do BCMA, opcionalmente em uma concentração ou quantidade da forma solúvel ou de vertente do BCMA correspondente a uma concentração ou quantidade presente no soro ou sangue ou plasma do indivíduo ou de um paciente com mieloma múltiplo ou, em média, em uma população de pacientes para a doença ou distúrbio, ou em uma concentração ou quantidade do BCMA solúvel ou de vertente em que a ligação ou me- dida é reduzida ou bloqueada, ou é substancialmente reduzida ou blo- queada, para células que expressam um CAR anti-BCMA de referên- cia no mesmo ensaio; e no momento do início da administração da terapia celular, o indivíduo foi previamente administrado e/ou está em tratamento com um inibidor da gama secretase.
13. Um método de tratamento, o método que compreende a administração de um inibidor da gama secretase a um indivíduo tendo uma doença ou distúrbio, em que, no momento do início da adminis- tração do inibidor, o indivíduo foi previamente administrado e/ou está em tratamento com, uma terapia celular, a referida terapia celular que compreende uma dose de células geneticamente modificadas que ex- pressam um receptor de antígeno quimérico que se liga especifica- mente ao antígeno de maturação de células B de superfície (BCMA), em que a ligação do CAR ao BCMA de superfície ou uma medida indicativa da função ou atividade das células de expressão de CAR, após a exposição a células que expressam o BCMA de superfí- cie, não é reduzida ou bloqueada ou não é substancialmente reduzida ou bloqueada na presença de uma forma solúvel ou de vertente do BCMA, opcionalmente, em uma concentração ou quantidade da forma solúvel ou de vertente do BCMA correspondente a uma concen- tração ou quantidade presente no soro ou sangue ou plasma do indiví- duo ou de um paciente com mieloma múltiplo ou, em média, em uma população de pacientes para a doença ou distúrbio, ou em uma con- centração ou quantidade de BCMA solúvel ou de vertente, em que a ligação ou medida é reduzida ou bloqueada, ou é substancialmente reduzida ou bloqueada, para células que expressam um CAR anti- BCMA de referência no mesmo ensaio.
14. O método de qualquer uma das modalidades 1-13, em que o método compreende selecionar um indivíduo tendo um câncer em que as células cancerígenas no indivíduo (i) expressam CD138, CD38 de superfície ou um marcador de célula plasmática de superfície ou são derivadas de células plasmáticas e (ii) compreendem baixa ex- pressão do antígeno de maturação de células B de superfície (BCMA)
e/ou um nível de expressão do BCMA de superfície abaixo de um nível limiar;
15. O método da modalidade 14, em que a terapia celular e/ou o inibidor de gama secretase é administrado ao indivíduo selecio- nado.
16. O método da modalidade 14 ou modalidade 15, em que o nível limiar de expressão do BCMA de superfície é inferior à expres- são média ou mediana ou nível do BCMA de superfície em células plasmáticas em uma pluralidade de indivíduos controle, opcionalmente em que os indivíduos controle são um grupo de indivíduos saudáveis ou normais.
17. O método de qualquer uma das modalidades 14-16, em que; a baixa expressão do BCMA de superfície está presente quando menos que ou menos que cerca de 60%, menos que ou me- nos que cerca de 50%, menos que ou menos que cerca de 40%, me- nos que ou menos que cerca de 30%, menos que ou menos que cerca de 20% ou menos que ou menos que cerca de 10% das células plas- máticas, ou células com um marcador ou fenótipo plasmático ou célu- las cancerígenas, no indivíduo expressam o BCMA de superfície; ou o nível limiar de BCMA de superfície é menor que ou menor que cerca de 60%, menor que ou menor que cerca de 50%, menor que ou menor que cerca de 40%, menor que ou menor que cerca de 30%, menor que ou menor que cerca de 20% ou menor que ou menor que cerca de 10% das células plasmáticas, ou células com marcador ou fenótipo plasmático ou células cancerígenas, no indivíduo que expres- sa o BCMA de superfície.
18. O método de qualquer uma das modalidades 14-17, em que a expressão do BCMA de superfície é determinada por citometria de fluxo e/ou um imunoensaio.
19. O método de qualquer uma das modalidades 14-18, em que a ligação do receptor recombinante ao BCMA de superfície ou uma medida indicativa da função ou atividade das células de expres- são do receptor recombinante, após a exposição às células que ex- pressam o BCMA de superfície, não é reduzida ou bloqueada ou não é substancialmente reduzida ou bloqueada na presença de uma forma solúvel ou de vertente do BCMA.
20. O método da modalidade 19, em que a concentração ou quantidade da forma solúvel ou de vertente do BCMA correspondente a uma concentração ou quantidade presente no soro ou sangue ou plasma do indivíduo ou de um paciente com mieloma múltiplo ou, em média, em uma população de pacientes para a doença ou distúrbio, ou em uma concentração ou quantidade de BCMA solúvel ou de vertente, em que a ligação ou medida é reduzida ou bloqueada, ou é substanci- almente reduzida ou bloqueada, para células que expressam um re- ceptor recombinante anti-BCMA de referência, opcionalmente um CAR anti-BCMA de referência, no mesmo ensaio.
21. O método de qualquer uma das modalidades 1-20, em que o inibidor de gama secretase inibe a clivagem da intramembrana de BCMA.
22. O método da modalidade 21, em que o inibidor de gama secretase inibe a clivagem da intramembrana de BCMA com uma con- centração inibidora de metade da máxima (ICso) de 0,01 nM a 10 nM, 0,01 nM a 5 nM, 0,01 nM a 1 NM, 0,01 nM a 0,5 nM, 0,01 nM a 0,35 NM, 0,01 nM a 0,25 nM, 0,01 nM a 0,1 nM, 0,01 nM a 0,05 nM, 0,05 NM a 10 nM, 0,05 NM a 5 nM, 0,05 nM a 1 NM, 0,05 NM a 0,5 nM, 0,05 NM a 0,35 nM, 0,05 nM a 0,25 nM, 0,05 nM a 0,1 nM, 0,1 nM a 10 NM,0,1 nM a 5 NM, 0,1 NM a 1 NM, 0,1 NM, to 0,5 nM, 0,1 nM a 0,35 NM, 0,1 nM a 0,25 nM, 0,25 nM a 10 NM, 0,25 nM a 5 nM, 0,25 NM a 1 nM, 0,25 nM a 0,5 nM, 0,25 nM a 0,35 nM, 0,35 nM a 10 nM, 0,35 nM a 5 nM, 0,35 nM a 1 nM, 0,35 nM a 0,5 NM, 0,5 NM a 10 NM, 0,5 NM a nM, 0,5 NM a 1 NM, 1 NM a 10 NM, 1 NM a 5nM or 5 NM a 10 NM.
23. O método da modalidade 21 ou modalidade 22, em que o inibidor de gama secretase inibe a clivagem da intramembrana de BCMA com uma concentração inibidora de metade da máxima (ICso) menor que ou menor que cerca de 10 nM, 5 nM, 1 nM., 0,5 NM, 0,35 NM, 0,25 nM, 0,1 nM, 0,05 nM ou 0,01 nM ou menor.
24. Método de tratamento, o método compreendendo: (a) administrar uma terapia celular a um indivíduo tendo uma doença ou distúrbio, a referida terapia celular que compreende uma dose de células geneticamente modificadas que expressam um receptor recombinante, em que o receptor recombinante não se liga especificamente ao antígeno de maturação de células B de superfície (BCMA); e (b) administrar um inibidor da gama secretase.
25. Um método de tratamento, o método que compreende a administração de uma terapia celular a um indivíduo tendo uma doen- ça ou distúrbio, a referida terapia celular que compreende uma dose de células geneticamente modificadas que expressam um receptor re- combinante, em que o receptor recombinante não se liga especifica- mente ao antígeno de maturação de células B de superfície (BCMA), em que, no momento do início da administração da terapia celular, o indivíduo foi previamente administrado e/ou está em tratamento com um inibidor da gama secretase.
26. Um método de tratamento, o método que compreende a administração de um inibidor da gama secretase a um indivíduo tendo uma doença ou distúrbio, em que, no momento do início da adminis- tração do inibidor, o indivíduo foi previamente administrado e/ou está em tratamento com uma terapia celular, a referida terapia celular que compreende uma dose de células geneticamente modificadas que ex-
pressam um receptor recombinante, em que o receptor recombinante não se liga especificamente ao antígeno de maturação de células B de superfície (BCMA).
27. O método de qualquer uma das modalidades 24-26, em que o receptor recombinante se liga especificamente a um antígeno alvo associado à doença ou distúrbio.
28. O método da modalidade 27, em que o antígeno alvo é selecionado dentre anidrase carbônica 9 (CAIX), Her2/neu (erbB2 de tirosina cinase receptora), LI-CAM, CD19, CD20, CD22, mesotelina, CEA e hepatite antígeno de superfície da hepatite B, receptor antifola- to, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, glicoproteína epi- telial 2 (EPG-2), glicoproteína epitelial 40 (EPG-40), EPHa2, dímeros erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB, EGFR vill, proteína de ligação ao folato (FBP), FOCRL5, FCRH5, receptor de acetilcolina fetal, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alfa, IL-13R-alfa2, receptor de domínio de inserção de cinase (Kkdr), cadeia leve capa, Lewis Y, molécula de adesão de cé- lulas L1, (LI-CAM), antígeno associado ao melanoma (MAGE)-AJ1, MAGE-A3, MAGE-AG6, antígeno do melanoma preferencialmente ex- presso (PRAME), survivina, TAG72, B7-H6, receptor alfa-2 de IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE A1, HLA-AIl MAGE A2, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, receptor-a de folato, CD44v6, CD44v7/8, integrina de avb6, 8H9, NCAM, recepto- res de VEGF, 5T4, AchR fetal, ligantes NKG2D, CD44v6, antígeno du- al, um antígeno câncer-testículo, mesotelina, CMV de murino, mucina 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, antí- geno oncofetal, ROR1, TAG72, VEGF-R2, antígeno carcinoembrioná- rio (CEA), Her2/neu, receptor de estrogênio, receptor de progesterona, efrinaB2, CD123, c-Met, GD-2, GD2 O-acetilado (OGD2), CE7, Tumor 1 de Wilms (WT-1), uma ciclina, ciclina A2, CCL-1, CD138, um antíge- no específico de patógeno e um antígeno associado a um marcador universal.
29. Método para modular a atividade de uma terapia celu- lar, o método compreendendo (a) administrar uma terapia celular a um indivíduo tendo uma doença ou distúrbio, a referida terapia celular que compreende uma dose de células geneticamente modificadas que expressam um receptor recombinante; e (b) subsequente à administração em (a) administrar ao indi- víduo um inibidor da gama secretase.
30. Método de modulação da atividade de uma terapia celu- lar, o método que compreende a administração de um inibidor da ga- ma secretase a um indivíduo tendo uma doença ou distúrbio, em que, no momento da iniciação da administração do inibidor, o indivíduo foi previamente administrado, e/ou está em tratamento com uma terapia celular, a referida terapia celular que compreende uma dose de células geneticamente modificadas que expressam receptor recombinante.
31. O método da modalidade 29 ou modalidade 30, em que o receptor recombinante se liga especificamente a um antígeno alvo associado à doença ou distúrbio.
32. O método da modalidade 31, em que o antígeno alvo é selecionado dentre antígeno de maturação de células B (BCMA), ani- drase carbônica 9 (CAIX), Her2/neu (erbB2 de tirosina cinase recepto- ra), L(-CAM, CD19, CD20, CD20, CD22, mesotelina, CEA e antígeno de superfície da hepatite B, receptor antifolato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, glicoproteína epitelial 2 (EPG-2), glicopro- teína epitelial 40 (EPG-40), EPHa2, dímeros erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB, EGFR vill, proteína de ligação ao folato (FBP), FCRL5, FCRHS5, receptor de acetilcolina fetal, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alfa, IL- 13R-alfa2, receptor de domínio de inserção de cinase (Kkdr), cadeia le- ve capa, Lewis Y, molécula de adesão de células L1, (LI-CAM), antí-
geno associado ao melanoma (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-AG6, an- tígeno do melanoma preferencialmente expresso (PRAME), survivina, TAG72, B7-H6, receptor alfa 2 de IL-3 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW- MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-Al MAGE A1, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, receptor-a de folato, CD44v6, CD44v7/8, integrina de avb6, 8H9, NCAM, receptores de VEGF, 5T4, AchR fetal, ligantes de NKG2D, CD44v6, antígeno dual, um antígeno câncer-testículo, meso- telina, CMV de murino, mucina 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, antígeno oncofetal, ROR1, TAG72, VEGF-R2, antígeno carcinoembrionário (CEA), Her2/neu, receptor de estrogênio, receptor de progesterona, efrinaB2, CD123, c-Met, GD-2, GD?2 O-acetilado (OGD2), CE7, Tumor 1 de Wilms (WT-1), uma ciclina, ciclina A2, CCL-1, CD138, um antígeno específico do patógeno e um antígeno associado a um marcador universal.
33. O método da modalidade 27, 28, 31 ou 32, em que o antígeno alvo é Muc1.
34. O método da modalidade 31 ou modalidade 32, em que o antígeno alvo é BCMA.
35. O método da modalidade 34, em que o BCMA é o BCMA de superfície.
36. O método de qualquer uma das modalidades 14-35, em que o inibidor de gama secretase inibe ou reduz ou é capaz de inibir ou reduzir a clivagem de um ou mais alvos selecionados dentre BCMA, Incisura 1, Incisura 2, Incisura 3, Incisura 4, Muc1, Efrina B2, Betaglicana (TGFBR3), CD43, CD44, CSFIR, CXCR1, CXCL16, Del- ta1, E-caderina, N-caderina, HLA-A2, IFNaR2, ILIR1, ILIR2, IL6R ou proteína precursora amiloide (APP).
37. O método da modalidade 36, em que os um ou mais al- vos do inibidor de gama secretase compreendem Muc1.
38. O método da modalidade 36, em que os um ou mais al-
vos do inibidor de gama secretase compreendem BCMA.
39. O método de qualquer uma das modalidades 36-38, em que o inibidor de gama secretase inibe o alvo com uma concentração inibidora de metade da máxima (ICso) de 0,01 nM a 1 uM, 0,01 nM a 100 nM, 0,01 nM a 10 nM, 0,01 nNM a 5 NM, 0,01 nM a 1 nM, 0,01 nM a 0,5 nM, 0,01 nM a 0,25 nM, 0,01 nM a 0,1 nM, 0,01 nM a 0,05 nM, 0,05 nM a 1 uM, 0,05 nM a 100 nM, 0,05 nM a 10 nM, 0,05 nM a 5 nM, 0,05 nM a 1 NM, 0,05 nM a 0,5 nM, 0,05 nM a 0,25 nM, 0,05 nM a 0,1 NM, 0,1 nM à 1 UM, 0,1 NM a 100 nM, 0,1 nNM a 10 nM, 0,1 nM a 5 NM, 0,1 nM a 1 NM, 0,1 nM a 0,5 NM, 0,1 NM a 0,25 nM, 0,25 nM a 1 UM, 0,25 nM a 100 nM, 0,25 nM a 10 nM, 0,25 nM a 5 nM,0,25 nM a 1 AM, 0,25 nM a 0,5 nM, 0,5 nM a 1 uM, 0,5 nM a 100 nM, 0,5 nM a 10 AM, 0,5 nM a 5 nM, 0,5 NM a 1 NM, 1 NM a 1 UM, 1 NM a 100 NM, 1 nM à NM, 1 NM a 5 NM, 5 NM a 1 UM, 5 NM a 100 nM, 5 nM a 10 nM, 10 nM a 1 UM, 10 NM a 100 nM or 100 nM a 1 UM.
40. O método de qualquer uma das modalidades 36-39, em que o inibidor de gama secretase inibe o alvo com uma concentração inibidora de metade da máxima (ICs5s0) menor que ou menor que cerca de 1 uM, 100 nM, 10 nM, 5 nM, 1 nM, 0,5 nM, 0,35 nM, 0,25 nM, 0,1 NM, 0,05 nM ou 0,01 nM ou menor.
41. O método de qualquer uma das modalidades 11-40, em que o inibidor de gama secretase é um inibidor de peptídeo ou inibidor de não peptídeo.
42. O método da modalidade 41, em que o inibidor de gama secretase é um inibidor de peptídeo e o inibidor de peptídeo é selecio- nado dentre derivados de peptídeos aldeídos, derivados de difluoroce- tonas, derivados de hidroxietileno dipeptídeo isotere, derivados de peptídeo alfa-helicoidal e análogos de dipeptídeo.
43. O método da modalidade 41, em que o inibidor de gama secretase é um inibidor de não peptídeo e o inibidor de não peptídeo é um derivado de benzodiazepinas ou um derivado de sulfonamidas.
44. O método de qualquer uma das modalidades 41-43, em que o inibidor de gama secretase é um inibidor do estado de transição ou inibidor do estado de não transição.
45. O método de qualquer uma das modalidades 41-44, em que o inibidor de gama secretase é um fármaco anti-inflamatório não esteroide.
46. O método de qualquer uma das modalidades 41-45, em que o inibidor de gama secretase é selecionado a partir de LY3039478, inibidor de secretase | (GSI 1) Z-Leu-Leu-Norleucina; inibi- dor de y-secretase Il (GSI II); inibidor de y-secretase Ill (GSI Ill), N- Benziloxicarbonil-Leu-leucinal, N-(2-Naftoil)-Val-fenilalaninal; inibidor de y-secretase Ill (GSI IV); inibidor de y-secretase Ill (GSI V), N- Benziloxicarbonil-Leu-fenilalaninal; inibidor de y-secretase Ill (GS! VI), 1-(S)-endo-N-(1,3,3)-trimetilbiciclo[2.2.1]hept-2-il)-4-fluorofenil sulfo- namida; inibidor de y-secretase II! (GSI VII), Mentiloxicarbonil-LL-CHO; inibidor de y-secretase Ill (GSI IX), (DAPT), t-Butil Éster de N-[N-(3,5- Difluorofenacetil-L-alanil)]-S-fenilglicina; inibidor de y-secretase X (GSI XxX), terc-butil éster de ácido (1S-benzil-4R-[1-(1S-carbamoil-2- fenetilcarbamoil)-1S-3-metilbutilcarbamoil]-2R-hidróxi-5- fenilpentilkcarbâmico; inibidor de y-secretase XI (GSI XI), 7-amino-4- cloro-3-metóxi-isocumarina; inibidor de y-secretase XII (GSI XII), Z-lle- Leu-CHO; inibidor de y-secretase XIII (GSI XIII), Z-Tyr-lle-Leu-CHO; inibidor de y-secretase XIV (GSI XIV), Z-Cys(t-Bu)-lle-Leu-CHO; inibi- dor de ysecretase XVI (GSI XVI), Metil Éster de N-[N-3,5- difluorofenacetil]-L-alanil-S-fenilglicina; inibidor de y-secretase XVII (GSI XVII); inibidor de 7ysecretase XIX (GSI XIX), ben- zo[e][1 4]diazepin-3-il)-butiramida; inibidor de y-secretase XX (GSI XX), (S,S)-2-[2-(3,5-Difluorofenil)acetilamino]-N-(5-metil-6-0x0-6,7-di-hidro-
5H-dibenzo[b,d]Jazepin-7-il)propionamida; inibidor de y-secretase XXI (GSI XXI), (S,S)-2-[2-(3,5-Difluorofenil)-acetilamino]-N-(1-metil-2-0x0-5- fenil-2-,3-di-hidro-1H-benzo[e][1 ,4]diazepin-3-il)-propionamida; inibidor de Gama40 secretase |, N-trans-3,5-dimetoxicinamoil-lle-leucinal; ini- bidor de Gama40 secretase Il, N-terc-Butiloxicarbonil-Gly-Val-Valinal Isovaleril-V V-Sta-A-Sta-OCH3; MK-0752; MRK-003 (Merck); semaga- cestate/LY450139; RO4929097; PF-03084,014; BMS-708163; MPC- 7869 (modificador de y-secretase), YO-01027 (Dibenzazepina), Com- posto E ([(28S)-2K[(3,5-Difluorofenil)acetilJamino]Jamino)-N-[(3S)-1-metil- 2-0X0-5-fenil-2,3-di-hidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il]propanamidal], LY411575, L-685.458, BMS-289948 (cloridrato de (4-cloro-N-(2,5- difluorofenil)-N-((1R)-f4-fluoro-2-[3-(1H-imidazo]-1- ipropillfenil)etil)benzenossulfonamida) e BMS-299897 (ácido (4-[2- ((1R)-1-([(4-clorofenil)sulfonil]-2,5-difluoroanilinojetil)-5- fluorofeniljbutanoico).
47. O método de qualquer uma das modalidades 11-46, em que o inibidor de gama secretase é LY3039478 ou um composto da estrutura: Composto 1 F. 7 F o ms MÁ : À Z o z d oH ou um estereoisômero ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitá- vel de quaisquer dos precedentes.
48. O método de qualquer uma das modalidades 1-47, em que o indivíduo compreende células plasmáticas, células cancerígenas ou células de mieloma ou células que expressam marcadores de célu- las plasmáticas, que expressam o BCMA de superfície.
49. O método de qualquer uma das modalidades 21-48, em que: o indivíduo tem um câncer em que as células cancerígenas no indivíduo (i) expressam CD138, CD38 de superfície ou um marca- dor de célula plasmática de superfície ou são derivadas de células plasmáticas e (ii) compreendem baixa expressão do antígeno de matu- ração de células B de superfície (BCMA) e/ou um nível de expressão do BCMA de superfície abaixo de um nível limiar; e/ou o método compreende ainda selecionar um indivíduo que tem um câncer em que as células cancerígenas no indivíduo (i) ex- pressam CD138, CD38 de superfície ou um marcador de célula plas- mática de superfície ou são derivadas de células plasmáticas e (ii) compreendem baixa expressão da antígeno de maturação de células B de superfície (BCMA) e/ou um nível de expressão do BCMA de su- perfície abaixo de um nível limiar.
50. O método de qualquer uma das modalidades 4-8, 27-29 e 31-49, em que o alvo do inibidor de gama secretase é o antígeno alvo e o inibidor de gama secretase inibe a clivagem do antígeno alvo.
51. O método de qualquer uma das modalidades 7-23 e 34- 50, em que a administração do inibidor: diminui a clivagem ou eliminação de BCMA das células, op- cionalmente as células plasmáticas, em mais que ou mais que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação ao nível de clivagem ou eliminação de BCMA das células no indivíduo antes da administração do inibidor; diminui o nível ou a quantidade de BCMA detectado no soro de um indivíduo em mais que ou mais que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação ao nível ou quantidade de BCMA no soro do indivíduo antes da adminis- tração do inibidor; e/ou aumenta a expressão do BCMA de superfície nas células, opcionalmente nas células plasmáticas, em mais que ou mais que cer- ca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação ao nível de BCMA de superfície nas células do indiví- duo antes da administração do inibidor.
52. O método de qualquer uma das modalidades 1-51, em que a administração do inibidor: diminui a clivagem ou eliminação do alvo ou do antígeno al- vo, opcionalmente BCMA ou Muc1, das células, opcionalmente células plasmáticas, em mais que ou mais que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação ao nível de clivagem ou eliminação do alvo ou antígeno alvo das células no indiví- duo antes da administração do inibidor; diminui o nível ou a quantidade do alvo ou antígeno alvo, opcionalmente BCMA ou Muc1, detectado no soro de um indivíduo em mais que ou mais que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação ao nível ou quantidade do alvo ou antígeno alvo no soro do indivíduo antes da administração do inibidor; e/ou aumenta a expressão do alvo de superfície ou do antígeno alvo, opcionalmente BCMA ou Muc1, nas células, opcionalmente nas células plasmáticas, em mais que ou mais que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação ao nível do alvo de superfície ou antígeno alvo nas células do indiví- duo antes da administração do inibidor.
53. O método de qualquer uma das modalidades 1-52, em que a doença ou distúrbio é um câncer.
54. O método da modalidade 53, em que o câncer é uma malignidade de células B.
55. O método da modalidade 53 ou modalidade 54, em que o câncer é mieloma múltiplo, plasmocitoma, um câncer de origem de células plasmáticas e/ou um câncer de origem de células B.
56. O método de qualquer uma das modalidades 1-55, em que o inibidor é administrado por via oral, subcutânea ou intravenosa.
57. O método de qualquer uma das modalidades 1-56, em que o inibidor é administrado por via oral.
58. O método de qualquer uma das modalidades 1-57, em que o inibidor é administrado pelo menos ou é administrado seis vezes ao dia, cinco vezes ao dia, quatro vezes ao dia, três vezes ao dia, du- as vezes ao dia, uma vez ao dia, a cada dois dias, três vezes por se- mana, pelo menos uma vez por semana ou apenas uma vez.
59. O método de qualquer uma das modalidades 1-58, em que o inibidor é administrado três vezes por semana.
60. O método da modalidade 58 ou modalidade 59, em que a administração do inibidor é realizada em um ciclo de tratamento que é pelo menos ou pelo menos cerca de ou 14 dias, pelo menos ou pelo menos cerca de ou 21 dias ou pelo menos ou pelo menos cerca de ou 28 dias.
61. O método de qualquer uma das modalidades 1-60, em que o inibidor é administrado ou cada administração do inibidor é ad- ministrada independentemente, em uma quantidade de 0,5 mg a 500 mg, 0,5 mg a 250 mg, 0,5 mg a 100 mg, 0,5 mg a 50 mg, 0,5 mg a 25 mg, 0,5 mg a 10 mg, 0,5 mg a 5,0 mg, 0,5 mg a 2,5 mg, 0,5 mg a 1,0 mg, 1,0 mg a 500 mg, 1,0 mg a 250 mg, 1,0 mg a 100 mg, 1,0 mg a 50 mg, 1,0 mg a 25 mg, 1,0 mg a 10 mg, 1,0 mg à 5,0 mg, 1,0 mg a 2,5 mg, 2,5 mg a 500 mg, 2,5 mg a 250 mg, 2,5 mg a 100 mg, 2,5 mg a 50 mg, 2,5 mg a 25 mg, 2,5 mg a 10 mg, 2,5 mg a 5,0 mg, 5,0 mg a 500 mg, 5,0 mg a 250 mg, 5,0 mg a 100 mg, 5,0 mg a 50 mg, 5,0 mg a 25 mg, 5,0 mg a 10 mg, 10 mg a 500 mg, 10 mg a 250 mg, 10 mg a 100 mg, 10 mg a 50 mg, 10 mg a 25 mg, 25 mg a 500 mg, 25 mg a 250 mg, 25 mg a 100 mg, 25 mg a 50 mg, 50 mg a 500 mg, 50 mg a 250 mg, 50 mg a 100 mg, 100 mg a 500 mg, 100 mg a 250 mg or 250 mg a 500 mg.
62. O método de qualquer uma das modalidades 1-61, em que o inibidor é administrado ou cada administração do inibidor é ad- ministrada independentemente, em uma quantidade que é pelo menos ou pelo menos cerca de ou é ou é cerca de 0,5 mg, 1,0 mg, 2,5 mg, 5,0 mg, 10,0 mg, 25 mg, 50 mg, 100 mg, 250 mg ou 500 mg.
63. O método de qualquer uma das modalidades de 14-62, em que o receptor recombinante é um receptor de células T transgêni- cas (TCR) ou um receptor de não células T funcionais.
64. O método de qualquer uma das modalidades de 14-63, em que o receptor recombinante é um receptor quimérico, que opcio- nalmente é um receptor de antígeno quimérico (CAR).
65. O método de qualquer uma das modalidades 1-13 e 64, em que o receptor de antígeno quimérico (CAR) compreende um do- mínio de reconhecimento de antígeno extracelular que se liga especifi- camente ao antígeno e um domínio de sinalização intracelular que compreende um ITAM.
66. O método da modalidade 65, em que o domínio de sina- lização intracelular compreende e o domínio intracelular de uma ca- deia CD3-zeta (CD3%).
67. O método da modalidade 65 ou modalidade 66, em que o receptor de antígeno quimérico (CAR) compreende ainda uma região de sinalização coestimuladora.
68. O método da modalidade 67, em que a região de sinali- zação coestimuladora compreende um domínio de sinalização deriva- do de CD28 ou 4-1BB, opcionalmente CD28 humano ou 4-1BB huma- no.
69. O método da modalidade 67 ou modalidade 68, em que a região de sinalização coestimuladora é um domínio derivado de 4- 1BB, opcionalmente 4-1BB humano.
70. O método de qualquer uma das modalidades 1-69, em que o indivíduo é um humano.
71. O método de qualquer uma das modalidades 1-70, em que o BCMA é BCMA humano ou o antígeno alvo é um antígeno hu- mano.
72. O método de qualquer uma das modalidades 1-72, em que as células geneticamente modificadas compreendem células T ou células NK.
73. O método da modalidade 72, em que a terapia celular é uma terapia de células T e a dose de células geneticamente modifica- das compreende células T.
74. O método da modalidade 72 ou modalidade 73, em que as células T são CD4+ e/ou CD8+.
75. O método de qualquer uma das modalidades 72-74, em que as células T são células T primárias obtidas de um indivíduo.
76. O método de qualquer uma das modalidades 1-75, em que a terapia celular compreende células que são autólogas ao indiví- duo.
77. O método de qualquer uma das modalidades 1-76, em que a terapia celular compreende células que são alogênicas ao indi- víduo.
78. O método de qualquer uma das modalidades 1-77, em que a terapia celular compreende a administração de ou de cerca de 1 x 10º a 5 x 10º células de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), a terapia celular compreende a administração de ou de cer- ca de 1 x 10º a 1 x 10º células de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), de ou de cerca de 5 x 10º a 1 x 107 células de expres- são do receptor recombinante totais, células T totais ou células mono- nucleares de sangue periférico totais (PBMCs) ou de ou de cerca de 1 x 10º a 1 x 107 células de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), cada qual inclusive.
79. O método de qualquer uma das modalidades 1-78, em que a terapia celular compreende a administração de não mais do que x 108 células de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), não mais que 2,5 x 10º células de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), não mais que 1 x 108 células de ex- pressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), não mais que 1 x 107 células de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), não mais que 0,5 x 107 células de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), não mais que 1 x 10º células de expressão do recep- tor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), não mais que 0,5 x 10º células de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs).
80. O método de qualquer uma das modalidades 1, 4, 5, 14 e 38, em que o início da administração do inibidor é precedente, simul- taneamente ou subsequentemente ao início da administração da tera- pia celular.
81. O método da modalidade 80, em que o inibidor é admi- nistrado antes do início da administração da terapia celular.
82. O método de 1, 2, 4, 5, 14, 15, 38, 39 e 81, em que o início da administração do inibidor ocorre dentro ou dentro de cerca de 1 hora, 2 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas ou 1 semana antes do início da administração da terapia celular.
83. O método da modalidade 80, em que o inibidor é admi- nistrado subsequentemente ao início da administração da terapia celu- lar.
84. O método de 1, 3, 4, 5, 14, 16, 19, 20, 38, 40 e 83, em que o início da administração do inibidor ocorre dentro ou dentro de cerca de 1 hora, 2 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 14 dias, 21 dias, 28 dias ou mais após o início da administração da terapia celular.
85. O método de qualquer uma das modalidades 1, 3, 4,5, 14, 16, 19, 20, 38, 40, 83 e 84, em que o inibidor é administrado em um momento no qual: o número de células da terapia celular detectável no san- gue a partir do indivíduo é diminuído em comparação ao indivíduo em um ponto de tempo precedente após o início da administração das cé- lulas; o número de células da terapia celular detectável no san- gue é menor que ou menor que cerca de 1,5 vezes, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 50 vezes ou 100 vezes ou menor que o número de pico ou máximo de células da terapia celular detectável no sangue do indivíduo após o início da administração da administração das células; e/ou em um momento após um nível de pico ou máximo das cé- lulas da terapia celular ser detectável no sangue do indivíduo, o núme- ro de células ou derivado das células detectáveis no sangue do indiví- duo é menor que 10%, menor que 5%, menor que 1% ou menor que 0,1% das células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs)
no sangue do indivíduo.
86. O método de qualquer uma das modalidades 1, 3, 4,5, 14, 16, 19, 20, 38, 40, 83-854, em que o inibidor é administrado até 7 dias, 14 dias, 21 dias, 28 dias ou mais após o início da administração das células.
87. O método de qualquer uma das modalidades 1-86, ca- racterizado pelo fato de que o método compreende ainda a adminis- tração de uma quimioterapia com linfodepleção antes da administra- ção da terapia celular e/ou em que o indivíduo recebeu uma quimiote- rapia com linfodepleção antes da administração das células.
88. O método da modalidade 87, em que a quimioterapia com linfodepleção compreende a administração de fludarabina e/ou ciclofosfamida ao indivíduo.
89. O método de qualquer uma das modalidades 1-88, em que o método compreende ainda a administração de um esteroide, opcionalmente em que o esteroide é administrado antes, simultanea- mente e/ou subsequentemente ao início da administração do inibidor, opcionalmente em que o esteroide é administrado durante o ciclo de tratamento com o inibidor.
90. O método da modalidade 89, em que o esteroide é ou compreende dexametasona.
91. O método de qualquer uma das modalidades 1-90, em que a terapia celular exibe expansão e/ou persistência aumentada ou prolongada no indivíduo em comparação a um método no qual a tera- pia celular é administrada ao indivíduo na ausência de inibidor de ga- ma secretase.
92. O método de qualquer uma das modalidades 1-91, em que o método previne, reduz ou melhora um ou mais sintomas ou re- sultados da doença ou distúrbio.
93. Método de tratamento, o método compreendendo:
(a) administrar, a um indivíduo tendo uma doença ou dis- túrbio, um agente terapêutico ou terapia que direciona ou é específico para o antígeno de maturação de células B (BCMA); e (b) administrar um inibidor de gama secretase ao indivíduo.
94. O método da modalidade 93, em que o agente terapêu- tico ou terapia é ou compreende um anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno, opcionalmente um anticorpo biespeciífico.
95. O método da modalidade 93 ou modalidade 94, em que o agente terapêutico ou terapia é um anticorpo biespecífico que tam- bém direciona ou se liga especificamente a um antígeno de células T, opcionalmente CD2 ou CD3.
96. O método da modalidade 93 ou modalidade 94, em que o agente terapêutico ou terapia é um anticorpo biespecífico que tam- bém direciona um segundo antígeno, opcionalmente em que o segun- do antígeno é selecionado dentre CD19, CD20, CD22, CD33, CD38, CS1, ROR1, GPC3, CD123, I1L-13R, CD138, c-Met, EGFRvIII, GD-2, NY-ESO-1, MAGE A3 e glicolipídeo F77.
97. O método de qualquer uma das modalidades 93-96, em que o inibidor de gama secretase é selecionado a partir de LY3039478, inibidor de secretase | (GSI |) Z-Leu-Leu-Norleucina; inibi- dor de y-secretase Il (GSI II); inibidor de y-secretase Ill (GSI Ill), N- Benziloxicarbonil-Leu-leucinal, N-(2-Naftoil)-Val-fenilalaninal; inibidor de y-secretase Ill (GSI IV); inibidor de y-secretase Ill (GSI V), N- Benziloxicarbonil-Leu-fenilalaninal; inibidor de y-secretase Ill (GS! VI), 1-(S)-endo-N-(1,3,3)-trimetilbiciclo[2.2.1]hept-2-il)-4-fluorofenil — sulfo- namida; inibidor de y-secretase Ill (GSI VII), Mentiloxicarbonil-LL-CHO; inibidor de y-secretase III (GSI IX), (DAPT), t-Butil Éster de N-[N-(3,5 - difluorofenacetil-L-alanil)]-S-fenilglicina; inibidor de y-secretase X (GSI XxX), terc-butil éster de ácido (1S-benzil-4R-[1-(1S-carbamoil-2- fenetilcarbamoil)-1S-3-metilbutilcarbamoil]-2R-hidróxi-5-
fenilpentil)kcarbâmico; inibidor de y-secretase XI (GSI XI), 7-amino-4- cloro-3-metóxi-isocumarina; inibidor de y-secretase XII (GSI XII), Z-lle- Leu-CHO; inibidor de y-secretase XIII (GSI XIII), Z-Tyr-lle-Leu-CHO; inibidor de y-secretase XIV (GSI XIV), Z-Cys(t-Bu)-lle-Leu-CHO; inibi- dor de ysecretase XVI (GSI XVI), Metil Éster de N-[N-3,5- difluorofenacetil]-L-alanil-S-fenilglicina; inibidor de y-secretase XVII (GSI XVII); inibidor de 7secretase XIX (GSI XIX), ben- zo[e][1,4]diazepin-3-il)-butiramida; inibidor de y-secretase XX (GSI XX), (S,S)-2-[2-(3,5-Difluorofenil)acetilamino]-N-(5-metil-6-0x0-6,7-di-hidro- 5H-dibenzo[b d]Jazepin-7-il)propionamida; inibidor de y-secretase XXI (GSI XXI), (S,S)-2-[2-(3,5-Difluorofenil)-acetilamino]-N-(1-metil-2-0x0-5- fenil-2-,3-di-hidro-1H-benzo[e][1 4]diazepin-3-il)-propionamida; inibidor de Gama40 secretase |, N-trans-3,5-dimetoxicinamoil-Ile-leucinal; ini- bidor de Gama40 secretase |l, N-terc-Butiloxicarbonil-Gly-Val-Valinal Isovaleril-V V-Sta-A-Sta-OCH3; MK-0752; MRK-003 (Merck); semaga- cestate/LY450139; RO4929097; PF-03084,014; BMS-708163; MPC- 7869 (modificador da y-secretase), YO-01027 (Dibenzazepina), Com- posto E ([(28)-2K[(3,5-Difluorofenil)acetilJaminoJamino)-N-[(3S)-1-metil- 2-0Xx0-5-fenil-2,3-di-hidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il]propanamidal], LY411575, L-685.458, BMS-289948 (cloridrato de 4-cloro-N-(2,5- difluorofenil)-N-((1R)-f4-fluoro-2-[3-(1H-imidazo]|-1- i))propillfenil>)etil)benzenossulfonamida) e BMS-299897 (ácido 4-[2- ((1R)-1-([(4-clorofenil)sulfonil]-2,5-difluoroanilinojetil)-5- fluorofenilibutanoico).
98. O método de qualquer uma das modalidades 93-97, em que o inibidor de gama secretase é LY3039478 ou um composto da estrutura:
Composto 1 F. 7 “ao
RA LL Z
PENSO o = 4d E oH ou um estereoisômero ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitá- vel de quaisquer dos precedentes.
99. Combinação, caracterizada pelo fato de que compreen- de: (a) células geneticamente modificadas que expressam um receptor de antígeno quimérico (CAR) que compreende um domínio de ligação ao antígeno que se liga especificamente ao antígeno de matu- ração de células B de superfície (BCMA); e (b) um inibidor da gama secretase, em que a ligação do CAR ao BCMA de superfície ou uma medida indicativa da função ou atividade das células de expressão de CAR, após a exposição a células que expressam o BCMA de superfí- cie, não é reduzida ou bloqueada ou não é substancialmente reduzida ou bloqueada na presença de uma forma solúvel ou de vertente do BCMA, opcionalmente, em uma concentração ou quantidade da forma solúvel ou de vertente do BCMA correspondente a uma concen- tração ou quantidade presente no soro ou sangue ou plasma do indiví- duo ou de um paciente com mieloma múltiplo ou, em média, em uma população de pacientes para a doença ou distúrbio, ou em uma con- centração ou quantidade de BCMA solúvel ou de vertente, em que a ligação ou medida é reduzida ou bloqueada, ou é substancialmente reduzida ou bloqueada, para células que expressam um CAR anti- BCMA de referência no mesmo ensaio.
100. A combinação da modalidade 99, em que o inibidor de gama secretase inibe ou reduz ou é capaz de inibir ou reduzir a cliva- gem da intramembrana de BCMA.
101. A combinação da modalidade 100, em que o inibidor de gama secretase inibe a clivagem da intramembrana de BCMA com uma concentração inibidora de metade da máxima (IC5o) de 0,01 nM a 10 nM, 0,01 nM a 5 nM, 0,01 nM a 1 nM, 0,01 nM a 0,5 nM, 0,01 nM a 0,35 nM, 0,01 nM a 0,25 nM, 0,01 nM a 0,1 nM, 0,01 nM a 0,05 nM, 0,05 nM a 10 NM, 0,05 nM a 5 nM, 0,05 nM a 1 NM, 0,05 nM a 0,5 NM, 0,05 nM a 0,35 nM, 0,05 nM a 0,25 nM, 0,05 nM a 0,1nM, 0,1 nM a 10 NM,0,1 nM a 5 NM, 0,1 NM a 1 NM, 0,1 NM, to 0,5 NM, 0,1 nM a 0,35 NM, 0,1 nM a 0,25 nM, 0,25 nM a 10 nM, 0,25 nM a 5 nM, 0,25 NM a 1 NM, 0,25 nM a 0,5 nM, 0,25 nM a 0,35 nM, 0,35 nM a 10 nM, 0,35 nM a 5 nM, 0,35 nM a 1 NM, 0,35 NM a 0,5 NM, 0,5 NM a 10 NM, 0,5 NM a nM, 0,5 NM a 1 NM, 1 NM a 10 NM, 1 NM a 5 NM ou 5 nM a 10 nM.
102. A combinação da modalidade 100 ou modalidade 101, em que o inibidor de gama secretase inibe a clivagem da intramem- brana de BCMA com uma concentração inibidora de metade da máxi- ma (ICs5o9) menor que ou menor que cerca de 10 nM, 5 nM, 1 nM, 0,5 nM, 0,35 nM, 0,25 nM, 0,1 nM, 0,05 nM ou 0,01 nM ou menor.
103. Combinação, caracterizada pelo fato de que compre- ende: (a) células geneticamente modificadas que expressam um receptor recombinante, em que o receptor recombinante não se liga especificamente ao antígeno de maturação de células B de superfície (BCMA); e (b) um inibidor da gama secretase.
104. O método da modalidade 103, em que o receptor re- combinante se liga especificamente a um antígeno alvo associado à doença ou distúrbio.
105. A combinação da modalidade 104, em que o antígeno alvo é selecionado dentre anidrase carbônica 9 (CAIX), Her2/neu (erbB2 de tirosina cinase receptora), LI-CAM, CD19, CD20, CD?2?2, mesotelina, CEA, e antígeno de superfície da hepatite B, receptor anti- folato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, glicoproteína epitelial 2 (EPG-2), glicoproteína epitelial 40 (EPG-40), EPHa2, díme- ros erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB, EGFR vill, proteína de ligação ao folato (FBP), FCRL5, FCRHB5, receptor de acetilcolina fetal, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alfa, IL-13R-alfa2, receptor de domínio de inserção de cinase (Kdr), cadeia leve capa, Lewis Y, molécula de adesão de cé- lulas L1, (LI-CAM), antígeno associado ao melanoma (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-AG6, antígeno do melanoma preferencialmente ex- presso (PRAME), survivina, TAG72, B7-H6, receptor alfa-2 de IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE A1, HLA-AIl MAGE A2, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, receptor-a de folato, CD44v6, CD44v7/8, integrina de avb6, 8H9, NCAM, recepto- res de VEGF, 5T4, AchR fetal, ligantes NKG2D, CD44v6, antígeno du- al, um antígeno câncer-testículo, mesotelina, CMV de murino, mucina 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, antí- geno oncofetal, ROR1, TAG72, VEGF-R2, antígeno carcinoembrioná- rio (CEA), Her2/neu, receptor de estrogênio, receptor de progesterona, efrinaB2, CD123, c-Met, GD-2, GD2 O-acetilado (OGD2), CE7, tumor de Wilms 1 (WT-1), uma ciclina, ciclina A2, CCL-1, CD138, um antíge- no específico de patógeno e um antígeno associado a um marcador universal.
106. A combinação da modalidade 104 ou modalidade 105, em que o antígeno alvo é Muc1.
107. A combinação de qualquer uma das modalidades 99- 106, em que o inibidor de gama secretase inibe ou reduz ou é capaz de inibir ou reduzir a clivagem de um ou mais alvos selecionados den-
tre BCMA, Incisura 1, Incisura 2, Incisura 3, Incisura 4, Muc1, Efrina B2, Betaglicana (TGFBR3), CD43, CD44, CSFIR, CXCR1, CXCL16, Delta1, E-caderina, N-caderina, HLA-A2, IFNaR2, ILIR1, ILIR2, ILGR ou proteína precursora amiloide (APP).
108. A combinação da modalidade 107, em que os um ou mais alvos do inibidor de gama secretase compreendem Muc1.
109. A combinação da modalidade 107, em que os um ou mais alvos do inibidor de gama secretase compreendem BCMA.
110. A combinação de qualquer uma das modalidades 103- 109, em que o inibidor de gama secretase inibe o alvo com uma con- centração inibidora de metade da máxima (ICso) de 0,01 nM a 1 UM, 0,01 nM a 100 nM, 0,01 nM a 10 nM, 0,01 nM a 5 nM, 0,01 NM a 1 AM, 0,01 nM a 0,5 nM, 0,01 nM a 0,25 nM, 0,01 nM a 0,1 NM, 0,01 nM à 0,05 nM, 0,05 nM a 1 UM, 0,05 nM a 100 nM, 0,05 nM a 10 nM, 0,05 NM a 5 nM, 0,05 nM a 1 nM, 0,05 nM a 0,5 nM, 0,05 nM a 0,25 nM, 0,05 nM a 0,1 nM, 0,1 NM a 1 uM, 0,1 nM a 100 nM, 0,1 nM a 10 AM, 0,1 nM a 5 NM, 0,1 NM a 1 NM, 0,1 NM a 0,5 NM, 0,1 NM a 0,25 AM, 0,25 nM a 1 UM, 0,25 nM a 100 nM, 0,25 nM a 10 nM, 0,25 NMa5 nNM,0,25 nM a 1 nM, 0,25 nM a 0,5 NM, 0,5 nM a 1 UM, 0,5 nM a 100 NM, 0,5 nM a 10 nM, 0,5 NM a 5 nM, 0,5 NM a 1 AM, 1 NM a 1 UM, 1 NM a 100 nM, 1 NM a 10 NM, 1 NM a 5 NM, 5 NM a 1 UM, 5 nM a 100 NM, 5 NM a 10 nM, 10 nM a 1 UM, 10 nM a 100 nM ou 100 nM a 1 UM.
111. A combinação de qualquer uma das modalidades 103- 110, em que o inibidor de gama secretase inibe o alvo com uma con- centração inibidora de metade da máxima (ICso) menor que ou menor que cerca de 1 uM, 100 nM, 10 nM, 5 nM, 1 nM, 0,5 nM, 0,35 NM, 0,25 NM, 0,1 nM, 0,05 nM ou 0,01 nM ou menor.
112. A combinação de qualquer uma das modalidades 99- 111, em que o inibidor de gama secretase é um inibidor de peptídeo ou inibidor de não peptídeo.
113. A combinação da modalidade 112, em que o inibidor de gama secretase é um inibidor de peptídeo e o inibidor de peptídeo é selecionado dentre derivados de peptídeos aldeídos, derivados de difluorocetonas, derivados de hidroxietileno dipeptídeo isotere, deriva- dos de peptídeo alfa-helicoidal e análogos de dipeptídeo.
114. A combinação da modalidade 113, em que o inibidor de gama secretase é um inibidor de não peptídeo e o inibidor de não peptídeo é um derivado de benzodiazepinas ou um derivado de sulfo- namidas.
115. A combinação de qualquer uma das modalidades 99- 114, em que o inibidor de gama secretase é um inibidor do estado de transição ou inibidor do estado de não transição.
116. A combinação de qualquer uma das modalidades 99- 115, em que o inibidor de gama secretase é um fármaco anti- inflamatório não esteroide.
117. A combinação de qualquer uma das modalidades 99- 116, em que o inibidor de gama secretase é selecionado dentre LY3039478, inibidor de secretase | (GSI |) Z-Leu-Leu-Norleucina; inibi- dor de y-secretase Il (GSI II); inibidor de y-secretase Ill (GSI III), N- Benziloxicarbonil-Leu-leucinal, N-(2-Naftoil)-Val-fenilalaninal; inibidor de y-secretase Ill (GSI IV); inibidor de y-secretase Ill (GSI V), N- Benziloxicarbonil-Leu-fenilalaninal; inibidor de y-secretase Ill (GSI VI), 1-(S)-endo-N-(1,3,3)-trimetilbiciclo[2.2.1]hept-2-il)-4-fluorofenil sulfo- namida; inibidor de y-secretase II! (GSI VII), Mentiloxicarbonil-LL-CHO; inibidor de y-secretase Ill (GSI IX), (DAPT), t-Butil Éster de N-[N-(3,5- Difluorofenacetil-L-alanil)]-S-fenilglicina; inibidor de y-secretase X (GSI XxX), terc-butil éster de ácido (1S-benzil-4R-[1-(1S-carbamoil-2- fenetilcarbamoil)-1S-3-metilbutilcarbamoil]-2R-hidróxi-5- fenilpentilkcarbâmico; inibidor de y-secretase XI (GSI XI), 7-amino-4- cloro-3-metóxi-isocumarina; inibidor de y-secretase XII (GSI XII), Z-lle-
Leu-CHO; inibidor de y-secretase XIII (GSI XIII), Z-Tyr-lle-Leu-CHO; inibidor de y-secretase XIV (GSI XIV), Z-Cys(t-Bu)-lle-Leu-CHO; inibi- dor de y-secretase XVI (GSI XVI), Metil Éster de N-[N-3,5- difluorofenacetil]-L-alanil-S-fenilglicina; inibidor de y-secretase XVII (GSI XVII); inibidor de 7y-secretase XIX (GSI XIX) ben- zo[e][1 ,4]diazepin-3-il)-butiramida; inibidor de y-secretase XX (GSI XX), (S,S)-2-[2-(3,5-Difluorofenil)acetilamino]-N-(5-metil-6-0x0-6,7-di-hidro- 5H-dibenzo[b,d]Jazepin-7-il)propionamida; inibidor de y-secretase XXI (GSI XXI), (S,S)-2-[2-(3,5-Difluorofenil)-acetilamino]-N-(1-metil-2-0x0-5- fenil-2-,3-di-hidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-3-il)-propionamida; inibidor de Gama40 secretase |, N-trans-3,5-dimetoxicinamoil-lle-leucinal; ini- bidor de Gama40 secretase Il, N-terc-Butiloxicarbonil-Gly-Val-Valinal Isovaleril-V V-Sta-A-Sta-OCH3; MK-0752; MRK-003 (Merck); semaga- cestate/LY450139; RO4929097; PF-03084,014; BMS-708163; MPC- 7869 (modificador da y-secretase), YO-01027 (Dibenzazepina), Com- posto E ([(28S)-2X[(3,5-Difluorofenil)acetilJaminoJamino)-N-[(3S)-1-metil- 2-0x0-5-fenil-2,3-di-hidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il]propanamidal], LY411575, L-685.458, BMS-289948 (cloridrato de 4-cloro-N-(2,5- difluorofenil)-N-((1R)-f4-fluoro-2-[3-(1H-imidazo|-1- ipropillfenil)etil)Denzenossulfonamida) e BMS-299897 (ácido 4-[2- ((1R)-1([(4-clorofenil)sulfonil]-2,5-difluoroanilinojetil)-5- fluorofeniljbutanoico).
118. A combinação de qualquer uma das modalidades 99- 117, em que o inibidor de gama secretase é LY3039478 ou um com- posto da estrutura:
Composto 1
F F. EF o FA n RA ) Ê ê É N O ã d E oH ou um estereoisômero ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitá- vel de quaisquer dos precedentes.
119. Combinação, caracterizada pelo fato de que compre- ende: (a) células geneticamente modificadas que expressam um receptor recombinante; e (b) LY3039478 ou um composto da estrutura: Composto 1
F F. EF o FA n RA ) Ê ê É N Oo E d E oH ou um estereoisômero ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitá- vel de quaisquer dos precedentes.
120. A combinação da modalidade 119, em que o receptor recombinante se liga especificamente a um antígeno alvo associado à doença ou distúrbio.
121. A combinação da modalidade 120, em que o antígeno alvo é selecionado dentre antígeno de maturação de células B (BCMA), anidrase carbônica 9 (CAIX), Her2/neu (erbB2 de tirosina ci- nase receptora), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, mesotelina, CEA, e an- tígeno de superfície da hepatite B, receptor antifolato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, glicoproteína epitelial 2 (EPG-2),
glicoproteína epitelial 40 (EPG-40), EPHa2, dímeros erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB, EGFR vill, proteína de ligação ao folato (FBP), FCRL5, FCRHB5, receptor de acetilcolina fetal, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R- alfa, IL-13R-alfa2, receptor de domínio de inserção de cinase (kdr), cadeia leve capa, Lewis Y, molécula de adesão de células L1, (L1- CAM), antígeno associado ao melanoma (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-AG6, Antígeno preferencialmente expresso do melanoma (PRA- ME), survivina, TAG72, B7-H6, receptor alfa 2 da IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE A1, HLA- A2 NY-ESO-1, PSCA, receptor-a de folato, CD44v6, CD44v7/8, inte- grina avb6, 8H9, NCAM, receptores de VEGF, 5T4, AchR fetal, ligan- tes de NKG2D, CD44v6, antígeno dual, um antígeno câncer-testículo, mesotelina, CMV de murino, mucina 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, antígeno oncofetal, ROR1, TAG72, VEGF-R2, antígeno carcinoembrionário (CEA), Her2/neu, re- ceptor de estrogênio, receptor de progesterona, efrinaB2, CD123, c- Met, GD-2, GD2 O-acetilado (OGD2), CE7, Tumor de Wilms 1 (WT-1), uma ciclina, ciclina A2, CCL-1, CD138, um antígeno específico de pa- tógeno e um antígeno associado a um marcador universal.
122. A combinação da modalidade 120 ou modalidade 121, em que o antígeno alvo é Muc1.
123. A combinação da modalidade 120 ou modalidade 121, em que o antígeno alvo é BCMA.
124. A combinação da modalidade 123, em que o BCMA é BCMA de superfície.
125. A combinação da modalidade 124, em que a ligação do receptor recombinante, opcionalmente o CAR, ao BCMA de super- fície ou uma medida indicativa da função ou atividade das células de expressão do receptor recombinante, opcionalmente as células de ex- pressão de CAR, após a exposição às células que expressam o BCMA de superfície, não é reduzida ou bloqueada ou não é substancialmente reduzida ou bloqueada na presença de uma forma solúvel ou de ver- tente do BOCMA, opcionalmente em uma concentração ou quantidade da forma solúvel ou de vertente do BCMA correspondente a uma con- centração ou quantidade presente em soro ou sangue ou plasma do indivíduo ou de um paciente com mieloma múltiplo ou, em média, em uma população de pacientes para a doença ou distúrbio, ou em uma concentração ou quantidade do BCMA solúvel ou de vertente em que a ligação ou medida é reduzida ou bloqueada, ou é substancialmente reduzida ou bloqueada, para células que expressam um receptor re- combinante anti-BCMA de referência, opcionalmente, CAR anti-BCMA, no mesmo ensaio.
126. A combinação de qualquer uma das modalidades 103- 125, em que o receptor recombinante é um receptor de células T transgênicas (TCR) ou um receptor de não células T funcionais.
127. A combinação de qualquer uma das modalidades 103- 126, em que o receptor recombinante é um receptor quimérico, que opcionalmente é um receptor de antígeno quimérico (CAR).
128. A combinação de qualquer uma das modalidades 99- 102 e 127, em que o receptor de antígeno quimérico (CAR) compre- ende um domínio de reconhecimento de antígeno extracelular que se liga especificamente ao antígeno e um domínio de sinalização intrace- lular que compreende um ITAM.
129. A combinação da modalidade 128, em que o domínio de sinalização intracelular compreende e o domínio intracelular de uma cadeia CD3-zeta (CD3C).
130. A combinação da modalidade 128 ou modalidade 129, em que o receptor de antígeno quimérico (CAR) compreende ainda uma região de sinalização coestimuladora.
131. A combinação da modalidade 130, em que a região de sinalização coestimuladora compreende um domínio de sinalização derivado de CD28 ou 4-1BB, opcionalmente CD28 humano ou 4-1BB humano.
132. A combinação da modalidade 130 ou modalidade 131, em que a região de sinalização coestimuladora é um domínio derivado de 4-1BB, opcionalmente 4-1BB humano.
133. A combinação de qualquer uma das modalidades 99- 132, em que o BCMA é BCMA humano ou o antígeno alvo é um antí- geno humano.
134. A combinação de qualquer uma das modalidades 99- 134, em que as células geneticamente modificadas compreendem cé- lulas T ou células NK.
135. A combinação da modalidade 134, em que as células geneticamente modificadas compreendem células T.
136. A combinação da modalidade 134 ou modalidade 135, em que as células T são CD4+ e/ou CD8+.
137. A combinação de qualquer uma das modalidades 134- 136, em que as células T são células T primárias obtidas de um indiví- duo.
138. A combinação de qualquer uma das modalidades 99- 137, em que as células geneticamente modificadas são formuladas como uma composição farmacêutica para administração a um indiví- duo, opcionalmente, em que as células são formuladas para adminis- tração em um ou mais doses únicas para o tratamento de uma doença ou condição.
139. A combinação de qualquer uma das modalidades 99- 138, em que o inibidor de gama secretase é formulado como uma composição farmacêutica para administração a um indivíduo, opcio- nalmente em que o inibidor de gama secretase é formulado para ad- ministração em uma ou mais doses únicas.
140. Um kit que compreende a combinação de qualquer uma das modalidades 99-139 e instruções para administrar as células geneticamente modificadas e/ou o inibidor de gama secretase a um indivíduo tendo uma doença ou distúrbio.
141. O kit da modalidade 140, que compreende ainda um reagente para detectar a expressão do antígeno de maturação das cé- lulas B (BCMA) na superfície de uma célula e instruções para adminis- trar o inibidor a um indivíduo com base nos resultados de uso do rea- gente para detectar BCMA na superfície das células de um câncer no indivíduo, opcionalmente em que as células cancerígenas expressam CD138, CD38 de superfície ou um marcador de célula plasmática de superfície ou são derivadas de células plasmáticas.
142. O Kit da modalidade 141, em que as instruções especi- ficam a administração do inibidor ao indivíduo se as células compre- enderem baixa expressão do BCMA de superfície e/ou um nível de expressão do BCMA de superfície abaixo de um nível limiar.
143. O kit da modalidade 142, em que o nível limiar de ex- pressão do BCMA de superfície é inferior à expressão média ou medi- ana ou nível do BCMA de superfície em células plasmáticas em uma pluralidade de indivíduos controle, opcionalmente em que os indiví- duos controle são um grupo de indivíduos saudáveis ou normais.
144. O kit da modalidade 142 ou modalidade 143, em que; a baixa expressão do BCMA de superfície está presente quando menos que ou menos que cerca de 60%, menos que ou me- nos que cerca de 50%, menos que ou menos que cerca de 40%, me- nos que ou menos que cerca de 30%, menos que ou menos que cerca de 20% ou menos que ou menos que cerca de 10% das células plas- máticas, ou células com um marcador ou fenótipo plasmático ou célu- las cancerígenas, no indivíduo expressam o BCMA de superfície; ou o nível limiar de BCMA de superfície é menor que ou menor que cerca de 60%, menor que ou menor que cerca de 50%, menor que ou menor que cerca de 40%, menor que ou menor que cerca de 30%, menor que ou menor que cerca de 20% ou menor que ou menor que cerca de 10% das células plasmáticas, ou células com marcador ou fenótipo plasmático ou células cancerígenas, no indivíduo que expres- sa o BCMA de superfície.
145. O kit de qualquer uma das modalidades 141-144, que compreende ainda células geneticamente modificadas que expressam um receptor recombinante, opcionalmente em que as células geneti- camente modificadas são formuladas para administração de uma ou mais doses únicas a um indivíduo tendo uma doença ou condição.
146. O kit da modalidade 145, em que o receptor recombi- nante se liga especificamente a um antígeno alvo associado à doença ou condição.
147. O kit de qualquer uma das modalidades 140, 145 e 146, em que as instruções especificam a administração do inibidor de gama secretase, ou uma ou mais doses únicas do mesmo, a um indi- víduo tendo uma doença ou distúrbio antes, simultaneamente ou após o início da administração de uma dose das células geneticamente mo- dificadas ao indivíduo.
148. O kit da modalidade 147, em que as instruções especi- ficam a administração do inibidor de gama secretase, ou uma ou mais doses únicas do mesmo, a um indivíduo tendo uma doença ou distúr- bio antes do início da administração de uma dose das células geneti- camente modificadas ao indivíduo.
149. O kit da modalidade 148, em que as instruções especi- ficam a administração do inibidor dentro, ou dentro de cerca de, 1 ho- ra, 2 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas ou 1 semana antes do início da administração da terapia celular.
150. O kit da modalidade 147, em que as instruções especi-
ficam a administração do inibidor de gama secretase, ou uma ou mais doses únicas do mesmo, a um indivíduo tendo uma doença ou distúr- bio após o início da administração de uma dose de células genetica- mente modificadas ao indivíduo.
151. Kit, que compreende: (a) um inibidor de gama secretase, opcionalmente em que o inibidor de gama secretase é formulado em uma ou mais doses úni- cas; e (b) instruções para administrar o inibidor de gama secretase a um indivíduo após o início da administração de uma terapia celular a um indivíduo, a terapia celular que compreende uma dose de células geneticamente modificadas que expressam um receptor recombinante.
152. O kit da modalidade 150 ou modalidade 151, em que o início da administração do inibidor está dentro ou dentro de cerca de 1 hora, 2 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 ho- ras, | semana, 14 dias, 21 dias, 28 dias ou mais após o início da ad- ministração da dose de células geneticamente modificadas.
153. O kit de qualquer uma das modalidades 150-152, em que as instruções especificam que o inibidor é para administração em um momento em que: o número de células da terapia celular detectável no san- gue a partir do indivíduo diminui em comparação ao indivíduo em um ponto de tempo precedente após o início da administração das células; o número de células da terapia celular detectável no san- gue é menor que ou menor que cerca de 1,5 vezes, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 50 vezes ou 100 vezes ou menor que o número de pico ou máximo de células da terapia celular detectável no sangue do indivíduo após o início da administração das células; e/ou em um momento após um nível de pico ou máximo das cé- lulas da terapia celular ser detectável no sangue do indivíduo, o núme-
ro de células ou derivado das células detectáveis no sangue do indiví- duo é menor que 10%, menor que 5%, menor que 1% ou menor que 0,1% das células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs) no sangue do indivíduo.
154. O kit de qualquer uma das modalidades 150-153, em que as instruções que especificam o inibidor é para administração até 7 dias, 14 dias, 21 dias, 28 dias ou mais após o início da administração das células.
155. O kit de qualquer uma das modalidades 150-154, em que o receptor recombinante se liga especificamente a um antígeno alvo associado à doença ou distúrbio.
156. O kit da modalidade 146 ou modalidade 155, em que o antígeno alvo é selecionado dentre antígeno de maturação de células B (BCMA), anidrase carbônica 9 (CAIX), Her2/neu (erbB2 de tirosina cinase receptora), LI-CAM, CD19, CD20, CD22, mesotelina, CEA e antígeno de superfície da hepatite B, receptor antifolato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, glicoproteína epitelial 2 (EPG-2), glicoproteína epitelial 40 (EPG-40), EPHa2, dímeros erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB, EGFR vill, proteína de ligação ao folato (FBP), FCRL5, FCRHB5, receptor de acetilcolina fetal, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R- alfa, IL-13R-alfa2, receptor de domínio de inserção de cinase (Kkdr), cadeia leve capa, Lewis Y, molécula de adesão de células L1, (L1- CAM), antígeno associado ao melanoma (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE- A6, antígeno de melanoma preferencialmente expresso (PRAME), survivina, TAG72, B7-H6, receptor alfa 2 de I1L-13 (IL- 13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-Al MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, receptor-a de folato, CD44v6, CD44v7/8, integrina avb6, 8H9, NCAM, receptores de VEGF, 574, AchR fetal, ligantes de NKG2D, CD44v6, antígeno dual, um antígeno câncer-testículo, mesotelina, CMV de murino, mucina 1 (MUC1),
MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, antígeno onco- fetal, ROR1I, TAG72, VEGF-R2, antígeno carcinoembrionário (CEA), Her2/neu, receptor de estrogênio, receptor de progesterona, efrinaB2, CD123, c-Met, GD-2, GD2 O-acetilado (OGD2), CE7, Tumor 1 de Wilms (WT-1), uma ciclina, ciclina A2, CCL-1, CD138, um antígeno específico de patógeno e um antígeno associado a um marcador uni- versal.
157. O kit da modalidade 156, em que o antígeno alvo é Muc1, opcionalmente Muc1i humano.
158. O kit da modalidade156, em que o antígeno alvo é BCMA, opcionalmente BCMA humano.
159. O kit da modalidade 158, em que a ligação do receptor recombinante, opcionalmente o CAR, ao BCMA de superfície ou uma medida indicativa da função ou atividade das células de expressão do receptor recombinante, opcionalmente as células de expressão de CAR, após a exposição a células que expressam BCMA de superfície, não é reduzida ou bloqueada ou não é substancialmente reduzida ou bloqueada na presença de uma forma solúvel ou de vertente do BCMA, opcionalmente em uma concentração ou quantidade da forma solúvel ou de vertente do BCMA correspondente a uma concentração ou quantidade presente no soro ou sangue ou plasma do indivíduo ou de um paciente com mieloma múltiplo ou, em média, em uma popula- ção de pacientes para a doença ou distúrbio, ou em uma concentração ou quantidade do BCMA solúvel ou de vertente em que a ligação ou medida é reduzida ou bloqueada, ou é substancialmente reduzida ou bloqueada, para células que expressam um receptor recombinante an- ti-BCMA de referência, opcionalmente, CAR anti-BCMA, no mesmo ensaio.
160. O kit de qualquer uma das modalidades 146-159, em que o receptor recombinante é um receptor de células T transgênicas
(TCR) ou um receptor funcional de não células T.
161. O kit de qualquer uma das modalidades 146-160, em que o receptor recombinante é um receptor quimérico, que opcional- mente é um receptor de antígeno quimérico (CAR).
162. O kit da modalidade 161, em que o receptor de antí- geno quimérico (CAR) compreende um domínio extracelular de reco- nhecimento de antígeno que se liga especificamente ao antígeno e um domínio de sinalização intracelular que compreende um ITAM.
163. O kit da modalidade 162, em que o domínio de sinali- zação intracelular compreende e o domínio intracelular de uma cadeia CD3-zeta (CD37).
164. O kit de qualquer uma das modalidades 161-163, em que o receptor de antígeno quimérico (CAR) compreende ainda uma região de sinalização coestimuladora.
165. O kit da modalidade 164, em que a região de sinaliza- ção coestimuladora compreende um domínio de sinalização derivado de CD28 ou 4-1BB, opcionalmente CD28 humano ou 4-1BB humano.
166. O kit da modalidade 164 ou modalidade 165, em que a região de sinalização coestimuladora é um domínio derivado de 4- 1BB, opcionalmente 4-1BB humano.
167. O kit de qualquer uma das modalidades 146-166, ca- racterizado pelo fato de que as células geneticamente modificadas compreendem células T ou células NK.
168. O kit da modalidade 167, em que as células genetica- mente modificadas compreendem células T.
169. O kit da modalidade 167 ou modalidade 168, em que as células T são CD4+ e/ou CD8+.
170. O kit de qualquer uma das modalidades 167-169, em que as células T são células T primárias obtidas de um indivíduo.
171. O kit de qualquer uma das modalidades 141-170, em que o inibidor de gama secretase inibe a clivagem de um ou mais al- vos selecionados dentre BCMA, Incisura 1, Incisura 2, Incisura 3, Inci- sura 4, Muc1, Efrina B2, Betaglicana (TGFBR3), CD43, CD44, CSFIR, CXCR1, CXCL16, Delta1, caderina-E, N-caderina, HLA-A2, IFNaR2, ILIR1, ILIR2, IL6R ou proteína precursora amiloide (APP).
172. O kit da modalidade 171, em que os um ou mais alvos do inibidor de gama secretase compreendem Muc1.
173. O kit da modalidade 171, em que os um ou mais alvos do inibidor de gama secretase compreendem BCMA.
174. O kit de qualquer uma das modalidades 141-173, em que o inibidor de gama secretase inibe o alvo com uma concentração inibidora de metade da máxima (ICso) de 0,01 nM a 1 UM, 0,01 nM a 100 nM, 0,01 nM a 10 nM, 0,01 nM a 5 NM, 0,01 nM a 1 NM, 0,01 nM a 0,5 nM, 0,01 nM a 0,25 nM, 0,01 nM a 0,1 nM, 0,01 nM a 0,05 nM, 0,05 nM a 1 uM, 0,05 nM a 100 nM, 0,05 nM a 10 nM, 0,05 nM a 5 nM, 0,05 nM a 1 nM, 0,05 nM a 0,5 nM, 0,05 nM a 0,25 nM, 0,05 nM a 0,1 nM, 0,1 NM à 1 UM, 0,1 NM a 100 nM, 0,1 NM a 10 NM, 0,1 NM a 5 AM, 0,1 nM a 1 NM, 0,1 nNM a 0,5 NM, 0,1 NM a 0,25 nM, 0,25 nM a 1 UM, 0,25 nM a 100 nM, 0,25 nM a 10 nM, 0,25 nM a 5 nM,0,25 nM a 1 AM, 0,25 nM a 0,5 nM, 0,5 nM a 1 uM, 0,5 nM a 100 nM, 0,5 nM a 10 AM, 0,5 nM a 5 nM, 0,5 NM à 1 AM, 1 NM a 1 UM, 1 NM a 100 NM, 1 nM à NM, 1 NM a 5 NM, 5 NM a 1 UM, 5 NM a 100 NM, 5 nM a 10 nM, 10 nM a 1 UM, 10 NM a 100 nM ou 100 nM a 1 UM.
175. O kit de qualquer uma das modalidades 141-174, em que o inibidor de gama secretase inibe o alvo com uma concentração inibidora de metade da máxima (ICso) menor que ou menor que cerca de 1 uM, 100 nM, 10 nM, 5 nM, 1 nM, 0,5 nM, 0,35 nM, 0,25 nM, 0,1 NM, 0,05 nM ou 0,01 nM ou menor.
176. O kit de qualquer uma das modalidades 141-175, em que o inibidor de gama secretase é um inibidor de peptídeo ou inibidor de não peptídeo.
177. O kit da modalidade 176, em que o inibidor de gama secretase é um inibidor de peptídeo e o inibidor de peptídeo é selecio- nado dentre os derivados de peptídeos aldeídos, derivados de difluo- rocetonas, derivados de hidroxietileno dipeptídeo isotere, derivados de peptídeo alfa-helicoidal e análogos de dipeptídeo.
178. O kit da modalidade 177, em que o inibidor de gama secretase é um inibidor de não peptídeo e o inibidor de não peptídeo é um derivado de benzodiazepinas ou um derivado de sulfonamidas.
179. O kit de qualquer uma das modalidades 141-178, em que o inibidor de gama secretase é um inibidor do estado de transição ou inibidor do estado de não transição.
180. O kit de qualquer uma das modalidades 141-179, em que o inibidor de gama secretase é um fármaco anti-inflamatório não esteroide.
181. O kit de qualquer uma das modalidades 141-180, ca- racterizado pelo fato de que o inibidor de gama secretase é seleciona- do dentre LY3039478, inibidor de secretase | (GSI |) Z-Leu-Leu- Norleucina; inibidor de y-secretase Il (GSI II); inibidor de y-secretase |Il (GSI 1), N-Benziloxicarbonil-Leu-leucinal, N-(2-Naftoil)-Val- fenilalaninal; inibidor de y-secretase Ill (GSI IV); inibidor de y-secretase 1 (GSI V), N-Benziloxicarbonil-Leu-fenilalaninal; inibidor de »y- secretase Ill (GSI VI), 1-(S)-endo-N-(1,3,3)-trimetilbiciclo[2.2.1]hept-2- iI)-4-fluorofenil sulfonamida; inibidor de y-secretase III (GSI VII), Menti- loxicarbonil-LL-CHO; inibidor de y-secretase III (GSI IX), (DAPT), t-Butil Éster de N-[N-(3,5-Difluorofenacetil-L-alanil)]-S-fenilglicina; inibidor de y-secretase X (GSI X), terc-butil éster de ácido (1S-benzil-4R-[1-(1S- carbamoil-2-fenetilcarbamoil)-1S-3-metilbutilcarbamoil]-2R-hidróxi-5- fenilpentilkcarbâmico; inibidor de y-secretase XI (GSI XI), 7-amino-4- cloro-3-metóxi-isocumarina; inibidor de y-secretase XII (GSI XII), Z-lle-
Leu-CHO; inibidor de y-secretase XIII (GSI XIII), Z-Tyr-lle-Leu-CHO; inibidor de y-secretase XIV (GSI XIV), Z-Cys(t-Bu)-lle-Leu-CHO; inibi- dor de y-secretase XVI (GSI XVI), Metil Éster de N-[N-3,5- difluorofenacetil]-L-alanil-S-fenilglicina; inibidor de y-secretase XVII (GSI XVII); inibidor de 7y-secretase XIX (GSI XIX) ben- zo[e][1 ,4]diazepin-3-il)-butiramida; inibidor de y-secretase XX (GSI XX), (S,S)-2-[2-(3,5-Difluorofenil)acetilamino]-N-(5-metil-6-0x0-6,7-di-hidro- 5H-dibenzo[b,d]Jazepin-7-il)propionamida; inibidor de y-secretase XXI (GSI XXI), (S,S)-2-[2-(3,5-Difluorofenil)-acetilamino]-N-(1-metil-2-0x0-5- fenil-2-,3-di-hidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-3-il)-propionamida; inibidor de Gama40 secretase |, N-trans-3,5-dimetoxicinamoil-lle-leucinal; ini- bidor de Gama40 secretase Il, N-terc-Butiloxicarbonil-Gly-Val-Valinal Isovaleril-V V-Sta-A-Sta-OCH3; MK-0752; MRK-003 (Merck); semaga- cestate/LY450139; RO4929097; PF-03084,014; 708163; MPC-7869 (modificador da y-secretase), YO-01027 (Dibenzazepina), Composto E ([(28)-2-11(3,5-Difluorofenil)acetillamino]Jamino)-N-[(3S)-1-metil-2-0x0-5- fenil-2,3-di-hidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-ilpropanamidal, LY411575, L-685.458, BMS-289948 (cloridrato de 4-cloro-N-(2,5-difluorofenil)-N- ((1R)-(4-fluoro-2-[3-(1H-imidazo|-1- ipropillfenil)etil)Denzenossulfonamida) e BMS-299897 (ácido 4-[2- ((1R)-1([(4-clorofenil)sulfonil]-2,5-difluoroanilinojetil)-5- fluorofeniljbutanoico).
182. O kit de qualquer uma das modalidades 141-181, em que o inibidor de gama secretase é LY3039478 ou um composto da estrutura: Composto 1 no
VASO o ã d WS ou um estereoisômero ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitá- vel de quaisquer dos precedentes.
183. O kit de qualquer uma das modalidades 99-182, em que as instruções especificam a administração de uma dose de células geneticamente modificadas a um indivíduo tendo uma doença ou dis- túrbio.
184. O kit da modalidade 183, em que a doença ou distúr- bio é um câncer.
185. O kit da modalidade 184, em que o câncer é uma ma- lignidade de células B.
186. O kit da modalidade 184 ou modalidade 185, em que o câncer é mieloma múltiplo.
187. O kit de qualquer uma das modalidades 183-186, em que a dose compreende de ou de cerca de 1 x 10º a 5x 10º células de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), a terapia celular compreende a administração de ou de cerca de 1 x 10º a 1 x 108 célu- las de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), de ou de cerca de 5 x 10º a 1 x 107 células de expressão do receptor recombi- nante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue peri- férico totais (PBMCs) ou de ou de cerca de 1 x 106º a 1 x 107 células de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), cada qual inclu- sive, opcionalmente, em que as instruções especificam a administra- ção de uma ou de uma pluralidade de doses únicas que compreende a dose de células e/ou um volume correspondente a esta ou pluralidade de doses únicas que compreende a dose de células.
188. O kit de qualquer uma das modalidades 183-186, em que a dose compreende não mais que 5 x 10º células de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononuclea- res de sangue periférico totais (PBMCs), não mais que 2,5 x 10º célu- las de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), não mais que 1 x 108 células de expressão do receptor recombinante totais, cé- lulas T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), não mais que 1 x 107 células de expressão do receptor re- combinante totais, células T totais ou células mononucleares de san- gue periférico totais (PBMCs), não mais que 0,5 x 107 células de ex- pressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), não mais que 1 x 108 células de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), não mais que 0,5 x 10º células de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), opcionalmente em que as instruções especificam a administração de uma ou de uma pluralidade de doses únicas que compreende a dose de células e/ou um volume correspondente a esta ou a pluralidade de doses únicas que compreende a dose de células.
189. O kit de qualquer uma das modalidades 99-188, em que as instruções especificam a administração do inibidor por via oral, subcutânea ou intravenosa.
190. O kit da modalidade 189, em que as instruções especi- ficam a administração do inibidor por via oral.
191. O kit de qualquer uma das modalidades 99-190, em que as instruções especificam que o inibidor deve ser administrado pelo menos seis vezes ao dia, cinco vezes ao dia, quatro vezes ao dia, três vezes ao dia, duas vezes ao dia, uma vez ao dia, a cada dois dias, três vezes por semana, pelo menos uma vez por semana ou apenas uma vez.
192. O kit de qualquer uma das modalidades 99-191, em que as instruções especificam que o inibidor é administrado três vezes por semana.
193. O kit da modalidade 191 ou modalidade 192, em que as instruções que especificam a administração do inibidor devem ser realizadas em um ciclo de tratamento que é pelo menos ou pelo me- nos cerca de ou 14 dias, pelo menos ou pelo menos cerca de ou 21 dias ou pelo menos ou pelo menos cerca de ou 28 dias.
194. O kit de qualquer uma das modalidades 99-193, em que as instruções especificam que o inibidor é administrado ou que cada administração do inibidor é administrada independentemente, em uma quantidade de 0,5 mg to 500 mg, 0,5 mg to 250 mg, 0,5 mg to 100 mg, 0,5 mg to 50 mg, 0,5 mg to 25 mg, 0,5 mg to 10 mg, 0,5 mg to 5,0 mg, 0,5 mg to 2,5 mg, 0,5 mg to 1,0 mg, 1,0 mg to 500 mg, 1,0 mg to 250 mg, 1,0 mg to 100 mg, 1,0 mg to 50 mg, 1,0 mg to 25 mg, 1,0 mg to 10 mg, 1,0 mg to 5,0 mg, 1,0 mg to 2,5 mg, 2,5 mg to 500 mg, 2,5 mg to 250 mg, 2,5 mg to 100 mg, 2,5 mg to 50 mg, 2,5 mg to 25 mg, 2,5 mg to 10 mg, 2,5 mg to 5,0 mg, 5,0 mg to 500 mg, 5,0 mg to 250 mg, 5,0 mg to 100 mg, 5,0 mg to 50 mg, 5,0 mg to 25 mg, 5,0 mg to 10 mg, 10 mg to 500 mg, 10 mg to 250 mg, 10 mg to 100 mg, 10 mg to 50 mg, 10 mg to 25 mg, 25 mg to 500 mg, 25 mg to 250 mg, 25 mg to 100 mg, 25 mg to 50 mg, 50 mg to 500 mg, 50 mg to 250 mg, 50 mg to 100 mg, 100 mg to 500 mg, 100 mg to 250 mg ou 250 mg to 500 mg.
195. O kit de qualquer uma das modalidades 99-194, em que as instruções especificam que o inibidor é administrado ou que cada administração do inibidor é administrada independentemente, em uma quantidade que é pelo menos ou pelo menos cerca de ou é ou é cerca de 0,5 mg, 1,0 mg, 2,5 mg, 5,0 mg, 10,0 mg, 25 mg, 50 mg, 100 mg, 250 mg ou 500 mg.
196. Artigo de fabricação que compreende a combinação ou kit de qualquer uma das modalidades 99-195. VI. Exemplos
[00618] Os exemplos a seguir são incluídos apenas para fins ilus- trativos e não se destinam a limitar o escopo da invenção. Exemplo 1: Avaliação da Expressão de Superfície do BCMA em Linhagens Celulares de Mieloma Múltiplo (MM) na Presença de um Inibidor de Gama Secretase
[00619] Os efeitos do inibidor de gama secretase (GSI) exemplares, LY3039478, nos níveis de superfície do antígeno de maturação de cé- lulas B (BCMA) em linhas celulares de mieloma múltiplo (MM) foram avaliados. Diferentes concentrações de LY3039478, incluindo concen- trações dentro da Cmaá/Cmin estimada para o inibidor, foram incubadas com células RPMI 8226 (linhagem celular de mieloma múltiplo humano de BCMAPº*), células MM1.S (linha celular de mieloma múltiplo hu- mano de BCMAMéto) e células OPM2 (linhagem celular de mieloma múltiplo humano de BCMAMéto) por 24 horas a 37 ºC. As linhas celula- res também foram incubadas na ausência do inibidor (controle do veí- culo). A expressão da superfície do BCMA em cada linhagem celular foi avaliada por citometria de fluxo usando o anticorpo anti-BCMA. Como mostrado na FIG. 1, LY3039478 alcançou inibição potente da clivagem de BCMA a partir da superfície das linhas celulares avalia- das, com uma ICso de 0,01 nM a 0,35 nM. Exemplo 2: Avaliação da função das células CAR T anti-BCMA na Presença de um inibidor de Gama secretase
[00620] Certas atividades funcionais de células CAR t anti-BCMA contra células alvo de expressão de BCMA foram avaliadas na pre- sença ou ausência do GSI LY3039478 exemplar.
[00621] Neste estudo, para gerar células T de expressão de CAR anti-BCMA, as células T CD4+ e CD8+ foram isoladas por enriqueci-
mento baseado em imunoafinidade a partir de amostras de leucafere- se de dois indivíduos doadores saudáveis e um paciente com mielo- ma. As células T isoladas foram ativadas e transduzidas com um vetor viral que codifica um CAR anti-BCMA. O CAR continha um domínio de ligação ao antígeno de scFv específico para BCMA tendo um domínio VH e um domínio VL com sequências de aminoácidos mencionadas em SEQ ID NOS: 24 e 25, respectivamente, um espaçador, um espa- çador tendo uma sequência de aminoácido mencionada em SEQ ID NO: 31, uma região de transmembrana de CD28, uma região de sina- lização coestimuladora de 4-1BB e um domínio de sinalização intrace- lular derivado de CD3-zeta. A construção de ácido nucleico que codifi- ca o CAR também inclui uma sequência de receptor truncada para uso como um marcador de transdução, separada da sequência de CAR por uma sequência de T2A autoclivável.
1. Atividade Citolítica
[00622] As células CAR-T anti-BCMA geradas como descrito neste Exemplo acima foram cultivadas a 37 ºC com células alvo OPM2 ou RPMI-8226 em uma relação efetor para alvo (E:T) de 0,3:1. As células alvo foram marcadas com NucLight Red (NLR), para permitir o rastre- amento das células alvo por microscopia. As culturas foram incubadas na ausência de LY3039478 ou na presença de LY3039478 em con- centrações de 0,1 nM, 1 nM, 10NM, 100nM, 1000nNM, 10000nNM ou 100000 nM (a faixa que abrange a faixa farmacocinética humana esti- mada é mostrada pelas caixas nas FIGS. 3A-3D). Como um controle, as células alvo foram incubadas com LY3039478, mas sem cultura com células CAR-T. A atividade citolítica foi avaliada medindo a perda de células alvo viáveis após cerca de 150 horas, como determinado pelo sinal fluorescente vermelho (usando o IncuCyte& Live Cell Analysis System, Essen Bioscience). A área sob a curva para a morte observada durante o período de cultura (- 150 horas) foi determinada.
A porcentagem de lise (% de morte) foi determinada normalizando a AUC para extermínio a culturas incubadas sem o inibidor.
[00623] A avaliação das células CAR-T do doador derivado do pa- ciente com mieloma está representada nas FIGS. 2A (OPM2) e 2B (RPMI- 8226). Como mostrado, LY3039478 aumentou a atividade cito- lítica das células CAR T anti-BCMA em todas as concentrações testa- das em ambas as linhagens celulares, embora a magnitude do efeito nas concentrações de inibidor testadas seja dependente da linhagem celular. Não foram observados efeitos prejudiciais na função das célu- las CAR T neste ensaio em 100 uM de LY3039478, o que é 300 vezes acima da Cmáx calculada observada em pacientes. Não foram observa- das diferenças na sobrevivência alvo na presença de LY3039478 iso- ladamente, sem células CAR-T. Resultados similares foram observa- dos em uma relação E:T de 1:1. As células CAR-T derivadas dos ou- tros doadores que foram incubados com LY3039478 também mostra- ram um aumento na função de CAR-T, embora tenha sido observada alguma variabilidade de doador para doador. Estes resultados indicam que o tratamento na presença de um inibidor de gama secretase pode aumentar a expressão de BCMA de superfície e a função citolítica das células CAR T anti-BCMA.
[00624] Um estudo similar foi realizado para avaliar ainda mais os efeitos de diferentes concentrações de LY3039478, incluindo concen- trações dentro da Cmá/Cmin estimada para o inibidor, na função citolíti- ca de células CAR-T anti-BCMA contra células alvo OPM2. Resultados na FIG. 2C de um doador exemplar mostrou que LY3039478 era ca- paz de aumentar a morte de CAR-T anti-BCMA de células alvo de ex- pressão de BCMA com uma IC50 de 0,1-0,25 nM.
2. Produção de Citocinas
[00625] A produção de citocinas por células CAR-T anti-BCMA na presença ou ausência de LY3039478 foi avaliada através da monitori-
zação dos níveis de citocinas nos sobrenadantes de coculturas de cé- lulas CAR-T com células alvo de expressão de BCMA. As células CAR-T geradas como descrito neste Exemplo acima foram cultivadas com células alvo OPM2 ou RPMI-8226 na ausência de LY3039478 ou na presença de LY3039478 em concentrações de 0,1 nM, 1 nM, 10nM, 100nM, 1000nM, 10000nM ou 100000 nM (a faixa que abrange a faixa farmacocinética humana estimada é mostrada pelas caixas nas FIGS. 3A-3D). Os sobrenadantes de cultura foram colhidos após 24 horas, e O IFNy e IL-2 foram medidos a partir dos sobrenadantes de cultura.
[00626] A presença de LY3039478 aumentou a produção de IFN- gama (FIG. 3A e FIG. 3B) e IL-2 (FIG. 3C e 3D) no sobrenadante de células CAR T anti-BCMA cocultivadas com células alvo de expressão de BCMA em comparação a coculturas incubadas na ausência de LY3039478. A magnitude do efeito diferiu entre as linhagens celulares e, em alguns casos, a concentração do inibidor. Similares aos efeitos na função citolítica, os resultados indicaram que a combinação com um inibidor de gama secretase aumenta a disponibilidade do antígeno BCMA para as células CAR-T anti-BCMA, levando ao aumento do efei- to das células CAR-T, incluindo a produção de citocinas.
[00627] Um estudo similar foi realizado para avaliar ainda mais os efeitos de diferentes concentrações de LY3039478, incluindo concen- trações dentro da Cmá/Cmin estimada para o inibidor, sobre a capaci- dade das células CAR-T anti-BCMA geradas, como descrito neste Exemplo 2 acima, de produzir citocinas após cocultura com células alvo OPM2. Resultados na FIG. 3E de um doador exemplar foi consis- tente com uma interpretação de que LY3039478 era capaz de aumen- tar a produção de citocinas (com uma IC50 de 0,1-0,25 nM) por células CAR-T anti-BCMA cultivadas com células alvo de expressão de BCMA. Exemplo 3: Efeito do Inibidor de Gama Secretase na Expansão de
Células CAR-T e na Produção de Citocinas após Re-estimulação Serial
[00628] A capacidade das células CAR T de expandir-se ex vivo após ciclos repetidos de estimulação de antígeno pode se correlacio- nar com a função in vivo e/ou a capacidade das células persistirem in vivo (por exemplo, após administração e ativação inicial em resposta ao encontro com antígeno) (Zhao et al. (2015) Cancer Cell, 28:415- 28). Para avaliar o efeito do inibidor de gama secretase exemplar na atividade das células CAR-T após re-estimulação serial, células CAR+ T anti-BCMA foram geradas como descrito acima no Exemplo 2, e cé- lulas alvo de expressão de BCMA irradiadas (células MM1S) foram adicionadas a um relação efetor para alvo (E:T) de 1:2 na presença de LY3039478 em duas concentrações diferentes, 0,001 uM (uma con- centração em torno da IC50) ou uma concentração mais alta de 1,0 UM (aproximadamente 3 vezes a Cmáx), Ou com apenas controle veícu- lo. O ensaio foi realizado em uma composição de células CAR+ T anti- BCMA geradas a partir de células T derivadas de um doador saudável ou de um doador com mieloma múltiplo. A cada 3-4 dias, as células T de expressão de CAR foram colhidas, contadas e re-semeadas na densidade inicial de semeadura com meios frescos contendo novas células alvo irradiadas na mesma relação E:T na presença ou ausên- cia da mesma concentração de LY3039478. Um total de 3-5 ciclos de estimulação foram realizados durante um período de cultura de 10 a 14 dias. Os efeitos do inibidor na função das células T foram avaliados monitorando o número de células (FIGS. 4A e 4B) ou produção de ci- tocina no sobrenadante colhido (FIG. 5A e FIG. 5B) em cada ciclo de estimulação.
[00629] O número de células CAR-T foi determinado em cada ciclo antes do re-semeadura de células CAR+ T anti-BCMA derivadas de células derivadas de doadores saudáveis (FIG. 4A) ou as células deri-
vadas de pacientes (FIG. 4B). Para células CAR+ T anti-BCMA deriva- das de ambos os doadores, a expansão aumentada de células CAR-T anti-BCMA foi observada durante o período de 10-14 dias, quando as células CAR-T foram incubadas na presença de ambas as concentra- ções de LY3039478 (0,001 uM e 1,0 uM). Os resultados indicaram que o LY3039478 não exibiu quaisquer efeitos prejudiciais na função das células CAR-T, embora seja um inibidor conhecido da via de sinaliza- ção de Incisura, que está envolvida na diferenciação das células T. Os resultados foram consistentes com uma conclusão de que o inibidor de gama secretase exemplar LY3039478 pode promover a expansão e/ou sobrevivência continuada das células CAR+ T, após encontro repetido com antígeno cognato.
[00630] A produção de citocinas por células CAR-T anti-BCMA na re-estimulação com células de expressão de antígeno na presença ou ausência de LY3039478 foi avaliada após o primeiro ciclo de re- semeadura no dia 4. Os sobrenadantes da cultura foram colhidos 24 horas após re-semeadura e IFN-gama, IL-2 e TNF-alfa foram medidos a partir dos sobrenadantes de cultura. Níveis elevados de IFN-gama, I1L-2 e TNF-alfa foram observados para ambas as concentrações de LY3039478 (0,001 uM e 1,0 uM) em células CAR+ T anti-BCMA deri- vadas das células doadoras saudáveis (FIG. 5A) ou das células doa- doras de paciente (FIG. 5B). Exemplo 4: Avaliação de Agentes na Atividade de Bloqueio da Atividade de CAR Anti-BCMA
[00631] —Polinucleotídeos que codificam receptores de antígeno quimérico exemplares (CARs), cada qual contendo um domínio de li- gação ao antígeno de scFv anti-5BCMA humano. Entre os CARs esta- vam aqueles contendo scFvs anti-BCMA contendo uma VH e VL men- cionados em SEQ ID NOS: 22 e 23, respectivamente (referidas neste exemplo como CAR anti-BCMA.3), uma VH e VL mencionadas em
SEQ ID NOS: 24 e 25, respectivamente (referidas neste exemplo co- mo CAR anti-BCMA.4) e uma VH e VL mencionada em SEQ ID NOS: 18 e 19, respectivamente (referidas neste exemplo como anti-BCMA.1 CAR). Os CARS codificados também foram gerados para conter um espaçador exemplar mencionado em SEQ ID NO: 31, um domínio de transmembrana de CD28 humano, uma sequência de co-sinalização intracelular derivada de 4-1BB humana e um domínio de sinalização intracelular derivado de CD3-zeta.
[00632] Os clones de cDNA que codificam estes CARs foram liga- dos a um elemento de salto ribossômico a jusante (como T2A) seguido por uma sequência de codificação de receptor truncada, e clonados em um vetor de expressão lentiviral.
[00633] Para gerar as células T de expressão de CAR anti-BCMA, as células T foram isoladas por enriquecimento à base de imunoafini- dade a partir de amostras de leucaferese de indivíduos doadores hu- manos. As células T isoladas foram ativadas e transduzidas com veto- res lentivirais contendo os respectivos polinucleotídeos que codificam os CARs anti-BCMA e expandidas; as células T CD4+ e CD8+ foram coradas e analisadas por citometria de fluxo para confirmar a transdu- ção e expressão dos CARs anti-BCMA. Várias funções das células de expressão de CAR anti-BCMA foram avaliadas após incubação com células alvo de expressão de BCMA e BCMA solúvel.
[00634] Para avaliar a atividade citolítica, as células T de expressão de CAR anti-BCMA foram incubadas com células alvo OPM2 em uma relação E:T de 5:1 na presença de BCMA-Fc solúvel em O, 0,3, 3, 30 ou 300 ng/mL. As células alvo foram marcadas com NucLight Red (NLR) para permitir o rastreamento das células alvo por microscopia. A atividade citolítica foi avaliada medindo-se a perda de células alvo viá- veis durante um período dentre 24 e 72 horas, como determinado pelo sinal fluorescente vermelho (usando IncuCyte& Live Cell Analysis Sys-
tem, Essen Bioscience). A porcentagem de lise (% de Lise) foi norma- lizada para a lise que ocorreu em células alvo incubadas com células T simuladas. A atividade citolítica das células T que expressam o CAR contendo anti-BCMA.1 ou CAR anti-BCMA.3 foi substancialmente re- duzida na presença de 3 ng/mL ou mais BCMA-Fc, no entanto, a ativi- dade citolítica das células que expressam o CAR anti-BCMA.4 não foi bloqueada pela presença de até 300 ng/ml de BCMA-Fc.
[00635] Para avaliar a produção de citocinas, as células T de ex- pressão de CAR anti-BCMA foram incubadas com células alvo OPM2 em uma relação E:T de 5:1 na presença de BCMA-Fc solúvel a 0, 111, 333 e 1000 ng/mL. As células T que não expressam um CAR (simula- do) também foram avaliadas. A acumulação de citocinas de IFN-y, TNF-a e IL-2 no sobrenadante foi avaliada. O acúmulo de citocinas em culturas contendo células T que expressam de CAR anti-BCMA.1 ou CAR anti-BCMA.3 foi substancialmente reduzido na presença de 111 ng/mL ou mais BCMA-Fc, porém, uma menor redução no acúmulo de citocinas foi observada em culturas que contêm células T que expres- sam o CAR BCMA.4 na presença de BCMA-Fc solúvel em todas as concentrações testadas.
[00636] Em outra experiência, a atividade das células T de expres- são de CAR anti-BCMA.4 na presença vs. ausência de BCMA solúvel foi avaliada. As células T de expressão de CAR anti-BCMA.4 foram cocultivadas com células tumorais RPMI-8226, com BCMA-Fc recom- binante ou com sobrenadante de cultura celular derivado de células de mieloma múltiplo NCI-H929 (linhagem celular de secreção de BCMA, o sobrenadante contendo BCMA solúvel). Nem a lise de células tumorais nem a produção de citocinas foram afetadas por quaisquer concentra- ções de BCMA solúvel derivado de NCI-H929 (até 1000 ng/mL). Tanto a lise de células tumorais quanto a produção de citocinas foram dimi- nuídas minimamente em níveis fisiológicos igualmente altos de BCMA recombinante. Exemplo 5: Administração do Composto Inibidor de Gama- Secretase LY3039478 e células CAR+ T anti-BCMA in vivo em um Modelo de Tumor Animal
[00637] Um estudo farmacocinético e farmacodinâmico foi realizado após a administração oral de uma dose única de LY3039478 (3 mg/kg) em um modelo de xenoenxerto de mieloma múltiplo humano. Especifi- camente, os camundongos NOD.Cg.PrkdescidIL2rgtm 1Wil/SzJ (NSG) foram injetados subcutaneamente (s.c.) com células 11E+07 RPMI- 8226 modificadas para expressar GFP e vaga-lume luciferase (RPMI- 8226 fíluc) e os tumores foram permitidos crescer. Trinta e dois (32) dias após a injeção de RPMI-8226 (dia O do estudo), uma dose única de 3 mg/kg de LY3039478 foi administrada por via oral.
[00638] AFIG.6 representa a análise de amostras de sangue, co- lhidas O, 0,5, 2, 6, 18, 24, 36 e 48 horas após a administração, para os níveis plasmáticos do fármaco. FIG. 7 mostra os níveis plasmáticos de BCMA ao longo do tempo em amostras de plasma colhidas 0, 0,5, 2, 6, 18, 24, 36 e 48 horas após a administração em camundongos que receberam uma dose oral única de LY3039478 (3 g/Kkg) ou veículo em este estudo. As células tumorais em 2 horas, 24 horas ou 48 horas após a administração de LY3039478 ou controle veículo no estudo fo- ram avaliadas quanto à expressão de superfície de BCMA. A intensi- dade média de fluorescência (MFI) do BCMA de superfície, quando avaliada por citometria de fluxo, é mostrada na FIG. 8. A expressão aumentada de BCMA nos tumores foi confirmada com um esquema de dosagem de 0,1 mg/kg ou 1 mg/kg administrado duas administrações orais de LY3039478 em um modelo alternativo de células tumorais de mieloma múltiplo.
[00639] Os efeitos antitumorais após a administração de células CAR T anti-BCMA e um composto inibidor de gama secretase,
LY3039478, cada qual, individualmente e em combinação, foram ava- liados em um modelo de camundongo de xenoenxerto de mieloma múltiplo humano RPMI-8226. As células T de expressão de CAR anti- BCMA foram geradas como descrito no Exemplo 2.
[00640] Os camundongos NOD.Cg.PrkdcscidIL2ragtm 1 Wil/'SzJ (NSG) foram injetados subcutaneamente (s.c.) com células 1E+07 RPMI-8226 modificadas para expressar GFP e vaga-lume luciferase (RPMI-8226 ffluc), e o volume tumoral foi aumentado ao longo de 25 dias, sendo o 25º dia designado como “dia 0” neste estudo. Os animais foram divididos em 8 grupos e cada grupo recebeu um dos seguintes tratamentos: (1) somente veículo, (2) LY3039478 (3 mg/kg) somente, (3) Células T simuladas (que não expressam o CAR) (células 3,00E+06 T por camundongo) e veículo, (4) Células T simuladas (célu- las 3,00E+06 T por camundongo) e LY3039478 (3 mg/kg), (5) células CAR+ T anti-BCMA (células 1,00E+06 CAR+ por camundongo) e veí- culo, (6) células CAR+ T anti-BCMA (1,00E+06 células CAR+ por mouse) e LY3039478 (3 mg/kg), (7) células CAR T anti-BCMA+ (célu- las 3,00E+06 CAR+ por camundongo) e veículo ou (8) células CAR+ T anti-BCMA (células 3,00E+06 CAR+ por camundongo) e LY3039478 (3 mg/kg). Em cada grupo, LY3039478 ou veículo foi liberado por via oral (p.o.) no dia -1 e no dia zero (0) e em dias alternados (e.o.d.) até o dia 21. Onde aplicável, as células T foram administradas por uma úni- ca injeção intravenosa (i.v.) no dia O.
[00641] O volume tumoral foi avaliado duas vezes por semana ao longo do estudo; resultados para diferentes grupos são mostrados na FIG. 9A. As células CAR+ T no sangue e no tumor foram avaliadas nos dias 7, 15, 21 e 28 por citometria de fluxo usando anticorpos es- pecíficos para marcadores de superfície celular e um reagente especií- fico para o CAR anti-BCMA. A sobrevivência dos animais foi monitora- da ao longo do estudo.
[00642] Como mostrado na FIG. 9A, os tumores continuaram a crescer ao longo do estudo após a transferência adotiva de células de controle negativo (Simulação) ou em camundongos que não recebe- ram tratamento. Em camundongos que receberam as doses mais altas de células T de expressão de CAR anti-BCMA, a regressão completa do crescimento tumoral foi observada por cerca de 20 dias após a transferência de células CAR T e foi mantida durante todo o restante do estudo; alguma redução no crescimento tumoral foi observada em animais que receberam a dose mais baixa de células T de expressão de CAR anti-BCMA e veículo. Em animais que receberam administra- ção de LY3039478 em combinação com a dose mais baixa de células de expressão de CAR anti-BCMA, foi observada uma redução subs- tancial no crescimento de tumor em comparação aos camundongos tratados com a dose mais baixa de célulasde expressão de CAR anti- BCMA e veículo. A administração de LY3039478 foi bem tolerada ao longo do estudo, como indicado pelo peso corporal e pelo escore da condição.
[00643] A porcentagem de sobrevivência dos animais ao longo do estudo é mostrada na FIG. 9B. A administração de células T de ex- pressão de CAR anti-BCMA foi observada como resultado no aumento da sobrevivência. Um benefício adicional de sobrevivência foi obser- vado em camundongos tratados com a combinação das células T de expressão de CAR anti-BCMA com a dose mais baixa e GSI, LY3039478, em comparação ao grupo tratado com a dose mais baixa de células CAR-T e veículo. Mediana (dias) mortes no Dia 65 de tumor no Dia 65 Re EE RR A
CAR antirBCMA 1e6 + ea Célula T de expressão de | Indef. 2 80 8/8 CAR antiBCMA 1e6 + LY3039478 Célula T de expressão de | Indef. 10/10 CAR antiBCMA 3e6 + Veículo Célula T de expressão de | Indef. 100 10/10 CAR antirBCMA 3e6 + LY3039478
[00644] A presença de células CAR+ T no sangue foi monitorada ao longo do estudo (a partir do sangue coletado nos dias 7, 14, 21 e 28 após a administração das células CAR-T). Os glóbulos brancos das amostras de sangue foram corados com vários reagentes para detec- tar vários marcadores na superfície das células imunes, incluindo célu- las T e expressão do CAR (incluindo um reagente específico para o CAR e um reagente específico para um marcador de transdução codi- ficado pelo vetor de CAR). Os resultados são mostrados nas FIGS.
10A e 10B.
[00645] — Como mostrado, contagens aumentadas de células T CD4+ de expressão de CAR anti-BCMA (FIG. 10A) e células T CD8+ de ex- pressão de CAR anti-BCMA (FIG. 10B) foram observadas no sangue periférico nos Dias 15, 21 e 28 após a administração das células T de expressão de CAR de dose mais alta ou mais baixa em combinação com LY3039478 em comparação a sua ausência. Na presença de LY3039478, o pico de expansão ocorreu por volta do dia 15 após a administração de células de expressão de CAR anti-BCMA de dose mais alta e foi por volta do dia 21 após a administração de células T de expressão de CAR anti-BCMA de dose mais baixa. Não foram obser- vadas alterações no hemograma periférico para células T CD4+ ou CD8+ que não expressavam o CAR anti-BCMA quando tratadas com ou sem o LY3039478.
[00646] Os digestos tumorais também foram analisadas para de- terminar o número de células CAR+ T CD4+ e CD8+ em tumores se-
guindo as várias condições de tratamento. Nos dias 7 e 15, os diges- tos de tumores por satélite de camundongos tratados com células CAR+ T anti-BCMA de dose mais baixa e LY3039478 mostrou um nú- mero maior de células CAR+ T CD4+ e CD8+ por 1 x 10º células em comparação aos camundongos tratados com células CAR+ T anti- BCMA com dose mais baixa e veículo (FIG. 11). A análise de células de digestos tumorais para expressão de BCMA de superfície por cito- metria de fluxo, medida pela intensidade média de fluorescência (MFI), mostrou que a presença de LY3039478 aumentou a MFI de BCMA de superfície em células tumorais RPMI-8226 (FIG. 12B). O BCMA sérico também foi avaliado de acordo com a condição do tratamento. FIG. 12A mostra os níveis séricos de BCMA nos dias 7 e 15 para cada con- dição de tratamento. Estes resultados são consistentes com a capaci- dade do LY3039478 de reduzir ou impedir a clivagem do BCMA de su- perfície.
[00647] Estes resultados são consistentes com a descoberta de que a administração de LY3039478 em combinação com a dose mais bai- xa de células CAR T anti-BCMA levou a efeitos antitumorais aumenta- dos em comparação à administração da dose mais baixa de células T de expressão de CAR anti-BCMA em combinação com veículo sozi- nho. Exemplo 6: Avaliação de Células CAR+ T Anti-BCMA Após Esti- mulação Crônica e Re-Desafio na Presença de um Composto Ini- bidor de Gama Secretase, LY3039478
[00648] O efeito de um composto inibidor de gama secretase, LY3039478, na citotoxicidade de células CAR+ T anti-BCMA após es- timulação específica de CAR a longo prazo foi avaliado. As composi- ções de células CAR+ T anti-BCMA, geradas como descrito no Exem- plo 2, contendo células T CD4+ e CD8+ de expressão de CAR anti- BCMA, foram incubadas com 50 ug/mL de contas conjugadas com
BCMA-Fc por 7 dias, sob condições projetadas para esgotar funcio- nalmente as células CAR T.
[00649] As células CAR-T foram, então, redesafiadas com células alvo de expressão de antígeno na presença ou ausência de LY3039478. Especificamente, as células T de expressão de CAR anti- BCMA foram cocultivadas com várias linhagens celulares de mieloma múltiplo RPMI-8226, OPM2 ou MM1.S na presença de 1 uM de contro- le veículo de LY3039478 ou de DMSO em uma relação efetor para al- vo de 0,3:1. Para avaliar a atividade citolítica, as células alvo foram marcadas com NucLight Red (NLR) para permitir o rastreamento por microscopia fluorescente. A atividade de morte foi avaliada medindo- se a perda de células alvo viáveis ao longo do tempo, como determi- nado pela perda de sinal fluorescente ao longo do tempo por micros- copia de fluorescência cinética (usando o IncuCyte6 Live Cell Analysis System, Essen Bioscience). A fluorescência alvo foi monitorada ao longo do tempo e foi normalizada para contagem de célula de direcio- namento.
[00650] Os resultados mostrados na FIG. 13A demonstraram que a presença de LY3039478 melhorou a atividade citolítica de células CAR+ T anti-BCMA que foram estimuladas cronicamente. Um índice de morte foi determinado como o inverso da área sob a curva (AUC) para a fluorescência alvo ao longo do tempo e foi normalizado em re- lação ao controle veículo de DMSO. Como mostrado na FIG. 13B, o grau de melhoria na morte celular correlacionou-se com a densidade do antígeno BCMA nas células alvo (densidade do antígeno: RPMI- 8226<OPM2<MM1.S).
[00651] O sobrenadante da cultura de células foi colhido das cocul- turas 24 horas após o início da cultura de células T de expressão de CAR anti-BCMA e células alvo na experiência acima, ou em um expe- rimento similar, porém, no qual as células CAR+ T anti-BCMA e as cé-
lulas alvo foram cocultivadas em uma relação E:T de 1:1. A produção de TNF-alfa, IFN-gama e IL-2 no sobrenadante colhido foi medida usando um ensaio Luminex Multiplex. Em ambas as relações E:T, a presença de GSI LY3039478 melhorou a função das células T de ex- pressão de CAR anti-BCMA cronicamente estimuladas para produzir citocinas (FIG. 13C). O grau de melhoria na produção de citocinas também se correlacionou com a densidade do antígeno BCMA nas células alvo. Exemplo 7: Avaliação da Produção de Citocinas por Células CAR+ T anti-BCMA na Presença ou Ausência de um Inibidor de Gama Secretase
[00652] Vários parâmetros indicativos da função das células T fo- ram avaliados após a incubação de células CAR+ T anti-<BCMA com contas contendo BCMA na presença de diferentes concentrações do inibidor de gama secretase, LY3039478 ou veículo (DMSO). O sobre- nadante foi colhido após 24 horas e a produção de TNF-alfa, IFN- gama e IL-2 foi medida usando um ensaio Luminex Multiplex. Os resul- tados são mostrados na FIG. 14. Os resultados foram consistentes com a conclusão de que a presença deste composto GSI não afetou a produção de citocinas, a contagem de células CAR+ T ou a viabilida- de. Exemplo 8: Avaliação da Eexpressão de Ssuperfície de BCMA em Células de Mieloma Múltiplo em Pacientes Tratados com Inibidor de Gama Secretase
[00653] Três indivíduos humanos tendo mieloma múltiplo recebe- ram três doses de 25 mg do inibidor de gama secretase (GSI) LY3039478 por via oral. A capacidade de ligação ao anticorpo do antí- geno de maturação de células B absolutas (BCMA) (ABC) na superfí- cie de células de mieloma múltiplo foi quantificada por citometria de fluxo realizada em espécie de aspirado de medula óssea obtidas de cada um dos pacientes antes da administração do GSI e imediatamen- te após a terceira dose oral de GSI. Um aumento médio de 66 vezes no BCMA ABC foi observado após a administração de GSI (FIG. 15A). A porcentagem de células plasmáticas nas amostras de pacientes que determinavam ter expressão mensurável de BCMA de superfície foi observada aumentar de 35% (média) antes do GSI para 98,4% (mé- dia) após as três doses orais (FIG. 15B).
[00654] A presente invenção não se destina a ser limitada em es- copo às modalidades particulares descritas, as quais são fornecidas, por exemplo, para ilustrar vários aspectos da invenção. Várias modifi- cações às composições e métodos descritos tornar-se-ão evidentes a partir da descrição e dos ensinamentos no presente documento. Tais variações podem ser praticadas sem se afastar do verdadeiro escopo e espírito da descrição e estão destinadas a incluir-se no escopo da presente invenção.
SEQUÊNCIAS [FEITO TREE OO» » Eis 1 ESKYGPPCPPCP espaçador (IgG4articulação) (aa) Homo sapiens 2 GAATCTAAGTACGGACCGCCCTGCCCCCCTTGCCCOT espaçador (IgG4articulação) (nt) Homo sapiens 3 ESKYGPPCPPCPGOPREPOVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE- Espaçador de WESNGOPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQOEGNVFSCSVMHEA- articulação-CH3 LHNHYTOKSLSLSLGK Homo sapiens 4 ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQED- Espaçador de PEVOFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHODWLNGKEYK- articulação-CH2- CKVSNKGLPSSI|EKTISKAKGOPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPS- cH3 DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGN- Homo sapiens
VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK RWPESPKAQASSVPTAQPOAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEE- lgD-articulação-Fc QEERETKTPECPSHTQPLGVYLLTPAVQDLWLRDKATFTCFVVGSDLK- Homo sapiens DAHLTWEVAGKVPTGGVEEGLLERHSNGSQOSQHSRLTLPRSLWNAG- TSVTCTLNHPSLPPQRLMALREPAAQAPVKLSLNLLASSDPPEAASWLLCEVSG- FSPPNILLMWLEDOREVNTSGFAPARPPPQPGSTTFWAWSVLRVPAP-
PSPQPATYTCVVSHEDSRTLLNASRSLEVSYVTDH 6 LEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPR T2A artificial 7 RKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLD- tEGFR PQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVS- artificial LNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENS-
CKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPRE- FVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQOCAHYIDGPHCVKTCPAGVM- GENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATG-
MVGALLLLLVVALGIGLFM 8 FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV. CD28 (aminoácidos 153-179 de Acesso No. P10747) Homo sapiens 9 IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYS- CD28 (aminoácidos LLVTVAFIIFWV. 114-179 de Acesso No. P10747) Homo sapiens RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYOQPYAPPRDFAAYRS CD28 (aminoácidos 180-220 de P10747) Homo sapiens EE) RSKRSRGGHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS CD28 (LL a GG) o res tmn "| 12 KRGRKKLLYIFKOPFMRPVOTTAEEDGCSCRFPEEEEGGCEL 4-1B8B8 (aminoáci dos 214-255 of Q07011.1) Homo sapiens 13 RVKFSRSADAPAY QOGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKN- CcD3 zeta PQEGLYNELQOKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH- Homo sapiens
MOALPPR 14 RVKFSRSAEPPAYQOGONOQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKN- CcD3 zeta POEGLYNELOKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH- Homo sapiens
MOALPPR RVKFSRSADAPAYKQGQONQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKN- CcD3 zeta PQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH- Homo sapiens
MOALPPR 18 QIQLVOSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTE- Anti-BCMA de TREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLOQINNLKYEDTATYFCALDYSYAM- cadeia pesada DYWGOGTSVTVSS variável (VH) 19 DIVLTOSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIHWYQQKPGQPPTLLIQLASN- Anti-BCMA de VOTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLOSRTIPRTFGGGTKLEIK Cadeia leve variável (VL) OIQLVOSGPDLKKPGETVKLSCKASGYTFTNFGMNWVKQAPGKGFKW- AnticBCMA de MAWINTYTGESYFADDFKGRFAFSVETSATTAYLOINNLKTEDTATYFCARGE|Y- cadeia pesada YGYDGGFAYWGQOGTLVTVSA variável (VH) 21 DVVMTOSHRFMSTSVGDRVSITCRASQDVNTAVSWYQQKPGAOSPKLLI- Anti-BCMA de FSASYRYTGVPDRFTGSGSGADFTLTISSVOAEDLAVYYCQQHYSTPWTFGGGT- Cadeia leve variável KLDIK (VL) 22 EVOLVOSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQOMPGKGLEWM- Anti-BCMA de GIIYPGDSDTRYSPSFQGHVTISADKSISTAYLOWSSLKASDTAMYYCARYSGS- cadeia pesada FDNWGOGTLVTVSS variável (VH) 23 SYELTOPPSASGTPGQRVTMSCSGTSSNIGSHSVNWYQQLPGTAPKLLIYTNN- Anti-BCMA de QORPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLOSEDEADY YCAAWDGSLNGLVFGGGT- cadeia leve variável KLTVLG (VL) 24 EVOLVOSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMROAPGOGLESMGWIN- Anti-BCMA de PNSGGTNYAQKFOGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRD- cadeia pesada GYMDYWGQGTLVTVSS variável (VH)
YEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLOAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGT- cadeia leve variável — ee TT IT EE RR E ee 31 ESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQED- Espaçador de PEVOFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFOSTYRVVSVLTVLHODWLNGKEYK- articulação-CH2- CKVSNKGLPSSIEKTISKAKGOPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPS- cH3 DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWOQEGN- Homo sapiens
VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 32 EVOLVOSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQOAPGOGLEWMGRIIPIL- Anti-BCMA de GIANYAQKFOGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYSK- cadeia pesada SIVSYMDYWGOGTLVTVSS variável (VH) 33 LPVLTOPPSTSGTPGORVTVSCSGSSSNIGSNVVFWYQOLPGTAPKLVIYRNN- Anti-BCMA de ORPSGVPDRFSVSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGYVFGTGT- Cadeia leve variável KVTVLG (VL) 34 QVQLVOSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVROAPGOGLEWMGRIIPIL- Anti-BCMA de GTANYAQKFOGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYGSYR- cadeia pesada WEDSWGOGTLVTVSS variável (VH) QAVLTOPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVFWYQOQLPGTAPKLLIYSNN- Anti-BCMA de ORPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSASYVFGTGT- cadeia leve variável KVTVLG (VL) 36 QVOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMHWVRQAPGORLEWMGWIN- Anti-BCMA de PNSGGTNYAQKFQDRITVTRDTSSNTGYMELTRLRSDDTAVYYCARSPYSGVLD- cadeia pesada KWGQOGTLVTVSS variável (VH) 37 OSVLTAPPSVSGAPGORVTISCTGSSSNIGAGFDVHWYQOQLPGTAPKLLIYGNSN- Anti-BCMA de RPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLOAEDEADYYCOSYDSSLSGYVFGTGT- cadeia leve variável KVTVLG (VL) 39 MALPVTALLLPLALLLHAARP peptídeo sinal de
MMA ES) EVOLLESGGGLVOPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQOAPGKGLEWVSAIS- Anti-BCMA de GSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLOMNSLRAEDTAVYYCARAEM- cadeia pesada GAVFDIWGOGTMVTVSS variável (VH) 42 EIVLTOSPATLSLSPGERATLSCRASQOSVSRYLAWYQQKPGOAPRLLIYDASN- Anti-BCMA de RATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQORISWPFTFGGGTKVEIK cadeia leve variável VL) 43 QVQOLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVA- Anti-BCMA de VISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGTYL- cadeia pesada GGLWYFDLWGRGTLVTVSS variável (VH) DIVMTOSPLSLPVTPGEPASISCRSSOSLLHSNGYNYLDWYLQOKPGOSPAQLLIYL- Anti-BCMA de GSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMOGLGLPLTFGGGT- cadeia leve variável KVEIK (VL) 45 QVQLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIIN- Anti-BCMA de PGGGSTSYAQKFOGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARESW- cadeia pesada PMDVWGOGTTVTVSS variável (VH) 46 EIVMTOSPATLSVSPGERATLSCRASQOSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRA- Anti-BCMA de TGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLOSEDFAVYYCOQYAAYPTFGGGTKVEIK Cadeia leve variável 2) 47 QLOLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLE- Anti-BCMA de WIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR- cadeia pesada GRGYATSLAFDIWGQGTMVTVSS variável (VH)
EIVLTOSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQOKPGQAPRLLIVDASN- ANtBCMA — de RATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCAORHVWPPTFGGGTKVEIK cadeia leve variável 2) 49 EVOLVESGGGLVAPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSTIS- AntBCMA — de SSSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSQEHLI- cadeia — pesada FDYWGOGTLVTVSS variável (VH) 50 EIVLTOSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQOKPGOAPRLLIYDASN- ANtBOCMA — de RATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRFYYPWTFGGGTKVEIK cadeia leve variável (VL) E QVALVESGGGVVAOPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVA- ANBOMA — de VISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR- cadeia — pesada TDFWSGSPPGLDYWGQGTLVTVSS variável (VH) 52 DIQLTASPSSVSASVGDRVTITCRASAGISSWLAWYOOKPGKAPKLLIVGASS- ANBOMA — de LOSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLOPEDFATYYCAQQIYTFPFTFGGGTKVEIK cadeia leve variável VL) 53 QVALVASGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGOGLEWMGGIF ANtBCMA — de PIFGTANYAQKFOGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTPEYSSS|- cadeia — pesada WHYYYGMDVWGOGTTVTVSS variável (VH) ga DIVMTOSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYOOK- ANBOMA — de PGQPPKLLINWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLOAED- cadeia leve variável VAVYYCQQFAHTPFTFGGGTKVEIK (VL) QVALVESGGGVVAPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMAHWVRQAPGKGLEWVA- ANBOCMA — de VISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKG- cadeia — pesada PLQEPPYDYGMDVWGQGTTVTVSS variável (VH) EIVMTOSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYOOKPGOAPRLLIVSASTRA- | AntBCMA — de TGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLOSEDFAVYYCAQHHVWPLTFGGGTKVEIK cadeia leve variável VL) 57 QVALVASGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVROAPGOGLEWMGRIIPIL- | AntrBCMA — de GIANYAQKFOQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYYSHDMWSE- | cadeia — pesada DWGOGTLVTVSS variável (VH) 58 LPVLTOPPSASGTPGORVTISCSGRSSNIGSNSVNWYRQLPGAAPKLLIYSNN- ANtBCMA — de ORPPGVPVRFSGSKSGTSASLAISGLOSEDEATYYCATWDDNLNVHYVFGTGT- cadeia leve variável KVTVLG VL) QVALVASGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSINWVRQAPGAGLEWMGWIN- ANEBOMA — de TETREPAYAYDFRGRFVFSLDTSVSTAYLOISSLKAEDTAVYYCARDYSYAM- cadeia — pesada DYWGOGTLVTVSS variável (VH) DIVLTOSPASLAVSLGERATINCRASESVSVIGAHLIFWYQOKPGOPPKLLIVLASN- | AntrBCMA — de LETGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLOAEDAAIYYCLOSRIFPRTFGQGTKLEIK cadeia leve variável (VL) 61 EVOLVESGGGLVOPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGT- ANtBCMA — de VYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGES- cadeia — pesada DVWGOGTTVTVSS variável (VH) 62 DIQLTASPSSLSASVGDRVTITCRASASISSYLNWYQAKPGKAPKLLIVAASS- ANtrBCMA — de (VL) 63 QVALVESGGGLVAPGRSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLGWVSGIS- AntiBCMA — de RSGENTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRDEDTAVYYCARSPAHYYGG- | cadeia — pesada MDVWGQGTTVTVSS variável (VH) 6a DIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSSFLAWYQQKPGAOAPRLLIVGASR- AntBCMA — de RATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDSAVYYCQQYHSSPSWTFGQGTKLEIK — | cadeia leve variável
VD 65 QVALVESGGGLVAPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGT AntrBCMA — de VYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGES- cadeia — pesada DVWGOGTTVTVSS variável (VH) [6 orrasrsPSaveDRTaRAN asma a]
FLNWYHOTPGKAPKLLIYDASTLOTGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLOPEDIG- cadeia leve variável Eee ArAATAEAS Tor] 67 EVOLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSG|- Anti-BCMA de VYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLOQMNSLRPEDTAI/YYCSAHGGES- cadeia pesada DVWGOGTTVTVSS variável (VH) EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQOSIGSSSLAWYQQKPGOAPRLLMYGASS- Anti-BCMA de RASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQOYAGSPPFTFGOGTKVEIK Cadeia leve variável (VL) 69 QIQLVOSGPELKKPGETVKISCKASGYTFRHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRIN- Anti-BCMA de TESGVPIYADDFKGRFAFSVETSASTAYLVINNLKDEDTASYFCSNDYLYS- cadeia pesada LDFWGOGTALTVSS variável (VH) 70 DIVLTASPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGOPPTLLIOQOLASN- Anti-BCMA de VOTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLOSRTIPRTFGGGTKLEIK Cadeia leve variável VL) Ti OIQLVOSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTHYSMNWVKQOAPGKGLKWMGRINTE- AnticBCMA de TGEPLYADDFKGRFAFSLETSASTAYLVINNLKNEDTATFFCSNDYLYS- cadeia pesada CDYWGQOGTTLTVSS variável (VH) 72 DIVLTOSPASLAMSLGKRATISCRASESVSVIGAHLIHWYQQOKPGQOPPKLLIYLASN- Anti-BCMA de LETGVPARFSGSGSGTDFTLTIDPVEEDDVAIYSCLOSRIFPRTFGGGTKLEIK cadeia leve variável
VD 73 QVOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVROAPGOGLEWM- Anti-BCMA de GWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSINTAYMELSSLTSEDTAVYFCAS- cadeia pesada LYDYDWYFDVWGQGTMVTVSS variável (VH) 74 DIVMTOTPLSLSVTPGQPASISCKSSOSLVHSNGNTYLHWYLOK- Anti-BCMA de PGOSPOLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCSOS- cadeia leve variável SIYPWTFGOGTKLEIK (VL) 75 QVQOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVROAPGOGLEWM- Anti-BCMA de GWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCAS- cadeia pesada LYDYDWYFDVWGQGTMVTVSS variável (VH) 76 DIVMTOTPLSLSVTPGEPASISCKSSOSLVHSNGNTYLHWYLOK- AnticBCMA de PGOSPOQOLLIYKVYSNRFSGVPDRFSGSGSGADFTLKISRVEAEDVGVYYCAETSHV- cadeia leve variável PWTFGQOGTKLEIK (VL) 77 QVQOLVESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTLDYYAIGWFROAPGKEREGVICISRS- SdAb anti-BCMA DGSTYYADSVKGRFTISRDNAKKTVYLQMISLKPEDTAAYYCAAGADCSGYL-
RDYEFRGOGTOVTVSS 78 IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP espaçador de A me e | LDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP espaçador de E ssa dE” 81 PTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD articulação de
NM MMC 82 TTTPAPRPPTPAPTIASOPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD articulação de E Aa EE FVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD articulação de
MMA 84 DTGLYICKVELMYPPPYYLGIGNGTOQIYVIDPEPCPDSD articulação de A e ae | [6 | aFesRAEIRVTERRREVATAPSPSPRRRBERITE etasasaro7 | 88 GLAVSTISSFFPPGYQ articulação de A eae memo É EPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHED- articulação de I9G1 [O [rever emana |
CKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDF AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN-
VFSCSVMHEALHNHYTOKSLSLSPGK 90 EVOLLESGGGLVOPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVROAPGKGLEWVSAIS- CAR ant-BCMA GSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAEM- GAVFDIWGOGTMVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVLTOSPATLSLSPGE- RATLSCRASQSVSRYLAWYQOKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSG- TDFTLTISSLEPEDFAVYYCQORISWPFTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTII- HVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHS- DYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGON- QLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELOKDKMAEAY-
SEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMOALPPR 1 EIVLTOSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGOAPRLLIYDASN- CAR ant-BCMA RATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQORISWPFTFGGGT- KVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVOLLESGGGLVOPGGSLRLSCAASGFT- FSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTIS- RDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAEMGAVFDIWGOGTMVTVS- SAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVA- FIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSA- DAPAYOQGAONQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKN- PQEGLYNELOKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH-
MOALPPR 92 QVALVESGGGVVAPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVA- CAR ant-BCMA VISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLOMNSLRAEDTAVYYCARDGTYL- GGLWYFDLWGRGTLVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGDIVMTOSPLSLPVTPGE- PASISCRSSOSLLHSNGYNYLDWYLOKPGOSPOLLIYVLGSNRASGVP- DRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMOGLGLPLTFGGGT- KVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYS- LLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS- RVKFSRSADAPAY QOGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKN- PQEGLYNELOKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH-
MOALPPR 3 DIVMTOSPLSLPVTPGEPASISCRSSOSLLHSNGYNYLDWYLOKPGOSPOLLIVL- CAR ant-BCMA GSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGLGLPLTFGGGT- KVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGOVOLVESGGGVVOPGRSLRLSCAASGFT- FSSYGMHWVROAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTIS- RDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGTYLGGLWYFDLWGRGTLVTVS- SAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVA- FIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSA- DAPAYQQGANAQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKN- PQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH-
MOALPPR 4 QVALVASGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIIN- CAR ant-BCMA PGGGSTSYAQKFOGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARESW- PMDVWGOGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVMTOSPATLSVSPGE- RATLSCRASQSVSSNLAWYQOKPGOQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSG- TEFTLTISSLOSEDFAVYYCQQYAAYPTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTII- HVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHS- DYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGON- QLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAY-
SEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMOQALPPR EIVMTOSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQOKPGOAPRLLIVGASTRA- | CAR ant-BCMA TGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLOSEDFAVYYCQQYAAYPTFGGGT- KVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQOVOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYT- FTSYYMHWVRQAPGOGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFOGRVTM- TRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARESWPMDVWGQGTTVTVS-
SAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVA- FIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSA- DAPAYQQGANQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKN- PQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH-
MOALPPR QLOLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRAPPGKGLE- CAR ant-BCMA WIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR- GRGYATSLAFDIWGOGTMVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVLTOSPATLS- LSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGOAPRLLIYDASNRATGIPAR- FSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQORHVWPPTFGGGT- KVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYS- LLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS- RVKFSRSADAPAY QOGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKN- PQEGLYNELOKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH-
MOALPPR 97 EIVLTOSPATLSLSPGERATLSCRASOSVSSYLAWYQOKPGOAPRLLIYDASN- CAR ant-BCMA RATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQORHVWPPTFGGGT- KVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGOLOLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIS- SSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSL- KLSSVTAADTAVYYCARGRGYATSLAFDIWGQGTMVTVSSAAALDNEKSNGTII- HVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHS- DYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGON- QLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAY-
SEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMOALPPR 98 EVOLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVROAPGKGLEWVSTIS- CAR ant-BCMA SSSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSQEHLI- FDYWGOGTLVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVLTOSPATLSLSPGERATLS- CRASQSVSRYLAWYQOKPGOAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISS- LEPEDFAVYYCQORFYYPWTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTII- HVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHS- DYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGON- QLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAY-
SEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMOALPPR EIVLTOSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGOAPRLLIYDASN- CAR ant-BCMA RATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQORFYYPWTFGGGT- KVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVAPGGSLRLSCAASGFT- FSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSTISSSSSTIY YADSVKGRFTISRDNAKNS- LYLOMNSLRAEDTAVYYCARGSQEHLIFDYWGOGTLVTVSSAAALDNEKSNGTII- HVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHS- DYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQN- QLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAY-
SEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMOQALPPR 100 QVALVESGGGVVAPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVA- CAR ant-BCMA VISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR- TDFWSGSPPGLDYWGQGTLVTVSSGSTSGSGKPEGSGEGSTKGDIALT- QSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASSLOSGVPS- RFSGSGSGTDFTLTISSLOPEDFATYYCQQIYTFPFTFGGGT- KVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYS- LLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS- RVKFSRSADAPAY QQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKN- PQEGLYNELOKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH-
MOALPPR 101 DIOLTASPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQOKPGKAPKLLIYGASS- CAR ant-BCMA LOSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLOPEDFATYYCQQIYTFPFTFGGGT- KVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVESGGGVVAQPGRSLRLSCAASGFT- FSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTIS-
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MOALPPR 102 QVALVASGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGOGLEWMGGIF CAR ant-BCMA PIFGTANYAQKFOGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTPEYSSS|- WHYYYGMDVWGOGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGDIVMTOSPDSLAVSL- GERATINCKSSOSVLYSSNNKNYLAWYQOKPGOPPKLLIYWASTRESGVP- DRFSGSGSGTDFTLTISSLOAEDVAVYYCQQFAHTPFTFGGGT- KVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYS- LLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS- RVKFSRSADAPAY QQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKN- PQEGLYNELOKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH-
MOALPPR 103 DIVMTOSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQOK- CAR ant-BCMA PGQPPKLLIVWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLOQAED- VAVYYCQQFAHTPFTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGOVAOLVOSGA- EVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGOGLEWMGGIIPIFGTANYAQK- FOGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTPEYSSSIWHYYYG- MDVWGOGTTVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSK- PFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPG- PTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQOGONOQLYNELNLGR- REEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELOKDKMAEAYSEIGMKGER-
RRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMOALPPR 104 QVALVESGGGVVAPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVA- CAR antr-BCMA VISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKG- PLOEPPYDYGMDVWGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVMT- QSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQOKPGOAPRLLIYSASTRATG|- PARFSGSGSGTEFTLTISSLOSEDFAVYYCQQHHVWPLTFGGGT- KVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYS- LLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS- RVKFSRSADAPAY QQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKN- PQEGLYNELOKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYOGLSTATKDTYDALH-
MOALPPR 105 EIVMTOSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYOOKPGOAPRLLIVSASTRA- | CAR antrBCMA TGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLOSEDFAVYYCQQHHVWPLTFGGGT- KVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQOVOLVESGGGVVOPGRSLRLSCAASGFT- FSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTIS- RDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKGPLQEPPYDYGMDVWGQGTTVTVS- SAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVA- FIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSA- DAPAYQQGANQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKN- PQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH-
MOALPPR 106 QSALTOPASVSASPGOSIAISCTGTSSDVGWYQQHPEGKAPKLMI- CAR ant-BCMA YEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGT- KLTVLESRGGGEGSCEGESCEGESLEMAEVAQLVOSGAEMKKPGASLKLSCKAS- GYTFIDYYVYWMRQAPGAGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSIS- TAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGOGTLVTVS- SAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSK- PFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPG- PTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQOGONOQLYNELNLGR- REEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELOKDKMAEAYSEIGMKGER-
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107 QSVLTAPPSVSGAPGORVTISCTGSSSNIGAGFDVHWYQOLPGTAPKLLIVGNSN- | CAR antr-BCMA RPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLOAEDEADYYCOSYDSSLSGYVFGTGT- KVTVLESRGGGESCEGESCEGESLEMAQVALVOSGAEVKKPGASVKVSCKAS- GYTFTDYYMHWVRQAPGARLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQDRI- TVTRDTSSNTGYMELTRLRSDDTAVYYCARSPYSGVLDKWGOGTLVTVS- SAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSK- PFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPG- PTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQONQLYNELNLGR- REEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELOKDKMAEAYSEIGMKGER-
RRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMOALPPR 108 SYELTOPPSASGTPGORVTMSCSGTSSNIGSHSVNWYOALPGTAPKLLIVTNN- CAR ant-BCMA QRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLOSEDEADYYCAAWDGSLNGLVFGGGT- KLTVLESRGGGESCEGEESCEGESLEMAEVQLVASGAEVKKPGES- LKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGHVTISA- DKSISTAYLOWSSLKASDTAMYYCARYSGSFDNWGOGTLVTVS- SAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSK- PFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPG- PTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQOGONOQLYNELNLGR- REEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELOKDKMAEAYSEIGMKGER-
RRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMOALPPR 109 LPVLTQPPSASGTPGORVTISCSGRSSNIGSNSVNWYRQLPGAAPKLLIYSNN- CAR ant-BCMA QORPPGVPVRFSGSKSGTSASLAISGLOSEDEATYYCATWDDNLNVHYVFGTGT- KVTVLESRGGGESCEGESCEGESLEMAQVALVASGAEVKKPGSSVKVSCKAS- GGTFSSYAISWVRQAPGAQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFOGRVTITAD- KSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYYSHDMWSEDWGQGTLVTVS- SAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSK- PFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPG- PTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQOGONQLYNELNLGR- REEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELOKDKMAEAYSEIGMKGER-
RRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMOALPPR 110 QAVLTOPPSASGTPGAORVTISCSGSSSNIGSNYVFWYQQLPGTAPKLLIYSNN- CAR ant-BCMA ORPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSASYVFGTGT- KVTVLESRGGGESCEGESCEGESLEMAQVALVOSGAEVKKPGSSVKVSCKAS- GGTFSSYAISWVRQAPGAQGLEWMGRIIPILETANYAQKFOGRVTITADES- TSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYGSYRWEDSWGOQGTLVTVS- SAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSK- PFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPG- PTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQOGONOQLYNELNLGR- REEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELOKDKMAEAYSEIGMKGER-
RRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMOALPPR m LPVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGRSSNIGSNSVNWYRQLPGAAPKLLIYSNN- CAR ant-BCMA QORPPGVPVRFSGSKSGTSASLAISGLOSEDEATYYCATWDDNLNVHYVFGTGT- KVTVLESRGGGEGSCEGESCGEGGSLEMAQVALVASGAEVKKPGSSVKVSCKAS- GGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFOGRVTITAD- KSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYYSHDMWSEDWGQGTLVTVSSAAAP- TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAG- TCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTOEEDGCSCRFPEEEEGG- CELRVKFSRSAEPPAYQQGQNAQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGK- PRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATK-
DTYDALHMQALPPR n2 SYELTOPPSASGTPGORVTMSCSGTSSNIGSHSVNWYQALPGTAPKLLIVTNN- CAR ant-BCMA QRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLOSEDEADYYCAAWDGSLNGLVFGGGT- KLTVLESRGGGESCGEESCEGESLEMAEVOLVOSGAEVKKPGES- LKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFOGHVTISA- DKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARYSGSFDNWGQGTLVTVSSAAAPTTTPA- PRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAG-
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DTYDALHMOALPPR 113 QAVLTAPPSASGTPGAORVTISCSGSSSNIGSNYVFWYQQLPGTAPKLLIVSNN- CAR ant-BCMA QORPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSASYVFGTGT- KVTVLESRGGGESCEGESCEGESLEMAQVALVOSGAEVKKPGSSVKVSCKAS- GGTFSSYAISWVRQAPGAQGLEWMGRIIPILGETANYAQKFOGRVTITADES- TSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYGSYRWEDSWGQGTLVTVSSAAAPTTTPA- PRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAG- TCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVOTTOEEDGCSCRFPEEEEGG- CELRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGK- PRRKNPQEGLYNELOKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATK-
DTYDALHMOALPPR 174 QSVLTAPPSVSGAPGORVTISCTGSSSNIGAGFDVHWYQOLPGTAPKLLIVGNSN- | CAR ant-BCMA RPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLOAEDEADYYCOSYDSSLSGYVFGTGT- KVTVLESRGGGESCEGESCEGESLEMAQVALVOSGAEVKKPGASVKVSCKAS- GYTFTDYYMHWVRQAPGARLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQDRI- TVTRDTSSNTGYMELTRLRSDDTAVYYCARSPYSGVLDKWGOGTLVTVSSAAAP- TTTPAPRPPTPAPTIASOPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAG- TCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTOEEDGCSCRFPEEEEGG- CELRVKFSRSAEPPAYQQGONQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGK- PRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATK-
DTYDALHMOALPPR QSALTOPASVSASPGOSIAISCTGTSSDVGWYQQHPEGKAPKLMI- CAR ant-BCMA YEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLOAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGT- KLTVLESRGGGESGGECESCGGESLEMAEVOLVOSGAEMKKPGASLKLSCKAS- GYTFIDYYVYWMRQAPGAOGLESMGWINPNSGGTNYAQKFOGRVTMTRDTSIS- TAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGOGTLVTVSSAAAPTTTPA- PRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAG- TCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVOQTTOEEDGCSCRFPEEEEGG- CELRVKFSRSAEPPAYQQGQNOQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGK- PRRKNPQEGLYNELOKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATK-
DTYDALHMOALPPR 116 DIVLTOSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIFWYQQKPGOPPTLLIQLASN- | CAR ant-BCMA VOTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLOSRTIPRTFGGGT- KLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGOIQLVOSGPELKKPGETVKISCKASGYT- FTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAY- LOINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSAAATTTPAPRPPTPAP- TIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLS- LVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVOTTAEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSR- SADAPAYQQGQNALYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKN- PQEGLYNELOKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH-
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MOALPPR 118 DIVLTOSPASLAVSLGERATINCRASESVSVIGAHLIFWYQQKPGQPPKLLIVLASN- | CAR ant-BCMA [O [imanrsscsmmassasmana |
KLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGOVOLVASGSELKKPGASVKVSCKASGYT- FTDYSINWVRQAPGQGLEWMGWINTETREPAYAYDFRGRFVFSLDTSVSTAY- LOISSLKAEDTAVYYCARDYSYAMDYWGQGTLVTVS- SAAADTGLYICKVELMYPPPYYLGIGNGTQIYVIDPEPCPDSDFLLWILAA- VSSGLFFYSFLLTAVSKRGRKKLLYIFKOPFMRPVQTTAQEEDGCSCRFPEEEEGG- CELRVKFSRSADAPAY QQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGK- PRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATK-
DTYDALHMOALPPR 119 DIVLTOSPASLAVSLGERATINCRASESVSVIGAHLIHWYQOKPGQPPKLLIVLASN- | CAR ant-BCMA LETGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLOAEDAAIYYCLOSRIFPRTFGAGT- KLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGOVOLVOSGSELKKPGASVKVSCKASGYT- FTDYSINWVRQAPGQGLEWMGWINTETREPAYAYDFRGRFVFSLDTSVSTAY- LOISSLKAEDTAVYYCARDYSYAMDYWGQGTLVTVSSAAAQIKESLRAELRVTER- RAEVPTAHPSPSPRPAGQFOTLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSKRGRK- KLLYIFKQPFMRPVOQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSA- DAPAYQQGAONQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKN- PQEGLYNELOKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH-
MOALPPR 120 EVOLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIROAPGKGLEWVSYIS- CAR ant-BCMA SSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLOMNSLRAEDTAVYYCAKVD- GDYTEDYWGQGTLVTVSSGGGESCEGESCGEGEGSASALTOPASVSGSPGOSI- TISCTGSSSDVGKYNLVSWYQQPPGKAPKLIIYDVNKRPSGVSNRFSGSKSGNTA- TLTISGLOGDDEADYYCSSYGGSRSYVFGTGTKVTVLESKYGPPCPPCPAPPVAG- PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTK- PREEQFOSTYRVVSVLTVLHODWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGOPRE- PQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGOPENNYKTTPPVL- DSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTOKSLSLSLGKM- FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKOPFMRPVQTTQEEDGCS- CRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQONQLYNELNLGRREEYDVLD- KRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELOKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHD-
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MKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMOALPPR 122 EVOLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYIS- CAR ant-BCMA SSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVY YCAKVDGPPSFDI- WGOGTMVTVSSGGEGSCGGESGGEGSSYVLTAPPSVSVAPGOTARITCGAN- NIGSKSVHWYQAKPGQAPMLVVYDDDDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGVEA- GDEADYFCHLWDRSRDHYVFGTGTKLTVLESKYGPPCPPCPAPPVAG- PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTK- PREEQFOSTYRVVSVLTVLHODWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQOPRE- PQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGOPENNYKTTPPVL- DSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTOKSLSLSLGKM- FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKOPFMRPVOQTTQEEDGCS- CRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLD- KRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHD-
E GRaGsToRERRRA 123 SYELTQOPPSASGTPGORVTMSCSGTSSNIGSHSVNWYQQLPGTAPKLLIYTNN- CAR anti-BCMA QORPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLOSEDEADYYCAAWDGSLNGLVFGGGT- KLTVLGESRGGGESCGGGESCGEGGESLEMAEVQLVOSGAEVKKPGES- LKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFOGHVTISA- DKSISTAYLOWSSLKASDTAMYYCARYSGSFDNWGOQOGTLVTVSSESKYG- PPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVOFNWYV- DGVEVHNAKTKPREEQFOSTYRVVSVLTVLHQODWLNGKEYKCKVSNKGLPS- SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN- GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQOEGNVFSCSVMHEALHNHYT- OKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFM- RPVOTTAQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGANAQLYNELNL- GRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIG-
MKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMOALPPR 124 QOSALTOPASVSASPGOSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMI- CAR anti-BCMA YEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLOAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGT- KLTVLGSRGGGESCEGESCEGESLEMAEVAQLVASGAEMKKPGASLKLSCKAS- GYTFIDYYVYWMRQAPGOGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSIS- TAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGOGTLVTVSSESKYG- PPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVOFNWYV- DGVEVHNAKTKPREEQFOSTYRVVSVLTVLHODWLNGKEYKCKVSNKGLPS- SIEKTISKAKGAPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN- GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYT- QOKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFM- RPVOTTAQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNAQLYNELNL- GRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELOKDKMAEAYSEIG-
MKGERRRGKGHDGLYOGLSTATKDTYDALHMOALPPR 125 OSALTOPASVSASPGOSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMI- CAR anti-BCMA YEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLOAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGT- KLTVLESRGGGESCEGESCEGESLEMAEVALVOAOSGAEMKKPGASLKLSCKAS- GYTFIDYYVYWMRQAPGOGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSIS- TAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSSESKYG- PPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVOFNWYV- DGVEVHNAKTKPREEQFOSTYRVVSVLTVLHODWLNGKEYKCKVSNKGLPS- SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN- GOPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYT- OKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNM- TPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAY QQGQNAQLYNELNL- GRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQOKDKMAEAYSEIG-
MKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMOALPPR 126 EVOLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSG|- CAR anti-BCMA VYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLOQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGES- DVWGOGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIQLTOSPSSLSAS- VGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQOKPGKAPKLLIYAASSLOSGVPSRFSGSGSG- TDFTLTISSLAPEDFATYYCQASYSTPYTFGOGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIAS- QPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLS- LVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVOTTAQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSR- SADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKN- PQOEGLYNELQOKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH-
MQALPPR 127 QVQLVESGGGLVOPGRSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLGWVSGIS- CAR anti-BCMA RSGENTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRDEDTAVYYCARSPAHYYGG- MDVWGOGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIVLTAOSPGTLSLSPGERATLS- CRASQOSISSSFLAWYQOKPGOAPRLLIYGASRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISR- LEPEDSAVYYCQQYHSSPSWTFGQGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLR- PEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIF-
KQPFMRPVOTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGON- QLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQOKDKMAEAY-
SEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMOALPPR 128 QVAOLVESGGGLVAPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGI- CAR ant-BCMA VYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGES- DVWGOGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIRLTOSPSPLSAS- VGDRVTITCQASEDINKFLNWYHQTPGKAPKLLIYDASTLOTGVPSRFSGSGSG- TDFTLTINSLOPEDIGTYYCQQYESLPLTFGGGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIAS- QPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLS- LVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVOTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSR- SADAPAYKQGONQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKN- PQEGLYNELOKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH-
MOALPPR 129 EVOLVESGGGLVOPGGESLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGT- CAR ant-BCMA VYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGES- DVWGOGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVLTOSPGTLSLSPGERATLS- CRASQSIGSSSLAWYQOKPGOAPRLLMYGASSRASGIPDRFSGSGSGTDFTLTIS- RLEPEDFAVYYCQQYAGSPPFTFGOGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLR- PEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIF- KQPFMRPVOTTAEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGON- QLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELOKDKMAEAY-
SEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMOALPPR 130 QIALVASGPDLKKPGETVKLSCKASGYTFTNFGMNWVKQAPGKGFKW- CAR ant-BCMA MAWINTYTGESYFADDFKGRFAFSVETSATTAYLOINNLKTEDTATYFCARGEIY- YGYDGGFAYWGQGTLVTVSAGGGGSGEGESCGEGESDVVMT- QSHRFMSTSVGDRVSITCRASQDVNTAVSWYQOKPGOSPKLLIFSASYRYTGVP- DRFTGSGSGADFTLTISSVOAEDLAVYYCAQQHYSTPWTFGGGTKLDIKTTTPA- PRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIY WAPLAG- TCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVOTTOEEDGCSCRFPEEEEGG- CELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGK- PRRKNPQEGLYNELOKDKMAEAYSEI!GMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATK-
DTYDALHMOALPPR 131 QIALVASGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTE- CAR ant-BCMA TREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAM- DYWGOGTSVTVSSGEGGESCEGESCEGESAIALVASGPELKKPGETVKISCKAS- GYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAY- LOINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGOGTSVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIAS- QPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLS- LVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSR- SADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKN- PQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH-
MOALPPR 132 QIALVASGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTE- CAR ant-BCMA TREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAM- DYWGOGTSVTVSSGGEGESCEGESCEGESDIVLTASPASLAMSLGKRATISCRA- SESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIVLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTID- PVEEDDVAIYSCLOSRIFPRTFGGGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLR- PEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIF- KQPFMRPVQTTAQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGON- QLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAY-
SEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMOALPPR 133 QIALVASGPELKKPGETVKISCKASGYTFRHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRIN- CAR ant-BCMA TESGVPIYADDFKGRFAFSVETSASTAYLVINNLKDEDTASYFCSNDYLYS- LDFWGOQGTALTVSSGGGGSCEGESCGEGESDIVLTASPPSLAMSLGKRATISCRA- SESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVATGVPARFSGSGSRTDFTLTID- PVEEDDVAVYYCLOSRTIPRTFGGGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLR-
PEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIF- KQPFMRPVOTTAEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGOQN- QLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELOKDKMAEAY-
SEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMOALPPR 134 QIQLVOSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTE- CAR anti-BCMA TGEPLYADDFKGRFAFSLETSASTAYLVINNLKNEDTATFFCSNDYLYS- CDYWGQOGTTLTVSSEGGESGEGESGEGESDIVLTASPPSLAMSLGKRATIS- CRASESVTILGSHLIYWYQQAKPGQPPTLLIOLASNVOTGVPARFSGSGSRTDFTL- TIDPVEEDDVAVYYCLOSRTIPRTFGGGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLR- PEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIF- KQPFMRPVOTTAEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGOQON- QLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQOKDKMAEAY-
SEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR 135 DIVLTOSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIHWYQQKPGOPPTLLIQLASN- CAR anti-BCMA VOTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLOSRTIPRTFGGGT- KLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGOIALVOSGPELKKPGETVKISCKASGYT- FTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAY- LOINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSFVPVFLPAKPTTTPA- PRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAG- TCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAP- PRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGONAQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRD- PEMGGKPRRKNPQEGLYNELOKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLS-
TATKDTYDALHMOALPPR 136 QVQLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQOAPGOGLEWM- CAR anti-BCMA GWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSINTAYMELSSLTSEDTAVYFCAS- LYDYDWYFDVWGOGTMVTVSSGGGGSGCGEGSGGGEGSDIVMTOTPLS- LSVTPGOPASISCKSSQOSLVHSNGNTYLHWYLOKPGOSPOQLLIYKVSNRFSGVP- DRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCSQOSSIYPWTFGOGTKLEIKGLAVSTISS- FFPPGYQIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKOPFMRPVQTTQEED- GCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQONQLYNELNLGRREEYDVLD- KRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHD-
GLYOGLSTATKDTYDALHMOALPPR 137 QVOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVROAPGOGLEWM- CAR anti-BCMA GWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSINTAYMELSSLTSEDTAVYFCAS- LYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGEGSCEGESDIVMTAOTPLS- LSVTPGQPASISCKSSQOSLVHSNGNTYLHWYLOKPGOSPOLLIYKVSNRFSGVP- DRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCSOSSIYPWTFGOGTKLEIKTTTPA- PRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIY IWAPLAG- TCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVOTTOEEDGCSCRFPEEEEGG- CELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGK- PRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEI/GMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATK-
DTYDALHMOALPPR 138 QVQLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQOAPGQOGLEWM- CAR anti-BCMA GWIFFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSINTAYMELSSLTSEDTAVYFCAS- LYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGEGGSCGEGESDIVMTATPLS- LSVTPGQPASISCKSSOSLVHSNGNTYLHWYLOKPGOSPOQLLIYKVSNRFSGVP- DRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCSQOSSIYPWTFGOGTKLEIKEPKSPD- KTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVK- FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL- PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN- GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQOGNVFSCSVMHEALHNHYT- OKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVOTT- QEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQONALYNELNLGR- REEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELOKDKMAEAYSEIGMKGER-
RRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR GWIFFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCAS- LYDYDWYFDVWGQOGTMVTVSSGGGGESGEEESCEGESDIVMTOTPLS- LSVTPGEPASISCKSSQOSLVHSNGNTYLHWYLOKPGOSPAQLLIYKVSNRFSGVP- DRFSGSGSGADFTLKISRVEAEDVGVYYCAETSHVPWTFGOGTKLEIKGLAVSTIS- SFFPPGYQIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVOTT- QEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQONAL YNELNLGR- REEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELOKDKMAEAYSEI/GMKGER-
RRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMOALPPR 140 QVQLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGOGLEWM- CAR anti-BCMA GWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCAS- LYDYDWYFDVWGOGTMVTVSSGGGGSGGGGSGEGESDIVMTOTPLS- LSVTPGEPASISCKSSOSLVHSNGNTYLHWYLOKPGOSPOQLLIYKVSNRFSGVP- DRFSGSGSGADFTLKISRVEAEDVGVYYCAETSHVPWTFGOGTKLEIKTTTPA- PRPPTPAPTIASQOPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIY IWAPLAG- TCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVOTTOEEDGCSCRFPEEEEGG- CELRVKFSRSADAPAYQQGQONQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGK- PRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEI/GMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATK-
DTYDALHMOALPPR 141 QVQLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGOGLEWM- CAR anti-BCMA GWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCAS- LYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGESGGEGSCEGGESDIVMTOTPLS- LSVTPGEPASISCKSSOSLVHSNGNTYLHWYLOKPGOSPOQLLIYKVSNRFSGVP- DRFSGSGSGADFTLKISRVEAEDVGVYYCAETSHVPWTFGQOGTKLEIKEPKSPD- KTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVK- FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL- PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN- GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQOQOGNVFSCSVMHEALHNHYT- OKSLSLSPGKIYWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVOTT- QEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNALYNELNLGR- REEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELOKDKMAEAYSEI/GMKGER-
RRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMOALPPR 145 EVOLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYIS- Anti-BCMA de SSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLOMNSLRAEDTAVYYCAKVD- cadeia pesada GDYTEDYWGQOGTLVTVSS variável (VH) 146 QOSALTOPASVSGSPGOSITISCTGSSSDVGKYN- Anti-BCMA de LVSWYQQPPGKAPKLIIYDVNKRPSGVSNRFSGSKSGNTATLTISGLOGDDE- Cadeia leve variável ADYYCSSYGGSRSYVFGTGTKVTVL (VL) 147 EVOLVOSGGGLVOQPGRSLRLSCTASGFTFGDYAMSWFRQAPGKGLEWVG- Anti-BCMA de FIRSKAYGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKSIAYLQOMNSLKTEDTAVYYCAAWSAP- cadeia pesada TDYWGOGTLVTVSS variável (VH) 148 DIQMTOSPAFLSASVGDRVTVTCRASQGISNYLAWYQQKPGNAPR- Anti-BCMA de LLIYSASTLASGVPSRFRGTGYGTEFSLTIDSLOPEDFATYYCQAOSYTSRATFGPG- Cadeia leve variável TRLDIK (VL) 149 EVOLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYIS- Anti-BCMA de SSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVDGPPSFDI- cadeia pesada WGOGTMVTVSS variável (VH) 150 SYVLTOPPSVSVAPGOTARITCGANNIGSKSVHWYQQK- Anti-BCMA de PGQOAPMLVVYDDDDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGVEAGDE- Cadeia leve variável ADYFCHLWDRSRDHYVFGTGTKLTVL (VL) 151 EVOLVOSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVROAPGOGLEWMGRIIPIL- Anti-BCMA de GIANYAQKFOGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYSK- cadeia pesada SIVSYMDYWGQGTLVTVSS variável (VH)
ORPSGVPDRFSVSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGYVFGTGT- cadeia leve variável | 2 dera EE TS | TS 153 MPLLLLLPLIWAGALA CD33 Signal
A 154 MALPVTALLLPLALLLHA peptídeo sinal de rc Es 155 atgettetectagigacaagecttetactetatgagitaccacacccageattectectgatecea sequência sinal de cadeia —GMCSFR alfa 156 MLLLVTSLLLCELPHPAFLUP sequência sinal de cadeia —GMCSFR alfa E Glu Val Val Val Lys Tyr GIy Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Articulação de 196 o e lee) 158 X1IPPX2P Articulação de IgG X1 é glicina, cisteína ou arginina Exemplar X2 é cisteina ou treonina 159 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Articulação de 196 2 ASA SO mes | 160 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Articulação de IgG
NM 161 ELKTPLGDTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPP Articulação de 19G [1 raro “SS Dun 162 Glu Ser Lys Tyr GIy Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Articulação de 196 se ae") 1763 Glu Ser Lys Tyr GIy Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Articulação de IgG o TAS | ees 164 Tyr GIy Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Articulação de 196 o ss Ses“) 165 Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Articulação de IgG
MMA 166 MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPRKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSIS- tEGFR GDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFEN- LEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWK- artificial KLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVS- RGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQOCHPECLPOQAMNITCTGRGPDN- CIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTG-
PGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFM Tr MLaVvAGACSQNEYFDSLLHACIPCOLRCSSNTPPLTCARYCNASVTNSVKGTNAGGGO- polipeptídeo de fusão SPKSSDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMIS- BCMA-Fo RTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK- TKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHODWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEK- TISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPEN-
NYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTOKSLSLSPGK
188 OSALTOPASVSASPGOSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMI- antrBCMA scFv YEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLOAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGT- KLTVLGSRGGGESCEGESCEGGESLEMAEVOLVOSGAEMKKPGASLKLSCKAS- GYTFIDYYVYWMROAPGOGLESMGWINPNSGGTNYAQKFOGRVTMTRDTSIS- ss

Claims (147)

REIVINDICAÇÕES
1. Método de tratamento, caracterizado pelo fato de que o método compreende: (a) administrar uma terapia celular a um indivíduo tendo uma doença ou distúrbio, a referida terapia celular que compreende uma dose de células imunes expressando um receptor recombinante; e (b) administrar ao indivíduo um composto da estrutura: Composto 1 r
F FE o is: RA vz Do AO o ê tm o
OM ou um estereoisômero do mesmo, ou um sal ou hidrato farmaceutica- mente aceitável de quaisquer dos precedentes.
2. Método de tratamento, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar uma terapia celular a um indivíduo tendo uma doença ou distúrbio, a referida terapia celular que compre- ende uma dose de células imunes expressando um receptor recombi- nante, em que, no momento do início da administração da terapia celu- lar, o indivíduo foi previamente administrado e/ou está em tratamento com um tendo a estrutura: Composto 1
F F. F o Tm
RA V co ÃO o z o oH ou um estereoisômero do mesmo, ou um sal ou hidrato farmaceutica-
mente aceitável de quaisquer dos precedentes.
3. Método de tratamento, caracterizado pelo fato de que o método compreende a administração a um indivíduo tendo uma doen- ça ou distúrbio de um tendo a estrutura: Composto 1 F 7 FE o is: Us: TO Do NR é * o E
OM ou um estereoisômero do mesmo, ou um sal ou hidrato farmaceutica- mente aceitável de quaisquer dos precedentes, em que, no momento do início da administração, o indiví- duo foi previamente administrado e/ou está em tratamento com uma terapia celular, a referida terapia celular que compreende uma dose de células imunes que expressam um receptor recombinante.
4. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 3, caracteri- zado pelo fato de que o início da administração do composto é prece- dente, simultaneamente ou subsequentemente ao início da adminis- tração da terapia celular.
5. Método, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o composto é administrado antes do início da admi- nistração da terapia celular.
6. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracteri- zado pelo fato de que o início da administração do composto ocorre dentro de, ou dentro de cerca de 1 hora, 2 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas ou 1 semana antes do início da administração da terapia celular.
7. Método, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o composto é administrado subsequentemente ao iní-
cio da administração da terapia celular.
8. Método de tratamento, caracterizado pelo fato de que o método compreende (a) administrar uma terapia celular a um indivíduo tendo uma doença ou distúrbio, a referida terapia celular que compreende uma dose de células imunes expressando um receptor recombinante; e (b) subsequentemente à administração em (a), administrar ao indivíduo um composto tendo a estrutura: Composto 1
F F. EF o FP
RA V Po gg o z o oH ou um estereoisômero do mesmo, ou um sal ou hidrato farmaceutica- mente aceitável de quaisquer dos precedentes.
9. Método de tratamento, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar um composto a um indivíduo tendo uma doença ou distúrbio, em que, no momento do início da adminis- tração, o indivíduo foi previamente administrado e/ou está em trata- mento com uma terapia celular, a referida terapia celular que compre- ende uma dose de células imunes, um receptor recombinante que ex- pressa, em que o composto é um composto que tem a estrutura: Composto 1
F F. EF o FP
RA V co ÃO o z o oH ou um estereoisômero do mesmo, ou um sal ou hidrato farmaceutica- mente aceitável de quaisquer dos precedentes.
10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 9, caracterizado pelo fato de que a terapia celular ou o recep- tor recombinante se liga especificamente a um antígeno alvo associa- do à doença ou distúrbio.
11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 10, caracterizado pelo fato de que a terapia celular ou o re- ceptor recombinante se liga especificamente a um antígeno alvo, em que o composto é capaz de inibir a clivagem do antígeno alvo e/ou em que o antígeno alvo é clivado por uma gama secretase.
12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 11, caracterizado pelo fato de que a terapia celular e/ou o re- ceptor recombinante se ligam especificamente a ou têm como alvo um BCMA.
13. Método, de acordo com a reivindicação 12, caracteriza- do pelo fato de que a terapia celular e/ou o receptor recombinante se liga ao BCMA expresso na superfície das células plasmáticas e/ou na superfície de células de mieloma múltiplo.
14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 11, caracterizado pelo fato de que a terapia celular e/ou o re- ceptor recombinante se ligam especificamente a um Muc1.
15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o receptor recombinante é um receptor de antígeno quimérico.
16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 15, caracterizado pelo fato de que o composto é capaz de inibir ou inibir uma atividade ou função de uma gama secretase.
17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 16, caracterizado pelo fato de que o composto, estereioisô-
mero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável inibe ou é capaz de inibir a clivagem da intramembrana de BCMA.
18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 17, caracterizado pelo fato de que o indivíduo compreende células plasmáticas ou células cancerígenas ou células de mieloma ou células que expressam marcadores de células plasmáticas, que ex- pressam BCMA de superfície.
19. Método, de acordo com a reivindicação 17 ou 18, carac- terizado pelo fato de que: o indivíduo tem um câncer em que as células cancerígenas no indivíduo (i) expressam CD138, CD38 de superfície ou um marca- dor de célula plasmática de superfície ou são derivadas de células plasmáticas e (ii) compreendem baixa expressão do antígeno de matu- ração de células B de superfície (BCMA) e/ou um nível de expressão do BCMA de superfície abaixo de um nível limiar; e/ou o método compreende ainda selecionar um indivíduo que tem um câncer em que as células cancerígenas no indivíduo (i) ex- pressam CD138, CD38 de superfície ou um marcador de célula plas- mática de superfície ou são derivadas de células plasmáticas e (ii) compreendem baixa expressão da antígeno de maturação de células B de superfície (BCMA) e/ou um nível de expressão do BCMA de su- perfície abaixo de um nível limiar.
20. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 19, caracterizado pelo fato de que o composto, estereoisôme- ro, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável é administrado por via oral, subcutânea ou intravenosa.
21. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 20, caracterizado pelo fato de que o composto, estereoisôme- ro, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável é administrado por via oral.
22. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 21, caracterizado pelo fato de que: o composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceutica- mente aceitável é administrado pelo menos ou é administrado seis ve- zes ao dia, cinco vezes ao dia, quatro vezes ao dia, três vezes ao dia, duas vezes ao dia, uma vez ao dia, a cada dois dias, três vezes por semana, pelo menos uma vez por semana, duas vezes por semana ou apenas uma vez; ou o composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceutica- mente aceitável é administrado seis vezes ao dia, cinco vezes ao dia, quatro vezes ao dia, três vezes ao dia, duas vezes ao dia, uma vez ao dia, a cada dois dias, três vezes por semana, duas vezes por semana, uma vez por semana, ou apenas uma vez durante o período de trata- mento do composto.
23. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 22, caracterizado pelo fato de que o composto, estereoisôme- ro, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável é administrado uma vez a cada dois dias, opcionalmente durante o período de tratamento do composto.
24. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 22, caracterizado pelo fato de que o composto, estereoisôme- ro, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável é administrado não mais que uma vez por dia, opcionalmente a duração do período de tra- tamento do composto.
25. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 22, caracterizado pelo fato de que o composto, estereoisôme- ro, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável é administrado uma vez três vezes por semana, opcionalmente pela duração do período de tra- tamento do composto.
26. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica-
ções 22 a 25, caracterizado pelo fato de que a administração é pela duração do período de tratamento do composto.
27. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 22 a 26, caracterizado pelo fato de que o período de tratamento do composto: é pelo menos ou pelo menos cerca de 14 dias; é pelo menos ou pelo menos cerca de 21 dias; ou é pelo menos ou pelo menos cerca de 28 dias.
28. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 27, caracterizado pelo fato de que o composto, estereoisôme- ro, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável é administrado, ou uma ou mais ou cada administração do composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável durante o período de tratamento do composto, independentemente, compreende a administração, em uma quantidade de 1,0 mg a 100 mg, 1,0 mg a 50 mg, 1,0 mg a 25 mg, 1,0 mg a 10 mg, 1,0 mg a 5,0 mg, 5,0 mg a 100 mg, 5,0 mg a 50 mg, 5,0 mg a 25 mg, 5,0 mg a 10 mg, 10 mg a 100 mg, 10 mg a 50 mg, 10 mg a 25 mg, 25 mg a 100 mg, 25 mg a 50 mg.
29. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 28, caracterizado pelo fato de que o composto, estereoisôme- ro, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável é administrado, ou um ou mais ou cada administração do composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável durante o período de tratamento do composto, independentemente, está em uma quantidade que é pe- lo menos ou pelo menos cerca de ou é ou é cerca de 0,5 mg, 1,0 mg, 2,5 mg, 5,0 mg, 10,0 mg, 25 mg, 50 mg, 100 mg, 250 mg ou 500 mg.
30. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 29, caracterizado pelo fato de que o composto, estereoisôme- ro, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável é administrado, ou uma ou mais ou cada administração do composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável durante o período de tratamento do composto, independentemente, está em uma quantidade que é pe- lo menos ou pelo menos cerca de ou é ou é cerca de 5,0 mg, 10,0 mg, mg, 16 mg, 17 mg, 18 mg, 19 mg, 20 mg, 21 mg, 22 mg, 23 mg, 24 mg, 25 mg, 50 mg ou 100 mg.
31. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 30, caracterizado pelo fato de que o composto, estereoisôme- ro, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável é administrado ou uma ou mais ou cada administrações do composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável durante o período de tratamento do composto, independentemente, está em uma quantidade que é pe- lo menos ou pelo menos cerca de ou é ou é cerca de 50 mg.
32. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 31, caracterizado pelo fato de que o composto, estereoisôme- ro, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável é administrado, ou uma ou mais ou cada administração do composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável durante o período de tratamento do composto, independentemente, em uma quantidade de ou cerca de 50 mg.
33. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 30, caracterizado pelo fato de que o composto, estereoisôme- ro, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável é administrado, ou uma ou mais ou cada administração do composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável durante o período de tratamento do composto, independentemente, está em uma quantidade que é pe- lo menos ou pelo menos cerca de ou é ou é cerca de 25 mg.
34. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 30 e 33, caracterizado pelo fato de que o composto, estereoi- sômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável é administrado, ou uma ou mais ou cada administração do composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável durante o tratamento do com- posto independentemente, a uma quantidade de ou cerca de 25 mg.
35. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 30, caracterizado pelo fato de que o composto, estereoisôme- ro, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável é administrado, ou uma ou mais ou cada administração do composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável durante o período de tratamento do composto, independentemente, em uma quantidade de ou cerca de 0,1 mg/kg de peso do indivíduo, 0,2 mg/kg de peso do indivíduo, 0,21 mg/kg de peso do indivíduo, 0,22 mg/kg de peso do indivíduo, 0,23 mg/kg de peso do indivíduo, 0,24 mg/kg de peso do indivíduo, 0,25 mg/kg de peso do indivíduo, 0,3 mg/kg de peso do indivíduo, 0,4 mg/kg de peso do indivíduo ou 0,5 mg/kg de peso do indivíduo.
36. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 35, caracterizado pelo fato de que a terapia celular e/ou o re- ceptor recombinante se ligam ou direcionam especificamente um antí- geno alvo associado à doença ou distúrbio e o composto inibe a cliva- gem do antígeno alvo e/ou inibe a eliminação do antígeno alvo.
37. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 36, caracterizado pelo fato de que a administração do estere- oisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável: diminui a clivagem ou eliminação de BCMA das células, op- cionalmente as células plasmáticas, no indivíduo, em mais do que ou mais do que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação ao nível de clivagem ou eli- minação de BCMA das células no indivíduo antes da administração do composto; diminui um nível ou quantidade de BCMA detectado no soro de um indivíduo em mais que ou mais que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação ao nível ou quantidade de BCMA no soro do indivíduo antes da adminis- tração do composto; e/ou aumenta a expressão do BCMA de superfície nas células, opcionalmente nas células plasmáticas, em mais que ou mais que cer- ca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação ao nível de BCMA de superfície nas células do indiví- duo antes da administração do composto.
38. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 36, caracterizado pelo fato de que a referida administração do composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitá- vel: resulta em uma diminuição, em um ponto de tempo subse- quente à referida administração, na clivagem ou eliminação de células de BCMA, opcionalmente células plasmáticas, opcionalmente células de mieloma múltiplo, no indivíduo, a referida diminuição estando em ou maior que ou maior que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, em comparação ao nível de clivagem ou elimi- nação de BCMA das células no indivíduo antes da administração do composto, opcionalmente em que o referido ponto de tempo é cerca de 24, 48, 36 ou 72 horas ou 1 semana subsequente ao início da refe- rida administração; resulta em uma diminuição, em um ponto de tempo subse- quente à referida administração, em um nível ou quantidade de BCMA detectado ou medido no soro do indivíduo em mais que ou mais que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação ao nível ou quantidade de BCMA no soro do in- divíduo antes da administração do composto, opcionalmente em que o referido ponto de tempo é de ou cerca de 24, 48, 36 ou 72 horas ou 1 semana após o início da referida administração; e/ou resulta em um aumento, em um ponto de tempo subse-
quente à referida administração, da expressão do BCMA de superfície em células, opcionalmente células plasmáticas, opcionalmente células de mieloma múltiplo, no indivíduo, em mais que ou mais que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação ao nível de BCMA de superfície nas células no indivíduo antes da administração do composto, opcionalmente em que o referido ponto de tempo está em ou cerca de 24, 48, 36 ou 72 horas, ou 1 se- mana após o início da referida administração.
39. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 38, caracterizado pelo fato de que a administração do com- posto: diminui a clivagem ou eliminação de um antígeno alvo es- pecificamente ligado à terapia celular e/ou receptor recombinante, op- cionalmente BCMA ou Muc1, das células, opcionalmente células plasmáticas, em mais que ou mais que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação ao nível de clivagem ou eliminação do alvo ou antígeno alvo das células no indiví- duo antes da administração do composto, estereoisômero, sal ou hi- drato farmaceuticamente aceitável; diminui o nível ou quantidade de um antígeno alvo ligado especificamente pela terapia celular e/ou receptor recombinante, opci- onalmente BCMA ou Muc1, detectado no soro de um indivíduo em mais que ou mais que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação ao nível ou quantidade do alvo ou antígeno alvo no soro do indivíduo antes da administração do composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitá- vel; e/ou aumenta a expressão da superfície de um antígeno alvo especificamente ligado à terapia celular e/ou receptor recombinante, opcionalmente BCMA ou Muc1, nas células, opcionalmente nas célu-
las plasmáticas, em mais que ou mais que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação ao nível do alvo de superfície ou antígeno alvo nas células no indivíduo antes da administração do composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável.
40. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 38, caracterizado pelo fato de que a administração do com- posto: resulta em uma diminuição, em um ponto de tempo subse- quente à referida administração, na clivagem ou eliminação de um an- tígeno alvo especificamente ligado à terapia celular e/ou receptor re- combinante, opcionalmente BCMA ou Muc1, das células, opcional- mente células plasmáticas, a referida diminuição estando em ou mais que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação ao nível de clivagem ou eliminação do alvo ou antígeno alvo das células no indivíduo antes da administração do composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitá- vel; resulta em uma diminuição, em um ponto de tempo subse- quente à referida administração, no nível ou quantidade de um antíge- no alvo especificamente ligado à terapia celular e/ou receptor recom- binante, opcionalmente BCMA ou Muc1, detectado no soro de um indi- víduo, referida diminuição estando em ou mais que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação ao nível ou quantidade do alvo ou antígeno alvo no soro do indivíduo antes da administração do composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável; e/ou resulta em um aumento, em um ponto de tempo subse- quente à referida administração, na expressão de superfície de um an- tígeno alvo especificamente ligado à terapia celular e/ou receptor re-
combinante, opcionalmente BCMA ou Muc1, nas células, opcional- mente células plasmáticas, o aumento estando em ou mais que ou mais que cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais em comparação ao nível do alvo de superfície ou antíge- no alvo nas células no indivíduo antes da administração do composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável.
41. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 40, caracterizado pelo fato de que a administração compre- ende a administração de um composto da estrutura: Composto 1 F. 7 F o ms Us TO
PENSO o = 4d E oH
42. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 41, caracterizado pelo fato de que a doença ou distúrbio é um câncer.
43. Método, de acordo com a reivindicação 42, caracteriza- do pelo fato de que o câncer é uma malignidade de células B.
44. Método, de acordo com a reivindicação 42 ou 43, carac- terizado pelo fato de que o câncer é mieloma múltiplo, plasmocitoma, um câncer de origem de células plasmáticas e/ou um câncer de ori- gem de células B.
45. Método, de acordo com a reivindicação 42 ou 44, carac- terizado pelo fato de que o câncer é um mieloma múltiplo.
46. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 42 a 45, caracterizado pelo fato de que o câncer é um câncer reincidente ou refratário, opcionalmente um mieloma múltiplo reindi- cente ou refratário ao tratamento.
47. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 46, caracterizado pelo fato de que o método compreende ainda, antes da referida administração da referida terapia celular, sele- cionar um indivíduo para a referida administração tendo um câncer que, ou as células das quais, (i) expressam CD138, CD38 de superfí- cie ou um marcador de célula plasmática de superfície ou são deriva- das de células plasmáticas e, opcionalmente, (ii) compreendem baixa expressão do antígeno de maturação de células B de superfície (BCMA) e/ou um nível de expressão do BCMA de superfície abaixo de um nível limiar.
48. Método, de acordo com a reivindicação 47, caracteriza- do pelo fato de que o indivíduo administrado com a referida terapia ce- lular e/ou o referido composto é o indivíduo selecionado.
49. Método, de acordo com a reivindicação 47 ou 48, carac- terizado pelo fato de que o nível limiar de expressão do BCMA de su- perfície é inferior à expressão média ou mediana ou nível do BCMA de superfície em células plasmáticas em uma pluralidade de indivíduos controle, opcionalmente em que a pluralidade de indivíduos controle é um grupo de indivíduos saudáveis ou normais.
50. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 47 a 49, caracterizado pelo fato de que; a baixa expressão do BCMA de superfície está presente quando menos que ou menos que cerca de 60%, menos que ou me- nos que cerca de 50%, menos que ou menos que cerca de 40%, me- nos que ou menos que cerca de 30%, menos que ou menos que cerca de 20% ou menos que ou menos que cerca de 10% das células plas- máticas, ou células com um marcador ou fenótipo plasmático ou célu- las cancerígenas, no indivíduo expressam o BCMA de superfície; o nível limiar de BCMA de superfície é menor que ou menor que cerca de 60%, menor que ou menor que cerca de 50%, menor que ou menor que cerca de 40%, menor que ou menor que cerca de 30%, menor que ou menor que cerca de 20% ou menor que ou menor que cerca de 10% das células plasmáticas, ou células com um marcador ou fenótipo plasmático ou as células cancerígenas, no indivíduo que expressa o BCMA de superfície.
51. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 47 a 50, caracterizado pelo fato de que a expressão do BCMA de superfície é determinada por citometria de fluxo e/ou um imunoensaio.
52. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 47 a 51, caracterizado pelo fato de que (a) a capacidade do do- mínio de ligação ao antígeno do receptor recombinante, opcionalmente receptor do antígeno quimérico, para se ligar ao BCMA expresso na superfície de uma célula alvo, ou (b) uma medida indicativa da função ou atividade do receptor recombinante, opcionalmente o receptor qui- mérico de antígeno, para células que expressam o BCMA de superfíi- cie, não é reduzida ou bloqueada ou não é substancialmente reduzida ou bloqueada na presença de uma concentração ou quantidade de uma forma solúvel ou de vertente do BCMA.
53. Método, de acordo com a reivindicação 52, caracteriza- do pelo fato de que a concentração ou quantidade é uma concentra- ção ou quantidade do BCMA solúvel ou de vertente capaz de bloquear ou reduzir ou substancialmente bloquear ou reduzir a ligação ou uma medida da função ou atividade associada a um receptor recombinante anti-BCMA de referência ou um domínio de ligação anti-BCMA de refe- rência, nas mesmas condições ou substancialmente nas mesmas con- dições, ou é uma concentração ou quantidade presente em uma amostra biológica.
54. Método, de acordo com a reivindicação 52, caracteriza- do pelo fato de que a concentração ou quantidade da forma solúvel ou de vertente do BCMA é uma concentração ou quantidade presente no soro ou sangue ou plasma do indivíduo ou de um paciente com mi- eloma múltiplo ou, em média, em uma população de paciente para a doença ou distúrbio.
55. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 15 a 54, caracterizado pelo fato de que o receptor de antígeno quimérico (CAR) compreende um domínio de reconhecimento de antí- geno extracelular que se liga especificamente ao antígeno e um domí- nio de sinalização intracelular que compreende um ITAM.
56. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 54, caracterizado pelo fato de que o receptor recombinante é um receptor de antígeno quimérico que compreende um domínio de ligação ao antígeno compreendendo: uma região Vx que compreende uma CDRH1, uma CDRH2 e uma CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 173, 174 e 175, respectivamente e uma região V. que com- preende uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 183, 184 e 185, respecti- vamente; uma região Vx4 que compreende uma CDRH1, uma CDRH2 e uma CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 176, 177 e 175, respectivamente e uma região V.L que com- preende uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 183, 184 e 185, respecti- vamente; uma região Vx4 que compreende uma CDRH1, uma CDRH2 e uma CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 178, 179 e 175, respectivamente e uma região Vi que com- preende uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 183, 184 e 185, respecti- vamente;
uma região Vx que compreende uma CDRH1, uma CDRH2 e uma CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 180, 181 e 182, respectivamente e uma região V.L que com- preende uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NOS: 186, 187 e 185, respecti- vamente; ou uma região Vu, a sequência mencionada em SEQ ID NO: 24 ou uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos em ou cerca de 90%, em ou cerca de 91%, em ou cerca de 92%, em ou cerca de 93%, em ou cerca de 94%, em ou cerca de 95%, em ou cerca de 96%, em ou cerca de 97%, em ou cerca de 98%, ou em ou cerca de 99% de identidade para SEQ ID NO: 24; e contém uma região V. que compre- ende a sequência mencionada em SEQ ID NO: 25 ou uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos ou cerca de 90%, em ou cerca de 91%, em ou cerca de 92%, em ou cerca de 93%, em ou cerca de 94%, em ou cerca de 95%, em ou cerca de 96%, em ou cerca de 97%, em ou cerca de 98%, ou em ou cerca de 99% de identidade para SEQ ID NO: 25; ou um scFv que compreende a sequência de aminoácidos mencionada em SEQ ID NO: 188 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90%, em ou cerca de 91%, em ou cerca de 92%, em ou cerca de 93%, em ou cerca de 94%, em ou cerca de 95%, em ou cerca de 96%, em ou cerca de 97%, em ou cerca de 98%, ou em ou cerca de 99% de identidade para SEQ ID NO: 188.
57. Método, de acordo com a reivindicação 56, caracteriza- do pelo fato de que o domínio de ligação ao antígeno ou o receptor de antígeno quimérico se liga especificamente ao BCMA.
58. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 55 a 57, caracterizado pelo fato de que o domínio de sinalização intracelular compreende e o domínio intracelular de uma cadeia CD3-
zeta (CD3C).
59. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 55 a 58, caracterizado pelo fato de que o receptor de antígeno quimérico (CAR) compreende ainda uma região de sinalização coesti- muladora.
60. Método, de acordo com a reivindicação 59, caracteriza- do pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora compreen- de um domínio de sinalização derivado de CD28 ou 4-1BB, opcional- mente CD28 humano ou 4-1BB humano.
61. Método, de acordo com a reivindicação 59 ou 60, carac- terizado pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora é um domínio derivado de 4-1BB, opcionalmente 4-1BB humano.
62. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 61, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é um humano.
63. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 62, caracterizado pelo fato de que o BCMA é BCMA humano ou o antígeno alvo é um antígeno humano.
64. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 63, caracterizado pelo fato de que as células imunes compre- endem células T ou células NK.
65. Método, de acordo com a reivindicação 64, caracteriza- do pelo fato de que a terapia celular é uma terapia de células T e a do- se de células imunes compreende células T.
66. Método, de acordo com a reivindicação 64 ou 65, carac- terizado pelo fato de que as células T são CD4+ e/ou CD8+.
67. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 64 a 66, caracterizado pelo fato de que as células T são células T primárias obtidas de um indivíduo.
68. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 67, caracterizado pelo fato de que a terapia celular compre-
ende células que são autólogas ao indivíduo.
69. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 68, caracterizado pelo fato de que a terapia celular compre- ende células que são alogênicas ao indivíduo.
70. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 69, caracterizado pelo fato de que a administração da terapia celular compreende a administração de ou de cerca de 1 x 10º a 5x 10º células de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), a terapia celular compreende a administração de ou de cerca de 1 x 10º a 1 x 108 células de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), de ou de cerca de 5 x 10º a 1 x 107 células de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononuclea- res de sangue periférico totais (PBMCs) ou de ou de cerca de 1 x 10º a 1 x 107 células de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), cada qual inclusive.
71. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 70, caracterizado pelo fato de que a administração da terapia celular compreende a administração de não mais do que 5 x 10º célu- las de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), não mais que 2,5 x 10º células de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), não mais que 1 x 10º células de expressão do receptor re- combinante totais, células T totais ou células mononucleares de san- gue periférico totais (PBMCs), não mais que 1 x 107 células de expres- são do receptor recombinante totais, células T totais ou células mono- nucleares de sangue periférico totais (PBMCs), não mais que 0,5 x 107 células de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), não mais que 1 x 10º células de expressão do receptor recombinante to- tais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), não mais do que 0,5 x 10º células de expressão do receptor recombinante totais, células T total ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs).
72. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 69, caracterizado pelo fato de que a administração da terapia celular compreende entre em ou cerca de 2,5 x 107 células T de ex- pressão de CAR e 1,2 x 10º células T de expressão de CAR, entre em ou cerca de 5,0 x 107 células T de expressão de CAR e 4,5 x 10º célu- las T de expressão de CAR, entre em ou cerca de 1,5 x 10º células T de expressão de CAR e 3,0 x 10º células T de expressão de CAR, ca- da qual inclusive.
73. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 69, caracterizado pelo fato de que a terapia celular compre- ende entre em ou cerca de 50 x 106 e 450 x 10º células de expressão do receptor recombinantes totais, células T totais ou células mononu- cleares de sangue periférico totais (PBMCs), entre em ou cerca de 150 x 1086 e 450 x 10º células de expressão do receptor recombinante to- tais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), entre em ou cerca de 250 x 10º e 450 x 10º células de expressão do receptor recombinante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs), entre em ou cer- ca de 350 x 10º e 450 x 10º células de expressão do receptor recombi- nante totais, células T totais ou células mononucleares de sangue peri- férico totais (PBMCs), cada qual inclusive.
74. Método de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 e 2 a 73, caracterizado pelo fato de que o início da administra-
ção do composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável está dentro ou dentro de cerca de 1 hora, 2 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 14 dias, 21 dias, 28 dias ou mais após o início da administração da terapia ce- lular.
75. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções | e 2 a 74, caracterizado pelo fato de que o composto, estereoi- sômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável é administrado em um momento em que: o número de células da terapia celular detectável no san- gue a partir do indivíduo é diminuído em comparação ao indivíduo em um ponto de tempo precedente após o início da administração das cé- lulas; o número de células da terapia celular detectável no san- gue é menor que ou menor que cerca de 1,5 vezes, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 50 vezes ou 100 vezes ou menor que o número de pico ou máximo das células da terapia celular detectável no sangue do indivíduo após o início da administração das células; e/ou em um momento após um nível de pico ou máximo das cé- lulas da terapia celular ser detectável no sangue do indivíduo, o núme- ro de células ou derivado das células detectáveis no sangue do indiví- duo é menor que 10%, menor que 5%, menor que 1% ou menor que 0,1% das células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs) no sangue do indivíduo.
76. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 e 3 a 75, caracterizado pelo fato de que o composto, estereoi- sômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável é administrado por um período de tratamento do composto de até 7 dias, 14 dias, 21 dias, 28 dias ou mais após o início da administração das células.
77. Método, de acordo com a reivindicação 27 ou 76, carac-
terizado pelo fato de que o estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuti- camente aceitável é administrado a cada três dias durante o período de tratamento do composto.
78. Método, de acordo com a reivindicação 27 ou 76, carac- terizado pelo fato de que o estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuti- camente aceitável é administrado três vezes por semana durante o período de tratamento do composto.
79. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 e 3 a 75, caracterizado pelo fato de que o composto, estereoi- sômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável é administrado nos dias 2, 4, 7, 9, 11, 14, 16 e 18 após o início da administração das células.
80. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 e 3 a 79, caracterizado pelo fato de que no momento ou ime- diatamente antes do início da administração do composto, estereoisô- mero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável, a doença ou condi- ção recidivou no indivíduo.
81. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 80, caracterizado pelo fato de que o método compreende ainda a administração de uma quimioterapia com linfodepleção antes da administração da terapia celular e/ou em que o indivíduo recebeu uma quimioterapia com linfodepleção antes da administração das célu- las.
82. Método, de acordo com a reivindicação 81, caracteriza- do pelo fato de que a quimioterapia com linfodepleção compreende a administração de fludarabina e/ou ciclofosfamida ao indivíduo.
83. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 82, caracterizado pelo fato de que o método compreende ainda a administração de um esteroide, opcionalmente em que o este- roide é administrado antes, simultaneamente e/ou subsequentemente ao início da administração do composto, estereoisômero, sal farma- ceuticamente aceitável ou hidrato, opcionalmente em que o esteroide é administrado durante o período de tratamento do composto.
84. Método, de acordo com a reivindicação 83, caracteriza- do pelo fato de que o esteroide é ou compreende dexametasona.
85. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 84, caracterizado pelo fato de que a terapia celular exibe ex- pansão e/ou persistência aumentada ou prolongada no indivíduo, em comparação a um método no qual a terapia celular é administrada ao indivíduo na ausência do composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável.
86. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 85, caracterizado pelo fato de que o método ainda previne, reduz ou melhora um ou mais sintomas ou resultados da doença ou distúrbio.
87. Combinação, caracterizada pelo fato de que compreen- de: (a) células imunes que expressam um receptor recombinan- te; e (b) um composto tendo a estrutura: Composto 1
F
FR F o ms Us TO Po O o z d om ou um estereoisômero do mesmo, ou um sal ou hidrato farmaceutica- mente aceitável de quaisquer dos precedentes.
88. Combinação, de acordo com a reivindicação 87, carac- terizada pelo fato de que o composto inibe ou reduz ou é capaz de ini-
bir ou reduzir a clivagem da intramembrana de BCMA.
89. Combinação, de acordo com a reivindicação 87 ou 88, caracterizada pelo fato de que o receptor recombinante e/ou terapia celular direciona ou se liga especificamente a um antígeno alvo asso- ciado à doença ou distúrbio.
90. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 87 a 89, caracterizada pelo fato de que o receptor de antígeno recombinante ou a terapia celular direciona ou se liga especificamente a um BCMA.
91. Combinação, de acordo com a reivindicação 90, carac- terizada pelo fato de que a terapia celular ou o receptor recombinante se liga especificamente ao BCMA expresso na superfície das células plasmáticas, opcionalmente células de mieloma múltiplo.
92. Combinação, de acordo com a reivindicação 91, carac- terizada pelo fato de que a ligação do receptor de antígeno recombi- nante ao BCMA de superfície ou uma medida indicativa da função ou atividade das células de expressão do receptor recombinante, opcio- nalmente as células de expressão de CAR, após a exposição a células que expressam o BCMA de superfície, não é reduzida ou bloqueada ou não é substancialmente reduzida ou bloqueada na presença de uma forma solúvel ou de vertente do BCMA, opcionalmente em uma concentração ou quantidade da forma solúvel ou de vertente do BCMA correspondente a uma concentração ou quantidade presente no soro Ou no sangue ou plasma do indivíduo ou de um paciente com mieloma múltiplo ou, em média, em uma população de pacientes para a doença ou distúrbio, ou em uma concentração ou quantidade do BCMA solúvel ou de vertente em que a ligação ou medida é reduzida ou bloqueada, ou é substancialmente reduzida ou bloqueada, para células que ex- pressam um receptor recombinante anti-BCMA de referência, opcio- nalmente, CAR anti-BCMA, no mesmo ensaio.
93. Combinação de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 87 a 92, caracterizada pelo fato de que o receptor recombinan- te é um receptor quimérico, que opcionalmente é um receptor de antí- geno quimérico (CAR).
94. Combinação, de acordo com a reivindicação 93, carac- terizada pelo fato de que o receptor recombinante é um receptor de antígeno quimérico (CAR) e o receptor de antígeno quimérico compre- ende um domínio de reconhecimento de antígeno extracelular que se liga especificamente ao antígeno e um domínio de sinalização intrace- lular que compreende um ITAM.
95. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 87 a 94, caracterizada pelo fato de que o receptor recombinan- te é um receptor de antígeno quimérico que compreende um domínio de ligação ao antígeno compreendendo: uma região Vx que compreende uma CDRH1, uma CDRH2 e uma CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 173, 174 e 175, respectivamente e uma região V. que com- preende uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 183, 184 e 185, respecti- vamente; uma região Vx4 que compreende uma CDRH1, uma CDRH2 e uma CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 176, 177 e 175, respectivamente e uma região V. que com- preende uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 183, 184 e 185, respecti- vamente; uma região Vx que compreende uma CDRH1, uma CDRH2 e uma CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 178, 179 e 175, respectivamente e uma região Vi que com- preende uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 183, 184 e 185, respecti- vamente; uma região Vx que compreende uma CDRH1, uma CDRH2 e uma CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 180, 181 e 182, respectivamente e uma região Vi que com- preende uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 186, 187 e 185, respecti- vamente; ou uma região Vn, a sequência mencionada em SEQ ID NO: 24 ou uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos cerca de 90%, ou cerca de 91%, ou cerca de 92%, ou cerca de 93%, ou cerca de 94%, em ou cerca de 95%, em ou cerca de 96%, em ou cerca de 97%, em ou cerca de 98%, ou em ou cerca de 99% de identidade para SEQ ID NO: 24; e contém uma região V. que compreende a sequência mencionada em SEQ ID NO: 25 ou uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos cerca de 90%, ou 91%, ou 92%, ou 93% ou 93%, ou cerca de 94%, em ou cerca de 95%, em ou cerca de 96%, em ou cer- ca de 97%, em ou cerca de 98%, ou em ou cerca de 99% de identida- de para SEQ ID NO: 25; ou um scFv que compreende a sequência de aminoácidos mencionada em SEQ ID NO: 188 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90%, em ou cerca de 91%, em ou cerca de 92%, em ou cerca de 93%, em ou cerca de 94%, em ou cerca de 95%, em ou cerca de 96%, em ou cerca de 97%, em ou cerca de 98%, ou em ou cerca de 99% de identidade para SEQ ID NO: 188.
96. Combinação, de acordo com a reivindicação 95, carac- terizada pelo fato de que o domínio de ligação ao antígeno ou o recep- tor de antígeno quimérico se liga especificamente ao BCMA.
97. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 94 a 96, caracterizada pelo fato de que o domínio de sinaliza-
ção intracelular compreende o domínio intracelular de uma cadeia CD3-zeta (CD37).
98. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 94 a 97, caracterizada pelo fato de que o receptor de antígeno quimérico (CAR) compreende ainda uma região de sinalização coesti- muladora.
99. Combinação, de acordo com a reivindicação 98, carac- terizada pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora com- preende um domínio de sinalização derivado de CD28 ou 4-1BB, opci- onalmente CD28 humano ou 4-1BB humano.
100. Combinação, de acordo com a reivindicação 98 ou 99, caracterizada pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora é um domínio derivado de 4-1BB, opcionalmente 4-1BB humano.
101. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 88 a 100, caracterizada pelo fato de que o BCMA é BCMA humano ou o antígeno alvo é um antígeno humano.
102. Combinação de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 87 a 101, caracterizada pelo fato de que as células imunes compreendem células T ou células NK.
103. Combinação, de acordo com a reivindicação 102, ca- racterizada pelo fato de que as células imunes compreendem células T.
104. Combinação, de acordo com a reivindicação 102 ou 103, caracterizada pelo fato de que as células T são CD4+ e/ou CD8+.
105. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 102 a 104, caracterizada pelo fato de que as células T são células T primárias obtidas de um indivíduo.
106. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 87 a 105, caracterizada pelo fato de que as células imunes são formuladas como uma composição farmacêutica para administra-
ção a um indivíduo, opcionalmente, em que as células são formuladas para administração em uma ou mais doses únicas para tratamento de uma doença ou condição.
107. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 87 a 106, caracterizada pelo fato de que o composto, estere- oisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável, formulado como uma composição farmacêutica para administração a um indivíduo, op- cionalmente, em que o composto é formulado para administração em uma ou mais doses únicas.
108. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 87 a 107, caracterizada pelo fato de que compreende o com- posto da estrutura: Composto 1
F F. F o ms
AAA Po O o z d oH
109. Kit, caracterizado pelo fato de que compreende a combinação como definida em qualquer uma das reivindicações 87 a 108 e instruções para administrar as células imunes e/ou para admi- nistrar o composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável a um indivíduo tendo uma doença ou distúrbio.
110. Kit, de acordo com a reivindicação 109, caracterizado pelo fato de que as instruções especificam a administração das células imunes e/ou a administração do composto, estereoisômero, sal ou hi- drato farmaceuticamente aceitável, de acordo com os métodos como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 86.
111. Kit, de acordo com a reivindicação 109 ou 110, carac- terizado pelo fato de que compreende ainda um reagente para detec-
tar a expressão do antígeno de maturação de células B (BCMA) na superfície de uma célula, e instruções para administrar o composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável a um indi- víduo com base nos resultados do uso do reagente para detectar BCMA na superfície das células de um câncer no indivíduo, opcional- mente em que as células cancerígenas expressam CD138, CD38 de superfície ou um marcador de célula plasmática de superfície ou são derivadas de células plasmáticas.
112. Kit, de acordo com a reivindicação 111, caracterizado pelo fato de que as instruções especificam a administração do com- posto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável ao indivíduo se as células compreenderem baixa expressão do BCMA de superfície e/ou um nível de expressão do BCMA de superfície abaixo de um nível limiar.
113. Kit, de acordo com a reivindicação 112, caracterizado pelo fato de que o nível limiar de expressão do BCMA de superfície é inferior à expressão média ou mediana ou nível do BCMA de superfí- cie em células plasmáticas em uma pluralidade de indivíduos controle, opcionalmente em que os indivíduos controle são um grupo de indiví- duos saudáveis ou normais.
114. Kit, de acordo com a reivindicação 112 ou 113, carac- terizado pelo fato de que; a baixa expressão do BCMA de superfície está presente quando menos que ou menos que cerca de 60%, menos que ou me- nos que cerca de 50%, menos que ou menos que cerca de 40%, me- nos que ou menos que cerca de 30%, menos que ou menos que cerca de 20% ou menos que ou menos que cerca de 10% das células plas- máticas, ou células com um marcador ou fenótipo plasmático ou célu- las cancerígenas, no indivíduo expressam o BCMA de superfície; ou o nível limiar de BCMA de superfície é menor que ou menor que cerca de 60%, menor que ou menor que cerca de 50%, menor que ou menor que cerca de 40%, menor que ou menor que cerca de 30%, menor que ou menor que cerca de 20% ou menor que ou menor que cerca de 10% das células plasmáticas, ou células com marcador ou fenótipo plasmático ou células cancerígenas, no indivíduo que expres- sa o BCMA de superfície.
115. Kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações 109 a 114, caracterizado pelo fato de que as instruções especificam a administração do composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceu- ticamente aceitável ou uma ou mais doses únicas do mesmo, a um indivíduo tendo uma doença ou distúrbio antes, simultaneamente com ou após o início da administração de uma dose das células imunes ao indivíduo.
116. Kit, de acordo com a reivindicação 115, caracterizado pelo fato de que as instruções especificam a administração do com- posto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável, ou uma ou mais doses únicas dos mesmos, a um indivíduo tendo uma doença ou distúrbio antes do início da administração de uma dose das células imunes ao indivíduo.
117. Kit, de acordo com a reivindicação 116, caracterizado pelo fato de que as instruções especificam a administração do com- posto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável dentro ou dentro de cerca de 1 hora, 2 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas ou 1 semana antes do início da administração da terapia celular.
118. Kit, de acordo com a reivindicação 115, caracterizado pelo fato de que as instruções especificam a administração do com- posto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável, ou uma ou mais doses únicas do mesmo, a um indivíduo tendo uma do- ença ou distúrbio após o início da administração de uma dose das cé-
lulas imunes ao indivíduo.
119. Kit, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) um tendo a estrutura: Composto 1 F. 7 “ao
RA VAZ
PE NSÕO o z 4d E oH ou um estereoisômero do mesmo, ou um sal ou hidrato farmaceutica- mente aceitável de quaisquer dos precedentes, opcionalmente em que o composto é formulado em uma ou mais doses únicas; e (b) instruções para administrar o composto a um indivíduo após o início da administração de uma terapia celular a um indivíduo, a terapia celular que compreende uma dose de células imunes expres- sando um receptor recombinante.
120. Kit, de acordo com a reivindicação 119, caracterizado pelo fato de que as instruções especificam a administração das células imunes e/ou a administração do composto, estereoisômero, sal ou hi- drato farmaceuticamente aceitável, de acordo com os métodos como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 86.
121. Kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 109 a 115 e 118 a 120, caracterizado pelo fato de que as instruções especificam o início da administração do composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável está dentro ou dentro de cerca de 1 hora, 2 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 14 dias, 21 dias, 28 dias ou mais após o início da administração da dose de células imunes.
122. Kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações 109 a 115 e 118 a 121, caracterizado pelo fato de que as instruções especificam a administração ou início da administração do composto em um momento em que: o número de células da terapia celular detectável no san- gue a partir do indivíduo é diminuído em comparação ao indivíduo em um ponto de tempo precedente após o início da administração das cé- lulas, opcionalmente em que o tempo precedente está dentro de 1, 2, 3 ou 4 semanas de inicio da referida terapia celular; o número de células da terapia celular detectável no san- gue é menor que ou menor que cerca de 1,5 vezes, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 50 vezes ou 100 vezes ou menor que o número de pico ou máximo das células da terapia celular detectável no sangue do indivíduo após o início da administração das células; e/ou em um momento após um nível de pico ou máximo das cé- lulas da terapia celular ser detectável no sangue do indivíduo, o núme- ro de células ou derivado das células detectáveis no sangue do indiví- duo é menor que 10%, menor que 5%, menor que 1% ou menor que 0,1% das células mononucleares de sangue periférico totais (PBMCs) no sangue do indivíduo.
123. Kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 109 a 115 e 118 a 122, caracterizado pelo fato de que as instruções especificam que o composto é para administração no momento em que a doença ou condição recidivou no indivíduo após o tratamento com a terapia celular, opcionalmente seguindo uma resposta objetiva e/ou o indivíduo é determinado ter progredido após o tratamento com a terapia celular e/ou uma redução ou perda do antígeno alvo ter sido observada no indivíduo após o tratamento com a terapia celular.
124. Kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações 119 a 123, caracterizado pelo fato de que o receptor de antígeno re- combinante se liga especificamente a um antígeno alvo associado à doença ou distúrbio.
125. Kit, de acordo com a reivindicação 124, caracterizado pelo fato de que o antígeno alvo é Muc1, opcionalmente Muc1i huma- no.
126. Kit, de acordo com a reivindicação 124, caracterizado pelo fato de que o antígeno alvo é BCMA, opcionalmente BCMA hu- mano.
127. Kit, de acordo com a reivindicação 126, caracterizado pelo fato de que a ligação do receptor recombinante ao BCMA de su- perfície ou uma medida indicativa da função ou atividade das células de expressão de receptores recombinantes, opcionalmente as células de expressão de CAR, após a exposição a células que expressam o BCMA de superfície, não é reduzida ou bloqueada ou não é substan- cialmente reduzida ou bloqueada na presença de uma forma solúvel ou de vertente do BCMA, opcionalmente em uma concentração ou quantidade da forma solúvel ou de vertente do BCMA correspondente a uma concentração ou quantidade presente no soro ou sangue ou plasma do indivíduo ou de um paciente com mieloma múltiplo ou, em média, em uma população de pacientes para a doença ou distúrbio, ou em uma concentração ou quantidade do BCMA solúvel ou de vertente em que a ligação ou medida é reduzida ou bloqueada, ou substanci- almente reduzida ou bloqueada, para células que expressam um re- ceptor recombinante anti-BCMA de referência, opcionalmente, CAR anti-BCMA, no mesmo ensaio.
128. Kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações 109 a 127, caracterizado pelo fato de que o receptor recombinante é um receptor quimérico, que opcionalmente é um receptor de antígeno quimérico (CAR).
129. Kit, de acordo com a reivindicação 128, caracterizado pelo fato de que o receptor de antígeno quimérico (CAR) compreende um domínio de reconhecimento de antígeno extracelular que se liga especificamente ao antígeno e um domínio de sinalização intracelular que compreende um ITAM.
130. Kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações 109 a 129, caracterizado pelo fato de que o receptor recombinante é um receptor de antígeno quimérico que compreende um domínio de ligação ao antígeno compreendendo: uma região Vx4 que compreende uma CDRH1, uma CDRH2 e uma CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 173, 174 e 175, respectivamente e uma região V. que com- preende uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 183, 184 e 185, respecti- vamente; uma região Vx que compreende uma CDRH1, uma CDRH2 e uma CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 176, 177 e 175, respectivamente e uma região V. que com- preende uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 183, 184 e 185, respecti- vamente; uma região Vx4 que compreende uma CDRH1, uma CDRH2 e uma CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 178, 179 e 175, respectivamente e uma região V.L que com- preende uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 183, 184 e 185, respecti- vamente; uma região Vx4 que compreende uma CDRH1, uma CDRH2 e uma CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 180, 181 e 182, respectivamente e uma região Vi que com- preende uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 186, 187 e 185, respecti- vamente; ou uma região Vn, a sequência mencionada em SEQ ID NO: 24 ou uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos em ou cerca de 90%, em ou cerca de 91%, em ou cerca de 92%, em ou cerca de 93%, em ou cerca de 94%, em ou cerca de 95%, em ou cerca de 96%, em ou cerca de 97%, em ou cerca de 98%, ou em ou cerca de 99% de identidade para SEQ ID NO: 24; e contém uma região V. que compre- ende a sequência mencionada em SEQ ID NO: 25 ou uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos em ou cerca de 90%, em ou cerca de 91%, em ou cerca de 92%, em ou cerca de 93%, em ou cerca de 94%, em ou cerca de 95%, em ou cerca de 96%, em ou cerca de 97%, em ou cerca de 98%, ou em ou cerca de 99% de identidade para SEQ ID NO: 25; ou um scFv que compreende a sequência de aminoácidos mencionada em SEQ ID NO: 188 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90%, em ou cerca de 91%, em ou cerca de 92%, em ou cerca de 93%, em ou cerca de 94%, em ou cerca de 95%, em ou cerca de 96%, em ou cerca de 97%, em ou cerca de 98%, ou em ou cerca de 99% de identidade para SEQ ID NO: 188.
131. Combinação, de acordo com a reivindicação 130, ca- racterizada pelo fato de que o domínio de ligação ao antígeno ou o re- ceptor de antígeno quimérico se liga especificamente ao BCMA.
132. Kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações 129 a 131, caracterizado pelo fato de que o domínio de sinalização intracelular compreende um domínio intracelular de uma cadeia CD3- zeta (CD3C).
133. Kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações 129 a 132, caracterizado pelo fato de que o receptor de antígeno qui- mérico (CAR) compreende ainda uma região de sinalização coestimu- ladora.
134. Kit, de acordo com a reivindicação 133, caracterizado pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora compreende um domínio de sinalização derivado de CD28 ou 4-1BB, opcionalmen- te CD28 humano ou 4-1BB humano.
135. Kit, de acordo com a reivindicação 133 ou 134, carac- terizado pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora é um domínio derivado de 4-1BB, opcionalmente 4-1BB humano.
136. Kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações 109 a 135, caracterizado pelo fato de que as células imunes compre- endem células T ou células NK.
137. Kit, de acordo com a reivindicação 136, caracterizado pelo fato de que as células imunes compreendem células T.
138. Kit, de acordo com a reivindicação 136 ou 137, carac- terizado pelo fato de que as células T são CD4+ e/ou CD8+.
139. Kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações 136 a 138, caracterizado pelo fato de que as células T são células T primárias obtidas de um indivíduo.
140. Artigo de fabricação, caracterizado pelo fato de que compreende a combinação ou kit como definidos em qualquer uma das reivindicações 87 a 139.
141. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 86, ou a combinação ou kit como definidos em qualquer uma das reivindicações 87 a 139, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é um câncer, opcionalmente um mieloma múltiplo e admi- nistração da terapia celular e do composto, estereoisômero, sal ou hi- drato farmaceuticamente aceitável resulta em uma diminuição no vo- lume tumoral, no crescimento tumoral ou na carga tumoral, ou um au- mento na sobrevivência ou sobrevivência livre de progressão ou resul- ta em uma resposta objetiva ou resposta completa no indivíduo.
142. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 86, ou a combinação ou kit como definidos em qualquer uma das reivindicações 87 a 139, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é um câncer, opcionalmente um mieloma múltiplo, e o método resulta em uma diminuição no volume tumoral, crescimento tumoral, carga tumoral ou um aumento na sobrevivência, sobrevivên- cia livre de progressão, taxa de resposta objetiva, resposta durável ou taxa de resposta completa, em uma coorte de indivíduos, em que a referida diminuição ou aumento é maior que um aumento ou diminui- ção resultante da administração a indivíduos na coorte da terapia celu- lar ou do composto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável sozinho.
143. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 86, ou a combinação ou kit como definidos em qualquer uma das reivindicações 87 a 139, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é um câncer, opcionalmente um mieloma múltiplo e, em uma coorte de indivíduos, o método resulta em uma diminuição, em comparação com a administração da terapia celular sozinha, no volu- me tumoral, no crescimento tumoral ou na carga tumoral, ou em um aumento em comparação à administração da terapia celular sozinha, na sobrevivência ou sobrevivência livre de progressão ou taxa de res- posta objetiva ou taxa de resposta completa ou medida indicativa da atividade ou função da terapia celular.
144. Método de acordo com a reivindicação 143, caracteri- zado pelo fato de que a diminuição é maior que uma diminuição no volume tumoral, no crescimento tumoral ou na carga tumoral após a administração a indivíduos na coorte do composto sozinho, em compa- ração a nenhum tratamento, ou em que o aumento é maior que um aumento na sobrevivência ou sobrevivência livre de progressão ou ta- xa de resposta objetiva ou taxa de resposta completa após a adminis- tração a indivíduos na coorte do composto isoladamente, em compa- ração a nenhum tratamento.
145. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 86, ou a combinação ou kit como definidos em qualquer uma das reivindicações 87 a 139, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é um câncer, opcionalmente um mieloma múltiplo e, em uma coorte de indivíduos, o método resulta em um aumento na ex- pressão da superfície do BCMA no câncer ou nas células canceríge- nas, em comparação à administração da terapia celular sozinha.
146. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 86, ou a combinação ou kit como definidos em qualquer uma das reivindicações 87 a 139, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é um câncer, opcionalmente um mieloma múltiplo e, em uma coorte de indivíduos, o método resulta em uma diminuição nos níveis séricos de BCMA, em comparação à administração da terapia celular isoladamente em indivíduos da coorte e/ou em comparação à administração do composto isoladamente em indivíduos da coorte.
147. Método, de acordo com a reivindicação 146, caracteri- zado pelo fato de que a diminuição em comparação à administração da terapia celular sozinha é maior que uma diminuição nos níveis séri- cos de BCMA em indivíduos da coorte após a administração do com- posto, estereoisômero, sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável so- zinho, em comparação a nenhum tratamento.
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