TW201533060A - 抗ｃｄ３３抗體及免疫結合物 - Google Patents

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Steven Leong
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Abstract

本發明提供抗CD33抗體及免疫結合物以及其使用方法。

Description

抗CD33抗體及免疫結合物
本發明係關於抗CD33抗體及免疫結合物以及其使用方法。
CD33為唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素家族成員，其係67-kDa糖基化跨膜蛋白。除了定向骨髓單核細胞及紅血球系祖細胞之外，其亦表現於大多數骨髓及單核細胞白血病細胞上。其未見於最早的多能幹細胞、成熟粒細胞、淋巴樣細胞或非造血細胞上。參見Sabbath等，J.Clin.Invest.75：756-56(1985)及Andrews等，Blood 68：1030-5(1986)。CD33在其胞質尾區上含有兩個酪胺酸殘基，其各自後接與許多抑制性受體中可見之基於免疫受體酪胺酸之抑制基元(ITIM)類似的疏水性殘基。
基於單株抗體(mAb)之療法已變成癌症之重要治療方式。白血病由於惡性細胞在血液、骨髓、脾臟及淋巴結中之可達性以及允許鑒別抗原靶標之各種譜系及造血分化階段之明確定義的免疫表型而非常適合此種方法。大多數針對急性骨髓白血病(AML)之研究集中於CD33。關於未結合抗CD33 mAb林妥珠單抗(lintuzumab)之反應已具有適度的單劑及針對AML之活性，並且當與習知化學療法組合時在兩個隨機化試驗中不能改善患者預後。免疫結合物吉姆單抗奧佐米星(gemtuzumab ozogamicin)(GO；Mylotarg)、結合至抗腫瘤抗生素卡奇黴素(calicheamicin)之抗CD33單株抗體，當與標準化學療法組合時，改善 AML患者子集中之存活，但安全性擔憂導致在美國從市場撤回。另外，在AML患者中進行抗CD33-美素登結合物(AVE9633；huMy9-6-DM4)之三個I期研究。僅在一個I期研究(施用時程日1/8)中測定最大耐受劑量(MTD)，因為其他兩項研究由於在遠高於飽和劑量之劑量下無明顯活性跡象而在達到MTD之前中止。AVE9633在I期施用時程日1/8中之活性為適度的。Lapusan等，Invest.New Drugs 30：1121-1131(2012)。
此項技術中需要靶向CD33以診斷及治療CD33相關病狀、諸如癌症之安全且有效之藥劑。本發明滿足該需求且提供其他益處。
本發明提供抗CD33抗體及免疫結合物以及其使用方法。
在一些實施方案中，提供結合於CD33之經分離之抗體。在一些實施方案中，抗體結合於CD33且具有下列特徵中之一或多者：a)結合於重組人類CD33；b)結合於重組食蟹猴CD33；c)結合於人類外周血單核細胞(PBMC)表面上之內源性CD33；d)結合於食蟹猴PBMC表面上之內源性CD33；e)結合於癌細胞表面上之內源性CD33；f)結合於AML癌細胞表面上之內源性CD33；g)結合於Molm-13細胞表面上之內源性CD33；h)結合於包含R69G突變之CD33；i)結合於CD33 Ig V結構域；j)結合於在N100缺乏N連接之糖基化之CD33；k)結合於在N113缺乏N連接之糖基化之CD33；l)結合於包含S102A突變之CD33；m)結合於包含S115A突變之CD33； n)不結合CD33 Ig C2結構域；o)與My9.6抗體競爭人類CD33結合；p)與抗體33H4競爭人類CD33結合；q)與抗體23E4競爭人類CD33結合；r)以小於15nM、小於10nM、小於7nM、小於5nM或小於3nM之Kd結合於內源性人類CD33；s)以小於10nM、小於7nM、小於5nM或小於3nM之Kd結合於重組人類CD33；及/或t)以小於10nM、小於7nM、小於5nM或小於3nM、小於2nM或小於1nM之Kd結合於重組食蟹猴CD33。
在一些實施方案中，提供結合於CD33之經分離之抗體，其中該抗體包含(a)包含SEQ ID NO：112之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：113之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：114之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：111之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。在一些實施方案中，該抗體包含(a)包含SEQ ID NO：115之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：116之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：117之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。在一些實施方案中，該抗體包含(a)包含SEQ ID NO：118之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：119之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：111之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在一些實施方案中，結合CD33之抗體包含(a)包含SEQ ID NO：8、 SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：23或SEQ ID NO：30之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34或SEQ ID NO：35之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28或SEQ ID NO：29之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在一些實施方案中，結合CD33之抗體包含：(i)(a)包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(ii)(a)包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：13之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(iii)(a)包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(iv)(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(v)(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：26之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(vi)(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：27之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(vii)(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：28之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(viii)(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：29之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(ix)(a)包含SEQ ID NO：30之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序 列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(x)(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：31之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(xi)(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：32之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(xii)(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：33之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(xiii)(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：34之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；或(xiv)(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：35之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含 SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在一些實施方案中，結合CD33之抗體包含：a)包含SEQ ID NO：66之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：65之序列之輕鏈可變區；b)包含SEQ ID NO：68之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：67之序列之輕鏈可變區；c)包含SEQ ID NO：78之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：77之序列之輕鏈可變區；d)包含SEQ ID NO：80之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：79之序列之輕鏈可變區；e)包含SEQ ID NO：82之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：81之序列之輕鏈可變區；f)包含SEQ ID NO：84之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：83之序列之輕鏈可變區；g)包含SEQ ID NO：86之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：85之序列之輕鏈可變區；h)包含SEQ ID NO：88之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：87之序列之輕鏈可變區；i)包含SEQ ID NO：90之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：89之序列之輕鏈可變區；j)包含SEQ ID NO：92之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：91之序列之輕鏈可變區；k)包含SEQ ID NO：94之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：93之序列之輕鏈可變區；l)包含SEQ ID NO：96之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：95 之序列之輕鏈可變區；m)包含SEQ ID NO：98之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：97之序列之輕鏈可變區；或n)包含SEQ ID NO：100之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：99之序列之輕鏈可變區。
在一些實施方案中，提供結合於CD33之經分離之抗體。在一些實施方案中，該抗體結合於CD33且具有下列特徵中之一或多者：a)結合於重組人類CD33；b)結合於重組食蟹猴CD33；c)結合於人類外周血單核細胞(PBMC)表面上之內源性CD33；d)以小於10nM、小於7nM、小於5nM、小於3nM、小於2nM或小於1nM之Kd結合於重組人類CD33；及/或e)以小於10nM、小於7nM、小於5nM、小於3nM、小於2nM或小於1nM之Kd結合於重組食蟹猴CD33。
在一些實施方案中，結合於CD33之經分離之抗體包含(a)包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列之HVR-L3。
在一些實施方案中，結合CD33之抗體包含：a)包含SEQ ID NO：70之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：69之序列之輕鏈可變區；b)包含SEQ ID NO：72之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：71之序列之輕鏈可變區；c)包含SEQ ID NO：74之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：73之序列之輕鏈可變區；或 d)包含SEQ ID NO：76之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：75之序列之輕鏈可變區。
在一些實施方案中，結合於CD33之經分離之抗體包含(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在一些實施方案中，結合於CD33之經分離之抗體包含(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：26之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在一些實施方案中，結合於CD33之經分離之抗體包含(a)包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列之HVR-L3。
在一些實施方案中，抗體為單株抗體。在一些實施方案中，抗體為人類、人源化或嵌合抗體。在一些實施方案中，抗體為IgG1、IgG2a或IgG2b抗體。在一些實施方案中，抗體為結合CD33之抗體片段。在一些實施方案中，CD33為具有SEQ ID NO：1之序列且具有或不具有信號序列(例如，具有或不具有胺基酸1-17)的人類CD33。
在一些實施方案中，提供編碼本文所述之抗體之分離核酸。在一些實施方案中，提供包含該核酸之宿主細胞。在一些實施方案中，提供一種製備抗體之方法，其包括培養該宿主細胞以便製備該抗體。
在一些實施方案中，提供一種包含本文所述之抗體及細胞毒性劑 之免疫結合物。在一些實施方案中，該免疫結合物具有式Ab-(L-D)p，其中：(a)Ab為技術方案1至15中任一項之抗體；(b)L為連接子；(c)D為細胞毒性劑；及(d)p在1-8範圍內。
在一些實施方案中，該細胞毒性劑選自類美登素、卡奇黴素、吡咯并苯并二氮呯及奈莫柔比星(nemorubicin)衍生物。在一些實施方案中，D為式A之吡咯并苯并二氮呯： 其中虛線指示C1與C2或者C2與C3之間之雙鍵的視情況存在；R2獨立地選自H、OH、=O、=CH2、CN、R、OR、=CH-RD、=C(RD)2、O-SO2-R、CO2R及COR，並且視情況進一步選自鹵基或二鹵基，其中RD獨立地選自R、CO2R、COR、CHO、CO2H及鹵基；R6及R9獨立地選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR'、NO2、Me3Sn及鹵基；R7獨立地選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR'、NO2、Me3Sn及鹵基；Q獨立地選自O、S及NH；R11為H或R，或者其中Q為O、SO3M，其中M為金屬陽離子；R及R'各自獨立地選自視情況經取代之C1-8烷基、C3-8雜環基及C5-20芳基，並且視情況關於基團NRR'，R及R'與其所連接之氮原子一起形成視情況經取代之4員、5員、6員或7員雜環； R12、R16、R19及R17係分別如關於R2、R6、R9及R7所定義；R"為C3-12伸烷基，該鏈可間雜有一或多個視情況經取代之雜原子及/或芳族環；及X及X'獨立地選自O、S及N(H)。
在一些實施方案中，D具有以下結構： 其中n為0或1。
在一些實施方案中，D為奈莫柔比星衍生物。在一些實施方案中，D具有選自以下之結構：
在一些實施方案中，免疫結合物包含可由蛋白酶裂解之連接子。 在一些實施方案中，免疫結合物包含酸不穩定之連接子。在一些實施方案中，連接子包含腙。
在一些實施方案中，包含本文所述之抗體之免疫結合物具有選自以下之式： 及
在任何本文所述之免疫結合物實施方案中，p在2-5範圍內。
在一些實施方案中，提供醫藥調配物。在一些實施方案中，醫藥調配物包含本文所述之免疫結合物及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施方案中，該醫藥調配物包含另一治療劑。
在一些實施方案中，提供治療方法。在一些實施方案中，提供治療CD33陽性癌症之方法。在一些實施方案中，治療方法包括向個體施用有效量之本文所述之免疫結合物或本文所述之醫藥調配物。在一些 實施方案中，該CD33陽性癌症為AML。在一些實施方案中，該方法包括向個體施用另一治療劑。
在一些實施方案中，提供抑制CD33陽性細胞增殖之方法。在一些實施方案中，該方法包括在允許本文所述之免疫結合物與細胞表面上之CD33結合之條件下使該細胞暴露於該免疫結合物，從而抑制該細胞之增殖。在一些實施方案中，該細胞為AML癌細胞。
在一些實施方案中，提供偵測生物樣本中之人類CD33之方法。在一些實施方案中，方法包括在允許抗CD33抗體與天然存在之人類CD33結合之條件下使該生物樣本與該抗CD33抗體接觸，以及偵測該生物樣本中是否形成該抗CD33抗體與該天然存在之人類CD33之複合物。在一些實施方案中，抗CD33抗體為本文所述之抗體。在一些實施方案中，生物樣本為AML癌症樣本。
在一些實施方案中，提供用於偵測CD33陽性癌症之方法。在一些該等實施方案中，方法包括(i)向具有或疑似具有CD33陽性癌症之受試者施用經標記之抗CD33抗體，及(ii)偵測該受試者中之該經標記之抗CD33抗體，其中該經標記之抗CD33抗體之偵測指示該受試者中存在CD33陽性癌症。在一些實施方案中，抗CD33抗體為本文所述之抗體。在一些該等實施方案中，經標記之抗CD33抗體包含結合於正電子發射體之抗CD33抗體。在一些實施方案中，該正電子發射體為89Zr。
圖1A-B顯示7A1、9C2、10D3及15G15之輕鏈可變區序列(A)及重鏈可變區序列(B)之比對。
圖2A-B顯示15G15、15G15.33、15G15.37、15G15.83、15G15.88、15G15.7、15G15.17、15G15.30、15G15.31、15G15.39及15G15.84之輕鏈可變區序列(A)及重鏈可變區序列(B)之比對。
圖3A-B顯示23E4、27C6、33F3、33F9及33H4之輕鏈可變區序列 (A)及重鏈可變區序列(B)之比對。
圖4A-B顯示9C3、9C3.2、9C3.3及9C3.4之輕鏈可變區序列(A)及重鏈可變區序列(B)之比對。
圖5A-D顯示抗CD33抗體與重組CD33之物種交叉反應性。顯示結合於表現重組人類(hu)CD33(A、C)及食蟹猴(cyno)CD33(B、D)之293細胞之抗CD33抗體。
圖6A-D顯示結合於表現於Molm-13(A、C)及AML(B、D)細胞中之內源性huCD33之抗CD33抗體。
圖7A-D顯示抗CD33抗體與內源性CD33之物種交叉反應性。抗CD33抗體結合於huCD33+(A、C)及cynoCD33+(B、D)骨髓細胞。
圖8A-D顯示使用huCD33(A-C)及cynoCD33(D)之抗CD33抗體抗原決定基框併及與MY9.6之比較。關於MY9，參見例如Griffin等，Leuk Res.8：521(1984)。
圖9顯示抗CD33抗體15G15與抗CD33抗體27C6、9C2、33F9、10D3、7A1、15G15、23E4及33H4之間針對人類CD33結合之例示性抗體競爭實驗。
圖10A-C顯示抗CD33抗體9C3並不與抗CD33抗體15G15.33競爭且結合於不同於15G15.33之抗原決定基。
圖11顯示9C3抗體、9C3.2、9C3.3及9C3.4之變異體具有改良之與huCD33之結合。
圖12A-D.圖12A顯示實施例中所用之結構域交換多肽之示意圖。圖12B-D顯示抗CD33抗體7A1、9C2、10D3及15G15結合於huCD33之Ig樣V結構域。
圖13A-C顯示抗CD33抗體WM53(A)及15G15(B)能夠結合於缺乏N連接之糖基化之huCD33 Ig樣V結構域。在圖13C中，huCD33之Ig樣V結構域之一致N-糖基化位點序列經加框，包括突變位點S102A及 S115A。(由於僅顯示Ig樣V結構域，因此附圖中所示之編號不同於全長CD33之編號)。
圖14A-C顯示CD33(A)之R69及G69 Ig-V結構域之野生型及單一核苷酸多態性(SNP)序列，並且顯示抗CD33抗體7A1、9C2、10D3、15G15、23E4、27C6、33F9及33H4之結合不受SNP(r2455069)(例如，R69G)影響。
圖15A-B顯示抗CD33抗體15G15及15G15.33 L-D#1之內化及活體外效能。
圖16A-B顯示在HL-60(A)及EOL-1(B)異種移植物中在用各種劑量之15G15.33 Thio-HC A118C L-D#1(L-D#1係藉由將連接子-藥物部分單甲基-吡啶基二硫化物、N10連接之吡咯并苯并二氮呯 結合而製得)及15G15.33 Thio-LC V205C L-D#1處理後，腫瘤體積(mm3)隨時間之變化。
圖17顯示在HL-60異種移植物中在用各種濃度之15G15 Thio-HC A118C L-D#2(L-D#2係藉由將連接子-藥物部分順丁烯二醯亞胺與縮 醛連接子-PNU結合而製得)後，腫瘤體積(mm3) 隨時間之變化。
I.定義
用於本文目的之「接受體人類構架」為包含來源於如下所定義之人類免疫球蛋白構架或人類一致構架之輕鏈可變域(VL)構架或重鏈可變域(VH)構架之胺基酸序列的構架。「來源於」人類免疫球蛋白構架或 人類一致構架之接受體人類構架可包含其相同之胺基酸序列，或它可含有胺基酸序列變化。在一些實施方案中，胺基酸變化之數目為10或更小、9或更小、8或更小、7或更小、6或更小、5或更小、4或更小、3或更小或者2或更小。在一些實施方案中，VL接受體人類構架序列與VL人類免疫球蛋白構架序列或人類一致構架序列一致。
「親和力」係指分子(例如，抗體)之單一結合位點與其結合搭配物(例如，抗原)之間全部非共價相互作用總和的強度。除非另外說明，否則如本文所用之「結合親和力」係指反映結合對之成員(例如，抗體及抗原)之間1：1相互作用之內在結合親和力。分子X對其搭配物Y之親和力通常可用解離常數(Kd)來表示。親和力可藉由此項技術中已知之常用方法(包括本文所述之彼等方法)進行量測。用於量測結合親和力之特定說明性及例示性實施方案經描述於下文。
「親和力成熟之」抗體係指與不具有此類改變之親本抗體相比，在一或多個高變區(HVR)中具有一或多個改變之抗體，此類改變導致抗體對抗原之親和力提高。
術語「抗CD33抗體」及「結合於CD33之抗體」係指能夠以足夠親和力結合CD33之抗體，以使得該抗體可用作靶向CD33之診斷及/或治療劑。在一個實施方案中，抗CD33抗體與不相關、非CD33蛋白之結合程度小於抗體與CD33之結合之約10%，例如藉由放射免疫檢定(RIA)所量測。在某些實施方案中，結合於CD33之抗體具有1μM、100nM、10nM、5nm、4nM、3nM、2nM、1nM、0.1nM、0.01nM或0.001nM(例如，10-8M或更少，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)之解離常數(Kd)。在某些實施方案中，抗CD33抗體結合於CD33之抗原決定基，該抗原決定基在不同物種之CD33之間為保守的。
術語「抗體」在本文以最寬泛意義使用且涵蓋各種抗體結構，包 括(但不限於)單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)和抗體片段，只要它們展現出所需之抗原結合活性即可。
「抗體片段」係指不同於完整抗體之分子，該分子包含完整抗體之一部分並且結合完整抗體所結合之抗原。抗體片段之實例包括(但不限於)Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；雙功能抗體(diabody)；線性抗體；單鏈抗體分子(例如scFv)；及由抗體片段形成之多特異性抗體。
作為參考抗體之「結合於相同抗原決定基之抗體」係指在競爭檢定中阻斷參考抗體與其抗原之結合50%或更多之抗體，並且相反地，在競爭檢定中參考抗體阻斷抗體與其抗原之結合50%或更多。本文提供例示性競爭檢定。
術語「癌症」及「癌性」係指或描述哺乳動物中通常以失調之細胞生長/增殖為特徵的生理病狀。癌症之實例包括(但不限於)癌瘤、淋巴瘤(例如，霍奇金氏淋巴瘤及非霍奇金氏淋巴瘤)、母細胞瘤、肉瘤及白血病。該等癌症之更具體實例包括急性骨髓白血病(AML)、骨髓增生異常症候群(MDS)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性骨髓單核細胞性白血病、急性前髓細胞性白血病(APL)、慢性骨髓增生性病症、血小板增多性白血病(thrombocytic leukemia)、前體B細胞急性淋巴母細胞性白血病(pre-B-ALL)、前體T細胞急性淋巴母細胞性白血病(preT-ALL)、多發性骨髓瘤(MM)、肥大細胞疾病、肥大細胞白血病、肥大細胞肉瘤、骨髓肉瘤、淋巴性白血病及未分化白血病。在一些實施方案中，癌症為骨髓白血病。在一些實施方案中，癌症為急性骨髓白血病(AML)。
術語「嵌合」抗體係指其中一部分重鏈和/或輕鏈衍生自特定來源或物種，而其餘重鏈和/或輕鏈衍生自不同來源或物種之抗體。
抗體之「類別」係指其重鏈所擁有之恆定域或恆定區之類型。存在五種主要類別之抗體：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，並且此等中之 數種可進一步劃分成子類(同種型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。對應於免疫球蛋白之不同類別之重鏈恆定域分別被稱為α、δ、ε、γ及μ。
如本文所用之術語「細胞毒性劑」係指抑制或阻止細胞功能及/或引起細胞死亡或破壞的物質。細胞毒性劑包括(但不限於)：放射性同位素(例如，At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212以及Lu之放射性同位素)；化學治療劑或藥物(例如，甲胺喋呤、阿黴素、長春花生物鹼(長春新鹼、長春鹼、依託泊苷)、多柔比星、美法侖(melphalan)、絲裂黴素C、苯丁酸氮芥、道諾黴素或其他嵌入劑)；生長抑制劑；酶及其片段諸如溶核酶；抗生素；毒素諸如細菌、真菌、植物或動物來源之小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段及/或變異體；以及下文揭示之各種抗腫瘤或抗癌劑。
「效應功能」係指由抗體之Fc區引起之彼等生物活性，其隨抗體同種型而發生變化。抗體效應功能之實例包括：C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；以及B細胞激活。
藥劑(例如，醫藥調配物)之「有效量」係指以劑量及在需要的時間段內能有效獲得所需之治療或預防結果的量。
術語「抗原決定基」係指抗原分子上與抗體結合之特定位點。
本文之術語「Fc區」用於定義含有恆定區之至少一部分之免疫球蛋白重鏈的C端區域。該術語包括天然序列Fc區及可變Fc區。在一個實施方案中，人類IgG重鏈Fc區自Cys226或Pro230延伸至重鏈之羧基端。然而，Fc區之C端離胺酸(Lys447)可能存在或可能不存在。除非本文另外說明，否則Fc區或恆定區中之胺基酸殘基之編號係根據EU編號系統，亦稱為EU索引，如Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991中所述。
「構架」或「FR」係指可變域殘基而非高變區(HVR)殘基。可變域之FR通常由四個FR結構域組成：FR1、FR2、FR3及FR4。因此，HVR及FR序列在VH(或VL)中通常以下列順序出現：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「全抗體」在本文中可互換使用以指具有基本上類似於天然抗體結構之結構或具有含有如本文所定義之Fc區之重鏈的抗體。
術語「CD33之糖基化形式」係指藉由添加碳水化合物殘基進行轉譯後修飾之CD33的天然存在形式。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及「宿主細胞培養物」可互換使用並且係指已經引入外源核酸之細胞，包括該等細胞之後代。宿主細胞包括「轉化體」及「轉化細胞」，其包括初始轉化細胞以及由此衍生之後代，而不考慮傳代之次數。後代之核酸含量可能不與親本細胞完全一致，而可能含有突變。本文包括與所篩選或所選擇之與初始轉化細胞具有相同功能或生物活性的突變體後代。
「人類抗體」為具有對應於由人類或人類細胞所產生之抗體之胺基酸序列或來源於利用人類抗體庫或其他人類抗體編碼序列之非人類來源之胺基酸序列的抗體。人類抗體之此定義明確排除包含非人類抗原結合殘基之人源化抗體。
「人類一致構架」為代表在選擇人類免疫球蛋白VL或VH構架序列中最通常存在之胺基酸殘基的構架。通常，人類免疫球蛋白VL或VH序列之選擇來自可變域序列之子群。通常，序列之子群為如Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，NIH Publication 91-3242,Bethesda MD(1991)，第1-3卷中之子群。在一個實 施方案中，對於VL，子群為如Kabat等，同上中之子群κI。在一個實施方案中，對於VH，子群為如Kabat等，同上中之子群III。
「人源化」抗體係指包含來自非人類HVR之胺基酸殘基及來自人類FR之胺基酸殘基的嵌合抗體。在某些實施方案中，人源化抗體將包含基本上所有的至少一個以及通常兩個可變域，其中所有或基本上所有HVR(例如，CDR)對應於非人類抗體之HVR，並且所有或基本上所有FR對應於人類抗體之FR。人源化抗體視情況可包含來源於人類抗體之抗體恆定區的至少一部分。抗體之「人源化形式」(例如，非人類抗體)係指已經歷人源化之抗體。
如本文所用之術語「高變區」或「HVR」係指抗體可變域中在序列上高度可變及/或形成結構確定之環(「高變環」)的每個區域。通常，天然四鏈抗體包含六個HVR；三個在VH中(H1、H2、H3)並且三個在VL中(L1、L2、L3)。HVR通常包含來自高變環及/或來自「互補決定區」(CDR)之胺基酸殘基，後者具有最高的序列可變性及/或參與抗原識別。例示性高變環出現在胺基酸殘基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)及96-101(H3)。(Chothia及Lesk,J.Mol.Biol.196：901-917(1987)。)例示性CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3)出現在L1之胺基酸殘基24-34、L2之胺基酸殘基50-56、L3之胺基酸殘基89-97、H1之胺基酸殘基31-35B、H2之胺基酸殘基50-65及H3之胺基酸殘基95-102。(Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)。)除了VH中之CDR1外，CDR通常包含形成高變環之胺基酸殘基。CDR亦包含「特異性決定殘基」或「SDR」，其為接觸抗原之殘基。SDR包含在CDR區域內，稱為縮短-CDR或a-CDR。例示性a-CDR(a-CDR-L1、a-CDR-L2、a-CDR-L3、a-CDR-H1、a-CDR-H2及a-CDR-H3)出現在L1之胺基酸殘 基31-34、L2之胺基酸殘基50-55、L3之胺基酸殘基89-96、H1之胺基酸殘基31-35B、H2之胺基酸殘基50-58及H3之胺基酸殘基95-102。(參見Almagro及Fransson,Front.Biosci.13：1619-1633(2008)。)除非另外說明，否則HVR殘基及可變域中的其他殘基(例如，FR殘基)在本文中係根據Kabat等，同上進行編號。
「免疫結合物」為結合至一或多種異源分子(包括但不限於細胞毒性劑)之抗體。
「個體」或「受試者」為哺乳動物。哺乳動物包括(但不限於)：家畜(例如，牛、羊、貓、狗及馬)、靈長類動物(例如，人類及非人類靈長類動物，諸如猴)、兔及齧齒動物(例如，小鼠和大鼠)。在某些實施方案中，個體或受試者為人類。
「經分離之抗體」為已經自其天然環境之組分中分離的抗體。在一些實施方案中，如藉由例如電泳(例如，SDS-PAGE、等電聚焦(IEF)、毛細管電泳)或層析法(例如，離子交換或逆相HPLC)所測定，抗體經純化至大於95%或99%之純度。對於評估抗體純度之方法之綜述，參見例如Flatman等，J.Chromatogr.B 848：79-87(2007)。
「分離核酸」係指已經自其天然環境之組分中分離的核酸分子。分離核酸包括通常含有核酸分子之細胞中所含的核酸分子，但該核酸分子存在於染色體外或不同於其天然染色體位置之染色體位置。
「分離的編碼抗CD33抗體之核酸」係指編碼抗體重鏈及輕鏈(或其片段)之一或多種核酸分子，包括在單個載體或不同載體上之此類核酸分子以及存在於宿主細胞中一或多個位置之此類核酸分子。
如本文所用之術語「CD33」係指由細胞中之CD33前體蛋白之加工產生之任何天然的成熟CD33。除非另外說明，否則該術語包括來自任何脊椎動物來源之CD33，包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如，人類及食蟹猴)及齧齒動物(例如，小鼠及大鼠)。該術語亦包括天然存 在之CD33變異體，例如，剪接變異體或等位基因變異體。例示性人類CD33前體蛋白之胺基酸序列(具有信號序列(具有信號序列，胺基酸1-17))示於SEQ ID NO：1中。例示性成熟人類CD33之胺基酸序列為SEQ ID NO：1之胺基酸18-364。例示性細胞外域之胺基酸序列為SEQ ID NO：1之胺基酸18-259。例示性Ig樣V型(Ig V)結構域之胺基酸序列為SEQ ID NO：2。例示性Ig樣C2型(Ig C2)結構域之胺基酸序列為SEQ ID NO：3。例示性食蟹猴CD33前體蛋白之胺基酸序列(具有信號序列)示於SEQ ID NO：4中。
術語「CD33陽性癌症」係指包含在其表面上表現CD33之細胞的癌症。在一些實施方案中，在諸如免疫組織化學、FACS等方法中例如使用CD33之抗體測定細胞表面上之CD33表現。或者，CD33 mRNA表現視為與細胞表面上之CD33表現相關並且可藉由選自原位雜交及RT-PCR(包括定量RT-PCR)之方法來測定。
術語「CD33陽性細胞」係指在其表面上表現CD33之細胞。
如本文所用之術語「單株抗體」係指自基本上同種抗體之群體獲得之抗體，亦即，構成該群體之單個抗體為相同的及/或結合相同的抗原決定基，除了可能之變異抗體，例如，含有天然存在之突變或在單株抗體製劑之生產期間出現的突變，此類突變通常以微量存在。與通常包括針對不同決定子(抗原決定基)之不同抗體的多株抗體製劑相反，單株抗體製劑之各單株抗體針對抗原上之單一決定子。因此，修飾語「單株」指示當自抗體之基本上同種群體獲得時的抗體特徵，並且不應解釋為需要藉由任何特定方法來產生抗體。舉例而言，根據本發明使用之單株抗體可藉由多種技術來製備，包括(但不限於)融合瘤方法、重組DNA方法、噬菌體展示方法及利用含有全部或部分人類免疫球蛋白基因座的轉殖基因動物的方法，用於製備單株抗體之此類方法及其他例示性方法如本文所述。
「裸抗體」係指不與異種部分(例如，細胞毒性部分)或放射性標記結合的抗體。裸抗體可存在於醫藥調配物中。
「天然抗體」係指具有不同結構之天然存在的免疫球蛋白分子。舉例而言，天然IgG抗體為由經二硫鍵鍵合之兩條相同的輕鏈及兩條相同的重鏈組成的約150,000道爾頓之異四聚糖蛋白。自N端至C端，各重鏈具有可變區(VH)(亦稱為可變重鏈結構域或重鏈可變域)，接著為三個恆定域(CH1、CH2及CH3)。類似地，自N端至C端，各輕鏈具有可變區(VL)(亦稱為可變輕鏈結構域或輕鏈可變域)，接著為恆定輕鏈(CL)結構域。基於其恆定域之胺基酸序列，抗體之輕鏈可指定為兩種類型(稱為κ及λ)中之一種。
術語「包裝插頁」用於指通常包括於治療產品之商業包裝中的說明，其含有關於使用此類治療產品之適應症、用法、劑量、施用、組合療法、禁忌症及/或警告之資訊。
相對於參考多肽序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」經定義為在比對序列且引入空位(若需要時)以達成最大百分比的序列一致性之後，並且在不將任何保守取代視為序列一致性之部分的情況下，候選序列中與參考多肽序列中之胺基酸殘基相同之胺基酸殘基的百分比。為了測定胺基酸序列一致性百分比的比對可以藉由此項技術之技能範圍內的多種方式實現，例如，使用公開獲得之電腦軟體諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體。熟習此項技術者可以確定用於比對序列之適當參數，包括實現在所比較序列之全長上實現最大比對所需的任何演算法。然而，為了本文目的，使用序列比較電腦程式ALIGN-2來生成胺基酸序列一致性%值。ALIGN-2序列比較電腦程式由Genentech公司編寫，並且源代碼已經與使用者文件一起提交給美國版權局(U.S.Copyright Office,Washington D.C.,20559)，其中它以美國版權註冊號TXU510087註冊。ALIGN-2程式可 自Genentech,Inc.,South San Francisco,California公開獲得，或可自源代碼編譯。應當編譯ALIGN-2程式用於UNIX操作系統，包括數字UNIX V4.0D。所有序列比較參數由ALIGN-2程式設定並且不能改變。
在ALIGN-2用於胺基酸序列比較之情況下，給定胺基酸序列A對、與或針對給定胺基酸序列B之胺基酸序列一致性%(或者可表達為具有或包含對、與或針對給定胺基酸序列B之特定胺基酸序列一致性%的給定胺基酸序列A)計算如下：100乘以分數X/Y
其中X為在序列比對程式ALIGN-2之A與B的比對中藉由該程式評分為一致匹配之胺基酸殘基數，並且其中Y為B中胺基酸殘基之總數。應當理解，當胺基酸序列A之長度不等於胺基酸序列B之長度時，A對B之胺基酸序列一致性%將不等於B對A之胺基酸序列一致性%。除非另外明確說明，否則本文使用之所有胺基酸序列一致性%值係如在緊接前一段中所述使用ALIGN-2電腦程式來獲得。
術語「醫藥調配物」係指呈允許包含於其中之活性成分之生物活性有效的形式並且不含對將施用調配物之受試者具有不可接受之毒性之其它組分的製劑。
「醫藥學上可接受之載劑」係指對受試者無毒之醫藥調配物中除活性成分以外的成分。醫藥學上可接受之載劑包括(但不限於)緩衝劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。
如本文使用之「治療(treatment)」(及其語法變化形式諸如「治療(treat)」或「治療(treating)」)係指嘗試改變所治療個體之自然進程的臨床干預，並且可以為了預防或在臨床病理學過程期間進行。理想的治療效果包括(但不限於)：預防疾病之發生或復發、緩解症狀、消除疾病之任何直接或間接的病理學後果、防止轉移、降低疾病進展速率、改善或減輕疾病狀態以及緩解或改善預後。在一些實施方案中，本發 明之抗體用於延遲疾病之發展或減緩疾病之進程。
術語「可變區」或「可變域」係指參與抗體與抗原結合之抗體重鏈或輕鏈的結構域。天然抗體之重鏈及輕鏈之可變域(分別為VH及VL))通常具有類似結構，其中各結構域包含四個保守的構架區(FR)及三個高變區(HVR)。(參見例如Kindt等，Kuby Immunology，第6版，W.H.Freeman and Co.，第91頁(2007)。)單個VH或VL結構域可能足以賦予抗原結合特異性。此外，使用來自結合特定抗原之抗體的VH或VL結構域以分別篩選互補性VL或VH結構域文庫可以分離結合該抗原之抗體。參見例如Portolano等，J.Immunol.150：880-887(1993)；Clarkson等，Nature 352：624-628(1991)。
如本文所用之術語「載體」係指能夠使與其連接之另一核酸增殖的核酸分子。該術語包括作為自我複製之核酸結構之載體以及併入已經引入該載體之宿主細胞之基因組內的載體。某些載體能夠引導與其可操作性連接之核酸的表現。本文將此類載體稱為「表現載體」。
「烷基」為含有正、第二、第三或環碳原子之C1-C18烴。實例為甲基(Me、-CH3)、乙基(Et、-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr、正丙基、-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr、異丙基、-CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu、正丁基、-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(i-Bu、異丁基、-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu、第二丁基、-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu、第三丁基、-C(CH3)3)、1-戊基(正戊基、-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基 (-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3。
如本文所用之術語「C1-C8烷基」係指具有1至8個碳原子之直鏈或支鏈、飽和或不飽和烴。代表性「C1-C8烷基」包括(但不限於)-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基、-正己基、-正庚基、-正辛基、-正壬基及-正癸基；而支鏈C1-C8烷基包括(但不限於)-異丙基、-第二丁基、-異丁基、-第三丁基、-異戊基、2-甲基丁基，不飽和C1-C8烷基包括(但不限於)-乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基、-異丁烯基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、-2,3-二甲基-2-丁烯基、1-己基、2-己基、3-己基、-乙炔基、-丙炔基、-1-丁炔基、-2-丁炔基、-1-戊炔基、-2-戊炔基、-3-甲基-1-丁炔基。C1-C8烷基可能未經取代或經一或多個基團取代，該等基團包括(但不限於)-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2-NHC(O)R'、-SO3R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN；其中各R'獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳基。
如本文所用之術語「C1-C12烷基」係指具有1至12個碳原子之直鏈或支鏈、飽和或不飽和烴。C1-C12烷基可能未經取代或經一或多個基團取代，該等基團包括(但不限於)-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-SO3R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN；其中各R'獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳基。
如本文所用之術語「C1-C6烷基」係指具有1至6個碳原子之直鏈或支鏈、飽和或不飽和烴。代表性「C1-C6烷基」包括(但不限於)-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基及-正己基；而支鏈C1-C6烷基包括(但 不限於)-異丙基、-第二丁基、-異丁基、-第三丁基、-異戊基及2-甲基丁基；不飽和C1-C6烷基包括(但不限於)-乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基及-異丁基烯基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、-2,3-二甲基-2-丁烯基、1-己基、2-己基及3-己基。C1-C6烷基可能未經取代或經一或多個如上文關於C1-C8烷基所述之基團取代。
如本文所用之術語「C1-C4烷基」係指具有1至4個碳原子之直鏈或支鏈、飽和或不飽和烴。代表性「C1-C4烷基」包括(但不限於)-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基；而支鏈C1-C4烷基包括(但不限於)-異丙基、-第二丁基、-異丁基、-第三丁基；不飽和C1-C4烷基包括(但不限於)-乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基及-異丁基烯基。C1-C4烷基可能未經取代或經一或多個如上文關於C1-C8烷基所述之基團取代。
「烷氧基」為與氧單鍵鍵合之烷基。例示性烷氧基包括(但不限於)甲氧基(-OCH3)及乙氧基(-OCH2CH3)。「C1-C5烷氧基」為具有1至5個碳原子之烷氧基。烷氧基可能未經取代或經一或多個如上文關於烷基所述之基團取代。
「烯基」為含有正、第二、第三或環碳原子且具有至少一個不飽和位點、亦即碳碳sp 2 雙鍵之C2-C18烴。實例包括(但不限於)：伸乙基或乙烯基(-CH=CH2)、烯丙基(-CH2CH=CH2)、環戊烯基(-C5H7)及5-己烯基(-CH2CH2CH2CH2CH=CH2)。「C2-C8烯基」為含有2至8個正、第二、第三或環碳原子且具有至少一個不飽和位點、亦即碳碳sp 2 雙鍵之烴。
「炔基」為含有正、第二、第三或環碳原子且具有至少一個不飽和位點、亦即碳碳sp參鍵之C2-C18烴。實例包括(但不限於)：乙炔基(-C≡CH)及炔丙基(-CH2C≡CH)。「C2-C8炔基」為含有2至8個正、第二、第三或環碳原子且具有至少一個不飽和位點、亦即碳碳sp參鍵之烴。
「伸烷基」係指具有1-18個碳原子並且具有藉由自母體烷烴之相 同或兩個不同碳原子移除兩個氫原子而衍生之兩個單價基團中心之飽和的支鏈或直鏈或環狀烴基。典型的伸烷基包括(但不限於)：亞甲基(-CH2-)、1,2-乙基(-CH2CH2-)、1,3-丙基(-CH2CH2CH2-)、1,4-丁基(-CH2CH2CH2CH2-)及其類似基團。
「C1-C10伸烷基」為具有式-(CH2)1-10-之直鏈飽和烴基。C1-C10伸烷基之實例包括亞甲基、伸乙基、伸丙基、伸丁基、伸戊基、伸己基、伸庚基、伸辛基、伸壬基及伸癸基。
「伸烯基」係指具有2-18個碳原子並且具有藉由自母體烯烴之相同或兩個不同碳原子移除兩個氫原子而衍生之兩個單價基團中心之不飽和的支鏈或直鏈或環狀烴基。典型的伸烯基包括(但不限於)：1,2-伸乙基(-CH=CH-)。
「伸炔基」係指具有2-18個碳原子並且具有藉由自母體炔烴之相同或兩個不同碳原子移除兩個氫原子而衍生之兩個單價基團中心之不飽和的支鏈或直鏈或環狀烴基。典型的伸炔基包括(但不限於)：乙炔基(-C≡C-)、炔丙基(-CH2C≡C-)及4-戊炔基(-CH2CH2CH2C≡C-)。
「芳基」係指碳環芳族基團。芳基之實例包括(但不限於)苯基、萘基及蒽基。碳環芳族基團或雜環芳族基團可能未被取代或被一或多個基團取代，所述基團包括(但不限於)-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN；其中各R'獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳基。
「C5-C20芳基」為在碳環芳族環中具有5至20個碳原子之芳基。C5-C20芳基之實例包括(但不限於)苯基、萘基及蒽基。C5-C20芳基可能如上文關於芳基所述未經取代或經取代。「C5-C14芳基」為在碳環芳族環中具有5至14個碳原子之芳基。C5-C14芳基之實例包括(但不限於)苯基、萘基及蒽基。C5-C14芳基可能如上文關於芳基所述經取代或未經 取代。
「伸芳基」為具有兩個共價鍵並且可以呈如下列結構中所示之鄰位、間位或對位組態之芳基： 其中苯基可能未經取代或經至多四個基團取代，所述基團包括(但不限於)-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN；其中各R'獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳基。
「芳基烷基」係指其中鍵合至碳原子、通常末端或sp3碳原子之一個氫原子經芳基置換的非環狀烷基。典型的芳基烷基包括(但不限於)苄基、2-苯基乙-1-基、2-苯基乙烯-1-基、萘基甲基、2-萘基乙-1-基、2-萘基乙烯-1-基、萘并苄基、2-萘并苯基乙-1-基及其類似基團。芳基烷基包含6至20個碳原子，例如芳基烷基之烷基部分(包括烷基、烯基或炔基)具有1至6個碳原子並且芳基部分具有5至14個碳原子。
「雜芳基烷基」係指其中鍵合至碳原子、通常末端或sp3碳原子之一個氫原子經雜芳基置換的非環狀烷基。典型的雜芳基烷基包括(但不限於)2-苯并咪唑基甲基、2-呋喃基乙基及其類似基團。雜芳基烷基包含6至20個碳原子，例如雜芳基烷基之烷基部分(包括烷基、烯基或炔基)具有1至6個碳原子並且雜芳基部分具有5至14個碳原子及1至3個選自N、O、P及S之雜原子。雜芳基烷基之雜芳基部分可為具有3至7個環成員(2至6個碳原子)之單環或具有7至10個環成員(4至9個碳原子及1至3個選自N、O、P及S之雜原子)之雙環，例如：雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統。
「經取代之烷基」、「經取代之芳基」及「經取代之芳基烷基」分別意謂其中一或多個氫原子各自獨立地經取代基置換之烷基、芳基及芳基烷基。典型的取代基包括(但不限於)-X、-R、-O-、-OR、-SR、-S-、-NR2、-NR3、=NR、-CX3、-CN、-OCN、-SCN、-N=C=O、-NCS、-NO、-NO2、=N2、-N3、NC(=O)R、-C(=O)R、-C(=O)NR2、-SO3 -、-SO3H、-S(=O)2R、-OS(=O)2OR、-S(=O)2NR、-S(=O)R、-OP(=O)(OR)2、-P(=O)(OR)2、-PO- 3、-PO3H2、-C(=O)R、-C(=O)X、-C(=S)R、-CO2R、-CO2 -、-C(=S)OR、-C(=O)SR、-C(=S)SR、-C(=O)NR2、-C(=S)NR2、-C(=NR)NR2，其中各X獨立地為鹵素：F、Cl、Br或I；並且各R獨立地為-H、C2-C18烷基、C6-C20芳基、C3-C14雜環、保護基或前藥部分。如上文所述之伸烷基、伸烯基及伸炔基亦可類似地經取代。
「雜芳基」及「雜環」係指其中一或多個環原子為雜原子(例如氮、氧及硫)之環系統。雜環基包含3至20個碳原子及1至3個選自N、O、P及S之雜原子。雜環可為具有3至7個環成員(2至6個碳原子及1至3個選自N、O、P及S之雜原子)之單環或具有7至10個環成員(4至9個碳原子及1至3個選自N、O、P及S之雜原子)之雙環，例如：雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統。
例示性雜環描述於例如Paquette,Leo A.,「Principles of Modern Heterocyclic Chemistry」(W.A.Benjamin,New York,1968)，特別是第1、3、4、6、7及9章；「The Chemistry of Heterocyclic Compounds,A series of Monographs」(John Wiley & Sons,New York,1950年迄今)，特別是第13、14、16、19及28卷；以及J.Am.Chem.Soc.(1960)82：5566中。
雜環之實例例如包括但不限於吡啶基、二氫吡啶基、四氫吡啶基(哌啶基)、噻唑基、四氫噻吩基、硫氧化四氫噻吩基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、四唑基、苯并呋喃基、硫雜萘基、吲哚基、吲哚烯基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、哌啶基、 4-哌啶酮基、吡咯啶基、2-吡咯啶酮基、吡咯啉基、四氫呋喃基、雙四氫呋喃基、四氫哌喃基、雙四氫哌喃基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基、十氫喹啉基、八氫異喹啉基、氮雜環辛四烯基、三嗪基、6H-1,2,5-噻二嗪基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、噻吩基、噻蒽基、哌喃基、異苯并呋喃基、色烯基、呫噸基、啡噁嗪基、2H-吡咯基、異噻唑基、異噁唑基、吡嗪基、噠嗪基、吲嗪基、異吲哚基、3H-吲哚基、1H-吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、酞嗪基、萘啶基、喹喏啉基、喹唑啉基、噌啉基、喋啶基、4aH-咔唑基、咔唑基、β-咔啉基、啡啶基、吖啶基、嘧啶基、啡啉基、啡嗪基、啡噻嗪基、呋呫基、啡噁嗪基、異二氫苯并哌喃基、二氫苯并哌喃基、咪唑啶基、咪唑啉基、吡唑啶基、吡唑啉基、哌嗪基、吲哚啉基、異吲哚啉基、奎寧環基、嗎啉基、噁唑啶基、苯并三唑基、苯并異噁唑基、噁吲哚基、苯并噁唑啉基及靛紅醯基。
舉例而言而非限制，碳鍵合雜環係在吡啶之2位、3位、4位、5位或6位；噠嗪之3位、4位、5位或6位；嘧啶之2位、4位、5位或6位；吡嗪之2位、3位、5位或6位；呋喃、四氫呋喃、硫代呋喃、噻吩、吡咯或四氫吡咯之2位、3位、4位或5位；噁唑、咪唑或噻唑之2位、4位或5位；異噁唑、吡唑或異噻唑之3位、4位或5位；吖丙啶之2位或3位；吖丁啶之2位、3位或4位；喹啉之2位、3位、4位、5位、6位、7位或8位；或異喹啉之1位、3位、4位、5位、6位、7位或8位處鍵合。更通常地，碳鍵合雜環包括2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、5-吡啶基、6-吡啶基、3-噠嗪基、4-噠嗪基、5-噠嗪基、6-噠嗪基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、6-嘧啶基、2-吡嗪基、3-吡嗪基、5-吡嗪基、6-吡嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基或5-噻唑基。
舉例而言而非限制，氮鍵合雜環係在吖丙啶、吖丁啶、吡咯、吡咯啶、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑啶、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、吲哚林、1H 吲唑之1位；異吲哚或異吲哚啉之2位；嗎啉之4位；及咔唑或β-咔啉之9位處鍵合。更通常地，碳鍵合雜環包括1-吖丙啶基、1-吖丁啶基、1-吡咯基、1-咪唑基、1-吡唑基及1-哌啶基。
「C3-C8雜環」係指其中1至4個環碳原子獨立地經來自由O、S及N組成之群組之雜原子置換的芳族或非芳族C3-C8碳環。C3-C8雜環之代表性實例包括(但不限於)苯并呋喃基、苯并噻吩、吲哚基、苯并吡唑基、香豆素基、異喹啉基、吡咯基、噻吩基、呋喃基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、三唑基、喹啉基、嘧啶基、吡啶基、吡啶酮基、吡嗪基、噠嗪基、異噻唑基、異噁唑基及四唑基。C3-C8雜環可能未經取代或經至多七個基團取代，該等基團包括(但不限於)-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN；其中各R'獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳基。
「C3-C8雜環基」係指其中一個雜環基之氫原子經一鍵置換的上文定義之C3-C8雜環基。C3-C8雜環基可能未經取代或經至多六個基團取代，該等基團包括(但不限於)-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN；其中各R'獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳基。
「C3-C20雜環」係指其中1至4個環碳原子獨立地經來自由O、S及N組成之群組之雜原子置換的芳族或非芳族C3-C8碳環。C3-C20雜環可能未經取代或經至多七個基團取代，該等基團包括(但不限於)-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN；其中各R'獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳基。
「C3-C20雜環基」係指其中一個雜環基之氫原子經一鍵置換的上文定義之C3-C20雜環基。
「碳環」意謂作為單環之具有3至7個碳原子之飽和或不飽和環或作為雙環之具有7至12個碳原子之飽和或不飽和環。單環碳環具有3至6個環原子，更通常具有5或6個環原子。雙環碳環具有例如以雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統排列之7至12個環原子，或具有以雙環[5,6]或[6,6]系統排列之9或10個環原子。單環碳環之實例包括環丙基、環丁基、環戊基、1-環戊-1-烯基、1-環戊-2-烯基、1-環戊-3-烯基、環己基、1-環己-1-烯基、1-環己-2-烯基、1-環己-3-烯基、環庚基及環辛基。
「C3-C8碳環」為3員、4員、5員、6員、7員或8員飽和或不飽和的非芳族碳環。代表性C3-C8碳環包括(但不限於)-環丙基、-環丁基、-環戊基、-環戊二烯基、-環己基、-環己烯基、-1,3-環己二烯基、-1,4-環己二烯基、-環庚基、-1,3-環庚二烯基、-1,3,5-環庚三烯基、-環辛基及-環辛二烯基。C3-C8碳環基可能未經取代或經一或多個基團取代，該等基團包括(但不限於)-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN；其中各R'獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳基。
「C3-C8碳環基」係指其中一個碳環基之氫原子經一鍵置換的上文定義之C3-C8碳環基。
「連接子」係指包含共價連接抗體與藥物部分之共價鍵或原子鏈的化學部分。在各種實施方案中，連接子包括二價基團，諸如烷基二基、芳基二基、雜芳基二基、諸如-(CR2)nO(CR2)n-之部分、烷氧基(例如聚乙烯基氧基、PEG、聚亞甲基氧基)及烷基胺基(例如聚伸乙基胺基、JeffamineTM)之重複單元；及二酸酯及醯胺，包括丁二酸酯、丁二醯胺、二乙醇酸酯、丙二酸酯及己醯胺。在各種實施方案中，連接子 可包含一或多個胺基酸殘基，諸如纈胺酸、苯丙胺酸、離胺酸及高離胺酸。
術語「對掌性」係指具有鏡像搭配物之不可重疊(non-superimposability)特性之分子，而術語「非對掌性」係指在其鏡像搭配物上可重疊之分子。
術語「立體異構體」係指具有相同化學組成，但關於原子或基團在空間上之排列不同的化合物。
「非對映異構體」係指具有兩個或更多個對掌性中心並且其分子並非彼此鏡像之立體異構體。非對映異構體具有不同的物理特性，例如熔點、沸點、光譜特性及反應性。可在高解析度分析程序(諸如電泳及層析法)下可分離非對映異構體之混合物。
「對映異構體」係指化合物之彼此為不可重疊之鏡像的兩種立體異構體。
本文使用之立體化學定義及慣例一般遵循S.P.Parker編，McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；及Eliel,E.及Wilen,S.,Stereochemistry of Organic Compounds(1994)John Wiley & Sons,Inc.,New York。許多有機化合物以光學活性形式存在，即，它們能夠旋轉平面偏振光之平面。在描述光學活性化合物時，前綴D及L，或R及S，用於表示分子關於其對掌性中心之絕對組態。前綴d及l或(+)及(-)用於表示化合物之平面偏振光之旋轉標記，其中用(-)或1意謂化合物為左旋的。具有(+)或d前綴之化合物為右旋的。對於給定之化學結構，此等立體異構體為相同的，不同之處在於它們為彼此之鏡像。亦可將特定之立體異構體稱為對映異構體，以及此類異構體的混合物經常稱為對映異構體混合物。50：50之對映異構體混合物稱為外消旋混合物或外消旋物，其可出現在化學反應或過程中不存在立體選擇性或立體特異性之情況下。術語「外消旋混 合物」及「外消旋物」係指兩種缺乏光學活性之對映異構體種類之等莫耳混合物。
「離去基」係指可以被另一個官能基取代之官能基。某些離去基為此項技術中所熟知的，並且實例包括(但不限於)鹵化物(例如，氯化物、溴化物、碘化物)、甲烷磺醯基(甲磺醯基)、對甲苯磺醯基(甲苯磺醯基)、三氟甲磺醯基(三氟甲磺酸酯基)及三氟甲磺酸酯基。
術語「保護基」係指當使化合物上其他官能基反應時通常用於阻斷或保護特定官能基之取代基。舉例而言，「胺基保護基」為連接至胺基之阻斷或保護化合物中之胺基官能基之取代基。合適之胺基保護基包括(但不限於)乙醯基、三氟乙醯基、第三丁氧基羰基(BOC)、苄氧基羰基(CBZ)及9-芴基亞甲基氧基羰基(Fmoc)。對於保護基及其用途之一般性描述，參見T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley & Sons,New York,1991，或後續版本。
II.組合物及方法
在一個態樣中，本發明在某種程度上係基於結合至CD33之抗體及包含該等抗體之免疫結合物。本發明之抗體及免疫結合物例如可用於診斷或治療CD33陽性癌症。
A.例示性抗CD33抗體
本文提供結合於CD33之經分離之抗體。CD33為唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素家族成員，其係67kDa糖基化I型跨膜蛋白，除了定向骨髓單核細胞及紅血球系祖細胞之外，其亦表現於大多數骨髓及單核細胞白血病細胞上。
例示性天然存在之人類CD33前體蛋白序列(具有信號序列(胺基酸1-17))提供於SEQ ID NO：1中，並且相應的成熟CD33蛋白質序列對應於SEQ ID NO：1之胺基酸18-364。
在某些實施方案中，抗CD33抗體具有呈任何組合之下列特徵中的 至少一或多者：a)結合於重組人類CD33；b)結合於重組食蟹猴CD33；c)結合於人類外周血單核細胞(PBMC)表面上之內源性CD33；d)結合於食蟹猴PBMC表面上之內源性CD33；e)結合於癌細胞表面上之內源性CD33；f)結合於AML癌細胞表面上之內源性CD33；g)結合在Molm-13細胞表面上之內源性CD33；h)結合於包含R69G突變之CD33；i)結合於CD33 Ig V結構域；j)結合於在N100缺乏N連接之糖基化之CD33；k)結合於在N113缺乏N連接之糖基化之CD33；l)結合於包含S102A突變之CD33；m)結合於包含S115A突變之CD33；n)不結合CD33 Ig C2結構域；o)與My9.6抗體競爭人類CD33結合；p)與抗體33H4競爭人類CD33結合；q)與抗體23E4競爭人類CD33結合；r)以小於15nM、小於10nM、小於7nM、小於5nM或小於3nM之Kd結合於內源性人類CD33；s)以小於10nM、小於7nM、小於5nM或小於3nM之Kd結合於重組人類CD33；及/或t)以小於10nM、小於7nM、小於5nM或小於3nM、小於2nM或小於1nM之Kd結合於重組食蟹猴CD33。
在一些實施方案中，抗體之特徵係在本文中如下文實施例中所述來測定。非限制性例示性之該等抗體包括本文所述之7A1、9C2、10D3 及15G15及其變異體。在一些實施方案中，結合CD33之抗體結合重組及內源性人類及食蟹猴CD33且與My9.6、33H4及23E4競爭人類CD33結合。在一些實施方案中，結合CD33之抗體結合重組及內源性人類及食蟹猴CD33且與My9.6競爭人類CD33結合，但具有與My9.6重疊但不同之抗原決定基。
在某些實施方案中，抗CD33抗體具有呈任何組合之下列特徵中的至少一或多者：a)結合於重組人類CD33；b)結合於重組食蟹猴CD33；c)結合於人類外周血單核細胞(PBMC)表面上之內源性CD33；d)以小於10nM、小於7nM、小於5nM、小於3nM、小於2nM或小於1nM之Kd結合於重組人類CD33；及/或e)以小於10nM、小於7nM、小於5nM、小於3nM、小於2nM或小於1nM之Kd結合於重組食蟹猴CD33。
在一些實施方案中，抗體之特徵係在本文中如下文實施例中所述來測定。非限制性例示性之該等抗體包括本文所述之9C3及其變異體。
抗體7A1、9C2、10D3、15G15、15G15.33、15G15.37、15G15.83、15G15.88、15G15.7、15G15.17、15G15.30、15G15.31、15G15.39及其他實施方案
在一些實施方案中，本發明提供包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR之抗CD33抗體，該等HVR選自(a)包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：23及/或SEQ ID NO：30之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34或SEQ ID NO：35之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28或SEQ ID NO：29之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在一個態樣中，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之抗體，該等VH HVR序列選自(a)包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：23或SEQ ID NO：30之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34或SEQ ID NO：35之胺基酸序列之HVR-H2；及(c)包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3。在一個實施方案中，抗體包含包括SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施方案中，抗體包含包括SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3及包括SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。在另一實施方案中，抗體包含包括SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3、包括SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3，及包括SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34或SEQ ID NO：35之胺基酸序列之HVR-H2。在另一實施方案中，抗體包含(a)包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：23或SEQ ID NO：30之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34或SEQ ID NO：35之胺基酸序列之HVR-H2；及(c)包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3。
在另一態樣中，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之抗體，該等VL HVR序列選自(a)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28或SEQ ID NO：29之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。在一個實施方案中，抗體包含(a)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28或SEQ ID NO：29之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：23或SEQ ID NO：30之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34或SEQ ID NO：35之胺基酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28或SEQ ID NO：29之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：23及/或SEQ ID NO：30之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：21及/或SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34及/或SEQ ID NO：35之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28及/或SEQ ID NO：29之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：112之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：113之胺基酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：114之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：111之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：112之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：113之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：114之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：111之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：115之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：116之胺 基酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：117之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：115之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：116之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：117之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：118之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：119之胺基酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：111之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：118之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：119之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：111之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：9之胺基酸 序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：10之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：13之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：13之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：21之胺基 酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：22之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：21之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：24之胺基 酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：26之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：26之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：27之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：27之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：24之胺基 酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：28之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：28之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：29之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：29之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：30之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：24之胺基 酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：30之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：31之胺基酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：31之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：32之胺基 酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：32之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：33之胺基酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：33之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：34之胺基 酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：34之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：35之胺基酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：35之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在任何上述實施方案中，抗CD33抗體為人源化的。在一個實施方案中，抗CD33抗體包含如任何上述實施方案中之HVR，並且進一步包含人類接受體構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類一致構架。在某 些實施方案中，人類接受體構架為人類VLκI一致(VLKI)構架及/或VH構架VH1。在某些實施方案中，人類接受體構架為包含下列突變中之任一者的人類VLκI一致(VLKI)構架及/或VH構架VH1。
在另一態樣中，抗CD33抗體包含與SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98或SEQ ID NO：100之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些實施方案中，與SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98及/或SEQ ID NO：100之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VH序列含有相對於參考序列之取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗CD33抗體保留結合CD33之能力。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98及/或SEQ ID NO：100中已經有總共1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98及/或SEQ ID NO：100中已經有總共1至5個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在HVR外部之區域中(亦即，在FR中)存在取代、插入或缺失。視情況，抗CD33抗體包含SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98或SEQ ID NO：100之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施方案中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：23或SEQ ID NO：30之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34或SEQ ID NO：35之胺基酸序列之HVR-H2；及(c)包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3。
在另一態樣中，提供抗CD33抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97及/或SEQ ID NO：99之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)。在某些實施方案中，與SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97或SEQ ID NO：99之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列含有相對於參考序列之取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗CD33抗體保留結合CD33之能力。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97及/或SEQ ID NO：99中已經有總共1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97及/或SEQ ID NO：99中已經有總共1至5個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在HVR外部之區域中(亦即，在FR中)存在取代、插入或缺失。視情況，抗CD33抗體包含SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97或SEQ ID NO：99之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施方案中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28或SEQ ID NO：29之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，提供抗CD33抗體，其中該抗體包含如任何上文提供之實施方案中之VH，及如任何上文提供之實施方案中之VL。
在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：66及SEQ ID NO：65中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：68及SEQ ID NO：67中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：78及SEQ ID NO：77中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：80及SEQ ID NO：79中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：82及SEQ ID NO：81中之VH及VL序列，包括 彼等序列之轉譯後修飾。在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：84及SEQ ID NO：83中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：86及SEQ ID NO：85中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：88及SEQ ID NO：87中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：90及SEQ ID NO：89中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：92及SEQ ID NO：91中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：94及SEQ ID NO：93中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：96及SEQ ID NO：95中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：98及SEQ ID NO：97中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：100及SEQ ID NO：99中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，本文提供結合於與本文提供之抗CD33抗體相同之抗原決定基的抗體。舉例而言，在某些實施方案中，提供結合於與抗CD33抗體相同之抗原決定基的抗體，其分別包含SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98或SEQ ID NO：100之VH序列及SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97或SEQ ID NO：99之VL序列。
本文提供包含以下之抗體：包含根據如圖1A及/或圖2A中所描繪之Kabat編號之HVR1-LC、HVR2-LC及HVR3-LC序列的輕鏈可變域及包含根據圖1B及/或圖2B中所描繪之Kabat編號之HVR1-HC、HVR2-HC及HVR3-HC序列的重鏈可變域。在一些實施方案中，抗體包含包括如圖1A及/或圖2A中所描繪之HVR1-LC、HVR2-LC及/或HVR3-LC序列以及FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC及/或FR4-LC序列的輕鏈可變域。在一些實施方案中，抗體包含包括如圖1B及/或圖2B中所描繪之HVR1-HC、HVR2-HC及/或HVR3-HC序列以及FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC及/或FR4-HC序列的重鏈可變域。
在本發明之另一態樣中，根據任何上述實施方案之抗CD33抗體為單株抗體，包括人類抗體。在一個實施方案中，抗CD33抗體為抗體片段，例如，Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2片段。在另一實施方案中，抗體為基本上全長抗體，例如，IgG1抗體、IgG2a抗體或如本文所定義之其他抗體類別或同種型。
在另一態樣中，根據任何上述實施方案之抗CD33抗體可併有任何如下文所述之單獨或組合的特徵。
抗體9C3及其他實施方案
在一些實施方案中，本發明提供包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR之抗CD33抗體，該等HVR選自(a)包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列之HVR-L3。
在一個態樣中，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之抗體，該等VH HVR序列選自(a)包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列之 HVR-H2；及(c)包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列之HVR-H3。在一個實施方案中，抗體包含包括SEQ ID NO：19之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施方案中，抗體包含包括SEQ ID NO：19之胺基酸序列之HVR-H3及包括SEQ ID NO：16之胺基酸序列之HVR-L3。在另一實施方案中，抗體包含包括SEQ ID NO：19之胺基酸序列之HVR-H3、包括SEQ ID NO：16之胺基酸序列之HVR-L3及包括SEQ ID NO：18之胺基酸序列之HVR-H2。在另一實施方案中，抗體包含：(a)包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列之HVR-H2；及(c)包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列之HVR-H3。
在另一態樣中，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之抗體，該等VL HVR序列選自(a)包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列之HVR-L3。在一個實施方案中，抗體包含：(a)包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：19之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列 之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列之HVR-L3。
在任何上述實施方案中，抗CD33抗體為人源化的。在一個實施方案中，抗CD33抗體包含如任何上述實施方案中之HVR，並且進一步包含人類接受體構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類一致構架。在某些實施方案中，人類接受體構架為人類VLκI一致(VLKI)構架及/或VH構架VH1。在某些實施方案中，人類接受體構架為包含下列突變中之任一者的人類VLκI一致(VLKI)構架及/或VH構架VH1。
在另一態樣中，抗CD33抗體包含與SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：74及/或SEQ ID NO：76之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些實施方案中，與SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：74及/或SEQ ID NO：76之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VH序列含有相對於參考序列之取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗CD33抗體保留結合CD33之能力。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：74及/或SEQ ID NO：76中已經有總共1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：74及/或SEQ ID NO：76中已經有總共1至5個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在HVR外部之區域中(亦即，在FR中)存在取代、插入或缺失。視情況，抗CD33抗體包含SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：74或SEQ ID NO：76之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施方案中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列之HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列之HVR-H2，及(c)包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列之HVR-H3。
在另一態樣中，提供抗CD33抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73及/或SEQ ID NO：75之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性在輕鏈可變域(VL)。在某些實施方案中，與SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73及/或SEQ ID NO：75之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列含有相對於參考序列之取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗CD33抗體保留結合CD33之能力。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73及/或SEQ ID NO：75中已經有總共1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73及/或SEQ ID NO：75中已經有總共1至5個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在HVR外部之區域中(亦即，在FR中)存在取代、插入或缺失。視情況，抗CD33抗體包含SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73或SEQ ID NO：75之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施方案中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，提供抗CD33抗體，其中該抗體包含如任何上文提供之實施方案中之VH，及如任何上文提供之實施方案中之VL。
在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：70及SEQ ID NO：69中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：72及SEQ ID NO：71中之VH及VL序列，包括 彼等序列之轉譯後修飾。在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：74及SEQ ID NO：73中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：76及SEQ ID NO：75中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，本文提供結合於與本文提供之抗CD33抗體相同之抗原決定基的抗體。舉例而言，在某些實施方案中，提供結合於與抗CD33抗體相同之抗原決定基的抗體，其分別包含SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：74及SEQ ID NO：76之VH序列以及SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73及SEQ ID NO：75之VL序列。
本文提供包含以下之抗體：包含根據如圖4A中所描繪之Kabat編號之HVR1-LC、HVR2-LC及HVR3-LC序列的輕鏈可變域及包含根據圖4B中所描繪之Kabat編號之HVR1-HC、HVR2-HC及HVR3-HC序列的重鏈可變域。在一些實施方案中，抗體包含包括如圖4A中所描繪之HVR1-LC、HVR2-LC及/或HVR3-LC序列以及FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC及/或FR4-LC序列的輕鏈可變域。在一些實施方案中，抗體包含包括如圖4B中所描繪之HVR1-HC、HVR2-HC及/或HVR3-HC序列以及FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC及/或FR4-HC序列的重鏈可變域。
在本發明之另一態樣中，根據任何上述實施方案之抗CD33抗體為單株抗體，包括人類抗體。在一個實施方案中，抗CD33抗體為抗體片段，例如，Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2片段。在另一實施方案中，抗體為基本上全長抗體，例如，IgG1抗體、IgG2a抗體或如本文所定義之其他抗體類別或同種型。
在另一態樣中，根據任何上述實施方案之抗CD33抗體可併有任何如下文所述之單獨或組合的特徵。
抗體23E4及其他實施方案
在一些實施方案中，本發明提供包含至少一個、兩個、三個、四 個、五個或六個HVR之抗CD33抗體，該等HVR選自(a)包含SEQ ID NO：39之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：40之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：41之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：36之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：37之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：38之胺基酸序列之HVR-L3。
在一個態樣中，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之抗體，該等VH HVR序列選自(a)包含SEQ ID NO：39之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：40之胺基酸序列之HVR-H2；及(c)包含SEQ ID NO：41之胺基酸序列之HVR-H3。在一個實施方案中，抗體包含包括SEQ ID NO：41之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施方案中，抗體包含包括SEQ ID NO：41之胺基酸序列之HVR-H3及包括SEQ ID NO：38之胺基酸序列之HVR-L3。在另一實施方案中，抗體包含包括SEQ ID NO：41之胺基酸序列之HVR-H3、包括SEQ ID NO：38之胺基酸序列之HVR-L3及包括SEQ ID NO：40之胺基酸序列之HVR-H2。在另一實施方案中，抗體包含：(a)包含SEQ ID NO：39之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：40之胺基酸序列之HVR-H2；及(c)包含SEQ ID NO：41之胺基酸序列之HVR-H3。
在另一態樣中，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之抗體，該等VL HVR序列選自(a)包含SEQ ID NO：36之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：37之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：38之胺基酸序列之HVR-L3。在一個實施方案中，抗體包含：(a)包含SEQ ID NO：36之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：37之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：38之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含 SEQ ID NO：39之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：40之胺基酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：41之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：36之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：37之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：38之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：39之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：40之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：41之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：36之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：37之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：38之胺基酸序列之HVR-L3。
在任何上述實施方案中，抗CD33抗體為人源化的。在一個實施方案中，抗CD33抗體包含如任何上述實施方案中之HVR，並且進一步包含人類接受體構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類一致構架。在某些實施方案中，人類接受體構架為人類VLκI一致(VLKI)構架及/或VH構架VH1。在某些實施方案中，人類接受體構架為包含下列突變中之任一者的人類VLκI一致(VLKI)構架及/或VH構架VH1。
在另一態樣中，抗CD33抗體包含與SEQ ID NO：102之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些實施方案中，與SEQ ID NO：102之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VH序列含有相對於參考序列之取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗CD33抗體保留結合CD33之能力。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：102中已經有總共1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：102中已經有總共1至5個胺基酸經取代、插入及/或缺 失。在某些實施方案中，在HVR外部之區域中(亦即，在FR中)存在取代、插入或缺失。視情況，抗CD33抗體包含SEQ ID NO：102之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施方案中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：39之胺基酸序列之HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：40之胺基酸序列之HVR-H2，及(c)包含SEQ ID NO：41之胺基酸序列之HVR-H3。
在另一態樣中，提供抗CD33抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：101之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)。在某些實施方案中，與SEQ ID NO：101之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列含有相對於參考序列之取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗CD33抗體保留結合CD33之能力。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：101中已經有總共1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：101中已經有總共1至5個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在HVR外部之區域中(亦即，在FR中)存在取代、插入或缺失。視情況，抗CD33抗體包含SEQ ID NO：101之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施方案中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：36之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：37之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：38之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，提供抗CD33抗體，其中該抗體包含如任何上文提供之實施方案中之VH，及如任何上文提供之實施方案中之VL。
在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：102及SEQ ID NO：101中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，本文提供結合於與本文提供之抗CD33抗體相同之 抗原決定基的抗體。舉例而言，在某些實施方案中，提供結合於與抗CD33抗體相同之抗原決定基的抗體，其包含SEQ ID NO：102之VH序列及SEQ ID NO：101之VL序列。
本文提供包含包括根據如圖3A中所描繪之Kabat編號之HVR1-LC、HVR2-LC及HVR3-LC序列的輕鏈可變域及包括根據如圖3B中所描繪之Kabat編號之HVR1-HC、HVR2-HC及HVR3-HC序列的重鏈可變域的23E4抗體。在一些實施方案中，該23E4抗體包含包括如圖3A中所描繪之HVR1-LC、HVR2-LC及/或HVR3-LC序列以及FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC及/或FR4-LC序列的輕鏈可變域。在一些實施方案中，該23E4抗體包含包括如圖3B中所描繪之HVR1-HC、HVR2-HC及/或HVR3-HC序列以及FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC及/或FR4-HC序列的重鏈可變域。
在本發明之另一態樣中，根據任何上述實施方案之抗CD33抗體為單株抗體，包括人類抗體。在一個實施方案中，抗CD33抗體為抗體片段，例如，Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2片段。在另一實施方案中，抗體為基本上全長抗體，例如，IgG1抗體、IgG2a抗體或如本文所定義之其他抗體類別或同種型。
在另一態樣中，根據任何上述實施方案之抗CD33抗體可併有任何如下文所述之單獨或組合的特徵。
抗體27C6及其他實施方案
在一些實施方案中，本發明提供包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR之抗CD33抗體，該等HVR選自(a)包含SEQ ID NO：45之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：46之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：47之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：42之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：43之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：44之胺基酸序列之HVR-L3。
在一個態樣中，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之抗體，該等VH HVR序列選自(a)包含SEQ ID NO：45之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：46之胺基酸序列之HVR-H2；及(c)包含SEQ ID NO：47之胺基酸序列之HVR-H3。在一個實施方案中，抗體包含包括SEQ ID NO：47之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施方案中，抗體包含包括SEQ ID NO：47之胺基酸序列之HVR-H3及包括SEQ ID NO：44之胺基酸序列之HVR-L3。在另一實施方案中，抗體包含包括SEQ ID NO：47之胺基酸序列之HVR-H3、包括SEQ ID NO：44之胺基酸序列之HVR-L3及包括SEQ ID NO：46之胺基酸序列之HVR-H2。在另一實施方案中，抗體包含：(a)包含SEQ ID NO：45之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：46之胺基酸序列之HVR-H2；及(c)包含SEQ ID NO：47之胺基酸序列之HVR-H3。
在另一態樣中，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之抗體，該等VL HVR序列選自(a)包含SEQ ID NO：42之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：43之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：44之胺基酸序列之HVR-L3。在一個實施方案中，抗體包含：(a)包含SEQ ID NO：42之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：43之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：44之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：45之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：46之胺基酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：47之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：42之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：43之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含 SEQ ID NO：44之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：45之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：46之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：47之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：42之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：43之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：44之胺基酸序列之HVR-L3。
在任何上述實施方案中，抗CD33抗體為人源化的。在一個實施方案中，抗CD33抗體包含如任何上述實施方案中之HVR，並且進一步包含人類接受體構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類一致構架。在某些實施方案中，人類接受體構架為人類VLκI一致(VLKI)構架及/或VH構架VH1。在某些實施方案中，人類接受體構架為包含下列突變中之任一者的人類VLκI一致(VLKI)構架及/或VH構架VH1。
在另一態樣中，抗CD33抗體包含與SEQ ID NO：104之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些實施方案中，與SEQ ID NO：104之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VH序列含有相對於參考序列之取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗CD33抗體保留結合CD33之能力。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：104中已經有總共1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：104中已經有總共1至5個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在HVR外部之區域中(亦即，在FR中)存在取代、插入或缺失。視情況，抗CD33抗體包含SEQ ID NO：104之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施方案中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：45之胺基酸序列之HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：46之胺基酸序列之HVR-H2，及(c)包含 SEQ ID NO：47之胺基酸序列之HVR-H3。
在另一態樣中，提供抗CD33抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：103之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)。在某些實施方案中，與SEQ ID NO：103之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列含有相對於參考序列之取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗CD33抗體保留結合CD33之能力。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：103中已經有總共1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：103中已經有總共1至5個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在HVR外部之區域中(亦即，在FR中)存在取代、插入或缺失。視情況，抗CD33抗體包含SEQ ID NO：103之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施方案中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：42之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：43之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：44之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，提供抗CD33抗體，其中該抗體包含如任何上文提供之實施方案中之VH，及如任何上文提供之實施方案中之VL。
在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：104及SEQ ID NO：103中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，本文提供結合於與本文提供之抗CD33抗體相同之抗原決定基的抗體。舉例而言，在某些實施方案中，提供結合於與抗CD33抗體相同之抗原決定基的抗體，其包含SEQ ID NO：104之VH序列及SEQ ID NO：103之VL序列。
本文提供包含包括根據如圖3A中所描繪之Kabat編號之HVR1-LC、HVR2-LC及HVR3-LC序列的輕鏈可變域及包括根據如圖3B 中所描繪之Kabat編號之HVR1-HC、HVR2-HC及HVR3-HC序列的重鏈可變域的27C6抗體。在一些實施方案中，該27C6抗體包含包括如圖3A中所描繪之HVR1-LC、HVR2-LC及/或HVR3-LC序列以及FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC及/或FR4-LC序列的輕鏈可變域。在一些實施方案中，該抗體包含包括如圖3B中所描繪之HVR1-HC、HVR2-HC及/或HVR3-HC序列以及FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC及/或FR4-HC序列的重鏈可變域。
在本發明之另一態樣中，根據任何上述實施方案之抗CD33抗體為單株抗體，包括人類抗體。在一個實施方案中，抗CD33抗體為抗體片段，例如，Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2片段。在另一實施方案中，抗體為基本上全長抗體，例如，IgG1抗體、IgG2a抗體或如本文所定義之其他抗體類別或同種型。
在另一態樣中，根據任何上述實施方案之抗CD33抗體可併有任何如下文所述之單獨或組合的特徵。
抗體33F3及其他實施方案
在一些實施方案中，本發明提供包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR之抗CD33抗體，該等HVR選自(a)包含SEQ ID NO：45之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：51之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：48之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：49之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：50之胺基酸序列之HVR-L3。
在一個態樣中，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之抗體，該等VH HVR序列選自(a)包含SEQ ID NO：45之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：51之胺基酸序列之HVR-H2；及(c)包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列之HVR-H3。在一個實施方案中，抗體包含包括SEQ ID NO：52之胺基酸序列之HVR-H3。在 另一實施方案中，抗體包含包括SEQ ID NO：52之胺基酸序列之HVR-H3及包括SEQ ID NO：50之胺基酸序列之HVR-L3。在另一實施方案中，抗體包含包括SEQ ID NO：52之胺基酸序列之HVR-H3、包括SEQ ID NO：50之胺基酸序列之HVR-L3及包括SEQ ID NO：51之胺基酸序列之HVR-H2。在另一實施方案中，抗體包含：(a)包含SEQ ID NO：45之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：51之胺基酸序列之HVR-H2；及(c)包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列之HVR-H3。
在另一態樣中，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之抗體，該等VL HVR序列選自(a)包含SEQ ID NO：48之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：49之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：50之胺基酸序列之HVR-L3。在一個實施方案中，抗體包含：(a)包含SEQ ID NO：48之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：49之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：50之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：45之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：51之胺基酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：52之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：48之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：49之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：50之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：45之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：51之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：48之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：49之胺基 酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：50之胺基酸序列之HVR-L3。
在任何上述實施方案中，抗CD33抗體為人源化的。在一個實施方案中，抗CD33抗體包含如任何上述實施方案中之HVR，並且進一步包含人類接受體構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類一致構架。在某些實施方案中，人類接受體構架為人類VLκI一致(VLKI)構架及/或VH構架VH1。在某些實施方案中，人類接受體構架為包含下列突變中之任一者的人類VLκI一致(VLKI)構架及/或VH構架VH1。
在另一態樣中，抗CD33抗體包含與SEQ ID NO：106之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些實施方案中，與SEQ ID NO：106之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VH序列含有相對於參考序列之取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗CD33抗體保留結合CD33之能力。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：106中已經有總共1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：106中已經有總共1至5個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在HVR外部之區域中(亦即，在FR中)存在取代、插入或缺失。視情況，抗CD33抗體包含SEQ ID NO：106之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施方案中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：45之胺基酸序列之HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：51之胺基酸序列之HVR-H2，及(c)包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列之HVR-H3。
在另一態樣中，提供抗CD33抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：105之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)。在某些實施方案中，與SEQ ID NO：105之胺基酸序列具有至少90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列含有相對於參考序列之取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗CD33抗體保留結合CD33之能力。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：105中已經有總共1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：105中已經有總共1至5個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在HVR外部之區域中(亦即，在FR中)存在取代、插入或缺失。視情況，抗CD33抗體包含SEQ ID NO：105之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施方案中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：48之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：49之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：50之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，提供抗CD33抗體，其中該抗體包含如任何上文提供之實施方案中之VH，及如任何上文提供之實施方案中之VL。
在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：106及SEQ ID NO：105中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，本文提供結合於與本文提供之抗CD33抗體相同之抗原決定基的抗體。舉例而言，在某些實施方案中，提供結合於與抗CD33抗體相同之抗原決定基的抗體，其包含SEQ ID NO：106之VH序列及SEQ ID NO：105之VL序列。
本文提供包含包括根據如圖3A中所描繪之Kabat編號之HVR1-LC、HVR2-LC及HVR3-LC序列的輕鏈可變域及包括根據如圖3B中所描繪之Kabat編號之HVR1-HC、HVR2-HC及HVR3-HC序列的重鏈可變域的33F3抗體。在一些實施方案中，該33F3抗體包含包括如圖3A中所描繪之HVR1-LC、HVR2-LC及/或HVR3-LC序列以及FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC及/或FR4-LC序列的輕鏈可變域。在一些實施方案中，該33F3抗體包含包括如圖3B中所描繪之HVR1-HC、HVR2-HC及/ 或HVR3-HC序列以及FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC及/或FR4-HC序列的重鏈可變域。
在本發明之另一態樣中，根據任何上述實施方案之抗CD33抗體為單株抗體，包括人類抗體。在一個實施方案中，抗CD33抗體為抗體片段，例如，Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2片段。在另一實施方案中，抗體為基本上全長抗體，例如，IgG1抗體、IgG2a抗體或如本文所定義之其他抗體類別或同種型。
在另一態樣中，根據任何上述實施方案之抗CD33抗體可併有任何如下文所述之單獨或組合的特徵。
抗體33F9及其他實施方案
在一些實施方案中，本發明提供包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR之抗CD33抗體，該等HVR選自(a)包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：57之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列之HVR-L3。
在一個態樣中，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之抗體，該等VH HVR序列選自(a)包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：57之胺基酸序列之HVR-H2；及(c)包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列之HVR-H3。在一個實施方案中，抗體包含包括SEQ ID NO：58之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施方案中，抗體包含包括SEQ ID NO：58之胺基酸序列之HVR-H3及包括SEQ ID NO：55之胺基酸序列之HVR-L3。在另一實施方案中，抗體包含包括SEQ ID NO：58之胺基酸序列之HVR-H3、包括SEQ ID NO：55之胺基酸序列之HVR-L3及包括SEQ ID NO：57之胺基酸序列之HVR-H2。在另一實施方案中，抗體包含：(a)包含SEQ ID NO：56之 胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：57之胺基酸序列之HVR-H2；及(c)包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列之HVR-H3。
在另一態樣中，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之抗體，該等VL HVR序列選自(a)包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列之HVR-L3。在一個實施方案中，抗體包含：(a)包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：57之胺基酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：58之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：57之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列之HVR-L3。
在任何上述實施方案中，抗CD33抗體為人源化的。在一個實施方案中，抗CD33抗體包含如任何上述實施方案中之HVR，並且進一步包含人類接受體構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類一致構架。在某些實施方案中，人類接受體構架為人類VLκI一致(VLKI)構架及/或VH 構架VH1。在某些實施方案中，人類接受體構架為包含下列突變中之任一者的人類VLκI一致(VLKI)構架及/或VH構架VH1。
在另一態樣中，抗CD33抗體包含與SEQ ID NO：108之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些實施方案中，與SEQ ID NO：108之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VH序列含有相對於參考序列之取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗CD33抗體保留結合CD33之能力。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：108中已經有總共1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：108中已經有總共1至5個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在HVR外部之區域中(亦即，在FR中)存在取代、插入或缺失。視情況，抗CD33抗體包含SEQ ID NO：108之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施方案中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列之HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：57之胺基酸序列之HVR-H2，及(c)包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列之HVR-H3。
在另一態樣中，提供抗CD33抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：107之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)。在某些實施方案中，與SEQ ID NO：107之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列含有相對於參考序列之取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗CD33抗體保留結合CD33之能力。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：107中已經有總共1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：107中已經有總共1至5個胺基酸經 取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在HVR外部之區域中(亦即，在FR中)存在取代、插入或缺失。視情況，抗CD33抗體包含SEQ ID NO：107之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施方案中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，提供抗CD33抗體，其中該抗體包含如任何上文提供之實施方案中之VH，及如任何上文提供之實施方案中之VL。
在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：108及SEQ ID NO：107中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，本文提供結合於與本文提供之抗CD33抗體相同之抗原決定基的抗體。舉例而言，在某些實施方案中，提供結合於與抗CD33抗體相同之抗原決定基的抗體，其包含SEQ ID NO：108之VH序列及SEQ ID NO：107之VL序列。
本文提供包含包括根據如圖3A中所描繪之Kabat編號之HVR1-LC、HVR2-LC及HVR3-LC序列的輕鏈可變域及包括根據如圖3B中所描繪之Kabat編號之HVR1-HC、HVR2-HC及HVR3-HC序列的重鏈可變域的33F9抗體。在一些實施方案中，該33F9抗體包含包括如圖3A中所描繪之HVR1-LC、HVR2-LC及/或HVR3-LC序列以及FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC及/或FR4-LC序列的輕鏈可變域。在一些實施方案中，該33F9抗體包含包括如圖3B中所描繪之HVR1-HC、HVR2-HC及/或HVR3-HC序列以及FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC及/或FR4-HC序列的重鏈可變域。
在本發明之另一態樣中，根據任何上述實施方案之抗CD33抗體為單株抗體，包括人類抗體。在一個實施方案中，抗CD33抗體為抗體片段，例如，Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2片段。在另一 實施方案中，抗體為基本上全長抗體，例如，IgG1抗體、IgG2a抗體或如本文所定義之其他抗體類別或同種型。
在另一態樣中，根據任何上述實施方案之抗CD33抗體可併有任何如下文所述之單獨或組合的特徵。
抗體33H4及其他實施方案
在一些實施方案中，本發明提供包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR之抗CD33抗體，該等HVR選自(a)包含SEQ ID NO：62之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：60之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列之HVR-L3。
在一個態樣中，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之抗體，該等VH HVR序列選自(a)包含SEQ ID NO：62之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列之HVR-H2；及(c)包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列之HVR-H3。在一個實施方案中，抗體包含包括SEQ ID NO：64之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施方案中，抗體包含包括SEQ ID NO：64之胺基酸序列之HVR-H3及包括SEQ ID NO：61之胺基酸序列之HVR-L3。在另一實施方案中，抗體包含包括SEQ ID NO：64之胺基酸序列之HVR-H3、包括SEQ ID NO：61之胺基酸序列之HVR-L3及包括SEQ ID NO：63之胺基酸序列之HVR-H2。在另一實施方案中，抗體包含：(a)包含SEQ ID NO：62之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列之HVR-H2；及(c)包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列之HVR-H3。
在另一態樣中，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之抗體，該等VL HVR序列選自(a)包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：60之胺基酸序列之HVR-L2； 及(c)包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列之HVR-L3。在一個實施方案中，抗體包含：(a)包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：60之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明之抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個或全部三個VH HVR序列之VH結構域，該等VH HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：62之胺基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列之HVR-H2，及(iii)包含選自SEQ ID NO：64之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VL HVR序列之VL結構域，該等VL HVR序列選自(i)包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列之HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：60之胺基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，本發明提供包含以下之抗體：(a)包含SEQ ID NO：62之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：60之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列之HVR-L3。
在任何上述實施方案中，抗CD33抗體為人源化的。在一個實施方案中，抗CD33抗體包含如任何上述實施方案中之HVR，並且進一步包含人類接受體構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類一致構架。在某些實施方案中，人類接受體構架為人類VLκI一致(VLKI)構架及/或VH構架VH1。在某些實施方案中，人類接受體構架為包含下列突變中之任一者的人類VLκI一致(VLKI)構架及/或VH構架VH1。
在另一態樣中，抗CD33抗體包含與SEQ ID NO：110之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些實施方案中，與 SEQ ID NO：110之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VH序列含有相對於參考序列之取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗CD33抗體保留結合CD33之能力。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：110中已經有總共1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：110中已經有總共1至5個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在HVR外部之區域中(亦即，在FR中)存在取代、插入或缺失。視情況，抗CD33抗體包含SEQ ID NO：110之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施方案中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：62之胺基酸序列之HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列之HVR-H2，及(c)包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列之HVR-H3。
在另一態樣中，提供抗CD33抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：109之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)。在某些實施方案中，與SEQ ID NO：109之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL序列含有相對於參考序列之取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗CD33抗體保留結合CD33之能力。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：109中已經有總共1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在SEQ ID NO：109中已經有總共1至5個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施方案中，在HVR外部之區域中(亦即，在FR中)存在取代、插入或缺失。視情況，抗CD33抗體包含SEQ ID NO：109之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在一特定實施方案中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：60之胺基酸序列之 HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中，提供抗CD33抗體，其中該抗體包含如任何上文提供之實施方案中之VH，及如任何上文提供之實施方案中之VL。
在一個實施方案中，抗體分別包含SEQ ID NO：110及SEQ ID NO：109中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，本文提供結合於與本文提供之抗CD33抗體相同之抗原決定基的抗體。舉例而言，在某些實施方案中，提供結合於與抗CD33抗體相同之抗原決定基的抗體，其包含SEQ ID NO：110之VH序列及SEQ ID NO：109之VL序列。
本文提供包含包括根據如圖3A中所描繪之Kabat編號之HVR1-LC、HVR2-LC及HVR3-LC序列的輕鏈可變域及包括根據如圖3B中所描繪之Kabat編號之HVR1-HC、HVR2-HC及HVR3-HC序列的重鏈可變域的33H4抗體。在一些實施方案中，該33H4抗體包含包括如圖3A中所描繪之HVR1-LC、HVR2-LC及/或HVR3-LC序列以及FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC及/或FR4-LC序列的輕鏈可變域。在一些實施方案中，該33H4抗體包含包括如圖3B中所描繪之HVR1-HC、HVR2-HC及/或HVR3-HC序列以及FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC及/或FR4-HC序列的重鏈可變域。
在本發明之另一態樣中，根據任何上述實施方案之抗CD33抗體為單株抗體，包括人類抗體。在一個實施方案中，抗CD33抗體為抗體片段，例如，Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2片段。在另一實施方案中，抗體為基本上全長抗體，例如，IgG1抗體、IgG2a抗體或如本文所定義之其他抗體類別或同種型。
在另一態樣中，根據任何上述實施方案之抗CD33抗體可併有任何如下文所述之單獨或組合的特徵。
1.抗體親和力
在某些實施方案中，本文提供之抗體具有1μM、100nM、50nM、10nM、5nM、1nM、0.1nM、0.01nM或0.001nM之解離常數(Kd)，並且視情況為10-13M(例如10-8M或更小，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)。
在一個實施方案中，如下列檢定所述，藉由用所關注之抗體之Fab形式及其抗原進行的放射性標記之抗原結合檢定(RIA)來量測Kd。Fab對抗原之溶液結合親和力藉由以下來量測：用最小濃度之(125I)標記之抗原在滴定系列之未標記之抗原的存在下平衡Fab，隨後用抗Fab抗體塗佈之板捕獲結合抗原(參見例如Chen等，J.Mol.Biol.293：865-881(1999))。為了建立檢定條件，將MICROTITER®多孔板(Thermo Scientific)用在50mM碳酸鈉(pH 9.6)中之5μg/ml捕捉抗Fab抗體(Cappel Labs)塗佈隔夜，並且隨後用PBS中之2%(w/v)牛血清白蛋白在室溫(大約23℃)下阻斷2至5小時。在非吸附板(Nunc #269620)中，將100pM或26pM[125I]-抗原與所關注Fab之連續稀釋液(例如，與抗VEGF抗體Fab-12之評估一致，於Presta等，Cancer Res.57：4593-4599(1997)中)混合。隨後將所關注之Fab培育隔夜；然而，培育可以持續較長時期(例如，約65小時)以確保達到平衡。隨後，將混合物轉移至捕獲板以在室溫下培育(例如，一小時)。隨後移除溶液並且將板用PBS中之0.1%聚山梨醇酯20(TWEEN-20®)洗滌八次。當板已經乾燥時，添加150μl/孔之閃爍劑(MICROSCINT-20TM；Packard)，並且將板在TOPCOUNTTM γ計數器(Packard)上計數十分鐘。選擇給出小於或等於20%之最大結合之各Fab的濃度用於競爭性結合檢定。
根據另一實施方案，使用表面電漿共振檢定來量測Kd，該表面電漿共振檢定使用BIACORE®-2000或BIACORE®-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)，用約10反應單位(RU)之固定抗原CM5晶片在25℃下進行。簡言之，將羧甲基化葡聚糖生物傳感器晶片(CM5，BIACORE,Inc.) 用N-乙基-N'-(3-二甲基胺基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)及N-羥基丁二醯亞胺(NHS)根據供應商之說明書活化。將抗原用10mM乙酸鈉(pH 4.8)稀釋至5μg/ml(約0.2μM)，隨後以5μl/分鐘的流速注入以實現大約10反應單位(RU)之偶合蛋白。在注入抗原之後，注射1M乙醇胺以阻斷未反應之基團。對於動力學量測，在25℃下，以大約25μl/min之流速在含有0.05%聚山梨醇酯20(TWEEN-20TM)界面活性劑之PBS(PBST)中注入Fab之兩倍連續稀釋液(0.78nM至500nM)。使用簡單的一對一朗繆爾(Langmuir)結合模型(BIACORE®評價軟體，3.2版)，藉由同時擬合締合及解離傳感圖(sensorgram)來計算締合速率(kon)及解離速率(koff)。平衡解離常數(Kd)計算為koff/kon之比值。參見例如Chen等，J.Mol.Biol.293：865-881(1999)。若藉由上述表面電漿共振檢定測得之結合速率超過106M-1 s-1，則該結合速率可以藉由使用螢光淬滅技術來測定，該螢光淬滅技術在25℃下，在如分光計中量測之漸增濃度之抗原存在下，量測PBS(pH為7.2)中20nM抗抗原抗體(Fab形式)之螢光發射強度的增加或減少(激發=295nm；發射=340nm，16nm通帶)，該分光計諸如配備有停流(stop-flow)之分光光度計(Aviv Instruments)或具有攪拌比色杯之8000系列SLM-AMINCOTM分光光度計(ThermoSpectronic)。
2.抗體片段
在某些實施方案中，本文提供之抗體為抗體片段。抗體片段包括(但不限於)Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv及scFv片段以及下文所述之其他片段。對於某些抗體片段之綜述，參見Hudson等，Nat.Med.9：129-134(2003)。關於scFv片段之綜述，參見例如Pluckthün,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg及Moore編，(Springer-Verlag,New York)，第269-315頁(1994)；亦參見WO 93/16185；以及美國專利第5,571,894號及第5,587,458號。對於包含補 救受體結合抗原決定基殘基且具有增加之活體內半衰期之Fab及F(ab')2片段的討論，參見美國專利第5,869,046號。
雙功能抗體為具有可以為二價或雙特異性之兩個抗原結合位點之抗體片段。參見例如EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等，Nat.Med.9：129-134(2003)；及Hollinger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448(1993)。三鏈抗體(triabody)及四鏈抗體(tetrabody)亦描述於Hudson等，Nat.Med.9：129-134(2003)中。
單結構域抗體為包含抗體之所有或一部分重鏈可變域或所有或一部分輕鏈可變域的抗體片段。在某些實施方案中，單結構域抗體為人類單結構域抗體(Domantis,Inc.,Waltham,MA；參見例如美國專利第6,248,516 B1號)。
抗體片段可以藉由各種技術來製備，該等技術包括(但不限於)如本文所述之完整抗體之蛋白水解消化以及由重組宿主細胞(例如大腸桿菌(E.coli)或噬菌體)產生。
3.嵌合抗體及人源化抗體
在某些實施方案中，本文提供之抗體為嵌合抗體。某些嵌合抗體描述於例如美國專利第4,816,567號；及Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81：6851-6855(1984)。在一個實例中，嵌合抗體包含非人類可變區(例如，來源於小鼠、大鼠、倉鼠、兔或非人類靈長類動物諸如猴之可變區)及人類恆定區。在另一實例中，嵌合抗體為「類型轉換(class switched)」抗體，其中類別或子類已相比於親本抗體之類別或子類而改變。嵌合抗體包括其抗原結合片段。
在某些實施方案中，嵌合抗體為人源化抗體。通常，非人類抗體經人源化以減少對人類之免疫原性，同時保留親本非人類抗體之特異性及親和力。通常，人源化抗體包含一或多個可變域，其中HVR，例如CDR(或其部分)來源於非人類抗體，並且FR(或其部分)來源於人類 抗體序列。人源化抗體視情況亦將包含人類恆定區之至少一部分。在一些實施方案中，人源化抗體中之一些FR殘基經來自非人類抗體(例如，HVR殘基來源於其中之抗體)之相應殘基取代，例如，以恢復或提高抗體特異性或親和力。
人源化抗體及其製備方法綜述於例如Almagro及Fransson,Front.Biosci.13：1619-1633(2008)，並且進一步描述於例如Riechmann等，Nature 332：323-329(1988)；Queen等，Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 86：10029-10033(1989)；美國專利第5,821,337號、第7,527,791號、第6,982,321號及第7,087,409號；Kashmiri等，Methods 36：25-34(2005)(描述SDR(a-CDR)移植)；Padlan,Mol.Immunol.28：489-498(1991)(描述「表面重塑(resurfacing)」)；Dall'Acqua等，Methods 36：43-60(2005)(描述「FR改組」)；及Osbourn等，Methods 36：61-68(2005)及Klimka等，Br.J.Cancer,83：252-260(2000)(描述FR改組之「導向選擇(guided selection)」方法)。
可用於人源化之人類構架區包括(但不限於)：使用「最適(best-fit)」方法選擇之構架區(參見例如Sims等，J.Immunol.151：2296(1993))；來源於輕鏈或重鏈可變區之特定子群之人類抗體之一致序列的構架區(參見例如Carter等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89：4285(1992)；及Presta等，J.Immunol.,151：2623(1993))；人類成熟(體細胞突變)構架區或人類生殖系構架區(參見例如Almagro及Fransson,Front.Biosci.13：1619-1633(2008))；及來源於篩選FR庫之構架區(參見例如Baca等，J.Biol.Chem.272：10678-10684(1997)及Rosok等，J.Biol.Chem.271：22611-22618(1996))。
4.人類抗體
在某些實施方案中，本文提供之抗體為人類抗體。可以使用此項技術中已知之各種技術產生人類抗體。人類抗體通常描述於van Dijk 及van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5：368-74(2001)及Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20：450-459(2008)中。
可以藉由將免疫原施用於已經修飾以產生對抗原激發反應之完整人類抗體或具有人類可變區之完整抗體的轉殖基因動物來製備人類抗體。該等動物通常含有全部或一部分的人類免疫球蛋白基因座，該基因座替代內源性免疫球蛋白基因座或存在於染色體外或隨機整合至動物之染色體中。在該等轉殖基因小鼠中，內源性免疫球蛋白基因座通常已經失活。對於自轉殖基因動物獲得人類抗體之方法的綜述，參見Lonberg,Nat.Biotech.23：1117-1125(2005)。亦參見例如描述XENOMOUSETM技術之美國專利第6,075,181號及第6,150,584號；描述HUMAB®技術之美國專利第5,770,429號；描述K-M MOUSE®技術之美國專利第7,041,870號，及描述VELOCIMOUSE®技術之美國專利申請公開案第US 2007/0061900號。來自由該等動物產生之完整抗體之人類可變區可經進一步修飾，例如，藉由與不同的人類恆定區組合。
亦可以藉由基於融合瘤之方法來製備人類抗體。已描述用於產生人類單株抗體之人類骨髓瘤及小鼠-人類異源骨髓瘤細胞株。(參見例如Kozbor J.Immunol.,133：3001(1984)；Brodeur等，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，第51-63頁(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；及Boerner等，J.Immunol.,147：86(1991)。)經由人類B細胞融合瘤技術產生之人類抗體亦描述於Li等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103：3557-3562(2006)。其他方法包括描述於例如美國專利第7,189,826號(描述自融合瘤細胞株產生單株人類IgM抗體)及Ni,Xiandai Mianyixue,26(4)：265-268(2006)(描述人類-人類融合瘤)之彼等方法。人類融合瘤技術(Trioma技術)亦描述於Vollmers及Brandlein,Histology and Histopathology,20(3)：927-937(2005)以及Vollmers及Brandlein,Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology,27(3)：185-91(2005)。
亦可藉由分離選自來源於人類之噬菌體展示庫之Fv純系可變域序列來產生人類抗體。隨後該等可變域序列可與所需人類恆定域組合。自抗體庫選擇人類抗體之技術如下所述。
5.來源於庫之抗體
可藉由篩選具有所需的一種或多種活性之抗體之組合庫來分離本發明抗體。舉例而言，此項技術中已知多種方法用於產生噬菌體展示庫及篩選具有所需結合特性之該等抗體庫。該等方法綜述於例如Hoogenboom等，Methods in Molecular Biology 178：1-37(O'Brien等編，Human Press,Totowa,NJ,2001)並且進一步描述於例如在McCafferty等，Nature 348：552-554；Clackson等，Nature 352：624-628(1991)；Marks等，J.Mol.Biol.222：581-597(1992)；Marks及Bradbury,Methods in Molecular Biology 248：161-175(Lo編，Human Press,Totowa,NJ,2003)；Sidhu等，J.Mol.Biol.338(2)：299-310(2004)；Lee等，J.Mol.Biol.340(5)：1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34)：12467-12472(2004)；及Lee等，J.Immunol.Methods 284(1-2)：119-132(2004)。
在某些噬菌體展示方法中，VH及VL基因譜系藉由聚合酶鏈反應(PCR)分別選殖，並且在噬菌體庫中隨機重組，隨後其可以用來篩選抗原結合噬菌體，如在Winter等，Ann.Rev.Immunol.,12：433-455(1994)中所述。噬菌體通常以單鏈Fv(scFv)片段或以Fab片段呈現抗體片段。來自免疫源之庫向免疫原提供高親和力抗體而不需要構築融合瘤。或者，可以選殖(例如，自人類)初始譜系以向多種非自體抗原以及不存在任何免疫作用之自體抗原提供單一來源之抗體，如Griffiths等，EMBO J,12：725-734(1993)所述。最後，亦可以藉由選殖來自幹細胞之未重排之V基因區段及使用含有編碼高度可變之CDR3區且實現活 體外重排之隨機序列的PCR引子來合成製備初始庫，如Hoogenboom及Winter,J.Mol.Biol.,227：381-388(1992)所述。描述人類抗體噬菌體庫之專利出版物包括例如：美國專利第5,750,373號及美國專利公開案第2005/0079574號、第2005/0119455號、第2005/0266000號、第2007/0117126號、第2007/0160598號、第2007/0237764號、第2007/0292936號及第2009/0002360號。
自人類抗體庫分離之抗體或抗體片段視為本文之人類抗體或人類抗體片段。
6.多特異性抗體
在某些實施方案中，本文提供之抗體為多特異性抗體，例如雙特異性抗體。多特異性抗體為具有對至少兩個不同位點之結合特異性的單株抗體。在某些實施方案中，一種結合特異性係針對CD33，且另一種係針對任何其他抗原。在某些實施方案中，一種結合特異性係針對CD33，且另一種係針對CD3。參見例如美國專利第5,821,337號。在某些實施方案中，雙特異性抗體可結合CD33之兩個不同抗原決定基。雙特異性抗體亦可用於將細胞毒性劑定位至表現CD33之細胞。雙特異性抗體可製備成全長抗體或抗體片段。
用於製備多特異性抗體之技術包括(但不限於)具有不同特異性之兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對之重組共表現(參見Milstein及Cuello,Nature 305：537(1983))、WO 93/08829及Traunecker等，EMBO J.10：3655(1991))，及「孔中杵臼(knob-in-hole)」工程改造(參見例如美國專利第5,731,168號)。多特異性抗體亦可以如下方式製備：工程改造靜電操作作用(engineering electrostatic steering effect)用於製備抗體Fc-異二聚體分子(WO 2009/089004A1)；交聯兩種或更多種抗體或片段(參見例如美國專利第4,676,980號，及Brennan等，Science,229：81(1985))；使用白胺酸拉鏈以產生雙特異性抗體(參見例如Kostelny等，J Immunol.,148(5)：1547-1553(1992))；使用「雙功能抗體」技術用於製備雙特異性抗體片段(參見例如Hollinger等，Proc.Natl.Acad.Sci.UsA,90：6444-6448(1993))；及使用單鏈Fv(sFv)二聚體(參見例如Gruber等，J.Immunol.,152：5368(1994))；及製備三特異性抗體，如例如在Tutt等，J.Immunol.147：60(1991)中所述。
具有三個或更多個功能性抗原結合位點之工程改造抗體(包括「章魚(Octopus)抗體」)亦包括於本文中(參見例如US 2006/0025576A1)。
本文之抗體或片段亦包括「雙重作用FAb」或「DAF」，其包含結合於CD33以及另一不同抗原之抗原結合位點(參見例如US 2008/0069820)。
7.抗體變異體
在某些實施方案中，涵蓋本文提供之抗體的胺基酸序列變異體。舉例而言，可能希望改善抗體之結合親和力及/或其他生物學特性。抗體之胺基酸序列變異體可以藉由將適當的修飾引入至編碼抗體之核苷酸序列中或藉由肽合成來製備。該等修飾包括例如在抗體之胺基酸序列內殘基之缺失及/或插入及/或取代。可進行缺失、插入及取代之任何組合以獲得最終的構築體，其條件為最終構築體具有所需特性，例如，抗原結合。
a)取代、插入及缺失變異體
在某些實施方案中，提供具有一或多個胺基酸取代之抗體變異體。用於取代性突變誘發之所關注位點包括HVR及FR。保守性取代示於表1中之「較佳取代」的標題下。更實質的變化在表1中在「例示性取代」的標題下提供，並且如下文關於胺基酸側鏈類別來進一步描述。可將胺基酸取代引入所關注之抗體中，並且對產物篩選所需活性，例如保留/改進之抗原結合、降低之免疫原性或改進之ADCC或CDC。
表1
根據共同的側鏈特性，胺基酸可如下分組： (1)疏水性：正白氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile； (2)中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln； (3)酸性：Asp、Glu； (4)鹼性：His、Lys、Arg； (5)影響鏈取向之殘基：Gly、Pro； (6)芳族：Trp、Tyr、Phe。
非保守性取代將需要用此等類別之一的成員替換另一類別。
一種類型之取代變異體涉及取代親本抗體(例如人源化或人類抗體)之一或多個高變區殘基。通常，選擇用於進一步研究之所得變異體 相對於親本抗體將具有某些生物學特性之修飾(例如，改進)(例如，增加之親和力、降低之免疫原性)及/或將具有基本上保留之親本抗體之某些生物學特性。例示性的取代變異體為親和力成熟抗體，其可例如使用基於噬菌體展示之親和力成熟技術諸如本文所述之彼等技術來方便地生成。簡言之，將一或多個HVR殘基突變且將變異體抗體在噬菌體上呈現且對其篩選特定的生物學活性(例如結合親和力)。
可以對HVR做出改變(例如，取代)，例如以改進抗體親和力。可對HVR「熱點」，亦即由在體細胞成熟過程期間以高頻率經歷突變之密碼子編碼的殘基(參見例如Chowdhury,Methods Mol.Biol.207：179-196(2008))，及/或SDR(a-CDR)做出此類改變，其中對所得變異體VH或VL測試結合親和力。藉由次級庫之構築及再選擇進行的親和力成熟已經描述於例如Hoogenboom等，Methods in Molecular Biology 178：1-37(O'Brien等編，Human Press,Totowa,NJ,(2001)。)在親和力成熟之一些實施方案中，藉由多種方法中之任一者(例如，易錯PCR、鏈改組或寡核苷酸定向誘變)將多樣性引入為成熟所選之可變基因。隨後創建次級庫。隨後篩選庫以鑒別具有所需親和力之任何抗體變異體。另一種引入多樣性之方法涉及HVR引導方法，其中將數個HVR殘基(例如，每次4-6個殘基)隨機化。可例如使用丙胺酸掃描誘變或建模來特異性鑒別涉及抗原結合之HVR殘基。特別地，通常靶向CDR-H3及CDR-L3。
在某些實施方案中，可以在一或多個HVR內發生取代、插入或缺失，只要該等改變不會基本上降低抗體結合抗原之能力。舉例而言，可以對HVR進行不會實質性降低結合親和力之保守性改變(例如，如本文提供之保守性取代)。該等改變可能在HVR「熱點」或SDR外部。在上文提供之變異體VH及VL序列之某些實施方案中，各HVR為未改變的，或者含有不超過1、2或3處胺基酸取代。
一種可用於鑒定抗體中可以作為誘變靶位之殘基或區域的方法 稱為「丙胺酸掃描誘變」，如由Cunningham及Wells(1989)Science,244：1081-1085所述。在此方法中，鑒別殘基或靶殘基之組(例如，帶電荷之殘基諸如arg、asp、his、lys及glu)且用中性或帶負電荷之胺基酸(例如，丙胺酸或聚丙胺酸)置換以測定抗體與抗原之相互作用是否受到影響。可在對初始取代顯示功能敏感性之胺基酸位置引入進一步的取代。或者或另外，利用抗原-抗體複合物之晶體結構來鑒別抗體與抗原間的接觸點。可靶向或消除該等接觸殘基及鄰近殘基作為取代的候選。可篩選變異體以確定它們是否含有所需特性。
胺基酸序列插入包括長度範圍為一個殘基至含有100或更多個殘基之多肽的胺基端及/或羧基端融合，以及單個或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包括具有N端甲硫胺醯基殘基之抗體。抗體分子之其他插入變異體包括抗體之N端或C端與酶(例如對於ADEPT)或增加抗體之血清半衰期之多肽的融合。
b)糖基化變異體
在某些實施方案中，改變本文提供之抗體以提高或降低抗體糖基化程度。可藉由改變胺基酸序列以使得創建或移除一或多個糖基化位點來方便地實現對抗體之糖基化位點的添加或缺失。
在抗體包含Fc區之情況中，可以改變與其連接之碳水化合物。由哺乳動物細胞產生之天然抗體通常包含分枝的雙觸角寡糖，其一般藉由N鍵連接於Fc區之CH2結構域的Asn297。參見例如Wright等，TIBTECH 15：26-32(1997)。寡糖可包括各種碳水化合物，例如，甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸，以及連接於雙觸角寡糖結構「主幹」中之GlcNAc的岩藻糖。在一些實施方案中，可以對本發明抗體中之寡糖進行修飾以創建具有某些改進之特性的抗體變異體。
在一個實施方案中，提供抗體變異體，其具有缺乏連接(直接或間 接)於Fc區之岩藻糖的碳水化合物結構。舉例而言，該等抗體中之岩藻糖量可為1%至80%、1%至65%、5%至65%或20%至40%。藉由相對於連接於Asn 297之所有糖結構(例如，複合的、雜合的及高甘露糖的結構)的總和計算糖鏈內Asn297處岩藻糖之平均量來測定岩藻糖量，如藉由MALDI-TOF質譜法所量測，例如如WO 2008/077546中所述。Asn297係指位於Fc區中之大約位置297(Fc區殘基之Eu編號)的天冬醯胺殘基；然而，Asn297亦可由於抗體中之微小序列變化而位於位置297上游或下游約±3個胺基酸，亦即在位置294與位置300之間。該等岩藻糖基化變異體可具有改進之ADCC功能。參見例如美國專利公開案第US 2003/0157108號(Presta,L.)；US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。涉及「脫岩藻糖基化」或「岩藻糖缺乏」抗體變異體之出版物的實例包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki等，J.Mol.Biol.336：1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等，Biotech.Bioeng.87：614(2004)。能夠產生脫岩藻糖基化抗體之細胞株的實例包括缺乏蛋白質岩藻糖基化之Lec13 CHO細胞(Ripka等，Arch.Biochem.Biophys.249：533-545(1986)；美國專利申請案第US 2003/0157108 A1號，Presta,L；及WO 2004/056312 A1,Adams等，尤其在實施例11)，及基因剔除細胞株，諸如α-1,6-岩藻糖基轉移酶基因FUT8，基因剔除CHO細胞(參見例如Yamane-Ohnuki等，Biotech.Bioeng.87：614(2004)；Kanda,Y.等，Biotechnol.Bioeng.,94(4)：680-688(2006)；及WO2003/085107)。
進一步提供具有兩分型寡糖(bisected oligosaccharide)之抗體變異體，例如其中連接於抗體Fc區之雙觸角寡糖係藉由GlcNAc兩分。該等 抗體變異體可以具有降低之岩藻糖基化及/或改進之ADCC功能。該等抗體變異體之實例描述於例如WO 2003/011878(Jean-Mairet等)；美國專利第6,602,684號(Umana等)；及US 2005/0123546(Umana等)。亦提供在連接於Fc區之寡糖中具有至少一個半乳糖殘基的抗體變異體。該等抗體變異體可具有改進之CDC功能。該等抗體變異體描述於例如WO 1997/30087(Patel等)；WO 1998/58964(Raju,S.)；及WO 1999/22764(Raju,S.)。
c)Fc區變異體
在某些實施方案中，可將一或多種胺基酸修飾引入本文提供之抗體之Fc區中，從而生成Fc區變異體。Fc區變異體可包含在一或多個胺基酸位置包含胺基酸修飾(例如取代)的人類Fc區序列(例如，人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)。
在某些實施方案中，本發明涵蓋具有一些但並非所有效應功能之抗體變異體，該等效應功能使其成為用於如下應用之期望候選物，其中抗體之活體內半衰期為重要的，而某些效應功能(諸如補體及ADCC)為不必要的或有害的。可以進行活體外及/或活體內細胞毒性檢定以證實CDC及/或ADCC活性之降低/消除。舉例而言，可以進行Fc受體(FcR)結合檢定以確保抗體缺乏FcγR結合(因此有可能缺乏ADCC活性)，但保留FcRn結合能力。介導ADCC之主要細胞(NK細胞)僅表現Fc(RIII，而單核細胞表現Fc(RI、Fc(RII及Fc(RIII。造血細胞上之FcR表現概括於Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol.9：457-492(1991)之第464頁上的表3中。評估所關注分子之ADCC活性之活體外檢定的非限制性實例描述於美國專利第5,500,362號(參見例如Hellstrom,I.等，Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 83：7059-7063(1986))及Hellstrom,I等，Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 82：1499-1502(1985)；第5,821,337號(參見Bruggemann,M.等，J.Exp.Med.166：1351-1361(1987))。或者，可採用非放射性檢定方法 (參見例如用於流式細胞術之ACTITM非放射性細胞毒性檢定(CellTechnology,Inc.Mountain View,CA；及CytoTox 96®非放射性細胞毒性檢定(Promega,Madison,WI)。可用於該等檢定之效應細胞包括外周血單核細胞(PBMC)及天然殺傷(NK)細胞。或者或另外，可在活體內、例如在動物模型中評估所關注分子之ADCC活性，諸如揭示於Clynes等，Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 95：652-656(1998)之動物模型。亦可進行C1q結合檢定以證實抗體不能結合C1q，並且因此缺乏CDC活性。參見例如WO 2006/029879及WO 2005/100402中之C1q及C3c結合ELISA。為了評估補體激活，可以實施CDC檢定(參見例如Gazzano-Santoro等，J.Immunol.Methods 202：163(1996)；Cragg,M.S.等，Blood 101：1045-1052(2003)；及Cragg,M.S.及M.J.Glennie,Blood 103：2738-2743(2004))。亦可以使用此項技術中已知之方法來實施FcRn結合及活體內清除/半衰期測定(參見例如Petkova,S.B.等，Int'l.Immunol.18(12)：1759-1769(2006))。
具有降低之效應功能之抗體包括具有Fc區殘基238、265、269、270、297、327及329中之一或多者之取代的彼等抗體(美國專利第6,737,056號)。該等Fc突變體包括在胺基酸位置265、269、270、297及327中之兩處或更多處具有取代的Fc突變體，包括殘基265及297取代成丙胺酸之所謂的「DANA」Fc突變體(美國專利第7,332,581號)。
描述具有改進或降低之與FcR結合的某些抗體變異體。(參見例如美國專利第6,737,056號；WO 2004/056312，及Shields等，J.Biol.Chem.9(2)：6591-6604(2001)。)
在某些實施方案中，抗體變異體包含具有改進ADCC之一或多處胺基酸取代，例如Fc區之位置298、333及/或334(殘基之EU編號)之取代的Fc區。
在一些實施方案中，對Fc區做出改變，其導致改變的(亦即改進的 或降低的)C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)，例如，如美國專利第6,194,551號、WO 99/51642以及Idusogie等，J.Immunol.164：4178-4184(2000)中所述。
具有增加之半衰期及改進之與新生兒Fc受體(FcRn)之結合的抗體描述於US2005/0014934A1(Hinton等)，新生兒Fc受體(FcRn)負責將母體IgG轉移至胎兒(Guyer等，J.Immunol.117：587(1976)及Kim等，J.Immunol.24：249(1994))。彼等抗體包含其中具有改進Fc區與FcRn結合之一或多處取代的Fc區。該等Fc變異體包括在Fc區殘基238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434中之一或多處具有取代，例如Fc區殘基434之取代(美國專利第7,371,826號)的彼等變異體。
亦參見Duncan及Winter,Nature 322：738-40(1988)；美國專利第5,648,260號；美國專利第5,624,821號；及WO 94/29351，其涉及Fc區變異體之其他實例。
d)經半胱胺酸工程改造之抗體變異體
在某些實施方案中，可能期望創建經半胱胺酸工程改造的抗體，例如，「thioMAb」，其中抗體之一或多個殘基用半胱胺酸殘基取代。在特定實施方案中，經取代之殘基存在於抗體之可接近位點。藉由用半胱胺酸取代彼等殘基，反應性硫醇基團由此定位於抗體的可接近位點，並且可用於將抗體與其他部分(諸如藥物部分或連接子-藥物部分)結合，以創建免疫結合物，如本文進一步所描述。在某些實施方案中，可用半胱胺酸取代下列殘基中之任意一或多者：輕鏈之V205(Kabat編號)；重鏈之A118(EU編號)；及重鏈Fc區之S400(EU編號)。可如例如美國專利第7,521,541號所述生成經半胱胺酸工程改造之抗體。
e)抗體衍生物
在某些實施方案中，可進一步修飾本文提供之抗體以含有此項技 術中已知且易於獲得之另外的非蛋白質部分。適合於抗體衍生化之部分包括(但不限於)水溶性聚合物。水溶性聚合物之非限制性實例包括(但不限於)聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、聚1,3-二氧戊環、聚1,3,6-三噁烷、乙烯/順丁烯二酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或無規共聚物)及葡聚糖或聚(N-乙烯吡咯啶酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如，甘油)、聚乙烯醇及其混合物。由於其在水中之穩定性，聚乙二醇丙醛在製造中可能具有優勢。聚合物可具有任何分子量，並且可為分枝或無分枝的。連接至抗體上之聚合物數目可變化，並且若連接一個以上之聚合物，則它們可以是相同或不同的分子。一般而言，可根據下列考慮來確定用於衍生化之聚合物之數目及/或類型，該等考慮包括(但不限於)抗體待改進之特定特性或功能、抗體衍生物是否將用於限定條件下之療法中等。
在另一實施方案中，提供抗體與可藉由曝露於輻射而選擇性加熱之非蛋白質部分的結合物。在一個實施方案中，非蛋白質部分為碳奈米管(Kam等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102：11600-11605(2005))。輻射可為任何波長，並且包括(但不限於)對普通細胞無損害、但將非蛋白質部分加熱至抗體-非蛋白質部分附近之細胞被殺死的溫度的波長。
B.重組方法及組合物
可使用重組方法及組合物來產生抗體，例如，如美國專利第4,816,567號中所述。在一個實施方案中，提供編碼本文所述之抗CD33抗體之分離核酸。該種核酸可編碼構成抗體VL之胺基酸序列及/或構成抗體VH之胺基酸序列(例如，抗體之輕鏈及/或重鏈)。在另一實施方案中，提供一或多種包含該等核酸之載體(例如，表現載體)。在另一實施方案中，提供包含該等核酸之宿主細胞。在一個此類實施方案中，宿主細胞包含(例如，已用下列載體轉化)：(1)包含編碼構成抗體VL之 胺基酸序列及構成抗體VH之胺基酸序列之核酸的載體，或(2)包含編碼構成抗體VL之胺基酸序列之核酸的第一載體及包含編碼構成抗體VH之胺基酸序列之核酸的第二載體。在一個實施方案中，宿主細胞為真核的，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴樣細胞(例如，Y0、NS0、Sp20細胞)。在一個實施方案中，提供製備抗CD33抗體之方法，其中該方法包括在適合於表現抗體之條件下培養包含編碼如上文所提供之抗體之核酸的宿主細胞，並且視情況自宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收抗體。
對於抗CD33抗體之重組產生，將編碼例如如上所述之抗體的核酸分離且插入一或多種載體中，以在宿主細胞中進一步選殖及/或表現。可使用習知程序將此種核酸容易地分離且測序(例如，藉由使用能夠特異性結合於編碼抗體之重鏈及輕鏈之基因的寡核苷酸探針)。
適合於選殖或表現編碼抗體之載體的宿主細胞包括本文所述之原核或真核細胞。舉例而言，可在細菌中產生抗體，特別是在不需要糖基化及Fc效應功能時。對於抗體片段及多肽在細菌中之表現，參見例如美國專利第5,648,237號、第5,789,199號及第5,840,523號。(亦參見Charlton,Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo編，Humana Press,Totowa,NJ,2003)，第245-254頁，其描述抗體片段在大腸桿菌中之表現。)在表現後，可將抗體在可溶性級分中自細菌細胞團糊中分離並且可以進一步純化。
除了原核生物外，真核微生物諸如絲狀真菌或酵母為適合於編碼抗體之載體的選殖或表現宿主，包括其糖基化途徑已經「人源化」從而導致產生具有部分或完全人類糖基化模式之抗體的真菌及酵母菌株。參見Gerngross,Nat.Biotech.22：1409-1414(2004)，及Li等，Nat.Biotech.24：210-215(2006)。
適合於表現糖基化抗體之宿主細胞亦源自多細胞生物體(無脊椎 動物及脊椎動物)。無脊椎動物細胞之實例包括植物及昆蟲細胞。已經鑒別出眾多杆狀病毒株，其可與昆蟲細胞一起使用，特別是用於轉染草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)細胞。
亦可利用植物細胞培養物作為宿主。參見例如美國專利第5,959,177號、第6,040,498號、第6,420,548號、第7,125,978號及第6,417,429號(描述用於在轉殖基因植物中產生抗體之PLANTIBODIESTM技術)。
亦可使用脊椎動物細胞作為宿主。舉例而言，適合於在懸浮液中生長之哺乳動物細胞株可能為有用的。有用的哺乳動物宿主細胞株之其他實例為經SV40轉化之猴腎CV1株(COS-7)；人類胚腎株(293或293細胞，如例如Graham等，J.Gen Virol.36：59(1977)中所述)；幼年倉鼠腎細胞(BHK)；小鼠塞托利(sertoli)細胞(TM4細胞，如例如Mather,Biol.Reprod.23：243-251(1980)中所述)；猴腎細胞(CV1)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76)；人類子宮頸癌細胞(HELA)；犬腎細胞(MDCK；buffalo大鼠肝細胞(BRL 3A)；人類肺細胞(W138)；人類肝細胞(Hep G2)；小鼠乳房腫瘤(MMT 060562)；TRI細胞，如例如Mather等，Annals N.Y.Acad.Sci.383：44-68(1982)中所述；MRC5細胞；及FS4細胞。其他有用的哺乳動物宿主細胞株包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包括DHFR- CHO細胞(Urlaub等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216(1980))；及骨髓瘤細胞株諸如Y0、NS0及Sp2/0。關於適於抗體產生之某些哺乳動物宿主細胞株的綜述，參見例如Yazaki及Wu,Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo編，Humana Press,Totowa,NJ)，第255-268頁(2003)。
C.檢定
可藉由此項技術中已知之多種檢定對本文提供之抗CD33抗體鑒別、篩選或表徵其物理/化學特性及/或生物學活性。
在一個態樣中，例如藉由已知方法諸如ELISA、BIACore®、FACS 或西方墨點法(Western blot)對本發明之抗體測試其抗原結合活性。
在另一態樣中，可使用競爭檢定來鑒別與本文所述任一抗體競爭結合於CD33之抗體。在某些實施方案中，該種競爭性抗體結合與由本文所述之抗體所結合抗原決定基相同的抗原決定基(例如，線性或構象抗原決定基)。用於定位抗體所結合抗原決定基之詳細例示性方法提供於Morris(1996)「Epitope Mapping Protocols」,Methods in Molecular Biology第66卷(Humana Press,Totowa,NJ)。
在例示性競爭檢定中，在包含結合於CD33之第一標記抗體(例如，本文所述任一抗體)及第二未標記抗體(其經測試與第一抗體競爭結合於CD33之能力)之溶液中培育固定之CD33。第二抗體可存在於融合瘤上清液中。作為對照，在包含第一標記抗體但不包含第二未標記抗體之溶液中培育固定之CD33。在允許第一抗體與CD33結合之條件下培育後，移除過量的未結合抗體，並且量測與固定之CD33締合之標記的量。若測試樣本中與固定之CD33締合之標記的量相對於對照樣本基本上降低，則其指示第二抗體與第一抗體競爭結合於CD33。參見Harlow及Lane(1988)Antibodies：A Laboratory Manual第14章(Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY)。
D.免疫結合物
本發明亦提供包含結合至一或多種細胞毒性劑之本文抗CD33抗體的免疫結合物，該等細胞毒性劑諸如化學治療劑或藥物、生長抑制劑、毒素(例如，蛋白質毒素、細菌、真菌、植物或動物來源之酶活性毒素或其片段)或放射性同位素(亦即，放射結合物)。
免疫結合物允許將藥物部分靶向傳遞至腫瘤，並且在一些實施方案中，在其中進行細胞內積聚，其中未結合藥物之全身施用可導致對正常細胞之毒性至不可接受之程度(Polakis P.(2005)Current Opinion in Pharmacology 5：382-387)。
抗體-藥物結合物(ADC)為藉由將有效的細胞毒性藥物靶向至抗原表現腫瘤細胞而結合抗體及細胞毒性藥物之特性的靶向化學治療分子(Teicher,B.A.(2009)Current Cancer Drug Targets 9：982-1004)，從而藉由使功效最大化及使脫靶毒性最小化來提高治療指數(Carter,P.J.及Senter P.D.(2008)The Cancer Jour.14(3)：154-169；Chari,R.V.(2008)Acc.Chem.Res.41：98-107)。
本發明之ADC化合物包括具有抗癌活性者。在一些實施方案中，ADC化合物包括結合(亦即共價連接)至藥物部分之抗體。在一些實施方案中，抗體經由連接子共價連接至藥物部分。本發明之抗體-藥物結合物(ADC)選擇性地將有效劑量之藥物傳遞至腫瘤組織，進而可實現更大選擇性(亦即更低有效劑量)，同時提高治療指數(「治療窗口」)。
抗體-藥物結合物(ADC)之藥物部分(D)可包括具有細胞毒性或細胞抑制作用之任何化合物、部分或基團。藥物部分可藉由包括(但不限於)微管蛋白結合、DNA結合或嵌入以及RNA聚合酶、蛋白質合成及/或拓撲異構酶之抑制的機制而賦予其細胞毒性及細胞抑制作用。例示性藥物部分包括(但不限於)具有細胞毒性活性之類美登素、多拉司他汀(dolastatin)、奧瑞他汀(auristatin)、卡奇黴素、吡咯并苯并二氮呯(PBD)、奈莫柔比星及其衍生物、PNU-159682、蒽環類藥物、倍癌黴素(duocarmycin)、長春花生物鹼、紫杉烷、單端孢黴(trichothecene)、CC1065、喜樹鹼、依利奈法德(elinafide)及其立體異構體、等排體、類似物及衍生物。該等免疫結合物之非限制性實例在下文更詳細地討論。
1.例示性抗體-藥物結合物
抗體-藥物結合物(ADC)化合物之例示性實施方案包含靶向腫瘤細胞之抗體(Ab)、藥物部分(D)及將Ab連接至D之連接子部分(L)。在一些實施方案中，抗體係經由一或多個胺基酸殘基(諸如離胺酸及/或半 胱胺酸)連接至連接子部分(L)。
例示性ADC具有式I：Ab-(L-D)p I
其中p為1至約20。在一些實施方案中，可以結合至抗體之藥物部分的數量受到游離半胱胺酸殘基數量的限制。在一些實施方案中，藉由本文所述之方法將游離半胱胺酸殘基引入抗體胺基酸序列中。式I之例示性ADC包括(但不限於)具有1、2、3或4個工程改造之半胱胺酸胺基酸之抗體(Lyon,R.等，(2012)Methods in Enzym.502：123-138)。在一些實施方案中，不使用工程改造之一或多個游離半胱胺酸殘基已經存在於抗體中，在該種情況下，現有之游離半胱胺酸殘基可用於將抗體結合至藥物。在一些實施方案中，在抗體結合之前將抗體暴露於還原條件下以產生一或多個游離半胱胺酸殘基。
a)例示性連接子
「連接子」(L)為可用於將一或多個藥物部分(D)連接至抗體(Ab)以形成式I之抗體-藥物結合物(ADC)的雙官能或多官能部分。在一些實施方案中，可以使用具有反應性官能基用於共價連接至藥物及抗體之連接子來製備抗體-藥物結合物(ADC)。舉例而言，在一些實施方案中，抗體(Ab)之半胱胺酸硫醇可以與連接子或藥物-連接子中間體之反應性官能基形成鍵以製備ADC。
在一個態樣中，連接子具有能夠與抗體上存在之游離半胱胺酸反應以形成共價鍵的官能基。該等反應性官能基之非限制性實例包括順丁烯二醯亞胺、鹵代乙醯胺類、α-鹵代乙醯基活化酯諸如丁二醯亞胺酯、4-硝基苯基酯、五氟苯基酯、四氟苯基酯、酸酐、醯氯、磺醯氯、異氰酸酯及異硫氰酸酯。參見例如Klussman等，(2004),Bioconjugate Chemistry 15(4)：765-773之第766頁之結合方法及本文之實施方案。
在一些實施方案中，連接子具有能夠與存在於抗體上之親電基團 反應的官能基。例示性的此類親電基團包括(但不限於)醛及酮羰基。在一些實施方案中，連接子之反應性官能基之雜原子可以與抗體上之親電基團反應且形成與抗體單元之共價鍵。此類反應性官能基之非限制性實例包括(但不限於)醯肼、肟、胺基、肼、縮胺基硫脲、肼羧酸酯及芳基醯肼。
連接子可包含一或多個連接子組分。例示性連接子組分包括6-順丁烯二醯亞胺基己醯基(maleimidocaproyl)(「MC」)、順丁烯二醯亞胺基丙醯基(maleimidopropanoyl)(「MP」)、纈胺酸-瓜胺酸(「val-cit」或「vc」)、丙胺酸-苯丙胺酸(「ala-phe」)、對胺基苄氧羰基(「PAB」)、4-(2-吡啶基硫基)戊酸N-丁二醯亞胺酯(「SPP」)及環己烷-1-甲酸4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)酯(「MCC」)。各種連接子組分為此項技術中已知的，其中一些描述於下文。
連接子可為促進藥物釋放之「可裂解連接子」。非限制性例示性可裂解連接子包括酸不穩定連接子(例如，包含腙)、蛋白酶敏感性(例如，肽酶敏感性)連接子、光不穩定連接子或含二硫化物之連接子(Chari等，Cancer Research 52：127-131(1992)；US 5208020)。
在某些實施方案中，連接子具有下式II：
其中A為「拉伸單元(stretcher unit)」，並且a為0至1之整數；W為「胺基酸單元」，並且w為0至12之整數；Y為「間隔基單元」，以及y為0、1或2；並且Ab、D及p如上文對於式I所定義。該等連接子之例示性實施方案描述於美國專利第7,498,298號中，其係由引用之方式明確併入本文中。
在一些實施方案中，連接子組分包含將抗體連接至另一連接子組分或藥物部分的「拉伸單元」。非限制性例示性拉伸單元如下所示(其中波浪線表示共價連接至抗體、藥物或另外的連接子組分的位點)：
在一些實施方案中，連接子組分包含「胺基酸單元」。在一些此類實施方案中，胺基酸單元允許連接子經蛋白酶裂解，從而促進在暴露於細胞內蛋白酶(諸如溶酶體酶)後藥物自免疫結合物中釋放(Doronina等，(2003)Nat.Biotechnol.21：778-784)。例示性胺基酸單元包括(但不限於)二肽、三肽、四肽及五肽。例示性二肽包括(但不限於)纈胺酸-瓜胺酸(vc或val-cit)、丙胺酸-苯丙胺酸(af或ala-phe)；苯丙胺酸-離胺酸(fk或phe-lys)；苯丙胺酸-高離胺酸(phe-homolys)；及N-甲基-纈胺酸-瓜胺酸(Me-val-cit)。例示性三肽包括(但不限於)甘胺酸-纈胺酸-瓜胺酸(gly-val-cit)及甘胺酸-甘胺酸-甘胺酸(gly-gly-gly)。胺基酸單元可包含天然存在之胺基酸殘基及/或次要胺基酸及/或非天然存在之胺基酸類似物，諸如瓜胺酸。胺基酸單元可經設計及優化以供特定酶進行酶促裂解，該特定酶例如腫瘤相關蛋白酶、組織蛋白酶B、C及D或纖維蛋白溶酶蛋白酶。
在一些實施方案中，連接子組分包含直接或經由拉伸單元及/或胺 基酸單元將抗體連接至藥物部分之「間隔基」單元。間隔基單元可為「自我犧牲的(self-immolative)」或「非自我犧牲的」。「非自我犧牲的」間隔基單元為其中部分或全部間隔基單元在裂解ADC後保持與藥物部分結合之單元。非自我犧牲之間隔基單元之實例包括(但不限於)甘胺酸間隔基單元及甘胺酸-甘胺酸間隔基單元。在一些實施方案中，藉由腫瘤細胞相關蛋白酶將含有甘胺酸-甘胺酸間隔基單元之ADC進行酶促裂解導致甘胺酸-甘胺酸-藥物部分自ADC之其餘部分上釋放。在一些此類實施方案中，甘胺酸-甘胺酸-藥物部分在腫瘤細胞中經歷水解步驟，因此自藥物部分上裂解甘胺酸-甘胺酸間隔基單元。
「自我犧牲的」間隔基單元允許釋放藥物部分。在某些實施方案中，連接子之間隔基單元包含對胺基苄基單元。在一些此類實施方案中，將對胺基苄基醇經由醯胺鍵連接至胺基酸單元，並且在苄醇與藥物之間形成胺基甲酸酯、胺基甲酸甲酯或碳酸酯(Hamann等，(2005)Expert Opin.Ther.Patents(2005)15：1087-1103)。在一些實施方案中，間隔基單元為對胺基苄氧羰基(PAB)。在一些實施方案中，包含自我犧牲的連接子的ADC具有以下結構：
其中Q為-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-鹵素、-硝基或-氰基；m為0至4之整數；並且p在1至約20之範圍內。在一些實施方案中，p在1至10、1至7、1至5或1至4之範圍內。
自我犧牲的間隔基的其他實例包括(但不限於)：電子上類似於PAB基團之芳族化合物，諸如2-胺基咪唑-5-甲醇衍生物(美國專利第7,375,078號；Hay等，(1999)Bioorg.Med.Chem.Lett.9：2237)及鄰胺基苄基縮醛或對胺基苄基縮醛。在一些實施方案中，可以使用在醯胺鍵水解後進行環化之間隔基，諸如經取代及未經取代之4-胺基丁酸醯胺 (Rodrigues等，(1995)Chemistry Biology 2：223)、適當取代之雙環[2.2.1]及雙環[2.2.2]環系統(Storm等，(1972)J.Amer.Chem.Soc.94：5815)及2-胺基苯基丙酸醯胺(Amsberry等，(1990)J.Org.Chem.55：5867)。將藥物連接至甘胺酸殘基之α-碳上為可用於ADC之自我犧牲的間隔基的另一實例(Kingsbury等，(1984)J.Med.Chem.27：1447)。
在一些實施方案中，連接子L可為經由分枝的多官能連接子部分將一個以上藥物部分共價連接至抗體之樹枝狀類型連接子(Sun等，(2002)Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12：2213-2215；Sun等，(2003)Bioorganic & Medicinal Chemistry 11：1761-1768)。樹枝狀連接子可以增加藥物與抗體之莫耳比，亦即裝載量，其與ADC之效能有關。因此，若抗體僅帶有一個反應性半胱胺酸硫醇基團，則可經由樹枝狀連接子連接眾多藥物部分。
下文示出在式I之ADC情形中之非限制性例示性連接子：
其他非限制性例示性ADC包括以下結構： 其中X為： Y為： 各R獨立地為H或C1-C6烷基；並且n為1至12。
通常可藉由在兩個或更多個胺基酸及/或肽片段之間形成肽鍵來製備肽型連接子。該等肽鍵可例如根據液相合成方法(例如，E.Schröder及K.Lübke(1965)「The Peptides」，第1卷，第76-136頁，Academic Press)來製備。
在一些實施方案中，連接子經調節溶解度及/或反應性之基團取 代。作為非限制性實例，帶電荷之取代基諸如磺酸酯基(-SO3 -)或銨可增加連接子試劑之水溶性且促進連接子試劑與抗體及/或藥物部分之偶合反應，或促進Ab-L(抗體-連接子中間體)與D或者D-L(藥物-連接子中間體)與Ab之偶合反應，取決於製備ADC所採用之合成途徑。在一些實施方案中，將一部分連接子偶合至抗體並且將一部分連接子偶合至藥物，隨後將Ab-(連接子部分)a偶合至藥物-(連接子部分)b以形成式I之ADC。在一些此類實施方案中，抗體包含一個以上(連接子部分)a取代基，以使得一個以上藥物偶合至式I之ADC中之抗體。
本發明之化合物明確涵蓋(但不限於)用以下連接子試劑製備的ADC：雙順丁烯二醯亞胺基-三氧基乙二醇(BMPEO)、N-(β-順丁烯二醯亞胺基丙基氧基)-N-羥基丁二醯亞胺酯(BMPS)、N-(ε-順丁烯二醯亞胺基己醯氧基)丁二醯亞胺酯(EMCS)、N-[γ-順丁烯二醯亞胺基丁醯氧基]丁二醯亞胺酯(GMBS)、1,6-己烷-雙-乙烯基碸(HBVS)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧基-(6-醯胺基己酸丁二醯亞胺酯)(LC-SMCC)、間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基丁二醯亞胺酯(MBS)、4-(4-N-順丁烯二醯亞胺基苯基)丁酸醯肼(MPBH)、3-(溴乙醯胺基)丙酸丁二醯亞胺酯(SBAP)、碘乙酸丁二醯亞胺酯(SIA)、(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸丁二醯亞胺酯(SIAB)、N-丁二醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、N-丁二醯亞胺基-4-(2-吡啶硫基)戊酸酯(SPP)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸丁二醯亞胺酯(SMCC)、4-(對順丁烯二醯亞胺基苯基)丁酸丁二醯亞胺酯(SMPB)、6-[(β-順丁烯二醯亞胺基丙醯胺基)己酸丁二醯亞胺酯](SMPH)、亞胺基四氫噻吩(IT)、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC及磺基-SMPB及丁二醯亞胺基-(4-乙烯基碸)苯甲酸酯(SVSB)，且包括雙順丁烯二醯亞胺試劑：二硫基雙順丁烯二醯亞胺基乙烷(DTME)、1,4-雙順丁烯二醯亞胺基丁烷(BMB)、1,4雙順丁烯二醯 亞胺基-2,3-二羥基丁烷(BMDB)、雙順丁烯二醯亞胺基己烷(BMH)、雙順丁烯二醯亞胺基乙烷(BMOE)、BM(PEG)2(如下所示)，及BM(PEG)3(如下所示)；亞胺酯之雙官能衍生物(諸如己二亞胺酸二甲酯鹽酸鹽)、活性酯(諸如辛二酸二丁二醯亞胺酯)、醛(諸如戊二醛)、雙疊氮化合物(諸如雙(對疊氮苯甲醯基)己二胺)、雙重氮鹽衍生物(諸如雙(對重氮苯甲醯基)-乙二胺)、二異氰酸酯(諸如甲苯2,6-二異氰酸酯)及雙活性氟化合物(諸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。在一些實施方案中，雙順丁烯二醯亞胺試劑使抗體中之半胱胺酸之硫醇基團連接至含有硫醇之藥物部分、連接子或連接子-藥物中間體。與硫醇基團具有反應性之其他官能基包括(但不限於)碘乙醯胺、溴乙醯胺、乙烯基吡啶、二硫化物、吡啶基二硫化物、異氰酸酯及異硫氰酸酯。
某些有用的連接子試劑可以自各種商業來源獲得，諸如Pierce Biotechnology,Inc.(Rockford,IL),Molecular Biosciences Inc.(Boulder,CO)，或根據此項技術中描述之程序合成；例如在Toki等，(2002)J.Org.Chem.67：1866-1872；Dubowchik等，(1997)Tetrahedron Letters,38：5257-60；Walker,M.A.(1995)J.Org.Chem.60：5352-5355；Frisch等，(1996)Bioconjugate Chem.7：180-186；US 6214345；WO 02/088172；US 2003130189；US 2003096743；WO 03/026577；WO 03/043583；及WO 04/032828中。
碳-14標記之1-異硫氰基苄基-3-甲基二亞乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)為用於將放射性核苷酸結合至抗體之例示性螯合劑。參見例如WO94/11026。
b)例示性藥物部分
(1)美素登及類美登素
在一些實施方案中，免疫結合物包含與一或多個類美登素分子結合之抗體。類美登素為美素登之衍生物，並且為藉由抑制微管蛋白聚合而作用之有絲分裂抑制劑。美素登首次自東非灌木齒葉美登木(east African shrub Maytenus serrata)中分離(美國專利第3896111號)。隨後，發現某些微生物亦產生類美登素，諸如美登醇及C-3美登醇酯(美國專利第4,151,042號)。合成類美登素揭示於例如美國專利第4,137,230號；第4,248,870號；第4,256,746號；第4,260,608號；第4,265,814號；第4,294,757號；第4,307,016號；第4,308,268號；第4,308,269號；第4,309,428號；第4,313,946號；第4,315,929號；第4,317,821號；第4,322,348號；第4,331,598號；第4,361,650號；第4,364,866號；第4,424,219號；第4,450,254號；第4,362,663號；及第4,371,533號中。
類美登素藥物部分為抗體-藥物結合物中之有吸引力之藥物部分，因為它們：(i)相對易於藉由發酵產物之發酵或化學修飾或衍生化來製備，(ii)易於用適於經由非二硫化物連接子結合至抗體之官能基衍生化，(iii)於血漿中穩定，及(iv)有效抵抗多種腫瘤細胞株。
適用作類美登素藥物部分之某些類美登素為此項技術中已知的並且可根據已知方法自天然來源分離或使用基因工程改造技術產生(參見例如Yu等，(2002)PNAS 99：7968-7973)。類美登素亦可根據已知方法合成製備。
例示性類美登素藥物部分包括(但不限於)具有修飾芳族環者，諸如：C-19-去氯(美國專利第4256746號)(例如藉由氫化鋰鋁還原安絲菌素(ansamytocin)P2來製備)；C-20-羥基(或C-20-去甲基)+/-C-19-去氯(美國專利第4361650號及第4307016號)(例如藉由使用鏈黴菌(Streptomyces)或放線菌(Actinomyces)去甲基化或使用LAH脫氯來製 備)；及C-20-去甲氧基、C-20-醯氧基(-OCOR)、+/-去氯(美國專利第4,294,757號)(例如藉由使用醯氯進行醯化來製備)，及在芳族環之其他位置具有修飾者。
例示性類美登素藥物部分亦包括具有諸如以下修飾者：C-9-SH(美國專利第4424219號)(例如藉由美登醇與H2S或P2S5之反應來製備)；C-14-烷氧基甲基(去甲氧基/CH2OR)(US 4331598)；C-14-羥基甲基或醯氧基甲基(CH2OH或CH2OAc)(美國專利第4450254號)(例如自諾卡氏菌(Nocardia)製備)；C-15-羥基/醯氧基(US 4364866)(例如藉由用鏈黴菌轉化美登醇來製備)；C-15-甲氧基(美國專利第4313946號及第4315929號)(例如自滑桃樹(Trewia nudlflora)分離)；C-18-N-去甲基(美國專利第4362663號及第4322348號)(例如藉由用鏈黴菌將美登醇去甲基化來製備)；及4,5-去氧(US 4371533)(例如藉由三氯化鈦/LAH還原美登醇來製備)。
類美登素化合物上之許多位置可用作連接位置。舉例而言，可使用習知偶合技術藉由與羥基反應來形成酯鍵。在一些實施方案中，反應可發生在具有羥基之C-3位置、經羥基甲基修飾之C-14位置、經羥基修飾之C-15位置及具有羥基之C-20位置。在一些實施方案中，在美登醇或美登醇類似物之C-3位置形成連接。
類美登素藥物部分包括具有以下結構者：
其中波浪線指示類美登素藥物部分之硫原子與ADC之連接子的共價連接。各R可獨立地為H或C1-C6烷基。連接醯胺基與硫原子之伸烷基鏈可為甲烷基、乙烷基或丙基，亦即m為1、2或3(US 633410；US 5208020；Chari等，(1992)Cancer Res.52：127-131；Liu等，(1996)Proc.Natl.Acad.Sci USA 93：8618-8623)。
本發明之ADC涵蓋類美登素藥物部分之所有立體異構體，亦即在對掌性碳處之R及S組態之任何組合(US 7276497；US 6913748；US 6441163；US 633410(RE39151)；US 5208020；Widdison等，(2006)J.Med.Chem.49：4392-4408，其係以全文引用之方式併入)。在一些實施方案中，類美登素藥物部分具有下列立體化學：
類美登素藥物部分之例示性實施方案包括(但不限於)DM1；DM3；及DM4，其具有下列結構：
其中波浪線指示藥物之硫原子與抗體-藥物結合物之連接子(L)的共價連接。
其他例示性類美登素抗體-藥物結合物具有下列結構及縮寫(其中Ab為抗體並且p為1至約20。在一些實施方案中，p為1至10，p為1至7，p為1至5，或p為1至4)：
其中DM1經由BMPEO連接子連接至抗體之硫醇基團的例示性抗體-藥物結合物具有下列結構及縮寫：
其中Ab為抗體；n為0、1或2；並且p為1至約20。在一些實施方案中，p為1至10，p為1至7，p為1至5，或p為1至4。
含有類美登素之免疫結合物、其製備方法以及其治療用途揭示於 例如美國專利第5,208,020號及第5,416,064號；US 2005/0276812 A1；及歐洲專利EP 0 425 235 B1中，其揭示內容特此以引用之方式明確併入。亦參見Liu等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：8618-8623(1996)；及Chari等，Cancer Research 52：127-131(1992)。
在一些實施方案中，抗體-類美登素結合物可藉由在不顯著降低抗體或類美登素分子之生物活性下將抗體與類美登素分子化學連接來製備。參見例如美國專利第5,208,020號(其揭示內容特此以引用之方式明確併入)。在一些實施方案中，每個抗體分子結合有平均3-4個類美登素分子之ADC已顯示增強靶細胞之細胞毒性之功效而不會負面影響抗體之功能或溶解性。在一些情況下，即使一分子的毒素/抗體亦預期相比於裸抗體之使用增強細胞毒性。
用於製備抗體-類美登素結合物之例示性連接基團包括例如本文所述者及下列文獻中所揭示者：美國專利第5208020號；歐洲專利0 425 235 B1；Chari等，Cancer Research 52：127-131(1992)；US 2005/0276812 A1；及US 2005/016993 A1，其揭示內容特此以引用之方式明確併入。
(2)奧瑞他汀及多拉司他汀
藥物部分包括多拉司他汀、奧瑞他汀及其類似物及衍生物(US 5635483；US 5780588；US 5767237；US 6124431)。奧瑞他汀為海洋軟體動物化合物多拉司他汀-10之衍生物。儘管不希望受任何特定理論約束，多拉司他汀及奧瑞他汀已顯示干擾微管動力學、GTP水解以及核及細胞分裂(Woyke等，(2001)Antimicrob.Agents and Chemother.45(12)：3580-3584)且具有抗癌(US 5663149)及抗真菌活性(Pettit等，(1998)Antimicrob.Agents Chemother.42：2961-2965)。多拉司他汀/奧瑞他汀藥物部分可經由肽類藥物部分之N(胺基)端或C(羧基)端連接至抗體(WO 02/088172；Doronina等，(2003)Nature Biotechnology 21(7)：778-784；Francisco等，(2003)Blood 102(4)：1458-1465)。
例示性奧瑞他汀實施方案包括US 7498298及US 7659241中所揭示之N端連接之單甲基奧瑞他汀藥物部分DE及DF，所述文獻之揭示內容以全文引用之方式明確併入：
其中DE及DF之波浪線指示與抗體或抗體-連接子組分之共價連接位點，並且在各位置獨立地：R2選自H及C1-C8烷基；R3選自H、C1-C8烷基、C3-C8碳環、芳基、C1-C8烷基-芳基、C1-C8烷基-(C3-C8碳環)、C3-C8雜環及C1-C8烷基-(C3-C8雜環)；R4選自H、C1-C8烷基、C3-C8碳環、芳基、C1-C8烷基-芳基、C1-C8烷基-(C3-C8碳環)、C3-C8雜環及C1-C8烷基-(C3-C8雜環)；R5選自H及甲基；或R4及R5共同形成碳環且具有式-(CRaRb)n-，其中Ra及Rb獨立地選自H、C1-C8烷基及C3-C8碳環並且n選自2、3、4、5及6；R6選自H及C1-C8烷基；R7選自H、C1-C8烷基、C3-C8碳環、芳基、C1-C8烷基-芳基、C1-C8烷基-(C3-C8碳環)、C3-C8雜環及C1-C8烷基-(C3-C8雜環)；各R8獨立地選自H、OH、C1-C8烷基、C3-C8碳環及O-(C1-C8烷基)；R9選自H及C1-C8烷基；R10選自芳基或C3-C8雜環； Z為O、S、NH或NR12，其中R12為C1-C8烷基；R11選自H、C1-C20烷基、芳基、C3-C8雜環、-(R13O)m-R14或-(R13O)m-CH(R15)2；m為在1-1000範圍內之整數；R13為C2-C8烷基；R14為H或C1-C8烷基；R15在每次出現時獨立地為H、COOH、-(CH2)n-N(R16)2、-(CH2)n-SO3H或-(CH2)n-SO3-C1-C8烷基；R16在每次出現時獨立地為H、C1-C8烷基或-(CH2)n-COOH；R18選自-C(R8)2-C(R8)2-芳基、-C(R8)2-C(R8)2-(C3-C8雜環)及-C(R8)2-C(R8)2-(C3-C8碳環)；以及n為在0至6範圍內之整數。
在一個實施方案中，R3、R4及R7獨立地為異丙基或第二丁基並且R5為-H或甲基。在一例示性實施方案中，R3及R4各自為異丙基，R5為-H，並且R7為第二丁基。
在另一實施方案中，R2及R6各自為甲基，並且R9為-H。
在另一實施方案中，R8在每次出現時為-OCH3。
在一例示性實施方案中，R3及R4各自為異丙基，R2及R6各自為甲基，R5為-H，R7為第二丁基，R8在每次出現時為-OCH3，並且R9為-H。
在一個實施方案中，Z為-O-或-NH-。
在一個實施方案中，R10為芳基。
在一例示性實施方案中，R10為-苯基。
在一例示性實施方案中，當Z為-O-時，R11為-H、甲基或第三丁基。
在一個實施方案中，當Z為-NH時，R11為-CH(R15)2，其中R15為-(CH2)n-N(R16)2，並且R16為-C1-C8烷基或-(CH2)n-COOH。
在另一實施方案中，當Z為-NH時，R11為-CH(R15)2，其中R15為 -(CH2)n-SO3H。
式DE之例示性奧瑞他汀實施方案為MMAE，其中波浪線指示抗體-藥物結合物之連接子(L)之共價連接：
式DF之例示性奧瑞他汀實施方案為MMAF，其中波浪線指示抗體-藥物結合物之連接子(L)之共價連接：
其他例示性實施方案包括在五肽奧瑞他汀藥物部分之C端具有苯丙胺酸羧基修飾之單甲基纈胺酸化合物(WO 2007/008848)及在五肽奧瑞他汀藥物部分之C端具有苯丙胺酸側鏈修飾之單甲基纈胺酸化合物(WO 2007/008603)。
包含MMAE或MMAF及各種連接子組分之式I之ADC的非限制性例示性實施方案具有下列結構及縮寫(其中「Ab」為抗體；p為1至約8，「Val-Cit」為纈胺酸-瓜胺酸二肽；並且「S」為硫原子：
包含MMAF及各種連接子組分之式I之ADC的非限制性例示性實施方案進一步包括Ab-MC-PAB-MMAF及Ab-PAB-MMAF。包含藉由不可蛋白水解裂解之連接子連接至抗體之MMAF的免疫結合物已顯示具有與包含藉由蛋白水解裂解之連接子連接至抗體之MMAF的免疫結合物類似的活性(Doronina等，(2006)Bioconjugate Chem.17：114-124)。在一些此類實施方案中，鹹信藥物釋放受到細胞中之抗體降解的影響。
通常，可藉由形成兩個或更多個胺基酸及/或肽片段之間的肽鍵來製備肽基藥物部分。該等肽鍵可例如根據液相合成方法來製備(參見例如E.Schröder及K.Lübke,「The Peptides」，第1卷，第76-136頁，1965,Academic Press)。在一些實施方案中，奧瑞他汀/多拉司他汀藥物部分可根據以下方法來製備：US 7498298；US 5635483；US 5780588；Pettit等，(1989)J.Am.Chem.Soc.111：5463-5465；Pettit等，(1998)Anti-Cancer Drug Design 13：243-277；Pettit,G.R.等，Synthesis,1996,719-725；Pettit等，(1996)J.Chem.Soc.Perkin Trans.15：859-863；及Doronina(2003)Nat.Biotechnol.21(7)：778-784。
在一些實施方案中，式DE(諸如MMAE)及DF(諸如MMAF)之奧瑞他汀/多拉司他汀藥物部分及其藥物-連接子中間體及衍生物(諸如MC-MMAF、MC-MMAE、MC-vc-PAB-MMAF及MC-vc-PAB-MMAE) 可使用US 7498298；Doronina等，(2006)Bioconjugate Chem.17：114-124；及Doronina等，(2003)Nat.Biotech.21：778-784中所述之方法來製備，隨後結合至所關注之抗體。
(3)卡奇黴素
在一些實施方案中，免疫結合物包含結合至一或多個卡奇黴素分子之抗體。抗生素之卡奇黴素家族及其類似物能夠產生低於皮莫耳濃度之雙鏈DNA斷裂(Hinman等，(1993)Cancer Research 53：3336-3342；Lode等，(1998)Cancer Research 58：2925-2928)。卡奇黴素具有細胞內作用位點，但在某些情況下不容易跨過質膜。因此，在一些實施方案中，此等藥劑經由抗體介導性內化之細胞攝取可極大地增強其細胞毒性作用。製備具有卡奇黴素藥物部分之抗體-藥物結合物之非限制性例示性方法描述於例如US 5712374；US 5714586；US 5739116；及US 5767285中。
(4)吡咯并苯并二氮呯
在一些實施方案中，ADC包含吡咯并苯并二氮呯(PBD)。在一些實施方案中，PBD二聚體識別並結合於特定DNA序列。天然產物胺茴黴素(anthramycin)，PBD，首先報導於1965年(Leimgruber等，(1965)J.Am.Chem.Soc.,87：5793-5795；Leimgruber等，(1965)J.Am.Chem.Soc.,87：5791-5793)。自此以後，許多PBD(天然存在的及類似物)已有報導(Thurston等，(1994)Chem.Rev.1994,433-465)，包括三環PBD支架之二聚體(US 6884799；US 7049311；US 7067511；US 7265105；US 7511032；US 7528126；US 7557099)。不希望受任何特定理論約束，據信該二聚體結構賦予與B型DNA之小溝具有相同螺旋(isohelicity)的適當三維形狀，導致在結合位點之緊密配合(snug fit)(Kohn,In Antibiotics III.Springer-Verlag,New York，第3-11頁(1975)；Hurley及Needham-VanDevanter,(1986)Acc.Chem.Res.,19：230-237)。帶有C2芳 基取代基之二聚PBD化合物已顯示可用作細胞毒性劑(Hartley等，(2010)Cancer Res.70(17)：6849-6858；Antonow(2010)J.Med.Chem.53(7)：2927-2941；Howard等，(2009)Bioorganic and Med.Chem.Letters 19(22)：6463-6466)。
在一些實施方案中，PBD化合物可以藉由在N10位置用氮保護基(其可在活體內移除)將其保護之前藥形式使用(WO 00/12507；WO 2005/023814)。
PBD二聚體已結合至抗體並且所得ADC顯示具有抗癌特性(US 2010/0203007)。在PBD二聚體上之非限制性例示性連接位點包括五員吡咯環、PBD單元之間的栓系(tether)及N10-C11亞胺基團(WO 2009/016516；US 2009/304710；US 2010/047257；US 2009/036431；US 2011/0256157；WO 2011/130598)。
ADC之非限制性例示性PBD二聚體組分具有式A：
及其鹽及溶劑合物，其中：波浪線指示與連接子之共價連接位點；虛線指示C1與C2之間或者C2與C3之間雙鍵的視情況存在；R2獨立地選自H、OH、=O、=CH2、CN、R、OR、=CH-RD、=C(RD)2、O-SO2-R、CO2R及COR，並且視情況進一步選自鹵基或二鹵基，其中RD獨立地選自R、CO2R、COR、CHO、CO2H及鹵基；R6及R9獨立地選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR'、NO2、Me3Sn及鹵基；R7獨立地選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR'、 NO2、Me3Sn及鹵基；Q獨立地選自O、S及NH；R11為H或R，或者其中Q為O、SO3M，其中M為金屬陽離子；R及R'各自獨立地選自視情況經取代之C1-8烷基、C1-12烷基、C3-8雜環基、C3-20雜環及C5-20芳基，並且視情況關於基團NRR'，R及R'與其所連接之氮原子一起形成視情況經取代之4員、5員、6員或7員雜環；R12、R16、R19及R17係分別如關於R2、R6、R9及R7所定義；R"為C3-12伸烷基，該鏈可間雜有一或多個雜原子例如O、S、N(H)、NMe及/或芳族環例如苯或吡啶，該等環視情況經取代；以及X及X'獨立地選自O、S及N(H)。
在一些實施方案中，R及R'各自獨立地選自視情況經取代之C1-12烷基、C3-20雜環及C5-20芳基，並且視情況關於基團NRR'，R及R'與其所連接之氮原子一起形成視情況經取代之4員、5員、6員或7員雜環。
在一些實施方案中，R9及R19為H。
在一些實施方案中，R6及R16為H。
在一些實施方案中，R7及R17皆為OR7A，其中R7A為視情況經取代之C1-4烷基。在一些實施方案中，R7A為Me。在一些實施方案中，R7A為CH2Ph，其中Ph為苯基。
在一些實施方案中，X為O。
在一些實施方案中，R11為H。
在一些實施方案中，在各單體單元中的C2與C3之間存在雙鍵。
在一些實施方案中，R2及R12獨立地選自H及R。在一些實施方案中，R2及R12獨立地為R。在一些實施方案中，R2及R12獨立地為視情況經取代之C5-20芳基或C5-7芳基或C8-10芳基。在一些實施方案中，R2及R12獨立地為視情況經取代之苯基、噻吩基、萘基、吡啶基、喹啉基或異喹啉基。在一些實施方案中，R2及R12獨立地選自=O、=CH2、=CH-RD 及=C(RD)2。在一些實施方案中，R2及R12各自為=CH2。在一些實施方案中，R2及R12各自為H。在一些實施方案中，R2及R12各自為=O。在一些實施方案中，R2及R12各自為=CF2。在一些實施方案中，R2及/或R12獨立地為=C(RD)2。在一些實施方案中，R2及/或R12獨立地為=CH-RD。
在一些實施方案中，當R2及/或R12為=CH-RD時，各基團可獨立地具有下文所示之組態：
在一些實施方案中，=CH-RD呈組態(I)。
在一些實施方案中，R"為C3伸烷基或C5伸烷基。
在一些實施方案中，ADC之例示性PBD二聚體組分具有式A(I)之結構： 其中n為0或1。
在一些實施方案中，ADC之例示性PBD二聚體組分具有式A(II)之結構： 其中n為0或1。
在一些實施方案中，ADC之例示性PBD二聚體組分具有式A(III)之結構： 其中RE及RE"各自獨立地選自H或RD，其中RD係如上文所定義；以及其中n為0或1。
在一些實施方案中，n為0。在一些實施方案中，n為1。在一些實施方案中，RE及/或RE"為H。在一些實施方案中，RE及RE"為H。在一些實施方案中，RE及/或RE"為RD，其中RD為視情況經取代之C1-12烷基。在一些實施方案中，RE及/或RE"為RD，其中RD為甲基。
在一些實施方案中，ADC之例示性PBD二聚體組分具有式A(IV)之結構： 其中Ar1及Ar2各自獨立地為視情況經取代之C5-20芳基；其中Ar1及Ar2可為相同或不同的；以及其中n為0或1。
在一些實施方案中，ADC之例示性PBD二聚體組分具有式A(V)之結構： 其中Ar1及Ar2各自獨立地為視情況經取代之C5-20芳基；其中Ar1及Ar2可為相同或不同的；以及其中n為0或1。
在一些實施方案中，Ar1及Ar2各自獨立地選自視情況經取代之苯基、呋喃基、噻吩基及吡啶基。在一些實施方案中，Ari及Ar2各自獨立地為視情況經取代之苯基。在一些實施方案中，Ar1及Ar2各自獨立地為視情況經取代之噻吩-2-基或噻吩-3-基。在一些實施方案中，Ar1及Ar2各自獨立地為視情況經取代之喹啉基或異喹啉基。喹啉基或異喹啉基可經由任意可用之環位置與PBD核結合。舉例而言，喹啉基可為喹啉-2-基、喹啉-3-基、喹啉-4-基、喹啉-5-基、喹啉-6-基、喹啉-7-基及喹啉-8-基。在一些實施方案中，喹啉基選自喹啉-3-基及喹啉-6-基。異喹啉基可為異喹啉-1-基、異喹啉-3-基、異喹啉-4-基、異喹啉-5-基、異喹啉-6-基、異喹啉-7-基及異喹啉-8-基。在一些實施方案中，異喹啉基選自異喹啉-3-基及異喹啉-6-基。
ADC之其他非限制性例示性PBD二聚體組分具有式B：
及其鹽及溶劑合物，其中：波浪線指示與連接子之共價連接位點；連接至OH之波浪線指示S或R組態；RV1及RV2獨立地選自H、甲基、乙基及苯基(該苯基可視情況經氟取代，特別是在位置4)及C5-6雜環基；其中RV1及RV2可為相同或不同的；以及n為0或1。
在一些實施方案中，RV1及RV2獨立地選自H、苯基及4-氟苯基。
在一些實施方案中，連接子可連接在PBD二聚體藥物部分之各種位點之一，該藥物部分包括B環之N10亞胺、C環之C-2內/外位置或連 接A環之栓系單元(參見以下結構C(I)及C(II))。
ADC之非限制性例示性PBD二聚體組分包括式C(I)及C(II)：
式C(I)及C(II)以其N10-C11亞胺形式示出。例示性PBD藥物部分亦包括甲醇胺以及經保護之甲醇胺形式，如下表中所示：
其中：X為CH2(n=1至5)、N或O；Z及Z'獨立地選自OR及NR2，其中R為含有1至5個碳原子之第一、第二或第三烷基鏈；R1、R'1、R2及R'2各自獨立地選自H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C5-20芳基(包括經取代之芳基)、C5-20雜芳基、-NH2、-NHMe、-OH及-SH，其中，在一些實施方案中，烷基、烯基及炔基鏈包含至多5個碳原子；R3及R'3獨立地選自H、OR、NHR及NR2，其中R為含有1至5個碳原子之第一、第二或第三烷基鏈；R4及R'4獨立地選自H、Me及OMe；R5選自C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C5-20芳基(包括經鹵基、 硝基、氰基、烷氧基、烷基、雜環基取代之芳基)及C5-20雜芳基，其中，在一些實施方案中，烷基、烯基及炔基鏈包含至多5個碳原子；R11為H、C1-C8烷基或保護基(諸如乙醯基、三氟乙醯基、第三丁氧羰基(BOC)、苄氧基羰基(CBZ)、9-氟烯基甲基烯氧基羰基(Fmoc)或包含自我犧牲單元(諸如纈胺酸-瓜胺酸-PAB)之部分)；R12為H、C1-C8烷基或保護基；其中R1、R'1、R2、R'2、R5或R12之一的氫原子或者A環之間-OCH2CH2(X)nCH2CH2O-間隔基的氫原子經連接至ADC之連接子的鍵置換。
ADC之例示性PDB二聚體部分包括(但不限於)(波浪線指示共價連接至連接子之位點)： PBD二聚體； 包含PBD二聚體之ADC之非限制性例示性實施方案具有下列結構： PBD二聚體-val-cit-PAB-Ab； PBD二聚體-Phe-Lys-PAB-Ab，其中：n為0至12。在一些實施方案中，n為2至10。在一些實施方案中，n為4至8。在一些實施方案中，n選自4、5、6、7及8。
包含PBD二聚體之另一非限制性例示性ADC可藉由將單甲基吡啶基二硫化物、N10連接之PBD(如下所示)結合至抗體而製得：
PBD二聚體-val-cit-PAB-Ab及PBD二聚體-Phe-Lys-PAB-Ab之連接子可由蛋白酶裂解，而PBD二聚體-順丁烯二醯亞胺-縮醛之連接子為酸不穩定的。
PBD二聚體及包含PBD二聚體之ADC可根據此項技術中已知之方法製備。參見例如WO 2009/016516；US 2009/304710；US 2010/047257；US 2009/036431；US 2011/0256157；WO 2011/130598。
(5)蒽環類藥物
在一些實施方案中，ADC包含蒽環類藥物。蒽環類藥物為展現細胞毒性活性之抗生素化合物。儘管不希望受任何特定理論約束，但研 究已指示蒽環類藥物可藉由多種不同機制作用以殺死細胞，該等機制包括：1)將藥物分子嵌入細胞之DNA中，從而抑制DNA依賴性核酸合成；2)由藥物產生自由基，其隨後與細胞大分子反應以造成對細胞之損傷，及/或3)藥物分子與細胞膜之相互作用(參見例如C.Peterson等，「Transport And Storage Of Anthracycline In Experimental Systems And Human Leukemia」,Anthracycline Antibiotics In Cancer Therapy；N.R.Bachur,「Free Radical Damage」同上，第97-102頁)。由於其細胞毒性潛力，蒽環類藥物已用於治療眾多癌症，諸如白血病、乳癌、肺癌、卵巢腺癌及肉瘤(參見例如P.H-Wiernik,Anthracycline：Current Status And New Developments第11頁)。
非限制性例示性蒽環類藥物包括阿黴素(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、伊達比星(idarubicin)、道諾黴素(daunomycin)、奈莫柔比星及其衍生物。道諾黴素及阿黴素之免疫結合物及前藥已經製備且研究(Kratz等，(2006)Current Med.Chem.13：477-523；Jeffrey等，(2006)Bioorganic及Med.Chem.Letters 16：358-362；Torgov等，(2005)Bioconj.Chem.16：717-721；Nagy等，(2000)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97：829-834；Dubowchik等，(2002)Bioorg.及Med.Chem.Letters 12：1529-1532；King等，(2002)J.Med.Chem.45：4336-4343；EP 0328147；US 6630579)。抗體-藥物結合物BR96-阿黴素與腫瘤相關抗原Lewis-Y特異性反應並且已在I和II階段研究中評估(Saleh等，(2000)J.Clin.Oncology 18：2282-2292；Ajani等，(2000)Cancer Jour.6：78-81；Tolcher等，(1999)J.Clin.Oncology 17：478-484)。
PNU-159682為奈莫柔比星之有效代謝物(或衍生物)(Quintieri等，(2005)Clinical Cancer Research 11(4)：1608-1617)。奈莫柔比星為在阿黴素之糖苷胺基上具有2-甲氧基嗎啉基之阿黴素半合成類似物並且正進行臨床評估(Grandi等，(1990)Cancer Treat.Rev.17：133；Ripamonti 等，(1992)Brit.J.Cancer 65：703)，包括用於肝細胞癌之II/III階段試驗(Sun等，(2003)Proceedings of the American Society for Clinical Oncology 22,Abs1448；Quintieri(2003)Proceedings of the American Association of Cancer Research,44：第1版，Abs 4649；Pacciarini等，(2006)Jour.Clin.Oncology 24：14116)。
包含奈莫柔比星或奈莫柔比星衍生物之非限制性示例性ADC示於式Ia中：
其中R1為氫原子、羥基或甲氧基並且R2為C1-C5烷氧基，或其醫藥學上可接受之鹽；L1及Z一起為如本文所述之連接子(L)；T為如本文所述之抗體(Ab)；以及m為1至約20。在一些實施方案中，m為1至10、1至7、1至5、或1至4。
在一些實施方案中，R1及R2皆為甲氧基(-OMe)。
包含奈莫柔比星或奈莫柔比星衍生物之另一非限制性例示性ADC示於式Ib中：
其中R1為氫原子、羥基或甲氧基並且R2為C1-C5烷氧基，或其醫藥學上可接受之鹽；L2及Z一起為如本文所述之連接子(L)；T為如本文所述之抗體(Ab)；以及m為1至約20。在一些實施方案中，m為1至10、1至7、1至5、或1至4。
在一些實施方案中，R1及R2皆為甲氧基(-OMe)。
在一些實施方案中，含奈莫柔比星之ADC之奈莫柔比星組分為PNU-159682。在一些此類實施方案中，ADC之藥物部分可具有下列結構之一： 其中波浪線指示與連接子(L)之連接。
蒽環類藥物(包括PNU-159682)可經由若干連接位點及包括本文所述之連接子之多種連接子(US 2011/0076287；WO2009/099741；US 2010/0034837；WO 2010/009124)結合至抗體。
包含奈莫柔比星及連接子之例示性ADC包括(但不限於)： PNU-159682順丁烯二醯亞胺縮醛-Ab； PNU-159682-val-cit-PAB-Ab； PNU-159682-val-cit-PAB-間隔基-Ab；
PNU-159682-val-cit-PAB-間隔基(R1R2)-Ab，其中：R1及R2獨立地選自H及C1-C6烷基；以及 PNU-159682-順丁烯二醯亞胺-Ab。
PNU-159682順丁烯二醯亞胺縮醛-Ab之連接子為酸不穩定的，而PNU-159682-val-cit-PAB-Ab、PNU-159682-val-cit-PAB-間隔基-Ab及PNU-159682-val-cit-PAB-間隔基(R1R2)-Ab之連接子為蛋白酶可裂解的。
(6)其他藥物部分
藥物部分亦包括格爾德黴素(geldanamycin)(Mandler等，(2000)J.Nat.Cancer Inst.92(19)：1573-1581；Mandler等，(2000)Bioorganic & Med.Chem.Letters 10：1025-1028；Mandler等，(2002)Bioconjugate Chem.13：786-791)；及其酶活性毒素及片段，包括(但不限於)白喉毒素A鏈、白喉毒素之非結合活性片段、外毒素A鏈(來自銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa))、蓖麻毒素A鏈、相思豆毒素A鏈、蒴蓮根毒素A鏈、α-八疊球菌、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陸蛋白(PAPI、PAPII及PAP-S)、苦瓜抑制劑、麻瘋樹毒蛋白、巴豆毒素、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制劑、白樹毒素、邁托毒素(mitogellin)、局限麴菌素(restrictocin)、酚黴素、伊諾黴素(enomycin)及單端孢黴烯族毒素(tricothecene)。參見例如WO 93/21232。
藥物部分亦包括具有核酸降解活性之化合物(例如，核糖核酸酶或 DNA內切酶)。
在某些實施方案中，免疫結合物可包含高放射性原子。多種放射性同位素可用於產生放射性結合抗體。實例包括At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212及Lu之放射性同位素。在一些實施方案中，當免疫結合物用於偵測時，其可包含用於閃爍照相研究之放射性原子，例如Tc99或I123，或用於核磁共振(NMR)成像(亦稱為磁共振成像，MRI)之自旋標記，諸如鋯-89、碘-123、碘-131、銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓、錳或鐵。鋯-89可與各種金屬螯合劑複合且結合於抗體，例如用於PET成像(WO 2011/056983)。
放射性標記或其他標記可以已知方式併入免疫結合物中。舉例而言，肽可使用包含例如一或多個氟-19原子替代一或多個氫之合適胺基酸前驅體生物合成或化學合成。在一些實施方案中，諸如Tc99、I123、Re186、Re188及In111之標記可經由抗體中之半胱胺酸殘基連接。在一些實施方案中，釔-90可經由抗體之離胺酸殘基連接。在一些實施方案中，可使用IODOGEN方法(Fraker等，(1978)Biochem.Biophys.Res.Commun.80：49-57)併入碘-123。「Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy」(Chatal,CRC Press 1989)描述某些其他方法。
在某些實施方案中，免疫結合物可包含結合於前藥活化酶之抗體。在一些此類實施方案中，前藥活化酶將前藥(例如，肽基化學治療劑，參見WO 81/01145)轉化為活性藥物，諸如抗癌藥物。在一些實施方案中，該等免疫結合物可用於抗體依賴性酶介導之前藥療法(「ADEPT」)。可結合於抗體之酶包括(但不限於)鹼性磷酸酶，其可用於將含磷酸酯之前藥轉化為游離藥物；芳基硫酸酯酶，其可用於將含硫酸酯之前藥轉化為游離藥物；胞嘧啶去胺酶，其可用於將無毒性5-氟胞嘧啶轉化為抗癌藥物5-氟尿嘧啶；蛋白酶，諸如沙雷氏菌(serratia)蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、羧基肽酶及組織蛋白酶(諸 如組織蛋白酶B及L)，其可用於將含肽前藥轉化為游離藥物；D-丙胺醯基羧基肽酶，其可用於轉化含有D-胺基酸取代基之前藥；碳水化合物裂解酶，諸如β-半乳糖苷酶及神經胺酸苷酶，其可用於將糖基化前藥轉化為游離藥物；β-內醯胺酶，其可用於將經β-內醯胺衍生之藥物轉化為游離藥物；及青黴素醯胺酶，諸如青黴素V醯胺酶及青黴素G醯胺酶，其可用於將在其胺氮處分別經苯氧基乙醯基或苯基乙醯基衍生之藥物轉化為游離藥物。在一些實施方案中，可藉由此項技術中熟知之重組DNA技術將酶共價結合至抗體。參見例如Neuberger等，Nature 312：604-608(1984)。
c)藥物裝載量
藥物裝載量由p表示，p為式I之分子中每個抗體之藥物部分的平均數。藥物裝載量範圍可為1至20個藥物部分(D)/抗體。式I之ADC包括與1至20之藥物部分範圍結合之抗體的集合。在由結合反應製備ADC中之每個抗體的藥物部分的平均數可藉由習知方法(諸如質譜法、ELISA檢定及HPLC)來表徵。亦可根據p確定ADC之數量分佈。在一些情況下，均一ADC(其中p為具有其他藥物裝載量之ADC的某一值)的分離、純化及表徵可藉由諸如逆相HPLC或電泳之方法來實現。
對於一些抗體-藥物結合物，p可能受到抗體上連接位點數量的限制。舉例而言，當連接為如在上述某些例示性實施方案中之半胱胺酸硫醇時，抗體可僅具有一或數個半胱胺酸硫醇基團，或者可僅具有一或數個充分反應性硫醇基團，經由該硫醇基團可連接連接子。在某些實施方案中，較高藥物裝載量(例如p>5)可能導致某些抗體-藥物結合物之聚集、不溶性、毒性或喪失細胞滲透性。在某些實施方案中，ADC之平均藥物裝載量範圍為1至約8；約2至約6；或約3至約5。實際上，已經表明對於某些ADC，每個抗體之藥物部分的最佳比率可小於8，並且可為約2至約5(US 7498298)。
在某些實施方案中，在結合反應期間與抗體結合之藥物部分的量少於理論最大值。抗體可含有例如不與藥物-連接子中間體或連接子試劑反應的離胺酸殘基，如下所述。一般而言，抗體不含許多可連接至藥物部分之游離且反應性半胱胺酸硫醇基團；實際上抗體中之大部分半胱胺酸硫醇殘基作為二硫橋而存在。在某些實施方案中，可以用還原劑諸如二硫蘇糖醇(DTT)或三羰基乙基膦(TCEP)在部分或全部還原條件下使抗體還原以產生反應性半胱胺酸硫醇基團。在某些實施方案中，使抗體經歷變性條件以揭示反應性親核基團諸如離胺酸或半胱胺酸。
ADC之裝載量(藥物/抗體比率)可以不同方式控制，例如藉由：(i)限制藥物-連接子中間體或連接子試劑相對於抗體之莫耳過量，(ii)限制結合反應時間或溫度，及(iii)部分或限制半胱胺酸硫醇修飾之還原條件。
應當理解，若不止一個親核基團與藥物-連接子中間體或連接子試劑反應，則所得產物為ADC化合物與連接至抗體之一或多個藥物部分之分佈的混合物。可藉由對抗體具特異性並且對藥物具特異性之雙重ELISA抗體檢定自混合物計算每個抗體之藥物平均數。可藉由質譜法來鑒別混合物中之個別ADC分子，且藉由HPLC例如疏水性相互作用層析法來分離(參見例如McDonagh等，(2006)Prot.Engr.Design及Selection 19(7)：299-307；Hamblett等，(2004)Clin.Cancer Res.10：7063-7070；Hamblett,K.J.等，「Effect of drug loading on the pharmacology,pharmacokinetics,and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate」，摘要號624，美國癌症研究協會(American Association for Cancer Research),2004屆年會，2004年3月27-31日，Proceedings of the AACR，第45卷，2004年3月；Alley,S.C.等，「Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates」，摘要號627，美國癌症研究協會，2004屆年會，2004年3月27-31日，Proceedings of the AACR，第45卷，2004年3月)。在某些實施方案中，可藉由電泳或層析法自結合混合物中分離具有單一裝載量值之均一ADC。
d)某些製備免疫結合物之方法
可藉由採用熟習此項技術者已知之有機化學反應、條件及試劑之若干途徑製備式I之ADC，該等途徑包括：(1)使抗體之親核基團與二價連接子試劑反應以經由共價鍵形成Ab-L，接著與藥物部分D反應；及(2)使藥物部分之親核基團與二價連接子試劑反應以經由共價鍵形成D-L，接著與抗體之親核基團反應。經由後一種途徑製備式I之ADC的例示性方法描述於US 7498298中，其係以引用之方式明確併入本文中。
抗體上之親核基團包括(但不限於)：(i)N端胺基團，(ii)側鏈胺基團，例如離胺酸，(iii)側鏈硫醇基團，例如半胱胺酸，及(iv)糖羥基或胺基，其中該抗體為糖基化的。胺、硫醇及羥基為親核性的並且能夠與連接子部分及連接子試劑上之親電子基團反應以形成共價鍵，該等連接子部分及連接子試劑包括：(i)活性酯諸如NHS酯、HOBt酯、鹵代甲酸酯及醯鹵；(ii)烷基及苄基鹵化物諸如鹵代乙醯胺類；及(iii)醛、酮、羧基及順丁烯二醯亞胺基團。某些抗體具有可還原之鏈間二硫鍵，亦即半胱胺酸橋。可藉由用還原劑諸如DTT(二硫蘇糖醇)或三羰基乙基膦(TCEP)處理使得抗體具有反應性用於與連接子試劑結合，以使該抗體完全或部分還原。理論上，每個半胱胺酸橋將因此形成兩個反應性硫醇親核體。可經由離胺酸殘基之修飾，例如藉由使離胺酸殘基與2-亞胺基硫雜戊環(Traut試劑)反應，將另外的親核基團引入抗體中，導致胺轉化為硫醇。亦可藉由引入一個、兩個、三個、四個或更多個半胱胺酸殘基(例如，藉由製備包含一或多個非天然半胱胺酸胺基酸殘基之變異體抗體)將反應性硫醇基團引入抗體。
亦可藉由使抗體上之親電子基團(諸如醛或酮羰基)與連接子試劑或藥物上之親核基團反應來產生本發明之抗體-藥物結合物。連接子試劑上之有用的親核基團包括(但不限於)醯肼、肟、胺基、肼、縮胺基硫脲、肼羧酸酯及芳基醯肼。在一個實施方案中，修飾抗體以引入能夠與連接子試劑或藥物上之親核取代基反應的親電子部分。在另一個實施方案中，糖基化抗體上之糖可用例如高碘酸鹽氧化劑氧化，以形成可與連接子試劑或藥物部分之胺基團反應的醛或酮基團。所得亞胺希夫鹼(Schiff base)基團可形成穩定的鍵，或可經例如硼氫化物試劑還原以形成穩定的胺鍵。在一個實施方案中，糖基化抗體之碳水化合物部分與半乳糖氧化酶或偏高碘酸鈉(sodium meta-periodate)之反應可產生可能與藥物上之適當基團反應之抗體的羰基(醛及酮)基團(Hermanson,Bioconjugate Techniques)。在另一實施方案中，含有N端絲胺酸或酥胺酸殘基之抗體可以與偏高碘酸鈉反應，導致產生醛替代第一胺基酸(Geoghegan及Stroh,(1992)Bioconjugate Chem.3：138-146；US 5362852)。此類醛可以與藥物部分或連接子親核體反應。
藥物部分上之例示性親核基團包括(但不限於)：胺、硫醇、羥基、醯肼、肟、肼、縮胺基硫脲、肼羧酸酯及芳基醯肼基團，該等親核基團能夠與連接子部分及連接子試劑上之親電子基團反應以形成共價鍵，該等連接子部分及連接子試劑包括：(i)活性酯諸如NHS酯、HOBt酯、鹵代甲酸酯及醯鹵；(ii)烷基及苄基鹵化物諸如鹵代乙醯胺類；及(iii)醛、酮、羧基及順丁烯二醯亞胺基團。
在本文標題為「例示性連接子」之部分描述可用於製備ADC之非限制性例示性交聯試劑。使用該等交聯試劑連接兩個部分(包括蛋白質部分及化學部分)之方法為此項技術中已知的。在一些實施方案中，包含抗體及細胞毒性劑之融合蛋白可例如藉由重組技術或肽合成來製備。重組DNA分子可包含編碼結合物之抗體及細胞毒性部分的區域， 該等抗體及細胞毒性部分彼此鄰近或經編碼不破壞結合物之所需特性之連接子肽的區域隔開。
在另一實施方案中，抗體可結合至「受體」(諸如鏈黴親和素)用於腫瘤預靶向，其中將抗體-受體結合物施用於患者，接著使用清除劑自循環中移除未結合之結合物，隨後施用結合至細胞毒性劑(例如，藥物或放射性核苷酸)之「配位體」(例如，抗生物素蛋白)。
E.用於診斷及偵測之方法及組合物
在某些實施方案中，本文提供之任何抗CD33抗體可用於偵測生物樣本中CD33之存在。如本文所用之術語「偵測」涵蓋定量或定性偵測。「生物樣本」包含例如細胞或組織(例如，活檢材料，包括癌性或可能癌性的淋巴組織，諸如淋巴細胞、淋巴母細胞、單核細胞、骨髓單核細胞及其混合物)。
在一個實施方案中，提供用於診斷或偵測方法中之抗CD33抗體。在另一態樣中，提供偵測生物樣本中CD33之存在的方法。在某些實施方案中，該方法包括在允許抗CD33抗體與CD33結合之條件下使生物樣本與如本文所述之抗CD33抗體接觸，以及偵測抗CD33抗體及生物樣本中之CD33之間是否形成複合物。該方法可為活體外或活體內方法。在一個實施方案中，抗CD33抗體用於選擇有資格用抗CD33抗體治療(例如其中CD33為用於選擇患者之生物標記物)的受試者。在另一實施方案中，生物樣本為細胞或組織。
在另一實施方案中，抗CD33抗體在活體內被用於偵測(例如，藉由活體內成像)受試者中之CD33陽性癌症，例如為了對癌症進行診斷、預後或分期、確定適當的治療過程或監測癌症對治療之反應的目的。此項技術中已知用於活體內偵測之一種方法為免疫-正電子發射斷層掃描(免疫-PET)，如例如van Dongen等，The Oncologist 12：1379-1389(2007)及Verel等，J.Nucl.Med.44：1271-1281(2003)中所述。在該等實 施方案中，提供用於偵測受試者中CD33陽性癌症之方法，該方法包括向患有或疑似患有CD33陽性癌症之受試者施用經標記之抗CD33抗體，以及偵測受試者中經標記之抗CD33抗體，其中該經標記之抗CD33抗體之偵測表明受試者中存在CD33陽性癌症。在某些此類實施方案中，經標記之抗CD33抗體包含結合至正電子發射體(諸如68Ga、18F、64Cu、86Y、76Br、89Zr及124I)之抗CD33抗體。在一特定實施方案中，正電子發射體為89Zr。
在其他實施方案中，診斷或偵測之方法包括使固定於基質之第一抗CD33抗體與生物樣本接觸以測試CD33之存在，使該基質暴露於第二抗CD33抗體，且偵測該第二抗CD33是否結合於第一抗CD33抗體與生物樣本中之CD33之間的複合物。基質可為任何支持介質，例如玻璃、金屬、陶瓷、聚合物珠粒、載玻片、晶片及其他基質。在某些實施方案中，生物樣本包含細胞或組織。在某些實施方案中，第一或第二抗CD33抗體為本文所述之任何抗體。
根據任何上述實施方案可診斷或偵測之例示性病症包括CD33陽性癌症，諸如CD33陽性AML、CD33陽性CML、CD33陽性MDS、CD33陽性慢性骨髓單核細胞性白血病、CD33陽性APL、CD33陽性慢性骨髓增生性病症、CD33陽性血小板性白血病、CD33陽性前B-ALL、CD33陽性前T-ALL、CD33陽性多發性骨髓瘤、CD33陽性肥大細胞疾病、CD33陽性肥大細胞白血病、CD33陽性肥大細胞肉瘤、CD33陽性骨髓肉瘤、CD33陽性淋巴性白血病及CD33陽性未分化型白血病。在一些實施方案中，CD33陽性癌症為接收抗CD33免疫組織化學(IHC)或原位雜交(ISH)評分大於「0」之癌症，其對應於在本文實施例B中所述之條件下在>90%之腫瘤細胞中非常弱之染色或無染色。在另一實施方案中，CD33陽性癌症以1+、2+或3+等級表現CD33，如在本文實施例B中所述之條件下所定義。在一些實施方案中，CD33陽性癌症為根據偵 測CD33 mRNA之逆轉錄酶PCR(RT-PCR)檢定表現CD33之癌症。在一些實施方案中，RT-PCR為定量RT-PCR。
在某些實施方案中，提供經標記之抗CD33抗體。標記包括(但不限於)直接偵測之標記或部分(諸如螢光、發色團、電子緻密、化學發光及放射性標記)以及間接偵測(例如，經由酶促反應或分子相互作用)之部分，諸如酶或配位體。例示性標記包括(但不限於)放射性同位素32P、14C、125I、3H及131I；螢光團諸如稀土螯合物或螢光素及其衍生物；若丹明及其衍生物；丹磺醯；傘形酮(umbelliferone)；螢光素酶，例如螢火蟲螢光素酶及細菌螢光素酶(美國專利第4,737,456號)；螢光素；2,3-二氫酞嗪二酮；辣根過氧化酶(HRP)；鹼性磷酸酶；β-半乳糖苷酶；葡萄糖澱粉酶；溶菌酶；糖氧化酶，例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶及葡萄糖-6-磷酸脫氫酶；雜環氧化酶諸如尿酸氧化酶及黃嘌呤氧化酶，其與採用過氧化氫以氧化染料前驅體之酶(諸如HRP、乳過氧化酶或微過氧化酶)偶合；生物素/抗生物素蛋白；自旋標記；噬菌體標記；穩定自由基；及其類似物。在另一實施方案中，標記為正電子發射體。正電子發射體包括(但不限於)68Ga、18F、64Cu、86Y、76Br、89Zr及124I。在一特定實施方案中，正電子發射體為89Zr。
F.醫藥調配物
藉由使具有所需純度之此類抗體或免疫結合物與一或多種視情況選用之醫藥學上可接受之載劑混合來製備如本文所述之抗CD33抗體或免疫結合物的醫藥調配物(Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.編(1980))，呈凍乾調配物或水溶液的形式。醫藥學上可接受之載劑在採用之劑量及濃度下對接受者通常為無毒的，並且包括(但不限於)：緩衝劑諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苄基氯化銨；氯化六甲雙銨；苯紮氯銨；苄索氯銨；苯酚、丁基或苄基醇；對 羥基苯甲酸烷基酯諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(小於約10個殘基)的多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸諸如甘胺酸、穀胺醯胺、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單糖、二糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑諸如EDTA；糖類諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽抗衡離子諸如鈉離子；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；及/或非離子型界面活性劑諸如聚乙二醇(PEG)。本文例示性的醫藥學上可接受之載劑進一步包括間質藥物分散劑諸如在中性條件下具活性之可溶性玻尿酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如，人類可溶性PH-20玻尿酸酶糖蛋白，諸如rHuPH20(HYLENEX®,Baxter International,Inc.)。某些例示性sHASEGP及使用方法(包括rHuPH20)描述於美國專利公開案第2005/0260186號及第2006/0104968號中。在一個態樣中，sHASEGP與一或多種其他糖胺聚糖酶(glycosaminoglycanase)諸如軟骨素酶組合。
例示性凍乾抗體或免疫結合物調配物描述於美國專利第6,267,958號中。水性抗體或免疫結合物調配物包括描述於美國專利第6,171,586號及第WO2006/044908號中之彼等調配物，後者之調配物包括組胺酸-乙酸鹽緩衝劑。
本文之調配物亦可含有經受治療之特定適應症所必需的一種以上活性成分，較佳地具有不會不利地互相影響之互補活性者。
活性成分亦可包埋於例如藉由凝聚技術或藉由界面聚合製備之微膠囊(例如分別為羥甲基纖維素或明膠-微膠囊及聚-(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊)中、包埋於膠體藥物傳遞系統(例如，脂質體、白蛋白微球、微乳劑、奈米顆粒及奈米膠囊)中或包埋於粗乳劑中。該等技術揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.編(1980)中。
可製備持續釋放調配物。持續釋放調配物之合適實例包括含有抗體或免疫結合物之固體疏水性聚合物之半透性基質，該等基質呈成形物品，例如膜或微膠囊的形式。
將用於活體內施用之調配物通常為無菌的。例如藉由經由無菌過濾膜過濾來容易地實現滅菌。
G.治療方法及組合物
本文提供之任何抗CD33抗體或免疫結合物可用於方法(例如治療方法)中。
在一個態樣中，將本文提供之抗CD33抗體或免疫結合物用於抑制CD33陽性細胞增殖之方法中，該方法包括在允許使抗CD33抗體或免疫結合物與細胞表面之CD33結合之條件下將該細胞暴露於該抗CD33抗體或免疫結合物中，從而抑制細胞增殖。在某些實施方案中，該方法為活體外或活體內方法。在其他實施方案中，該細胞為淋巴細胞、淋巴母細胞、單核細胞或骨髓單核細胞。
活體外細胞增殖之抑制可使用自Promega(Madison,WI)商購獲得之CellTiter-GloTM發光細胞活力檢定來檢定。該檢定基於所存在之ATP之定量(其為代謝活性細胞之指示)來確定培養物中存活細胞之數量。參見Crouch等，(1993)J.Immunol.Meth.160：81-88；美國專利第6602677號。該檢定可以96孔或384孔格式進行，使其適於自動高通量篩選(HTS)。參見Cree等，(1995)AntiCancer Drugs 6：398-404。該檢定程序涉及直接向培養的細胞中添加單一試劑(CellTiter-Glo®試劑)。此舉導致細胞溶解且產生由螢光素酶反應產生之發光信號。發光信號與存在之ATP量成比例，該存在之ATP量與存在於培養物中之活細胞數量成正比。可藉由光度計或CCD攝像成像裝置來記錄數據。發光輸出以相對光單位(RLU)表示。
在另一態樣中，提供用作藥物之抗CD33抗體或免疫結合物。在其 他態樣中，提供用於治療方法中之抗CD33抗體或免疫結合物。在某些實施方案中，提供用於治療CD33陽性癌症之抗CD33抗體或免疫結合物。在某些實施方案中，本發明提供用於治療患有CD33陽性癌症之個體之方法的抗CD33抗體或免疫結合物，該方法包括向該個體施用有效量之抗CD33抗體或免疫結合物。在一個此類實施方案中，該方法進一步包括向該個體施用有效量之至少一種例如如下所述之另外的治療劑。
在另一態樣中，本發明提供抗CD33抗體或免疫結合物於製造或製備藥物中之用途。在一個實施方案中，該藥物用於治療CD33陽性癌症。在另一實施方案中，該藥物用於治療CD33陽性癌症之方法中，該方法包括向患有CD33陽性癌症之個體施用有效量之藥物。在一個此類實施方案中，該方法進一步包括向該個體施用有效量之至少一種例如如下所述之另外的治療劑。
在另一態樣中，本發明提供治療CD33陽性癌症之方法。在一個實施方案中，該方法包括向患有該種CD33陽性癌症之個體施用有效量之抗CD33抗體或免疫結合物。在一個此類實施方案中，該方法進一步包括向該個體施用有效量之至少一種例如如下所述之另外的治療劑。
根據任何上述實施方案之CD33陽性癌症可為例如CD33陽性AML、CD33陽性CML、CD33陽性MDS、CD33陽性慢性骨髓單核細胞性白血病、CD33陽性APL、CD33陽性慢性骨髓增生性病症、CD33陽性血小板性白血病、CD33陽性前B-ALL、CD33陽性前T-ALL、CD33陽性多發性骨髓瘤、CD33陽性肥大細胞疾病、CD33陽性肥大細胞白血病、CD33陽性肥大細胞肉瘤、CD33陽性骨髓肉瘤、CD33陽性淋巴性白血病及CD33陽性未分化型白血病。在一些實施方案中，CD33陽性癌症為接收抗CD33免疫組織化學(IHC)或原位雜交(ISH)評分大於「0」之癌症，其對應於在本文實施例B中所述之條件下在>90%之腫瘤 細胞中非常弱之染色或無染色。在另一實施方案中，CD33陽性癌症以1+、2+或3+等級表現CD33，如在本文實施例B中所述之條件下所定義。在一些實施方案中，CD33陽性癌症為根據偵測CD33 mRNA之逆轉錄酶PCR(RT-PCR)檢定表現CD33之癌症。在一些實施方案中，RT-PCR為定量RT-PCR。
根據任何上述實施方案之「個體」可為人類。
在另一態樣中，本發明提供包含本文提供之例如用於任何上述治療方法之任何抗CD33抗體或免疫結合物的醫藥調配物。在一個實施方案中，醫藥調配物包含本文提供之任何抗CD33抗體或免疫結合物及醫藥學上可接受之載劑。在另一實施方案中，醫藥調配物包含本文提供之任何抗CD33抗體或免疫結合物及至少一種例如如下所述之另外的治療劑。
本發明之抗體或免疫結合物在療法中可單獨使用或與其他藥劑組合使用。例如，本發明之抗體或免疫結合物可與至少一種另外的治療劑共同施用。
上述此類組合療法涵蓋組合施用(其中兩種或更多種治療劑包括於相同或獨立之調配物中)及獨立施用，在此情況下，本發明之抗體或免疫結合物之施用可以發生在另外的治療劑及/或佐劑之施用之前、同時及/或之後。本發明之抗體或免疫結合物亦可與放射療法組合使用。
本發明之抗體或免疫結合物(及任何另外的治療劑)可藉由任何合適方式施用，包括非經腸、肺內及鼻內，並且必要時為進行局部治療，則病灶內施用。非經腸輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下施用。可以藉由任何合適途徑，例如藉由注射(諸如靜脈內或皮下注射)來給藥，其部分地取決於施用為短暫的或長期的。本文涵蓋各種給藥方案，包括(但不限於)在各種時間點單次或多次施用、推注施用及脈衝輸注。
本發明之抗體或免疫結合物可以與良好的醫學實踐一致之方式調配、給藥及施用。在此情形下考慮之因素包括受治療之特定病症、受治療之特定哺乳動物、個體患者之臨床病狀、病症之起因、藥劑之傳遞部位、施用方法、施用時程以及醫學專業人員已知之其他因素。抗體或免疫結合物無需但視情況與一或多種目前用於預防或治療所討論之病症之藥劑一起調配。該等其他藥劑之有效量取決於存在於調配物中之抗體或免疫結合物之量、病症或治療之類型及上文所討論之其他因素。通常以相同的劑量及用如本文所述之施用途徑，或約1%至99%的本文所述之劑量，或以由經驗上/臨床上確定為適當的任何劑量及任何途徑來使用此等藥劑。
對於疾病之預防或治療，本發明之抗體或免疫結合物之適當劑量(當單獨使用或與一或多種其他另外的治療劑組合使用時)將取決於待治療之疾病類型、抗體或免疫結合物之類型、疾病之嚴重程度及進展、是否施用抗體或免疫結合物用於預防或治療目的、先前療法、患者之臨床病史及對抗體或免疫結合物之反應以及主治醫師之判斷。同時或藉由一系列治療將抗體或免疫結合物適當地施用於患者。根據疾病之類型及嚴重程度，約1μg/kg至15mg/kg(例如0.1mg/kg至10mg/kg)之抗體或免疫結合物可為施用於患者之初始候選劑量，例如無論是否藉由一次或多次分開施用或者藉由連續輸注。一種典型的日劑量範圍可為約1μg/kg至100mg/kg或更多，取決於上文提及之因素。對於數天或更長時間內之重複施用(取決於病狀)，將通常維持治療直至疾病症狀出現所需的抑制。抗體或免疫結合物之一種例示性劑量範圍將為約0.05mg/kg至約10mg/kg。因此，約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg(或其任何組合)之一或多種劑量可施用於患者。此類劑量可間歇施用，例如每週或每三週一次(例如以使患者接受約2至約20或例如約六個劑量之抗體)。可施用初始較高之裝載劑量，接著為一或多 個較低劑量。然而，其他給藥方案可為有用的。藉由習知技術及檢定容易監測此療法之進程。
應理解，可使用本發明之免疫結合物及抗CD33抗體進行任何上述調配或治療方法。
H.製品
在本發明之另一態樣中，提供含有用於治療、預防及/或診斷上述病症之物質的製品。該製品包含容器及在該容器上或與該容器相關聯之標簽或包裝插頁。合適的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。容器可由多種材料(諸如玻璃或塑膠)形成。該容器裝有自身或與另一種組合物組合以有效治療、預防及/或診斷病症之組合物並且可具有無菌接入口(例如，該容器可為具有皮下注射針頭可刺穿之塞子之靜脈內溶液袋或小瓶)。組合物中至少一種活性劑為本發明之抗體或免疫結合物。標簽或包裝插頁指示該組合物用於治療所選病狀。此外，製品可包含(a)第一容器及其中包含之組合物，其中該組合物包含本發明之抗體或免疫結合物；及(b)第二容器及其中包含之組合物，其中該組合物包含其他細胞毒性劑或另外的治療劑。本發明之此實施方案中之製品可進一步包含包裝插頁，其指示該等組合物可用於治療特定病狀。或者或另外，製品可進一步包含第二(或第三)容器，其包含醫藥學上可接受之緩衝劑，諸如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)或右旋糖溶液。其可進一步包括自商業及使用者觀點來看所需之其他材料，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針頭及注射器。
III.實施例
下面為本發明之方法及組合物之實施例。應理解，考慮到上文提供之一般性描述，可實施各種其他實施方案。
實施例1
A.單株抗體產生
使用下列程序藉由用與表現於哺乳動物表現系統中之C端標簽(RADYKDDDDK)融合之重組hu及cyno CD33細胞外域(ECD，huCD33之胺基酸1-262及cynoCD33之胺基酸1-257)使動物免疫來生成針對人類(hu)及食蟹猴(cyno)CD33之單株抗體。
藉由ELISA及FACS使陽性純系擴增且針對與huCD33及cynoCD33之結合再次篩選。鑒別九種純系：33H4、33F9、27C6、2E4、7A1、9C2、9C3、10D3及15G15，其藉由螢光活化細胞分選(FACS)與表現重組人類及食蟹猴CD33之穩定細胞株以及與表現於急性骨髓白血病腫瘤細胞株上之腫瘤源CD33強烈反應。變異體由9C3及15G15構成，包括9C3.2、9C3.3、9C3.4、15G15.33、15G15.37、15G15.83、15G15.88、15G15.7、15G15.17、15G15.30、15G15.31、15G15.39及15G15.84。在一些情況下，藉由Biacore測定單價結合親和力(資料未示出)。
分離重鏈及輕鏈之序列見於圖1-4及下文序列表中。殘基編號係根據Kabat等，Sequences of proteins of immunological interest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)。
B.物種交叉反應性
測試單株抗體以確定其是否與cynoCD33(其與huCD33蛋白具86.3%一致性)交叉反應。藉由FACS使用穩定表現人類或食蟹猴CD33之HEK293AD細胞來測定物種特異性。將細胞與1μg/ml之抗體純系在4℃下一起培育40分鐘，洗滌且用山羊-抗mIgG(H+L)F(ab')2-488或山羊-抗hIgG(H+L)F(ab')2-488二次抗體偵測。圖5A-D顯示6種抗體(7A1、9C2、10D3、15G15、27C6及33F9)識別重組hu及cynoCD33，而兩種抗體(33H4及23E4)具有與僅結合於人類CD33之MY9.6類似的結合概況。藉由對來自食蟹猴(產地毛里求斯)之血液之FACS分析來進一 步證實與食蟹猴CD33之交叉反應性。圖7A-D顯示7A1、9C2、10D3、15G15、33F9及27C6將食蟹猴CD14+/CD33+骨髓細胞染色，但33H4、23E4或MY9.6並未如此。亦對於人類CD14+/CD33+骨髓細胞證實抗體結合。腫瘤細胞有可能改變蛋白質之糖基化模式，例如，以避免免疫反應，從而確保吾等之抗體將不受此修飾影響，對AML腫瘤細胞株Molm13、HL-60、EOL-1、THP-1及U937以及來自確診AML病例之患者之骨髓進行FACS。圖6A-D顯示結合於Molm-13或陽性AML樣本之抗體的代表性實例。此等結果表明結合於CD33之抗體不受AML腫瘤細胞株或患者樣本中可見之糖基化改變的影響。
C.單株抗體抗原決定基分組
使用Octet RED384儀器(ForteBio)進行抗CD33抗體之抗原決定基框併(binning)。將生物素標記之CD33以10μg/ml捕獲於抗生蛋白鏈菌素生物感測器上持續60秒。藉由添加50μg/ml持續600秒使第一抗體之結合達到飽和。將相同生物感測器浸於5μg/ml之競爭抗體中並且測量結合持續300秒。在飽和量之第一抗體存在下，第二抗體不能結合，指示兩種抗體處於相同抗原決定基框併中；在飽和量之第一抗體存在下，第二抗體成功結合，指示兩種抗體處於不同抗原決定基框併中。使用My9.6作為第一飽和抗體，接著競爭抗體27C6、23E4、33H4、33F9、9C2、7A1、10D3及15G15。後續實驗使用抗體33H4、27C6、23E4、7A1、33F9及15G15作為飽和抗體以完成且證實分析(資料未示出)。
圖8A-C顯示CD33之抗體之抗原決定基框併，且顯示33F9、7A1、9C2、10D3及15G15與MY9.6框併，但27C6、23E4及33H4並未如此。亦確定27C6具有不同於所有其他抗體之抗原決定基，並且23E4及33H4共用重疊之抗原決定基(資料未示出)。與cyno-CD33之抗原決定基框併顯示7A1、9C2、10D3及15G15框併在一起，但此框併不包括27C6及33F9(圖8D)。此表明27C6及33F9結合於cyno-CD33上之不同抗原決定基。 資料亦揭示27C6及33F9不框併在一起(資料未示出)。儘管人類框併顯示MY9.6與7A1、9C2、10D3、15G15及33F9之重疊，但FACS資料顯示MY9.6、23E4及33H4不結合cyno-CD33，因此針對CD33之MY9.6之抗原決定基可能不與7A1、9C2、10D3、15G15及33F9一致。
亦使用基於細胞之競爭結合FACS檢定來測定抗原決定基分組。將表現重組人類CD33之HEK293AD細胞與Dylight-650標記之示蹤抗體(0.3-1μg/ml)及50-100倍過量之未經標記之競爭抗體同時培育。當示蹤劑由未經標記之抗體置換時，發生競爭，其指示抗體結合於CD33上之相同或類似區域，此應發生在使用相同抗體作為示蹤劑及競爭劑時。當示蹤劑未經不同的未經標記之抗體置換時，該未經標記之抗體結合於CD33中之不同區域。
圖9顯示在50倍過量之示蹤劑下使用15G15 Dylight-650示蹤抗體與未經標記之競爭抗體之代表性實例。如關於Octet資料所觀察，27C6不與15G15競爭。三種其他抗體(9C2、33F9及10D3)顯示競爭，但未達到未經標記之15G15可見之程度，表明其抗原決定基可為相似的，但不相同。
如圖10A-B中所示，顯示9C3結合於hu及cynoCD33。然而，競爭抗體15G15不能置換9C3標記之示蹤抗體，表明其結合於huCD33上之不同區域(圖10C)。9C3之物理表徵鑒別在重鏈中CDR2與CDR3之間在位置69(kabat #)處之非典型N連接之糖基化位點。使用定點誘變來移除該位點並且圖11藉由FACS及Scatchard分析顯示與CD33之結合改進(表2)。
為測定CD33抗體是否結合於CD33之Ig樣V或Ig樣C結構域，使用標準分子選殖方法將嵌合Ig樣結構域膜蛋白工程改造，其含有連接於不相關Ig樣C(包括TM/CD；構築體-88B)之CD33 Ig樣V(M17-V136，包括間隔基H137-H143)或連接於CD33 Ig樣C(R144-Q228，包括TM/CD L229)之不相關Ig樣V(構築體-88)。參見圖12A。將N端或細胞質標簽連接以證實用此等構築體轉染之293細胞表現細胞膜上之蛋白質(資料未示出)。簡言之，使用polyfect用構築體88及88B短暫轉染293細胞。在48小時後，在4℃下將細胞用1-10μg/ml之Dylight-650標記之7A1、9C2、10D3或15G15染色30-40分鐘，洗滌且用BD FACS calibur分析。
在圖12D中，抗體7A1、9C2、10D3及15G5顯示顯著結合於構築體88B中之CD33 Ig樣V，相比於同種型對照物多至少100倍。然而，未結合於構築體88中之CD33 Ig樣C(圖12C)，實際上結合等效於模擬轉染細胞(圖12B)。藉由不相關Ig樣V結構域之抗體偵測構築體88中之陽性信號，證實該構築體表現於細胞表面上(資料未示出)。
CD33之Ig樣V結構域含有兩個N連接之糖基化位點(NXS/T)及在CD33之位置69處之SNP(R69G；r2455069)，其可影響抗體與CD33之結合。為測試兩個N連接之糖基化位點之作用，使用標準位點特異性誘變(QuikChange II,Agilent Technologies)將位置S102及S115處之絲胺酸殘基用丙胺酸取代，以分別降低或消除全長huCD33膜構築體之Ig樣V結構域中之位置N100及N113處之N連接之糖基化。構築體含有單一突變(S115A)或雙重突變(S102A/S115A)並且使用Polyfect(Promega)藉由短暫轉染表現於293AD細胞中(圖13A)。48小時後使用1μg/ml之結合於Dylight-650之抗體進行FACS。圖13B顯示代表性實例純系15G15之結果，其展現顯著結合於表現huCD33之部分或完全去糖基化Ig樣V形式之短暫轉染細胞，如由相比於同種型對照物18-44倍高之螢光所示。實驗顯示抗體之結合獨立於Ig樣V結構域中之N連接之糖基化。(使用穩定表現高程度之rhCD33之HEK 293AD作為陽性對照染色並且不適於作為短暫轉染細胞表現之定量的參考。)
藉由使用標準位點特異性誘變且表現如上所述之293AD細胞中之R69G變異體之huCD33中的胺基酸位置編號69之甘胺酸及精胺酸之作 用來研究SNP(R69G)對於抗體與Ig樣V結構域之結合的影響(圖14A)。
圖14B-C顯示所測試之抗體結合於R69 CD33及G69 CD33，並且在huCD33之兩種形式之間的結合相似(資料未示出)。
D.抗體親和力
遵循標準程序(Holmes等，Science 256：1205-1210(1992))進行Scatchard分析來測定包括33H4、33F9、27C6、2E4、7A1、9C2、9C3、9C3.2、9C3.3、9C3.4、10D3、15G15、15G15.33、15G15.83及15G15.88之抗體之相對結合親和力。
使用間接Iodogen方法用[I125]標記抗CD33抗體。使用NAP-5管柱(GE Healthcare)藉由凝膠過濾自游離125I-Na純化[I125]標記之抗CD33抗體；經純化之碘化抗CD33抗體具有8-10μCi/μg之特異性活性範圍。將50μL體積之含有固定濃度之[I125]標記之抗體及遞減濃度之連續稀釋之未經標記之抗體的競爭檢定混合物置於96孔板中。在37℃下在5% CO2中將穩定表現重組hu或cynoCD33之HEK293AD細胞或表現內源性CD33之Molm-13腫瘤細胞在生長培養基中培養。使用Sigma細胞解離溶液使細胞脫離燒瓶且用結合緩衝液洗滌，該結合緩衝液由含1%牛血清白蛋白(BSA)、300mM人類IgG及0.1%疊氮化鈉之杜貝卡氏改良伊格爾培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium，DMEM)組成。將經洗滌細胞於0.2mL結合緩衝液中以100,000個細胞之密度添加至96孔板。各孔中[I125]標記之抗體之最終濃度為約250pM。經由10次2倍稀釋步驟，競爭檢定中未經標記之抗體之最終濃度範圍為1000nM至0nM僅緩衝液檢定。一式三份地進行競爭檢定。在室溫下將競爭檢定培育2小時。在2小時培育後，將競爭檢定轉移至Millipore Multiscreen過濾板(Billerica,MA)且用結合緩衝液洗滌4次以自結合之[I125]標記抗體分離游離物。利用Wallac Wizard 1470 γ計數器(PerkinElmer Life and Analytical Sciences Inc.；Wellesley,MA)對過濾器進行計數。使用 NewLigand軟體(Genentech)評估結合數據，其使用Munson及Robard之擬合算法以測定抗體之結合親和力(Munson及Robard 1980)。
表2顯示與由HEK293AD CD33穩定細胞表現之重組hu及cynoCD33以及與Molm-13細胞之親和力(kD範圍為0.2-23nM)。
E.抗CD33抗體之內化
ADC靶標之一個所需屬性是能夠將抗體內化至細胞中之降解隔室中。為確定在結合後抗CD33抗體是否得到內化，在37℃下將HL-60或Molm-13細胞與0.3mg/ml hIgG在RPMI培養基中預培育2小時以降低與FcR之非特異性結合，隨後在細胞培養物處理之4孔腔載玻片(Nalge Nunc International)中接種。在黑暗中將最終濃度為1μg/mL之直接結合於Dylight 488之抗體與hIgG阻斷細胞在冰上一起培育30分鐘。立即將細胞成像以顯示膜染色(T0)並且利用Leica SP5共焦顯微鏡在37℃下經10小時時期用縮時攝影追蹤。如圖15A中所示，代表性實例15G15在30分鐘內由HL-60細胞快速內化。使用量測抗體藥物結合物殺傷靶細胞 之能力的基於細胞之活體外檢定來證實15G15定位至溶酶體。簡言之，在37℃下將Molm-13或EOL-1細胞與含有0.3mg/ml低內毒素hIgG之RPMI一起預培育2小時以降低與FcR之非特異性結合，並且以8,000-16,000個細胞/孔之密度塗於96孔板中。將測試物品同種型-L-D#1或15G15.33 L-D#1添加至細胞，最終濃度範圍為0-1000ng/ml(在3倍步驟中)且在37℃與5% CO2下培育約60小時。使用CellTiter-Glo(Promega,Inc)及Envision 2012 Multilabel讀取器(Perkin Elmer)測定細胞活力。圖15B顯示用15G15.33-L-D#1 ADC相比於同種型ADC將靶細胞特異性殺傷及完全切除(EC50分別為6及63ng/ml)，因此證實溶酶體中之ADC轉運及加工。兩種ADC皆具有類似的藥物裝載量。
F.抗CD33抗體藥物結合物之產生
對於較大規模之抗體產生，在CHO細胞中產生抗體。將編碼VL及VH之載體轉染於CHO細胞中並且藉由蛋白A親和力層析法自細胞培養基純化IgG。
藉由將具有重鏈A118C突變之15G15(15G15 thio-HC A118C)及具有重鏈A118C突變之15G15.33(15G15.33 thio-HC A118C)或具有輕鏈V205C突變之15G15.33(15G15.33 thio-LC V205C)與藥物連接子部分單甲基-吡啶基二硫化物、N10連接之吡咯并苯并二氮呯(參見圖16；L-D #1)或具有縮醛連接子-PNU之順丁烯二醯亞胺(參見圖17；L-D #2)結合來產生抗CD33抗體-藥物結合物(ADC)。因為抗體15G15及15G15.33中之初始分離之工程改造之半胱胺酸殘基以與細胞硫醇(例如，谷胱甘肽)之混合二硫化物形式存在並且因此不可用於結合。此等抗體之部分還原(例如，用DTT)、純化及用去氫抗壞血酸(DHAA)再次氧化，向抗體提供可用於結合之游離半胱胺酸巰基，如先前例如Junutula等，(2008)Nat.Biotechnol.26：925-932及US 2011/0301334中所述。簡言之，將抗體與藥物-連接子部分組合以允許藥物-連接子部分結合於抗 體之游離半胱胺酸殘基。數小時後，將ADC純化。測定各ADC之藥物裝載量(每個抗體藥物部分之平均數)並且對於PBD結合物而言其為1.4-1.6以及對於PNU結合物而言其為1.3。
G.抗CD33抗體藥物結合物於HL-60及EOL-1人類急性骨髓白血病細胞株異種移植物模型中之功效
使用人類急性骨髓白血病異種移植物模型HL-60(AML亞型M2)及EOL-1(AML亞型M4a)研究抗CD33 ADC之功效。由於其遺傳學及分子異常，兩者皆產生中度至不良預後。雌性C.B-17 SCID小鼠(Charles River Laboratories；Hollister,CA)各自在腰窩區域皮下接種五百萬個HL-60或EOL-1細胞。當異種移植腫瘤達到100-300mm3之平均腫瘤體積時(稱為第0天)，將動物隨機分配至各7-10隻小鼠之組中並且接受ADC之單一靜脈內注射。在施用ADC之前約4小時，向動物經腹膜內給與過量(30mg/kg)抗gD對照抗體以阻斷腫瘤細胞上之可能的非特異性抗體結合位點。在整個研究中每週1-2次量測小鼠之腫瘤及體重。當體重減輕大於其起始體重之20%時，立即對小鼠實施安樂死。在腫瘤達到3000mm3或顯示即將潰爛徵象之前，對所有動物實施安樂死。藉由在注射後第1、7及14天之PK出血證實抗體之存在。
如圖16A-B中所示，在HL-60及EOL-1模型中在1mg/kg或20μg/m2劑量之15G15.33-L-D#1下實現基本上腫瘤生長抑制，而較低劑量導致相比於陰性對照抗體-藥物結合物延遲之腫瘤生長。如圖17中所示，發現單一11.9mg/kg劑量之15G15 L-D #2延遲HL-60模型中之腫瘤生長。
儘管為了清楚理解已經由說明及實施例詳細地描述前述發明，但本說明書及實施例不應理解為限制本發明之範疇。本文引用之所有專利及科學文獻之揭示內容係以全文引用之方式明確併入。
序列表
<110> 美商建南德克公司
<120> 抗CD33抗體及免疫結合物
<130> GENE-33488/WO-1/ORD
<150> US 61/916,087
<151> 2013-12-13
<160> 121
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 364
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
<210> 2
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 2
<210> 3
<211> 84
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 3
<210> 4
<211> 359
<212> PRT
<213> 食蟹猴
<400> 4
<210> 5
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 5
<210> 6
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 6
<210> 7
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 7
<210> 8
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
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<221> MISC_FEATURE
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<212> PRT
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<221> MISC_FEATURE
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<223> F、L或I
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<223> T、S、L、Y或I
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<221> MISC_FEATURE
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<223> A、D或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> D、N或Y
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<212> PRT
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<223> 合成
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> L或W
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> A或L
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<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> V或A
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 合成
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> S或N
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<223> V或I
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<212> PRT
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<223> G或E
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<212> PRT
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<223> 合成
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<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> V或A
<400> 117
<210> 118
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> A或K
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> V或I
<400> 118
<210> 119
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> G或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> I或V
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> F、L或I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> T、L、Y或I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> A、D或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> N或Y
<400> 119
<210> 120
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 120
<210> 121
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 121

Claims (51)

  1. 一種結合於CD33之經分離之抗體，其中該抗體包含：(a)包含SEQ ID NO：112之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：113之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：114之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：111之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
  2. 如請求項1之抗體，其中該抗體包含：(a)包含SEQ ID NO：115之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：116之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：117之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
  3. 如請求項1之抗體，其中該抗體包含：(a)包含SEQ ID NO：118之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：119之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：111之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
  4. 如請求項1之抗體，其中該抗體包含：(a)包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：23或SEQ ID NO：30之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34或SEQ ID NO：35之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28或SEQ ID NO：29之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
  5. 如請求項1之抗體，其中該抗體包含：(i)(a)包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(ii)(a)包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：13之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(iii)(a)包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(iv)(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(v)(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：26之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(vi)(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：27之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(vii)(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：28之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(viii)(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：29之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(ix)(a)包含SEQ ID NO：30之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(x)(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：31之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基 酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(xi)(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：32之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(xii)(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：33之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；(xiii)(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：34之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3；或(xiv)(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：35之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
  6. 如前述請求項中任一項之抗體，其中該抗體包含：a)包含SEQ ID NO：66之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：65之序列之輕鏈可變區； b)包含SEQ ID NO：68之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：67之序列之輕鏈可變區；c)包含SEQ ID NO：78之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：77之序列之輕鏈可變區；d)包含SEQ ID NO：80之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：79之序列之輕鏈可變區；e)包含SEQ ID NO：82之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：81之序列之輕鏈可變區；f)包含SEQ ID NO：84之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：83之序列之輕鏈可變區；g)包含SEQ ID NO：86之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：85之序列之輕鏈可變區；h)包含SEQ ID NO：88之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：87之序列之輕鏈可變區；i)包含SEQ ID NO：90之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：89之序列之輕鏈可變區；j)包含SEQ ID NO：92之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：91之序列之輕鏈可變區；k)包含SEQ ID NO：94之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：93之序列之輕鏈可變區；l)包含SEQ ID NO：96之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：95之序列之輕鏈可變區；m)包含SEQ ID NO：98之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：97之序列之輕鏈可變區；或n)包含SEQ ID NO：100之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：99之序列之輕鏈可變區。
  7. 如前述請求項中任一項之抗體，其中該抗體具有下列特徵中之一或多者：a)結合於重組人類CD33；b)結合於重組食蟹猴CD33；c)結合於人類外周血單核細胞(PBMC)表面上之內源性CD33；d)結合於食蟹猴PBMC表面上之內源性CD33；e)結合於癌細胞表面上之內源性CD33；f)結合於AML癌細胞表面上之內源性CD33；g)結合於Molm-13細胞表面上之內源性CD33；h)結合於包含R69G突變之CD33；i)結合於CD33 Ig V結構域；j)結合於在N100缺乏N連接之糖基化之CD33；k)結合於在N113缺乏N連接之糖基化之CD33；l)結合於包含S102A突變之CD33；m)結合於包含S115A突變之CD33；n)不結合CD33 Ig C2結構域；o)與My9.6抗體競爭人類CD33結合；p)與抗體33H4競爭人類CD33結合；q)與抗體23E4競爭人類CD33結合；r)以小於15nM、小於10nM、小於7nM、小於5nM或小於3nM之Kd結合於內源性人類CD33；s)以小於10nM、小於7nM、小於5nM或小於3nM之Kd結合於重組人類CD33；及/或t)以小於10nM、小於7nM、小於5nM或小於3nM、小於2nM或小於1nM之Kd結合於重組食蟹猴CD33。
  8. 一種結合於CD33之經分離之抗體，其中該抗體包含：(a)包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列之HVR-L3。
  9. 如請求項8之經分離之抗體，其中該抗體包含：a)包含SEQ ID NO：70之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：69之序列之輕鏈可變區；b)包含SEQ ID NO：72之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：71之序列之輕鏈可變區；c)包含SEQ ID NO：74之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：73之序列之輕鏈可變區；或d)包含SEQ ID NO：76之序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：75之序列之輕鏈可變區。
  10. 如請求項8或9之經分離之抗體，其中該抗體具有下列特徵中之一或多者：a)結合於重組人類CD33；b)結合於重組食蟹猴CD33；c)結合於人類外周血單核細胞(PBMC)表面上之內源性CD33；d)以小於10nM、小於7nM、小於5nM、小於3nM、小於2nM或小於1nM之Kd結合於重組人類CD33；及/或e)以小於10nM、小於7nM、小於5nM、小於3nM、小於2nM或小於1nM之Kd結合於重組食蟹猴CD33。
  11. 如前述請求項中任一項之抗體，其為單株抗體。
  12. 如前述請求項中任一項之抗體，其為人類或嵌合抗體。
  13. 如前述請求項中任一項之抗體，其為結合CD33之抗體片段。
  14. 如前述請求項中任一項之抗體，其中CD33為包含SEQ ID NO：1之胺基酸18至364之人類CD33。
  15. 一種結合於CD33之經分離之抗體，其中該抗體包含：(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
  16. 一種結合於CD33之經分離之抗體，其中該抗體包含：(a)包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：26之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。
  17. 一種結合於CD33之經分離之抗體，其中該抗體包含：(a)包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列之HVR-L3。
  18. 如前述請求項中任一項之抗體，其為IgG1、IgG2a或IgG2b抗體。
  19. 一種分離核酸，其編碼前述請求項中任一項之抗體。
  20. 一種宿主細胞，其包含如請求項19之核酸。
  21. 一種產生抗體之方法，其包括培養如請求項20之宿主細胞以便產 生該抗體。
  22. 一種免疫結合物，其包含如請求項1至18中任一項之抗體及細胞毒性劑。
  23. 如請求項22之免疫結合物，其具有式Ab-(L-D)p，其中：(a)Ab為如請求項1至15中任一項之抗體；(b)L為連接子；(c)D為細胞毒性劑；及(d)p在1-8範圍內。
  24. 如請求項23之免疫結合物，其中該細胞毒性劑選自類美登素、卡奇黴素、吡咯并苯并二氮呯及奈莫柔比星衍生物。
  25. 如請求項23之免疫結合物，其中D為式A之吡咯并苯并二氮呯： 其中虛線指示C1與C2或者C2與C3之間之雙鍵的視情況存在；R2獨立地選自H、OH、=O、=CH2、CN、R、OR、=CH-RD、=C(RD)2、O-SO2-R、CO2R及COR，且視情況進一步選自鹵基或二鹵基，其中RD獨立地選自R、CO2R、COR、CHO、CO2H及鹵基；R6及R9獨立地選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR'、NO2、Me3Sn及鹵基；R7獨立地選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR'、NO2、Me3Sn及鹵基；Q獨立地選自O、S及NH；R11為H或R，或者其中Q為O、SO3M，其中M為金屬陽離子；R及R'各自獨立地選自視情況經取代之C1-8烷基、C3-8雜環基及 C5-20芳基，並且視情況關於基團NRR'，R及R'與其所連接之氮原子一起形成視情況經取代之4員、5員、6員或7員雜環；R12、R16、R19及R17係分別如關於R2、R6、R9及R7所定義；R"為C3-12伸烷基，該鏈可間雜有一或多個視情況經取代之雜原子及/或芳族環；及X及X'獨立地選自O、S及N(H)。
  26. 如請求項25之免疫結合物，其中D具有以下結構： 其中n為0或1。
  27. 如請求項23之免疫結合物，其中D為奈莫柔比星衍生物。
  28. 如請求項27之免疫結合物，其中D具有選自以下之結構：
  29. 如請求項23至28中任一項之免疫結合物，其中該連接子可由蛋白酶裂解。
  30. 如請求項23至28中任一項之免疫結合物，其中該連接子為酸不穩定的。
  31. 如請求項30之免疫結合物，其中該連接子包含腙。
  32. 如請求項28之免疫結合物，其具有選自以下之式： 及
  33. 如請求項23至32中任一項之免疫結合物，其中p在2-5範圍內。
  34. 如請求項23至33中任一項之免疫結合物，其包含如請求項15至17中任一項之抗體。
  35. 一種醫藥調配物，其包含如請求項23至34中任一項之免疫結合物及醫藥學上可接受之載劑。
  36. 如請求項39之醫藥調配物，其進一步包含另外的治療劑。
  37. 一種治療具有CD33陽性癌症之個體的方法，該方法包括向該個體施用有效量之如請求項23至34中任一項之免疫結合物或如請求項35之醫藥調配物。
  38. 如請求項37之方法，其中該CD33陽性癌症為AML。
  39. 如請求項37或38之方法，其進一步包括向該個體施用另外的治療劑。
  40. 一種抑制CD33陽性細胞之增殖的方法，該方法包括在允許免疫結合物與該細胞表面上之CD33結合之條件下使該細胞暴露於如請求項23至34中任一項之免疫結合物，從而抑制該細胞之增殖。
  41. 如請求項40之方法，其中該細胞為AML癌細胞。
  42. 如請求項1至18中任一項之抗體，其結合於標記。
  43. 如請求項42之抗體，其中該標記為正電子發射體。
  44. 如請求項43之抗體，其中該正電子發射體為89Zr。
  45. 一種偵測生物樣本中之人類CD33之方法，其包括在允許抗CD33抗體與天然存在之人類CD33結合之條件下使該生物樣本與如請求項1至18中任一項之抗CD33抗體接觸，並且偵測在該生物樣本中是否形成該抗CD33抗體與天然存在之人類CD33之間的複合物。
  46. 如請求項45之方法，其中該抗CD33抗體為如請求項15至17中任一項之抗體。
  47. 如請求項46之方法，其中該生物樣本為AML子宮內膜癌樣本。
  48. 一種用於偵測CD33陽性癌症之方法，其包括(i)向具有或疑似具有CD33陽性癌症之受試者施用經標記之抗CD33抗體，其中該經標記之抗CD33抗體包含如請求項1至18中任一項之抗CD33抗體，及(ii)偵測該受試者中之該經標記之抗CD33抗體，其中該經標記之抗CD33抗體之偵測指示該受試者中存在CD33陽性癌症。
  49. 如請求項48之方法，其中該經標記之抗CD33抗體為經標記之如請求項8或14之抗體。
  50. 如請求項48或49之方法，其中該經標記之抗CD33抗體包含結合於正電子發射體之抗CD33抗體。
  51. 如請求項50之方法，其中該正電子發射體為89Zr。
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