MXPA04003385A

MXPA04003385A - Derivados de 3-?4-substituido con heterociclilo)-pirrol-2-ilmetilidene?-2-indolinona como inhibidores de cinasa.

Info

Publication number: MXPA04003385A
Application number: MXPA04003385A
Authority: MX
Inventors: Matthew Mattson
Original assignee: Sugen Inc
Priority date: 2001-10-10
Filing date: 2002-10-10
Publication date: 2005-04-11
Also published as: US20030130235A1; CA2462950A1; WO2003031438A1; JP2005508953A; BR0213185A; US6642232B2; EP1434774A1

Abstract

La presente invencion se refiere a ciertos derivados de 3-[4- sustituido con heterociclilo)-pirrol-2-ilmetilidene]-2-indolinona que inhiben cinasas, en particular las VEGFR y/o PDGFR cinasas; tambien se describen composiciones farmaceuticas que comprenden estos compuestos, metodos para el tratamiento de enfermedades mediadas por cinasas utilizando composiciones farmaceuticas que comprenden estos compuestos, y metodos para prepararlas.

Description

DERIVADOS DE LA 3-[4-(HETEROCICLICLO SUSTITUIDO)-PIRROL-2- ILMETILIDEN1-2-INDOLINONA COMO INHIBIDORES DE LA CINASA REFERENCIA CRUZADA A LAS SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud se relaciona a, y reclama la prioridad de la Solicitud provisional No. de Serie 60/328,226, presentada en Octubre 10, 2001 , la cual se incorpora aquí como referencia en su totalidad.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION Campo de la Invención La presente invención está dirigida a ciertos derivados de la 3-[4-(heterociclilo sustituido)-pirrol-2-ilmetiliden]-2-indolinona que inhiben las cinasas, en particular las cinasas VEGFR, PDGFR y c-kit. También se describen las composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos, métodos para tratar enfermedades mediadas por las cinasas, en particular las cinasas VEGFR, PDGFR y/o c-kit, que utilizan composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos y métodos para prepararlas.

Estado de la Técnica Las proteínas cinasas (PK, por sus siglas en inglés) son enzimas que catalizan la fosforilación de los grupos hidroxi en los residuos de tirosina, serina y treonina de las proteínas. Las consecuencias de esta actividad aparentemente simple son escalonadas; crecimiento, diferenciación y proliferación celular, es decir, virtualmente todos los aspectos de la vida celular en una manera u otra dependen de la actividad de las PK. Además, la actividad anormal de las PK ha sido relacionada con un hospedero en trastornos, que varía desde enfermedades que relativamente no amenazan la vida tales como soriasis, a enfermedades extremadamente virulentas tales como glioblastoma (cáncer de cerebro) (véase la Patente de E.U.A. 5,792,783, la cual se incorpora aquí como referencia en su totalidad). Por ejemplo, las cinasas VEGFR y/o PDGFR están involucradas en varios cánceres tales como linfoma de las células T, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mieloide aguda, melanoma, glioblastoma y otros (véase Bellamy W. T. et al., Cáncer Res. 1999, 59, 728-733). La VEGF también juega un papel en las enfermedades oculares tales como retinopatía diabética, isquemia de la retina y neovascularización de la retina. En vista del aparente enlace entre las actividades celulares relacionadas con las PK y una amplia variedad de enfermedades humanas, se han gastado muchos esfuerzos en un intento por identificar las formas para modular la actividad de las PK. Algunos de estos esfuerzos han involucrado procedimientos biomiméticos utilizando grandes moléculas estructuradas sobre aquéllas involucradas en los procesos celulares reales (por ejemplo, ligandos mutantes (Solicitud de E L). A. No. 4,966,849); receptores y anticuerpos solubles (Solicitud No. WO 94/10202, Kendall y Thomas, Proa Nat'l Acad.Sci., 90:10705-09 (1994), Kim, et al., Nature, 362:841-844 (1993)); ligandos de ARN (Jelinek, et al., Biochemistrv. 33:10450-56); Takano, et al., Mol. Bio. Cell 4:358A (1993); Kinsella, et al., Exp. Cell Res. 199:56-62 (1992); Wright, et al., J. Cellular Phvs., 152:448-57) e inhibidores de la tirosina cinasa (WO 94/03427; WO 92/21660; WO 91/15495; WO 94/14808; Patente de E.U.A. No. 5,330,992; Mariani, et al., Proa Am. Assoc. Cáncer Res.. 35:2268 (1994)). Además de lo anterior, se han hecho intentos por identificar moléculas pequeñas, las cuales actúan como inhibidores de las PK. Por ejemplo, los compuestos de arilo bis-monocíclicos, bicíclicos y heterocíclicos (PCT WO 92/20642), derivados de vinilenazaindol (PCT WO 94/14808) y 1 -ciclopropil-4-piridilquinolonas (Patente de E.U.A. No. 5,330,992) han sido descritos como inhibidores de la tirosina cinasa. Los compuestos de estirilo (Patente de E.U.A. No. 5,217,999), compuestos de piridilo sustituidos con estirilo (Patente de E.U.A. No. 5,302,606), derivados de quinazolina (Solicitud EP No. 0 566 266 A1 ), selenaindoles y selenuros (PCT WO 94/03427), compuestos polihidroxílicos tricíclicos (PCT WO 92/21660), compuestos del ácido bencilfosfónico (PCT WO 91/15495) y compuestos de indolina (Patente de E.U.A. 5,792,783) han sido descritos como inhibidores de las PTK útiles en el tratamiento del cáncer. Sin embargo, estos compuestos tienen una utilidad limitada debido a la toxicidad y/o pobre biodisponibilidad. En consecuencia, existe una necesidad de compuestos que no sufran de tales desventajas. Los compuestos de la presente invención satisfacen esta necesidad.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION En un aspecto, las modalidades preferidas de la presente invención se relacionan con un compuesto de Fórmula (IV): en donde: R es: (a) hidrógeno; (b) -PO(OR5)2 en donde cada uno de R5 es de manera independiente hidrógeno o alquilo; (c) -COR6 en donde R6 es alquilo; o (d) -CHR7NR8R9 en donde R7 es hidrógeno o alquilo, y R8 y R9 son de manera independiente hidrógeno o alquilo; o R8 y R9 junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, forman un anillo de heterocicloamino; R1 es hidrógeno, alquilo, alcoxi, hidroxi, trifluorometilo, trifluorometoxi, F, Cl, Br o I; R2 es hidrógeno, alquilo, heteroarilo, alcoxi, hidroxi, F, Cl, Br o I; R3 es hidrógeno o alquilo; R4 es hidrógeno o alquilo; el anillo A es heterocicloamino sustituido opcionalmente; Het es cicloalquilaminoalquilo, cicloalquilalquilaminoalquilo, heteroarilo, heterociclo, heterociclilcarbonilalquilo, heterociclilalquilcarbonilo o heterociclilalquilo; X es NR8R9 u OR8; y n es 0 ó 1 ; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otro aspecto, la presente invención se relaciona con un compuesto de Fórmula (I): en donde: R es: (a) hidrógeno; (b) -PO(OR5)2 en donde cada uno de R5 es de manera independiente hidrógeno o alquilo; (c) -COR6 en donde R6 es alquilo; o (d) -CHR7NR8R9 en donde R7 es hidrógeno o alquilo, y R8 y R9 son de manera independiente hidrógeno o alquilo; o R8 y R9 junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, forman un anillo de heterocicloamino; R1 es hidrógeno, alquilo, heteroarilo, alcoxi, hidroxi, trifluorometilo, trifluorometoxi, F, Cl, Br o I; R2 es hidrógeno, alquilo, alcoxi, hidroxi, F, Cl, Br o I; R3 es hidrógeno o alquilo; R4 es hidrógeno o alquilo; el anillo A es heterocicloamino sustituido opcionalmente; Het es cicloalquilaminoalquilo, cicloalquilalquilaminoalquilo, heteroarilo, heterociclo o heterociclilalquilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En aún otro aspecto, las modalidades preferidas de la presente invención se relacionan con los compuestos de Fórmula (I) o (IV): en donde: R es H; R1 es hidrógeno, alquilo, alcoxi, hidroxi, trifluorometilo, trifluorometoxi, F, Cl, Br o I; R2 es hidrógeno, alquilo, heteroarilo, alcoxi, hidroxi, F, Cl, Br o I; R3 es hidrógeno o alquilo; R4 es hidrógeno o alquilo; el anillo A es heterocicloamino sustituido opcionalmente; Het es cicloalquilaminoalquilo, cicloalquilalquilaminoalquilo, heteroarilo, heterociclo, heterociclilcarbonilalquilo, heterociclilalquilcarbonilo o heterociclilalquilo; X es OR8 (en donde R8 es hidrógeno o alquilo) o NR8R9, en donde R8 y R9 son de manera independiente hidrógeno o alquilo; o R8 y R9 junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, forman un anillo de heterocicloamino; y n es 0 ó 1 ; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En aún otro aspecto, esta invención está dirigida a una composición farmacéutica que comprende uno o más compuestos de las Fórmula (I) o (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un excipiente farmacéuticamente aceptable. En otro aspecto, esta invención está dirigida a un método de tratamiento de enfermedades mediadas por la actividad anormal de la proteína cinasa (PK), en particular, los receptores de las tírosina cinasas (RTK), las proteínas tirosína cinasas no receptoras (CTK) y las proteínas cinasas de serina/treonina (STK), en un organismo, en particular humanos, método el cual comprende administrar al organismo una composición farmacéutica que comprende un compuesto de las Fórmulas (I) o (IV) y un excipiente farmacéuticamente aceptable. Específicamente, las enfermedades mediadas por EGF, Met, HER2, HER3, HER4, IR, IGF-1 R, IRR, PDGFRa, PDGFRp, CSFIR, C-kit, C-fms, Flk- R, Flk4, KDR/Flk-1 , Flt-1 , flt-3, FGFR-1 R, FGFR-2R, FGFR-3R, FGFR-4R, Src, Frk, Btk, Csk, Abl, ZAP70, Fes/Fps, Fak, Jak, Ack, Yes, Fyn, Lyn, Lck, Blk, Hck, Fgr, Yrk, CDK2 y Raf. En particular las enfermedades mediadas por las cinasas VEGFR, c-kit y/o PDGFR. Tales enfermedades incluyen a manera de ejemplo y no de limitación, cánceres tales como el cáncer de pulmón, NSCLC (cáncer de pulmón de las células no pequeñas), cáncer de los huesos, cáncer pancreático, cáncer de piel, cáncer de cabeza y cuello, melanoma cutáneo o intraocular, cáncer uterino, cáncer de ovario, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de mama, tumores ginecológicos (por ejemplo, sarcomas uterinos, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma de cervix, carcinoma de la vagina o carcinoma de la vulva), Enfermedad de Hodgkin, cáncer de esófago, cáncer del intestino delgado, cáncer del sistema endocrino (por ejemplo, cáncer de la tiroides, paratiroides y glándulas adrenales), sarcomas de los tejidos blandos, cáncer de la uretra, cáncer del pene, cáncer de próstata, leucemia crónica o aguda, tumores sólidos en infantes, linfomas linfocíticos, cáncer de vejiga, cáncer del riñon o uréter (por ejemplo, carcinoma de las células renales, carcinoma de la pelvis renal), malignidad pediátrica, neoplasmas del sistema nervioso central (por ejemplo, linfoma primario del CNS, tumores del eje de la columna vertebral, gliomas del tronco del cerebro o adenomas de la pituitaria), esófago de Barrett (síndrome premaligno), enfermedad cutánea neoplásica, soriasis, micosis fungoides e hipertrofia prostética benigna, enfermedades relacionadas con la diabetes tales como retinopatía diabética, isquemia de la retina y neovascularización de la retina, cirrosis hepática, enfermedad cardiovascular tal como aterosclerosis, enfermedad inmunológica tal como enfermedad autoinmune y enfermedad renal. De manera preferida, la enfermedad es un cáncer tal como la leucemia mieloide aguda, cáncer colorrectal, melanoma, glioblastoma y carcinoma de pulmón de células no pequeñas. El método anteriormente mencionado puede llevarse a cabo con un agente quimioterapéutico. En una modalidad, el agente quimioterapéutico se selecciona del grupo que consiste de inhibidores mitóticos, agentes alquilantes, antimetabolitos, inhibidores del ciclo celular, enzimas, inhibidores de la topoisomerasa, modificadores de la respuesta biológica, antihormonas, agentes antiangiogénicos tales como inhibidores de la M P-2, MMP-9 y COX-2 y antiandrógenos. Los ejemplos de inhibidores de COX-II útiles incluyen el Vioxx™, CELEBREX™ (alecoxib), valdecoxib, rofecoxib y Cox 189. Los ejemplos de inhibidores útiles de la metaloproteinasa de la matriz, se describen en la WO 96/33172 (publicada en Octubre 24, 1996), WO 96/27583 (publicada en Marzo 7, 1996), Solicitud de Patente Europea No. 97304971.1 (presentada en Julio 8, 1997), Solicitud de Patente Europea No. 99308617.2 (presentada en Octubre 29, 1999), WO 98/07697 (publicada en Febrero 26, 1998), WO 98/03516 (publicada en Enero 29, 1998), WO 98/34918 (publicada en Agosto 13, 1998), W098/34915 (publicada en Agosto 13, 1998), WO 98/33768 (publicada en Agosto 6, 1998), WO 98/30566 (publicada en Julio 16, 1998), Solicitud de Patente Europea 606,046 (publicada en Julio 13, 1994), Solicitud de Patente Europea 931 ,788 (publicada en Julio 28, 1999), WO 90/05719 (publicada en Mayo 31 , 1990), WO 99/52910 (publicada en Octubre 21 , 1999), WO 99/52889 (publicada en Octubre 21 , 1999), WO 99/29667 (publicada en Junio 17, 1999), Solicitud Internacional del PCT No. PCT/IB98/011 13 (presentada en Julio 21 , 1998), Solicitud de Patente Europea No. 99302232.1 (presentada en Marzo 25, 1999), solicitud de patente de la Gran Bretaña número 9912961.1 (presentada en Junio 3, 1999), Solicitud Provisional de E.U.A. No. 60/148,464 (presentada en Agosto 12, 1999), Patente de E.U.A. No. 5,863,949 (expedida en Enero 26, 999), Patente de E.U.A. No. 5,861 ,510 (expedida en Enero 19, 1999) y la Solicitud de Patente Europea 780,386 (publicada en Junio 25, 1997), todas las cuales se incorporan aquí como referencia en su totalidad. Los inhibidores de la MMP-2 y MMP-9 preferidos son aquéllos que tienen poca o ninguna actividad inhibidora de la MMP-1. Los más preferidos, son aquéllos que inhiben selectivamente la MMP-2 y/o MMP-9 con relación a otras metaloproteinasas de la matriz (es decir, MMP-1 , MMP-3, MMP-4, MMP-5, MMP-6, MMP-7, MMP-8, MP-10, MMP-1 1 , MMP-12 y MMP-13). Algunos ejemplos específicos de inhibidores de las MMP útiles en la presente invención son el AG-3340, RO 32-3555, RS 13-0830 y los compuestos expuestos en la lista siguiente: ácido 3-[[4-(4-fluoro-fenoxi)-bencensulfonil]-(1-hidroxicarbamoil-ciclopentil)-amino]-propiónico; hidroxiamida del ácido 3-exo-3-[4-(4-fluoro-fenoxi)-bencensulfonilamino]-8-oxa-biciclo[3.2.1]octan-3-carboxilico; hidroxiamida del ácido (2R, 3R) 1 -[4-(2-cloro-4-fluoro-benciloxi)-bencensulfonil]-3-hidroxi-3-metil-piperidin-2-carboxilico; hidroxiamida del ácido 4-[4-(4-fluoro-fenoxi)-bencensulfonilamino]-tetrahidro-piran-4-carboxílico; ácido 3-[[4-(4-fluoro-fenoxi)-bencensulfonil]-(1-hidroxicarbamoil-ciclobutil)-amino]-propiónico; hidroxiamida del ácido 4-[4-(4-cloro-fenoxi)-bencensulfonilamino]-tetrahidro-piran-4-carboxilico; hidroxiamida del ácido (R) 3-[4-(4-cloro-fenoxi)-bencensulfonilamino]-tetrahidro-piran-3-carboxílico; hidroxiamida del ácido (2R, 3R) 1 -[4-(4-fluoro-2-metil-benciloxi)-bencensulfonil]-3-hidroxi-3-metil-piperidin-2-carboxílico; ácido 3-[[(4-(4-fluoro-fenoxi)-bencensulfonil]-(1 -hidroxicarbamoil-1-metil-etil)-amino]-propiónico; ácido 3-[[4-(4-fluoro-fenoxi)-bencensulfonil]-(4-hidroxicarbamoil-tetrahidro-piran-4-il)-amino]-propiónico; hidroxiamida del ácido 3-exo-3-[4-(4-cloro-fenoxi)-bencensulfonilamino]-8-oxa-biciclo[3.2.1]octan-3-carboxílico; hidroxiamida del ácido 3-endo-3-[4-(4-fluoro-fenoxi)-bencensulfonilamino]-8-oxa-biciclo[3.2.1]octan-3-carboxílico e hidroxiamida del ácido (R) 3-[4-(4-fluoro-fenoxi)-bencensulfonilamino]- tetrahidro-furan-3-carboxílico; y las sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos. Otros agentes antiangiogénicos, incluyendo otros inhibidores de la COX-II y otros inhibidores de las MMP, pueden ser útiles en la presente invención. Los compuestos de las Fórmulas (I) o (IV), también pueden ser utilizados con inhibidores de la transducción de la señal, tales como agentes que pueden inhibir las respuestas del EGFR (receptor del factor de crecimiento epidérmico), tales como anticuerpos EGFR, anticuerpos EGF y moléculas que son inhibidores del EGFR; inhibidores del VEGF (factor del crecimiento endotelial vascular) e inhibidores del receptor erbB2, tales como moléculas o anticuerpos orgánicos que unen al receptor erbB2, por ejemplo, HERCEPTIN.TM. (Genentech, Inc. de South San Francisco, Calif., E.U.A.). Los inhibidores de EGFR se describen en, por ejemplo, la WO 95/19970 (publicada en Julio 27, 1995), WO 98/14451 (publicada en Abril 9, 1998), WO 98/02434 (publicada en Enero 22, 1998), y la Patente de E.U.A. No. 5,747,498 (expedida en Mayo 5, 1998), y tales sustancias pueden utilizarse en la presente invención como se describe aquí. Los agentes que inhiben la EGFR incluyen, de manera no exclusiva, los anticuerpos monoclonales C225 y anti-EGFR 22Mab (ImClone Systems Incorporated de New York, N. Y., E.U.A.), los compuestos ZD-1839 (AstraZeneca), BIBX-1382 (Boehringer Ingelheim), MDX-447 (Medarex Inc. de Annandale, N. J., E.U.A.), y OLX-103 (Merck & Co. de Whitehouse Station, N.

J., E.U.A.), VRCTC-310 (Ventech Research) y la toxina de fusión EGF (Seragen Inc. de Hopkinton, Mass.). Estos y otros agentes que inhiben la EGFR pueden utilizarse en la presente invención. Los inhibidores de VEGF, por ejemplo el SU-5416, SU 1 1248, SU-6668 (Sugen Inc. de South San Francisco, Calif., E.U.A.), también pueden utilizarse en combinación con otros compuestos de las Fórmulas (I) o (IV). Los inhibidores de VEGF se describen en, por ejemplo, la WO 99/24440 (publicada en Mayo 20, 1999), la Solicitud Internacional del PCT PCT7IB99/00797 (presentada en Mayo 3, 1999), en la WO 95/21613 (publicada en Agosto 17, 1995), WO 99/61422 (publicada en Diciembre 2, 1999), la Patente de E.U.A. No. 5,834,504 (expedida en Noviembre 10, 1998), WO 01/60814, WO 98/50356 (publicada en Noviembre 12, 1998), Patente de E.U.A. No. 5,883,113 (expedida en Marzo 16, 1999), Patente de E.U.A. No. 5,886,020 (expedida en Marzo 23, 1999), Patente de E.U.A. No. 5,792,783 (expedida en Agosto 1 1 , 1998), WO 99/10349 (publicada en Marzo 4, 1999), WO 97/32856 (publicada en Septiembre 12, 1997), WO 97/22596 (publicada en Junio 26, 1997), WO 98/54093 (publicada en Diciembre 3, 1998), WO 98/02438 (publicada en Enero 22, 1998), WO 99/16755 (publicada en Abril 8, 1999), y la WO 98/02437 (publicada en Enero 22, 1998), todas las cuales se incorporan aquí como referencia en su totalidad. Otros ejemplos específicos de algunos inhibidores de VEGF útiles en la presente invención son IM862 (Cytran Inc. de Kirkland, Wash., E.U.A.); anticuerpo monoclonal anti-VEGF de Genentech, Inc. de South San Francisco, Calif.; y angiozima, una ribozima sintética de Ribozyme (Boulder, Coló.) y Chiron (Emeryville, Calif.). Estos y otros inhibidores de VEGF pueden utilizarse en la presente invención como se describe aquí. Los inhibidores del receptor de ErbB2, tales como el GW-282974 (Glaxo Wellcome pie), y los anticuerpos monoclonales AR-209 (Aronex Pharmaceuticals Inc. de The Woodlands, Tex., E.U.A.) y 2B-1 (Chiron), pueden además estar combinados con un compuesto de Fórmula (I) o (IV), por ejemplo, aquéllos indicados en la WO 98/02434 (publicada en Enero 22, 1998), WO 99/35146 (publicada en Julio 15, 1999), WO 99/35132 (publicada en Julio 15, 1999), WO 98/02437 (publicada en Enero 22, 1998), WO 97/13760 (publicada en Abril 17, 1997), WO 95/19970 (publicada en Julio 27, 1995), Patente de E.U.A. No. 5,587,458 (expedida en Diciembre 24, 1996), y la Patente de E.U.A. No. 5,877,305 (expedida en Marzo 2, 1999), todas las cuales se incorporan aquí como referencia en su totalidad. Los compuestos y sustancias inhibidoras del receptor de erbB2 descritos en las solicitudes del PCT y patentes de E.U.A. descritas anteriormente, así como otros compuestos y sustancias que inhiben el receptor de erbB2, pueden utilizarse con compuestos de Fórmulas (I) o (IV), de acuerdo con la presente invención. Los compuestos de las Fórmulas (I) o (IV), también pueden utilizarse con otros agentes útiles en el tratamiento del cáncer, incluyendo, de manera no exclusiva, agentes capaces de mejorar las respuestas inmunes antitumor, tales como anticuerpos CTLA4 (antígeno línfocítico cítotóxico 4) u otros agentes capaces de bloquear el CTLA4; y agentes antiproliferativos tales como otros inhibidores de la proteína farnesil transferasa, por ejemplo, los inhibidores de la proteina farnesil transferasa descritos en las referencias citadas en la sección "Antecedentes", de la Patente de E.U.A. No, 6,258,824 B1. Los anticuerpos CTLA4 específicos que pueden utilizarse en la presente invención incluyen aquéllos descritos en la Solicitud Provisional de E.U.A. 60/1 13,647 (presentada en Diciembre 23, 1998), la cual se incorpora aquí como referencia en su totalidad, sin embargo, otros anticuerpos CTLA4 pueden utilizarse en la presente invención. El método anterior también puede llevarse a cabo en combinación con terapia de radiación, en donde la cantidad de compuestos de Fórmulas (I) o (IV) en combinación con la terapia de radiación, es efectiva en el tratamiento de las enfermedades anteriores. Las técnicas para la administración de la terapia de radiación son conocidas en la técnica, y estas técnicas pueden utilizarse en la terapia de combinación descrita aquí. La administración del compuesto de la invención en esta terapia de combinación puede determinarse como se describe aquí. En otro aspecto, esta invención está dirigida a un método de modulación de la actividad catalítica (por ejemplo, inhibir la actividad catalítica) de las PK, en particular el receptor de las tirosina cinasas (RTK), las proteínas tirosina cinasas no receptoras (CTK) y las proteínas cinasas de serina/treonina (STK), utilizando un compuesto de esta invención o una composición farmacéutica que comprende un compuesto de esta invención y un excipiente farmacéuticamente aceptable. El método puede llevarse a cabo in vitro o in vivo. En particular, el receptor de la proteína cinasa cuya actividad catalítica es modulada por un compuesto de esta invención, es seleccionado del grupo que consiste de Met, EGF, HER2, HER3, HER4, IR, IGF-1 R, IRR, PDGFRa, PDGFRp, CSFIR, C-Kit, C-fms, Flk4, VEGFR, Flt-1 , FGFR-1 R, FGFR-2R, FGFR-3R y FGFR-4R, en particular las cinasas VEGFR y/o PDGFR. La tirosina cinasa celular cuya actividad catalítica es modulada por un compuesto de esta invención, se selecciona del grupo que consiste de Src, Frk, Btk, Csk, Abl, ZAP70, Fes/Fps, Fak, Jak, Ack, Yes, Fyn, Lyn, Lck, Blk, Hck, Fgr e Yrk. La proteína cinasa de serina-treonina cuya actividad catalítica es modulada por un compuesto de esta invención, se selecciona del grupo que consiste de CDK2 y Raf. En aún otro aspecto, esta invención está dirigida al uso de compuestos de Fórmulas (I) o (IV) en la preparación de un medicamento, el cual es útil en el tratamiento de una enfermedad mediada por la actividad anormal de la cinasa VEGFR y/o PDGFR. En otro aspecto, esta invención está dirigida a intermediarios de Formula (I I): en donde Het y A son como se definieron anteriormente. Los compuestos de fórmula (II ), son útiles en la síntesis de los compuestos de Formula (I ) descritos anteriormente. En otro aspecto, esta invención está dirigida a intermediarios de Fórmula (V): (V) en donde Het, A, X y n son como se definieron anteriormente.

Los compuestos de fórmula (V) son útiles en la síntesis de compuestos de Fórmula (IV) descritos anteriormente. En otro aspecto, esta invención está dirigida a un método de preparación de un compuesto de Fórmula (I) o (IV), método el cual comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (III ) siguiente: en donde R es hidrógeno y R1-R5 son como se definieron en los compuestos de Fórmula (I), con un compuesto de Fórmula (I I) mostrado anteriormente, en la presencia de un agente de acoplamiento; (i) modificando opcionalmente cualquiera de los grupos R-R5; y (ii) preparando opcionalmente una sal de adición de ácido; y (iii) preparando opcionalmente una base libre. Finalmente, esta invención también está dirigida a un método de identificación de un compuesto químico que modula la actividad catalítica de una proteina cinasa utilizando un compuesto de Fórmula (I ) o (IV) como una referencia, método el cual comprende poner en contacto las células que expresan la proteína cinasa con el compuesto o un compuesto de Fórmula (I) y a continuación verificar las células para un efecto.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION Definiciones A menos que se indique de otra manera, los siguientes términos utilizados en la especificación y reivindicaciones tienen los significados discutidos a continuación: "Alquilo", se refiere a un radical de hidrocarbono saturado lineal o ramificado de uno a seis átomos de carbono, de manera preferida uno a cuatro átomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, 2-propilo, n- butilo, iso-butilo, ter-butilo, pentilo, hexilo y lo similar, de manera preferida metilo, etilo, propilo o 2-propilo. "Alquileno", significa un radical de hidrocarbono divalente saturado, lineal, de uno a seis átomos de carbono o un radical de hidrocarbono divalente saturado, ramificado, de tres a seis átomos de carbono, por ejemplo, metileno, etileno, 2,2-dimetiletileno, propileno, 2-metilpropileno, butileno, pentileno y lo similar, de manera preferida metileno, etileno o propileno. "Cicloalquilo", se refiere a un radical de hidrocarbono cíclico saturado de tres a seis átomos de carbono, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo. "Alcoxi", significa un radical -OR, en donde R es un alquilo como se definió anteriormente, por ejemplo, metoxi, etoxi, propoxi, butoxi y lo similar. "Alcoxicarbonilo", significa un radical -COOR, en donde R en un alquilo como se definió anteriormente, por ejemplo, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, propoxicarbonilo, butoxicarbonilo y lo similar. "Alquiltio", significa un radical -SR, en donde R es un alquilo como se definió anteriormente, por ejemplo, metiltio, etiltio, propiltio, butiltio y lo similar. "Alquilamino" y "dialquilamino", significa un radical -NHR y -NRR' respectivamente, en donde R y R\ de manera independiente representan un grupo alquilo como se define aquí. Los ejemplos representativos incluyen, de manera no exclusiva, metilamino, etilamino, propilamino, dimetilamino, metiletilamino, di-(1 -metiletil)-amino y lo similar. "Cicloalquilalquilo", significa un radical de hidrocarbono monovalente lineal o ramificado, saturado, de uno a seis átomos de carbono, sustituido con uno o dos grupos cicloalquilo como se definió anteriormente, por ejemplo, ciclopropilmetilo, ciclopropiletilo, ciclobutilmetilo, ciciohexiletilo y lo similar. "Cicloalquilamino", significa un grupo -NRR', en donde R es hidrógeno o alquilo, y R' es cicloalquilo, por ejemplo, ciclopropilamino, ciclobutilamino, ciclohexilamino y lo similar. "Cicloalquilaminoalquilo", significa un grupo -(alquileno)-NRR', en donde R es hidrógeno o alquilo y R' es cicloalquilo, por ejemplo, ciclopropilaminometilo, ciclopropilaminoetilo, ciclobutilaminometilo, ciclohexilamínoetilo y lo similar. "Cicloalquilalquilaminoalquilo", significa un grupo -(alquileno)- NRR', en donde R es hidrógeno o alquilo, y R' es cicloalquilalquilo como se definió anteriormente, por ejemplo, ciclopropilmetilaminometilo, ciclopropilmetilaminoetilo, ciclobutilmetilaminometilo, ciclohexilmetilaminoetilo y lo similar. "Alquilaminocarbonilo" y "dialquilaminocarbonilo", significan un radical -CONHR y -CONRR' respectivamente, en donde R y R' de manera independiente, representan un grupo alquilo como se define aquí. Los ejemplos representativos incluyen, de manera no exclusiva, metilaminocarbonilo, etilaminocarbonilo, propilaminocarbonilo, dimetilaminocarbonilo, metiletilaminocarbonilo, di(1-metiletil)aminocarbonilo y lo similar. "Halo", significa flúor, cloro, bromo o yodo, de manera preferida flúor y cloro. "Haloalquilo", significa alquilo sustituido con uno o más, de manera preferida uno, dos o tres, átomos de halo ¡guales o diferentes, por ejemplo, -CH2CI, -CF3, -CH2CF3, -CH2CCI3 y lo similar. "Haloalcoxi", significa un radical -OR, en donde R es un haloalquilo como se definió anteriormente, por ejemplo, trifluorometoxi, tricloroetoxi, 2,2-dicloropropoxi y lo similar. "Hidroxialquilo", significa un radical de hidrocarbono monovalente lineal o ramificado, saturado, de uno a seis átomos de carbono, sustituido con uno o dos grupos hidroxi, con la condición de que si dos grupos hidroxi están presentes, no están ambos en el mismo átomo de carbono. Los ejemplos representativos incluyen, de manera no exclusiva, 2-hidroxietilo, 2-hidroxipropilo, 3-hidroxipropilo, 1-(hidroximetil)-2-metilpropilo, 2-hidroxibutilo, 3-hidroxibutilo, 4-hidroxibutilo, 2,3-dihidroxipropilo, 1 -(hidroximetil)-2-hidroxietilo, 2,3-dihidroxibutilo, 3,4-dihidroxibutilo y 2-(hidroximetil)-3-hidroxipropilo, de manera preferida 2-h¡droxietilo, 2,3-dihidroxipropilo y 1 -(hidroximetil)-2-hidroxietilo. "Alcoxialquilo", significa un radical de hidrocarbono monovalente lineal o ramificado, saturado, de uno a seis átomos de carbono, sustituido con uno o dos grupos alcoxi como se definió anteriormente, por ejemplo, metoximetilo, 2-metoxietilo, 2-metoxipropilo, 3-metoxipropilo, etoximetilo, 2-etoxietilo y lo similar. "Aminoalquilo", significa un radical de hidrocarbono monovalente lineal o ramificado, saturado, de uno a seis átomos de carbono, sustituido con uno o dos -NH2, por ejemplo, 2-aminoetilo, 3-aminopropilo, 2-aminopropilo, 2-, 3- o 4-aminobutilo y lo similar. "Aminoalquilcarbonilo", significa un radical -COR, en donde R es un grupo aminoalquilo como se definió anteriormente, por ejemplo, 2-aminoetilcarbonilo, 3-aminopropilcarbonilo, 2- aminopropilcarbonilo, 2-, 3- o 4- aminobutilcarbonilo y lo similar. "Alquilaminoalquilo", significa un radical de hidrocarbono monovalente lineal o ramificado, saturado, de uno a seis átomos de carbono, sustituido con uno o dos -NHR, en donde R es alquilo o acilo, por ejemplo, 2-N-metilaminoetilo, 2-N-etilaminoetilo, 2-N-acetilaminoetilo y lo similar. "Alquilaminoalquilcarbonilo", significa un radical -COR, en donde R es un grupo alquilaminoalquilo como se definió anteriormente, por ejemplo, 2-N-metilaminoetilcarbonilo, 2-N-etilaminoetilcarbonilo, 2-N-acetilaminoetilcarbonilo y lo similar. "Dialquilaminoalquilo", significa un radical de hidrocarbono monovalente lineal o ramificado, saturado, de uno a seis átomos de carbono, sustituido con uno o dos -NRR', en donde R y R' se seleccionan de manera independiente de alquilo, por ejemplo, 2-N,N-dietilaminoetilo, 2-?,?-dietilaminopropilo y lo similar. "Dialquilaminoalquilcarbonilo", significa un radical -COR, en donde R es un grupo dialquilaminoalquilo como se definió anteriormente, por ejemplo, 2-N,N-dietilaminoetilcarbonilo, 2-N,N-dietilaminopropilcarbonilo y lo similar. "Acilo", significa un radical -C(0)R, en donde R es hidrógeno, alquilo o haloalquilo como se definió aquí, por ejemplo, formilo, acetilo, trifluoroacetilo, butanoilo y lo similar. "Arilo", se refiere a un grupo anular aromático monocíclico o fusionado (es decir, anillos los cuales comparten un par de átomos adyacentes) de 6 a 12 átomos de carbono, por ejemplo, fenilo, naptilo, y lo similar. El grupo arilo puede estar sustituido o no sustituido. Cuando está sustituido, el grupo arilo está sustituido con uno o más, de manera más preferida uno, dos o tres, aún de manera más preferida uno o dos sustituyentes, seleccionados de manera independiente del grupo que consiste de alquilo, haloalquilo, alquiltio, halo, hidroxi, alcoxi, acilo, nitro, haloalcoxi, carboxi, alcoxicarbonilo, amino, alquilamino o dialquilamino. "Heteroarilo", se refiere a un grupo anular monocíclico o fusionado (es decir, anillos los cuales comparten pares de átomos adyacentes) de 5 a 12 átomos en el anillo que contiene uno, dos, tres o cuatro heteroátomos en el anillo, seleccionados de N, O o S, los átomos en el anillo restantes son C, y, además, que tienen un sistema de electrones pi completamente conjugado. Los ejemplos, sin limitación, de grupos heteroarilo no sustituidos son pirrólo, furano, tiofeno, imidazol, oxazol, tiazol, pirazol, piridina, pirimidina, quinolina, isoquinolina, purina, triazol, tetrazol, triacina y carbazol. El grupo heteroarilo puede estar sustituido o no sustituido. Cuando está sustituido, el grupo heteroarilo está sustituido con uno o más, de manera más preferida uno, dos o tres, de manera aún más preferida uno o dos sustituyentes seleccionados de manera independiente del grupo que consiste de alquilo, haloalquilo, halo, hidroxi, alcoxi, acilo, nitro, haloalcoxi, carboxi, alcoxicarbonilo, amino, alquilamino o dialquilamino. "Heterociclo" o "heterociclilo", significa un radical cíclico saturado o no saturado de 3 a 8 átomos en el anillo, en el cual uno, dos o tres átomos en el anillo son heteroátomos seleccionados de N, O o S(0)n (en donde n es un número entero de 0 a 2), los átomos restantes son C, en donde uno o dos átomos de C pueden estar reemplazados opcionalmente por un grupo carbonilo. De manera preferida, el anillo de heterociclo contiene al menos un átomo de nitrógeno en el anillo. Cuando está no saturado, el heterociclo contiene uno o dos enlaces dobles, con la condición de que anillo no es aromático. El anillo de heterociclilo puede estar sustituido opcionalmente de manera independiente con uno o más, de manera preferida uno, dos o tres sustituyentes seleccionados de alquilo (en donde el alquilo puede estar sustituido opcionalmente con uno o dos sustituyentes seleccionados de manera independiente de carboxi o -COOR, en donde R es alquilo), haloalquilo, halo, nitro, ciano, hidroxi, alcoxi, amino, alquilamino, dialquilamino, hidroxialquilo, carboxialquilo, aminoalquilo, alquilaminoalquilo, dialquilaminoalquilo, aminoalquilcarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, alcoxialquilo, alquilaminoalquilcarbonilo, dialquilaminoalquilcarbonilo, arilo, heteroarilo, ariloxi, aralquilo, heteroaralquilo, y -COR (en donde R es alquilo). Más específicamente, el término heterociclilo incluye, de manera no exclusiva, tetrahidropiranilo, 2,2-dimetil-1 ,3-dioxolano, piperidino, N-metilpiperidin-3-ilo, piperacino, N-metilpirrolidin-3-ilo, pirrolidino, morfolino, tiomorfolino, tiomorfolino-1 -óxido, tiomorfolino-1 ,1 -dióxido, 4-etiloxicarbonilpiperacino, 3-oxopiperacino, 2-imidazolidona, 2- pirrolidinona, 2-oxohomopiperacino, tetrahidropirimidin-2-ona y los derivados de los mismos. "Heterocicloamino", significa un radical cíclico saturado de 3 a 8 átomos en el anillo, en el cual al menos uno de los átomos en el anillo es nitrógeno y opcionalmente en donde uno o dos átomos en el anillo adicionales son heteroátomos seleccionados de -NRa- (en donde Ra es alquilo, alquiladlo sustituido, arilo o heteroarílo), O o S(0)n (en donde n es un número entero de 0 a 2), los átomos en el anillo restantes son C, en donde uno o dos átomos de C pueden estar reemplazados opcionalmente por un grupo carbonilo. El anillo de heterocicloamino puede estar sustituido opcionalmente de manera independiente con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados de alquilo, hidroxialquilo o carboxi. Más específicamente, el término heterocicloamino incluyen, de manera no exclusiva, piperídín-1-ilo, piperacín-1-ilo, pirrolidin-1-ilo, 2-oxo-pirrolidín-1 -ilo, 2,5-dioxo-pirrolidin-1 -ilo, morfolin-4-ilo, tiomorfolin-4-ilo, tiomorfolíno-1 -óxido, tíomorfolino-1 ,1 -dióxido, 4-etiloxicarbonilpiperacin-1- ilo, 3-oxopiperacin-l-ilo, 2-imidazolidon-1 -ilo, 2-pirrolidinon-l -ilo, 2-oxohomopiperacino, tetrahidropirimidin-2-ona y los derivados de los mismos. El grupo heterocicloamino es un subconjunto del grupo heterociclo definido anteriormente. "Heterocicloamino sustituido opcionalmente", significa un radical cíclico no aromático de 4 a 8 átomos en el anillo, que contiene uno o dos enlaces dobles dentro del anillo, con la condición de que el anillo no es aromático, y en el cual al menos uno de los átomos en el anillo es nitrógeno y opcionalmente, en donde uno o dos átomos en el anillo adicionales son heteroátomos seleccionados de manera independiente de -NRa- (en donde Ra es alquilo, alquil acilo sustituido, arilo o heteroarilo), O o S(0)n (en donde n es un número entero de 0 a 2), los átomos restantes en el anillo son C. Uno o dos átomos de C en el anillo pueden ser reemplazados opcionalmente por un grupo carbonilo. El anillo de heterocicloamino puede estar sustituido opcionalmente de manera independiente con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados de alquilo, cicloalquilalquilo, halo, nitro, ciano, hidroxi, alcoxi, amino, alquilamino y dialquilamino. "Hidroxi", se refiere a un grupo -OH. "Ariloxi", se refiere a -OR, en donde R es un grupo arilo, como se define aquí. Los ejemplos representativos incluyen, de manera no exclusiva, feniloxi, F, Cl, o Brfeniloxi, y lo similar y derivados de los mismos. "Ciano", se refiere a un grupo -C=N. "Nitro", se refiere a un grupo -N02.

"Aralquilo", significa alquilo como se definió anteriormente, el cual está sustituido con un grupo arilo como se definió anteriormente, por ejemplo, -CH2fenilo, -(CH2)2fenilo, -(CH2)3fenilo, -H2CH(CH3)CH2fenilo y lo similar y derivados de los mismos. Un grupo "heteroaralquilo", significa alquilo como se definió anteriormente, el cual está sustituido con un grupo heteroarilo, por ejemplo, -CH2piridinilo, -(CH2)2pirimidinilo, -(CH2)3imidazolilo y lo similar y derivados de los mismos. Un grupo "heterociclilalquilo", significa alquilo como se definió anteriormente, el cual está sustituido con un grupo heterociclo, por ejemplo, -CH2pirrolidin-1 -ilo, -(CH2)2piperidin-1-ilo y lo similar y derivados de los mismos. Un grupo "heterociclilcarbonilalquilo", significa -(alquilen)-C(O)-heterociclilo, por ejemplo, 2-morfolin-4-ilacetilo. Un grupo "heterociclilalquilcarbonilo", significa -C(0)-(alquilen)-heterociclilo, por ejemplo, 2-morfolin-4-il-2-oxoetilo. Opcional" u "opcionalmente", significa que el evento o circunstancia descrito posteriormente, puede pero no necesita ocurrir, y que la descripción incluye casos en donde el evento o circunstancia ocurre y casos en los cuales no. Por ejemplo, un "grupo heterociclo sustituido opcionalmente con un grupo alquilo", significa que el alquilo puede, pero no necesita estar presente, y la descripción incluye situaciones en donde el grupo heterociclo está sustituido con un grupo alquilo y situaciones en donde el grupo heterociclo no está sustituido con el grupo alquilo. Los términos "2-indolinona", "indolin-2-ona" y "2-oxindol", se utilizan de manera indistinta aquí para referirse a una molécula que tiene la estructura química: El término "pirrólo", se refiere a una molécula que tiene la estructura química: Los compuestos que tienen la misma fórmula molecular, pero difieren en la naturaleza o secuencia de unión de sus átomos o el arreglo de sus átomos en el espacio, son llamados "isómeros". Los isómeros que difieren en el arreglo de sus átomos en el espacio son llamados "estereoisómeros". Los estereoisómeros que no son imágenes especulares del otro son llamados "diastereómeros" y aquéllos no son imágenes especulares superpuestas de cada uno del otro son llamados "enantiómeros". Cuando un compuesto tiene un centro asimétrico, por ejemplo, éste está unido a cuatro grupos diferentes, es posible un par de enantiómeros. Un enantiómero puede caracterizarse mediante la configuración absoluta de su centro asimétrico y se describe mediante las reglas de secuenciamiento R- y S- de Cahn y Prelog, o mediante la manera en la cual las moléculas rotan el plano de luz polarizada y se designan como dextrogiratorio o levogiratorio (es decir, como isómeros (+) o (-), respectivamente). Un compuesto quiral pueden existir, ya sea como enantiómero individual o como una mezcla de los mismos. Una mezcla que contiene proporciones iguales de los enantiómeros, es llamada "mezcla racémica". Los compuestos de esta invención pueden poseer uno o más centros asimétricos; tales compuestos pueden, por lo tanto, ser producidos como estereoisómeros individuales (R)- o (S)- o como mezclas de los mismos. Por ejemplo, si un sustituyente en un compuesto de Fórmula (I) o (IV) es 2-hidroxietilo, entonces el carbono al cual el grupo hidroxi está unido es un centro asimétrico y por lo tanto, el compuesto de Fórmula (I) o (IV) puede existir como un estereoisómero (R)- o (S)-. Si no se indica de otra manera, la descripción o nombre de un compuesto particular en la especificación y reivindicaciones, pretende incluir ambos enantiómeros individuales y mezclas, racémicas o de otra manera, de los mismos. Los métodos para la determinación de la estereoquímica y la separación de los estereoisómeros es bien conocida en la técnica (véase la discusión en el Capítulo 4 de "Advanced Organic Chemistry", 4a edición J. March, John Wiley and Sons, New York, 1992).

Los compuestos de Fórmula (I) o (IV) pueden exhibir el fenómeno de tautomerismo e isomerismo estructural. Por ejemplo, los compuestos descritos aquí pueden adoptar una configuración E o Z alrededor del doble enlace que conecta la porción 2-indolinona a la porción pirrólo o pueden ser una mezcla de E y Z. Esta invención abarca cualquier forma isomérica tautomérica o estructural y mezclas de las mismas, las cuales poseen la capacidad de modular la actividad de RTK, CTK y/o STK. De manera preferida, los compuestos de Fórmula (I) o (IV), tienen una configuración Z alrededor del enlace doble que conecta la porción 2-indolinona a la porción pirrólo. Se ha contemplado que un compuesto de Fórmula (I) o (IV) podría ser metabolizado por enzimas en el cuerpo del organismo, tal como un humano, para generar un metabolito que puede modular la actividad de las proteínas cinasas. Tales metabolitos están dentro del alcance de la presente invención. Una "composición farmacéutica", se refiere a una mezcla de uno o más de los compuestos descritos aquí, o sales o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, con otros componentes químicos, tales como excipientes farmacéuticamente aceptables. El propósito de una composición farmacéutica es para facilitar la administración de un compuesto a un organismo. "Excipiente farmacéuticamente aceptable", se refiere a una sustancia inerte agregada a una composición farmacéutica para facilitar adicionalmente la administración de un compuesto. Los ejemplos, de manera no exclusiva, de excipientes incluyen carbonato de calcio, fosfato de calcio, varios azúcares y tipos de almidones, derivados de celulosa, gelatina, aceites vegetales y polietilenglicoles. "Sal farmacéuticamente aceptable", se refiere a aquellas sales las cuales retienen la efectividad y propiedades biológicas del compuesto original. Tales sales incluyen: (1 ) sales de adición de ácido, las cuales se obtienen mediante la reacción de la base libre del compuesto original con los ácidos inorgánicos, tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico y ácido perclórico y lo similar, o con ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido oxálico, ácido (D) o (L) málico, ácido maleico, ácido metansulfónico, ácido etansulfónico, ácido p-toluensulfónico, ácido salicílico, ácido tartárico ácido cítrico, ácido succínico o ácido malónico y lo similar, de manera preferida ácido clorhídrico o ácido (L)-málico; o (2) las sales formadas cuando un protón ácido presente en el compuesto original es reemplazado por un ion metálico, por ejemplo, un ion de metal alcalino, un ion alcalinotérreo o un ion de aluminio; o se coordina con una base orgánica tal como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, N-metilglucamina y lo similar. El compuesto de Fórmula (I) o (IV) también puede actuar como un profármaco. Un "profármaco", se refiere a un agente el cual se convierte en el fármaco original in vivo. Los profármacos son con frecuencia útiles debido a que, en algunas situaciones, pueden ser más fáciles de administrar que el fármaco original. Pueden, por ejemplo estar biodisponibles mediante administración oral, mientras que el fármaco original no. El profármaco también puede mejorar la solubilidad en composiciones farmacéuticas con respecto al fármaco original. Un ejemplo, de manera no exclusiva, de un profármaco puede ser un compuesto de la presente invención que se administra como un éster (el "profármaco"), carbamato o urea. Por ejemplo, un compuesto de Fórmula (I) o (IV), en donde R es -COR6 o -PO(OR5)2> se hidroliza in vivo para generar un compuesto correspondiente de Fórmula (I) o (IV), en donde R es hidrógeno. "PK", se refiere al receptor de la proteína tirosina cinasa (RTK), a la tirosina cinasa no receptora o "celular" (CTK) y las cinasas de serina-treonina (STK). "Método", se refiere a maneras, medios, técnicas y procedimientos para alcanzar una tarea dada, que incluyen, de manera no exclusiva, aquellas maneras, medios, técnicas y procedimientos ya sea conocidos, o rápidamente desarrollados de maneras, medios, técnicas y procedimientos conocidos por practicantes de las técnicas química, farmacéutica, biológica, bioquímica y médica. "Modulación" o "que modula", se refiere a la alteración de la actividad catalítica de las RTK, CTK y STK. En particular, que modula se refiere a la activación de la actividad catalítica de las RTK, CTK y STK, de manera preferida, la activación o inhibición de la actividad catalítica de las RTK, CTK y STK, dependiendo de la concentración del compuesto o sal la cual se expone la RTK, CTK o STK o, de manera más preferida, la inhibición de la actividad catalítica de las RTK, CTK y STK. "Actividad catalítica", se refiere a la velocidad de fosforilación de la tirosina bajo la influencia, directa o indirecta de las RTK y/o CTK, o la fosforilación de la serina y treonina bajo la influencia, directa o indirecta, de las STK. "Poner en contacto", se refiere a llevar un compuesto de esta invención y una PK objetivo juntos, en una manera tal que el compuesto puede afectar la actividad catalítica de la PK, ya sea directamente, es decir, mediante la interacción con la cinasa misma, o indirectamente, es decir, mediante la interacción con otra molécula sobre la cual depende la actividad catalítica de la cinasa. Tal "puesta en contacto", puede ser lograda "in vitro", es decir, en un tubo de prueba, una caja de petri o lo similar. En un tubo de prueba, la puesta en contacto puede involucrar únicamente un compuesto y una PK de interés o puede involucrar células completas. Las células pueden ser mantenidas o crecer en placas de cultivo celular y ponerse en contacto con un compuesto en tal medio. En este contexto, la capacidad de un compuesto particular para afectar el trastorno relacionado con la PK, es decir, el CI50 del compuesto, definida a continuación, puede determinarse antes de intentar utilizar los compuestos in vivo con organismos vivientes más complejos. Para las células fuera del organismo, existen múltiples métodos, y son bien conocidos por aquellos con experiencia en la técnica, para poner las PK en contacto con los compuestos, incluyendo, de manera no exclusiva, la microinyección celular directa y numerosas técnicas de portadores transmembranales. "/n vitro", se refiere a los procedimientos desarrollados en un medio ambiente artificial, tal como, por ejemplo, de manera no exclusiva, en un tubo de prueba o medio de cultivo. '7/7 vivo", se refiere a los procedimientos desarrollados dentro de un organismo viviente tal como, de manera no exclusiva, un ratón, rata o conejo. "Trastorno relacionado con las PK", "trastorno accionado por las PK" y "actividad anormal de las PK", todos se refieren a una condición caracterizada por una actividad catalítica de las PK inapropiada, es decir, sub o más comúnmente, sobreactividad, en donde la PK particular puede ser una RTK, una CTK o una STK. La actividad catalítica inapropiada puede surgir como el resultado de ya sea: (1 ) la expresión de las PK en células, las cuales normalmente no expresan las PK, (2) la expresión incrementada de las PK, lo que conduce a una proliferación, diferenciación y/o crecimiento celular no deseados, o, (3) disminución de la expresión de las PK, lo que conduce a reducciones no deseadas en la proliferación, diferenciación y/o crecimiento celular. Sobreactividad de una PK, se refiere ya sea a la amplificación de un gen que codifica una PK particular o la producción de un nivel de actividad de la PK, el cual puede correlacionarse con un trastorno de proliferación, diferenciación y/o crecimiento celular (que es, conforme el nivel de la PK se incrementa, la severidad de uno o más de los síntomas del trastorno celular se incrementa). La subactividad, es por supuesto, lo inverso, en donde la severidad de uno o más síntomas de un trastorno celular se incrementa conforme el nivel de la actividad de la PK disminuye. "Tratar", "que trata" y "tratamiento", se refiere a un método para aliviar o anular un trastorno celular mediado por la PK y/o sus síntomas concomitantes. Con respecto particularmente al cáncer, estos términos simplemente significan que la expectativa de vida de un individuo afectado con un cáncer puede incrementarse o que uno o más de los síntomas de la enfermedad se reducirán. "Organismo", se refiere a cualquier entidad viviente que comprende al menos una célula. Un organismo viviente puede ser tan simple como, por ejemplo, una sola célula eucariótica o tan complejo como un mamífero, incluyendo un ser humano. "Cantidad terapéuticamente efectiva", se refiere a aquella cantidad del compuesto a ser administrado, la cual aliviará en algún grado, uno o más de los síntomas del trastorno tratado. Con referencia al tratamiento del cáncer, una cantidad terapéuticamente efectiva se refiere a aquella cantidad, la cual tiene el efecto de: (1 ) reducir el tamaño del tumor; (2) inhibir (esto es, hacer más lenta, en algún grado, de manera preferida, detener) la metástasis del tumor; (3) inhibir en algún grado (esto es, hacer más lenta en algún grado, de manera preferida, detener) el crecimiento del tumor, y/o, (4) aliviar en algún grado (o, de manera preferida, eliminar) uno o más de los síntomas asociados con el cáncer. "Verificar", significa observar o detectar el efecto de poner en contacto un compuesto con una célula que expresa una PK particular. El efecto observado o detectado puede ser un cambio en el fenotipo celular, en la actividad catalítica de una PK o un cambio en la interacción de una PK con un asociado de unión natural. Las técnicas para observar o detectar tales efectos son bien conocidas en la técnica. Los efectos anteriormente mencionados se seleccionan de un cambio o una ausencia de cambio en el fenotipo celular, un cambio o ausencia de cambio en la actividad catalítica de la proteína cinasa o un cambio en la interacción de la proteína cínasa con un asociado de unión natural en un aspecto final de esta invención. "Fenotipo celular", se refiere a la apariencia externa de una célula o tejido o la función biológica de la célula o tejido. Los ejemplos, de manera no exclusiva, de un fenotipo celular son el tamaño de la célula, el crecimiento de la célula, la proliferación celular, la diferenciación celular, supervivencia celular, apoptosis y captación y uso de los nutrientes. Tales características fenotípicas son mensurables mediante técnicas bien conocidas en la técnica.

"Asociado de unión natural", se refiere a un polipéptido que se une a una PK particular en una célula. Los asociados de unión naturales pueden jugar un papel en la propagación de señal en los procesos de transducción de señales mediadas por la PK. Un cambio en la interacción del asociado de unión natural con la PK, puede manifestarse por sí mismo como un incremento o disminución de la concentración del complejo de la PK/asociado de unión natural y, como resultado, en un cambio observable, en la capacidad de la PK para mediar la transducción de la señal.

MODALIDADES PREFERIDAS Aunque la definición más amplia se expone en la Breve Descripción de la Invención, se prefieren ciertos compuestos de Fórmula (I) o (IV) expuestos a continuación. a. Un grupo preferido de compuestos es aquél en donde: R1 es hidrógeno, metilo, metoxi, hidroxi, F, Cl o Br. De manera preferida, R1 es hidrógeno o F, de manera más preferida F; y R2 es hidrógeno, metilo, metoxi, hidroxi, F, Cl o Br. De manera preferida, R es hidrógeno o F, de manera más preferida hidrógeno. Dentro de este grupo, uno o más grupos preferidos de compuestos, son aquéllos en donde: R1 está en la posición 5 del anillo de indolinona; y R es hidrógeno, -PO(OH)2, -COGH3, o pirrolidin-1-ilmetilo, de manera más preferida hidrógeno. Dentro de los grupos preferidos y más preferidos mencionados, un grupo de compuestos aún más preferido, es aquél en donde: R3 y R4 son de manera independiente hidrógeno o metilo, de manera más preferida metilo. Dentro de los grupos prefendos y más preferidos y aún más preferidos mencionados, un grupo de compuestos particularmente preferido, es aquél en donde: A es un grupo heterocicloamino de 4 a 6 átomos en el anillo, de manera preferida acetidin-1-ilo, pirrolidin-1 -ilo, piperidin-1-ilo o piperacin-1-ilo; de manera más preferida pirrolidin-1 -ilo; y Het es, ya sea: (i) un heterociclo que contiene de 4 a 6 átomos en el anillo, en donde uno o dos átomos en el anillo se seleccionan del grupo que consiste de nitrógeno, oxígeno o azufre, los átomos restantes en el anillo son carbono. El anillo de heterociclo puede estar sustituido opcionalmente con uno o dos alquilos. De manera preferida, el heterociclo es piperdin-1-ilo, morfolin-4-ilo, tiomorfolin-4-ilo, piperacin-1 -ilo, 2,6-dimetilmorfolin-4-ilo o 2,6-dimetilpiperacin-1 -ilo y se localiza en la posición 3 ó 4 del anillo A; (ii) heteroarilo, de manera preferida piridina, o (iii) heterociclilalquilo, en donde el heterociclo contiene de 4 a 6 átomos en el anillo, en donde uno o dos átomos en el anillo se seleccionan del grupo que consiste de nitrógeno, oxígeno o azufre, los átomos restantes en el anillo son carbono. De manera preferida, el heterociclo es pirrolidin-1 -ilmetilo, pirrolidin-1 -iletilo, pirrolidin-1 -ilmetilo o pirrolidin-1 -iletilo. Aún de manera más preferida, el pirrolidin-1 -ilmetilo, pirrolidin-1 -iletilo, pirrolidin-1 -ilmetilo o pirrolidin- -iletilo está unido en la posición C-2 del pirrolidin-1 -ilo (el anillo A anterior), y la estereoquímica en la posición C-2 del anillo de pirrolidin-1-il (el anillo A) es ya sea R o S. b. Otro grupo preferido de compuestos es aquél en donde: Het es un heterociclo que contiene de 4 a 6 átomos en el anillo, en donde uno o dos átomos en el anillo se seleccionan del grupo que consiste de nitrógeno, oxígeno o azufre, los átomos restantes en el anillo son carbono. El anillo de heterociclo puede estar sustituido opcionalmente con uno o dos alquilos. De manera preferida, el heterociclo es piperidin-1 -ilo, morfolin-4-ilo, tiomorfolin-4-ilo, piperacin-1-ilo, 2,6-dimetilmorfolin-4-ilo o 2,6-dimetilpiperacin-1 -ilo, y se localizan en la posición 3 ó 4 del anillo A. Dentro de este grupo, un grupo más preferido de compuestos, es aquél en donde A es un grupo heteroclicloamino de 4 a 6 átomos en el anillo, de manera preferida acetidin-1-ilo, pirrolidin-1 -ilo, piperidin-1-ilo o piperacin-1 -ilo. Dentro de este grupo, un grupo más preferido de compuestos es aquél en donde. R es hidrógeno; R es flúor y está en la posición 5 del anillo de indolinona.

Los compüestos representativos de esta invención se muestran en el Cuadro 1 , a continuación: CUADRO 1 CUADRO 1 ícontinüación) Utilidad Los compuestos de Fórmula (I) o (IV) inhiben a la VEGFR, PDGFR y c-kit y por lo tanto, son útiles para tratar enfermedades mediadas por la actividad anormal de la VEGFR, PDGFR y/o c-kit. Tales enfermedades incluyen de manera no exclusiva, cánceres tales como aquéllos del linfoma de las células T, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mieloide aguda, melanoma, glioblastoma y otros (véase Bellamy W. T. et al., Cáncer Res. 1999, 59, 728-733). Además, la VEGFR también juega un papel en las enfermedades oculares tales como la retinopatía diabética, isquemia de la retina y neovascularización de la retina. En consecuencia, los compuestos de la presente invención también son útiles en el tratamiento de enfermedades oculares. Se contempla además, que los compuestos de la presente invención pueden inhibir otros receptores de las tirosinas cinasas (RTK), proteínas tirosina cinasas no receptoras (CTK) y proteínas cinasas de serina/treonina (STK). En consecuencia, estos compuestos serían útiles en el tratamiento de enfermedades mediadas por estas cinasas, tales como cáncer, seleccionado del grupo que consiste de carcinoma de las células escamosas, astrocitoma, sarcoma de Kaposi, glioblastoma, cáncer de pulmón, cáncer de vejiga, cáncer de cabeza y cuello, melanoma, cáncer de ovario, cáncer de próstata, cáncer de mama, cáncer de pulmón de las células no pequeñas, glíoma, leucemia mieloide aguda, cáncer colorrectal, cáncer genitourinario y cáncer gastrointestinal, diabetes, un trastorno autoinmune, un trastorno de hiperproliferación, restenosís, fibrosis, soriasis, enfermedad de von Hippel- Lindau, osteoartritis, artritis reumatoide, angiogénesis, un trastorno inflamatorio, un trastorno inmunológico y un trastorno cardiovascular. Otras enfermedades se discuten en la Patente de E.U.A. No. 5,792,783, la descripción de la cual se incorpora aquí como referencia en su totalidad.

Administración y composición farmacéutica Un compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, puede administrarse como tal a un paciente humano, o puede administrarse en composiciones farmacéuticas en las cuales los materiales anteriores se mezclan con portadores o excipientes adecuados. Las técnicas para la formulación y administración de fármacos, pueden encontrarse en "Remington's Pharmacological Sciences", ack Publishing Co., Easton, PA., última edición. Como se utiliza aquí, "administrar" o "administración", se refiere al suministro de un compuesto de Fórmula (I) o (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o de una composición farmacéutica que contiene un compuesto de Fórmula (I) o (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de esta invención, a un organismo para el propósito de prevenir o tratar un trastorno relacionado con las PK. Las rutas adecuadas de administración pueden incluir, de manera no exclusiva, administración oral, rectal, transmucosa o intestinal o inyecciones intramuscular, subcutánea, intramedular, intratecal, intraventricular directa, intravenosa, intravítrea, intraperitoneal, intranasal o intraocular. Las rutas de administración preferidas son la oral y la intravenosa. De manera alterna, uno puede administrar el compuesto de una manera local más que sistémica, por ejemplo, vía inyección del compuesto directamente en un tumor sólido, con frecuencia en un depósito o en formulación de liberación sostenida. Además, uno puede administrar el fármaco en un sistema de suministro del fármaco dirigido, por ejemplo, en un liposoma recubierto con un anticuerpo específico del tumor. Los liposomas serán dirigidos y captados selectivamente por el tumor. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden fabricarse mediante procedimientos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, por medio de procedimientos convencionales de mezclado, disolución, granulación, formación de grageas, levigación, emulsificación, encapsulación, inclusión o liofilización. Las composiciones farmacéuticas para utilizarse de acuerdo con la presente invención pueden formularse de manera convencional utilizando uno o más portadores fisiológicamente aceptables que comprenden excipientes y auxiliares, los cuales facilitan el procesamiento de los compuestos activos en preparaciones que pueden utilizarse farmacéuticamente. La formulación apropiada depende de la ruta de administración elegida.

Para inyección, los compuestos de la invención pueden formularse en soluciones acuosas, de manera preferida en amortiguadores fisiológicamente compatibles tales como solución de Hanks, solución de Ringer o amortiguador de suero fisiológico. Para la administración transmucosa, se utilizan penetrantes apropiados a la barrera a ser permeada en la formulación. Tales penetrantes se conocen generalmente en la técnica. Para la administración oral, los compuestos pueden formularse combinando los compuestos activos con portadores farmacéuticamente aceptables bien conocidos en la técnica. Tales portadores permiten que los compuestos de la invención sean formulados como tabletas, pildoras, pastillas, grageas, cápsulas, líquidos, geles, jarabes, suspensiones acuosas espesas, suspensiones y lo similar, para la ingestión oral por un paciente. Las preparaciones farmacéuticas para uso oral pueden hacerse utilizando un excipiente sólido, moliendo opcionalmente la mezcla resultante, y procesando la mezcla de granulos, después agregando otros auxiliares adecuados si se desea, para obtener núcleos de tabletas o grageas. Los excipientes útiles son, en particular, rellenos tales como azúcares, incluyendo lactosa, sucrosa, manitol o sorbitol, preparaciones de celulosa tales como, por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, y almidón de papa, y otros materiales tales como gelatina, goma de tragacanto, metil celulosa, hidroxipropilmetil celulosa, carboximetilcelulosa sódica y/o polivinil pirrolidona (PVP). Si se desea, pueden agregarse agentes desintegrantes, tales como polivinil pirrolidona reticulada, agar o ácido algínico. También puede utilizarse una sal tal como alginato de sodio. Los núcleos de grageas se proporcionan con recubrimientos adecuados. Para este propósito, pueden utilizarse soluciones concentradas de azúcar, pueden contener opcionalmente goma arábiga, talco, polivinil pirrolidona, gel de carbopol, polietilenglicol y/o dióxido de titanio, soluciones de laca y solventes orgánicos adecuados o mezclas de solventes. Pueden agregarse tintes o pigmentos a los recubrimientos de las tabletas o grageas para la identificación o para caracterizar diferentes combinaciones de dosis del compuesto activo. Las composiciones farmacéuticas que pueden administrarse oralmente, incluyen cápsulas de ajuste a presión, hechas de gelatina, así como cápsulas blandas, selladas, hechas de gelatina y un plastificante, tal como glicerol o sorbitol. Las cápsulas de ajuste a presión pueden contener los ingredientes activos en mezcla con un relleno tal como lactosa, un aglutinante tal como almidón y/o un lubricante tal como talco o estearato de magnesio y, opcionalmente estabilizadores. En las cápsulas blandas, los compuestos activos pueden disolverse o suspenderse en líquidos adecuados, tales como aceites grasos, parafina líquida o polietilenglicoles líquidos. También pueden agregarse estabilizantes a estas formulaciones. Las composiciones farmacéuticas que pueden usarse también, incluyen cápsulas de gelatina dura. Como un ejemplo no limitante, la formulación del producto del fármaco oral de la cápsula del compuesto activo puede ser de concentraciones de dosis de 50 y 200 mg. Las dos concentraciones de dosis se hacen de los mismos gránulos, llenando cápsulas de gelatina dura de diferente tamaño, tamaño 3 para la cápsula de 50 mg y tamaño 0 para la cápsula de 200 mg. La composición de la formulación puede ser, por ejemplo, como se indica en el Cuadro 2.

CUADRO 2 Las cápsulas pueden empacarse en botellas de plástico o vidrio marrón para proteger el compuesto activo de la luz. Los recipientes que contiene la formulación de la cápsula del compuesto activo deben almacenarse a temperatura ambiente controlada ( 5-30°C). Para la administración por inhalación, los compuestos para utilizarse de acuerdo con la presente invención, se suministran de manera conveniente en la forma de un rocío en aerosol, utilizando un embalaje presurizado o un nebulizador y un propulsor adecuado, por ejemplo, de manera no exclusiva, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano o dióxido de carbono. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificación puede controlarse proporcionando una válvula para suministrar una cantidad medida. Las cápsulas y cartuchos de, por ejemplo, gelatina para utilizarse en un inhalador o insuflador, pueden formularse para que contengan una mezcla en polvo del compuesto, y una base en polvo adecuada tal como lactosa o almidón. Los compuestos también pueden formularse para la administración parenteral, por ejemplo, mediante inyección de un bolo o infusión continua. Las formulaciones para la inyección pueden presentarse en una forma de dosificación unitaria, por ejemplo, en ampollas o en recipientes con múltiples dosis, con un preservativo agregado. Las composiciones pueden tomar formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener materiales de la formulación, tales como agentes de suspensión, estabilizantes y/o de dispersión. Las composiciones farmacéuticas para la administración parenteral incluyen soluciones acuosas de una forma soluble en agua, tales como, de manera no exclusiva, una sal del compuesto activo. Adicionalmente, pueden prepararse suspensiones de los compuestos activos en un vehículo lipofílico. Los vehículos lipofílicos adecuados incluyen aceites grasos, tales como aceite de sésamo, ésteres sintéticos de ácidos grasos, tales como oleato de etilo y triglicéridos, o materiales tales como liposomas.

Las suspensiones acuosas para inyección pUeden contener sustancias que incrementen la viscosidad de la suspensión, tales como carboximetil celulosa sódica, sorbitol o dextrano. Opcionalmente, la suspensión puede contener estabilizantes y/o agentes adecuados que incrementen la solubilidad de los compuestos para permitir la preparación de soluciones altamente concentradas. De manera alterna, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo para la constitución con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua estéril, libre de pirógenos, antes del uso. Los compuestos pueden formularse también en composiciones rectales tales como supositorios o enemas de retención, utilizando, por ejemplo, bases para supositorios convencionales, tales como manteca de cacao u otros glicéridos. Además de las formulaciones descritas previamente, los compuestos pueden formularse también como preparaciones de depósito. Tales formulaciones que actúan a largo plazo, pueden administrarse mediante implante (por ejemplo, subcutánea o intramuscularmente), por inyección intramuscular. Un compuesto de esta invención puede formularse para esta ruta de administración con materiales poliméricos o hidrofóbicos adecuados (por ejemplo, en una emulsión con un aceite farmacológicamente aceptable), con resina de intercambio de iones, o como derivados poco solubles tales como, de manera no exclusiva, una sal poco soluble.

Un ejemplo no limitante de un portador farmacéutico para los compuestos hidrofóbicos de la invención, es un sistema cosolvente que comprende alcohol bencílico, un tensioactivo no polar, un polímero orgánico miscible en agua y una fase acuosa tal como un sistema cosolvente VPD. El VPD es una solución de 3% peso/volumen de alcohol bencílico, 8% peso/volumen del tensioactivo no polar Polisorbato 80 y 65% peso/volumen de polietilenglicol 300, aforado a un volumen de etanol absoluto. El sistema cosolvente VPD (VPD:D5W) consiste de VPD diluido 1 :1 con una solución de dextrosa al 5% en agua. Este sistema cosolvente disuelve bien los compuestos hidrofóbicos, y él mismo produce baja toxicidad tras la administración sistémica. Naturalmente, las composiciones de tal sistema cosolvente pueden variarse considerablemente sin destruir sus características de solubilidad y toxicidad. Además, la identidad de los componentes del cosolvente pueden variar: por ejemplo, pueden utilizarse otros tensioactivos no polares de baja toxicidad en lugar del Polisorbato 80, el tamaño de la fracción de polietilenglicol puede variar, otros polímeros biocompatibles pueden reemplazar al polietilenglicol, por ejemplo, polivinil pirrolidona, y otros azúcares o polisacáridos pueden sustituir a la dextrosa. De manera alterna, pueden emplearse otros sistemas de suministro para los compuestos farmacéuticos hidrofóbicos. Los liposomas y emulsiones son ejemplos bien conocidos de vehículos o portadores de suministro para fármacos hidrofóbicos. Además, también pueden emplearse ciertos solventes orgánicos tales como sulfóxido de dimetilo, aunque con frecuencia a un costo de mayor toxicidad. Adicionalmente, los compuestos pueden suministrarse utilizando un sistema de liberación sostenida, tal como matrices semipermeables de polímeros hidrofóbicos sólidos que contienen el agente terapéutico. Se han establecido varios materiales de liberación sostenida y son también conocidos por aquellos con experiencia en la técnica. Las cápsulas de liberación sostenida pueden, dependiendo de su naturaleza química, liberar los compuestos durante pocas semanas hasta por 100 días. Dependiendo de la naturaleza química y de la estabilidad biológica del reactivo terapéutico, pueden emplearse estrategias adicionales para la estabilización de la proteína. Las composiciones farmacéuticas de la presente, también comprenden portadores o excipientes adecuados en fase gel o sólida. Los ejemplos de tales portadores o excipientes incluyen, de manera no exclusiva, carbonato de calcio, fosfato de calcio, varios azúcares, almidones, derivados de celulosa, gelatina, y polímeros tales como polietilenglicoles. Muchos de los compuestos que modulan las PK de la invención, pueden proporcionarse como sales fisiológicamente aceptables, en donde el compuesto reclamado puede formar las especies cargadas negativa o positivamente. Los ejemplos de sales en las cuales el compuesto forma la porción cargada positivamente incluyen, de manera no exclusiva, amonio cuaternario (definido aquí en algún otro lugar), sales tales como clorhidrato, sulfato, carbonato, lactató, tartrato, malato, maleato, succinato, en donde el átomo de nitrógeno del grupo amonio cuaternario es un nitrógeno del compuesto seleccionado de esta invención, el cual ha reaccionado con el ácido apropiado. Las sales en las cuales un compuesto de esta invención forma las especies cargadas negativamente incluyen, de manera no exclusiva, las sales de sodio, potasio, calcio y magnesio formadas por la reacción de un grupo de ácido carboxílico en el compuesto con una base apropiada (por ejemplo, hidróxido de sodio (NaOH), hidróxido de potasio (KOH), hidróxido de calcio (Ca(OH)2), etc.). Las composiciones farmacéuticas adecuadas para utilizarse en la presente invención incluyen composiciones en donde los ingredientes activos están contenidos en una cantidad suficiente para lograr el propósito pretendido, por ejemplo, la modulación de la actividad de las PK o el tratamiento o la prevención de un trastorno relacionado con las PK. Más específicamente, una cantidad terapéuticamente efectiva, significa una cantidad de compuesto efectiva para prevenir, aliviar o aminorar los síntomas de enfermedad o prolongar la supervivencia del sujeto siendo tratado. La determinación de una cantidad terapéuticamente efectiva está dentro de la capacidad de aquellos con experiencia en la técnica, especialmente a la luz de la descripción detallada proporcionada aquí. Para cualquier compuesto utilizado en los métodos de la invención, la cantidad o dosis terapéuticamente efectiva puede estimarse ¡nicialmente a partir de ensayos de cultivo celulares. A continuación, la dosificación puede formularse para utilizarse en modelos animales para lograr un intervalo de concentración circulante que incluya la Cl50 como se determinó en el cultivo celular (es decir, la concentración del compuesto de prueba que logra una inhibición máxima de la mitad de la actividad de la PK). Tal información puede utilizarse entonces para determinar más exactamente las dosis en humanos. La toxicidad y eficacia terapéutica de los compuestos descritos aquí puede determinarse mediante los procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos celulares o animales experimentales, por ejemplo, determinando la Cl50 y la LD50 (ambas de las cuales se discuten en otro lugar aquí), para un compuesto objeto. Los datos obtenidos de estos ensayos de cultivos celulares y estudios animales pueden utilizarse para formular un intervalo de dosis para utilizarse en humanos. La dosis puede variar dependiendo de la forma de dosificación empleada y de la ruta de administración utilizada. La formulación exacta, ruta de administración y dosis, pueden elegirse por el médico individual en vista de la condición del paciente. (Véase, por ejemplo, Fingí, et al., 1975, en "The Pharmacological Basis of Therapeutics", Cap. 1 p. 1 )· La cantidad e intervalo de las dosis puede ajustarse individualmente para proporcionar niveles en el plasma de las especies activas que sean suficientes para mantener los efectos que modulan la cinasa. Estos niveles en plasma son referidos como las concentraciones efectivas mínimas (MEC). La MEC variará para cada compuesto, pero puede estimarse de los datos in vitro, por ejemplo, la concentración necesaria para alcanzar 50-90% de inhibición de una cinasa puede discernirse utilizando los ensayos descritos aquí. Las dosis necesarias para alcanzar la MEC dependerán de las características individuales y de la ruta de administración. Pueden utilizarse ensayos o bioensayos con HPLC para determinar las concentraciones en el plasma. Los intervalos de las dosis también pueden determinarse utilizando el valor de la MEC. Los compuestos deben administrarse utilizando un régimen que mantenga los niveles de plasma por encima de la MEC durante 10-90% del tiempo, de manera preferida entre 30-90%, y de manera aún más preferida entre 50-90%. En la actualidad, las cantidades terapéuticamente efectivas de compuestos de Fórmula (I) o (IV), pueden variar de aproximadamente 25 mg/m2 a 1500 mg/m2 por día; de manera preferida, aproximadamente 200 mg/m2/día. En casos de administración local o captación selectiva, la concentración local efectiva del fármaco puede no relacionarse con la concentración en el plasma y pueden emplearse otros procedimientos conocidos en la técnica para determinar la cantidad e intervalo correctos de la dosis.

La cantidad de una composición administrada por supuesto, será dependiente del sujeto siendo tratado, la severidad de la aflicción, la manera de administración, el juicio del médico que prescribe, etc. Las composiciones pueden, si se desea, presentarse en un empaque o dispositivo distribuidor, tal como un equipo aprobado por la FDA, que puede contener una o más formas de dosificación unitarias que contengan el ingrediente activo. El empaque puede comprender, por ejemplo, hojas de metal o plástico, tal como en un empaque vesicular. El empaque o dispositivo distribuidor puede acompañarse por instrucciones para la administración. El empaque o distribuidor también puede acompañarse por una nota asociada con el recipiente en una forma prescrita por una agencia gubernamental que regule la fabricación, uso o venta de productos farmacéuticos, nota la cual refleja la aprobación de la agencia de la forma de las composiciones o de la administración humana o veterinaria. Tal nota, por ejemplo, puede ser la etiqueta aprobada por la Administración de Alimentos y Fármacos de E.U.A., para la prescripción de fármacos o un inserto del producto aprobado. Las composiciones que comprenden un compuesto de la invención formulado en un portador farmacéuticamente compatible también pueden prepararse, colocarse en un recipiente apropiado y etiquetarse para el tratamiento de una condición indicada. Las condiciones adecuadas indicadas en la etiqueta pueden incluir el tratamiento de un tumor, inhibición de angiogénesis, tratamiento de fibrosis, diabetes y lo similar.

Es también un aspecto de esta invención que un compuesto descrito aquí, pueda combinarse con otros agentes quimioterapéuticos para el tratamiento de las enfermedades y trastornos discutidos anteriormente. Por ejemplo, un compuesto, sal o profármaco de esta invención puede combinarse con agentes alquilantes tales como fluorouracilo (5-FU) solo o en combinación adicional con leucovorina; u otros agentes alquilantes tales como, de manera no exclusiva, otros análogos de pirimidina tales como UFT, capecitabina, gemcitabina y citarabina, los sulfonatos de alquilo, por ejemplo, busulfan (utilizado en el tratamiento de la leucemia granulocítica crónica), improsulfan y píposulfan; aziridinas, por ejemplo, benzodepa, carbocuona, meturedepa y uredepa; etileniminas y metilmelaminas, por ejemplo, altretamina, trietilenmelamina, trietilenfosforamida, trietilentiofosforamida y trimetilolmelamina; y las mostazas nitrogenadas, por ejemplo, mostazas de clorambucilo (utilizada en el tratamiento de la leucemia linfocítica crónica, la macroglobulinemia primaria y linfoma de no de Hodgkin), ciclofosfamida (utilizada en el tratamiento de la enfermedad de Hodgkin, mieloma múltiple, neuroblastoma, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de pulmón, tumor de Wilm y rabdomiosarcoma), estramustina, ¡fosfamida, novembriquina, prednimustina y uracilo (utilizado en el tratamiento de trombocitosis primaría, linfoma no de Hodgkin, enfermedad de Hodgkin y cáncer de ovario); y triacinas, por ejemplo, dacarbacina (utilizada en el tratamiento del sarcoma del tejido blando).

Un compuesto de esta invención también puede utilizarse en combinación con otros agentes quimioterapéuticos antimetabolitos, tales como, de manera no exclusiva, análogos del ácido fólico, por ejemplo, metotrexato (utilizado en el tratamiento de la leucemia linfocítica aguda, coriocarcinoma, mucosis fungoide, cáncer de mama, cáncer de cabeza y cuello y sarcoma osteogénico) y pteropterina; y los análogos de purina tales como la mercaptopunna y la tioguanina que encuentran uso en el tratamiento de las leucemias granulocítica aguda, linfocítica aguda y granulocítica crónica. Está contemplado que un compuesto de esta invención también puede utilizarse en combinación con agentes quimioterapéuticos basados en productos naturales, tales como, de manera no exclusiva, los vincaalcaloides, por ejemplo, vinblastina (utilizada en el tratamiento del cáncer de mama y testicular), vincristina y vindesina; las epipodofilotoxinas, por ejemplo, etopósido y tenipósido, ambos de los cuales son útiles en el tratamiento del cáncer testicular y el sarcoma de Kaposi; los agentes quimioterapéuticos antibióticos, por ejemplo, daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, mitomicina (utilizada para tratar cáncer de estómago, cervix, colon, mama, vejiga y páncreas), dactinomicina, temozolomida, plicamicina, bleomicina (utilizada en el tratamiento de cáncer de la piel, del esófago y del tracto genitourinario); y agentes quimioterapéuticos enzimáticos, tales como la L-asparaginasa. Además de lo anterior, un compuesto de esta invención podría utilizarse también en combinación con los complejos de coordinación del platino (cisplatina, etc.); ureas sustituidas, tales como la hidroxiurea; derivados de metilhidracina, por ejemplo, procarbacina; supresores adrenocorticales, por ejemplo, mitotano, aminoglutetimida; y hormonas y antagonistas de las hormonas tales como los adrenocorticosteroides (por ejemplo, prednisona), progestinas (por ejemplo, caproato de hidroxiprogesterona); estrógenos (por ejemplo, dietilestilbesterol); antiestrógenos tales como el tamoxifeno; andrógenos, por ejemplo, propionato de testosterona e inhibidores de la aromatasa tales como el anastrozol. Finalmente, también se contempla también que la combinación de un compuesto de esta invención será efectiva en combinación con Endostatin®, Gleevec®, Camptosar®, Herceptin®, Imclone C225, mitoxantrona o paclitaxel para el tratamiento de cánceres de tumores sólidos o leucemias, tales como, de manera no exclusiva, leucemia mielógena aguda (no linfocítica). Los compuestos de esta invención también pueden utilizarse con un inhibidor de la COX-2. Para las terapias de combinación y las composiciones farmacéuticas descritas aquí, las cantidades efectivas del compuesto de la invención y del agente quimioterapéutico u otro agente útil para inhibir el crecimiento celular anormal (por ejemplo, otro agente antiproliferativo, antiagiogénico, inhibidor de la transducción de la señal o promotor del sistema inmune), pueden determinarse por aquéllos con experiencia ordinaria en la técnica, basándose en las cantidades efectivas para el compuesto descrito aquí y aquéllas conocidas o descritas para el agente quimioterapéutico u otro agente. Las formulaciones y rutas de administración para tales terapias y composiciones pueden basarse en la información descrita aquí para las composiciones y terapias que comprenden el compuesto de la invención como un solo agente activo y con la información proporcionada para el agente quimioterapéutico u otro agente en combinación con el mismo.

EJEMPLOS Las siguientes preparaciones y ejemplos se dan para permitir a aquéllos con experiencia en la técnica, entender y practicar más claramente la presente invención. No deben considerarse como que limitan el alcance de la invención, sino meramente como ilustrativos y representativos de la misma.

EJEMPLOS SINTETICOS Los números de Ejemplo dados a continuación corresponden a los números del compuesto en el Cuadro 1 .

EJEMPLO 2 Síntesis de la (3Z)-3^f3,5-dimetiM-(morfolin-4-¡l)p¡peridin-1-¡lcarbonil1- 1 H-pirrol-2-iimetil¡den -5-fluoro-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona Paso 1 A una mezcla agitada de 4-am¡no-1 -bencilpiperidina (Aldrich, 1.53 mL, 7.5 mimóles), K2C03 (2.28 g, 16.5 mmoles) y dimetilformamida (DMF) (15 mL) calentada a 50°C, se agregó gota a gota durante 60 minutos éter de bis(2-bromoetilo) (Aldrich, tec. 90%, 0.962 mL, 7.65 mmoles). Después de agitar 6 horas a 80°C, la TLC (90:10:1 de cloroformo/MeOH/NH4OH concentrado acuoso), indicó la formación de una nueva mancha. El calentamiento continuó hasta que el solvente se evaporó mediante soplado con una corriente de nitrógeno durante 2 horas. El material crudo era relativamente puro, pero se sometió a una columna de gel de sílice relativamente corta (gradiente de 1 % a 6% de 9:1 MeOH/NH4OH acuoso en cloroformo). La evaporación de las fracciones puras proporcionó -1.7 g de la diamin 4-(morfolin-4-il)-1 -bencilpiperidina como una sólido ceroso. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d 7.31 (m, 4H), 7.26 (m 1 H), 3.72 (t, J = 4.7 Hz, 4H), 3.49 (s, 2H), 2.94 (d amplio, J = 5.9 Hz, 2H), 2.54 (t, J = 4.7 Hz, 4H), 2.19 (tt, J = 1 1.5, 3.9 Hz, 1 H), 1 .96 (td, J = 1 1.7, 2.2 Hz, 2H), 1.78 (d amplio, J = 12.5 Hz, 2H), 1 .55 (m, 2H).

Paso 2 Una mezcla agitada de Pd(OH)2 (20% sobre carbono (<50% de humedad), 390 mg, 25% en peso), metanol (50 mL) y < HCI 1 .7 M (3 equivalentes, -10.6 mL - incluyendo el agua agregada después cuando se observó ppt) bajo nitrógeno, se intercambió a una atmósfera de hidrógeno a 1 atm., lavando abundantemente (-20 segundos), utilizando un balón de nitrógeno en el recipiente y afuera a través de un burbujeador de aceite. Después de 20 minutos, la mezcla de reacción bajo hidrógeno se calentó a 50°C y se agregó gota a gota 4-(morfolin-4-il)-1 -bencilpiperidina (1.56 g, 6.0 mmoles) en metanol (8 mL) durante 30 minutos. Después de 10 horas, la tic indicó que toda la amina de inicio se había consumido a una mancha más polar (ninhidrina activa). A continuación, la mezcla de reacción fue filtrada a través de Celite y se evaporó para proporcionar el clorhidrato de la 4-(morfolin-4-¡l)piperidina como un sólido blanco mate. Este material se sometió liberación de la base utilizando un exceso de resina básica (> 16 g, Bio-Rad Laboratories, AG1 -X8, malla 20-50, forma hidróxido, lavada con metanol dos veces), y una mezcla metanólica del clorhidrato de la amina. Después de agitar con turbulencia con la resina durante 30 minutos, la solución metanólica se decantó y evaporó para proporcionar 932 mg de la base libre de 4-(morfolin-4-il)p¡perid¡na como un sólido cristalino ceroso. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d 3.53 (s amplio, 4H), 3.30 (v s amplio, 1 H(+H20)), 2.92 (d amplio, J = 11.7 Hz, 1 H), 2.41 (s, 4H), 2.35 (-obscurecido t, J = 1 1.7 Hz, 2H), 2.12 (t amplio, 1 H), 1.65 (d amplio, = 1 1.7 Hz, 2H), 1 .18 (c amplio, J = 10.9 Hz, 2H); LCMS-APCI m/z 171 [M+1]+.

Paso 3 La (3Z)-3-(3,5-dimetil-4-carboxi-1 H-pirrol-2-ilmetiliden)-5-fluoro-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona (120 mg, 0.40 mmoles), se preparó como se describe en la Solicitud del PCT publicada WO 01/60814 y BOP (221 mg, 0.50 mmoles) se suspendieron en DMF (5 ml_) con buena agitación a temperatura ambiente y se agregó trietilamina (134 µ?_, 0.96 mmoles). Después de 10-15 minutos, se agregó a la mezcla de reacción homogénea la 4-(morfolin-4-il)piperidina (85 mg, 0.50 mmoles) toda a la vez. La mezcla de reacción se agitó durante 48 horas (puede hacerse mucho antes), a continuación se transfirió a un embudo que contiene cloroformo-isopropanol (5/1 ) y 5% de LiCI acuoso. La fase orgánica anaranjada turbia se separó, se lavó con LiCI (2X) acuoso al 5% adicional, NaOH (3X) acuoso 1 M, NaCI (1 X) saturado acuoso, y a continuación se secó (Na2S04) y se evaporó para proporcionar el producto crudo (96.3% puro; trazas de hexametilfosforamida (HMPA) mediante 1H RMN). Este producto crudo fue entonces purificado adicionalmente haciéndolo pasar a través de una columna muy corta (3 cm) de gel de sílice (gradiente de 5 al 15% de MeOH en diclorometano (DCM)), en donde se removió una traza del isómero 3E que se mueve más rápido. Las fracciones puras se evaporaron y se recristalizaron durante la noche a partir de una solución saturada de EtOAc, la cual se diluyó con Et2O (~3 veces) y se enfrió a 0°C. El licor madre se decantó para proporcionar, después de vacío completo, el compuesto deseado como cristales anaranjados (153 mg, 85%). 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d 13.60 (s, 1 H), 10.87 (s, 1 H), 7.72 (dd, J = 9.4, 2.7 Hz, 1 H), 7.68 (s, 1 H), 6.91 (td, J = 9.3, 2.6 Hz, 1 H), 6.82 (dd, J = 8.6, 4.7 Hz, 1 H), 3.54 (app t amplio, J = 4.3 Hz, 4H), 3.31 (2x s, 3H+3H), 2.43 (s amplio, 4H), 2.36 (m, 1 H), 2.25 (m amplio, 6H), 1.79 (s amplio, 2H), 1.22 (s amplio, 2H); LCMS m/z 453 [M+1]+.

EJEMPLO 1 Procediendo como se describió en el Ejemplo 2 anterior, pero sustituyendo la (3Z)-3-(3,5-dimetil-4-carboxi-1 H-pirrol-2-ilmetiliden)-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona por la (3Z)-3-(3,5-dimetil-4-carboxi-1 H-pirrol-2-ilmetiliden)-5-fluoro-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona, proporcionó la (3Z)-3-{[3,5-dimetil-4-(morfolin-4-il)piperidin-1-ilcarbonil]-1 H-pirrol-2-ilmetil¡den}-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d 13.55 (s, 1 H), 10.87 (s, 1 H), 7.74 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.59 (s, 1 H), 7.1 1 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 6.97 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 6.86 (d, J = 7.4 Hz, 1 H), 3.54 (app t amplio, J = 4.3 Hz, 4H), 3.31 (2x s, 3H+3H), 2.43 (s amplio, 4H), 2.35 (m, 1 H), 2.28 (m amplio, 6H), 1.79 (s amplio, 2H), 1 .22 (s amplio, 2H); LCMS m/z 435 [ +1]+.

EJEMPLO 3 Procediendo como se describió en el Ejemplo 2 anterior, pero sustituyendo la (3Z)-3-(3,5-dimetil-4-carboxi-1 H-pirrol-2-ilmetiliden)-5-cloro-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona por la (3Z)-3-(3,5-dimetil-4-carboxi-1 H-pirrol-2-ilmeti iden)-5-fluoro-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona, proporcionó la (3Z)-3-{[3,5-dimetil-4-(morfolin-4-il)piperidin-1-ilcarbonil]-1 H-pirrol-2-ilmetiliden}-5-cloro-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona. 1H R N (400 MHz, d6-DMSO) d 13.56 (s, 1 H), 10.97 (s, 1 H), 7.95 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 7.74 (s, 1 H), 7.1 1 (dd, J = 8.2, 2.0 Hz, 1 H), 6.85 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 3.54 (app t amplio, J = ~4 Hz, 4H), 3.31 (2x s, 3H+3H), 2.43 (s amplio, 4H), 2.37 (m, 1 H), 2.25 (m amplio, 6H), 1.79 (s amplio, 2H), 1.23 (s amplio, 2H); LCMS m/z 470 [M+1]+.

EJEMPLO 4 Procediendo como se describió en el Ejemplo 2 anterior, pero sustituyendo la 4-(morfolin-4-il)-piperidina con la 4-(1 -pirrolidinil)-piperidina comercialmente disponible, proporcionó la (3Z)-3-[3,5-dimetil-4-[4-(pirrolidin-1- ¡l)p¡per¡din-1 -ilcarbonil]-1 H-pirrol-2-il)metiliden]-5-fluoro-1 ,3-dih¡dro-2H-indol-2-ona. 1H RMN (400 MHz, d6-D SO) mezcla isomérica E/Z; LCMS m/z 437 [M+1 ]+.

EJEMPLO 18 Procediendo como se describió en el Ejemplo 2 anterior, pero sustituyendo la (3Z)-3-(3,5-dimetil-4-carboxi-1 H-pirrol-2-ilmetiliden)-5-fluoro-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona por la (3Z)-3-(3,5-dimetil-4-carboxi-1 H-pirrol-2-ilmetiliden)-6-fluoro-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona, proporcionó la (3Z)-3-{[3,5-dimetil-4-(morfolin-4-il)piper¡din-1 -ilcarbonil]-1 H-pirrol-2-ilmetiliden}-6-fluoro-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d 13.41 (s, 1 H), 1 1.02 (s, 1 H), 7.79 (dd, J = 8.2, 5.5 Hz, 1 H), 7.60 (s, 1 H), 6.81 (ddd, J = -1 1 , 8.6, 2.5 Hz, 1 H), 6.70 (dd, J = 9.0, 2.3 Hz, 1 H), 3. 56 (app t amplio, J = ~4 Hz, 4H), 2.45 (s amplio, 4H), 2.37 (m, 1 H), 2.26 (m amplio, 6H), 1.81 (s amplio, 2H), 1.25 (s amplio, 2H); LCMS m/z 453 [M+1]+.

EJEMPLO 19 Procediendo como se describió en el Ejemplo 2 anterior, pero sustituyendo la (3Z)-3-(3,5-dimetil-4-carboxi-1 H-pirrol-2-ilmetiliden)-6-cloro-1 ,3-d¡hidro-2H-¡ndol-2-ona por la (3Z)-3-(3,5-dimetil-4-carbox¡-1 H-pirrol-2-ilmet¡liden)-5-fluoro-1 ,3-d¡h¡dro-2H-¡ndol-2-ona, proporcionó la (3Z)-3-{[3,5-dimetil-4-(morfolin-4-il)piperidin-1 -ilcarbonil]-1 H-pirrof-2-ilmetiliden}-6-cloro-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d 13.46 (s, 1 H), 1 1.02 (s, 1 H), 7.79 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 7.66 (s, 1 H), 7.03 (dd, J = 8.2, 2.0 Hz, 1 H), 6.89 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 3.56 (app t amplio, J = ~4 Hz, 4H), 2.45 (s amplio, 4H), 2.37 (m, 1 H), 2.26 (m amplio, 6H), 1.81 (s amplio, 2H), 1.25 (s amplio, 2H); LCMS m/z 469 [M+1]+.

EJEMPLO 26 Procediendo como se describió en el Ejemplo 2 anterior, pero sustituyendo la (3Z)-3-(3,5-dimetil-4-carboxi-1 H-pirrol-2-ilmetiliden)-6-bromo-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona por la (3Z)-3-(3,5-dimetil-4-carboxi-1 H-pirrol-2-ilmetiliden)-5-fluoro-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona, proporcionó la (3Z)-3-{[3,5-dimetil-4-(morfolin-4-il)piperidin-1 -ilcarbonil]-1 H-pirrol-2-ilmetiliden}-6-bromo-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 13.26 (s, 1 H), 9.43 (s, 1 H), 7.23 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 7.21 (s, 1 H), 7.10 (dd, J = 8.2, 2.0 Hz, 1 H), 6.95 (d, J = 1.6 Hz, 1 H), 3.73 (m, 4H), 2.56 (s amplio, 4H), 2.37 (m amplio, 6H), 2.22 (m amplio, 4H), 1.9 (s amplio, 2H), 1.4 (s amplio, 2H); LCMS m/z 513, 515 [M+1]+.

EJEMPLO 6 Síntesis de la (3Z)-3-(r3,5-dimetil^-(morfolin-4-il)acetidin-1 -ilcarbon¡n-1 H- pirrol-2-ilmetiliden>-5-fluoro-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona Paso 1 Una solución de 1 -azabiciclo[1 .1 .0]butano, preparada a partir del bromhidrato de la 2,3-dibromopropilamina (58.8 mmoles), de acuerdo al procedimiento conocido descrito en Tetrahedron Lett. 40: 3761 -64 (1999), se agregó lentamente a una solución de morfolina (15.7 mi; 180 mmoles) y ácido sulfúrico (3.3 g de solución al 96%) en etanol no desnaturalizado anhidro (250 mi) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó en un baño de hielo durante 30 minutos, a continuación a temperatura ambiente durante 8 horas. Se agregaron hidróxido de calcio (5.5 g) y 100 mi de agua, y la suspensión obtenida se agitó durante 1 hora, y a continuación se filtró a través de una almohadilla de celite. El filtrado se concentró y destiló a presión reducida (20 mm Hg) para remover el agua y el exceso de morfolina. El residuo de la destilación se volvió a destilar al alto vacío utilizando un aparato Kugeirohr para obtener una 4-(acét¡dín-3-il)morfolina pura en un rendimiento del 33% (2.759 g) como un liquido oleoso incoloro. 13C-RMN (CDCI3, 100 MHz): d 66.71 (2C), 59.37 (1 C), 51.46 (2C), 49.95 (2C) 1H (CDCI3, 400 MHz): d 3.727 (t, J = 4.4 Hz, 4H), 3.619 (t, J = 8Hz, 2H), 3.566 (t, J = 8Hz, 2H), 3.227 (m, J = 7Hz, 1 H), 2.895 (s amplio, 1 H), 2.329 (s amplio, 4H).

Paso 2 Se suspendió el éster de 1 -(8-azabenztriazolilo) de la (3Z)-3-({3,5-dimetil-4-carboxi]-1-H-pirrol-2-il}metilen)-5-fluoro-1.3-dihidro-2H-indol-2-ona (0.5 mmoles, 210 mg) [preparado mediante activación de la (3Z)-3-(3,3-dimetil-4-carboxi-1 -H-pirrol-2-ilmetilen)-5-fluoro-1.3-dihidro-2H-indol-2-ona (480 mg; 1 .6 mmoles) con el reactivo HATU (570 mg, 1.5 mmoles), en la presencia de una base de Hunig (3.0 mmoles, 0.525 mi) en DMF (5ml) y aislado en su forma pura mediante la precipitación con cloroformo (5 mi) y secado al alto vacío en un rendimiento del 92% (579 mg)] en DMA anhidro (1.0 mi). Una solución de 4-(acetidin-3-il)-morfolina; (142.5 mg, 1 mmol) en DMA anhidro (1.0 mi), se agregó en una porción y la solución obtenida se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. La mezcla de reacción se evaporó a temperatura ambiente utilizando una bomba de aceite, el residuo espeso se diluyó con 6 mi de una mezcla de metanol más dietil amina (20:1 ; v/v), se inoculó mecánicamente y se colocó en un refrigerador (+3°C) durante 8 horas. Los precipitados se filtraron (con un ligero lavado con metanol enfriado con hielo), y se secaron al alto vacío para proporcionar el producto deseado. 71 .5% de rendimiento (152 mg de un sólido anaranjado) LC/MS: +APCI: M+1 = 425; -APCI: M-1 = 423. 19F-RMN (d-DMSO, 376.5 MHz): d -122.94 (m, 1 F). 1H (d-DMSO, 400 MHz): d 13.651 (s, 1 H), 10.907 (s, 1 H), 7.754 (dd, J = 9.4 Hz, J = 2.4 Hz, 1 H), 7.700 (s, 1 H), 6.935 (dt, J = 8.2 Hz, J = 2.4 Hz, 1 H), 6.841 (dd, J = 8.6 Hz, J = 3.9Hz; 1 H), 3.963 (s amplio, 2H), 3.793 (s amplio, 2H), 3.581 (t amplio, J = 4.3 Hz, 4H), 3.133 (m, 1 H), 2.367 (s, 3H), 2.340 (s, 3H), 2.295 (s amplio, 4H).

EJEMPLO 7 Procediendo como se describió en el Ejemplo 6 anterior, pero sustituyendo la (3Z)-3-(3,5-dimetil-4-carboxi-1 H-pirrol-2-ilmetiliden)-5-fluoro-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona con la (3Z)-3-(3,5-dimetil-4-carboxi-1 H-pirrol-2-ilmet¡liden)-5-cloro-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona, proporcionó la (3Z)-3-{[3-(morfol¡n-4-il)acetidin-1 -ilcarbonil]-1 H-pirrol-2-ilmetiliden}-5-cloro-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona como un sólido anaranjado. LC/MS: +APCI:M+1 = 441 ; -APCI: M-1 = 440, 441 H (d-DMSO, 400 MHz): d 13.607 (s, 1 H), 1 1.006 (s. 1 H), 7.976 (d, J = 2.0Hz, 1 H), 7.756 (s, 1 H), 7.136 (dd, J = 8.2 Hz, J = 2.0 Hz, 1 H), 6.869 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 3.964 (s amplio, 2H), 3.793 (s amplio, 2H), 3.582 (t amplio, J = 4.3 Hz, 4H), 3.134 (ri , 1 H), 2.369 (s, 3H), 2.347 (s, 3H), 2.296 (s amplio, 4H).

EJEMPLO 8 Procediendo como se describió en el Ejemplo 6 anterior, pero utilizando la 4-(acetidin-3-il)-cis-3,5-dimetilmorfolina (preparada en un procedimiento análogo a la preparación de la 4-(acet¡din-3-il)-morfolina, pero utilizando la cis-3,5-dimetilmorfolina (20.7g; 180 mmoles) en lugar de morfolina), proporcionó la (3Z)-3-{[3,5-dimetil-4-(2,5-dimetilmorfolin-4-il)acetidin-1 -ilcarbonil]-1 H-pirrol-2-ilmetiliden}-5-fluoro-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona como un sólido anaranjado. LC/MS: +APCI: M+1 = 453; -APCI: M-1 = 451. 19F-RMN (d-DMSO, 376.5 MHz): d -122.94 (m, 1 F). 1H (d-DMSO, 400 MHz): d 13.651 (s, 1 H), 10.907 (s; 1 H), 7.758 (dd, J = 9.4 Hz, J = 2.3 Hz; 1 H), 7.700 (s, 1 H), 6.935 (dt, J = 8.6 Hz, J = 2.7 Hz, 1 H), 6.842 (dd, J = 8.2 Hz, J = 4.3 Hz, 1 H), 3.961 (s amplio, 2H), 3.790 (s amplio, 2H), 3.546 (m amplio, 2H), 3.092 (m, H), 2.690 (s amplio; 2H), 2.364 (s, 3H), 2.338 (s, 3H), 1.492 (m amplio, 2H), 1.038 (s amplio, 6H).

EJEMPLO 9 Procediendo como se describió en el Ejemplo 6 anterior, pero sustituyendo la (3Z)-3-(3,5-dimetil-4-carboxi-1 H-pirrol-2-ilmetiliden)-5-fluoro-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona con la (3Z)-3-(3,5-dimetil-4-carboxi-1 H-pirrol-2-¡lmetiliden)-5-cloro-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona y la 4-(acetidin-3-il)morfolina con la 4-(acetidin-3-il)-cis-3,5-dimetilmorfolina, proporcionó la (3Z)-3-{[3,5-dimetil-4-(3,5-dimetilmorfolin-4-il)acetidin-1 -ilcarbonil]-1 H-pirrol-2-ilmetiliden}-5-cloro-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona como un sólido anaranjado. LC/MS: +APCI:M+1 = 469, 470; -APCI: M-1 = 468, 469. 1H (d-DMSO, 400 MHz): d 13.606 (s, 1 H), 1 1.008 (s, 1 H), 7.979 (d, J = 2.0Hz, 1 H), 7.758 (s, 1 H), 7.138 (dd, J = 8.2Hz, J = 2.0Hz, 1 H), 6.870 (d, J = 8.2Hz, 1 H), 3.964 (s amplio, 2H), 3.790 (s amplio, 2H), 3.547(m amplio, 2H), 3.095 (m, 1 H), 2.691 (s amplio, 2H), 2.366 (s, 3H), 2.345 (s, 3H), 1.494 (m amplio, 2H), 1 .039 (s amplio, 6H).

EJEMPLO 10 Procediendo como se describió en el Ejemplo 2 anterior, pero sustituyendo la 4-(morfolin-4-il)-piperidina con la 2-(R)-pirrolidin-1-ilmetilpirrolidina preparada como se describe a continuación, proporcionó la (3Z)-3-{[3,5-dimetil-2R-(pirrolidin-1 -ilmetil)pirrolidin-1-ilcarbonil]-1 H-pirrol-2-ilmet¡liden}-5-fluoro-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona.

Síntesis de la 2(R)-pirrolidin-1-ilmetilpirrolidina Paso 1 A una solución de la (+)-carbobenciloxi-D-prolina (1 .5 g, 6.0 mmoles), EDC (2.3 g, 12.0 mmoles) y HOBt (800 mg, 12.9 mmoles) en DMF (20 mi), se agregó trietilamina (1.5 mi) y pirrolidina (1.0 mi, 12.0 mmoles). Esta se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente. Se agregó NaHCO3 saturado, se extrajo con CH2CL2 (tres veces). Las capas orgánicas se separaron y se secaron sobre Na2SO4. El solvente se removió y el residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc), para proporcionar la 1-(R)-[N-(benciloxicarbonil)- prolil]pirrolidina como un sólido blanco (94%). 1H RMN (400 MHz,CDCI3, todos los rotámeros) d 1.57-1.66 (m, 1 H), 1 .71 -2.02 (m, 5H), 2.04-2.19 (m, 2H), 3.26-3.43 (m, 3H), 3.44-3.78 (m, 3H), 4.41 (dd, J = 4.5, 7.6 Hz, 0.5H), 4.52 (dd, J = 3.7, 7.6 Hz, 0.5H), 4.99 (d, J = 12.1 Hz, 0.5H), 5.05 (d, J = 12.5 Hz, 0.5H), 5.13 (d, J = 12.1 Hz, 0.5H), 5.20 (d, J = 12.5 Hz, 0.5H), 7.27-7.38 (m, 5H).

Paso 2 Una mezcla de la 1-(R)-[N-(benciloxicarbonil)prolíl]pirrolidina (2.7 g, 8.9 mmoles) y catalizador de Pd-C al 5% (270 mg) en metanol (15 mi), se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno durante 20 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de celite y el solvente se removió para proporcionar la 2(R)-prolilpirrolidina como un aceite viscoso (80%), el cual se utilizó sin purificación adicional para el siguiente paso.

H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d 1 .52-1.78 (m, 5H), 1 .82-1 .89 (m, 2H), 1.97-2.04 (m, 1 H), 2.63-2.71 (m, 1 H), 2.97-3.02 (m, 1 H), 3.22-3.35 (m, 3H), 3.48-3.54 (m, 1 H), 3.72 (dd, J = 6.1 , 8.0 Hz, 1 H).

Paso 3 2-(R)-Prol¡lp¡rrolidina (1.2 g, 7.1 mmoles) se disolvió en THF (10 mi). La mezcla de reacción se enfrió a 0°C y se agregó gota a gota BH3 1 M en THF (10 mi, 10 mmoles) a 0°C. La mezcla de reacción se sometió a reflujo durante 16 horas, HCI 3 M (4.7 mi). Una solución de NaOH 2 M se agregó hasta que se alcanzó un pH de 10. El producto se extrajo con MeOH al 5% en CH2CI2 (tres veces). Las capas orgánicas se secaron sobre Na2S04 y el solvente se removió para proporcionar el compuesto del título como un líquido ligeramente amarillo (73%), el cual se utilizó sin purificación adicional en el paso siguiente. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d 1 .22-1.30 (m, 1 H), 1 .55-1.69 (m, 6H), 1 .71 -1.79 (m, 1 H), 2.26-2.30 (m, 1 H), 2.33-2.38 (m, 1 H), 2.40-2.45 (m, 4H), 2.65-2.71 (m, 1 H), 2.78-2.84 (m, 1 H), 3.02-3.09 (m, 1 H).

EJEMPLO 11 Procediendo como se describió en el Ejemplo 2 anterior, pero sustituyendo la 4-(morfolin-4-il)-piperidina con la 2-(S)-pirrolidin-1 -ilmetilpirrolidina (preparada como se describió anteriormente, mediante la sustitución de la (+)-carbobenciloxi-D-prolina con la carbobenciloxi-L-prolina), proporcionó la (3Z)-3-{[3,5-dimetil-2S-(pirrolidin-1-ilmetil)pirrolidin-1 -ilcarbonil]-1 H-pirrol-2-ilmetiliden}-5-fluoro-1 ,3-dihidro-2H-indol-2-ona.

Síntesis de los Ejemplos 20. 21 . 24. 16, 17, 22 v 23 1 . Síntesis de las cadenas laterales 4, 5 y 6. 5 Una solución de la morfolina (10 mmoles, 0.872 mL) y Et3N (15 mmoles, 2.09 mL) en THF (20 mL) a 0°C, se agregó gota a gota en cloruro de cloroacetilo 1 (12 mmoles, 0.956 mL). La mezcla se agitó a 0°C durante 4 horas y a continuación a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se enfrió con H2O y se evaporó hasta sequedad. La purificación mediante cromatografía en columna (CH2CI2/CH3OH = 50/1 ) proporcionó la 2-cloro-1 -morfolin-4-il-etanona 2 (1 .62 g, 100%). 2 (1 .6 g, 0.98 mmoles) se trató con éster t-butílico del ácido piperacin-1 -carboxílico (10 mmoles, 1 .86 g) en DMF (20 mL) a 70°C durante 12 horas en la presencia de K2CO3 (3 mmoles, 4.14 g). Los solventes se evaporaron y el producto crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (CH2CI2/CH3OH = 30/1 ), para proporcionar el éster t-butílico del ácido 4-(2-morfolin-4-il-oxo-et¡l)-piperac¡n-1-carboxíl¡co 4, el cual se trató con TFA (5 mL) en CH2CI2 (5 mL) a temperatura ambiente durante 2 horas. La evaporación de todos los solventes proporcionó la sal de TFA de la 1-morfolin-4-il-2-piperacin-1 -il-etanona 4 (4.1 g, 93%). 1H RMN (CDCI3) d 3.25 (m, 4H), 3.40 (m, 4H), 3.47 (m, 2H), 3.61 (m, 2H), 3.70 (m, 4H), 3.77 (s, 2H). Las mismas reacciones se llevaron a cabo a las mismas escalas y condiciones, excepto que la secuencia de la morfolina y el éster t-butílico del ácido piperacin-1-carboxílico fue alterada. El éster t-butílíco del ácido 4-(2-cloro-acetil)-piperacin-1-carboxilico 3 y la sal de TFA de la 2-morfolin-4-il-1 -piperacin-1-il-etanona 5 (4.0 g, 91 %) se obtuvieron de manera correspondiente. 1H RMN (CDCI3) d 3.06 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.14 (t, J = 5.4Hz, 4H), 3.20 (m, 2H), 3.24 (m, 2H), 3.53 (t, J = 5.2Hz, 2H), 3.71 (t. J = 5. 4Hz, 2H), 3.84 (m, 4H), 4.15 (s, 2H). 4 ó 5 (5 mmoles, 2.2 g) en THF (10 mL), se goteó en una suspensión de una mezcla bien agitada de NaH (50 mmoles, 1.9 g) en THF (50 mL). La mezcla resultante se agitó durante la noche a 50°C, y a continuación se enfrió con H20 (5 mL), seguido por NaOH al 10% (10 mL) a 0°C. El sólido blanco se filtró y se lavó por sonicación con THF (4x20 mL). El líquido combinado se evaporó hasta sequedad y se purificó medíante cromatografía en columna (CHCl3/CH3OH/NH3*H20 = 15/1/0.1 -10/1/0.1 ) para proporcionar la 4-(2-piperacin-1 -¡l)-morfol¡na 6 (70 mg, 70%). 1H R N (CD3COCD3) d 2.35 (s, 1 H), 2.42 (m, 12H), 2.74 (t, J = 4.4Hz, 4H), 3.57 (t, J = 4.2 Hz, 4H). LCMS (m/z) 200 (M+1 ). 2. Condensación de las cadenas laterales 4, 5 y 6 con ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-1 ,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1 H-pirrol-3- carboxílico.

A una mezcla agitada amarilla espesa de ácido 5-(5-fluoro-2-oxo- 1 ,2-d¡hidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1 H-pirrol-3-carboxílico (90 mg, 0.3 mmoles), se agregaron trietilamina (0.084 mL, 0.6 mmoles), EDC (86 mg, 0.45 mmoles) y HOBT (60 mg, 0.45 mmoles) en DMF (0.8 mL), compuesto 4 (0.45 mmoles). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El producto sólido amarillo se precipitó del sistema de reacción. El sólido se aisló mediante filtración a vacío, se lavó una vez con etanol (1 mL), y se sometió a sonicación en éter dietílico (2 mL) durante 10 minutos. Después de secar bajo vacío, el compuesto del Ejemplo 20 (1 10 mg, 74% de rendimiento) se obtuvo como un sólido amarillo. 1H RMN (DMSO-de) d 2.27, 2.25 (2xs, 6H, CH3), 2.41 (m, 4H), 3.12 (s, 2H), 3.33 (m, 4H), 3.40 (s amplio, 2H), 3.52 (m, 6H, CH2), 6.83 (m, 1 H), 6.89 (m, 1 H), 7.68 (s, 1 H), 7.31 (d, J = 8.8Hz, 1 H) (aromático y vinilo), 10.87 (s, 1 H, CONH), 13.61 (s, 1 H, NH). LC-MS (m/z) 496.0 (M+1 ). El compuesto del Ejemplo 21 (70 mg, 47%), se precipitó de la mezcla de reacción del compuesto 5 con ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-1 ,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1 H-pirrol-3-carboxílico bajo las mismas condiciones utilizadas para sintetizar el compuesto del Ejemplo 20. 1 H RMN (DMSO-d6) d 2.28, 2.27 (2xs, 6H), 2.37 (m, 4H), 3.14 (s, 2H), 3.31 (m, 4H), 3.45 (s amplio, 2H), 3.55 (m, 6H), 6.83 (m, 1 H), 6.91 (m, 1 H), 7.70 (s, 1 H), 7.52 (dd, J = 2.0, 9.2Hz, 1 H), 10.88 (s, 1 H), 13.63 (s, 1 H). LC-MS (m/z) 496.0(M+1 ). El compuesto del Ejemplo 24 (1 10 mg, 76%), se purificó mediante cromatografía en columna (CHCI3/CH3OH/NH3»H2O = 1 5/1/0.1 ) después de la reacción del compuesto 6 con el ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-1 ,2- dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1 H-pirrol-3-carboxíl¡co bajo las mismas condiciones utilizadas para sintetizar el compuesto del Ejemplo 20. H RMN (DMSO-d6) d 2.27, 2.24 (2xs, 6H), 2.35 (m, 4H), 2.40 (t, J = 3.8 Hz, 4H), 3.52 (t, J = 4.8 Hz, 8H), 6.83 (m, 1 H), 6.91 (m,1 H), 7.68 (s, 1 H), 7.72 (dd, J = 2.4, 9.6 Hz, 1 H), 10.87 (s, 1 H), 13.60 (s, 1 H). LC-MS (m/z) 482.2 (M+1 ). 3. Síntesis de las cadenas laterales 9 y 10 8 10 La mezcla de la (3R)-(-)-1 -bencíl-pírrolidin-3-ilamina (10 mmoles, 1 .76 g), éter bis(2-cloroetilico) (1 1 mmoles, 1.29 mL), K2C03 (40 mmoles, 5.52 g) y Nal (0.4 mmoles, 60 mg) en CH3CN (100 mL), se calentó a reflujo durante 36 horas bajo N2. A continuación se absorbió sobre gel de sílice (10 g), y se evaporó hasta sequedad. El sólido se cargó sobre una columna de gel de sílice y se sometió a cromatografía instantánea (CH2CI2/CH3OH = 60/1 -20/1 ).

Se obtuvo la (3R)-1-(1-benc¡l-pirrol¡d¡n-3-il)-piper¡dina 7 como una goma blanca (1.4g, 60%). 1H RMN (CDCI3) d 1.72 (m, 1H), 2.0 (m, 1H), 2.37 (m, 3H), 2.49 (m, 3H), 2.75 (m, 1H), 2.86 (m, 2H), 3.63, 3.61 (2xs, 2H), 3.71 (m, 4H), 7.29 (m,5H). LC-MS (m/z) 247(M+1). El Compuesto 7 (1.4 g, 6.0 mmoles) se agregó gota a gota en un matraz equipado con un balón de H2 y que contenía la mezcla de Pd(OH)2 (400 mg, 20% sobre carbono) y HCI (1.15 mL, 35% en H20, 19.5 mmoles) en EtOH (50 mL). La mezcla se agitó bajo H2 a 50°C durante 10 horas. El sólido se filtró y se lavó con HOCH3 caliente (2x10 mL). El líquido combinado se evaporó hasta sequedad para proporcionar la sal de HCI de la (3R)-1-pirrolidin-3-il-piperidina 9 (1.4 g, 100%). 1H RMN (CD3OD) d 1.7 (s amplio, 1H), 2.42 (m, 1H), 2.57 (m, 1H), 3.31 (m, 2H), 3.42 (m, 1H), 3.65 (m, 3H), 3.73 (m, 1H), 3.93 (m, 3H), 4.06 (s amplio, 2H), 4.17 (m, 1H). LC-MS (m/z) 157 (M+2). Se siguió el mismo procedimiento para preparar la (3S)-1-(1-bencil-pirrolidin-3-il)-píperidina 9 y la (3S)-1-pirrolidin-3-il-piperidina 10 (1.5 g, 100%) a partir de la (3S)-(+)1-bencil-pirrolidin-3-ilamina (10 mmoles, 1.76g).

Compuesto 9: 1H RMN (CDCI3) d 1.75 (m, 1H), 2.01 (m, 1H), 2.38 (m, 3H), 2.52 (m, 3H), 2.74 (m, 1H), 2.85 (m, 2H), 3.61, 3.62 (2xs, 2H), 3.71 (m, 4H), 7.30 (m, 5H). LC-MS (m/z) 247 (M+1 ).

Compuesto 10: H RMN (CD3OD) d 1 .72 (s amplio, 1 H), 2.44 (m, 1 H), 2.57 (m, 1 H), 3.35 (m, 3H), 3.71 (m, 5H), 3.96-4.18 (m, 6H). LC-MS (m/z) 157 (M+2). 4. Síntesis de las cadenas laterales 13a, b. 11a, b 12a. b 13a, b a: NR1 R2 = I J b: NR^ = \ j Se hizo reaccionar el éter t-butílico del ácido (2R)-pirrolidin-1 ,2-dicarboxílico (2.15 g, 10 mmoles) con morfolina (1 .3 mL, 15 mmoles) en CH2CI2 (30 mL) en la presencia de EDC (2.7 g,15 mmoles), HOBT (1 .9 g,15 mmoles) y EtaN (2.1 mL,15 mmoles) a temperatura ambiente durante 14 horas. La mezcla se evaporó hasta sequedad y se purificó mediante cromatografía en columna. Después de lavar el sólido resultante con NaHC03 acuoso, seguido por H20 para remover la contaminación con HOBT, se obtuvo el compuesto puro del éster ter-butílico del ácido (2R)-2-(morfolin-4-carbonil)-pirrolidin-1 -carboxílico 1 1 a (1 .79 g, 63%). El Compuesto 1 1 a (1.79 g, 0.63 mmoles) se trató con TFA (5 mL) en CH2CI2 (5 mL) a temperatura ambiente durante 2 horas. La evaporación de los solventes proporcionó la sal de TFA de la (2R)-morfolin-4-il-pirrolidin-2-il-metanona 12a (2.89 g, 100%), la cual se redujo mediante LAH (0.85 g, 5 equivalentes) en THF (50 mL) a 50°C durante 12 horas. La reacción se enfrió con H20 (2.4 mL) y NaOH al 10% (2.4 mL). El sólido blanco de Al203 se filtró y se lavó con THF (3x10 mL). Después de remover los solventes del líquido combinado, se obtuvo el producto gomoso claro de la (2R)-4-pirrolidin-2-ilmetil-morfolina 13a (1 .1 g, 95%). Siguiendo el mismo procedimiento, se utilizó pirrolidina (1 .06 g, 15 mmoles) en lugar de morfolina para sintetizar la (2R)-pirrolidin-2-ilmetil pirrolidina 13b. 6. Condensación de las cadenas laterales 9, 10 y 13a, b con el ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-1 ,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1 H-pirrol-3-carboxilico ác di 2 , 4 -dime -lA'-pirrol-3- carboxilico Ejemplos 22 y 23 Siguiendo las condiciones previas (véase la síntesis del Ejemplo 21), se condensó el ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-1 ,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirrol-3-carboxílico con 9, para proporcionar el compuesto del Ejemplo 16 (85 mg, 65%). 1H RMN (DMSO-de) d 1.67 (m, 1H), 2.0 (m, 1H), 2.06, 2.31 (2xs, 6H), 2.34 (m, 3H), 2.77, 3.01, 3.22, 3.36, 3.65 (m, 6H), 3.46 (m, 2H), 3.52 (m, 2H), 6.75 (m, 1H), 6.86 (m, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.66 (d, J = 9.8Hz, 1H), 10.81 (s, 1H), 13.51 (s, 1H). LCMS (m/z) 439.0 (M+1). El compuesto del Ejemplo 17 (78 mg, 60%), se hizo a partir del ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-1 ,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1 H-pirrol-3-carboxílico y 10. 1H RMN (CDCI3-DMSO-d6) d 1.85 (m, 1H), 2.26 (m, 1H), 2.31, 2.37 (2xs, 6H), 2.52 (m, 3H), 2.8 (m, 1H), 3.18-3.94 (m, 6H), 3.68 (m, 2H), 3.73 (m, 2H), 6.81 (m, 2H), 7.17 (d, J = 8.4Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 10.07 (s, 1H), 13.54 (s, 1H). LCMS (m/z) 439.4 (M+1). El compuesto del Ejemplo 22 (80%), se hizo a partir del ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-1 ,2-d¡hidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirrol-3-carboxílico y 13a. 1H RMN (CDCI3) d 2.04 (m, 4H), 2.3 (m, 3H), 2.41, 2.28 (2xs, 6H), 2.77, 2.61 (m, 3H), 3.33 (m, 1H), 3.53 (m. 1H), 3.71 (m, 4H), 4.54 (m, 1H), 6.82 (m, 2H), 7.15 (d, J = 8.4Hz, 1H), 7.27 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 13.33 (s, 1H). LC-MS (m/z) 453.2 (M+1).

El compuesto del Ejemplo 23 (77%), se hizo a partir del ácido 5-(5-fluoro-2-oxo-1 ,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1 H-pirrol-3-carboxílico y 13b. 1H RMN (CDCI3) d 1 .93, 2.04 (m, 7H), 2.41 , 2.30 (2xs, 6H), 2.76, 2.62 (m, 3H), 3.33 (m, 1 H), 3.53 (m.1 H), 3.71 (m, 4H), 4.55 (m, 1 H), 6.82 (m, 2H), 7.17 (d, J = 8.8Hz, 1 H), 7.27 (m, 2H), 8.15 (s, 1 H), 13.32 (s, 1 H). LC-MS (m/z) 453.2 (M+1 ).

EJEMPLOS BIOLOGICOS Bioensavo de PDGFR Este ensayo se utiliza para analizar la actividad de la vitro de FGF1 -R en un ensayo de ELISA. 1 . Placas para Elisa de 96 pozos de Corning 2. Anticuerpo anti-PDGFR monoclonal 28D4C 10 (SUGEN, 3. PBS. 4. Amortiguador TBST. 5. Amortiguador de bloqueo (el mismo que para el bioanálisis de EGFR). 6. Lisado celular NIH 3T3 que expresa PDGFR-ß (SUGEN, Inc.). 7. Amortiguador TBS. 8. TBS + DMSO al 10%. 9. ATP. 10. MnCI2. 1 1 . Mezcla de fosforilación del amortiguador de cinasa: para 10 mi, mezclar 250 µ? de TRIS 1 M, 200 µ? de NaCI 5M aCI, 100 µ? de MnCI2 1 M y 50 µ? de Tritón X-100 100 mM en suficiente dH20 para hacer 10 mi. 12. Placas de polipropileno de fondo en forma de V de 96 pozos de NUNC. 13. EDTA. 14. Suero antifosfotirosina policlonal de conejo (SUGEN, Inc.). 15. Conjugado de peroxidasa IgG anticonejo de cabra (Biosource Cat. No. ALI0404). 16. ABTS. 17. Peróxido de hidrógeno, solución al 30%. 18. ABTS/H202. 19. HCI 0.2 M.

Procedimiento: 1. Recubrir las placas para ELISA DE 96 pozos de Corning con 0.5 µg de 28D4C10 en 100 µ? de PBS por pozo, almacenar durante la noche a 4°C. 2. Remover el 28D4C10 no unido de los pozos invirtiendo la placa para remover el líquido. Lavar 1 x con dH20. Coloque la placa en una toalla de papel para remover el exceso de líquido. 3. Agregar 150 µ? del Amortiguador de Bloqueo a cada pozo. Incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente con agitación. 4. Lavar la placa 3x con agua desionizada, a continuación una vez con TBST. Colocar la placa en una toalla de papel para remover el exceso de líquido y las burbujas. 5. Diluir el lisado en HNTG (10 µg de lisado/100 µ? de HNTG). 6. Agregar 100 µ? de lisado diluido a cada pozo. Agitar a temperatura ambiente durante 60 minutos. 7. Lavar las placas como se describe en el Paso 4. 8. Agregar 80 µ? de mezcla de amortiguador de cinasa de trabajo a la placa de ELISA que contiene la PDGFR capturada. 9. Diluir el compuesto de prueba 1 :10 en TBS en las placas de polipropileno de 96 pozos. 10. Agregar 10 µ? de compuesto de prueba diluido a la placa de ELISA. A los pozos de control, agregar 10 µ? de TBS + DMSO al 10%. Incubar con agitación durante 30 minutos a temperatura ambiente. 1 1 . Agregar 10 µ? de ATP directamente a los pozos, excepto en el pozo de control negativo (el volumen final del pozo debe ser de aproximadamente 100 µ? con ATP 20 µ? en cada pozo). Incubar 30 minutos con agitación. 12. Detener la reacción agregando 10 µ? de solución de EDTA a cada pozo. 13. Lavar 4x con aguda desionizada, dos veces con TBST. 14. Agregar 100 µ? de antifosfotirosina (dilución 1 :3000 en TBST) por pozo. Incubar con agitación durante 30-45 minutos, a temperatura ambiente. 15. Lavar como en el Paso 4. 16. Agregar 100 µ? de conjugado de peroxidasa IgG anticonejo de cabra de Biosource (dilución 1 :2000 en TBST) a cada pozo. Incubar con agitación durante 30 minutos a temperatura ambiente. 17. Lavar como en el Paso 4. 18. Agregar 100 µ? de solución de ABTS/H2O2 a cada pozo. 19. Incubar de 10 a 30 minutos con agitación. Remover cualesquier burbujas. 20. Si es necesario, detener la reacción con adición de 100 µ? de HCI 0.2 M por pozo. 21. Leer en ensayo en un lector de ELISA MR7000 Dynatech con un filtro de prueba a 410 nM y un filtro de referencia a 630 nM Bioensayo de GST-FLK-1 Este ensayo analiza la actividad de la tirosina cinasa de GST- Flk1 en los péptidos poli (glu, tyr).

Materiales y reactivos: 1. Placas para ELISA DE 96 pozos (Corning No. de Catálogo 5805-96). 2. Poli (glu, tyr) 4:1 , liofilizado (Sigma # Catálogo P0275). 3. Preparación de las placas de ensayo recubiertas con poli (glu, tyr) (pEY): Cubrir 2 ug/pozo de poli (glu, tyr) (pEY) en 100 ul de PBS, mantener a temperatura ambiente durante 2 horas o a 4°C durante la noche. Cubrir bien las placas para evitar la evaporación. 4. Amortiguador de PBS: para 1 L, mezclar 0.2 g de KH2P04, 1.15 g de Na2HP04, 0.2 g de KCI y 8 g de NaCI en aproximadamente 900 mi de dH20. Cuando todos los reactivos se hayan disuelto, ajusfar el pH a 7.2 con HCI. Aforar a 1 L con dH20. 5. Amortiguador de PBST: a 1 L de amortiguador de PBS, agregar 1.0 mi de Tween-20. 6. TBB-Amortiguador de Bloqueo: para 1 L, mezclar 1 .21 g de TRIS, 8.77 g de NaCI, 1 mi de TWEEN-20 en aproximadamente 900 mi de dh^O. Ajustar el pH a 7.2 con HCI. Agregar 10 g de BSA, agitar para disolver. Aforar a 1 L con dH20. Filtrar para remover la materia particulada. 7. BSA al 1 % en PBS: Para hacer una solución de trabajo 1x, agregar 10 g de BSA a aproximadamente 990 mi de amortiguador de PBS, agitar para disolver. Aforar a 1 L con amortiguador de PBS, filtrar para remover la materia particulada. 8. Hepes 50 mM pH 7.5. 9. GST-Flk1 cd purificado de la transformación del baculovirus recombinante sf9 (SUGEN, Inc.). 10. DMSO al 4% en dH20. 11. ATP 10 mM en dH20. 12. MnCI2 40 mM 13. Amortiguador de Dilución de la Cinasa (KDB): mezclar 10 mi de Hepes (pH 7.5), 1 mi de NaCI 5M, 40 µ?_ de ortovanadato de sodio 100 mM y 0.4 mi de BSA al 5% en dH20 con 88.56 mi de dH20. 14. Placas de polipropileno de fondo con forma de V de 96 pozos, de NUNC, Applied Scientific # Catálogo AS-72092 15. EDTA: mezclar 14.12 g de ácido etilendiamintetraacético (EDTA) para aproximadamente 70 mi de dH20. Agregar NaOH 10 N hasta que el EDTA se disuelva. Ajustar el pH a 8.0. Aforar a 100 mi con dH20. 16. 1 o Amortiguador de Dilución del Anticuerpo: mezclar 10 mi de BSA al 5% en amortiguador de PBS con 89.5 mi de TBST. 17. Anticuerpo monoclonal antifosfotirosina conjugado a la peroxidasa de rábano (PY99 H P, Santa Cruz Biotech). 18. Acido 2,2'-az¡nobis(3-etilbenztiazolin-6-sulfónico (ABTS, Moss, No. de Cat. ABST). 19. SDS aM 0%.

Procedimiento: 1. Recubrir las placas para ELISA de 96 pozos de Corning con 2 µg de péptido polyEY en PBS estéril, como se describe en el paso 3 de Materiales y Reactivos. 2. Remover el líquido no unido de los pozos invirtiendo la placa. Lavar una vez con TBST. Colocar la placa sobre una toalla de papel para remover el exceso de líquido. 3. Agregar 100 µ? de BSA al 1 % en PBS a cada pozo. Incubar con agitación durante 1 hora, a temperatura ambiente. 4. Repetir el paso 2. 5. Enjuagar los pozos con HEPES 50 mM (pH 7.5) (150 6. Diluir el compuesto de prueba con dH20/DMSO al 4% a 4 veces la concentración del ensayo final deseada en las placas de polipropileno de 96 pozos. 7. Agregar 25 µ? compuesto de prueba diluido a la placa de ELISA. En los pozos de control, colocar 25 µ? de dH20/DMSO al 4%. 8. Agregar 25 µ? de MnCI2 40 mM con 4x de ATP (2 µ?) a cada pozo. 9. Agregar 25 µ? de EDTA 0.5 M a los pozos del control negativo. 10. Diluir la GST-FI a 0.005 µg (5 ng)/pozo con KDB. 1 1. Agregar 50 µ? de enzima diluida a cada pozo. 12. Incubar con agitación durante 15 minutos a temperatura ambiente. 13. Detener la reacción agregando 50 µ? de EDTA 250 mM (pH 8.0). 14. Lavar 3X con TBST y colocar la placa sobre una toalla de papel para remover el exceso de liquido. 15. Agregar 100 µ? por pozo de conjugado HRP antifosfotirosina, dilución 1 :5,000 en amortiguador de dilución del anticuerpo. Incubar con agitación durante 90 minutos a temperatura ambiente. 16. Lavar como en el paso 14. 17. Agregar 100 µ? de solución de ABTS a temperatura ambiente a cada pozo. 18. Incubar con agitación durante 10 a 15 minutos. Remover cualesquier burbujas. 19. Detener la reacción agregando 20 µ? de SDS al 10% a cada pozo. 20. Leer los resultados en un lector de ELISA MR7000 de Dynatech con un filtro de prueba a 410 nM y un filtro de referencia a 630 nM.

Ensayo para c-kit Este ensayo se utiliza para detectar el nivel de la fosforilación de la tirosina c-kit. Células M07E (leucemia mieloide aguda humana), se subalimentaron con suero durante la noche en suero al 0.1 %. Las células se pretrataron con el compuesto (de manera concurrente con la subalimentación con suero), antes de la estimulación del ligando. Las células se estimularon con 250 ng/ml de rh-SCF durante 15 minutos. Después de la estimulación, las células se lisaron y se inmunoprecipitaron con un anticuerpo anti-c-kit. Los niveles de fosfotirosina y proteína se determinaron mediante transferencia Western.

Ensayo de HUV-EC-C Este ensayo se utiliza para medir la actividad de un compuesto contra PDGF-R, FGF-R, VEGF, aFGF o Flk-1/KDR, todos los cuales se expresan naturalmente por las células HUV-EC.

Día 0 1. Lavar y tripsinizar las células HUV-EC-C (células endoteliales de la vena umbilical humana (Colección Americana de Cultivos Tipo, No. de Catálogo 1730 CRL). Lavar con suero fisiológico amortiguado con fosfato de Dulbecco (D-PBS, obtenido de Gibco BRL, no. de catálogo 14190-029), 2 veces a aproximadamente 1 ml/ 0 cm2 del matraz de cultivo del tejido. Tripsinizar con tripsina-EDTA al 0.05% en solución de disociación celular no enzimática (Sigma Chemical Company, no. de catálogo C-1544). La tripsina al 0.05% se hace diluyendo tripsina al 0.25%/EDTA 1 mM (Gibco, no. de catálogo 25200-049) en la solución de disociación de las células. Tripsinizar con aproximadamente 1 ml/25-30 cm2 de matraz de cultivo del tejido durante aproximadamente 5 minutos a 37°C. Después de que las células se han desprendido del matraz, agregar un volumen igual de medio de ensayo y transferir a un tubo de centrífuga estéril de 50 mi (Fisher Scientific, no. de catálogo 05-539-6). 2. Lavar las células con aproximadamente 35 mi de medio de ensayo en el tubo de centrífuga estéril 50 mi agregando el medio de ensayo, centrifugar durante 10 minutos a aproximadamente 200x g, aspirar el sobrenadante y resuspender con 35 mi de D-PBS. Repetir el lavado dos veces con D-PBS, resuspender las células en aproximadamente 1 mi de medio de ensayo/15 cm2 del matraz del cultivo del tejido. El medio de ensayo consiste de medio F12K (Gibco BRL, no. de catálogo 21 127-014) y suero bovino fetal inactivado con calor al 0.5%. Contar las células con un Coulter Counter® (Coulter Electronics, Inc.), y agregar el medio de ensayo a las células para obtener una concentración de 0.8-1 .0 x 105 células/ml. 3. Agregar las células a placas de fondo plano de 96 pozos a 100 µ?/???? o 0.8-1.0 x 104 células/pozo, incubar ~ 24 horas a 37°C, C02 al 5%.

Día 1 1. Hacer titulaciones del compuesto de prueba dos veces, en placas separadas de 96 pozos, generalmente de 50 µ? hasta 0 µ?. Usar el mismo medio de ensayo como el mencionado en el día 0, paso 2 anterior. Las titulaciones se hacen agregando 90 µ?/???? del compuesto de prueba a 200 µ? (4X la concentración final del pozo) al pozo superior de una columna de platos particular. Puesto que la solución patrón del compuesto de prueba es usualmente de 20 mM en DMSO, la concentración del fármaco de 20 µ? contiene DMSO al 2%. Se utiliza un diluyente constituido de DMSO al 2% en medio de ensayo (F12K + suero bovino fetal al 0.5%), como el diluyente para las titulaciones del compuesto de prueba, con el fin de diluir el compuesto de prueba, pero mantener la concentración de DMSO constante. Agregar este diluyente a los pozos restantes en la columna a 60 µ?/????. Tomar 60 µ? de los 120 µ? de la dilución del compuesto de prueba 200 µ? en el pozo superior de la columna y mezclar con los 60 µ? en el segundo pozo de la columna. Tomar 60 µ? de este pozo y mezclar con los 60 µ? en el tercer pozo de la columna, y continuar así hasta que se completen las titulaciones dos veces. Cuando el pozo junto al último se mezcla, tomar 60 µ? de los 120 µ? en este pozo y desecharlos. Dejar el último pozo con 60 µ? de DMSO/medio diluyente como un control que contiene un compuesto que no es el de prueba. Hacer 9 columnas del compuesto de prueba titulado, suficientes para pozos por triplicado, cada uno para: (1 ) VEGF (obtenido de Pepro Tech Inc., no. de catálogo 100-200, (2) factor de crecimiento celular endotelial (ECGF) (también conocido como factor de crecimiento fibroblástico ácido o aFGF) (obtenido de Boehringer Mannheim Biochemica, no. de catálogo 1439 600), o (3) PDGF B/B humano (1276-956, Boehringer Mannheim, Alemania) y el control del medio del ensayo. El ECGF viene como una preparación con heparina sódica. 2. Transferir 50 µ?/???? de las diluciones del compuesto de prueba a las placas de ensayo de 96 pozos que contienen 0.8-1.0 x 104 células/100 µ?/???? de las células HUV-EC-C del día 0, e incubar a ~ 2 horas a 37°C, C02 al 5%. 3. Por triplicado, agregar 50 µ?/???? de 80 g/ml de VEGF, 20 ng/ml de ECGF, o control del medio a cada condición del compuesto de prueba. Como con los compuestos de prueba, las concentraciones del factor de crecimiento son 4X la concentración final deseada. Utilizar el medio de ensayo del día 0, paso 2 para hacer las concentraciones de los factores de crecimiento. Incubar aproximadamente 24 horas a 37°C, C02 al 5%. Cada pozo tendrá 50 µ? de dilución del compuesto de prueba, 50 µ? del factor de crecimiento o el medio, y 100 µ? de células, por lo que se calculan 200 µ?/???? en total. Así, las concentraciones 4X del compuesto de prueba y los factores de crecimiento se vuelven 1X una vez que todo se ha agregado a los pozos.

Día 2 1. Agregar 3H-timidina (Amersham, no. de catálogo TRK-686) a 1 µ??/???? (10 µ?/???? de una solución 100 µ??/?t?? hecha de medio RPMI + suero bovino fetal inactivado con calor al 10%), e incubar ~ 24 horas a 37°C, C02 al 5%. El RPMI se obtiene de Gibco BRL, no. de catálogo 11875-051.

Día 3 1 . Congelar las placas durante la noche a -20°C.

Día 4 Descongelar las placas y recolectar con un recolectador de placas de 96 pozos (Tomtec Harvester 96®) en rejillas de filtro (Wallac, no. de catálogo 1205-401 ), leer los conteos en un contador por centelleo líquido Wallac Betaplate™.

Modelos animales in vivo Modelos animales del xenoinjerto La capacidad de los tumores humanos para crecer como xenoinjertos en ratones atímicos (por ejemplo, Balb/c, nu/nu), proporciona un modelo útil in vivo para estudiar la respuesta biológica a las terapias para los tumores humanos. Desde el primer xenotransplante exitoso de los tumores humanos en ratones atímicos (Rygaard y Povlsen, 1969, Acta Pathol. Microbial. Scand. 77:758-760), muchas líneas celulares de tumores humanos diferentes (por ejemplo, de mama, pulmón, genitourinario, gastrointestinal, de cabeza y cuello, glioblastoma, huesos y melanomas malignos), se han transplantado y han crecido exitosamente en ratones atímicos. Los siguientes ensayos pueden utilizarse para determinar el nivel de actividad, especificidad y efectos de los diferentes compuestos de la presente invención. Tres tipos generales de ensayos son útiles para evaluar los compuestos: celular/catalítico, celular/biológico e in vivo. El objeto de los ensayos celulares/catalíticos, es determinar el efecto de un compuesto en la capacidad de una TK para fosforilar las tirosinas en un sustrato conocido en una célula. El objeto de los ensayos celulares/biológicos, es determinar el efecto de un compuesto en la respuesta biológica estimulada por una TK en una célula. El objeto de los ensayos in vivo es determinar el efecto de un compuesto en un modelo animal de un trastorno particular tal como el cáncer. Las líneas celulares adecuadas para experimentos de xenoinjertos subcutáneos incluyen células C6 (glioma, ATCC # CCL 107), células A375 (melanoma, ATCC # CRL 1619), células A431 (carcinoma epídermoide, ATCC # CRL 1555), células Calu 6 (pulmón, ATCC # HTB 56), células PC3 (próstata, ATCC # CRL 1435), células SKOV3TP5 y fibroblastos NIH 3T3 modificados genéticamente para sobreexpresar EGFR, PDGFR, IGF- 1 R o cualquier otra cinasa de prueba. El siguiente protocolo puede utilizarse para realizar los experimentos de xenoinjerto: Los ratones atímicos hembra (BALB/c, nu/nu) se obtienen de Charles River Laboratories Inc., (Wilmington, MA). Todos los animales se mantienen bajo condiciones de la sala limpia, en jaulas microaislantes con material para cama Alpha-dr¡. Reciben alimento para roedor estéril y agua ad libitum. Las líneas celulares se hacen crecer en un medio apropiado (por ejemplo, MEM, DMEM, Ham F10 o Ham F12 más suero bovino fetal (FBS) al 5%-10% y glutamina 2 mM (GLN)). Todo el medio de cultivo celular, la glutamina y el suero bovino fetal se compran de Gibco Life Technologies (Grand Island, NY), a menos que se especifique de otra manera. Todas las células crecen en una atmósfera húmeda de 90-95% aire y 5-10% de C02 a 37°C. Todas las líneas celulares se subcultivan de manera rutinaria dos veces a la semana y son negativas para el micoplasma como se determina por el método Mycotect (Gibco). Las células son recolectadas en o cerca de la confluencia con Tripsina-EDTA al 0.05% y se granulan a 450 x g durante 10 minutos. Los gránulos se resuspenden en PBS o medio estéril (sin FBS) a una concentración particular, y las células se implantan en el flanco posterior de los ratones (8-10 ratones por grupo, 2-10 x 106 células/animal). El crecimiento del tumor se mide durante 3 a 6 semanas utilizando calibradores venier. Los volúmenes del tumor se calculan como un producto de la longitud x el ancho x la altura a menos que se indique de otra manera. Los valores de P se calculan utilizando la prueba t de Student. Los compuestos de prueba en 50-100 µ? de excipiente (DMSO o VPD:D5W) pueden suministrarse mediante inyección IP a diferentes concentraciones e iniciando generalmente en el día uno después del implante.

Modelo de invasión del tumor El siguiente modelo de invasión del tumor se ha desarrollado y puede utilizarse para la evaluación del valor terapéutico y la eficacia de los compuestos identificados como que inhiben selectivamente el receptor KDR/FLK-1.

Procedimiento Se utilizan como animales experimentales, ratones atímicos de 8 semanas (hembra) (Simonsen Inc.). El implante de las células del tumor puede realizarse en una campana de flujo laminar. Para la anestesia, se administra un cóctel de Xilacina/Ketamina (100 mg/kg de Ketamina y 5 mg/kg de Xilacina) intraperitonealmente. Se hace una incisión en la línea media para exponer la cavidad abdominal (aproximadamente 1 .5 cm de longitud), para inyectar 107 células de tumor en un volumen de 100 µ? de medio. Las células se inyectan ya sea en el lóbulo duodenal del páncreas o bajo la túnica del colon. El peritoneo y los músculos se cierran con una sutura continua de seda 6-0 y la piel se cierra utilizando grapas para heridas. Los animales se observan diariamente.

Análisis Después de 2-6 semanas, dependiendo de las observaciones en conjunto de los animales, los ratones se sacrifican, y las metástasis locales del tumor a varios órganos (pulmón, hígado, cerebro, estómago, bazo, corazón, músculo) se extraen y analizan (medición del tamaño, grado de invasión, inmunoquímica, determinación de la hibridación in situ del tumor, etc.).

Ensayo de apoptosis Las células M07E se incuban con +/- SCF y +/- compuesto en FBS al 10% con rh-GM-CSF (10 ng/mL) y rh-IL-3 (10 ng/mL). Las muestras se ensayan a 24 y 48 horas. Para medir la caspasa-3 activada, las muestras se lavan con PBS y se permeabilizan con etanol al 70% enfriado con hielo. A continuación, las células se tiñen con caspasa-3 antiactiva de conejo, policlonal, conjugada con PE, y se analiza mediante FACS. Para medir la PARP escindida, las muestras se lisan y analizan mediante transferencia western con un anticuerpo anti-PARP.

Medición de la toxicidad celular Los compuestos terapéuticos deben ser más potentes para inhibir la actividad del receptor de la tirosina cinasa que para ejercer un efecto citotóxico. Una medida de la efectividad y la toxicidad celular de un compuesto puede obtenerse determinando el índice terapéutico, es decir, CI50/LD50. La Cl50, la dosis requerida para alcanzar 50% de inhibición, puede medirse utilizando técnicas estándar tales como aquéllas descritas aquí. La LD50, la dosis que resulta en 50% de toxicidad, puede también medirse mediante técnicas estándar (Mossman, 1983, J. Immunol. Methods, 65:55-63), midiendo la cantidad de LDH liberado (Korzeniewski y Callewaert, 1983, ¿. Immunol. Methods, 64:313, Decker y Lohmann-Matthes, 1988, J. Immunol. Methods, 1 15:61 ), o midiendo la dosis letal en modelos animales. Se prefieren los compuestos con un gran índice terapéutico. El índice terapéutico debería ser mayor que 2, de manera preferida al menos 10, de manera más preferida al menos 50. La actividad de los compuestos de la presente invención contra otras cinasas puede determinarse utilizando ensayos y métodos que son bien conocidos en la técnica. Algunos de tales ensayos se describen en la WO 01/60814, la descripción de la cual se incorpora aquí como referencia en su totalidad. El ensayo incluye, de manera no exclusiva, ensayo bio-flk-1 , un ensayo del receptor EGF-receptor quimérico HER2 en células completas, un ensayo bio-src, un ensayo bio-lck y un ensayo para medir la función de la fosforilación de raf. Los protocolos para estos ensayos se encuentran en la Patente de E.U.A. No. 6,130,238, la cual se incorpora aquí como referencia en su totalidad. La invención anterior se ha descrito con algunos detalles a manera de ilustración y ejemplo, para propósitos de claridad y entendimiento. Será obvio para alguien con experiencia en la técnica, que pueden practicarse cambios y modificaciones dentro del alcance de las reivindicaciones anexas. Por lo tanto, se entenderá que la descripción anterior pretende ser ilustrativa y no restrictiva. El alcance de la invención, por lo tanto, no debe estar determinado con referencia a la descripción anterior, sino que en su lugar debe determinarse con referencia las siguientes reivindicaciones anexas, junto con el alcance completo de los equivalentes a los cuales tales reivindicaciones tienen derecho. Todas las patentes, solicitudes de patente y publicaciones citadas en esta solicitud, se incorporan aquí como referencia en su totalidad para todos los propósitos, al mismo grado como si cada patente, solicitud de patente o publicación individual se denotara individualmente.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES 1.- Un compuesto de Fórmula (IV): en donde: R es: (a) hidrógeno; (b) -PO(OR5)2 en donde cada uno de R5 es de manera independiente hidrógeno o alquilo; (c) -COR6 en donde R6 es alquilo; o (d) -CHR7NR8R9 en donde R7 es hidrógeno o alquilo, y R8 y R9 son de manera independiente hidrógeno o alquilo; o R8 y R9 junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, forman un anillo de heterocicloamino; R1 es hidrógeno, alquilo, alcoxi, hidroxi, trifluorometilo, trifluorometoxi, F, Cl, Br o I; R2 es hidrógeno, alquilo, heteroarilo, alcoxi, hidroxi, F, Cl, Br o I; R3 es hidrógeno o alquilo; R4 es hidrógeno o alquilo; el anillo A es heterocicloamino sustituido opcionalmente; Het es cicloalquilaminoalquilo, cicloalquilalquilaminoalquilo, heteroarilo, heterociclo, heterociclilcarbonilalquilo, heterociclilalquilcarbonilo o heterociclilalquilo; X es NR8R9 u OR8; y n es 0 ó 1 ; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 2.- Un compuesto de Fórmula (I): en donde: R es: (a) hidrógeno; (b) -PO(OR5)2 en donde cada uno de R5 es de manera independiente hidrógeno o alquilo; (c) -COR6 en donde R6 es alquilo; 0 (d) -CHR7NR8R9 en donde R7 es hidrógeno o alquilo, y R8 y R9 son de manera independiente hidrógeno o alquilo; o R8 y R9 junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, forman un anillo de heterocicloamino; R1 es hidrógeno, alquilo, heteroarilo, alcoxi, hidroxi, trifluorometilo, trifluorometoxi, F, Cl, Br o I; R2 es hidrógeno, alquilo, heteroarilo, alcoxi, hidroxi, F, Cl, Br o I; R3 es hidrógeno o alquilo; R4 es hidrógeno o alquilo; el anillo A es heterocicloamino sustituido opcionalmente; Het es cicloalquilaminoalquilo, cicloalquilalquilaminoalquilo, heteroarilo, heterociclo o heterociclilalquilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 3.- El compuesto de conformidad con una de las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado además porque: R1 es hidrógeno, metilo, metoxi, hidroxi, F, Cl o Br; y R2 es hidrógeno, metilo, metoxi, hidroxi, F, Cl o Br. 4 - El compuesto de conformidad con una de las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado además porque: R1 es F; y R2 es hidrógeno. 5. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque: R1 está en la posición 5 del anillo de indolinona; y R es hidrógeno, -PO(OH)2) -COCH3 o pirrolidin-1-ilmetilo. 6. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque: R es hidrógeno; R3 y R4 son de manera independiente hidrógeno o metilo. 7. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque: R3 y R4 son metilo. 8. - El compuesto de conformidad con una de las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado además porque A es un grupo heterocicloamino de 4 a 6 átomos en el anillo. 9. - El compuesto de conformidad con una de las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado además porque A es acetidin-1 -ilo, pirrolidin-1-ilo, piperidin-1-ilo o piperacin-1 -ilo. 10.- El compuesto de conformidad con una de las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado además porque Het es un heterociclo que contiene de 4 a 6 átomos en el anillo, en donde uno o dos átomos en el anillo se seleccionan del grupo que consiste de nitrógeno, oxígeno o azufre, los átomos restantes en el anillo son carbono. 1 1.- El compuesto de conformidad con una de las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado además porque Het es piperdin-1-ilo, morfolin-4-ilo, tiomorfolin-4-¡lo, piperacin-1 -ilo, 2,6-dimetilmorfolin-4-ilo o 2,6-dimetilpiperacin-1 -ilo y se localizan en las posiciones 3 ó 4 del anillo A. 12.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 1 , caracterizado además porque A es acetidin-1 -ilo, pirrolidin-1-ilo, piperidin-1 -ilo o piperacin-1 -ilo. 13 - El compuesto de conformidad con una de las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado además porque Het es un heterociclilalquilo en donde el anillo de heterociclilo contiene 5 ó 6 átomos en el anillo, en donde uno o dos átomos en el anillo se seleccionan del grupo que consiste de nitrógeno, oxígeno o azufre, los átomos restantes en el anillo son carbono. 14. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado además porque Het es pirrolidin-1-ilmetilo. 15. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado además porque A es acetidin-1 -ilo, pirrolidin-1-ilo, piperidin-1 -ilo o piperacin-1 -ilo. 16. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado además porque A es pirrolidin-1-ilo y pirrolidin-1 -ilmetiío está en la posición C2 del anillo de pirrolidin-1 -ilo, y la estereoquímica en la posición C2 del anillo de pirrolidin-1 -ilo es R o S. - Un compuesto seleccionado del grupo que consiste de: 106 18.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado además porque el compuesto es: 19 - Una composición farmacéutica que comprende un compuesto o sal de conformidad con una de las reivindicaciones 1 , 2, 17 ó 18 y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable. 20.- El uso de un compuesto o sal de una de las reivindicaciones 1 , 2, 17 ó 18 para preparar un medicamento para la modulación de la actividad catalítica de una proteína cinasa. 21. - El uso como se reclama en la reivindicación 20, en donde la proteína cinasa es VEGFR, c- kit y PDGFR. 22. - El uso de un compuesto o sal de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 , 2, 17 ó 18 y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable para preparar un medicamento para tratar o prevenir un trastorno relacionado con una proteína cinasa en un paciente. 23. - El uso como se reclama en la la reivindicación 22, en donde el trastorno es mediado por la cinasa VEGFR, c-kit y/o PDGFR. 24. - El uso como se reclama en la reivindicación 23, en donde el trastorno relacionado con la proteína cinasa es un cáncer seleccionado del grupo que consiste de glioblastoma, cáncer de pulmón de las células no pequeñas, melanoma, leucemia mieloide aguda y cáncer colorrectal. 25. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en donde R es H.