TWI543988B - 結合於細胞凋亡抑制蛋白（ｉａｐ）之桿狀病毒ｉａｐ重複序列（ｂｉｒ）區域之化合物 - Google Patents

Description

結合於細胞凋亡抑制蛋白(IAP)之桿狀病毒IAP重複序列(BIR)區域之 化合物 相互參照的相關申請案

本申請人藉此主張先前於2006年3月16日所提出的美國暫時性專利申請案案號60/782,523，及於2006年12月26日所提出的60/876,994之利益，此些文獻其全部內容藉此以參考方式併入本文。

發明領域

本發明係關於一種黏結至IAP BIR區域的橋接化合物，其可有用地用來治療增殖性疾病及失調性細胞凋亡病症(諸如，癌症)。

發明背景

在多細胞生物中，典型會在正常成長及維持健康的組織中發生細胞凋亡(或計劃性細胞死亡)。其為一種複雜的過程，其可在缺乏發炎或壞死跡象下對已受損傷、生病或發展過度的細胞產生移除作用。

內因性細胞凋亡途徑已熟知為失調，最特別的是在癌症及淋巴增生症候群和自體免疫性疾病(諸如，多發性硬化)中、在神經變性疾病中及在發炎中。同樣地，已在病 毒及細菌感染之發展或維持中描述出宿主細胞凋亡反應之改變。

凋亡蛋白酶(caspases)為一來自已熟知可起始及執行細胞凋亡之半胱胺酸蛋白酶種類的蛋白代謝酵素家族。在正常細胞中，該凋亡蛋白酶會以非活性的酵素原存在，其可在外部訊號產生後(例如，產生自由死亡受體活化所驅動的配體(諸如，細胞素或免疫藥劑)、或藉由在基因毒性、化學毒性或輻射所引發的細胞損傷後之粒腺體因子(諸如，細胞色素C)釋放等那些)催化性地活化。細胞凋亡蛋白質抑制劑(IAP)構成一蛋白質家族，其能黏結及抑制該凋亡蛋白酶，因此可抑制細胞凋亡。因為其在調節凋亡蛋白酶活性中的中心角色，IAPs能抑制來自廣泛多種觸發(其包括內環境穩定或內生性細胞生長控制機制喪失，和化學療法的藥物及輻射)之計劃性細胞死亡。

IAPs包括一至三個熟知為桿狀病毒IAP重覆(BIR)區域的同源結構區域。它們亦可在C終端處包括一環鋅指狀(RING zin finger)區域，其具有可誘導IAP黏結分子經由其E3接合酶(ligase)功能來泛素化(ubiquitinylation)的能力。人類IAPs、XIAP、HIAP1(亦指為cIAP2)及HIAP2(cIAP1)每種皆具有三個BIR區域及一個羧基末端環鋅指狀區域。另一種IAP(NAIP)具有三個BIR區域(BIR1、BIR2及BIR3)，但是其無環區域；然而生活蛋白質(livin)、TsIAP及MLIAP具有單一BIR區域及一環區域。細胞凋亡之連結X染色體的抑制劑(XIAP)為一可藉由直接黏結來抑制起始子凋亡蛋白酶(已 熟知為凋亡蛋白酶-9)及受動器凋亡蛋白酶(凋亡蛋白酶-3及凋亡蛋白酶-7)之IAP實例。其亦可經由泛素化(ubiquitylation)調節的蛋白酶體(proteasome)途徑，經由環鋅指狀區域的E3接合酶活性來引發凋亡蛋白酶之移除。經由該BIR3區域，XIAP會黏結及抑制該凋亡蛋白酶-9。XIAP的連結子-BIR2區域可抑制凋亡蛋白酶-3及-7之活性。該BIR區域亦與IAPs和腫瘤壞死因子-受體相關因子(TRAF)-1及-2的交互作用有關，且會結合至TAB1(如為經由NFκB活化來達成存活信號之轉接子蛋白質)。因此，IAP在細胞凋亡連鎖反應上的作用為直接制動劑，其藉由防止凋亡蛋白酶作用或抑制其活性且藉由再指揮細胞發出信號至促存活模式來作用。

在癌症領域上的發展已於癌生物學中導致一新的範例，其中瘤形成可視為癌細胞執行正常的細胞凋亡途徑失敗。正常細胞可經由不同的細胞內及細胞外因素從其環境中接受連續回饋，且若從此背景中移除此回饋的話，其將“自殺”。可藉由凋亡蛋白酶連鎖反應之活化來達成誘導此細胞凋亡。但是，癌細胞可獲得能克服或繞過此細胞凋亡調節及繼續不適當地增生之能力。多數對癌症的治療會在癌標的細胞中引發至少一部分之細胞凋亡反應，而造成緩解或腫瘤開始消退。但是，在許多實例中，可抗細胞凋亡的剩餘細胞能逃脫治療及繼續致癌基因/基因改變之過程，而導致顯露出能克服吾人之有效治療疾病的能力之高抗藥性轉移性疾病。再者，大部分的癌療法(包括輻射療 法及傳統的化學療法)會在癌細胞中引發細胞凋亡，但是由於其缺乏獨自在癌細胞中引發細胞凋亡之特異性，其會造成額外的細胞損傷。對改良使用來治療癌症及更確切地其它增殖性疾病之促細胞凋亡藥劑的特異性/效力之需求很重要，因為其可在減少與給藥這些藥劑相關之副作用上受惠。因此，找出一種新穎能在癌細胞中引發細胞凋亡的方法為高度想要之醫學需求，其答案提供了全新的癌症治療之可能性。

主體生長的資料顯示出癌細胞可藉由持續地過度表現出一或多個IAP家族蛋白質成員來避免細胞凋亡(如已在許多原發性腫瘤活體組織切片樣品中和大部分已建立的癌細胞株上提出文件証明)。流行病學研究已闡明多種IAP的過度表現性與差的臨床預後及存活有關。對XIAP來說，此已在多種癌症(如白血病及卵巢癌)中証明。已經在多種惡性腫瘤中觀察到HIAP1及HIAP2(其產生自時常發生的11q21-q23區域之染色體放大作用)的過度表現性(包括二者)，該惡性腫瘤包括神經管胚細胞瘤、腎細胞癌、神經膠母細胞瘤及胃癌。(X)IAP負調節分子(諸如，XAF)似乎為腫瘤抑制劑(其在臨床癌症中很常喪失)。因此，藉由其可抑制細胞凋亡之內因性中介物(凋亡蛋白酶)的活化及執行之能力，IAP可直接促成腫瘤發展及抵抗醫藥干預。本發明之目標為使用有效力可黏結至特定的IAP區域之小分子來在癌細胞中誘導細胞凋亡。

吾人及其他人已闡明出影響IAP之抗凋亡功能的 各別BIR區域之關鍵重要性。吾人已建議可黏結至各別BIR區域之IAP拮抗劑將中斷IAP的抗凋亡功能。更確切來說，各別的BIR各別提供作為凋亡蛋白酶3、7及9之N端Ser-Gly-Val-Asp、Ser-Gly-Pro-Ile及Ala-Thre-Pro-Ile殘基的關鍵黏結位置，且此黏結為IAP之凋亡蛋白酶抑制劑功能的必需。N端AxPy四胜肽殘基黏結至XIAP可造成活性凋亡蛋白酶3、7及9之釋放。在其它IAP的實例(諸如，c-IAP1及c-IAP2)中，BIR之功能(當鍵結配體時)似乎可將IAP之泛素接合酶環功能的活化導向鍵結標的或各別的IAP其本身，以使得蛋白酶體喪失。在任一實例中，該IAP之小分子拮抗劑應該為優良的促細胞凋亡藥劑，其有可能使用在癌症、多種增殖性疾病及發炎中。

哺乳動物粒腺體蛋白質(換句話說，可拮抗IAP功能的凋亡蛋白酶之第二粒腺體衍生出的激活劑(SMAC))主要經由AxPy胺基末端四胜肽黏結至在各別IAP上的BIR 3或2位置。四種可拮抗果蠅(Drosophila)IAP來抑制凋亡蛋白酶的能力之果蠅死亡引發蛋白質(Reaper、HID、Grim及Sickle)亦可經由一短AxPy胺基末端四胜肽(一可置入該BIR黏結袋中及中斷IAP凋亡蛋白酶交互作用的序列)來黏結類似的果蠅IAP之BIR區域。

各別的BIR區域之全部拓撲形態可高度保存在人類IAP間及在人類IAP的各別BIR區域(每個BIR皆為一鋅指狀多胜肽區域)間，而藉由二個半胱胺酸及一個組胺酸殘基鎖在一配位的Zn原子中。XIAP BIR2及BIR3的X射線結晶 結構顯露出在每個BIR區域的表面上有一用於AxPy主題結構(motif)之關鍵性黏結袋。已在插進的胺基酸序列上(其可於BIR2及BIR3二者中形成黏結袋及溝紋)有所變化。同樣地，吾人已描述出在其它IAPs cIAP1及cIAP2的BIR中之同源區域。此開啟了可獲得多種天然及合成將在每個BIR區域間對每個IAP具有不同特異性及黏結親和力的黏結化合物之可能性。識別出此些化合物將影響IAP在癌細胞中的生物學功能(對正常細胞)之方法為發現出新機制藥劑，以便治療癌及其它已觀察到IAP功能失調之增殖性疾病的主要新挑戰。吾人已發現某些種類的BIR黏結化合物可以出乎意料的選擇性及效力來黏結至IAP BIRs，而對某些結構種類產生出明顯的治療優點，此可潛在產生IAP功能喪失或細胞IAP蛋白質喪失或二者。

已描述出一些胜肽AxPy似的及經雜環改質的AxPy胜肽化合物，其可藉由據報導般黏結至XIAP BIR3來活化細胞凋亡蛋白酶3。近來的回顧可參見愛爾莫(Elmore)等人，藥用化學年刊報導(Annual Reports in Medicinal Chemistry)，40(2006)245-262；孫(Sun)等人，Bioorg.Med.Chem.Let.15(2005)793-797；歐斯特(Oost)等人，J.Med.Chem.，2004，47(18)，4417-4426；帕克(Park)等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.15(2005)771-775；富蘭克林(Franklin)等人，生物化學，第42冊，第27號，2003，8223-8231；奇普(Kip)等人，生物化學2002，41，7344-7349；吳(Wu)等人，化學及生物學，第10冊，759-767(2003)；葛洛弗(Glover) 等人，分析生物化學，320(2003)157-169；美國已公告的專利申請案案號20020177557；及美國已公告的專利申請案案號20040180828；美國已公告的專利申請案案號US2006/0025347A1；美國已公告的專利申請案案號US2005/0197403A1；及美國已公告的專利申請案案號US2006/0194741A1。

前述化合物已顯示出可經由以經螢光性標定的探針取代，來將XIAP之經隔離出的BIR3區域做為標的，且它們似乎會在低微莫耳濃度-奈莫耳濃度範圍內有效力地在癌細胞株之選擇組中引發細胞凋亡事件。這些化合物顯示出差的活體內活性(此很可能由於受限的生物效性)，因此具有受限的治療應用。

因此，IAP BIR區域代表一可發現及發展出新穎的治療藥物之具吸引力的目標，特別是對可用來治療增殖性疾病(諸如，癌)之藥物。

發明概要

本發明家先前已揭示出一系列可在多種癌細胞株中黏結至IAP的BIR單元及引發細胞凋亡之化合物(美國公告專利申請案案號20060264379)。這些化合物的特徵為存在有一中心吡咯啶單元。現在，吾人於本文中揭示出經由一經取代的吡咯啶來連結(且其具有較佳的位置、定向及化學本質)二個BIR黏結單元可提供一種新穎且明顯優良的化合物種類，其在對抗多種癌細胞株以產生誘導細胞凋亡 之效力上增加超過相符合的非橋接BIR黏結化合物最高1000倍，且這些化合物顯示出具有用來治療人類癌症必需的效力、穩定性及醫藥性質。可有利地選擇該橋接基團之化學本質，以便在數種人類癌症的活體內異種移植模型中，於抑制及/或阻止IAP上造成高內因性(次奈莫耳濃度)細胞效力轉變成微克/公斤效力。再者，所描述的化合物在哺乳動物組織及流體之範圍內具有醫藥上可接受的穩定性，且具有可保証能使用於不同給藥途徑、合適於臨床用途而具有適當的溶解度及生物效性之醫藥性質。此給藥可在哺乳動物中產生持續的活體內效應，此如可在正常及腫瘤組織中測量出。

在本發明的一個具體實施例中，已提供一種由式I或II所表示之化合物的異構物、鏡像物、非鏡像異構物或互變體：

其中m為0、1或2；Y為NH、O或S；BG為1)-X-L-X¹-；X及X¹各自獨立地選自於下列：1)O，2)NR¹³，3)S，4)-C₁-C₆烷基-，5)-C₁-C₆烷基-O-，6)-C₁-C₆烷基-NR¹³-，7)-C₁-C₆烷基-S-，8)9) 10)11)12)13)14)，或15)

L選自於下列：1)-C1-C20烷基-，2)-C2-C6烯基-，3)-C2-C4炔基-4)-C3-C7環烷基-，5)-芳基-6)-聯苯基-，7)-雜芳基-，8)-雜環基-，9)-C₁-C₆烷基-(C₂-C₆烯基)-C₁-C₆烷基-，10)-C₁-C₆烷基-(C₂-C₄炔基)-C₁-C₆烷基-，11)-C₁-C₆烷基-(C₃-C₇環烷基)-C₁-C₆烷基-， 12)-C₁-C₆烷基-芳基-C₁-C₆烷基-，13)-C₁-C₆烷基-聯苯基-C₁-C₆烷基-，14)-C₁-C₆烷基-雜芳基-C₁-C₆烷基-，15)-C₁-C₆烷基-雜環基-C₁-C₆烷基-，16)-C₁-C₆烷基-Y-C₁-C₆烷基-，17)-芳基-Y-芳基-，18)-雜芳基-Y-雜芳基-，19)-雜環基-Y-雜環基-，20)，或21)，其中該烷基、烯基、炔基及環烷基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；及該芳基、聯苯基、雜芳基及雜環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；Q及Q¹各自獨立地選自於下列：1)NR⁴R⁵，2)OR11，或3)S(O)_mR¹¹；或Q及Q¹各自獨立地選自於下列：1)芳基，或2)雜芳基，該芳基及該雜芳基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；A及A¹各自獨立地選自於下列： 1)-CH₂- 2)-CH₂CH₂- 3)-CH(C₁-C₆烷基)-，4)-CH(C₃-C₇環烷基)-，5)-C₃-C₇環烷基-，6)-CH(C₁-C₆烷基-C₃-C₇環烷基)-，7)-C(O)-，或8)-C(O)OR¹³；R¹及R¹⁰⁰各自獨立地選自於下列：1)H，或2)可選擇性經一或多個R⁶取代基取代的C₁-C₆烷基；R²及R²⁰⁰各自獨立地選自於下列：1)H，或2)可選擇性經一或多個R⁶取代基取代的C₁-C₆烷基；R³及R³⁰⁰各自獨立地為選擇性經一或多個R⁶取代基取代的C₁-C₆烷基；R⁴及R⁵每個各自獨立地選自於下列：1)H，2)鹵烷基，3)←C₁-C₆烷基，4)←C₂-C₆烯基，5)←C₂-C₄炔基，6)←C₃-C₇環烷基，7)←C₃-C₇環烯基， 8)←芳基，9)←雜芳基，10)←雜環基，11)←雜雙環基，12)←C(O)-R¹¹，13)←C(O)O-R¹¹，14)←C(=Y)NR⁸R⁹，或15)←-S(O)₂-R¹¹，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；及其中該芳基、雜芳基、雜環基及雜雙環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；R⁶為：1)鹵素，2)NO₂，3)CN，4)鹵烷基，5)C₁-C₆烷基，6)C₂-C₆烯基，7)C₂-C₄炔基，8)C₃-C₇環烷基，9)C₃-C₇環烯基，10)芳基，11)雜芳基，12)雜環基， 13)雜雙環基，14)OR⁷，15)S(O)_mR⁷，16)NR⁸R⁹，17)NR⁸S(O)₂R¹¹，18)COR⁷，19)C(O)OR⁷，20)CONR⁸R⁹，21)S(O)₂NR⁸R⁹，22)OC(O)R⁷，23)OC(O)Y-R¹¹，24)SC(O)R⁷，或25)NC(Y)NR⁸R⁹，其中該芳基、雜芳基、雜環基及雜雙環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；R⁷為：1)H，2)鹵烷基，3)C₁-C₆烷基，4)C₂-C₆烯基，5)C₂-C₄炔基，6)C₃-C₇環烷基，7)C₃-C₇環烯基，8)芳基， 9)雜芳基，10)雜環基，11)雜雙環基，12)R⁸R⁹NC(=Y)，或13)C₁-C₆烷基-C₂-C₄烯基，或14)C₁-C₆烷基-C₂-C₄炔基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；及其中該芳基、雜芳基、雜環基及雜雙環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；R⁸及R⁹每個各自獨立地為：1)H，2)鹵烷基，3)C₁-C₆烷基，4)C₂-C₆烯基，5)C₂-C₄炔基，6)C₃-C₇環烷基，7)C₃-C₇環烯基，8)芳基，9)雜芳基，10)雜環基，11)雜雙環基，12)C(O)R¹¹，13)C(O)Y-R¹¹，或14)S(O)₂-R¹¹， 其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；及其中該芳基、雜芳基、雜環基及雜雙環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；或R⁸及R⁹與它們所鍵結的氮原子一起形成一選擇性經一或多個R⁶取代基取代之五、六或七員雜環；R¹⁰為：1)鹵素，2)NO₂，3)CN，4)B(OR¹³)(OR¹⁴)，5)C₁-C₆烷基，6)C₂-C₆烯基，7)C₂-C₄炔基，8)C₃-C₇環烷基，9)C₃-C₇環烯基，10)鹵烷基，11)OR⁷，12)NR⁸R⁹，13)SR⁷，14)COR⁷，15)C(O)OR⁷，16)S(O)_mR⁷，17)CONR⁸R⁹，18)S(O)₂NR⁸R⁹， 19)芳基，20)雜芳基，21)雜環基，或22)雜雙環基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基及環烯基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；R¹¹為：1)鹵烷基，2)C₁-C₆烷基，3)C₂-C₆烯基，4)C₂-C₄炔基，5)C₃-C₇環烷基，6)C₃-C₇環烯基，7)芳基，8)雜芳基，9)雜環基，或10)雜雙環基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；及其中該芳基、雜芳基、雜環基及雜雙環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；R¹²為：1)鹵烷基，2)C₁-C₆烷基，3)C₂-C₆烯基， 4)C₂-C₄炔基，5)C₃-C₇環烷基，6)C₃-C₇環烯基，7)芳基，8)雜芳基，9)雜環基，10)雜雙環基，11)C(O)-R¹¹，12)C(O)O-R¹¹，13)C(O)NR⁸R⁹，14)S(O)_m-R¹¹，或15)C(=Y)NR⁸R⁹，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；及其中該芳基、雜芳基、雜環基及雜雙環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；R¹³及R¹⁴每個各自獨立地為：1)H，或2)C₁-C₆烷基；或R¹³及R¹⁴可結合以形成一雜環或雜雙環基環；R²⁰為：1)H，2)NH2，或3)NHFmoc；或前藥體；或式I或II之化合物可以一可偵測的標籤或 一親和性標記物來標定。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種由式1-iv所表示的中間化合物：

其中PG³、R¹、R²、R³、R⁴及R⁵如於本文中所定義。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種由式2-iv所表示的中間化合物：

其中PG⁴、R¹、R²、R³、R⁴及R⁵如於本文中所定義。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種由式3-ii所表示的中間化合物：

其中PG⁴、R¹、R²、R³、A及Q如於本文中所定義；及L為-(CH₂)_r-、-(CH₂)_r-Y-(CH₂)_r-、-烷基-芳基-烷基-、-烷基-雜芳基-烷基-、環烷基、芳基或雜芳基。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種由式4(i)所表示的中間化合物：

其中PG⁴、PG⁴⁰⁰、L、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、R³、R³⁰⁰、A、A¹、Q及Q¹如於本文中所定義。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種由式6-ii所表示的中間化合物：

其中PG⁴、PG⁴⁰⁰、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、R³、R³⁰⁰、A、A¹、Q及Q¹如於本文中所定義。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種由式7-v所表示的中間化合物：

其中PG⁴、PG⁴⁰⁰、L、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、R³、R³⁰⁰、A、A¹、Q及Q¹如於本文中所定義。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種由式8-ii所表示之中間化合物：

其中PG⁴、r、L、R¹⁰⁰、R²⁰⁰、A¹及Q¹如於本文中所定義。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種由式8-iii所表示的中間化合物：

其中PG⁴、r、L、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、R³、A、A¹、Q及Q¹如於本文中所定義。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種由式17-i所表示的中間化合物：

其中PG⁴、L、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、R³、R³⁰⁰、A、A¹、Q及Q¹如於本文中所定義。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種由式18-i所表示的中間化合物：

其中PG⁴、L、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、R³、R³⁰⁰、A、A¹、Q及Q¹如於本文中所定義。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種由式19-2所表示的中間化合物：

其中PG¹、PG²、L、X如於本文中所定義。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種由式19-3所表示的中間化合物：

其中PG²、L及X如於本文中所定義。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種由式19-8所表示的中間化合物：

其中PG⁴、L、X、X¹、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、R³、R³⁰⁰、R⁴、R⁴⁰⁰、R⁵及R⁵⁰⁰如於本文中所定義。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種由式20-1a所表示的中間化合物：

其中PG¹、L、X、X¹、R⁴及R⁵如於本文中所定義。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種由式20-2所表示的中間化合物：

其中PG⁴、L、X及X¹如於本文中所定義。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種由式20-4所表示的中間化合物：

其中PG⁴、L、X、X¹、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、R³、R³⁰⁰、R⁴、R⁴⁰⁰、R⁵及R⁵⁰⁰如於本文中所定義。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種由描述於上述所表示的式I之化合物的製造方法，該方法包括：a)在一溶劑中，耦合二種由式1-iv所表示之中間物：

其中PG³、R¹、R²、R、A及Q如於本文中所定義；及b)移除該保護基團，以便形成式1之化合物。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種由描述於上述所表示的式I之化合物的製造方法，該方法包括：a)在一溶劑中，耦合由式2-iv所表示的中間物與一經活化的二酸(0.5當量)：

其中PG⁴為一保護基團；及R¹、R²、R³、A及Q如於本文中所定義；及b)移除該保護基團，以便形成式I之化合物。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種式I及II之化合物之醫藥上可接受的鹽之製備方法，其藉由以1至2當量如於本文中所定義之醫藥上可接受的酸來處理式I及II之化合物。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種包含如上所述的化合物之醫藥組合物，其與一醫藥上可接受的載劑、稀釋劑或賦形劑混合。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種包括一治療有效量之如上所述的化合物之醫藥組合物，其可採用作為藥劑來給藥，用以治療患者之增殖性疾病。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種醫藥組合物，其包含一式I之化合物與一或多種死亡受體同效劑(例如，TRAIL受體之同效劑)的組合。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種醫藥組合物，其包含一式I之化合物與任何可增加一或多種死亡受體同效劑靈敏度的治療藥物(例如，細胞毒素性細胞素，諸如干擾素)之組合。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種醫藥組合物之製備方法，該方法包括混合一如上所述的化合物與一醫藥上可接受的載劑、稀釋劑或賦形劑。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種特徵為細胞凋亡不足之疾病狀態的治療方法，該方法包括將一治療有效量之如上所述的醫藥組合物給藥至一需要其之患者，以便治療該疾病狀態。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種調節IAP功能之方法，該方法包括讓細胞與本發明之化合物接觸，以便防止BIR黏結蛋白質黏結至IAP BIR區域，因此調節該IAP功能。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種治療增殖性疾病之方法，該方法包括將一治療有效量之如上所述的醫藥組合物給藥至一需要其之患者，以便治療該增殖性疾病。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種治療癌症的方法，該方法包括將一治療有效量之如上所述的醫藥組合物給藥至一需要其之患者，以便治療癌症。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種治療癌症的方法，該方法包括將一治療有效量之如上所述的醫藥組合物與一選自於下列之藥劑組合或相繼地，或與一輻射療法組合或相繼地給藥至一需要其之患者，以便治療該癌症：a)動情激素受體調節劑、b)男性荷爾蒙受體調節劑、 c)類視色素受體調節劑、d)細胞毒素性藥劑、e)抗增生性藥劑、f)異戊二烯基蛋白質轉換酶抑制劑、g)HMG-CoA還原酶抑制劑、h)HIV蛋白質酶抑制劑、i)逆轉錄酶抑制劑、k)血管新生抑制劑、i)PPAR-γ同效劑、m)PPAR-δ同效劑、n)內在多抗藥性之抑制劑、o)止吐劑、p)在貧血症治療上有用的藥劑、q)在嗜中性白血球減少症治療上有用的藥劑、r)免疫提高藥物、s)蛋白酶體抑制劑、t)HDAC抑制劑、u)在蛋白酶體中之化學胰蛋白酶(chemotrypsin)似的活性之抑制劑、或v)E3接合酶抑制劑、w)免疫系統調節劑，諸如(但不限於)干擾素-α、卡介苗(BCG)及可引發細胞素(諸如，白細胞介素、TNF)釋放或引發死亡受體配體(諸如，TRAIL)釋放之離子化輻射(UVB)； x)死亡受體TRAIL及TRAIL同效劑之調節劑，諸如人化的抗體HGS-ETR1及HGS-ETR2。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種用來在患者中治療或預防增殖性疾病之方法，該方法包括將一治療有效量之上述描述的組合物給藥至該患者。

在本發明的另一個觀點中，該方法更包括在給藥該組合物前、同時或之後，將一治療有效量的化學療法藥劑給藥至患者。

在更另一個觀點中，該方法更包括在給藥該組合物前、同時或之後，將一治療有效量之死亡受體同效劑給藥至患者。該死亡受體同效劑為TRAIL或該死亡受體同效劑為TRAIL抗體。該死亡受體同效劑典型以一可產生協同效應的量來給藥。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種探針，該探針為上述之式I或II的化合物，其中該化合物經一可偵測的標籤或親和性標記物來標定。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種可鑑別出可黏結至IAP BIR區域之化合物的方法，該試驗包括：a)讓一IAP BIR區域與一探針接觸以形成一探針：BIR區域複體，其中該探針可由一測試化合物來取代；b)測量一來自該探針的訊號，以便建立一參考程度；c)溫育該探針：BIR區域複體與該測試化合物；d)測量該來自探針的訊號；e)比較該來自步驟d)之訊號與該參考程度，該訊號的 調變為該測試化合物黏結至該BIR區域之指示，

其中該探針為標定上一可偵測的標籤或親和力標籤之式I或II的化合物。

在本發明的另一個觀點中，已提供一種偵測活體內IAP之功能喪失或抑制的方法，該方法包括：a)將一治療有效量之如上述定義的醫藥組合物給藥至患者；b)從該患者中分離出一組織樣品；及c)從該樣品中偵測IAPs之功能喪失或抑制。

本發明之進一步觀點及優點將隨著參考下列說明且與下列圖形結合而變成較好了解，其中：

第1圖描述出SKOV-3人類卵巢癌細胞株異體移植與化合物3之研究。在雌性CD-1裸小鼠(大約20-25克)右側中，皮下地皮下注射5×10⁶個在50%母性凝膠(matrigel)中之SKOV-3人類卵巢腫瘤細胞。在第55天時，當腫瘤為大約100立方毫米時，開始以化合物3治療，在實驗期間，以化合物連續治療5天接著2天無藥物治療。以數位測徑器來測量腫瘤尺寸且以V=(a×b²)/2來計算，其中a為最長的維度及b為寬度。可在1毫克/公斤處觀察到腫瘤消退，同時可在0.3毫克/公斤處觀察到阻滯腫瘤生長(tumor stasis)。

第2圖描述出MDA-MB-231人類乳房癌細胞株異體移植與化合物3之研究。在雌性CD-1裸小鼠(大約20-25克)的右側中，皮下注射1×106個MDA-MB-231人類乳房腫瘤細胞。在第71天時，當腫瘤為大約90立方毫米時，開始以化 合物3治療，在實驗期間，以化合物連續治療5天接著2天無藥物治療。以數位測徑器來測量腫瘤尺寸且以V=(a×b2)/2來計算，其中a為最長的維度及b為寬度。可在1毫克/公斤處觀察到腫瘤消退。

第3圖闡明化合物3可在試管內於HCT-116細胞中引發cIAP-1喪失。以不同濃度的化合物3來處理PC3、SKOV3、MDA-MB-231、HCT-116細胞，且在37℃下培養5小時。收集細胞且利用西方墨點法(Western blot)來偵測cIAP1及肌動蛋白(負載對照-無顯示)程度。結果指出化合物3會以時間相依的方式(無顯示)在人類癌細胞中引發cIAP-1喪失。使用類似於如第3圖所描述的方法，化合物3可從ES2及4T1細胞株中引發c-IAP1喪失(無顯示)及從PC3細胞中引發cIAP2喪失(無顯示)。

第4圖闡明在CD-1老鼠白血球中的c-IAP1試管內調變。以不同濃度的化合物3試管內培養全血3小時。經由菲可(Ficoll)梯度，從經處理的全血中分離出白血球。從白血球中分離出蛋白質，且使用西方墨點法顯示出cIAP-1及微管蛋白(負載對照)的相對量。試管內結果指出化合物3可在全血中引發cIAP-1喪失，其濃度<10nM(相對於對照組)。

第5圖闡明在CD-1老鼠白血球中之cIAP-1的活體內調變。利用靜脈內巨量(bolus)注射如所指出的劑量，將化合物3給藥至CD-1老鼠。在1至48小時後，收集血液，在菲可梯度上分離出白血球及萃取蛋白質。利用西方墨點法顯示出cIAP-1及微管蛋白(負載對照)的相對量(顯示在下列 於3小時時間點處)。結果指出化合物3可在老鼠白血球中引發cIAP-1喪失，此可使用體外偵測方法來偵測。

第6圖描述MDA-MB-231人類乳房癌細胞株異體移植與化合物24(1毫克/公斤)之研究。在雌性CD-1裸小鼠(大約20-25克)的右側中，皮下地皮下注射1×106個在50%母性凝膠中之MDA-MB-231人類乳房腫瘤細胞。在第55天時，當腫瘤為大約100立方毫米時，開始以化合物24治療，在實驗期間，以化合物連續治療5天接著2天無藥物治療。以數位測徑器來測量腫瘤尺寸且以V=(a×b2)/2來計算，其中a為最長的維度及b為寬度。圓形-20%的HPCD對照；菱形-化合物24。

第7圖闡明在老鼠白血球中之cIAP-1的活體內調變。利用靜脈內巨量注射將化合物24給藥至CD-1老鼠。在1至48小時後，犧牲動物，收集血液，在菲可梯度上分離出白血球及萃取蛋白質。利用西方墨點法顯示出cIAP-1及微管蛋白(負載對照)的相對量(顯示在下列於3小時的時間點處)。結果指出化合物24將在老鼠白血球中引發cIAP-1喪失，此可使用體外偵測方法來偵測。

較佳實施例之詳細說明

在許多癌症及其它疾病中，由基因缺陷或由化學療法的藥劑所引發之IAP向上調節已經與細胞凋亡抵抗性增加有相互關聯。相反地，我們的結果顯示出IAP程度減少之細胞對化學療法的藥劑及對死亡受體同效劑(諸如， TRAIL)更敏感。咸信可拮抗IAP功能或從生病的細胞中喪失IAP之小分子可有用地作為治療藥物。我們已於本文中報導出本發明之化合物可直接黏結至IAP，以造成在細胞中的IAP蛋白質向下調節，及在癌細胞中引發細胞凋亡。再者，已闡明本發明之化合物與已使用在癌症治療上之臨床有關的藥劑組合之協同效應。

我們已發現一系列新穎的橋接化合物，其可黏結至完整的細胞IAP及產生深遠、持續的IAP蛋白質向下調變，且透過促進活性凋亡蛋白酶3釋放來提高癌細胞之細胞凋亡。已經在多種衍生自人類乳房、胰、結腸、肺、卵巢癌及原發性人類白血病及淋巴瘤細胞之細胞株中觀察到此生物學反應。已發現該些化合物可在大且廣泛的癌細胞範圍內高度地與由死亡受體同效劑主導的殺死(諸如，TRAIL、TRAIL受體單株抗體及TNF-α)協同作用。基於這些研究結果將發現，該些化合物可應用來治療許多型式的癌，諸如實體腫瘤及源自造血系統的腫瘤。再者，亦已發現本發明之化合物可應用來防止轉移性癌細胞侵襲、發炎及其它特徵為經由任何一種IAP之向上調節來抵抗細胞凋亡的細胞之疾病。如第3圖所顯示，化合物3能在濃度低於10nM下從多重腫瘤細胞株中引發c-IAP1/2蛋白質完全喪失。已證明本發明之其它化合物可顯示出類似可從癌細胞引發出時間相依的IAP喪失之能力。此IAP蛋白質喪失在SKOV3細胞中強烈與ED₅₀相互關聯。

下列更詳細描述出二個IAP BIR黏結單元(M1及 M2)之‘橋接’。使用連結至一個吡咯啶環的適當‘橋接單元’可提供經橋接的IAP BIR黏結化合物，其闡明出抗癌活性明顯增加(10-1000倍，如與其單體單元比較)。此經改善的活性產生自其黏結至完整的IAPs之BIR區域的能力已經改善，且可造成在不同癌細胞株中誘導細胞凋亡。

多種因素會影響本發明之化合物的試管內促細胞凋亡特徵。特別是，這些包括：i)連結子/吡咯啶鍵結之接附點，ii)在連結子/吡咯啶鍵結處的立體化學，iii)連結子部分其本身，包括連結子系統之立體化學、區域化學(regiochemistry)及堅硬度，iv)在R¹及R¹⁰⁰處的烷基取代，及v)在R⁴、R⁴⁰⁰、R⁵及R⁵⁰⁰處的取代樣式。

為了容易說明，遍及本說明，式I及式II之化合物亦可包括使用名稱P1、P2、P3、P4及P5。這些名稱指為在式I或II中之胺基酸或經改質的胺基酸。下列闡明該些名稱之使用： 其中波折線代表與另一個BIR黏結單元之共價鍵。

本發明之化合物亦可由式3或式4來表示，其中M1及M2代表各自獨立的BIR黏結區域。

其中R¹、R²、R¹⁰⁰、R²⁰⁰、R³、R³⁰⁰、R²⁰、A、A¹、Q、Q¹及BG如於本文中所定義，及虛線代表一假設的分隔線，用來比較與M1及M2結合的取代基。

在式3的一個支組中，M1與M2相同且虛線代表對稱線。在另一個支組中，M1與M2不同。

在一個支組中，式4之化合物相對於該虛線呈不對稱。在另一個支組中，在M1及M2上的取代基相同。在另一個支組中，在M1及M2上的取代基不同。

熟知技藝之人士將了解，當M1及M2相同時，在M1中之R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹³、R¹⁴、r、m、Y、A、Q及X取代基分別與在M2中的R¹⁰⁰、R²⁰⁰、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹³、R¹⁴、r、m、Y、 A¹、Q¹及X¹取代基具有相同的意義。當M1及M2不同時，在M1或M2中之至少一個R¹、R²、R¹⁰⁰、R²⁰⁰、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹³、R¹⁴、r、m、Y、A、A¹、Q、Q¹、X及X¹取代基不同。

再者，在M1中的取代基可定義為R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹³、R¹⁴、r、m、p、Y、A、Q及X，及在M2中的那些可各別定義為R¹⁰⁰、R²⁰⁰、R⁴⁰⁰、R⁵⁰⁰、R⁶⁰⁰、R⁷⁰⁰、R⁸⁰⁰、R⁹⁰⁰、R¹⁰⁰⁰、R¹¹⁰⁰、R¹³⁰⁰、R¹⁴⁰⁰、r¹、m¹、p¹、Y¹、A¹、Q¹及X¹。在M1與M2相同的實例中，於M1中之R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹³、R¹⁴、r、m、Y、A、Q及X取代基各別與在M2中的R¹⁰⁰、R²⁰⁰、R⁴⁰⁰、R⁵⁰⁰、R⁶⁰⁰、R⁷⁰⁰、R⁸⁰⁰、R⁹⁰⁰、R¹⁰⁰⁰、R¹¹⁰⁰、R¹³⁰⁰、R¹⁴⁰⁰、r¹、m¹、Y¹、A¹、Q¹及X¹具有相同的意義。在M1與M2不同的實例中，前述取代基的至少一個不同。

本發明之化合物可在哺乳動物IAP中有用地作為BIR區域黏結化合物，且可由式I或式II表示。下列為根據式I及式II之化合物的具體實施例、基團及取代基，其將於此之後詳細地描述。

A及A ¹ ：

在式I或II之化合物的一個支組中，A及A¹二者為CH₂。

在式I或II之化合物的另一個支組中，A及A¹二者為C=O。

在式I或II之化合物的另一個可替代的支組中，A為CH₂及A¹為C=O。

在式I或II之化合物的另一個可替代的支組中，A及A¹二者為C(O)OCH₃。

在式I或II之化合物的另一個可替代的支組中，A及A¹二者為C(O)OH。

如於本文中所提出的A及A1之任何及每個各別定義可與如於本文中所提出的核心、R¹、R²、R¹⁰⁰、R²⁰⁰、R³、R³⁰⁰、Q、Q¹及BG之任何及每個各別定義結合。

核心：

因此，對式I之化合物來說，本發明包括式1A至1C之化合物：

其中BG、A、A¹、Q、Q¹、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、R³及R³⁰⁰如於此上述及於此之後所定義。

在一個實例中，本發明包括式1A之化合物。

在另一個實例中，本發明包括式1B之化合物。

在另一個可替代的實例中，本發明包括式1C之化合物。

再者，式II之化合物包括式2A及2B之化合物：

其中BG、A、A¹、Q、Q¹、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、R³、R³⁰⁰及R²⁰如於此上述及於此之後所定義。

在一個實例中，本發明包括式2A之化合物。

如於本文中所提出的核心之任何及每個各別定義可與如於本文中所提出的A、A¹、R¹、R²、R¹⁰⁰、R²⁰⁰、R³、R³⁰⁰、R²⁰、Q、Q¹及BG之任何及每個各別定義結合。

BG：

在前述化合物的一個支組中，BG為-X-L-X¹-。

在一個支組中，對BG為-X-L-X¹-的式I之化合物來說，本發明包括式1a至1c之化合物：

其中L、X、X¹、A、A¹、Q、Q¹、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、R³及R³⁰⁰如於此上述及於此之後所定義。

前述化合物的進一步支組包括式1.1a至1.1c之化合物：

其中L、X、X¹、A、A¹、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、R³、R³⁰⁰、R⁴、R⁴⁰⁰、R⁵及R⁵⁰⁰如於此上述及於此之後所定義。

在一個支組中，對BG為-X-L-X¹-的式II之化合物來說，本發明包括式2a之化合物： 其中L、X、X¹、A、A¹、Q、Q¹、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、R³及R²⁰如於此上述及於此之後所定義。

如於本文中所提出的BG之任何及每個各別定義可與如於本文中所提出的核心、R¹、R²、R¹⁰⁰、R²⁰⁰、R³、R³⁰⁰、A、A¹、Q及Q¹之任何及每個各別定義結合。

X及X ¹ ：

在前述化合物的一個支組中，X及X¹各自獨立地選自於 下列：1)O，2)NR¹³，3)S，4)C₁-C₆烷基-O-，5)C₁-C₆烷基，6)，7)， 8)，9)，或10)。

在一個實例中，X及X¹各自獨立地選自於下列：1)O，2)，或 3)

如於本文中所提出的X及X¹之任何及每個各別定義可與如於本文中所提出的核心、L、A、A¹、R¹、R²、R¹⁰⁰、 R²⁰⁰、R³、R³⁰⁰、R²⁰、Q、Q¹及BG之任何及每個各別定義結合。

L：

在前述化合物的一個支組中，L選自於下列：1)-C₁-C₂₀烷基-，2)-C₃-C₇環烷基-，3)-芳基-，4)-聯苯基-，5)-雜芳基-，6)-C₁-C₆烷基-(C₂-C₄炔基)-C₁-C₆烷基-，7)-C₁-C₆烷基-芳基-C₁-C₆烷基-，8)-芳基-Y-芳基-，9)，或10)其中該烷基及環烷基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；及該芳基、聯苯基及雜芳基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代。

L的典型實例包括： 如於本文中所提出的L之任何及每個各別定義可與如於本文中所提出的核心、A、A¹、r、R¹、R²、R¹⁰⁰、R²⁰⁰、R³、R³⁰⁰、R²⁰、X、X¹、Q或Q¹之任何及每個各別定義結合。

r：

在前述觀點中，r為整數1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

如於本文中所提出的r之任何及每個各別定義可與如於本文中所提出的核心、A、L、A¹、R¹、R²、R¹⁰⁰、R²⁰⁰、R³、R³⁰⁰、R²⁰、Q、Q¹、X及X¹之任何及每個各別定義結合。

更明確來說，本發明包括式1.1至1.18之化合物：

其中r、A、A¹、Q、Q¹、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、R³及R³⁰⁰如於此上述所定義。

再者，更明確來說，本發明包括式2.1及2.2之化合物：

其中A、A¹、Q、Q¹、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、R³及R²⁰如 於此上述所定義。

R ¹ 及R ¹⁰⁰ ：

在前述化合物的一個支組中，R1及R100二者為H。

在前述化合物的一個支組中，R¹及R¹⁰⁰二者為C₁-C₆烷基。

在一個實例中，R¹及R¹⁰⁰二者為CH₃。

如於本文中所提出的R¹及R¹⁰⁰之任何及每個各別定義可與如於本文中所提出的核心、A、A¹、R²、R²⁰⁰、R³、R³⁰⁰、Q、Q¹、B、B¹及BG之任何及每個各別定義結合

R ² 及R ²⁰⁰ ：

在前述化合物的一個支組中，R²及R²⁰⁰二者為選擇性經OH取代的C₁-C₆烷基。

在一個實例中，R²及R²⁰⁰二者為CH₃。

在另一個實例中，R²為CH₂OH及R³⁰⁰為CH₃。

在另一個實例中，R²及R²⁰⁰二者為CH₂OH。

在另一個實例中，R²及R²⁰⁰二者為CH₂CH₃。

如於本文中所提出的R²及R²⁰⁰之任何及每個各別定義可與如於本文中所提出的核心、A、A¹、R¹、R¹⁰⁰、R³、R³⁰⁰、Q、Q¹及BG之任何及每個各別定義結合。

R ³ 及R ³⁰⁰ ：

在式I之化合物的一個支組中，R³及R³⁰⁰二者為C₁-C₆烷基。

在一個實例中，R³及R³⁰⁰二者為C(CH₃)₃。

在式II之化合物的支組中，R³為C₁-C₆烷基。在一 個實例中，R³為C(CH₃)₃。

如於本文中所提出的R³及R³⁰⁰之任何及每個各別定義可與如於本文中所提出的核心、A、A¹、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、Q、Q¹及BG之任何及每個各別定義結合。

Q及Q ¹ ：

在前述化合物的一個支組中，Q及Q¹二者為NR⁴R⁵，其中R⁴及R⁵如於本文中所定義。

如於本文中所提出的Q及Q¹之任何及每個各別定義可與如於本文中所提出的核心、A、A¹、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、R³、R³⁰⁰及BG之任何及每個各別定義結合。

R ⁴ 及R ⁵ ：

在前述化合物的一個支組中，其中A及A¹二者為C=O，R⁴為H及R⁵選自於下列：1)←C₁-C₆烷基、2)←C₂-C₆烯基、3)←C₂-C₄炔基、4)←C₃-C₇環烷基、5)←C₃-C₇環烯基、6)←芳基、7)←雜芳基、8)←雜環基、或9)←雜雙環基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；及其中該芳基、雜芳基、雜環基及 雜雙環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；其中R⁶及R¹⁰如於本文中所定義。

在上述化合物的另一個支組中，R⁴為H及R⁵選自於下列：1)←C₁-C₆烷基，或2)←芳基，其中該烷基可選擇性經一或二個R⁶取代基取代；及其中該芳基可選擇性經一個R¹⁰取代基取代；其中R⁶及R¹⁰如於本文中所定義。

前述支組的實例包括R⁴為H及R⁵選自於由下列所組成之群：

因此，當A及A1二者為C=O時，則Q及Q1二者為。

在另一個實例中，Q及Q1二者為。

在另一個實例中，Q為及Q1為。

在另一個實例中，Q及Q1二者為。

在另一個實例中，Q及Q1二者為。

在另一個實例中，Q及Q1二者為。

在另一個實例中，Q及Q1二者為。

在另一個實例中，Q及Q1二者為。

在另一個實例中，Q及Q1二者為。

在另一個實例中，Q及Q1二者為。

在另一個實例中，Q及Q1二者為。

在另一個實例中，Q及Q1二者為。

在另一個實例中，Q及Q1二者為。

在另一個實例中，Q及Q1二者為。

在另一個實例中，Q及Q¹二者為。

在另一個實例中，Q及Q¹二者為。

在另一個實例中，Q及Q¹二者為。

在另一個實例中，Q及Q¹二者為。

在另一個實例中，Q及Q二者為。

在另一個實例中，Q及Q¹二者為。

在另一個實例中，Q及Q¹二者為。

在另一個實例中，Q及Q¹二者為 。

在另一個實例中，Q及Q¹二者為。

在另一個實例中，Q及Q¹二者為。

在另一個實例中，Q及Q¹二者為。

在A及A¹二者為CH₂之前述化合物的另一個支組中，則R⁴及R⁵每個各自獨立地為：1)鹵烷基、2)←C₁-C₆烷基、3)←C₂-C₆烯基、4)←C₂-C₄炔基、5)←C₃-C₇環烷基、6)←C₃-C₇環烯基、7)←芳基、8)←雜芳基、9)←雜環基、 10)←雜雙環基、11)←C(O)-R¹¹、12)←C(O)O-R¹¹、13)←C(=Y)NR⁸R⁹、或14)←S(O)₂-R¹¹，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；及其中該芳基、雜芳基、雜環基及雜雙環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；其中Y、R⁶、R⁸、R⁹、R¹⁰及R¹¹如於本文中所定義。

在上述化合物的另一個支組中，R⁴及R⁵各自獨立地選自於下列：1)C₁-C₆烷基，2)←C(O)-R¹¹，3)←C(O)O-R¹¹，或4)←S(O)₂-R¹¹，其中該烷基經R⁶取代基取代；其中R⁶及R¹¹如於本文中所定義。

在前述化合物的一個支組中，R⁴為S(O)₂CH₃及R⁵為或。

在前述化合物的另一個支組中，R⁴為C(O)CH₃及R⁵為或。

在前述化合物的另一個支組中，R⁴為及R⁵為或。

如於本文中所提出的R⁴及R⁵之任何及每個各別定義可與如於本文中所提出的核心、A、A¹、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、R³、R³⁰⁰及BG之任何及每個各別定義結合。

R ¹¹ ：

在前述化合物的一個支組中，R¹¹為1)C₁-C₆烷基、或2)芳基，其中該烷基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；及其中該芳基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；其中R⁶及R¹⁰如於本文中所定義。

在前述化合物的一個支組中，R¹¹為：1)選擇性經一或二個R⁶取代基取代之C₁-C₆烷基，或2)選擇性經一個R¹⁰取代基取代之苯基；其中該R⁶及R¹⁰取代基如於本文中所定義。

如於本文中所提出的R¹¹之任何及每個各別定義可與如於本文中所提出的核心、A、A¹、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、R⁴、R⁵、R³、R³⁰⁰及BG之任何及每個各別定義結合。

R ⁶ ：

在前述化合物的一個支組中，R⁶為：1)鹵素， 2)NO₂，3)CN，4)芳基，5)雜芳基，6)雜環基，7)雜雙環基，8)OR⁷，9)SR⁷，或10)NR⁸R⁹，其中該芳基、雜芳基、雜環基及雜雙環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；其中R⁷、R⁸、R⁹及R¹⁰如於本文中所定義。

在前述化合物的另一個支組中，R⁶為：1)鹵素、2)芳基、或3)NR⁸R⁹，其中該芳基選擇性經一個R¹⁰取代基取代；其中R⁸、R⁹及R¹⁰如於本文中所定義。

在前述化合物的一個支組中，R⁶為：1)鹵素、2)苯基、或3)NR⁸R⁹，其中該苯基選擇性經一個R¹⁰取代基取代；其中R⁸及R⁹如於本文中所定義。

如於本文中所提出的R⁶之任何及每個各別定義可與如於本文中所提出的核心、A、A¹、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、R⁴、R⁵、R³、R³⁰⁰及BG之任何及每個各別定義結合。

R ⁸ 及R ⁹ ：

在前述化合物的一個支組中，R⁸及R⁹每個各自獨立地為：1)H、2)鹵烷基、3)C₁-C₆烷基、4)C₂-C₆烯基、5)C₂-C₄炔基、6)C₃-C₇環烷基、或7)C₃-C₇環烯基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；其中該R⁶取代基如於本文中所定義。

在前述化合物的另一個支組中，R⁸及R⁹每個各自獨立地為：1)H，或2)C₁-C₆烷基，其中該烷基選擇性經芳基取代。

如於本文中所提出的R⁸及R⁹之任何及每個各別定義可與如於本文中所提出的核心、A、A¹、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、R⁴、R⁵、R³、R³⁰⁰及BG之任何及每個各別定義結合。

R ¹⁰ ：

在前述化合物的一個觀點中，R¹⁰為：1)鹵素，2)NO₂，3)CN，4)鹵烷基，5)OR⁷，6)NR⁸R⁹，或7)SR⁷；其中R⁷、R⁸及R⁹如於本文中所定義。

在前述化合物的另一個觀點中，R¹⁰為：1)鹵素，或2)OC₁-C₆烷基。

如於本文中所提出的R¹⁰之任何及每個各別定義可與如於本文中所提出的核心、A、A¹、R¹、R¹⁰⁰、R²、R²⁰⁰、R⁴、R⁵、R³、R³⁰⁰及BG之任何及每個各別定義結合。

此外，本發明提供一種由式I或式2所表示的化合物之異構物、鏡像物、非鏡像異構物或互變體：

其中n為0或1；m為0、1或2；p為1或2；Y為NH、O或S；LG為：2)-X-L-X¹-；X及X¹各自獨立地選自於下列：1)O，2)NR¹³，3)S，4)C₁-C₆烷基-O-，5)C₁-C₆烷基-NR¹³-，6)C₁-C₆烷基-S-，7)C₁-C₆烷基-芳基-O-8)， 9) 10)，11)，或12)；L選自於下列：1)-C₁-C₂₀烷基-，2)-C₂-C₆烯基-，3)-C₂-C₄炔基-，4)-C₃-C₇環烷基-，5)-苯基-，6)-聯苯基-，7)-雜芳基-，8)-雜環基-，9)-C₁-C₆烷基-(C₂-C₆烯基)-C₁-C₆烷基-，10)-C₁-C₆烷基-(C₂-C₄炔基)-C₁-C₆烷基，11)-C₁-C₆烷基-(C₃-C₇環烷基)-C₁-C₆烷基，12)-C₁-C₆烷基-苯基-C₁-C₆烷基，13)-C₁-C₆烷基-聯苯基-C₁-C₆烷基，14)-C₁-C₆烷基-雜芳基-C₁-C₆烷基， 15)-C₁-C₆烷基雜環基-C₁-C₆烷基，16)-C₁-C₆烷基-O-C₁-C₆烷基，17)-C(O)-芳基-C(O)-，18)-C(O)-雜芳基-C(O)-，19)-C(O)-(C₁-C₆烷基)-芳基-(C₁-C₆烷基)-C(O)-，20)-C(O)-(C₁-C₆烷基)-雜芳基-(C₁-C₆烷基)-C(O)-，或21)-C(O)-(C₁-C₆烷基)-(C₃-C₇環烷基)-(C₁-C₆烷基)-C(O)-；Q及Q¹各自獨立地選自於下列：1)NR⁴R⁵，2)OR¹¹，或3)S(O)_mR¹¹；或Q及Q¹各自獨立地選自於選擇性經R¹²取代基取代之芳基或雜芳基；或Q及Q¹各自獨立地為：

其中G為一選擇性併入一或多個選自於S、N或O的雜原子之5、6或7員環，且其可選擇性經一或多個R¹²取代基取代，該環可選擇性與芳基或雜芳基并合，該芳基及雜芳基可選擇性經一或多個R¹²取代基取代；A及A¹各自獨立地選自於下列：1)-CH₂-， 2)-CH₂CH₂-，3)-CH(C₁-C₆烷基)-，4)-CH(C₃-C₇環烷基)-，5)-C₃-C₇環烷基-，6)-CH(C₁-C₆烷基-C₃-C₇環烷基)-，或7)-C(O)-；R¹及R¹⁰⁰各自獨立地選自於下列：3)H，或4)選擇性經一或多個R⁶取代基取代之C₁-C₆烷基；R²及R²⁰⁰各自獨立地為H或選擇性經一或多個R⁶取代基取代之C₁-C₆烷基；R⁴及R⁵各自獨立地選自於下列：1)H，2)C₁-C₆烷基→，3)C₃-C₇環烷基→，4)鹵烷基→，5)芳基→，6)聯苯基→，7)雜芳基-芳基→，8)芳基-雜芳基→，9)芳基-雜環基→，10)雜環基→，11)雜芳基→，12)雜環基→， 13)C₁-C₆烷基-O_nC(O)→，14)鹵烷基-O_nC(O)→，15)C₃-C₇環烷基-O_nC(O)→，16)芳基-O_nC(O)→，17)雜芳基-O_nC(O)→，18)雜環基-O_nC(O)→，19)R⁸R⁹NC(=Y)→，20)C₁-C₆烷基-S(O)₂→，21)C₃-C₇環烷基-S(O)₂→，22)芳基-S(O)₂→，23)雜芳基-S(O)₂→，24)雜環基-S(O)₂→，25)并合的芳基-C₃-C₇環烷基→，26)并合的雜芳基-C₃-C₇環烷基→，27)并合的芳基-雜環基→，28)并合的雜芳基-雜環基→，29)并合的芳基-C₃-C₇環烷基-O_nC(O)→，30)并合的雜芳基-C₃-C₇環烷基-O_nC(O)→，31)并合的芳基-雜環基-O_nC(O)→，或32)并合的雜芳基-雜環基-O_nC(O)→，其中該烷基及環烷基選擇性經一或多個R⁶取代基取代；及該芳基、雜芳基及雜環基選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；R⁶各自獨立地選自於下列： 1)鹵素，2)C₁-C₆烷基，3)C₃-C₇環烷基，4)鹵烷基，5)芳基，6)雜芳基，7)雜環基，8)OR⁷，9)S(O)_mR⁷，10)NR⁸R⁹，11)COR⁷，12)C(O)OR⁷，13)OC(O)R⁷，14)SC(O)R⁷，15)CONR⁸R⁹，16)S(O)₂NR⁸R⁹，或17)N(=Y)NR⁸R⁹，其中該芳基、雜芳基及雜環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；R⁷各自獨立地選自於下列：1)H、2)C₁-C₆烷基、3)C₃-C₇環烷基、4)鹵烷基、 5)芳基、6)雜芳基、7)雜環基、8)C(=Y)NR⁸R⁹、或9)C₁-C₆烷基-C₂-C₄炔基，其中該芳基、雜芳基及雜環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代；R⁸及R⁹各自獨立地選自於下列：1)H、2)C₁-C₆烷基、3)C₃-C₇環烷基、4)鹵烷基、5)芳基、6)雜芳基、7)雜環基、8)COC₁-C₆烷基、9)COC₃-C₃環烷基、10)CO-芳基、11)CO-雜芳基、12)CO-雜環基、13)C(O)Y-C₁-C₆烷基、14)C(O)Y-C₃-C₃環烷基、15)C(O)Y-芳基、16)C(O)Y-雜芳基、或 17)C(O)Y雜環基，其中該芳基、雜芳基及雜環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；或R⁸及R⁹與它們所鍵結的氮原子一起形成一選擇性經一或多個R⁶取代基取代之五、六或七員雜環；R¹⁰各自獨立地選自於下列：1)鹵素，2)NO₂，3)CN，4)C₁-C₆烷基，5)鹵烷基，6)C₃-C₇環烷基，7)OR⁷，8)NR⁸R⁹，9)SR⁷，10)COR⁷，11)CO₂R⁷，12)S(O)_mR⁷，13)CONR⁸R⁹，或14)S(O)₂NR⁸R⁹，其中該烷基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；R¹¹各自獨立地選自於下列：1)C₁-C₆烷基→，2)C₃-C₇環烷基→， 3)芳基→，4)雜芳基→，或5)雜環基→，其中該烷基及環烷基選擇性經一或多個R⁶取代基取代，及該芳基、雜芳基及雜環基選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；R¹²各自獨立地選自於下列：1)C₁-C₆烷基→，2)C₃-C₇環烷基→，3)鹵烷基→，4)芳基→，5)雜芳基→，6)雜環基→，7)C₁-C₆烷基-O_nC(O)→，8)鹵烷基-O_nC(O)→，9)C₃-C₇環烷基-O_nC(O)→，10)芳基-O_nC(O)→，11)雜芳基-O_nC(O)→，12)雜環基-O_nC(O)→，13)R⁸R⁹NC(O)→，14)C₁-C₆烷基-S(O)_m→，15)C₃-C₇環烷基-S(O)_m→，16)芳基-S(O)_m→，17)雜芳基-S(O)_m→， 18)雜環基-S(O)_m→，19)并合的芳基-C₃-C₇環烷基，20)并合的雜芳基-C₃-C₇環烷基，或21)C(=Y)-NR⁸R⁹，其中該烷基及環烷基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；及該芳基、雜芳基及雜環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；R¹³為：1)H，2)C₁-C₆烷基→，3)C₃-C₇環烷基→，4)鹵烷基→，5)芳基→，6)雜芳基→，7)雜環基→，8)C₁-C₆烷基-O_nC(O)→，9)鹵烷基-O_nC(O)→，10)C₃-C₇環烷基-O_nC(O)→，11)芳基-O_nC(O)→，12)雜芳基-O_nC(O)→，或13)雜環基-O_nC(O)→；或其前藥體、或醫藥上可接受的鹽、或經一可偵測的標籤或親和性標記物標定。

若任何變數(諸如，R⁶、R⁶⁰⁰、R¹⁰、R¹⁰⁰⁰及其類 似物)在任何構成結構中發生多於一次時，該變數在每個事件中的定義於每個其它事件中各自獨立。若取代基其自身經一或多個取代基取代時，經了解，該一或多個取代基可接附至相同的碳原子或不同的碳原子。所允許之於本文中所定義的取代基與變數之組合僅為它們可產生出化學安定的化合物。

熟知技藝之人士將了解，可選擇在本發明之化合物上的取代樣式及取代基，以便提供化學安定的化合物且其可使用在實例中所提出的化學及在技藝中所熟知的化學技術，使用容易獲得的起始物質來容易地合成。

經了解許多描述於本文的取代基或基團具有官能基同等物，此意謂著該基團或取代基可由另一個具有類似的電子、混成或鍵結性質之基團或取代基置換。

定義

除非其它方面有詳細指明，否則應用下列定義：

單一形式“一”、“一種”及“該”包括相符合的複數個參考物質，除非上下文有明確指定。

如於本文中所使用，名稱“包含”意欲意謂著在該措辭“包含”後的元素表列為需要或強制，但是可選擇其它元素且其可或可不存在。

如於本文中所使用，名稱“由...組成”意欲意謂著包括及限制為在該措辭“由...組成”後的任何事物。因此，措辭“由...組成”指示出所表列的元素為需要或強制且無存在其它元素。

如於本文中所使用，名稱“烷基”意指著包括分支及直鏈具有詳細指明的碳原子數之飽和脂肪烴基團二者，例如，在C₁-C₆-烷基中的C₁-C₆定義為包括於一線性或分支排列中具有1、2、3、4、5或6個碳之基團，及在C₁-C₄烷基中的C₁-C₄定義為包括於一線性或分支排列中具有1、2、3或4個碳之基團，及例如在C₁-C₂₀-烷基中的C₁-C₂₀定義為包括於一線性或分支排列中具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個碳之基團。如上述定義的C₁-C₆-烷基及C₁-C₄烷基之實例包括(但不限於)甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、三級丁基、異丁基、戊基及己基。

如於本文中所使用，名稱“烯基”意欲意謂著具有在其中詳細指明的碳原子數之不飽和直或支鏈烴基團，且其中至少二個碳原子由雙鍵彼此鍵結且具有E或Z區域化學性質及其組合。例如，在C₂-C₆烯基中的C₂-C₆定義為包括於一線性或分支排列中具有2、3、4、5或6個碳，且至少二個碳原子由一雙鍵鍵結在一起的基團。C₂-C₆烯基之實例包括乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基及其類似物。

如於本文中所使用，名稱“炔基”意欲意謂著具有在其中詳細指明的碳原子數之不飽和直鏈烴基團，其中至少二個碳原子由三鍵鍵結在一起。例如，在C₂-C₄炔基中的C₂-C₄定義為包括於一鏈中具有2、3或4個碳原子且至少二個碳原子由三鍵鍵結在一起的基團。此炔基的實例包括乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基及其類似物。

如於本文中所使用，名稱“環烷基”意欲意謂著具有在其中詳細指明的碳原子數之單環飽和脂肪烴基團，例如，在C₃-C₇環烷基中的C₃-C₇定義為包括於一單環排列中具有3、4、5、6或7個碳之基團。如上述定義的C₃-C₇環烷基之實例包括(但不限於)環丙基、環丁基、環戊基、環己基及環庚基。

如於本文中所使用，名稱“環烯基”意欲意謂著具有在其中詳細指明的碳原子數之單環飽和脂肪烴基團，例如，在C₃-C₇環烯基中的C₃-C₇定義為包括於單環排列中具有3、4、5、6或7個碳之基團。如上述定義的C₃-C₇環烯基實例包括(但不限於)環戊烯基及環己烯基。

如於本文中所使用，名稱“鹵基”或“鹵素”意欲意謂著氟、氯、溴及碘。

如於本文中所使用，名稱“鹵烷基”意欲意謂著如上述定義之烷基，其中每個氫原子可相繼地由一鹵素原子置換。該鹵烷基的實例包括(但不限於)CH₂F、CHF₂及CF₃。

如於本文中所使用，名稱“芳基”(單獨或與另一個基團組合)意謂著一包含6個碳原子的碳環芳香族單環基團，其可進一步并合至一第二5或6員碳環基團(其可為飽和或不飽和芳香族)。該芳基包括(但不限於)苯基、氫茚基、1-萘基、2-萘基及四氫萘基。該芳基可在該環烷基環或芳香環上的任一合適位置處連接至另一個基團。例如：

從該環系統所拉出的箭號線指為該鍵結可接附至該合適的環原子之任何一個。

如於本文中所使用，名稱“聯苯基”意欲意謂著二個苯基，其在苯基環上之任何一個可獲得位置處鍵結在一起。例如：

如於本文中所使用，名稱“雜芳基”意欲意謂著最高十個原子的單環或雙環系統，其中至少一個環為芳香族且包含1至4個選自於由O、N及S所組成之群的雜原子。該雜芳基取代基可經由一環碳原子或該雜原子之一來接附。該雜芳基的實例包括(但不限於)噻吩基、苯并咪唑基、苯并[b]噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、哌喃基、異苯并呋喃基、烯基、呫噸基、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡基、嘧啶基、噠基、吲基、異吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹基、異喹啉基、喹啉基、呔基、萘啶基、喹喏啉基、喹唑啉基、喏啉基、蝶啶基、異噻唑基、異基、基、異唑基、呋呫基、吲哚啉基、異吲哚啉基、噻唑并[4,5-b]-吡啶及螢光黃衍生物諸如：

如於本文中所使用，名稱"雜環"、"雜環的"或"雜環基"意欲意謂著包含1至4個選自於由O、N及S所組成之群的雜原子之5、6或7員非芳香族環系統。該雜環的實例包括(但不限於)吡咯啶基、四氫呋喃基、哌啶基、吡咯啉基、哌基、咪唑啶基、嗎福啉基、咪唑啉基、吡唑啶基、吡唑啉基及。

如於本文中所使用，名稱“雜雙環”(單獨或與另一個基團組合)意欲意謂著一如上述定義的雜環并合至另一個環(其可為雜環、芳基或任何於本文中所定義的其它環)。此雜雙環的實例包括(但不限於)香豆素、苯并[d][1,3]二呃、2,3-二氫苯并[b][1,4]二及3,4-二氫-2H-苯并[b][1,4]二呯。

如於本文中所使用，名稱“雜芳基”意欲意謂著一最高十個原子的單環或雙環系統，其中至少一個環為芳香族且包含1至4個選自於由O、N及S所組成之群的雜原子。該雜芳基取代基可經由環碳原子或該雜原子之一來接附。該雜芳基的實例包括(但不限於)噻吩基、苯并咪唑基、苯并[b]噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、哌喃基、異苯并呋喃基、 烯基、呫噸基、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡基、嘧啶基、噠基、吲基、異吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹基、異喹啉基、喹啉基、呔基、萘啶基、喹喏啉基、喹唑啉基、喏啉基、蝶啶基、異噻唑基、異基、基、異唑基、呋呫基、吲哚啉基及異吲哚啉基。

如於本文中所使用，名稱“雜環”、“雜環的”或“雜環基”意欲意謂著包含1至4個選自於由O、N及S所組成之群的雜原子之5、6或7員非芳香族環系統。該雜環的實例包括(但不限於)吡咯啶基、四氫呋喃基、哌啶基、吡咯啉基、哌基、咪唑啶基、嗎福啉基、咪唑啉基、吡唑啶基及吡唑啉基。

如於本文中所使用，名稱“雜原子”意欲意謂著O、S或N。

如於本文中所使用，名稱“經活化的二酸”意欲意謂著羧酸部分已轉換(就地或以分別的合成步驟)成例如(但不限於)酸鹵化物、琥珀酸酯或HOBt酯之二酸。例如，琥珀醯基氯及對苯二醯基氯皆為“二醯基氯”的實例。HOBt酯可藉由在適當的溶劑中，以脫水劑(諸如DCC、EDC、HBTU或其它)、鹼(諸如，DIPEA及HOBt)處理二酸而就地形成。經活化的二酸與胺之反應將造成酸官能基轉換成醯胺官能基。

如於本文中所使用，名稱“可偵測的標籤”意欲意謂著一可連結至本發明之化合物以產生探針或可連結至 IAP BIR區域的基團，如此當該探針與BIR區域結合時，該標籤允許對該探針進行直接或間接識別，以便其可經偵測、測量及定量。如於本文中所使用，名稱“親和性標記物”意欲意謂著一配體或基團，其可連結至本發明之化合物或IAP BIR區域，以允許從一溶液中萃取出另一種已接附該配體或基團的化合物。

如於本文中所使用，名稱“探針”意欲意謂著以一可偵測的標籤或親和性標記物標定的式I之化合物，及其能黏結(共價或非共價地)至IAP BIR區域。例如，當該探針非共價鍵結時，其可由一測試化合物取代。例如，當該探針共價鍵結時，其可使用來形成一交聯的加成物，其可由一測試化合物來定量及抑制。

如於本文中所使用，名稱“選擇性經一或多個取代基取代”或其相等名稱“選擇性經至少一個取代基取代”意欲意謂著隨後所描述之事件情況可或可不發生，及該描述包括該事件或情況發生的例子及不發生的例子。該定義意欲意謂著從零至五個取代基。

若該取代基它們本身與本發明之合成方法不相容時，該取代基可經一合適的保護基團(PG)來保護，其中該保護基團對在這些方法中所使用之反應條件安定。該保護基團可在該方法的反應程序中於合適的位置處移除，以提供想要的中間物或標的化合物。合適的保護基團及使用此合適的保護基團來保護及去保護不同取代基之方法已由熟知此技藝之人士所熟知；其實例可在T.格林尼(Greene)及 P.瓦刺(Wuts)之在化學合成中的保護基團(第3版)(約翰威利及宋斯(John Wiley & Sons)，NY(1999)，其全文以參考之方式併於本文)中發現。遍及全文所使用的保護基團實例包括(但不限於)Fmoc、Bn、Boc、Cbz及COCF3。在某些例子中，可特別選擇一取代基，以便其能在使用於本發明之方法的反應條件下反應。在這些情況下，該反應條件可將所選擇的取代基轉換成另一種在本發明之方法的中間化合物中有用的取代基，或轉換成一在標的化合物中想要的取代基。

遍及本文所使用之α-胺基酸的縮寫如下：

如於本文中所使用，名稱“殘基”當指為α-胺基酸時，其意欲意謂著一衍生自相符合的α-胺基酸之基團，其藉由消除該羧基之羥基與該α-胺基的一個氫來形成。例如，名稱Gln、Ala、Gly、Ile、Arg、Asp、Phe、Ser、Leu、Cys、Asn及Tyr各別代表L-麩醯胺酸、L-丙胺酸、甘胺酸、L-異白胺酸、L-精胺酸、L-天冬胺酸、L-苯丙胺酸、L-絲胺酸、L-白胺酸、L-半胱胺酸、L-天冬醯胺酸及L-酪胺酸之殘基。

如於本文中所使用，名稱“患者”意欲意謂著人類及非人類哺乳動物，諸如靈長類動物、貓、狗、豬、牛、羊、山羊、馬、兔、大白鼠、老鼠及其類似動物。

如於本文中所使用，名稱“前藥體”意欲意謂著一可在生理狀態下轉換或藉由溶劑分解成本發明之生物活性化合物的化合物。因此，名稱“前藥體”指為醫藥上可接受的本發明之化合物的前驅物。當將前藥體給藥至需要其之患者時，其可為無活性或顯示出有限的活性，但是其可活體內轉換成本發明之活性化合物。典型來說，前藥體可例如藉由在血液或其它器官中由酵素處理而水解，以便活體 內轉換而產生本發明之化合物。該前藥體化合物經常可在患者中提供優良溶解度、組織相容性或延遲釋放性(參見，邦德加(Bundgard)H.，前藥體之設計(1985)，pp.7-9，21-24(愛爾斯維爾(Elsevier)，阿姆斯特丹(Amsterdam))。前藥體的定義包括任何共價鍵結的載劑，當將此前藥體給藥至患者時，其可活體內釋放出本發明之活性化合物。可藉由改質存在於本發明之化合物中的官能基來製備本發明之化合物的前藥體，使得其此改質物可以例行的操控或活體內裂解成本發明之母化合物。

如於本文中所使用，名稱“醫藥上可接受的載劑、稀釋劑或賦形劑”意欲意謂著(但不限於)任何可接受可使用於患者(較佳為人類)之佐藥、載劑、賦形劑、助流劑、變甜劑、稀釋劑、防腐劑、染料/著色劑、風味促進劑、界面活性劑、潤溼劑、分散劑、懸浮劑、安定劑、等滲壓劑、溶劑、乳化劑或密封劑(諸如，脂粒、環糊精類、密封聚合物傳遞系統或聚乙二醇基質)。

如於本文中所使用，名稱“醫藥上可接受的鹽”意欲意謂著酸及鹼加成鹽二者。

如於本文中所使用，名稱“醫藥上可接受的酸加成鹽”意欲意謂著可保留自由態鹼(其非生物學或其它方面想要)的生物效率用及性質之那些鹽類，及其可使用無機酸，諸如氫氯酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及其類似物；及有機酸，諸如醋酸、三氟醋酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、反丁烯二酸、酒石酸、 檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲烷磺酸、乙磺酸、對-甲苯磺酸、水楊酸及其類似物來形成。

如於本文中所使用，名稱“醫藥上可接受的鹼加成鹽”意欲意謂著可保留自由態酸(其非生物學或其它方面想要)的生物學效率用及性質之那些鹽類。這些鹽類可藉由將無機鹼或有機鹼加入至自由態酸來製備。衍生自無機鹼的鹽包括(但不限於)鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂、鐵、鋅、銅、錳、鋁鹽及其類似物。衍生自有機鹼的鹽包括(但不限於)一級、二級及三級胺鹽、經取代的胺(包括天然產生之經取代的胺)、環胺及鹼性離子交換樹脂，諸如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二甲基胺基乙醇、2-二乙基胺基乙醇、二環己胺、離胺酸、精胺酸、組胺酸、咖啡因、普魯卡因、哈胺、膽鹼胺、甜菜鹼、乙二胺、葡萄糖胺、甲基葡萄糖胺、可可鹼、嘌呤類、哌、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺樹脂及其類似物。

如於本文中所使用，名稱“BIR區域黏結”意欲意謂著本發明之化合物在IAP BIR區域上的作用，其可阻礙或減少IAP黏結至BIR黏結蛋白質，或關於將BIR黏結蛋白質從IAP中移除。該BIR黏結蛋白質的實例包括(但不限於)凋亡蛋白酶及粒腺體衍生出的BIR黏結蛋白質(諸如Smac、Omi/WTR2A及其類似物)。

如於本文中所使用，名稱“細胞凋亡不足”意欲意謂著因為對患者有毒的細胞尚未凋亡而產生或繼續之疾病狀態。此包括(但不限於)殘存在未經治療的患者中之癌細 胞、在抗癌治療期間或之後殘存於患者中的癌細胞、或其作用對患者有毒之免疫細胞(包括嗜中性白血球、單核白血球及自動反應性T細胞)。

如於本文中所使用，名稱“治療有效量”意欲意謂著一式I之化合物的量，當將其給藥至患者時，其足以對與細胞凋亡不足相關之疾病狀態達成治療。該式I之化合物的量將依該化合物、欲治療的患者之症狀及其嚴重性及年齡而變化，但是其可由一般技藝人士考慮到其自身的知識及此公告而例行地決定。

如於本文中所使用，名稱“治療中”或“治療”意欲意謂著患者之與細胞凋亡不足相關(如揭示於本文)的疾病狀態之治療，其包括：(i)防止在患者中發生與細胞凋亡不足相關的疾病或症狀，特別是，當此哺乳動物易受該疾病或症狀感染但是尚未診斷出患有此病症時；(ii)抑制與細胞凋亡不足相關之疾病或症狀，即，遏制其發展；或(iii)減輕與細胞凋亡不足相關的疾病或症狀，即，造成症狀消退。

如於本文中所使用，名稱“治療癌”意欲意謂著將本發明之組合物給藥至遭受癌症折磨的患者(較佳為人類)，以藉由殺死癌細胞、抑制其生長或抑制其轉移生長來產生癌症緩和。

如於本文中所使用，名稱“防止疾病”意欲意謂著在癌症實例中，於外科手術後、化學療法後或放射性治療後，將本發明之醫藥組合物給藥至遭受癌症折磨的患者(較佳為人類)，以藉由殺死任何殘餘的癌細胞、抑制其生長或 抑制其轉移生長來防止該癌再生長。在此定義中亦包括預防將導致疾病(諸如氣喘、MS及其類似疾病)之前倖存(prosurvival)症狀。

如於本文中所使用，名稱“協同效應”意欲意謂著以本發明之化合物與本發明的化學療法藥劑或死亡受體同效劑之組合所獲得的效應大於僅以該化合物、藥劑或同效劑之一所獲得的效應；或有利的是，以上述化合物、藥劑或同效劑之組合所獲得的效應大於分別使用每種化合物、藥劑或同效劑所獲得之加成效應。此協同作用能夠以較小劑量來提供。

如於本文中所使用，名稱“細胞凋亡”或”計劃性細胞死亡”意欲意謂著細胞死亡的調節過程，其中一染色細胞可顯示出一組已良好標出特徵的生化標誌，其包括細胞薄膜出泡(blebbing)、細胞體收縮、核染質濃縮及DNA階梯；和任何凋亡蛋白酶主導的細胞死亡。

如於本文中所使用，名稱“BIR區域”或“BIR”可遍及全文交替地使用且意欲意謂著一特徵為一些不變的胺基酸殘基之區域，其在序列Cys-(Xaa1)2Cys-(Xaa1)16His-(Xaa1)6-8Cys內包括被保留的半胱胺酸及一個被保留的組胺酸殘基。典型來說，該保留序列之胺基酸序列為：Xaa1-Xaa1-Xaa1-Arg-Leu-Xaa1-Thr-Phe-Xaa1-Xaa1-Trp-Pro-Xaa2-Xaa1-Xaa1-Xaa2-Xaa2-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Leu-Ala-Xaa1-Ala-Gly-Phe-Tyr-Tyr-Xaa1-Gly-Xaa1-Xaa1-Asp-X aa1-Val-Xaa1-Cys-Phe-Xaa1-Cys-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Trp-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Asp-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-His-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Pro-Xaa1-Cys-Xaa1-Phe-Val，其中Xaa1為任何胺基酸及Xaa2為任何胺基酸或缺乏。該序列實質上與一提供於本文之XIAP、HIAP1或HIAP2的BIR區域序列相同較佳。

該BIR區域殘基編列在下列(參見基因組生物學(2001)1-10)：

如於本文中所使用，名稱“環鋅指狀物”或“RZF”意欲意謂著一具有下列保留序列之胺基酸序列的區域：Glu-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa2-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Cys-Lys-Xaa3-Cys-Met-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa3-Xaa1-Phe-Xaa1-Pro-Cys-Gly-His-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Cys-Xaa1-Xaa1-Cys-Ala-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Cys-Pro-Xaa1-Cys，其中Xaa1為任何胺基酸、Xaa2為Glu或Asp及Xaa3為Val或Ile。

如於本文中所使用，名稱”IAP”意欲意謂著一由IAP基因編碼出的多胜肽或蛋白質或其片斷。IAP的實例包括(但不限於)人類或老鼠NAIP(Birc 1)、HIAP-1(cIAP2，Birc 3)、HIAP-2(cIAP1，Birc 2)、XIAP(Birc 4)、存活蛋白質(survivin)(Birc 5)、生活蛋白質(ML-IAP，Birc 7)、ILP-2(Birc 8)及Apollon/Bruce(Birc 6)(參見例如美國專利案號6,107,041；6,133,437；6,156,535；6,541,457；6,656,704；6,689,562；德佛奧(Deveraux)及瑞得(Reed)，Gene Dev.13，239-252，1999；卡梭夫(Kasof)及夠美斯(Gomes)，J.Biol.Chem.，276，3238-3246，2001；福西克(Vucic)等人，Curr.Biol.10，1359-1366，2000；阿蝦伯(Ashab)等人，FEBS Lett.，495，56-60，2001，此些內容藉此以參考方式併入本文)。

如於本文中所使用，名稱“IAP基因”意欲意謂著一可編碼出一具有至少一個BIR區域且能在細胞或組織中調節(抑制或促進)細胞凋亡之多胜肽的基因。該IAP基因為一與下列至少一種有約50%或較多的核苷酸序列同一性之基因：人類或老鼠NAIP(Birc 1)、HIAP-1(cIAP2，Birc 3)、HIAP-2(cIAP1，Birc 2)、XIAP(Birc 4)、存活蛋白質(Birc 5)、生活蛋白質(ML-IAP，Birc 7)、ILP-2(Birc 8)及Apollon/Bruce(Birc 6)。將進行同一性測量之序列區域為一可編碼出至少一個BIR區域及一環鋅指狀區域的區域。哺乳動物IAP基因包括分離自任何哺乳動物來源之核苷酸序列。

如於本文中所使用，名稱“IC₅₀”意欲意謂著本發明之特別化合物可達成最大反應(諸如，在測量此反應之試驗中最大螢光探針黏結的置換)的50%抑制之量、濃度或劑量。

如於本文中所使用，名稱“EC₅₀”意欲意謂著本發明之特別化合物可達成細胞存活的50%抑制之量、濃度或劑量。

如於本文中所使用，名稱“調整”或“調節”意欲意謂著使用本發明之化合物來治療、預防、抑制、促進或誘導的功能或條件。例如，本發明之化合物可調整在患者中的IAP功能，因此藉由明顯減低或基本上消除經活化的細胞凋亡蛋白質(諸如，凋亡蛋白酶-3、7及9)與哺乳動物IAP之BIR區域的交互作用，或藉由在細胞中引發XIAP蛋白質喪失來促進細胞凋亡。

如於本文中所使用，名稱“促進細胞凋亡”意欲意謂著增加在所提供的細胞群體(試管內或活體內)中之細胞凋亡的數目。該細胞群體的實例包括(但不限於)卵巢癌細胞、結腸癌細胞、乳房癌細胞、肺癌細胞、胰癌細胞或T細胞及其類似物。將察知的是，在所提供的試驗中，由本發明之細胞凋亡促進化合物所提供的細胞凋亡促進程度將會有所變化，但是熟知技藝之人士可決定出細胞凋亡的程度之統計顯著性改變，此可鑑別出一可促進其它方面由IAP所限制的細胞凋亡之化合物。“促進細胞凋亡”意謂著經歷細胞凋亡的細胞數增加至少25%較佳，增加50%更佳及增加至少一倍最佳。所監視的樣品為正常經歷細胞凋亡不足之細胞樣品(即，癌細胞)較佳。偵測細胞凋亡程度改變(即，提高或減低)的方法描述在實例中，且包括定量DNA片斷的方法、定量從細胞質至細胞膜外邊的轉移磷酸醯基絲胺酸 (phosphatoylserine)之方法、測量凋亡蛋白酶的活化及藉由粒腺體來定量釋放進入細胞質中之細胞色素C及細胞凋亡抑制劑因子的方法。

如於本文中所使用，名稱“增殖性疾病”或“增殖性病症”意欲意謂著一由不適當高程度的細胞分裂、不適當低程度的細胞凋亡或二者所造成或產生自此原因之疾病。例如，癌(諸如，淋巴瘤、白血病、黑腫瘤、卵巢癌、乳房癌、胰癌及肺癌)與自體免疫性疾病為增殖性疾病之全部實例。

如於本文中所使用，名稱“死亡受體同效劑”意欲意謂著一能藉由直接或間接接觸該由死亡受體所主導之促細胞凋亡反應來激發的藥劑。例如，同效劑TRAIL受體抗體將黏結至TRAIL受體及觸發細胞凋亡反應。另一方面，其它藥劑(諸如，干擾素-α)可能以放大該促細胞凋亡反應之方式來觸發內生性TRAIL釋放及/或向上調節該TRAIL受體。

本發明之化合物或其醫藥上可接受的鹽可包含一或多個不對稱中心、對掌性軸及對掌性平面，從而可引起鏡像物、非鏡像異構物及其它立體異構物形式，且可就絕對立體化學來定義，諸如(R)-或(S)-，或如(D)-或(L)-(對胺基酸來說)。本發明意欲包括全部此可能的異構物和其外消旋及光學純形式。可使用對掌性合成子或對掌性試劑、或使用習知的技術(諸如，逆相HPLC)來解析，來製備光學活性(+)及(-)、(R)-及(S)-或(D)-及(L)-異構物。該些外消旋 混合物可經製備及之後分離成各別的光學異構物，或可利用對掌性合成來製備這些光學異構物。可使用已由熟習該項技術者所熟知的方法來解析該鏡像物，例如，可藉由形成非鏡像異構物的鹽類，然後利用結晶、氣相-液相或液相層析法、一鏡像物與一鏡像物特定的試劑之選擇性反應來分離。將亦由熟習該項技術者察知的是，若利用分離技術將想要的鏡像物轉換成另一種化學物質時，則需要額外步驟來形成想要的鏡像物形式。此外，可藉由使用光學活性試劑、基質、觸媒或溶劑的不對稱合成，或藉由不對稱轉換將一種鏡像物轉換成另一種來合成特定的鏡像物。

本發明之某些化合物可以兩性離子形式存在，且本發明包括這些化合物及其混合物的兩性離子形式。

效用

本發明之化合物可有用地作為IAP BIR區域黏結化合物，且就該些化合物其本身來說，本發明的組合物及方法包括應用至已受特徵為細胞凋亡不足的特別疾病狀態折磨或具有朝向此疾病狀態發展之體質的細胞或患者上。因此，本發明之化合物、組合物及方法可使用來治療細胞增殖性疾病/病症，其包括(但不限於)：i)癌症，ii)自體免疫性疾病，iii)炎性病症，iv)增生所引發的後醫學程序，包括(但不限於)外科手術、血管修復術及其類似程序。

本發明之化合物亦可有用地治療在計劃性細胞死亡或細胞凋亡機制(TRAIL、FAS、凋亡體(apoptosome))上有缺陷的疾病，諸如多發性硬化、動脈粥樣硬化、發炎、 自體免疫及其類似疾病。

該治療包括將本發明之化合物或其醫藥上可接受的鹽、或一包含一醫藥載劑與一治療有效量的本發明之化合物或其醫藥上可接受的鹽之醫藥組合物給藥至需要其之患者。特別是，本發明的化合物、組合物及方法可有用地用來治療包括實體腫瘤之癌症，諸如皮膚、乳房、腦、肺、睪丸癌及其類似病症。可由本發明之化合物、組合物及方法治療的癌包括(但不限於)下列：

本發明之化合物或其醫藥上可接受的鹽或其前藥體可以純形式或以適當的醫藥組合物來給藥，且此可經由蓋侖醫藥實施(Galenic pharmaceutical practice)之任何認可的模式來進行。

可藉由混合本發明之化合物與一適當之醫藥上可接受的載劑、稀釋劑或賦形劑來製備本發明之醫藥組合物，且可以固體、半固體、液體或氣體形式將其配製成製劑，諸如錠劑、膠囊、粉末、顆粒、軟膏、溶液、栓劑、注射劑、吸入劑、凝膠、微球體及氣溶膠。給藥此醫藥組合物的典型途徑包括(但不限於)口服、局部、經皮、吸入、非經腸式(皮下注射、靜脈內、肌肉內、胸骨內注射或輸液技術)、舌下、眼睛、直腸、陰道及鼻內。可將本發明之醫藥組合物配製成能讓包含在其中的活性成分，在將該組合物給藥至患者後具生物效性。將要給藥至實驗對象或患者的組合物可採用一或多種劑量單位形式，例如，錠劑可為單一劑量單位，及氣溶膠形式之本發明之化合物的容器可容納複數個劑量單位。製備此些劑形的實際方法已熟知或將由熟知此技藝之人士明瞭；例如，參見雷明頓氏(Remington’s)醫藥科學，第18版(馬克出版公司(Mack Publishing Company)，伊士頓(Easton)，Pa.，1990)。在任何事件中，該欲給藥的組合物將包含一治療有效量的本發明之化合物或其醫藥上可接受的鹽，其可用來治療如上所述之疾病狀態。

本發明之醫藥組合物可為固體或液體形式。在一個觀點中，該載劑為微粒，以便該組合物例如為錠劑或粉末形式。該載劑可為液體，且該組合物可為例如口服糖漿、可注射的液體或氣溶膠(其可用於例如吸入給藥)。

對口服給藥來說，該醫藥組合物為固體或液體形式較佳，其中在此視為固體或液體之形式中，其包括半固體、半液體、懸浮液及凝膠形式。

至於口服給藥用之固體組合物，該醫藥組合物可配製成粉末、細粒、壓錠劑、藥片、膠囊、口香糖、囊劑或其類似形式。此固體組合物典型將包含一或多種惰性稀釋劑或可食用載劑。此外，該組合物可存在有下列一或多種物質：結合劑，諸如羧甲基纖維素、乙基纖維素、微晶纖維素、黃蓍樹膠或明膠；賦形劑，諸如澱粉、乳糖或糊精；瓦解劑，諸如藻酸、藻酸鈉、普利莫凝膠(Primogel)、玉黍蜀粉及其類似物；潤滑劑，諸如硬脂酸鎂或史戴羅泰克斯(Sterotex)；助流劑，諸如膠體二氧化矽；變甜劑，諸如蔗糖或糖精；調味劑，諸如薄荷、水楊酸甲酯或柳橙香料；及著色劑。

當該醫藥組合物為膠囊形式(例如，明膠膠囊)時，其可包括(除了上述型式的物質外)液體載劑(諸如，聚 乙二醇)或油(諸如，大豆或蔬菜油)。

該醫藥組合物可為液體形式，例如，藥液酏、糖漿、溶液、乳液或懸浮液。該液體可用於口服給藥或利用注射來傳遞(此為二個實例)。當意欲用於口服給藥時，較佳的組合物包括(除了本化合物外)一或多種變甜劑、防腐劑、染料/著色劑及風味促進劑。在意欲利用注射給藥之組合物中，其可包含一或多種界面活性劑、防腐劑、潤溼劑、分散劑、懸浮劑、緩衝劑、安定劑及等滲壓劑。

本發明之液體醫藥組合物(不論它們為溶液、懸浮液或其它類似形式)可包含一或多種下列佐藥：無菌稀釋劑，諸如注射用水、鹽液溶液(較佳為生理鹽液)、侖爵式(Ringer’s)溶液、等滲壓氯化鈉、不揮發油(諸如，可提供作為溶劑或懸浮媒質的合成單或二甘油酯)、聚乙二醇類、甘油、丙二醇或其它溶劑；抗菌劑，諸如苄醇或對羥苯甲酸甲酯；密封劑，諸如環糊精類或經官能化的環糊精類，包括(但不限於)α、β或δ-羥基丙基環糊精或卡布提梭(Captisol)；抗氧化劑，諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，諸如乙二胺四醋酸；緩衝劑，諸如醋酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；及用來調整張力的試劑，諸如氯化鈉或右旋糖。該非經腸式製劑可封裝在由玻璃或塑膠製得之安瓿、可拋棄式注射器或多重劑量小玻瓶中。該可注射的醫藥組合物無菌較佳。

使用於非經腸式或口服給藥的本發明之液體醫藥組合物應該包括一定量的本發明之化合物，如此可獲得 一合適的劑量。在該組合物中，此量典型為至少0.01%的本發明之化合物。當意欲用於口服給藥時，此量可在該組合物之0.1至約70重量%間變化。對非經腸式用途來說，根據本發明之組合物及製劑可製備成該非經腸式劑量單元包含0.01至10重量%的本發明之化合物。該醫藥組合物可在給藥那時進一步稀釋；例如，該非經腸式調配物可進一步以一注射用之無菌、等滲壓溶液(諸如，0.9%的鹽液)、5重量%的右旋糖(D5W)、侖爵氏溶液或其它來稀釋。

本發明之醫藥組合物可使用來局部給藥，在此實例中，該載劑可合適地包含溶液、乳液、軟膏或凝膠基底。該基底可例如包含一或多種下列物質：礦脂、羊毛脂、聚乙二醇類、蜂蠟、礦物油、稀釋劑(諸如，水及醇)及乳化劑及安定劑。在局部給藥用之醫藥組合物中可存在有增稠劑。若意欲用於經皮給藥時，該組合物可包括一經皮貼片或離子透入裝置。該局部調配物可包含濃度從約0.1至約10%w/v(每單位體積的重量)的本發明之化合物。

本發明之醫藥組合物可例如以栓劑形式(其將在直腸中熔化及釋放藥物)使用於直腸給藥，以便治療例如結腸癌。該直腸給藥用的組合物可包括油狀基底，如為一合適的無刺激性賦形劑。此基底包括(但不限於)羊毛脂、可可脂及聚乙二醇。

本發明之醫藥組合物可包含多種能改質該固體或液體劑量單元的物理形式之物質。例如，該組合物可包括能繞著該活性成分形成一塗佈外殼的物質。該能形成塗 佈外殼之物質典型呈惰性，且可選自於例如糖、蟲膠及其它腸溶衣試劑。再者，該活性成分可裝入明膠膠囊中。

本發明之固體或液體形式的醫藥組合物可包括一能黏結至本發明之化合物因此輔助該化合物傳遞的試劑。可以此能力來作用的合適試劑包括(但不限於)單株或多株抗體、蛋白質或脂粒。

本發明之醫藥組合物可由能以氣溶膠來給藥的劑量單元組成。使用名稱”氣溶膠”來代表多種系統，其可從那些天然膠體變化至由加壓包裝所組成的系統。可以一經液化或加壓的氣體，或藉由能撒佈該活性成分的合適幫浦系統來傳遞。本發明之氣溶膠化合物可以單相、雙相或三相系統來輸送，以便輸送該活性成分。該氣溶膠之傳遞包括所需要的容器、激活劑、閥、次容器及其類似物，其可一起形成一成套配方。熟知技藝之人士可沒有過度的實驗而決定出較佳的氣溶膠。

可使用已在醫藥技藝中熟知的方法來製備本發明之醫藥組合物。例如，可藉由混合本發明之化合物與無菌的蒸餾水以便形成一溶液，來製備意欲藉由注射給藥的醫藥組合物。可加入界面活性劑以促進形成一均勻的溶液或懸浮液。界面活性劑為一與本發明之化合物非共價地互相作用，以便促進該化合物溶解或均勻懸浮在水性傳遞系統中之化合物。

以一治療有效量來給藥本發明之化合物或其醫藥上可接受的鹽，其中該有效量將依多種因素而變化，包 括：所使用的特定化合物之活性；該化合物的新陳代謝穩定性及作用長度；患者之年齡、體重、一般健康、性別及飲食；給藥模式及時間；排泄速率；藥物組合；特別的病症或症狀之嚴重性；及接受治療的患者。通常來說，每日的治療有效劑量可從每天約0.1毫克至約40毫克/公斤體重，或每天兩次本發明之化合物或其醫藥上可接受的鹽。

組合療法

本發明之化合物或其醫藥上可接受的鹽亦可與一或多種描述在下列的治療藥物同步給藥、在給藥該治療藥物前或後給藥。此組合療法可包括給藥單一藥學劑型調配物(其包含本發明之化合物與一或多種提供在下列的其它藥劑)和給藥本發明之化合物與每種擁有分別的藥學劑型調配物之其它藥劑。例如，可將本發明之化合物與一化學療法的藥劑(諸如，泰克索(Taxol)(太平洋紫杉醇(paclitaxel))、剋癌易(taxotere)、鬼臼乙叉、順氯氨鉑、長春新鹼、長春鹼及其類似物)一起，以單一口服劑量組合物(諸如，錠劑或膠囊)來給藥至患者，或每種藥劑以分別的口服劑量調配物或經由靜脈內注射來給藥。若使用分別的劑量調配物時，本發明之化合物與一或多種其它藥劑可在基本上相同的時間(即，同時發生)處或在分別交錯的時間(即，相繼地)下給藥；組合療法經了解包括全部這些攝藥法。此外，這些化合物可與能刺激死亡受體細胞凋亡途徑之分子透過直接或間接的方式來協同，如例如，本發明之化合物可與可溶的TRAIL任何藥劑或可造成TRAIL的循環 程度增加之程序(諸如，干擾素-α或輻射)組合著使用。

因此，本發明亦包括將本發明之化合物與輻射療法或一或多種其它藥劑(諸如描述在WO 03/099211(PCT/US03/15861)中的那些，此文獻藉此以參考方式併入本文)組合著使用。

此其它藥劑的實例包括(但不限於)下列：a)動情激素受體調節劑、b)男性荷爾蒙受體調節劑、c)類視色素受體調節劑、d)細胞毒素藥劑、e)抗增生劑、f)異戊二烯基蛋白質轉換酶抑制劑、g)HMG-CoA還原酶抑制劑、h)HIV蛋白質酶抑制劑、i)反轉轉錄酶抑制劑、k)血管新生抑制劑、i)PPAR-γ同效劑、m)PPAR-δ同效劑、n)內在多抗藥性的抑制劑、o)止吐劑、p)可有用地治療貧血症的藥劑、q)可有用地治療嗜中性白血球減少症的藥劑、r)免疫提高藥物、s)蛋白酶體抑制劑，諸如萬科(Velcade)及MG132 (7-Leu-Leu-醛)(參見喜(He)等人，在致癌基因(2004)23，2554-2558中)；t)HDAC抑制劑，諸如丁酸鈉、丁酸苯酯、羥基醯胺酸類、細胞周期素四胜肽及其類似物(參見羅薩特(Rosato)等人，分子癌治療，2003，1273-1284)；’ u)在蛋白酶體中之化學胰蛋白酶似的活性抑制劑；v)E3接合酶抑制劑；w)免疫系統調節劑，諸如干擾素-α及可引發細胞素(諸如，白細胞介素、TNF)釋放或引發死亡受體配體(諸如，TRAIL)釋放的離子化輻射(UVB)；x)死亡受體TRAIL之調節劑及TRAIL同效劑(諸如，人化的抗體HGS-ETR1及HGS-ETR2)；及或與輻射療法組合或相繼地使用，以便治療癌。

其它組合亦可包括能減低前述藥劑之毒性(諸如，肝毒性、神經元毒性、腎毒性及其類似毒性)的藥劑。

在一個實例中，共同給藥本發明的式I之化合物之一與一死亡受體同效劑(諸如TRAIL，諸如模仿TRAIL的小分子或抗體)可產生優良的協同效應。再者，本發明之化合物可與任何可造成TRAIL的循環程度增加之化合物組合著使用。

長春花屬生物鹼及相關的化合物

可與本發明之核鹼基(nucleobase)寡聚物組合著使用來治療癌及其它贅瘤的長春花屬生物鹼包括長春新鹼、長春鹼、長春地辛、長春氟寧(vinflunine)、長春瑞賓 (vinorelbine)及脫水長春鹼。

海兔毒素類(dolastatins)為在長春花屬生物鹼結合區處主要干擾微管蛋白之寡肽類。這些化合物亦可與本發明之化合物組合著使用來治療癌及其它贅瘤。海兔毒素包括海兔毒素-10(NCS 376128)、海兔毒素-15、ILX651、TZT-1027、辛普羅史達汀(symplostatin)1、辛普羅史達汀(symplostatin)3及LU 103793(西馬多丁(cemadotin))。

隱藻素類(cryptophycins)(例如，隱藻素1及隱藻素52(LY 355703))可在長春花屬生物鹼結合區內黏結微管蛋白且引發G2/M遏制及細胞凋亡。任何這些化合物皆可與本發明之化合物組合著使用來治療癌及其它贅瘤。

可與本發明之化合物相關連地使用來治療癌及其它贅瘤的其它微管破裂化合物描述在美國專利案號6,458,765；6,433,187；6,323,315；6,258,841；6,143,721；6,127,377；6,103,698；6,023,626；5,985,837；5,965,537；5,955,423；5,952,298；5,939,527；5,886,025；5,831,002；5,741,892；5,665,860；5,654,399；5,635,483；5,599,902；5,530,097；5,521,284；5,504,191；4,879,278；及4,816,444，及美國專利申請案公告案號2003/0153505A1；2003/0083263A1；及2003/0055002A1(其每篇藉此以參考方式併入本文)中。

紫杉醇類(taxanes)及其它微管安定化合物

紫杉醇類(諸如，太平洋紫杉醇、多西紫杉醇(doxetaxel)、RPR 109881A、SB-T-1213、SB-T-1250、 SB-T-101187、BMS-275183、BRT 216、DJ-927、MAC-321、IDN 5109及IDN 5390)可與本發明之化合物組合著使用來治療癌及其它贅瘤。亦可在本發明之方法及組合物中使用紫杉醇類似物(例如，BMS-184476，BMS-188797)及功能相關的非紫杉醇類(例如，艾普西隆類(epothilones)(例如，艾普西隆A、艾普西隆B(EPO906)、去氧艾普西隆B及艾普西隆B內醯胺(BMS-247550))、伊留賽洛賓(eleutherobin)、狄斯可得莫里得(discodermolide)、2-表-狄斯可得莫里得、2-脫-甲基狄斯可得莫里得、5-羥基甲基狄斯可得莫里得、19-脫-胺基羰基狄斯可得莫里得、9(13)-環狄斯可得莫里得及勞李馬里得(laulimalide))。

可與本發明之化合物組合著使用來治療癌及其它贅瘤的其它微管安定化合物描述在美國專利案號6,624,317；6,610,736；6,605,599；6,589,968；6,583,290；6,576,658；6,515,017；6,531,497；6,500,858；6,498,257；6,495,594；6,489,314；6,458,976；6,441,186；6,441,025；6,414,015；6,387,927；6,380,395；6,380,394；6,362,217；6,359,140；6,306,893；6,302,838；6,300,355；6,291,690；6,291,684；6,268,381；6,262,107；6,262,094；6,147,234；6,136,808；6,127,406；6,100,411；6,096,909；6,025,385；6,011,056；5,965,718；5,955,489；5,919,815；5,912,263；5,840,750；5,821,263；5,767,297；5,728,725；5,721,268；5,719,177；5,714,513；5,587,489；5,473,057；5,407,674；5,250,722；5,010,099及4,939,168；及美國專利申請案公告 案號2003/0186965A1；2003/0176710A1；2003/0176473A1；2003/0144523A1；2003/0134883A1；2003/0087888A1；2003/0060623A1；2003/0045711A1；2003/00230|82A1；2002/0198256A1；2002/0193361A1；2002/0188014A1；2002/0165257A1；2002/015611oA1；2002/0128471A1；2002/0045609A1；2002/0022651A1；2002/0016356A1；2002/0002292A1中，此些每篇藉此皆以參考方式併入本文。

可與本發明之化合物給藥的其它化學療法藥劑編列在下列表中：

其它組合亦可包括能減低前述藥劑毒性(諸如，肝毒性、神經元毒性、腎毒性及其類似毒性)之藥劑。

篩選試驗

本發明之化合物亦可以一能篩選出其它可黏結至IAP BIR區域的化合物之方法來使用。通常地說，為了將本發明之化合物使用在用來鑑別黏結至IAP BIR區域的化合物之方法中，讓該IAP鍵結至一載體且將本發明之化合物加入至該試驗。

再者，本發明之化合物可鍵結至該載體且加入IAP。

已有一些可測量出本發明之化合物黏結至BIR區域的方法。在一種方法中，本發明之化合物可例如經螢光性或放射性標定且直接測量該黏結。例如，此試驗可藉由讓該IAP接附至一固體載體、加入一本發明之經可檢測標定的化合物、洗滌掉過量試劑及測量該可偵測之標籤量是否存在於該固體載體上而完成。可使用數個已由熟習該項技術者所熟知的阻礙及洗滌步驟。

在某些實例中，僅標定該些組分之一。例如，可標定在該BIR區域中的特定殘基。再者，可以不同標籤來標定多於一種組分；例如，可對BIR區域使用I125及對探針使用螢光性標籤。

本發明之化合物亦可使用作為競爭者，以篩選出其它候選藥物或測試化合物。如於本文中所使用，名稱”候選藥物”或”測試化合物”可交替使用及描述為任何測試生物活性的分子，例如，蛋白質、寡胜肽、小有機分子、多糖類、多核苷酸及其類似物。該化合物可直接或間接改變IAP生物活性。

候選藥物可包括多種化學種類，然而典型上它們為具有分子量高於100及低於約2,500道耳吞的小有機分子。該候選藥劑典型包括與蛋白質進行結構交互作用所需之官能基(例如，氫鍵及親油性黏結)，典型包括至少一胺、羰基、羥基、醚或羧基。該候選藥物經常包括環狀碳或雜 環結構及/或經一或多個官能基取代的芳香族或聚芳香族結構。

可從任何數目的來源(包括合成或天然化合物基因庫)來獲得候選藥物。例如，可獲得許多用於無規及導向廣泛多種有機化合物及生物分子(包括無規寡核苷酸類之表現性)合成的方法。此外，可獲得或容易地製造出以細菌、真菌、植物及動物萃取物之形式的天然化合物之基因庫。額外的是，天然或合成所產生之基因庫及化合物可容易地透過習知的化學、物理及生化方法來改質。

可藉由結合一IAP BIR區域與一探針，以在第一樣品中形式一探針：BIR區域複體，接著加入一來自第二樣品的測試化合物來進行競爭性篩選試驗。測量該測試之黏結，在二個樣品間之黏結變化或差異指示出該測試化合物顯示出能黏結至BIR區域及可潛在調節IAP的活性。

在一個實例中，可透過使用該競爭性黏結試驗來測量該測試化合物之黏結。在此具體實施例中，該探針可以一螢光性標籤來標定。在某些情況下，於該測試化合物與該探針間會有一競爭性黏結。表現出探針的測試化合物(其將造成螢光性改變，如與對照比較)視為黏結至該BIR區域。

在一個實例中，該測試化合物可經標定。首先，將該測試化合物或本發明之化合物或二者加入至該IAP BIR區域一段足以允許黏結而形成複體的時間。

典型上需要在4℃至40℃間培養10分鐘至約1小 時來形成該探針：BIR區域複體，以允許高產量篩選。通常會移除或沖掉任何過量試劑。然後加入該測試化合物，接著為經標定的組分之存在或缺乏，以指示出黏結至該BIR區域。

在一個實例中，首先加入探針，接著為該測試化合物。探針之取代為該測試化合物黏結至該BIR區域的跡象，從而能黏結及潛在調節IAP之活性。可標定任一種組分。例如，探針存在於清洗溶液中時指示出其已由該測試化合物置換。再者，若該測試化合物經標定時，則探針存在於該載體上時指示出已取代。

在一個實例中，可首先加入該測試化合物，且溫育及洗滌，接著為加入探針。缺乏探針黏結可指示出該測試化合物已以較高的親和力鍵結至該BIR區域。因此，若該探針經偵測已在該載體上時(與缺乏測試化合物黏結結合)，此可指示出該測試化合物能黏結至該BIR區域。

藉由篩選測試化合物其調節IAP活性的能力來測試調變，且包括結合一測試化合物與一IAP BIR區域(如上所述)及測量在IAP的生物活性上之改變。因此，於此實例中，該測試化合物應該黏結至BIR區域(雖然此可不需要)及改變其生物活性(如於本文中所定義)二者。

可在該試驗中使用正對照及負對照。對全部對照及測試樣品進行多次試驗，以獲得統計顯著性結果。在溫育後，全部樣品皆經清洗而無非特別鍵結的物質並測量所鍵結的探針量。例如，若使用放射性標記時，該樣品可以 閃爍計數器來計數，以測量所鍵結的化合物量。

典型來說，在該試驗中所偵測的訊號可依該標籤的本質而包括螢光性、共振能量轉移、時間解析的螢光性、放射性、螢光偏振、電漿共振或化學發光及其類似性質。在本發明中，於進行篩選試驗時有用的可偵測標籤包括螢光性標籤，諸如螢光黃、奧勒崗(Oregon)綠、丹磺、若丹明、四甲基若丹明、德州(Texa)紅、Eu³⁺；化學發光標籤，諸如發光酶；比色標籤；酵素標誌；或放射性同位素，諸如氚、I¹²⁵及其類似物。

在進行本發明之篩選試驗中有用的親和性標記物包括生物素、多組胺酸及其類似物。

合成及方法

合成本發明之化合物的一般方法顯示在下列且此揭示的目的僅用於闡明，其並不想要解釋為限制方法，可利用任何其它方法來製得該些化合物。熟習該項技術者將容易地察知，可獲得一些方法來製備本發明之化合物。

一般程序

已設想出數種用來製備由式I及式II所表示的對稱或非對稱性橋接化合物之方法。一般方法闡明在方法1至8及方法17至20中，同時特定實例闡明在方法9至16及方法21至26中。

方法1闡明用來製備式I之雙炔基橋接化合物的一般程序。以NaH來去質子化N-PG¹-2-羥基脯胺酸且以炔丙基溴處理，以提供該脯胺酸中間物1-i。以胜肽耦合劑來活 化1-i之羧酸且以一級或二級胺處理，去保護PG¹以提供醯胺中間物1-ii。可藉由以胜肽耦合劑來活化PG²(H)N(R³)CHCO₂H之羧酸，接著加入1-ii以提供該經完整保護的醯胺(其可進一步在PG²處去保護，以提供醯胺1-iii)，來達成PG²(H)N(R³)CHCO₂H與1-ii之胜肽耦合。以胜肽耦合劑來活化PG³(R¹)N(R²)CHCO₂H的羧酸，接著加入1-iii以提供醯胺中間物1-iv。使用適當的觸媒系統，藉由同耦合該1-iv之炔部分來製備該雙炔基橋接部分，隨後去保護PG³，以提供化合物1-v。

如闡明在方法2中，經由典型的醯胺耦合/去保護方法來製備中間物2-i。就此來說，以胺基酸耦合試劑來活化PG¹-順-2-胺基-Pro(PG²)-OH之羧酸部分，以胺處理，以提供相符合的醯胺，接著在適當的反應條件下移除PG¹，以提供中間物2-i。以類似的方式讓PG³(H)N(R³)HCCO₂H與2-i耦合，接著為PG³去保護，以提供2-ii。讓 PG⁴(R¹)N(R²)HCCO₂H與2-ii耦合，以提供2-iii。去保護PG²以提供2-iv。

方法3闡明可藉由以適當經活化的二酸，於鹼存在下處理3-i，以提供3-ii，來製備式I之醯胺橋接化合物。去保護PG⁴以提供通式3-iii的化合物。二酸之活化可包括使用活性酯類、醯基氯類、醯基溴類、琥珀醯胺酯類、HOBt酯類及使用其它已使用來形成醯胺鍵結的試劑。

方法4闡明烷基橋接的化合物，其可使用描述於此的方法來製備。以0.5當量包含二個離去基團的烷基鏈(諸如，1,5-二溴戊烷、1,10-二溴癸烷及其類似物)來處理3-i，以提供中間物4-i。再者，3-i與二醛之還原性胺化可產生中間物4-i。PG⁴之去保護可產生式4-ii的化合物。

方法5闡明一種經由雙炔橋接單元來橋接二個BIR黏結單元的方法。耦合5-i與5-ii可提供該對稱橋接的中間物5-iii及5-v與不對稱中間物5-iv之混合物。可使用諸如色層分析法或再結晶方法來獲得5-ii、5-iii及5-v之分離。中間物5-iii、5-iv及5-v的去保護(各自獨立或如為一結合的混合物)可提供化合物5-vi、5-vii及5-viii。

在方法6中闡明其它不對稱橋接化合物的製備方法。耦合5-i與6-i將提供一中間物6-ii、5-iii及6-iii之混合物。可使用諸如色層分析法或再結晶方法來獲得6-ii、5-iii及6-iii之分離。去保護中間物6-iii的PG⁴可提供化合物6-iv。

另一個對策包括經由雙醯胺橋接基團來橋接二個BIR黏結單元，諸如闡明在方法7及8中。

以胜肽耦合劑來活化經單保護的橋接基團HO2C-L-CO2PG5，隨後以中間物3-i處理以提供中間物7-ii。去保護PG5可提供中間物7-iii。以胜肽耦合劑來處理7-iii，接著7-iv以提供7-v。去保護PG4及PG400可提供化合物7-vi。

可應用類似的方法來製備已在P2與P3間橋接之不對稱橋接的BIR黏結單元，如闡明在方法8中。以環狀酐(諸如，琥珀酸或戊二酸酐)來處理8-i，以提供中間物8-ii。以醯胺耦合劑接著3-i來處理8-ii，以提供中間物8-iii。去保護PG⁴可提供化合物8-iv。

方法9闡明化合物1之合成。以在DMF中的NaH，接著炔丙基溴來處理Boc-順-2-羥基-L-脯胺酸，以提供中間物9-1。讓醯胺與(R)-1,2,3,4-四氫-1-萘胺耦合，及以TFA進行Boc去保護，以提供中間物9-2。進行Boc-t-BuGly-OH與9-2之醯胺耦合，接著以TFA進行Boc去保護以提供中間物9-3。Boc-MeAla-OH與中間物9-3的醯胺耦合可提供中間物9-4。使用CuI/TMEDA觸媒，在O₂下進行9-4之乙炔基團的同耦合可產生中間物9-5，對其使用4N在1,4-二中的HCl來去保護，以提供化合物1‧2HCl。

使用中間物10-6來製備化合物2及3(參見方法10至12)。使用類似於中間物9-4所描述的程序，在第一步驟中使用Fmoc-AMPC(2S,4S)-OH來製備中間物10-5。使用鹼(諸如，20%的嗎福啉)，在溶劑(諸如，THF)中移除Fmoc保護基團，以提供中間物10-6。

以0.5當量在THF中之癸二醯基氯來處理中間物10-6，以提供11-1。

使用4N在1,4-二中的HCl來移除Boc保護基團，以提供化合物2‧2HCl(方法11)。

類似地，以0.5當量在THF中的對苯二醯基氯來處理中間物10-6，以提供12-1。使用1N在1,4-二中的HCl來移除Boc保護基團，以提供化合物3‧2HCl(方法12)。

方法13闡明化合物4及5之製備。在氧環境下，使用CuCl及TMEDA觸媒系統，於丙酮中耦合中間物9-4及13-1，以提供中間物9-5、13-2及13-3之混合物。利用矽膠層析法分離可提供各別的中間物。藉由以4N在1,4-二中的HCl來處理，以分別地去保護中間物13-2及13-3，以各別提供化合物4‧2HCl及5‧2HCl。

方法14闡明化合物6之製備。在氧環境下，使用CuCl及TMEDA觸媒系統，於丙酮中耦合中間物9-4及14-1。利用矽膠層析法從所得的混合物分離出中間物14-2。藉由以4N在1,4-二中的HCl處理來去保護該中間物14-2，以提供化合物6‧2HCl。

方法15闡明P2-P3橋接的化合物7及8之製備。以戊二酸酐來處理中間物15-1以提供中間物15-2。以HBTU、HOBt及DIPEA來處理15-2，接著加入在DMF中的10-6以提供中間物15-3。使用H₂在Pd/C上來移除Cbz保護基團，以產生中間物15-4。以Boc-N-MeAla-OH來醯化15-4可提供中間 物15-5，其使用4N在1,4-二中的HCl來對Boc去保護，以提供化合物7‧2HCl。

使用由聚苯乙烯支撐、在DMF中的N-甲基哌，從化合物7‧2HCl中移除Fmoc保護基團以提供化合物8。使用4N在1,4-二中的HCl，從中間物15-3移除Boc保護基團，以提供化合物9‧HCl(參見方法16)。

方法17闡明藉由磺醯胺連結橋接的化合物之合成。以二磺醯基氯試劑來處理3-i，以提供中間物17-i。去保護PG⁴以提供化合物17-ii。

類似地，以雙異氰酸鹽來處理3-i以提供中間物18-i，之後，去保護PG⁴以產生化合物18-ii。

方法19a及19b描述出到達化合物3-iii、17-ii或18-ii(其中A=CO及Q=NR4R5)的另一種途徑。以LG-L-LG來處理經保護的胺基-脯胺酸衍生物19-1，以提供中間物19-2，然後在PG1處去保護以產生中間物19-3。藉由胺基酸耦合/去保護序列(如較早描述)將中間物19-3轉換成中間物19-5。第三胺基酸耦合步驟可將中間物19-5轉換成中間物19-6。19-6在PG2處去保護可產生該二酸中間物19-7。以胺基酸耦合試劑，接著R4R5NH來處理19-7以產生中間物19-8，之後，去保護PG4以提供化合物19-9。

此方法可應用至橋接的雙脯胺酸醯胺類、磺醯胺類及尿素類之合成。例如，在該橋接基團包括Ar部分之實例中，X-L-X=-NHS(O)₂-Ar-S(O)₂NH-、NHC(O)-Ar-C(O)NH-或-NHC(O)NH-Ar-NHC(O)NH-、-O-CH₂ArCH₂-O-。

再者，該脯胺酸衍生物19-2可在PG2處去保護及轉換成醯胺中間物20-3。在如上所述之類似程序後，20-3可轉換成化合物19-9。

化合物20之合成闡明在方法21中。以對苯二醯基氯來處理N-Boc-順-4-胺基-L-脯胺酸甲基酯(21-1)，以提供中間物21-2，將其進一步以TFA去保護以產生中間物21-3。使用HBTU及HOBt讓中間物21-3耦合至Boc-t-BuGyl-OH(21-4)，接著TFA去保護，以提供中間物21-6。使用HBTU及HOBt讓中間物21-6耦合至Boc-N-MeAla-OH(21-7)，以提供中間物21-8。使用LiOH皂化該甲基酯以提供中間物21-9。使用HBTU及HOBt來耦合中間物21-9與苯乙胺，以提供中間物21-10，使用在1,4-二中的HCl來對其去保護， 以提供化合物20‧2HCl。

方法21

使用此方法來製備一些脯胺酸醯胺衍生物，諸如化合物19至24及46至51。此顯示在方法22中，其中讓中間物21-9耦合至2-丙基醯胺，接著為HCl去保護，以產生化合物22‧2HCl，同時讓中間物21-9耦合至1,1-二苯基甲基胺，接著以HCl去保護以提供化合物24‧2HCl。

吡咯啶衍生物之製備則描述在方法23中。讓該中間物21-8之酯部分還原成醇23-1，隨後將其氧化成醛23-2。使用苯乙胺之還原性胺化可提供中間物23-4。以乙醯基氯或苄醯基氯來醯化23-4，以各別提供23-5及23-6。以1N在 1,4-二中的HCl來去保護，以提供化合物25‧2HCl及27‧2HCl。

以甲磺醯基氯來磺醯化23-4，接著以1N在1,4-二中的HCl來去保護，以提供化合物26‧2HCl。

中間物24-1可對製備醚橋接的化合物提供一有用的樣板。從N-Boc-順-4-羥基-L-脯胺酸及α,α’-二溴-對-二甲苯來製備中間物24-1，如描述在下列。醯胺耦合及使用TFA對Boc保護基團去保護，以提供中間物24-3。如上所述般相繼進行二個胺基酸耦合及去保護步驟，以提供化合物29‧2HCl。

方法24

使用1,3-苯二磺醯基氯來橋接中間物10-6，以提供中間物25-1。以4N在1,4-二中的HCl來去保護，以提供化合物33，如為其雙HCl鹽。

類似地，使用二異氰酸1,4-亞苯酯來橋接中間物10-6，以提供中間物26-1，之後以TFA去保護以提供化合物44，如為雙TFA鹽。

在方法27中闡明化合物35之製備。使用在THF中的哌啶對中間物10-1進行處理來去保護，以提供中間物27-1。耦合27-1與Cbz-Gly-OH，接著進行Boc去保護以提供中間物27-3‧TFA。耦合27-3與Boc-t-BuGly-OH，接著進行Boc去保護以提供中間物27-5‧TFA。耦合27-5‧2TFA與Boc-NMeAla-OH以提供中間物27-6。使用H₂及Pd/C來移除Cbz基團以產生27-7，對其使用對苯二醯基氯橋接以提供中間物27-8。使用4N在1,4-二中的HCl對中間物27-8去保護，以提供化合物35‧2HCl。

從光學活性(R)-2-羥基-1-苯基乙基胺(28-1)來製備多種對掌性胺。對中間物28-1進行Boc保護以提供28-2。以多種烷基鹵化物來烷基化該28-2之醇部分，以提供中間物28-3、28-4及28-5。以HCl來對中間物28-3、28-4及28-5去保護，以產生對掌性胺28-6、28-7及28-8。

以類似於化合物22及24所闡明的方式(參見方法22)讓中間物28-6、28-7及28-8與中間物21-9耦合，以各別提供化合物63、64及65。

其它對掌性胺可商業購得或經由一些方法來製備，包括酮類、醇類或疊氮類轉換或互相轉換成胺類、使用對掌性或非對掌性化學及經由已在此項技藝中熟知之方法(諸如，色層分析法或結晶)的異構物對掌性解析。

例如，方法29闡明光學富含的不對稱1,1-二苯基甲胺類之鏡像選擇性合成，其可利用下列方法來製備：將芳基亞硼酸類加入至對掌性亞硫醯亞胺類，接著以酸來水解亞硫醯胺類，以提供特徵為中間物29-4與29-5之光學富含的胺中間物(波山(Bolshan)Y.；巴替(Batey)R.A.，Org.Letters，2005，7，1481-1484)。

以類似於化合物22及24所闡明的方法來耦合中間物29-4及29-5與中間物21-9(參見方法方法22)，以各別提供化合物66及67。

已存在有數種方法可用來將萘滿酮類轉換成對掌性1,2,3,4-四氫萘基-1-胺類(例如，由R.A.史脫克(Stalker)等人所報導的方法(四面體(Tetrahedron)，2002，58，4837))，如概述在下列：

這些對掌性胺可使用類似於如在方法21及22中所闡明的方法來摻入本發明之化合物中。

上述方法可應用至本發明之對稱性化合物及非對稱性化合物二者。取代基A¹、A、Q、Q¹、R¹、R¹⁰⁰、R²、 R²⁰⁰、R³、R³⁰⁰及其類似物如於本文中所定義。LG為離去基團，諸如例如，Cl、Br、I、OTs、OSu或OMs。

實例

遍及全文使用下列縮寫：Boc：三級丁氧基羰基；Cbz：苄氧基羰基；DCM：二氯甲烷，CH₂Cl₂；DIPEA：二異丙基乙基胺；DMAP：4-(二甲基胺基)吡啶；DMF：N,N-二甲基甲醯胺；DTT：二硫蘇糖醇；EDC：3-二甲基胺基丙基-3-乙基碳化二醯亞胺氫氯酸；EDTA：乙二胺四醋酸；Fmoc：N-(9-茀基甲氧基羰基)；HBTU：六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基；HCl：氫氯酸；HOAc：醋酸；HOBt：1-羥基苯并三唑；HPLC：高性能液相層析法；LCMS：液相層析法-質譜儀；MeOH：甲醇；MgSO₄：硫酸鎂；MS：質譜； NaHCO3：碳酸氫鈉；Pd/C：鈀/碳；TEA：三乙胺；THF：四氫呋喃；及TMEDA：N,N,N,N-四甲基乙二胺。

合成方法

化合物1之合成

步驟1：中間物9-1

在0℃下，於N₂中，將NaH(440毫克，11.0毫莫耳)懸浮在乾DMF(5毫升)中。將Boc-順-2-羥基-L-脯胺酸(1.00克，4.0毫莫耳)溶解在乾DMF(15毫升)中且將其逐滴加入至該NaH懸浮液。讓該混合物留在0℃下攪拌10分鐘。將炔丙基溴(560微升，5.0毫莫耳)逐滴加入至該溶液。在0℃下攪拌該混合物1小時，然後以H₂O中止反應。將該些成分與EtOAc及10%檸檬酸一起加入至一分離漏斗(直到pH~2)。收集有機層，在減壓下乾燥及濃縮。迅速層析(二氧化矽，己烷類/THF)以產生中間物9-1，如為一透明的油。MS(m/z)M+Na=292。

步驟2：中間物9-2

在N₂中，將中間物9-1(560毫克，2.1毫莫耳)、HOBt(444毫克，2.9毫莫耳)、EDC(563毫克，2.9毫莫耳)及DIPEA(1.46毫升，8.4毫莫耳)溶解在乾二氯甲烷(10毫升)中，且在室溫下攪拌10分鐘。然後，加入1,2,3,4-(R)-四氫萘基-1-胺(368微升，2.5毫莫耳)且將該溶液留在室溫下攪拌 24小時。然後，將該些成分與EtOAc一起加入至分離漏斗，且以10%檸檬酸(2×)、飽和的NaHCO₃(2×)及鹽水清洗。收集有機層，在減壓下乾燥及濃縮。在室溫下以5毫升50%的CH₂Cl₂/TFA來處理該產物1小時。在真空中移除揮發物及將殘餘物與二乙基醚磨碎，以提供中間物9-2‧TFA。MS(m/z)M+1=299。

步驟3：中間物9-3

在N₂下，將Boc-t-Bu-Gly-OH(484毫克，2.1毫莫耳)、HOBt(375毫克，2.4毫莫耳)、HBTU(910毫克，2.4毫莫耳)及DIPEA(1.20毫升，7毫莫耳)溶解在乾DMF(10毫升)中，及在室溫下攪拌10分鐘。然後，加入中間物9-2(720毫克，1.75毫莫耳)及將該溶液留在室溫下攪拌24小時。然後，將該些成分與EtOAc一起加入至分離漏斗，且以10%檸檬酸(2×)、飽和NaHCO₃(2×)及鹽水清洗。收集有機層，在減壓下乾燥及濃縮。在室溫下，以10毫升50%的CH₂Cl₂/TFA來處理所產生的產物1小時。在真空中移除揮發物及將殘餘物與二乙基醚磨碎，以提供中間物9-3‧TFA。MS(m/z)M+1=412。

步驟4：中間物9-4

在N₂下，將Boc-N-Me-Ala-OH(278毫克，1.37毫莫耳)、HOBt(227毫克，1.49毫莫耳)、EDC(293毫克，1.49毫莫耳)及DIPEA(796微升，4.6毫莫耳)溶解在乾二氯甲烷(10毫升)中及在室溫下攪拌10分鐘。然後，加入中間物9-3‧TFA(600毫克，1.14毫莫耳)及將該溶液留在室溫下攪拌24 小時。加入EtOAc及以10%檸檬酸(2×)、飽和NaHCO₃(2×)及鹽水來清洗有機層，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在減壓下移除揮發物。利用矽膠層析法來純化產物，以10-100%己烷類/THF沖提，以提供中間物9-4。MS(m/z)M+Na=619。

步驟5：化合物1

在O₂環境下，將中間物9-4(100毫克，0.17毫莫耳)、CuCl(25毫克，0.25毫莫耳)及N,N,N,N-四甲基乙二胺(38微升，0.25毫莫耳)懸浮在乾丙酮(5毫升)中及在室溫下攪拌72小時。加入EtOAc且以10%檸檬酸(2×)、飽和NaHCO₃(2×)及鹽水來清洗有機層，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在減壓下移除揮發物。利用矽膠層析法來純化產物，以10-100%己烷類/THF沖提，以提供中間物9-5。在0℃下，以4N在1,4-二中的HCl來處理9-5 2小時，及在減壓下移除揮發物，以提供化合物1，如為雙HCl鹽。MS(m/z)M+1=991.7。

中間物10-6之合成

步驟1：中間物10-1

將Fmoc-AMPC(2S,4S)-OH(900毫克，2.0毫莫耳)、HBTU(1.14克，3.0毫莫耳)及HOBt(415毫克，3.0毫莫耳)溶解在乾DMF(10毫升)中，且以DIPEA(1050微升，6.0毫莫耳)處理。在加入(R)-1,2,3,4-四氫萘基-1-胺(330微升，2.2毫莫耳)前，攪拌該混合物10分鐘。在以醋酸乙酯(100毫升)及10%檸檬酸(50毫升)稀釋前，攪拌該反應過夜。分離有機層，且在無水硫酸鎂上乾燥之前，以10%檸檬酸(2×50毫升)、飽和碳酸氫鈉(3×25毫升)及鹽水(1×20毫升)清洗， 過濾及在減壓下濃縮，以提供粗產物10-1白色固體。此物質的純度為95%(利用LCMS)，且讓其前進至下一個步驟而沒有進一步純化。

步驟2：中間物10-2

將中間物10-1溶解在二氯甲烷(10毫升)中並以TFA(10毫升)來處理。在減壓下移除揮發物前，於室溫下攪拌該溶液2小時。攪拌所產生的油與二乙基醚(25毫升)，以提供一淡棕色固體，過濾其且以二乙基醚(2×5毫升)清洗，以提供化合物10-2‧TFA，如為淡棕色固體(1.17克)。

步驟3：中間物10-3

將Boc-t-BuGly-OH(460毫克，2.0毫莫耳)、HBTU(760毫克，2.0毫莫耳)及HOBt(270毫克，2.0毫莫耳)及DIPEA(765微升，7.5毫莫耳)溶解在乾DMF(10毫升)中，且在加入中間物10-2(867毫克，1.5毫莫耳)前，於室溫下攪拌該反應10分鐘。在以醋酸乙酯(200毫升)及10%檸檬酸(50毫升)稀釋前，攪拌該混合物過夜。分離有機層，且在無水硫酸鎂上乾燥前，以10%檸檬酸(2×50毫升)、飽和碳酸氫鈉(3×25毫升)及鹽水(1×20毫升)清洗，過濾及在減壓下濃縮，以提供粗產物10-3白色固體(920毫克，純度>95%(利用LCMS))，且讓前進至下一個步驟而沒有進一步純化。

步驟4：中間物10-4

將中間物10-3溶解在二氯甲烷(10毫升)中及以TFA(10毫升)處理。在減壓下移除揮發物之前，於室溫下攪拌該溶液2小時。攪拌所產生的油與二乙基醚(20毫升)，以 提供淡棕色固體，過濾其，以二乙基醚(2×5毫升)清洗，以提供化合物10-4‧TFA白色固體。

步驟5：中間物10-5

將Boc-MeAla-OH(308毫克，1.52毫莫耳)、HBTU(450毫克，1.91毫莫耳)及HOBt(260毫克，1.91毫莫耳)溶解在乾DMF(10毫升)中。加入DIPEA(886微升，5.0毫莫耳)，且在加入中間物10-4(900毫克，1.27毫莫耳)之前，於室溫下攪拌該反應10分鐘。在以醋酸乙酯(200毫升)及10%檸檬酸(50毫升)稀釋之前，攪拌該混合物過夜。分離有機層，且在無水硫酸鎂上乾燥前，以10%檸檬酸(2×50毫升)、飽和碳酸氫鈉(3×25毫升)及鹽水(1×20毫升)清洗，過濾及在減壓下濃縮，以提供粗產物10-5白色固體(0.87毫克，95.5%純(利用LCMS))，且讓其前進至下一個步驟而沒有進一步純化。

步驟6：中間物10-6

將中間物10-5溶解在20%的嗎福啉/THF(10毫升)中，且在室溫下攪拌該溶液16小時。在減壓下移除揮發物，以提供化合物10-6白色固體。利用矽膠層析法進一步純化，以提供10-6，其純度為95%，LCMS(MS(m/z)M+1=617.4。

化合物2之合成

步驟1：中間物11-1

將粗產物10-6(200毫克，0.251毫莫耳)溶解在THF(5毫升)中且在冰浴中冷卻。加入DIPEA(50微升，0.275 毫莫耳)及癸二醯基氯(26微升，0.125毫莫耳)，且在以醋酸乙酯(20毫升)及飽和碳酸氫鈉稀釋之前，於室溫下攪拌該反應4小時。分離有機層，以鹽水清洗，在無水硫酸鎂上乾燥，過濾及在減壓下移除溶劑。利用矽膠層析法來純化所產生的粗產物固體，以10-100%的己烷/THF梯度沖提，以提供11-1，如為白色固體(55毫克)。

步驟2：化合物2

以4N在1,4-二(3毫升)中的HCl來處理中間物11-1(50毫克)及攪拌3小時。在減壓下移除揮發物及將所產生的固體與二乙基醚(3×5毫升)磨碎。在減壓下乾燥所產生的固體，以提供化合物2‧2HCl，如為灰白色固體(30毫克)。MS(m/z)(M+2)/2=541.4。

化合物3

步驟1：中間物12-1

將粗產物10-6(208毫克，0.251毫莫耳)溶解在THF(5毫升)中，且在冰浴中冷卻至4℃。加入DIPEA(50微升，0.275毫莫耳)。加入對苯二醯基氯(26微升，0.125毫莫耳)，且在以醋酸乙酯(20毫升)及飽和碳酸氫鈉稀釋前，攪拌該反應16小時。分離有機層，以鹽水清洗，在無水硫酸鎂上乾燥，過濾及在減壓下移除溶劑。利用矽膠層析法來純化所產生的粗產物固體，以25-100%己烷類/THF梯度沖提，以提供12-1，如為白色固體(90毫克)。

步驟2：化合物3

以4N在1,4-二(3毫升)中的HCl來處理中間 物12-1(90毫克)及攪拌3小時。在減壓下移除揮發物及將所產生的固體與二乙基醚磨碎，過濾及以二乙基醚(3×5毫升)清洗。在減壓下乾燥所產生的固體，以提供化合物3‧2HCl，如為灰白色固體(40毫克)。MS(m/z)(M+2)/2=523.4。

化合物4及5

在O2環境下，將中間物9-4(130毫克，0.21毫莫耳)及中間物13-1(130毫克，0.22毫莫耳)、CuCl(60毫克，0.6毫莫耳)及四甲基乙二胺(90微升，0.6毫莫耳)懸浮在乾丙酮(15毫升)中及在室溫下攪拌120小時。加入EtOAc且以10%檸檬酸(2×)、飽和NaHCO3(2×)及鹽水清洗有機層，在無水MgSO4上乾燥，過濾及在減壓下濃縮。利用矽膠層析法來純化產物，以10-100%己烷類/THF沖提，以提供中間物9-5、13-2及13-3。中間物13-2及13-3各自獨立地以4N在1,4-二 中的HCl來處理。移除揮發物及將所產生的固體與二乙基醚磨碎，過濾及以二乙基醚清洗，以各別提供化合物4及5，如為其雙HCl鹽。

化合物4‧2HCl：MS(m/s)M+1=993.5。

化合物5‧2HCl：MS(m/z)M+1=995.6。

化合物6

在O₂環境下，將中間物9-4(250毫克，0.400毫莫耳)、中間物14-1(560毫克，0.900毫莫耳)、CuCl(267毫克，2.7毫莫耳)及四甲基乙二胺(405微升，2.7毫莫耳)懸浮在乾丙酮(10毫升)中，且在室溫下攪拌72小時。加入塞里塑料及讓該混合物過濾過塞里塑料墊。將EtOAc加入至該過濾物， 且以10%檸檬酸(2×)、飽和NaHCO₃(2×)及鹽水來清洗所產生的有機層，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在減壓下濃縮。利用矽膠層析法來純化產物，以10-100%己烷類/THF沖提，以提供中間物14-2。以4N在1,4-二中的HCl來處理中間物14-2。移除揮發物及將所產生的固體與二乙基醚磨碎，過濾及以二乙基醚清洗，以提供化合物6，如為其雙HCl鹽。MS(m/s)(M+2)/2=514.4。

化合物7

步驟1：

在N₂中，於0℃下，將中間物15-1(1.0克，1.2毫莫耳)、戊二酸酐(190毫克，1.7毫莫耳)及DIPEA(836微升，4.8毫莫耳)溶解在二氯甲烷(20毫升)中。加入催化量的DMAP，且在冰上攪拌該溶液30分鐘及在室溫下24小時。將EtOAc加入至該過濾物，且以10%檸檬酸(2×)、飽和NaHCO₃(2×)及鹽水來清洗所產生的有機層，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在減壓下濃縮，以提供中間物15-2，如為白色固體。

步驟2：

在N₂下，將中間物15-2(420毫克，0.5毫莫耳)、HOBt(85毫克，0.63毫莫耳)、HBTU(222毫克，0.60毫莫耳)及DIPEA(313毫升，1.8毫莫耳)溶解在乾DMF(5毫升)中及在室溫下攪拌10分鐘。加入中間物10-6(250毫克，0.45毫莫耳)，且將該溶液留在室溫下攪拌24小時。加入EtOAc及以10%檸檬酸(2×)、飽和NaHCO₃(2×)及鹽水清洗所產生的有 機層，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在減壓下濃縮。利用矽膠層析法來純化產物，以10-100%己烷類/THF沖提，以提供中間物15-3。

步驟3：

將中間物15-3(240毫克，0.17毫莫耳)、10重量%Pd/C(50毫克，50%H₂O)懸浮在MeOH(10毫升)中，及在室溫下，於H₂環境(1大氣壓)中攪拌24小時。然後，在塞里塑料上過濾該些成分且以MeOH清洗。在減壓下濃縮過濾物，以提供中間物15-4，如為白色固體。

步驟4：

在N₂下，將BocNMe-Ala-OH(57毫克，0.28毫莫耳)、HOBt(44毫克，0.33毫莫耳)、HBTU(116毫克，0.31毫莫耳)及DIPEA(90微升，0.52毫莫耳)溶解在乾DMF(5毫升)中，且以中間物15-4(160毫克，0.13毫莫耳)處理。在室溫下攪拌24小時後，加入EtOAc且以10%檸檬酸(2×)、飽和NaHCO₃(2×)及鹽水來清洗所產生的有機層，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在減壓下濃縮。利用矽膠層析法來純化產物，以10-100%己烷類/THF沖提，以提供中間物15-5。在室溫下，讓中間物15-5與4N在1,4-二中的HCl攪拌1小時。在減壓下移除揮發物，以提供化合物7，如為其HCl鹽。MS(M+2)/2=618.0。

化合物8：

將化合物7‧HCl(100毫克，0.08毫莫耳)溶解在DMF(1毫升)中，且將其加入至哌基甲基聚苯乙烯樹脂 (0.86毫莫耳/克，356毫克，0.3毫莫耳)的CH₂Cl₂(5毫升)懸浮液。在室溫下搖晃48小時後，加入額外200毫克的樹脂。在過濾、以MeOH洗滌前，於室溫下搖晃該混合物20天。在減壓下移除揮發物，以提供化合物8白色固體。MS(m/z)M+1=1012。

化合物9：

以4N在1,4-二中的HCl來處理中間物15-3(10毫克)1小時。在減壓下移除揮發物，以提供化合物9，如為其HCl鹽。MS(m/s)(M+2)/2=642。

化合物10、11、12、13、14、15、16、39、40、41、42、43、52、55、56、57及58，且以類似於化合物2所描述的方式來製備，其中在步驟1中，以癸二醯基氯來取代相符合的磺醯氯或經活化的二酸。這些化合物之MS特徵總整理在表1中。

以類似於化合物29所描述的方式，使用1,2,3,4-(R)-四氫萘基-1-胺替代苯乙基醯胺來製備化合物17。MS(m/s)(M+2)/2=510.4。

化合物18

在4N於1,4-二中的HCl中攪拌中間物21-8 2小時。在真空中移除揮發物及讓殘餘物與二乙基醚磨碎，以提供化合物18‧2HCl，如為白色固體。MS(m/z)M+1=815.4。

以類似於化合物20所描述的方式來製備化合物19、21、22、23、24、31、32、46、47、48、49、50、51、 54、59、60、61、63、64、65及67，其中在步驟6中，以相符合的胺來取代苯乙胺。這些化合物的MS特徵總整理在表1中。

化合物20

步驟1：中間物21-2

在已冷卻至0℃的CH₂Cl₂中之N-Boc-順-4-胺基-L-脯胺酸甲基酯(21-1)(10.0克，35.61毫莫耳)溶液中，相繼地加入TEA(14.88毫升，106.80毫莫耳)、DMAP(10毫克)及對苯二醯基氯(3.61克，17.80毫莫耳)，且在室溫下攪拌該反應過夜。加入水及醋酸乙酯，分離有機層，以10%檸檬酸、水性NaHCO₃及鹽水清洗，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法來純化，以提供中間物21-2，如為白色固體。

步驟2：中間物21-3‧2TFA

在0℃下，將中間物21-2(4.80克，7.76毫莫耳)溶解在CH₂Cl₂(40毫升)與TFA(40毫升)之混合物中。在室溫下攪拌該溶液4小時。在減壓下移除揮發物及讓殘餘物與二乙基醚磨碎，以提供中間物21-3‧2TFA，如為白色固體。MS(m/z)M+1=419.2。

步驟3：中間物21-5

在已冷卻至0℃的DMF中之Boc-α-t-BuGly-OH(21-4)(3.95克，17.07毫莫耳)溶液中，相繼地加入DIPEA(13.5毫升，77.6毫莫耳)、HOBt(2.62克，19.4毫莫耳)及HBTU(7.36克，19.4毫莫耳)。在攪拌10分鐘後，加入中 間物21-3‧2TFA(5.02克，7.76毫莫耳)及在室溫下攪拌該反應混合物過夜。加入水及醋酸乙酯，分離有機層，以10%檸檬酸、水性NaHCO₃及鹽水來清洗，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法純化，以提供中間物21-5，如為白色固體。

步驟4：中間物21-6‧2TFA

在0℃下，將中間物21-5(6.55克，7.76毫莫耳)溶解在CH₂Cl₂(40毫升)與TFA(40毫升)之混合物中。在室溫下攪拌該溶液3小時。在減壓下移除揮發物及將殘餘物與二乙基醚磨碎，以提供中間物21-6‧2TFA，如為白色固體。MS(m/z)M+1=645.4。

步驟4：中間物21-8

在已冷卻至0℃的DMF中之Boc-NMe-Ala-OH(21-7)(3.15克，15.51毫莫耳)溶液中，相繼地加入DIPEA(12.3毫升，70.5毫莫耳)、HOBt(2.38克，17.63毫莫耳)及HBTU(6.69克，17.63毫莫耳)。在攪拌10分鐘後，加入中間物21-6‧2TFA(6.15克，7.05毫莫耳)及在室溫下攪拌該反應混合物過夜。加入水及醋酸乙酯，分離有機層，以10%檸檬酸、水性NaHCO₃及鹽水清洗，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法純化，以提供中間物21-8，如為白色固體。

步驟5：中間物21-9

在已冷卻至0℃的THF(80毫升)及MeOH(8毫升)中之中間物21-8(6.20克，6.11毫莫耳)溶液中，加入1N水性 LiOH(30.5毫升)及在室溫下攪拌該反應過夜。以10%檸檬酸將pH調整至6且加入醋酸乙酯，分離有機層，以鹽水清洗，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮，以提供中間物21-9，如為白色固體。

步驟6：中間物21-10

在已冷卻至0℃的DMF中之中間物21-9(150毫克，0.15毫莫耳)溶液中，相繼地加入DIPEA(265微升，1.52毫莫耳)、HOBt(51毫克，0.38毫莫耳)及HBTU(144毫克，0.38毫莫耳)。在攪拌10分鐘後，加入苯乙胺(42微升，0.33毫莫耳)及在室溫下攪拌該反應混合物過夜。加入水及醋酸乙酯，分離有機層，以10%檸檬酸、水性NaHCO₃及鹽水清洗，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法純化，以提供中間物21-10，如為白色固體。

步驟7：化合物20‧2HCl

將4N在1,4-二(3.0毫升)中的HCl加入至中間物21-10(145毫克，0.12毫莫耳)，且在0℃下攪拌該溶液1小時。在減壓下移除揮發物及將殘餘物與二乙基醚磨碎，以提供化合物20‧2HCl，如為白色固體。MS(m/z)(M+2)/2=497.6。

化合物22‧2HCl

步驟1：中間物22-1

在已冷卻至0℃的DMF中之中間物21-9(75毫克，0.08毫莫耳)溶液中，相繼地加入DIPEA(135微升，0.76毫莫耳)、HOBt(26毫克，0.19毫莫耳)及HBTU(72毫克，0.19 毫莫耳)。在攪拌10分鐘後，加入異丙胺(14微升，0.17毫莫耳)及在室溫下攪拌該反應混合物過夜。加入水及醋酸乙酯，分離有機層，以10%檸檬酸、水性NaHCO₃及鹽水清洗，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法純化，以提供中間物22-1，如為白色固體。

步驟2：化合物22‧2HCl

將4N在1,4-二(2.0毫升)中的HCl加入至中間物22-1(58毫克，0.05毫莫耳)，且在0℃下攪拌該溶液2小時。在減壓下移除揮發物及將殘餘物與二乙基醚磨碎，以提供化合物22‧2HCl，如為白色固體。MS(m/z)(M+2)/2=435.4。

化合物24‧2HCl

步驟1：中間物22-2

在已冷卻至0℃的DMF中之中間物21-9(600毫克，0.61毫莫耳)溶液中，相繼地加入DIPEA(1.0毫升，6.08毫莫耳)、HOBt(205毫克，1.52毫莫耳)及HBTU(576毫克，1.52毫莫耳)。在攪拌10分鐘後，加入胺基二苯基甲烷(230微升，1.34毫莫耳)及在室溫下攪拌該反應混合物過夜。加入水及醋酸乙酯，分離有機層，以10%檸檬酸、水性NaHCO₃及鹽水清洗，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法純化，以提供中間物22-2，如為白色固體。

步驟2：化合物24‧2HCl

將4N在1,4-二(1.9毫升)中的HCl加入至中間物22-2(660毫克，0.50毫莫耳)，且在0℃下攪拌該溶液1小 時。在減壓下移除揮發物及將殘餘物與二乙基醚磨碎，以提供化合物24‧2HCl，如為白色固體。MS(m/z)(M+2)/2=435.4。

化合物25

步驟1：中間物23-1

在已冷卻至0℃的THF中之中間物21-8(1.10克，1.08毫莫耳)溶液中，加入硼氫化鋰(118毫克，4.86毫莫耳)及在室溫下攪拌該反應混合物3小時。加入醋酸乙酯及10%檸檬酸。分離有機層，以水性NaHCO₃及鹽水清洗，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法純化以提供中間物23-1，如為白色固體。MS(m/z)M+1=959.6。

步驟2：中間物23-2

在CH₂Cl₂之中間物23-1(284毫克，0.29毫莫耳)溶液中，加入戴思馬丁過碘烷(314毫克，0.74毫莫耳)且在室溫下攪拌該反應5小時。加入水性NaHCO₃，分離有機層，以鹽水清洗，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法純化，以提供中間物23-2，如為白色固體。

步驟3：中間物23-4

在CH₂Cl₂之中間物23-2(282毫克，0.29毫莫耳)溶液中，加入苯乙胺(82微升，0.65毫莫耳)。在室溫下攪拌30分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉(280毫克，1.32毫莫耳)及攪拌該反應混合物2小時。加入飽和水性NaHCO₃，分離有機層，以鹽水清洗，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法純化以提供中間物23-4，如為 白色固體。MS(m/z)M+1=1165.8。

步驟4：中間物23-5

在已冷卻至0℃的CH₂Cl₂中之中間物23-4(100毫克，0.08毫莫耳)溶液中，相繼地加入三乙基胺(60微升，0.43毫莫耳)及乙醯基氯(14微升，0.19毫莫耳)。在加入水及醋酸乙酯前，於室溫下攪拌該反應2小時。分離有機層，以10%檸檬酸、水性NaHCO₃及鹽水清洗，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法純化以提供中間物23-5，如為白色固體。

步驟5：化合物25‧2HCl

將4N在1,4-二(3毫升)中的HCl加入至中間物23-5(80毫克，0.06毫莫耳)，且在室溫下攪拌該溶液1小時。在減壓下移除揮發物及將殘餘物與二乙基醚磨碎，以提供化合物25‧2HCl，如為白色固體。MS(m/z)(M+2)/2=525.6。

化合物26‧2HCl

步驟1：中間物23-5

在已冷卻至0℃的CH₂Cl₂中之中間物23-4(100毫克，0.08毫莫耳)溶液中，相繼地加入TEA(60微升，0.43毫莫耳)及甲磺醯基氯(15微升，0.19毫莫耳)，且在室溫下攪拌該反應2小時。加入水及醋酸乙酯，分離有機層，以10%檸檬酸、水性NaHCO₃及鹽水清洗，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。

利用矽膠層析法純化以提供中間物23-5，如為白 色固體。

步驟2：化合物26‧2HCl

將4N在1,4-二(3毫升)中的HCl加入至中間物23-5(79毫克，0.06毫莫耳)，且在室溫下攪拌該溶液1小時。在減壓下移除揮發物及將殘餘物與二乙基醚磨碎，以提供化合物26‧2HCl，如為白色固體。MS(m/z)(M+2)/2=561.6。

以類似於化合物26所描述的方式來製備化合物27、28及30，其中對化合物27及28來說，各別使用乙醯基氯及苄醯基氯來取代甲磺醯基氯。

化合物27-MS(m/z)(M+2)/2=587.6。

化合物28-MS(m/z)(M+2)/2=543.6。

化合物30-MS(m/z)(M+2)/2=579.6。

化合物29

步驟1：中間物24-1

在已冷卻至0℃的THF(21.6毫升，21.6毫莫耳)中之1.0M的NaHMDS溶液中，慢慢加入在DMF中之N-Boc-順-4-羥基-L-脯胺酸(2.50克，10.8毫莫耳)溶液。在0℃下攪拌20分鐘後，加入α,α’-二溴-對-二甲苯(1.37克，5.0毫莫耳)及在室溫下攪拌該反應混合物過夜。加入水及醋酸乙酯，分離有機層，在MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法純化以提供中間物24-1，如為白色固體。

步驟2：中間物24-2

在已冷卻至0℃的DMF中之中間物24-1(200毫 克，0.35毫莫耳)溶液中，相繼地加入DIPEA(365微升，2.1毫莫耳)、HOBt(132毫克，0.98毫莫耳)及HBTU(345毫克，0.91毫莫耳)。在攪拌10分鐘後，加入苯乙胺(107微升，0.85毫莫耳)及在室溫下攪拌該反應混合物過夜。加入水及醋酸乙酯，分離有機層，以10%檸檬酸、水性NaHCO₃及鹽水清洗，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法純化以提供中間物24-2，如為白色固體。

步驟3：中間物24-3‧2TFA

將中間物24-2(260毫克，0.35毫莫耳)溶解在CH₂Cl₂(3毫升)與TFA(3毫升)之混合物中。在室溫下攪拌該溶液1小時。在減壓下移除揮發物及將殘餘物與二乙基醚磨碎，以提供中間物24-3‧2TFA，如為白色固體。MS(m/z)M+1=571.4

步驟4：中間物24-4

在已冷卻至0℃的DMF中之Boc-α-t-BuGly-OH(256毫克，1.10毫莫耳)溶液中，相繼加入DIPEA(361微升，2.10毫莫耳)、HOBt(175毫克，1.3毫莫耳)及HBTU(455毫克，1.2毫莫耳)。在攪拌10分鐘後，加入中間物24-3‧2TFA(230毫克，0.46毫莫耳)且在室溫下攪拌該反應混合物過夜。加入水及醋酸乙酯，分離有機層，以10%檸檬酸、水性NaHCO₃及鹽水清洗，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法純化以提供中間物24-4，如為白色固體。

步驟5：中間物24-5‧2TFA

將中間物24-4(458毫克，0.46毫莫耳)溶解在CH₂Cl₂(3毫升)與TFA(3毫升)之混合物中。在室溫下攪拌該溶液30分鐘。在減壓下移除揮發物及將殘餘物與二乙基醚磨碎，以提供中間物24-5‧2TFA，如為白色固體。MS(m/z)M+1=797.6。

步驟6：中間物24-6

在已冷卻至0℃的DMF中之Boc-NMe-Ala-OH(119毫克，0.58毫莫耳)溶液中，相繼地加入DIPEA(209微升，1.2毫莫耳)、HOBt(91毫克，0.67毫莫耳)及HBTU(236毫克，0.62毫莫耳)。在攪拌10分鐘後，加入中間物24-5‧2TFA(250毫克，0.24毫莫耳)及在室溫下攪拌該反應混合物過夜。加入水及醋酸乙酯，分離有機層，以10%檸檬酸、水性NaHCO₃及鹽水清洗，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法純化以提供中間物24-6，如為白色固體。

步驟7：化合物29‧2HCl

將4N在1,4-二(1.0毫升)中的HCl加入至中間物24-6(280毫克，0.24毫莫耳)，且在0℃下攪拌該溶液1小時。在減壓下移除揮發物及將殘餘物與二乙基醚磨碎，以提供化合物29‧2HCl，如為白色固體。MS(m/z)M+1=967.6。

化合物33

步驟1：中間物25-1

在中間物10-6(258毫克，0.50毫莫耳)之DMF溶液中，相繼地加入DIPEA(217微升，1.25毫莫耳)及1,3-苯二磺 醯基氯(69毫克，0.25毫莫耳)，且在室溫下攪拌該反應過夜。加入水及醋酸乙酯，分離有機層，以10%檸檬酸、水性NaHCO₃及鹽水清洗，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法純化以提供中間物25-1，如為白色固體。

步驟2：化合物33‧2HCl

將4N在1,4-二(2毫升)中的HCl加入至中間物25-1(143毫克，0.11毫莫耳)，且在0℃下攪拌該溶液1小時。在減壓下移除揮發物及將殘餘物與二乙基醚磨碎，以提供化合物33‧2HCl，如為白色固體。MS(m/z)(M+2)/2=559.5。

化合物34：

以類似於化合物20的方式來製備化合物34，其中在步驟1中，以N-Boc-反-4-胺基-L-脯胺酸甲基酯來取代N-Boc-順-4-胺基-L-脯胺酸甲基酯；及在步驟6中，以1,2,3,4-(R)-四氫萘基-1-胺來取代苯乙胺。MS(m/z)M+1=1045.8。

化合物35‧2HCl

步驟1：中間物27-1

將中間物10-1(3.90克，6.68毫莫耳)溶解在THF(100毫升)中且以哌啶(5.0毫升，68.2毫莫耳)處理。在減壓下移除揮發物之前，於室溫下攪拌該溶液16小時，以提供一已懸浮在MeOH(5毫升)中的半固體，且過濾。濃縮過濾物，將其懸浮在MeOH(5毫升)中，過濾及濃縮該過濾 物以提供中間物27-1，如為半固體(80%純)。

步驟2：中間物27-2

在已冷卻至0℃的DMF中之碳苄基氧基甘胺酸(699毫克，3.34毫莫耳)溶液中，相繼地加入DIPEA(2.40毫升，13.9毫莫耳)、HOBt(488毫克，3.61毫莫耳)及HBTU(1.37克，3.61毫莫耳)。在攪拌10分鐘後，加入中間物27-1(1.00克，2.78毫莫耳)及在室溫下攪拌該反應混合物過夜。加入水及醋酸乙酯，分離有機層，以10%檸檬酸、水性NaHCO₃及鹽水清洗，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法純化以提供中間物27-2，如為白色固體。

步驟3：中間物27-3‧TFA

將中間物27-2(1.42克，2.58毫莫耳)溶解在CH₂Cl₂(15毫升)與TFA(15毫升)之混合物中。在室溫下攪拌該溶液1小時。在減壓下移除揮發物及將殘餘物與二乙基醚磨碎，以提供中間物27-3‧TFA，如為白色固體。MS(m/z)M+1=451.4。

步驟4：中間物27-4

在已冷卻至0℃的DMF中之Boc-α-t-BuGly-OH(668毫克，2.89毫莫耳)溶液中，相繼地加入DIPEA(2.1毫升，12.0毫莫耳)、HOBt(488毫克，3.61毫莫耳)及HBTU(1.37克，3.61毫莫耳)。在攪拌10分鐘後，加入中間物27-3‧TFA(1.36克，2.41毫莫耳)且在室溫下攪拌該反應混合物過夜。加入水及醋酸乙酯，分離有機層，以10%檸檬酸、水性NaHCO₃及鹽水清洗，在無水MgSO₄上 乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法純化以提供中間物27-4，如為白色固體。

步驟5：中間物27-5‧TFA

將中間物27-4(1.38克，2.08毫莫耳)溶解在DCM(10毫升)與TFA(10毫升)之混合物中。在室溫下攪拌該溶液4小時。在減壓下移除揮發物及將殘餘物與二乙基醚磨碎，以提供中間物27-5‧TFA，如為白色固體。MS(m/z)M+1=564.4。

步驟6：中間物27-6

在已冷卻至0℃的DMF中之Boc-NMe-Ala-OH(902毫克，4.44毫莫耳)溶液中，相繼地加入DIPEA(3.50毫升，20.2毫莫耳)、HOBt(682毫克，5.05毫莫耳)及HBTU(1.92克，5.05毫莫耳)。在攪拌10分鐘後，加入中間物27-5‧TFA(1.14克，1.68毫莫耳)及在室溫下攪拌該反應混合物過夜。加入水及醋酸乙酯，分離有機層，以10%檸檬酸、水性NaHCO₃及鹽水清洗，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法純化以提供中間物27-6，如為白色固體。

步驟7：中間物27-7

在中間物27-6(925毫克，1.24毫莫耳)的無水MeOH(25毫升)溶液中且於N₂下攪拌，加入10%的Pd/C(125毫克)。對該反應混合物充入H₂並攪拌1小時。然後，將該反應過濾過塞里塑料及在真空中濃縮過濾物。利用矽膠層析法純化以提供中間物27-7，如為白色固體。 MS(m/z)M+1=615.4

步驟8：中間物27-8

在已冷卻至0℃的DCM中之中間物27-7(150毫克，0.25毫莫耳)溶液中，相繼地加入TEA(100微升，0.73毫莫耳)及對苯二醯基氯(25.0毫克，0.12毫莫耳)，並在室溫下攪拌該反應過夜。加入水及醋酸乙酯，分離有機層，以10%檸檬酸、水性NaHCO₃及鹽水清洗，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法純化以提供中間物27-8，如為白色固體。

步驟9：化合物35‧2HCl

將4N在1,4-二(2毫升)中的HCl加入至中間物27-8(166毫克，0.12毫莫耳)，且在室溫下攪拌該溶液1小時。在減壓下移除揮發物及將殘餘物與二乙基醚磨碎，以提供化合物35‧2HCl，如為白色固體。MS(m/z)(M+2)/2=580.6。

以類似於化合物35所描述的方式，各別使用乙二醯基氯、異酞醯二氯及4,4’-聯苯二羰基氯來取代在步驟8中之酞醯基氯，以從中間物27-7來製備化合物36、37及38。

化合物36-MS(m/z)(M+2)/2=542.6。

化合物37-MS(m/z)(M+2)/2=580.6。

化合物38-MS(m/z)(M+2)/2=618.6。

化合物44

步驟1：中間物26-1

在THF中的中間物10-6(150毫克，0.27毫莫耳)溶 液中，相繼地加入TEA(112微升，0.81毫莫耳)及二異氰酸1,4-亞苯酯(43毫克，0.27毫莫耳)，且在室溫下攪拌該反應4小時。在減壓下移除揮發物及利用矽膠層析法純化殘餘物，以提供中間物26-1，如為白色固體。

步驟2：化合物44‧2TFA

將中間物26-1(148毫克，0.12毫莫耳)溶解在CH₂Cl₂(1.5毫升)與TFA(0.4毫升)之混合物中。在室溫下攪拌該溶液1小時。在減壓下移除揮發物及將殘餘物與二乙基醚磨碎，以提供化合物44‧2TFA，如為白色固體。MS(m/z)(M+2)/2=538.4。

化合物62：

以4N在1,4-二中的HCl來處理中間物21-9 2小時。在減壓下移除揮發物及將殘餘物與二乙基醚磨碎，以提供化合物62‧HCl，如為灰白色固體。MS(m/z)M+1=787.6。

中間物28-6

步驟1：中間物28-2

將(S)-(+)-2-苯基乙醇胺(28-1)(1.64克，12.0毫莫耳)溶解在CH₂Cl₂(90毫升)中。加入Boc₂O(2.84克，13.0毫莫耳)及DMAP(34毫克，0.02毫莫耳)，且在室溫下攪拌1小時。以二乙基醚(200毫升)及1N HCl(100毫升)來稀釋該反應混合物。以1M HCl(2×100毫升)清洗有機層，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在減壓下移除揮發物。利用矽膠層析法純化所產生的殘餘物，以提供油，以提供中間物28-2，如為 白色固體(2.7克，產率95%)。MS(m/z)M+1=238.2。

步驟2：中間物28-6

將中間物28-2(420毫克，1.77毫莫耳)及碘甲烷(330微升，5.29毫莫耳)溶解在無水DMF(25毫升)中。將該混合物冷卻至0℃，然後，加入NaH(60%分散在油中，103毫克，2.58毫莫耳)。在2小時後，以醋酸乙酯(200毫升)及1M HCl(100毫升)來稀釋該反應混合物。以1M HCl(2×100毫升)來清洗有機層，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在減壓下移除揮發物。利用矽膠層析法純化殘餘物以提供中間物28-3，如為油。然後，將中間物28-3冷凝至0℃且以4M在1,4-二(5毫升)中的HCl來處理。在攪拌90分鐘後，於減壓下移除揮發物及以二乙基醚清洗所產生的固體，以提供中間物28-6‧HCl，如為白色固體(237毫克，產率69%)。MS(m/z)M+1=152.2。

使用類似的程序來製備中間物28-7及28-8，其中對中間物28-7來說，以苄基溴來置換碘甲烷，及對中間物28-8來說，以碘乙醯胺來置換。

化合物66

步驟1：中間物29-1

在苯甲醛(840微升，8.25毫莫耳)之CH₂Cl₂(150毫升)溶液中，加入(S)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(1.0克，8.25毫莫耳)及乙氧化鈦(3.5毫升，16.50毫莫耳)。迴流該反應混合物5小時且將其冷卻至室溫。加入水及充分攪拌該混合物，然後讓其過濾過塞里塑料。以CH₂Cl₂(3×)萃取水層及以鹽水清洗結合的有機萃取物，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法純化以提供中間物29-1，如為黃色油。

步驟2：中間物29-2

在(S,E)-N-亞苄基-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(29-11)(110毫克，0.526毫莫耳)、[Rh(cod)(CH₃CN)₂]BF₄(20.1毫克，0.053毫莫耳)、對-甲苯基硼酸(143毫克，1.052毫莫耳)及Et₃N(147微升，1.052毫莫耳)於二(1.2毫升)中之懸浮液中，加入H₂O(2.4毫升)。在室溫下攪拌所產生的棕色懸浮液2天。以EtOAc(3×)萃取水層及以鹽水來清洗結合的有 機萃取物，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法純化以提供中間物29-2，如為白色固體(d.e.=81%)。

步驟3：中間物29-4

在(S)-2-甲基-N-((R)-苯基(對-甲苯基)甲基)丙烷-2-亞磺醯胺(82毫克，0.27毫莫耳)(29-2)於MeOH(270微升)中之溶液中，加入4N在1,4-二4(140微升，0.54毫莫耳)中的HCl。在室溫下攪拌該溶液1小時，然後，加入Et₂O及形成白色沉澱物。過濾沉澱物及以Et₂O清洗，以提供中間物29-4‧HCl，如為白色固體。

步驟4：中間物29-5

在已冷卻至0℃的DMF中之中間物21-9(122毫克，0.123毫莫耳)溶液中，相繼地加入DIPEA(193微升，1.107毫莫耳)、HOBt(42毫克，0.308毫莫耳)及HBTU(117毫克，0.308毫莫耳)。在攪拌10分鐘後，加入中間物29-4‧HCl(59毫克，0.253毫莫耳)且在室溫下攪拌該反應混合物過夜。加入水及醋酸乙酯，分離有機層，以10%檸檬酸、水性NaHCO₃及鹽水清洗，在無水MgSO₄上乾燥，過濾及在真空中濃縮。利用矽膠層析法純化以提供中間物66-1，如為粉紅色固體。

步驟5：化合物66‧2HCl

將4N在1,4-二(1毫升)中的HCl加入至中間物66-1(135毫克，0.12毫莫耳)。將該溶液貯存在0℃下1小時。在減壓下移除揮發物及將殘餘物與二乙基醚磨碎，以提供化合物6‧2HCl，如為白色固體。 MS(m/z)(M+2)/2=573.6。

根據上述程序來製備本發明之典型化合物且將其闡明在表1中：

本發明之典型化合物可藉由簡單地改質上述程序來製備且已闡明在表2至6中：

試驗 表現性用的分子構築體

經由BamH1及AVA I，將GST-XIAP BIR3RING：XIAP編碼序列胺基酸246-497選殖進入PGEX2T1中。將該質體轉化進入大腸桿菌DH5α中，以使用在蛋白質表現性及純化上。

經由BamH1及XhoI，將來自胺基酸251-363的GST-HIAP2(cIAP-1)BIR3：HIAP2編碼序列選殖進入 PGEX4T3中。將該質體轉化進入大腸桿菌DH5α中，以使用於蛋白質表現性及純化上。

經由BamH1及XhoI，將來自胺基酸236-349的GST-HIAP1(cIAP-2)BIR3：HIAP1編碼序列選殖進入PGEX4T3中。將該質體轉化進入大腸桿菌DH5α中，以使用在蛋白質表現性及純化上。

經由BamH1及XhoI，將來自胺基酸93-497的GST-連結子BIR2 BIR3RING：XIAP編碼序列選殖進入PGEx4t1中。使用下列引子：TTAATAGGATCCATCAACGGCTTTTATC及GCTGCATGTGTGTCAGAGG，使用標準PCR條件，從在PGEx4t3中的全長XIAP來放大胺基酸93-497。該PCR片斷為已選殖進入pCR-2.1(因維錯俊(invitrogen))中的TA。藉由BamHI/XhoI消化，將連結子BIR2 BIR3RING次選殖進入PGEx4T1中。將該質體轉化進入大腸桿菌DH5α中，以使用在蛋白質表現性及純化上。

經由BamH1及Xho I限制區，將全長的人類XIAP、AEG質體數23.XIAP編碼序列胺基酸1-497選殖進入GST融合載體、PGEX4T1中。將該質體轉化進入大腸桿菌DH5α中，以使用在蛋白質純化上。

經由BamH1及XhoI，將來自胺基酸93-497的GST-XIAP連結子BIR2：XIAP連結子BIR2編碼序列選殖進入PGEX4T3中。將該質體轉化進入大腸桿菌DH5α中，以使用在蛋白質表現性及純化上。

重組蛋白質之表現性及純化

A.重組蛋白質的表現性

在大腸桿菌株DH5-α中表現出經麩胱苷肽S-轉換酶(GST)標記的蛋白質。對表現全長XIAP來說，在37℃下，於補充以50微克/毫升的氨比西林之魯利亞肉湯(Luria Broth)(LB)媒質中，培養各別已轉化XIAP-BIR區域、cIAP-1、cIAP-2及生活蛋白質的細菌或其組合過夜。然後，將該過夜的培養物以25倍稀釋進入補充氨比西林的新鮮LB媒質中，且讓細菌生長至最高A₆₀₀=0.6，然後以1mM異丙基-D-1-硫代半乳吡喃糖苷誘導3小時。在誘導後，在5000rpm下離心該細胞10分鐘及移除媒質。在4℃下培養從1升已接收10毫升溶解緩衝液(50mM Tri-HCl，200mM NaCl，1mM DTT，1mM PMSF，2毫克/毫升的溶菌酶(lysosyme)，100微克/毫升))的培養物中獲得之每個小粒，且溫和地搖晃。在20分鐘培養後，將該細胞懸浮液放置在-80℃下過夜或直到需要時。

B.重組蛋白質之純化

對重組蛋白質之純化來說，將IPTG所引發的細胞溶成物解凍渦旋，然後在每次解凍後，藉由在液態氮中迅速冷凍與渦動破裂二次。藉由讓該萃取物通過生物內伯細胞破裂器(Bio-Neb Cell disrupter)裝置(葛雷思蔻(Glas-col)，其設定在100磅/平方英寸下與氮氣)四次，來進一步破裂細胞。使用SS-34貝克曼(Beckman)馬達，在4℃下，以15000rpm來離心該萃取物及淨化30分鐘。然後，在 4℃下，讓所產生的上層液與每500毫升的細胞培養物(對全長XIAP來說，每1000毫升的培養物)2毫升之麩胱苷肽-瓊脂糖凝膠小珠(法瑪西雅)混合1小時。之後，以1×Tris-緩衝鹽液(TBS)清洗小珠3次，以移除未鍵結的蛋白質。以2洗滌液(2毫升50mM pH 8.0包含10mM經還原的麩胱苷肽之TRIS)來沖提該經保留的蛋白質。儲備該經沖提的蛋白質且以604克/升之硫酸銨沉澱，將所產生的小粒再懸浮至適當的緩衝液中。如由SDS-PAGE判斷，該經純化的蛋白質純度>90%。使用布萊德福特(Bradford)方法來測量經純化的蛋白質之蛋白質濃度。

使用pet28ACPP32構築體，在大腸桿菌株之大腸桿菌AD494細胞中表現出組胺酸標誌蛋白質。如上所述般來製備該可溶的蛋白質部分。對蛋白質純化來說，利用親和層析法，使用充入NiSO₄的螯合瓊脂糖凝膠(法瑪西雅)，根據製造者用法說明來純化上層液。該經沖提的蛋白質之純度>90%，如可由SDS-PAGE來測量。從布萊德福特試驗來測量該經純化的蛋白質之蛋白質濃度。

螢光性探針P1的合成

使用標準Fmoc化學，在2-氯三苯甲基氯樹脂上製備螢光性胜肽探針，Fmoc-Ala-Val-Pro-Phe-Tyr(t-Bu)-Leu-Pro-Gly(t-Bu)-Gly-OH(Int.J.Pept.Prot.Res.38：555-561，1991)。使用20%在二氯甲烷(DCM)中的醋酸來進行從樹脂中切割，其將遺留下仍然有阻礙之側鏈。在室溫下，使用過量在二甲基甲醯胺 (DMF)中的二異丙基碳化二亞胺(DIC)，讓該C端經保護的羧酸耦合至4’-(胺基甲基)螢光黃(分子探針，A-1351；尤金(Eugene)，Oreg.)，且利用矽膠層析法來純化(10%在DCM中的甲醇)。使用哌啶(20%)，在DMF中移除該N端Fmoc保護基團，且利用矽膠層析法來純化(20%在DCM中的甲醇，0.5%HOAc)。最後，使用95%三氟醋酸(其包含2.5%的水及2.5%的三異丙基矽烷)來移除該三級丁基側鏈保護基，以提供探針P1(>95%純，HPLC)。

探針P2

黏結試驗 以螢光偏振為基礎的競爭試驗

對全部試驗來說，使用泰肯極化子(Tecan Polarion)裝置(其激發濾波器設定在485奈米處及發射濾波器設定在535奈米處)來評估螢光性及螢光性偏振。對每個試驗來說，首先，當單獨於螢光性探針P1或P2存在下培養 時，藉由滴定經選擇的蛋白質來建立該標的蛋白質之濃度，以產生一線性的劑量-反應訊號。在這些條件建立後，於固定限定量的標的蛋白質及螢光性探針存在下，使用經選擇的化合物之10點連續稀釋來評估該化合物的效力(IC₅₀)及選擇性。對每條IC₅₀曲線來說，進行如下的試驗：將25微升/井在50mM pH 6.5的MES緩衝液中之經稀釋的化合物加入一黑色96井板中，然後，加入25微升/井於50mM pH 6.5的MES中在0.5毫克/毫升下之牛血清白蛋白(BSA)。首先，藉由進行單獨讀取化合物/BSA溶液來評估每種化合物的自動螢光性。然後，加入25微升已稀釋至50mM包含0.05毫克/毫升BSA的MES中之螢光黃探針，及完成偵測捕捉螢光黃訊號之讀取。最後，加入25微升/井已以適當的濃度稀釋在50mM含0.05毫克/毫升BSA的MES中之標的或對照蛋白質(GST-BIRs)，且評估其螢光偏振。

IC ₅₀ 之測量及抑制常數

對每個試驗來說，對照該化合物的最後濃度來繪製出相對偏振-螢光單位，及使用圖形墊稜鏡(Graph pad prism)軟體及/或康橋(Cambridge)軟體來計算IC₅₀。如上所述之經計算的IC₅₀值及根據在尼可洛夫斯卡-可列斯卡(Nikolovska-Coleska)，Z.(2004)，Anal Biochem 332，261-273中所描述的方程式來推導出該ki值。

螢光偏振競爭試驗

使用探針P2來測量(如上所述)不同化合物在BIR2-BIR3-環FP試驗中的ki。例如，化合物3顯示出其ki低 於100nM。

凋亡蛋白酶-3全長XIAP、連結子BIR2或連結子-BIR2-BIR3-環去阻遏試驗

為了測量所選擇的化合物對抗XIAP-BIR2之相對活性，我們計劃出一種試管內試驗，其中凋亡蛋白酶-3已由XIAP連結子-BIR2、XIAP連結子BIR2-BIR3-環或全長XIAP的GST融合蛋白質抑制。讓凋亡蛋白酶3(0.125微升)及12.25-34.25nM(最後濃度)的GST-XIAP融合蛋白質(GST-BIR2、GST-BIR2BIR3RING或全長XIAP)與一系列的稀釋化合物(200uM-5pM)共培養。藉由覆蓋25微升0.4mM的DEVD-AMC溶液來測量凋亡蛋白酶3活性。最後反應體積為100微升。在凋亡蛋白酶緩衝液(50mM希皮士(Hepes)pH 7.4，100mM的NaCl，10%蔗糖，1mM的EDTA，10mM的DTT，0.1%的CHAPS(史丹尼克(Stennicke)H.R.及索維森(Salvesen)G.S.(1997)，凋亡蛋白酶-3、-6、-7及-8之生化特徵，J.Biol.Chem.272，25719-25723))中進行全部稀釋。

在室溫下培養15分鐘後，於泰肯分光光度計中，以360奈米的激發及444奈米的發射來測量從該基質之凋亡蛋白酶-3水解所釋放的螢光性AMC。在一或二位置競爭模型上，使用圖形墊v4.0，使用在培養15分鐘後的螢光性值對化合物的log10濃度來繪製，以計算IC₅₀值。

較佳化合物的IC₅₀值顯示出與對抗SKOV3s的EC₅₀值有相互關聯，其典型低於1uM。

無細胞試驗 使用細胞萃取物(凋亡體)之凋亡蛋白酶去阻遏試驗

讓100微克的293細胞S100抽出物及0.25uM-2uM的GST-XIAP融合蛋白質(XIAP-BIR3RING、XIAP-BIR2BIR3RING或全長XIAP)與一系列的稀釋化合物(40uM-5pM)共培養。藉由加入1mM dATP、0.1mM ALLN、133微克的細胞色素C(最後濃度)來活化存在於抽出物中的凋亡蛋白酶，及在37℃下溫育25分鐘。全部反應及稀釋皆使用S100緩衝液(50mM Pipes pH7.0，50mM KCl，0.5mM EGTA pH 8.0，2mM MgCl2(補充以2毫克/毫升之細胞鬆弛素(cytochalisin)B、2毫克/毫升之抑糜蛋白酶素(chymotstatin)、亮肽素、胃蛋白酶抑制素、抗痛素的1/1000稀釋物)，0.1M PMSF，1M DTT)。最後反應體積為30微升。藉由覆蓋30微升0.4mM的DEVD-AMC溶液來測量凋亡蛋白酶-3活性。在泰肯分光光度計中，於360奈米的激發及444奈米的發射下，使用1小時的動力學循環與每5分鐘進行一次讀取來測量所釋放的AMC切割物。凋亡蛋白酶活性計算為AMC螢光性/秒(Vo)。我們的化合物之凋亡蛋白酶去阻遏與經完全活化的萃取物及經活化由XIAP融合蛋白質存在而抑制之萃取物進行比較。

較佳化合物的IC₅₀值顯示出與對抗SKOV3的EC₅₀值相互關聯，其典型低於1uM。

細胞培養及細胞死亡試驗

A.細胞培養

將MDA-MD-231(乳房)及H460(肺)癌細胞培養在 補充以10% FBS及100單位/毫升的盤尼西林及鏈黴素(steptomycin)之RPMI 1640媒質中。

B.試驗

在不同細胞株上進行存活試驗，包括MDA-MB-231、SKOV3、H460、PC3、HCT-116及SW480細胞。以每井5000及2000個細胞的各別密度將細胞播種在96井板上，且在37℃下，於5%CO2存在下培養24小時。將所選擇的化合物稀釋進入不同濃度(範圍從0.01uM至最高100uM)的媒質中。將經稀釋的化合物加入到該MDA-MB-231細胞上。對MDA-MB-231、SKOV3、H460、PC3、HCT-116及SW480細胞來說，單獨或於1-3奈克/毫升TRAIL存在下加入該些化合物。在72小時後，使用以MTS為基礎的試驗來評估細胞生存能力。將[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鎓，內鹽；MTS]的溶液加入到細胞上1至4小時。在培養後，使用設定在570奈米處的泰肯分光光度計來評估所轉換的MTS量。

以所選擇的本發明化合物來處理MDA-MB-231、SKOV3及PC3細胞，且已發現具有100nM或較小的EC₅₀。當於TRAIL存在下以本發明之化合物來處理上述細胞株時，它們顯示出具有50nM或較小的EC₅₀。

存活MTT試驗

在以化合物處理前一天，將每井2000至4000個細胞板固在含有100微升媒質之經組織培養物處理的96井形 式碟中，且在37℃，5%CO₂下培養。在化合物處理那天，以細胞培養媒質將該化合物稀釋至2×的工作貯存濃度。然後，將100微升經稀釋的化合物加入至每井。在37℃，5%CO₂下培養經處理的板72小時。在培養後，如下評估細胞生存能力：將每井20微升在5毫克/毫升下的MTT試劑加入至細胞板。在37℃下，於5%CO₂存在下培養該板2小時。然後，從該板移除上層液及加入100微升的異丙醇。在泰肯分光光度計中以570奈米來測量吸收度。生存能力的百分比以獲得未經處理的細胞之訊號百分比來表示。

如在表7中看見，於上述表1中所表示的化合物通常顯示出對抗MDA-MB-231及SKOV-3細胞的EC₅₀值<1uM。所選擇的化合物具有EC₅₀<50nM。

A-EC₅₀低於50nM

B-EC₅₀低於250nM

C-EC₅₀高於1000nM

D-EC₅₀高於1000nM

細胞凋亡試驗：來自培養細胞的凋亡蛋白酶-3活性之測量

在處理前一天，將每井10,000個細胞板固在含有100微升媒質之經白色組織培養物處理的96井板中。在化合物處理那天，以細胞培養媒質將該化合物稀釋至2×工作貯存濃度，且對每井加入100微升的稀釋化合物，在37℃下，於5%CO₂存在下培養該板5小時。在培養後，以200微升的冷TRIS緩衝鹽液(TBS)緩衝液清洗該板兩次。以50微升的凋亡蛋白酶試驗緩衝液(20mM Tri-HCl pH7.4，0.1% NP-40， 0.1% Chaps，1mM DTT，0.1mM EDTA，0.1mM PMSF，2毫克/毫升的抑糜蛋白酶素、亮肽素、胃蛋白酶抑制素、抗痛素)來溶解細胞，然後在4℃下培養且搖晃30分鐘。將45微升的凋亡蛋白酶試驗緩衝液及5微升的Ac-DEVD-AMC以1毫克/毫升加入至每井，搖晃該板及在37℃下培養16小時。在泰肯分光光度計中，使用設定在360奈米及444奈米處之激發及發射濾波器來測量AMC的釋放量。與未經處理的細胞所獲得之訊號比較來表示出凋亡蛋白酶-3活性的百分比。

較佳化合物的IC₅₀值顯示出與對抗SKOV3之EC₅₀值相互關聯，且其典型低於1uM。

細胞生物化學：

A. XIAP及PARP/凋亡蛋白酶-3/凋亡蛋白酶-9之偵測

利用西方墨點法來進行細胞表現的XIAP及PARP之偵測。以300000細胞/井將細胞板固在60毫米井(6井板碟)中。隔天，以經選擇的化合物在指定的濃度下處理該些細胞。24小時後，藉由在4℃下以1800rpm離心來小球化細胞(經胰蛋白酶化的細胞)。以冷TBS沖洗所產生的小粒兩次。以250微升的溶解緩衝液(NP-40，甘油，1%的蛋白質酶抑制劑混合劑(西格瑪))來溶解該最後經清洗的細胞小粒，將其放置在4℃下25分鐘且溫和地搖晃。在4℃下以10,000rpm離心該細胞萃取物10分鐘。保留上層液及小粒二者以用於西方墨點分析，如描述在下列。評估來自上層液的蛋白質成分，將約50微克的蛋白質分餾到10%之 SDS-PAGE上。以溶解緩衝液來清洗丸粒及將其再懸浮至50微升1×拉美利(Lamelli)緩衝液中，煮沸及分餾到SDS-PAGE上。在電泳後，於0.6A下將每個凝膠電轉移到硝基纖維素薄膜上2小時。在室溫下，於TBST(含0.1%(v/v)屯(Tween)-20之TBS)中，以5%脫脂牛奶來阻礙薄膜非特定的位置1小時。對蛋白質免疫偵測來說，將該薄膜與對抗從貝克通-狄金森(Becton-Dickinson)獲得之XIAP選殖物48或從細胞訊號獲得的PARP而提高的一級抗體培養過夜，或在4℃下於如下稀釋物中搖晃培養凋亡蛋白酶-3或凋亡蛋白酶-9一級抗體：

XIAP選殖物80(貝克通-狄金森).......1/2500

PARP(細胞訊號)...........................1/2500

凋亡蛋白酶3(西格瑪).....................1/1500

凋亡蛋白酶9(上州(Upstate))............1/1000

在培養過夜後，讓該薄膜在TBST中接收三次洗滌15分鐘，然後在室溫中，於已與HRP-酵素(佳美工(Chemicon))耦合且以1/5000稀釋之二級抗體存在下，培養1小時。在培養後，每個薄膜以TBST清洗三次，且藉由加入螢光基質(ECL工具箱阿默珊(Amersham))及對不同的曝露時間來捕捉在X射線薄膜上的訊號，來偵測免疫反應帶。

某些已例示的化合物已顯示出可在接近與對抗SKOV3的EC₅₀值相互關聯之濃度(其典型低於1uM)下引發PARP切割。

中空纖維模型

使用活體內中空纖維模型來闡明所選擇的化合物對抗所選擇的細胞株之活體內功效，其中所選擇的化合物如為單一藥劑或可與所選擇的細胞毒素藥劑組合著治療。在第1天時，培養所選擇的細胞株且以約40,000細胞/纖維的細胞密度來填充該纖維。在操作那天(第4天)，將三條纖維皮下植入28-35 Nu/Nu CD-1公老鼠中。在第5天時，老鼠開始每日經由皮下途徑來接受注射適當濃度之對照媒劑或包含經選擇的化合物之媒劑，及/或經由腹膜內途徑來注射細胞毒素藥劑。在連續藥物治療3-7天後，犧牲動物，移出每條纖維及利用MTT試驗來測量殘存細胞的新陳代謝生存能力。該化合物的功效定義為在經媒劑治療的動物與經單獨化合物或所提供的化合物與細胞毒素藥劑組合著治療的動物間之差異。

在1天時植入MDA-MB-231細胞。經由IV巨量(尾巴靜脈)注射，以1、3及10毫克/公斤(2毫克/毫升在20%的水性HPCD中)來連續給藥該化合物3 4天。已觀察到化合物3可在3毫克/公斤的藥物濃度下完全抑制細胞生長(如與20%的HPCD對照比較)。

SKOV-3人類卵巢癌細胞株異體移植與化合物3之研究

在雌性CD-1裸小鼠(大約20-25克)右側中，皮下地皮下注射5×10⁶個在50%母性凝膠中之SKOV-3人類卵巢腫瘤細胞。在第55天時，當腫瘤為大約100立方毫米時，在實驗期間，使用5服用/2停用之治療計劃表，以化合物3開始治療。使用數位測徑器來測量腫瘤尺寸及以V=(a×b²)/2 來計算，其中a為最長的維度及b為寬度。

當化合物3的劑量為1毫克/公斤時可觀察到腫瘤消退，同時當化合物3的劑量為0.3毫克/公斤時可觀察到阻滯腫瘤生長(參見第1圖)。

MDA-MB-231人類乳房癌細胞株異體移植與化合物3之研究

在雌性CD-1裸小鼠(大約20-25克)右側中，皮下注射1×10⁶個MDA-MB-231人類乳房腫瘤細胞。在第71天時，當腫瘤為大約90立方毫米時，於實驗期間，使用5服用/2停用之治療計劃表，以化合物3開始治療。以數位測徑器來測量腫瘤尺寸及以V=(a×b²)/2來計算，其中a為最長的維度及b為寬度。

當化合物3的劑量為1毫克/公斤時可觀察到腫瘤消退(參見第2圖)。

藥物動力學研究

將所選擇的化合物溶解在生理食鹽水中，且使用不同給藥途徑(包括靜脈內巨量、靜脈內輸液、口服及皮下注射)以不同的劑量來提供。

本發明之化合物闡明出經由不同的給藥途徑皆具有可接受的藥物動力學。

試管內效力

本發明之化合物已證明可殺死SKOV3(卵巢)、MDA-MB-231(乳房)、BT549(乳房)、HL-60(急性前髓細胞白血病)及PANC-1(胰)、試管內細胞株，其闡明出0.1nM至 1000nM的EC₅₀範圍(參見表7)。

使用SKOV3繪製出這些化合物的SAR及其趨向於顯露出一些利益。在吡咯啶橋接位置處的立體化學改變會影響該化合物之效力，如在順-及反-脯胺酸衍生物3及29之EC₅₀中看見(EC₅₀各別為1nM，88nM)。醯胺橋接單元可提供一活性化合物，但是，可藉由變化該橋接單元的組分在對抗SKOV3細胞之效力上觀察到有意義的範圍。包括(但不限於)1,4-苯基二甲醯胺類(對酞醯基醯胺類)、1,3-苯基二甲醯胺類、2,6-萘基二甲醯胺類、1,4-環己基二甲醯胺類、3,5-吡啶基二甲醯胺類或C₂-C₁₀脂肪族二甲醯胺類之小形態限制的橋接單元可提供高活性化合物。包含雙甘胺酸醯胺類的橋接單元(諸如，化合物30)可提供較少活性的化合物(EC₅₀=188nM)。

醚、尿素及磺醯胺橋接單元可提供具有對抗SKOV3細胞活性的化合物，然而磺醯胺橋接化合物通常較低活性。

可藉由改變P4取代來觀察在對抗SKOV3細胞的效力上之明顯偏移，其中在R⁴/R⁴⁰⁰醯胺處的(R)-立體化學可提供一比相符合的(S)-異構物之效力強5-10倍的化合物。接近醯胺處引進親水性部分可提供較低活性的化合物，諸如化合物49。

額外地，N端丙胺酸部分的烷基化可提供一比相符合之未經取代的N端丙胺酸衍生物之效力高至100倍的化合物。

但是，一癌細胞株的支組對本發明之化合物固有地不敏感，其EC₅₀大於1000nM。我們已闡明IAP BIR黏結化合物闡明出可與死亡受體同效劑(諸如，TRAIL、同效劑TRAIL受體抗體、TNF-α及其它)協同來殺死多種癌細胞株。我們於此揭示出的式I及II之化合物亦闡明可與死亡受體同效劑(諸如，TRAIL)協同來殺死多種癌細胞株。當這些細胞經化合物及TRAIL或拮抗劑TRAIL抗體處理時，這些細胞株對化合物高度敏感，其EC₅₀通常低於100nM。

這些癌細胞株包括HELA(子宮頸)、HCT116(結腸)、PC3(前列腺)、OVCAR-3(卵巢)、HEY(卵巢)及H460(肺)。於TRAIL(1-3奈克/毫升)及不同化合物3濃度存在下，上述細胞株的EC₅₀低於1000nM。

活體內效力

以SKOV3及MDA-MB-231異體移植腫瘤模型來測試化合物3(參見第1及2圖)。在二實例中，當提供5天服用及2天停用時，可在1毫克/公斤下觀察到腫瘤消退。在SKOV3異體移植中，於0.1毫克/公斤下觀察到阻滯腫瘤生長。

討論

上述結果建議本發明之IAP BIR黏結化合物為一高效力藥劑(試管內及活體內二者)，其中在IAP黏結與IAP調節間的機制連結可與抗癌功效相互關聯。我們已闡明本發明之化合物會以高親和力黏結至IAP的BIR區域而造成活性凋亡蛋白酶3及9釋放。再者，這些化合物可在癌細胞中 造成誘導細胞凋亡，同時可協同地讓癌細胞株對死亡受體同效劑(諸如TRAIL)敏感化。再者，當以本發明之化合物治療攜有腫瘤的動物時，已闡明可以醫藥相關的劑量來阻滯腫瘤生長及/或消退腫瘤。

本發明之化合物已闡明可經由一些給藥途徑而具有可接受的藥物動力學。

其它具體實施例

將由一般技藝人士從前述說明中明瞭，可對於此所描述的本發明製得變化及改質以便讓其適應於不同用途及狀態。此些具體實施例亦在本發明之範圍內。

在此專利說明書中所提到的全部公告藉此以參考方式併入本文。

Claims (19)

1. 一種用於製備化學式19-9之化合物或其鹽類的方法，該方法包含下列步驟： 以及 其中PG⁴為一保護基團； X及X¹獨立地為：1)O，2)NR¹³，3)S，4)-C₁-C₆烷基-，5)-C₁-C₆烷基-O-，6)-C₁-C₆烷基-NR¹³-，7)-C₁-C₆烷基-S-，8)9)10)11)12)13)14)，或15)； L係：1)-C₁-C₂₀烷基-，2)-C₂-C₆烯基-，3)-C₂-C₄炔基- 4)-C₃-C₇環烷基-，5)-芳基- 6)-聯苯基-，7)-雜芳基-，8)-雜環基-，9)-C₁-C₆烷基-(C₂-C₆烯基)-C₁-C₆烷基-，10)-C₁-C₆烷基-(C₂-C₄炔基)-C₁-C₆烷基-，11)-C₁-C₆烷基-(C₃-C₇環烷基)-C₁-C₆烷基-，12)-C₁-C₆烷基-芳基-C₁-C₆烷基-，13)-C₁-C₆烷基-聯苯基-C₁-C₆烷基-，14)-C₁-C₆烷基-雜芳基-C₁-C₆烷基-，15)-C₁-C₆烷基-雜環基-C₁-C₆烷基-，16)-C₁-C₆烷基-Y-C₁-C₆烷基-，17)-芳基-Y-芳基-，18)-雜芳基-Y-雜芳基-，19)-雜環基-Y-雜環基-，20)，或21)， 其中該L中之烷基、烯基、炔基及環烷基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；及該芳基、聯苯基、雜芳基及雜環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；R¹係：1)H，或2)可選擇性經一或多個R⁶取代基取代的C₁-C₆烷基；R²係-CH₃、-CH₂CH₃或-CH₂OH；R³係選擇性經一或多個R⁶取代基取代的C₁-C₆烷基；R⁴及R⁵各自獨立地為：1)H，2)鹵烷基，3)C₁-C₆烷基，4)C₂-C₆烯基，5)C₂-C₄炔基，6)C₃-C₇環烷基，7)C₃-C₇環烯基，8)芳基，9)雜芳基，10)雜環基，11)雜雙環基，12)C(O)-R¹¹，13)C(O)O-R¹¹，14)C(=Y)NR⁸R⁹，或 15)-S(O)₂-R¹¹，其中該R⁴及R⁵中之烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；及其中該芳基、雜芳基、雜環基及雜雙環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；R⁶為：1)鹵素，2)NO₂，3)CN，4)鹵烷基，5)C₁-C₆烷基，6)C₂-C₆烯基，7)C₂-C₄炔基，8)C₃-C₇環烷基，9)C₃-C₇環烯基，10)芳基，11)雜芳基，12)雜環基，13)雜雙環基，14)-OR⁷，15)-S(O)_mR⁷，16)-NR⁸R⁹，17)-NR⁸S(O)₂R¹¹，18)-COR⁷， 19)-C(O)OR⁷，20)-CONR⁸R⁹，21)-S(O)₂NR⁸R⁹，22)-OC(O)R⁷，23)-OC(O)Y-R¹¹，24)-SC(O)R⁷，或25)-NC(Y)NR⁸R⁹，其中該R⁶中之芳基、雜芳基、雜環基及雜雙環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；R⁷為：1)H，2)鹵烷基，3)C₁-C₆烷基，4)C₂-C₆烯基，5)C₂-C₄炔基，6)C₃-C₇環烷基，7)C₃-C₇環烯基，8)芳基，9)雜芳基，10)雜環基，11)雜雙環基，12)R⁸R⁹NC(=Y)，或13)C₁-C₆烷基-C₂-C₄烯基，或14)C₁-C₆烷基-C₂-C₄炔基， 其中該R⁷中之烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；及其中該芳基、雜芳基、雜環基及雜雙環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；R⁸及R⁹獨立地為：1)H，2)鹵烷基，3)C₁-C₆烷基，4)C₂-C₆烯基，5)C₂-C₄炔基，6)C₃-C₇環烷基，7)C₃-C₇環烯基，8)芳基，9)雜芳基，10)雜環基，11)雜雙環基，12)-C(O)R¹¹，13)-C(O)Y-R¹¹，或14)-S(O)₂-R¹¹，其中該R⁸及R⁹中之烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；及其中該芳基、雜芳基、雜環基及雜雙環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；或R⁸及R⁹與它們所鍵結的氮原子一起形成一選擇性 經一或多個R⁶取代基取代之五、六或七員雜環；R¹⁰為：1)鹵素，2)-NO₂，3)-CN，4)-B(OR¹³)(OR¹⁴)，5)C₁-C₆烷基，6)C₂-C₆烯基，7)C₂-C₄炔基，8)C₃-C₇環烷基，9)C₃-C₇環烯基，10)鹵烷基，11)-OR⁷，12)-NR⁸R⁹，13)-SR⁷，14)-COR⁷，15)-C(O)OR⁷，16)-S(O)_mR⁷，17)-CONR⁸R⁹，18)-S(O)₂NR⁸R⁹，19)芳基，20)雜芳基，21)雜環基，或22)雜雙環基， R¹¹為：1)鹵烷基，2)C₁-C₆烷基，3)C₂-C₆烯基，4)C₂-C₄炔基，5)C₃-C₇環烷基，6)C₃-C₇環烯基，7)芳基，8)雜芳基，9)雜環基，或10)雜雙環基，其中該R¹¹中之烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；及其中該芳基、雜芳基、雜環基及雜雙環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代；R¹³及R¹⁴獨立地為：1)H，或2)C₁-C₆烷基；或R¹³及R¹⁴可結合以形成一雜環或雜雙環基環。
2. 如請求項1之方法，其中中間化合物20-4係經由包含下列步驟之方法所製備： 其中PG³為一保護基團。
3. 如請求項2之方法，其中中間化合物20-2係經由包含下列步驟之方法所製備： 其中PG¹及PG²為保護基團。
4. 如請求項1之方法，其中X及X¹係獨立地選自於：1)O，2)NR¹³，3)S，4)-C₁-C₆烷基-O-， 5)-C₁-C₆烷基，6)7)8)9)，或10)。
5. 如請求項1之方法，其中X及X¹係獨立地選自於：1)O，2)，或3)。
6. 如請求項1之方法，其中L係選自於：1)-C₁-C₂₀烷基-，2)-C₃-C₇環烷基-，3)-芳基- 4)-聯苯基-，5)-雜芳基-， 6)-C₁-C₆烷基-(C₂-C₄炔基)-C₁-C₆烷基-，7)-C₁-C₆烷基-芳基-C₁-C₆烷基-，8)-芳基-Y-芳基-，9)，或10)，其中該L中之烷基、烯基、炔基及環烷基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；及該芳基、聯苯基、雜芳基及雜環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代。
7. 如請求項1之方法，其中該L係選自於由下列所組成之群組： 其中r係1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
8. 如請求項1之方法，其中R¹及R¹⁰⁰二者皆為CH₃。
9. 如請求項1之方法，其中R³及R³⁰⁰二者皆為C(CH₃)₃。
10. 如請求項1之方法，其中R⁴係H，以及R⁵係：1)C₁-C₆烷基，2)C₂-C₆烯基，3)C₂-C₄炔基，4)C₃-C₇環烷基，5)C₃-C₇環烯基，6)芳基，7)雜芳基，8)雜環基，或9)雜雙環基，其中該R⁵中之烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；及其中該芳基、雜芳基、雜環基及雜雙環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代。
11. 如請求項1之方法，其中R⁴係H，以及R⁵係：1)C₁-C₆烷基，或2)芳基，其中該R⁵中之烷基可選擇性經一或二個R⁶取代基取代，以及其中該芳基可選擇性經一個R¹⁰取代基取代。
12. 如請求項1之方法，其中R⁴係H，以及R⁵係選自於由下列所組成之群組： 其中n係0、1或2，以及X係O、S或SO₂。
13. 如請求項1之方法，其中R¹¹係：1)C₁-C₆烷基，或2)芳基，其中該R¹¹中之烷基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代；及其中該芳基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代。
14. 如請求項1之方法，其中R¹¹係：1)可選擇性經一或二個R⁶取代基取代之C₁-C₆烷基，或2)可選擇性經一個R¹⁰取代基取代之苯基。
15. 如請求項1之方法，其中R⁶係：1)鹵素，2)NO₂，3)CN，4)芳基，5)雜芳基， 6)雜環基，7)雜雙環基，8)OR⁷，9)SR⁷，或10)NR⁸R⁹，其中該R⁶中之芳基、雜芳基、雜環基及雜雙環基可選擇性經一或多個R¹⁰取代基取代。
16. 如請求項1之方法，其中R⁶係：1)鹵素，2)芳基，或3)NR⁸R⁹，其中該R⁶中之芳基可選擇性經一個R¹⁰取代基取代。
17. 如請求項1之方法，其中R⁸及R⁹各自獨立地為：1)H，2)鹵烷基，3)C₁-C₆烷基，4)C₂-C₆烯基，5)C₂-C₄炔基，6)C₃-C₇環烷基，或7)C₃-C₇環烯基，其中該R⁸及R⁹中之烷基、烯基、炔基、環烷基及環烯基可選擇性經一或多個R⁶取代基取代。
18. 如請求項1之方法，其中R¹⁰係：1)鹵素， 2)NO₂，3)CN，10)鹵烷基，11)OR⁷，12)NR⁸R⁹，或13)SR⁷。
19. 一種化學式19-2、19-8、19-9、20-1或20-3之化合物， 其中PG¹、PG²、PG³及PG⁴為保護基團，以及R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、X、X¹及L係如請求項1中所界定者。