SU654171A3 - Способ получени 7- -/-/- -амино- -(п-оксифенилацетамидо)-дезацетоксицефалоспорановой кислоты, или ее гидрата или ее соли - Google Patents

Claims (2)

1. 36 человека. Также приготавливают стандартные растворы с концентрацией 0,5 мг/мл 7-D -(-)- с -амино-сч -(п -оксифенилацет амвдо)дезацетоксицефалоспорановой кислоты (п -оксицефалоксин) как в физио- логическом солевом растворе, так и в сыворотке человека. ЕЗсе приготовленные растворы помещают в термостат при , встр хивают и через 0,2, 4,8 и 24 ч отбирают пробы на анализ. Растворы (примерно 5 мкл .на полоскз наливают на ватман №1 1,27 см (0,5 дюйма),полоски хроматографической бумагиЗ, которые сушат и помещают в систему растворителей, содержащую 80 об.ч. бутилацетата, 15 об.ч. н-бутилового спирта, 4О об. ч. уксусной кислоты и 24 об.ч. воды. Затем Полоски дважды хроматографируют на пластинах, засе нных BaciE.Ei.es s-ubt-it. при рН 6,0. Бисхроматограммы указывают на то, :что п-ацетоксицефалоксин быстро гидролизуетс  до п - оксицефапоксина в сьторот- ке крови человека, но  вл етс  стабильным в физиологическом солевом растворе П р и м е р
2. 2. Энзиматический гидролиз п-ацетоксицефапексина в л-окси- цефалексин (RN -1394 в В1 -578 ). Дл  реакции готов т 10 г обезжиренных отрубей ShiBon 0,5 г RN - 1394 и воду до объема 1 п. Эту смесь помещают в термостат при с перемешиванием и реакцию проспеживают хроматографически. 5 мп смес нанос т в виде П51тнышка на полудюймовы полоски хроматографической бумаги через 1,2,3 и 4 ч. Полоски про вл ют в системе растворителей, содержащей ВО об. ч. бутилацетата , 15 о6.ч. н-бутипового спирта, 40 об.ч. уксусной кислоты и 24 об.ч. вопы. Про вленные полосы дважды хроматографируют на BaciCCus SufatiEis высе нную rip рН 6,0 на; агаровых пластинах, которые выдерживают в термостате при в течение ночи. На хроматограмме также получают стандартную линию т&Ь -578 р дом с реакционными образцам Анали nohyneHHbril измерением зон BL -578 на хроматограмме, показьтает, что реакци  завершилась. Проба BL-578 в 4-часовом образце дает 440 мг продукта, теоретический выход составл ет 45О мгпОксицефалексина . Через 4 ч реакционную смесь центрифугируют и довод т рН сло  до 4,0 с помощью нее . Проба реакционной смеси показьтает, что это 48О мгВЬ -578, 714 который отдел ют, лиофилизируют и термостатируют . Выделение BL -578. Все 2,8 г лиофилизата суспендируют в 75 мл воды при быстром перемешивании, одновременно добавл ют в течение 2 мин 15О мл ацетона.. Смесь перемешивают в течение 2О мин и образовавшийс  осадок отфильтровывают через складчатый бумажный фильтр. 2 или 3 капли насьпденного водного раствора хлористого бари  добавл ют к фильтрату при тщательном перемешивании, чтобы завершить осаждение протеинов. Суспензию снова отфильтровьгаают через такой же фильтр, как упоминалось раньше, и фильтрат концентрируют в вакууме при до объема около 25 мл. Этот раствор снова отфильтровьтают, чтобы удалить небольшое количество осадка, и фильтрат концентрируют до объема около 2 мл при под уменьшенным давлением. К это ,му концентрату добавл ют 10 мл ДМФА (диметилформамид) -и при царапании и перемешивании начинают кристалтгазацию. Смесь перемешивают в течение 2О мин и продукт отфильтровывают, промывают 3 раза по 2 мл ДМФА и 4 раза по 2Омл ацетона. Высушенный на воздухе продукт далее высушивают при давлении 1 мм рт. ст. над п тиокисью фосфора в течение 2 ч, чтобы получить 50О мг сопьвата ДМФА. ИК-спектр полностью соответствует требуемой структуре сольвата BL -578 с ДМФА. 5ОО мг полученного вещества перекристйппизовьшают путем перемешивани  в течение 5 мин в 2 мл воды с добавлением по капп м 6 мл ДМФА в течение 3 мин {кристаллизаци  начинаетс , когда добавлено около 3 мп ДМФА). Смесь перемешивают в течение 10 мин и фильтруют . Белые кристаллы- промьтают 3 раза (по 1 мл ДМФА) и 4 раза (по 10 мл) ацетоном. Продукт высушивают на воздухе и затем в вакууме над п тиокисью фосфора . Конечный вес после сушки в вакууме составл ет 370 мг (выход 74%). ИК- и ЯМР-спектры этого вещества полностью соответствуют спектрам ВЬ - 578, хот  обнаружено, что оно содержит некоторое количество бари . Чтобы попытатьс  удалить соли бари , указанную пробу перекристаллизовьтают следующим образом. 200 мг полученного BU - 578 раствор ют в 6 мл теплой (4О®С) воды, разбавл ют ацетонитрилом до точки помутнени  и через 10 мин филългруют. В фильтрат внос т затравку моногидрата Вь -578. После отстаивани  в течение 30 мин при 25-30 С и в течение 30 мин при кристаллы отфилы-ровывают , промывают ацетонитрилом и сушат на Воздухе. Выход 53 г. Аналитические данные. Данные ИКспектра перекристаллизованного BL -578, моногидрата, приведены в таблице. Спектр чистый, хорошо выраженный, идентичный эталону, ЯМР-спектр .хорошо выраженный и соответствует структура. Элементарный анализ перекристаллизо- ванного BL -578, моногидрата. Найаено,%: С 50,46; 50,18; 5О,36; Н 5,03; Н. 5,04; 4,96; 5,ОО; N 11,05; 11,27; 11,03; кристаппизационна  вода 5,21} Ва 0,11. Вычиспено,о: С 50,39; Н 5,ОЗ; N 11,02; кристаппизационна  вода 4,74. Температура разложени  (этанол ВЬ-578) образца 21lC, образца, полученного по предлагаемому способу и пе- рекристаплизованного, 2О8°С. Формула изобрет-ени  Способ получени  7-D -(-)-сСт мино-Ы- ( п -оксифенипацетамидо) дезацетоксицефапоспорановой киспоты или ее гидрата или ее соли, отличающийс  тем, что, с цепью увеличени  выхода целевого продукта, водный раствор 7-15„{ ) сз1-амино-с к -(п -ацетоксифенилацетамидо ) дезацетоксицефапоспорановой киспоты обрабатывают эстеразой, выбранной из группы, включающей сьгеоротку крови человека, сьторотку крови животного , пшеничные отруби, пшеничные за-. в зи и boci&Eus subt« is при рН 5,О7 ,5 и при концентрации 5-10 мг/мп эстеразы на .полный объем водного раствора с последующим выделе ием продуктов в свободном виде или в виде гидрата или соли. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1. Патент Швейцарии N9497463, кл. С 07 d 99/24, 15.10.70.