JP6681665B2

JP6681665B2 - Cell culture substrate containing fluorine-containing polyimide imidized by heat treatment on the surface

Info

Publication number: JP6681665B2
Application number: JP2015053859A
Authority: JP
Inventors: 朋未牧野; 洋堀川
Original assignee: Nippon Shokubai Co Ltd
Current assignee: Nippon Shokubai Co Ltd
Priority date: 2014-04-22
Filing date: 2015-03-17
Publication date: 2020-04-15
Anticipated expiration: 2035-03-17
Also published as: JP2015213498A

Description

本発明は、細胞培養用基材、該基材を備えた細胞培養用容器、該基材を用いて細胞を培養する方法、及び、該基材を用いて細胞から三次元的な組織を形成する方法に関する。 The present invention relates to a cell culture substrate, a cell culture container provided with the substrate, a method of culturing cells using the substrate, and forming a three-dimensional tissue from the cells using the substrate. On how to do.

肝臓、膵臓、皮膚、血管等の各器官を形成する細胞は、生体内において、細胞同士が三次元的にネットワークを形成し機能を発現している。 The cells forming each organ such as the liver, pancreas, skin, blood vessels, etc. in the living body, the cells form a three-dimensional network and express their functions.

そこでこれらの器官の機能を再生する再生医療の研究において、これらの器官の細胞を培養する場合には、細胞同士が三次元的にネットワークを形成できるような培養（すなわち三次元培養）が求められる。細胞同士が三次元的にネットワークを形成した最小の組織としてスフェロイドがある。しかしながら一般的な樹脂製の細胞培養用基材の表面で細胞を培養する場合、細胞は平面状に広がって増殖し、三次元的なネットワークは形成されない。 Therefore, in the research of regenerative medicine that regenerates the functions of these organs, when culturing cells of these organs, culture that allows cells to form a three-dimensional network (that is, three-dimensional culture) is required. . Spheroids are the smallest tissues in which cells form a three-dimensional network. However, when cells are cultured on the surface of a general resin-made cell culture substrate, the cells spread in a plane and proliferate, and a three-dimensional network is not formed.

三次元培養を行うための基材として従来から種々のものが開発されている。
例えば特許文献１では、熱可塑性の有機ポリマーから形成された基体と、該基体から延伸した柱状微小突起群とを備え、柱状微小突起群の突起に細胞を付着させて培養する細胞培養シートが開示されている。また特許文献２では、平面方向の形状が多角形であると共に最小内径が３μｍ以下である微小セルが複数連続して形成された、細胞接着面として機能する凹凸構造を有する細胞内容構造体が開示されている。 Various materials have been conventionally developed as substrates for three-dimensional culture.
For example, Patent Document 1 discloses a cell culture sheet including a substrate formed of a thermoplastic organic polymer and a group of columnar microprojections extending from the substrate, and culturing by attaching cells to the protrusions of the columnar microprojection group. Has been done. Further, Patent Document 2 discloses a cell content structure having a concavo-convex structure that functions as a cell adhesion surface, in which a plurality of minute cells each having a polygonal planar shape and a minimum inner diameter of 3 μm or less are continuously formed. Has been done.

非特許文献１では、含フッ素ポリイミドが優れた生体適合性を有することに着目し、含フッ素ポリイミドの１種である６ＦＤＡ−６ＦＡＰの膜の表面上で細胞培養を行ったところ、表面が平坦な６ＦＤＡ−６ＦＡＰ膜上では細胞は二次元的に増殖してしまいスフェロイドが形成されないのに対して、ラビング処理により表面に微細な凹凸を形成するとスフェロイドが形成されたことを開示している。ここで６ＦＤＡ−６ＦＡＰとは、酸二無水物である２，２’−ビス（３，４−ジカルボキシフェニル）ヘキサフルオロプロパン二無水物（６ＦＤＡ）と、ジアミン化合物である２，２’−ビス（４−アミノフェニル）ヘキサフルオロプロパン（６ＦＡＰ）とを重合させたポリイミドである。非特許文献１の筆者らは、特許文献３において、ラビング処理していない平坦な６ＦＤＡ−６ＦＡＰ膜上で二次元的に血管内皮細胞を培養したのちにゲルに転写して血管組織を形成し、ラビング処理した凹凸表面の６ＦＤＡ−６ＦＡＰ膜上で三次元的に肝癌細胞を培養してスフェロイドを形成し、両者を組み合わせることを開示する。 In Non-Patent Document 1, focusing on the fact that fluorinated polyimide has excellent biocompatibility, when cell culture was performed on the surface of a membrane of 6FDA-6FAP, which is one of fluorinated polyimides, the surface was flat. It discloses that cells are two-dimensionally proliferated on the 6FDA-6FAP membrane and spheroids are not formed, whereas spheroids are formed when fine irregularities are formed on the surface by rubbing treatment. Here, 6FDA-6FAP means 2,2′-bis (3,4-dicarboxyphenyl) hexafluoropropane dianhydride (6FDA) which is an acid dianhydride and 2,2′-bis which is a diamine compound. A polyimide obtained by polymerizing (4-aminophenyl) hexafluoropropane (6FAP). In Non-Patent Document 1, the authors described in Patent Document 3 two-dimensionally cultured vascular endothelial cells on a flat 6FDA-6FAP membrane that was not rubbed, and then transferred to a gel to form a vascular tissue, It is disclosed that hepatoma cells are three-dimensionally cultured on a 6FDA-6FAP film having an uneven surface subjected to a rubbing treatment to form spheroids, and both are combined.

特許第４８９７１９２号公報Japanese Patent No. 4897192 特許第４１５９１０３号公報Japanese Patent No. 4159103 特開２００９−２１３７１６号公報JP, 2009-213716, A

Ｎ．Ｍａｔｓｕｍｏｔｏｅｔａｌ．，ＰｏｌｙｍｅｒｓｆｏｒＡｄｖａｎｃｅｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，１９，１００２（２００８）N. Matsumoto et al. , Polymers for Advanced Technologies, 19, 1002 (2008).

特許文献１及び２に開示されている三次元培養用の細胞培養基板はいずれも基材表面に微細な凹凸構造を形成することで三次元培養を可能にするものであった。このような基材は、微細な凹凸の作成が容易ではなく加工コストがかかるという問題があった。また微細な凹凸を有する基板の表面上で細胞培養を行う場合、液体培地を基材表面に適用したときに基材表面上に気泡が残り易いため、基材表面に液体培地を適用した後に脱泡処理が必要であるという問題もあった。 The cell culture substrates for three-dimensional culture disclosed in Patent Documents 1 and 2 each enable three-dimensional culture by forming a fine uneven structure on the surface of the base material. Such a base material has a problem that it is not easy to form fine unevenness and processing costs are high. Also, when cell culture is performed on the surface of a substrate having fine irregularities, air bubbles tend to remain on the surface of the substrate when the liquid medium is applied to the surface of the substrate. There is also a problem that foam treatment is required.

非特許文献１及び特許文献３に開示されている、含フッ素ポリイミドである６ＦＤＡ−６ＦＡＰのラビング処理された膜を備えた細胞培養用基材は、特許文献１及び２と比較して簡便に作成可能ではあるが、特許文献１及び２と同様の問題は有しており、なお改善の余地があった。 The cell culture substrate provided with the rubbed membrane of 6FDA-6FAP, which is a fluorine-containing polyimide, disclosed in Non-Patent Document 1 and Patent Document 3 is more easily prepared than in Patent Documents 1 and 2. Although possible, there are problems similar to those of Patent Documents 1 and 2, and there is still room for improvement.

そこで本発明は、ラビング処理を必要とせず、三次元的な組織培養が可能な含フッ素ポリイミドを表面に備えた細胞培養用基材を提供することを目的とする。 Therefore, an object of the present invention is to provide a cell culture substrate having a fluorine-containing polyimide on the surface, which does not require rubbing treatment and enables three-dimensional tissue culture.

ポリアミド酸をイミド化してポリイミドを得る方法としては、ポリアミド酸をイミド化触媒の存在下でイミド化する方法（化学イミド化法）と、ポリアミド酸を加熱してイミド化する方法（熱イミド化法）がある。非特許文献１及び特許文献３において実験に用いられているポリイミドはいずれも第三級アミン化合物をイミド化触媒として用いる化学イミド化法で得られたものである。 As a method of imidizing a polyamic acid to obtain a polyimide, a method of imidizing polyamic acid in the presence of an imidization catalyst (chemical imidization method) and a method of heating polyamic acid to imidize (thermal imidization method) ). All of the polyimides used in the experiments in Non-Patent Document 1 and Patent Document 3 were obtained by a chemical imidization method using a tertiary amine compound as an imidization catalyst.

本発明者らは、驚くべきことに、非特許文献１及び特許文献３に開示されている化学イミド化法で製造した６ＦＤＡ−６ＦＡＰ膜の平坦な表面上では三次元培養ができないのに対して、熱イミド化法で製造した６ＦＤＡ−６ＦＡＰ膜を用いた場合は平坦な表面上であっても三次元培養が可能であることを見出した。そして、６ＦＤＡ−６ＦＡＰ膜にイミド化触媒として用いられる第三級アミン化合物が残存している場合に平坦な表面上での三次元培養が困難となることを見出した。 The present inventors surprisingly cannot perform three-dimensional culture on the flat surface of the 6FDA-6FAP membrane produced by the chemical imidization method disclosed in Non-Patent Document 1 and Patent Document 3. It was found that when a 6FDA-6FAP membrane produced by the thermal imidization method is used, three-dimensional culture is possible even on a flat surface. It was also found that three-dimensional culture on a flat surface becomes difficult when the tertiary amine compound used as an imidization catalyst remains on the 6FDA-6FAP membrane.

本発明の細胞培養用基材は、
表面の少なくとも一部がポリイミドを含む樹脂組成物により構成された細胞培養用基材であって、
前記ポリイミドが、ポリアミド酸を加熱処理によりイミド化させて得られ、かつ、繰り返し単位中に１個以上のフッ素原子を有する含フッ素ポリイミドである
ことを特徴とする。 The cell culture substrate of the present invention,
A cell culture substrate comprising at least a part of the surface of a resin composition containing a polyimide,
The polyimide is a fluorine-containing polyimide obtained by imidizing a polyamic acid by heat treatment and having one or more fluorine atoms in a repeating unit.

また本発明の細胞培養用基材は、
表面の少なくとも一部がポリイミドを含む樹脂組成物により構成された細胞培養用基材であって、
前記ポリイミドが、酸二無水物とジアミンとを各々１種又は２種以上重合させて得られたポリアミド酸を、加熱処理によりイミド化させて得られたポリイミドであり、
前記酸二無水物及び前記ジアミンのうち少なくとも１種の化合物は、分子内にフッ素原子を有することを特徴とする。 The cell culture substrate of the present invention,
A cell culture substrate comprising at least a part of the surface of a resin composition containing a polyimide,
The polyimide is a polyimide obtained by imidizing a polyamic acid obtained by polymerizing one kind or two or more kinds of acid dianhydride and diamine, respectively, by heat treatment,
At least one compound of the acid dianhydride and the diamine has a fluorine atom in the molecule.

上記特徴を備える細胞培養用基材では、フッ素化ポリイミドの製造が、イミド化触媒を必要としない熱イミド化により行われるため、三次元培養を妨げる原因となるイミド化触媒の存在しない表面とすることが可能であり、該表面上で細胞が三次元的な組織を形成することが可能となる。また、本発明の基材は、細胞の足場となる表面に立体的な構造を付与する必要がないため製造が容易である。 In the cell culture substrate having the above characteristics, the production of the fluorinated polyimide is performed by thermal imidization that does not require an imidization catalyst, so that the surface does not have an imidization catalyst that causes three-dimensional culture. It is possible that cells can form a three-dimensional tissue on the surface. In addition, the base material of the present invention does not need to have a three-dimensional structure on the surface serving as a scaffold for cells, and thus is easy to manufacture.

上記細胞培養用基材の好適な実施形態では、前記樹脂組成物におけるフッ素含有量が１〜６０質量％であり、イミド化率が２０％以上である。
この実施形態によれば、基材表面上での三次元的組織が形成され易く好ましい。 In a preferred embodiment of the cell culture substrate, the resin composition has a fluorine content of 1 to 60 mass% and an imidization ratio of 20% or more.
According to this embodiment, a three-dimensional structure is easily formed on the surface of the base material, which is preferable.

上記細胞培養用基材の好適な実施形態では、前記ポリアミド酸の加熱処理によるイミド化は、第三級アミン化合物の不存在条件下で行われる。 In a preferred embodiment of the cell culture substrate, the imidization of the polyamic acid by heat treatment is carried out under the absence of a tertiary amine compound.

この実施形態によれば、基材表面に第三級アミン化合物が存在しないため、該表面上で細胞が三次元的な組織を形成することが可能である。 According to this embodiment, since the tertiary amine compound does not exist on the surface of the base material, cells can form a three-dimensional tissue on the surface.

さらに本発明の細胞培養用基材は、
表面の少なくとも一部がポリイミドを含む樹脂組成物により構成された細胞培養用基材であって、
前記ポリイミドが、ポリアミド酸を加熱処理によりイミド化させて得られ、かつ、繰り返し単位中に１個以上のフッ素原子を有する含フッ素ポリイミドであり、
前記樹脂組成物中の第三級アミン化合物の量が、前記樹脂組成物中の前記ポリイミド及び残存するポリアミド酸の合計量に対して０．０３０質量％以下である
ことを特徴とする。 Further, the cell culture substrate of the present invention,
A cell culture substrate comprising at least a part of the surface of a resin composition containing a polyimide,
The polyimide is a fluorine-containing polyimide obtained by imidizing polyamic acid by heat treatment, and having one or more fluorine atoms in the repeating unit.
The amount of the tertiary amine compound in the resin composition is 0.030% by mass or less based on the total amount of the polyimide and the remaining polyamic acid in the resin composition.

本発明の更なる細胞培養用基材は、
表面の少なくとも一部がポリイミドを含む樹脂組成物により構成された細胞培養用基材であって、
前記ポリイミドが、酸二無水物とジアミンとを各々１種又は２種以上反応させて得られたポリイミドであり、
前記樹脂組成物中の第三級アミン化合物の量が、前記樹脂組成物中の前記ポリイミド及び残存する前記ポリアミド酸の総和に対して０．０３０質量％以下であり、
前記酸二無水物及び前記ジアミンのうち少なくとも１種の化合物は、分子内にフッ素原子を有することを特徴とする。 Further cell culture substrate of the present invention,
A cell culture substrate comprising at least a part of the surface of a resin composition containing a polyimide,
The polyimide is a polyimide obtained by reacting one or more kinds of acid dianhydride and diamine,
The amount of the tertiary amine compound in the resin composition is 0.030 mass% or less based on the total amount of the polyimide and the remaining polyamic acid in the resin composition,
At least one compound of the acid dianhydride and the diamine has a fluorine atom in the molecule.

本発明によれば、三次元培養を阻害する原因となる前記樹脂組成物中に残存する第三級アミン化合物が十分に少ないため、三次元培養が可能となる。 According to the present invention, three-dimensional culture is possible because the amount of the tertiary amine compound remaining in the resin composition, which causes the three-dimensional culture to be inhibited, is sufficiently small.

また本発明者らは、前記ポリイミドを表面に含む基材を用い、例えば、シングル若しくはマルチタイプのプレートやシャーレの底部に基材を設置して培養を行った時、さらに好ましくは、該基材のポリイミドを含む表面に細胞及び培地を接触させ、培地上面に加えて該基材の他方の表面を空気等の酸素含有ガスと接触させた状態で細胞培養を行うとき、細胞がスフェロイド、三次元細胞集合体等の三次元的な組織を形成することができるという驚くべき知見を見出し、本発明を完成するに至った。 In addition, the present inventors have used a substrate containing the polyimide on the surface, for example, when the substrate is placed on the bottom of a single or multi-type plate or petri dish and cultured, more preferably, the substrate When the cells and the culture medium are brought into contact with the surface containing the polyimide, and the cell culture is performed in a state where the other surface of the base material in addition to the top surface of the culture medium is brought into contact with an oxygen-containing gas such as air, the cells are spheroids, three-dimensional. The surprising finding that a three-dimensional tissue such as a cell aggregate can be formed was found, and the present invention has been completed.

したがって、本発明は、
容器の少なくとも一部が前記細胞培養用基材により構成されていることを特徴とする細胞培養用容器に関する。 Therefore, the present invention
The present invention relates to a cell culture container, wherein at least a part of the container is composed of the cell culture substrate.

本発明の細胞培養用容器を用いると、適度な柔軟性と疎水性を備えた培養表面を有するため、細胞の生育とスフェロイド、三次元細胞集合体等の三次元的な組織の形成が進み易い。更に該基材のポリイミドを含む表面に細胞及び培地を接触させ、培地上面に加えて該基材の他方の表面を空気等の酸素含有ガスと接触させた状態で細胞培養を行うとき、細胞の生育とスフェロイド、三次元細胞集合体等の三次元的な組織の形成が進み易い。 When the cell culture container of the present invention is used, since it has a culture surface having appropriate flexibility and hydrophobicity, cell growth and formation of three-dimensional tissues such as spheroids and three-dimensional cell aggregates are easy to proceed. . Further, when cells and a medium are brought into contact with the polyimide-containing surface of the substrate and the other surface of the substrate is brought into contact with an oxygen-containing gas such as air in addition to the upper surface of the medium, cell culture is performed. Growth and formation of three-dimensional tissues such as spheroids and three-dimensional cell aggregates are likely to proceed.

本発明はまた、前記細胞培養用基材の表面上で細胞を培養させる工程を含む、細胞培養方法に関する。 The present invention also relates to a cell culture method including a step of culturing cells on the surface of the cell culture substrate.

本発明はまた、前記細胞培養用基材の表面上で細胞を三次元培養する工程を含む、細胞培養方法に関する。 The present invention also relates to a cell culture method including a step of three-dimensionally culturing cells on the surface of the cell culture substrate.

本方法発明によれば、簡便な操作により、細胞の培養と、スフェロイド、三次元細胞集合体等の三次元的な組織の形成が可能である。 According to the present invention, cells can be cultured and three-dimensional tissues such as spheroids and three-dimensional cell aggregates can be formed by a simple operation.

また本発明は、
表面の少なくとも一部にポリイミドを含む樹脂組成物により構成されたフィルムを備えた細胞培養用基材の製造方法であって、
分子内に１個以上のフッ素原子を有するポリアミド酸が溶媒中に溶解された溶液の膜を形成する工程と、
前記膜を加熱処理することにより前記膜中のポリアミド酸をイミド化して前記フィルムを形成する工程と
を含む方法に関する。 The present invention also provides
A method for producing a cell culture substrate comprising a film composed of a resin composition containing polyimide on at least a part of the surface,
Forming a film of a solution in which a polyamic acid having one or more fluorine atoms in the molecule is dissolved in a solvent;
Heat treating the film to imidize the polyamic acid in the film to form the film.

本発明はまた、
表面の少なくとも一部にポリイミドを含む樹脂組成物により構成されたフィルムを備えた細胞培養用基材の製造方法であって、
酸二無水物とジアミンとを各々１種又は２種以上重合させて得られたポリアミド酸であって、前記酸二無水物及び前記ジアミンのうち少なくとも１種の化合物が分子内にフッ素原子を有するポリアミド酸が溶媒中に溶解された溶液の膜を形成する工程と、
前記膜を加熱処理することにより前記膜中のポリアミド酸をイミド化して前記フィルムを形成する工程と
を含む方法に関する。 The present invention also provides
A method for producing a cell culture substrate comprising a film composed of a resin composition containing polyimide on at least a part of the surface,
A polyamic acid obtained by polymerizing one kind or two or more kinds of acid dianhydride and diamine, respectively, wherein at least one compound of the acid dianhydride and the diamine has a fluorine atom in the molecule. Forming a film of a solution of polyamic acid dissolved in a solvent,
Heat treating the film to imidize the polyamic acid in the film to form the film.

この方法によれば、三次元培養を妨げる原因となるイミド化触媒の存在しない表面を有する細胞培養用基材を製造することが可能である。
前記方法の好適な実施形態では、前記溶液が第三級アミン化合物を含有しない。 According to this method, it is possible to produce a cell culture substrate having a surface on which an imidization catalyst that causes three-dimensional culture is not present.
In a preferred embodiment of said method said solution does not contain a tertiary amine compound.

この実施形態では、三次元培養を妨げる原因となる第三級アミン化合物の存在しない表面を有する細胞培養用基材を製造することが可能である。 In this embodiment, it is possible to manufacture a cell culture substrate having a surface free of a tertiary amine compound that causes a hindrance to three-dimensional culture.

本発明において「樹脂組成物」は「樹脂」と言い換えることもできる。含フッ素ポリイミドは通常は重合度が異なる多数の含フッ素ポリイミド分子からなることから、含フッ素ポリイミドを含有する樹脂を「樹脂組成物」と称する。本発明において「樹脂組成物」又は「樹脂」は、本発明の効果を損なわない範囲の量の他の成分を含んでいてもよいし、含んでいなくともよい。他の成分としては、本発明の効果を損なわない範囲の量の、重合反応に使用される成分や、通常の添加剤であることができる。 In the present invention, the “resin composition” can also be referred to as the “resin”. Since the fluorinated polyimide is usually composed of a large number of fluorinated polyimide molecules having different degrees of polymerization, a resin containing the fluorinated polyimide is referred to as a “resin composition”. In the present invention, the “resin composition” or the “resin” may or may not contain other components in an amount within a range that does not impair the effects of the present invention. Other components may be components used in the polymerization reaction and ordinary additives in an amount that does not impair the effects of the present invention.

本発明の細胞培養用基材では、細胞の足場となる表面を所定の樹脂組成物により構成することにより、細胞の三次元培養が可能となる。 In the cell culture substrate of the present invention, three-dimensional culturing of cells becomes possible by forming the surface serving as a scaffold of cells with a predetermined resin composition.

また本発明によれば細胞からスフェロイド、三次元細胞集合体等の三次元組織を形成することが可能である。 Further, according to the present invention, it is possible to form three-dimensional tissues such as spheroids and three-dimensional cell aggregates from cells.

図１は、本発明の細胞培養用基材の実施形態１において、樹脂組成物により構成されるフィルム１を、フィルム１の主面に対して垂直な平面に沿って切った断面を模式的に示す図である。FIG. 1 is a schematic cross-sectional view of a film 1 formed of a resin composition, taken along a plane perpendicular to the main surface of the film 1 in Embodiment 1 of the cell culture substrate of the present invention. FIG. 図２は、本発明の細胞培養用基材の実施形態２において、樹脂組成物により構成されるフィルム１及び支持体２を、フィルム１の主面に対して垂直な平面に沿って切った断面を模式的に示す図である。FIG. 2 is a cross-sectional view of the film 1 and the support 2 formed of the resin composition in the second embodiment of the cell culture substrate of the present invention, taken along a plane perpendicular to the main surface of the film 1. It is a figure which shows typically. ラット初代肝細胞の培養結果を示す写真である。（Ａ）はマルチウェルセルカルチャープレート２４ｗｅｌｌ（ＢＤＦａｌｃｏｎ社）での培養結果を示す。（Ｂ）は本発明の６ＦＤＡ／６ＦＡＰ膜での培養結果を示す。6 is a photograph showing the results of culturing rat primary hepatocytes. (A) shows the results of culturing in a multi-well cell culture plate 24well (BD Falcon). (B) shows the results of culturing with the 6FDA / 6FAP membrane of the present invention. 繊維芽様細胞の培養結果を示す写真である。（Ａ）はマルチウェルセルカルチャープレート２４ｗｅｌｌ（ＢＤＦａｌｃｏｎ社）での培養結果を示す。（Ｂ）は本発明の６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ膜での培養結果を示す。（Ｃ）は浮遊細胞用ペトリディッシュ（Ｎｕｎｃ社）での培養結果を示す。（Ｄ）は超低接着表面２４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）での培養結果を示す。It is a photograph showing the results of culturing fibroblast-like cells. (A) shows the results of culturing in a multi-well cell culture plate 24well (BD Falcon). (B) shows the results of culturing with the 6FDA / TPEQ membrane of the present invention. (C) shows the results of culturing in Petri dishes for floating cells (Nunc). (D) shows the culture results on an ultra-low adhesion surface 24-well plate (Corning). ラット初代肝細胞の培養結果を示す写真である。（Ａ）はマルチウェルセルカルチャープレート２４ｗｅｌｌ（ＢＤＦａｌｃｏｎ社）での培養結果を示す。（Ｂ）は本発明の６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ膜での培養結果を示す。（Ｃ）はＮａｎｏＣｕｌｔｕｒｅ（登録商標）ＰｌａｔｅＭＳパターン／高接着／２４ウェル（サイバックス社）での培養結果を示す。（Ｄ）はＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅマルチウェルプレート２４ｗｅｌｌ（住友ベークライト社）での培養結果を示す。6 is a photograph showing the results of culturing rat primary hepatocytes. (A) shows the results of culturing in a multi-well cell culture plate 24well (BD Falcon). (B) shows the results of culturing with the 6FDA / TPEQ membrane of the present invention. (C) shows the culture results in NanoCulture (registered trademark) Plate MS pattern / high adhesion / 24 wells (Cybacs). (D) shows the results of culturing in PrimeSurface multiwell plate 24well (Sumitomo Bakelite Co., Ltd.). ラット初代肝細胞の培養５日目に６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ膜上に形成された細胞凝集塊の、カドヘリン及びアクチンの免疫染色を示す写真（蛍光顕微鏡像）である。（Ａ）はカドヘリンの染色結果を示す。（Ｂ）はアクチンの染色結果を示す。（Ｃ）はカドヘリン染色の蛍光顕微鏡像とアクチン染色の蛍光顕微鏡像とを重ね合わせたものである。3 is a photograph (fluorescence microscope image) showing immunostaining of cadherin and actin in a cell aggregate formed on a 6FDA / TPEQ membrane on day 5 of culture of rat primary hepatocytes. (A) shows the results of cadherin staining. (B) shows the result of actin staining. (C) is a superimposition of a cadherin-stained fluorescence microscope image and an actin-stained fluorescence microscope image. ラット初代肝細胞の培養５日目の培養液でのアルブミンの定量結果を示す図である。It is a figure which shows the quantification result of albumin in the culture solution of the culture | cultivation 5th day of a rat primary hepatocyte. 図８は、本発明の細胞培養方法での、基材１０と、培地２と、細胞３と、外気（酸素含有ガス）４との位置関係を説明する模式図である。FIG. 8 is a schematic diagram illustrating the positional relationship among the base material 10, the medium 2, the cells 3, and the outside air (oxygen-containing gas) 4 in the cell culture method of the present invention. 本発明の細胞培養用容器の一実施形態を示す。1 shows an embodiment of the cell culture container of the present invention. 本発明の細胞培養用容器の別の実施形態を示す。（ａ）細胞培養用容器１００の縦断面の模式図である。（ｂ）細胞培養用容器１００を用いて細胞培養を行う方法を説明するための図である。2 shows another embodiment of the cell culture container of the present invention. (A) A schematic view of a vertical cross section of the cell culture container 100. (B) It is a figure for demonstrating the method of performing a cell culture using the cell culture container 100. 本発明の細胞培養用容器の他の実施形態を示す。（ａ）細胞培養用容器１００の斜視図である。（ｂ）細胞培養用容器１００のＡ−Ａ断面の模式図である。（ｃ）別の実施形態の細胞培養用容器１００のＡ−Ａ断面の模式図である。2 shows another embodiment of the cell culture container of the present invention. (A) It is a perspective view of the container 100 for cell culture. (B) It is a schematic diagram of the AA cross section of the cell culture container 100. (C) It is a schematic diagram of the AA cross section of the cell culture container 100 of another embodiment. 本発明の細胞培養用容器の更なる実施形態を示す。1 shows a further embodiment of the cell culture container of the present invention. 無血清培地を用いたラット初代肝細胞の培養結果を示す写真である。（Ａ）はＮａｎｏＣｕｌｔｕｒｅＰｌａｔｅＭＳパターン／高接着／２４ウェル（サイバックス社）での培養結果を示す。（Ｂ）はＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅマルチウェルプレート２４ｗｅｌｌ（住友ベークライト社）での培養結果を示す。（Ｃ）は本発明の６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ２４ｗｅｌｌプレートでの培養結果を示す。It is a photograph showing the results of culturing rat primary hepatocytes in a serum-free medium. (A) shows the culture results in NanoCulture Plate MS pattern / high adhesion / 24 wells (Cybacs). (B) shows the results of culturing in PrimeSurface multiwell plate 24well (Sumitomo Bakelite Co., Ltd.). (C) shows the culture results on the 6FDA / TPEQ 24 well plate of the present invention. 無血清培地を用いたラット初代肝細胞の培養５日目の培養液でのＣＹＰ１Ａ活性の測定結果を示すグラフである。It is a graph which shows the measurement result of CYP1A activity in the culture medium of the rat primary hepatocyte culture | cultivation 5th day using a serum-free medium. 血清培地を用いたラット初代肝細胞の培養結果を示す写真である。（Ａ）はコラーゲンタイプＩコートマイクロプレート２４ウェル（旭硝子社）での培養結果を示す。（Ｂ）はＮａｎｏＣｕｌｔｕｒｅＰｌａｔｅＭＳパターン／高接着／２４ウェル（サイバックス社）での培養結果を示す。（Ｃ）はＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅマルチウェルプレート２４ｗｅｌｌ（住友ベークライト社）での培養結果を示す。（Ｄ）はＬｕｍｏｘマルチウェルプレート２４ウェル（グライナー社）での培養結果を示す。（Ｅ）は本発明の６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ２４ｗｅｌｌプレートでの培養結果を示す。It is a photograph showing the results of culturing rat primary hepatocytes using a serum medium. (A) shows the results of culturing in 24-well collagen type I-coated microplate (Asahi Glass Co., Ltd.). (B) shows the results of culturing with NanoCulture Plate MS pattern / high adhesion / 24 wells (Cybacs). (C) shows the culture results in PrimeSurface multiwell plate 24well (Sumitomo Bakelite Co., Ltd.). (D) shows the results of culturing in 24-well Lumox multiwell plates (Greiner). (E) shows the culture results on the 6FDA / TPEQ 24 well plate of the present invention. 血清培地を用いたラット初代肝細胞の培養５日目の培養液でのアルブミンの定量結果を示すグラフである。It is a graph which shows the quantification result of albumin in the culture medium of the 5th day of culture | cultivation of the rat primary hepatocyte using a serum medium. ＨｅｐＧ２細胞の培養結果を示す写真である。（Ａ）はマルチウェルセルカルチャープレート２４ｗｅｌｌ（ＢＤＦａｌｃｏｎ社）での培養結果を示す。（Ｂ）はＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅマルチウェルプレート２４ｗｅｌｌ（住友ベークライト社）での培養結果を示す。（Ｃ）は本発明の６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ膜での培養結果を示す。It is a photograph showing the results of culturing HepG2 cells. (A) shows the results of culturing in a multi-well cell culture plate 24well (BD Falcon). (B) shows the results of culturing in PrimeSurface multiwell plate 24well (Sumitomo Bakelite Co., Ltd.). (C) shows the results of culturing with the 6FDA / TPEQ membrane of the present invention.

１．含フッ素ポリイミド
本発明で用いるポリイミドは、ポリアミド酸を加熱処理によりイミド化させて得られ、かつ繰り返し単位中に１個以上のフッ素原子を有する含フッ素ポリイミドである。典型的には、酸二無水物とジアミンとを各々１種以上反応させて得られたポリアミド酸を加熱処理によりイミド化させて得られた含フッ素ポリイミドである。含フッ素ポリイミドの製造のためには、好ましくは、酸二無水物及びジアミンのうち少なくとも１種の化合物として、分子内にフッ素原子を有するものを用いる。該ポリイミドを含む、本発明の基材表面を構成する樹脂組成物中のフッ素含量は、１〜６０質量％、好ましくは５〜６０質量％、より好ましくは１０〜６０質量％、さらに好ましくは１５〜５０質量％である。上記フッ素含有量とするためには、使用される酸二無水物又はジアミンの一方又は両方が１個以上のフッ素原子を含めばよい。かかるフッ素含有量の樹脂組成物により構成される基材表面では細胞が三次元的な組織を形成し易い。 1. Fluorine-containing polyimide The polyimide used in the present invention is a fluorine-containing polyimide obtained by imidizing polyamic acid by heat treatment and having one or more fluorine atoms in the repeating unit. Typically, it is a fluorine-containing polyimide obtained by imidizing a polyamic acid obtained by reacting one or more kinds of acid dianhydride and diamine, respectively, by heat treatment. For the production of the fluorine-containing polyimide, it is preferable to use at least one compound of acid dianhydride and diamine that has a fluorine atom in the molecule. The content of fluorine in the resin composition constituting the substrate surface of the present invention containing the polyimide is 1 to 60% by mass, preferably 5 to 60% by mass, more preferably 10 to 60% by mass, and further preferably 15%. Is about 50% by mass. In order to obtain the above-mentioned fluorine content, one or both of the acid dianhydride and the diamine used may contain one or more fluorine atoms. Cells easily form a three-dimensional tissue on the surface of a substrate composed of a resin composition having such a fluorine content.

前記酸二無水物及び前記ジアミンのうち少なくとも１種の化合物が有するフッ素原子は、酸二無水物とジアミンとのアミド化反応及びイミド化反応によって消滅しないことが好ましい。 It is preferable that the fluorine atom contained in at least one compound of the acid dianhydride and the diamine does not disappear due to the amidation reaction and imidization reaction of the acid dianhydride and the diamine.

ポリイミドは、酸二無水物とジアミンとを各々１種以上重合させて得られるポリアミド酸をイミド化することにより得られるものである。本発明の基材において細胞の足場となる表面を構成する樹脂組成物は、ポリイミドに加えて、ポリアミド酸を一部に含んでいてもよい。本明細書中では、イミド化率が０％のものをポリアミド酸、イミド化率が０％を超えるものをポリイミドと称する。 Polyimide is obtained by imidizing polyamic acid obtained by polymerizing one or more kinds of acid dianhydride and diamine. In the base material of the present invention, the resin composition forming the surface that serves as a scaffold for cells may partially contain polyamic acid in addition to polyimide. In the present specification, those having an imidization rate of 0% are referred to as polyamic acids, and those having an imidization rate of more than 0% are referred to as polyimides.

また、本明細書中で、「含フッ素ポリアミド酸」を「ポリアミド酸」、「含フッ素芳香族ポリアミド酸」を「芳香族ポリアミド酸」、「含フッ素ポリイミド」を「ポリイミド」、「含フッ素芳香族ポリイミド」を「芳香族ポリイミド」と各々称することがある。 In the present specification, "fluorinated polyamic acid" means "polyamic acid", "fluorine-containing aromatic polyamic acid" means "aromatic polyamic acid", "fluorine-containing polyimide" means "polyimide", and "fluorine-containing aromatic". The "group polyimide" may be referred to as an "aromatic polyimide".

酸二無水物として式（１）で示される化合物を用い、ジアミンとして式（２）で示される化合物を用いて得られる本発明のポリイミドは、その主鎖（主鎖骨格とも言う）中に式（３）で示される繰り返し単位を含む。 The polyimide of the present invention obtained by using the compound represented by the formula (1) as the acid dianhydride and the compound represented by the formula (2) as the diamine has a formula in the main chain (also referred to as a main chain skeleton). The repeating unit represented by (3) is included.

式（１）〜（３）において、Ｘ^０は、酸二無水物残基を表し、４価の有機基である。Ｙ^０は、ジアミン化合物残基を表し、２価の有機基である。Ｘ^０及びＹ^０に含まれるフッ素原子の合計は１個以上である。 In formulas (1) to (3), X ⁰ represents an acid dianhydride residue and is a tetravalent organic group. Y ⁰ represents a diamine compound residue and is a divalent organic group. The total number of fluorine atoms contained in X ⁰ and Y ⁰ is 1 or more.

本発明で用いられる樹脂組成物中の含フッ素ポリイミドは式（３）で示される繰り返し単位を有している限り、どのような製法で製造されたものでもよく、式（１）で示される酸二無水物と式（２）で示されるジアミンとを反応させて得られる含フッ素ポリイミドには限定されない。本発明での「酸二無水物とジアミンとを各々１種又は２種以上反応させて得られたポリイミド」において、酸二無水物は酸二無水物の誘導体の形態でもよく、ジアミンはジアミンの誘導体の形態でもよいことは当業者に自明である。 The fluorine-containing polyimide in the resin composition used in the present invention may be produced by any method as long as it has the repeating unit represented by the formula (3), and the acid represented by the formula (1) is used. The fluorine-containing polyimide obtained by reacting the dianhydride and the diamine represented by the formula (2) is not limited. In the “polyimide obtained by reacting one or more kinds of acid dianhydride and diamine with each other” in the present invention, the acid dianhydride may be in the form of a derivative of the acid dianhydride, and the diamine is a diamine. It will be apparent to those skilled in the art that it may be in the form of a derivative.

ポリイミドを製造する方法としては、実施例で示すような二段合成法や、一段合成法が使用できる。 As a method for producing a polyimide, a two-step synthesis method as shown in Examples or a one-step synthesis method can be used.

ポリイミドの二段合成法は前駆体としてポリアミド酸を合成し、ポリアミド酸をポリイミド酸に変換する方法である。前駆体としてのポリアミド酸はポリアミド酸誘導体であってもよい。ポリアミド酸誘導体としては、例えばポリアミド酸塩、ポリアミド酸アルキルエステル、ポリアミド酸アミド、ビスメチリデンピロメリチドからのポリアミド酸誘導体、ポリアミド酸シリルエステル、ポリアミド酸イソイミドなどが挙げられる。 The two-step synthesis method of polyimide is a method of synthesizing a polyamic acid as a precursor and converting the polyamic acid into a polyamic acid. The polyamic acid as a precursor may be a polyamic acid derivative. Examples of the polyamic acid derivative include polyamic acid salts, polyamic acid alkyl esters, polyamic acid amides, polyamic acid derivatives from bismethylidenepyromellitide, polyamic acid silyl esters, and polyamic acid isoimides.

ポリイミドの一段合成法としては、例えば高温溶融重合法、イソシアナート法、テトラカルボン酸ジチオ無水物法、イオン液体を用いる方法などの、溶媒を用いる一段合成法が使用できる。その他の一段合成法としては、ナイロン塩型モノマーを経由する重合法、高温固相重合法、高圧下での高温固相重合法、水中での固相重合法などが挙げられる。 As the one-step synthesis method of the polyimide, for example, a one-step synthesis method using a solvent such as a high temperature melt polymerization method, an isocyanate method, a tetracarboxylic acid dithioanhydride method, and a method using an ionic liquid can be used. Other one-step synthesis methods include a polymerization method via a nylon salt type monomer, a high temperature solid phase polymerization method, a high temperature solid phase polymerization method under high pressure, and a solid phase polymerization method in water.

また、本発明において、「酸二無水物残基」は上記構造を形成する４価の有機基であればよく、実際に酸二無水物が反応して形成された残基である必要はなく、同様に、「ジアミン化合物残基」は上記構造を形成する２価の有機基であればよく、実際にジアミン化合物が反応して形成された残基である必要はない。 Further, in the present invention, the “acid dianhydride residue” may be a tetravalent organic group forming the above structure, and does not have to be a residue formed by actually reacting the acid dianhydride. Similarly, the “diamine compound residue” may be a divalent organic group forming the above structure, and does not have to be a residue formed by actually reacting the diamine compound.

１．１．含フッ素ポリアミド酸
式（３）で示される繰り返し単位を含むポリイミドは、式（１）の酸二無水物と式（２）のジアミンとを反応させて得られるポリアミド酸をイミド化して得ることができ、該ポリアミド酸は、その主鎖（主鎖骨格）中に式（４）で表される繰り返し単位を含む。

1.1. Fluorine-containing polyamic acid A polyimide containing a repeating unit represented by the formula (3) can be obtained by imidizing a polyamic acid obtained by reacting an acid dianhydride of the formula (1) with a diamine of the formula (2). The polyamic acid contains a repeating unit represented by the formula (4) in the main chain (main chain skeleton).

ポリアミド酸の１分子に含まれる式（４）の繰り返し単位の数は１〜１３００であることが好ましく、１〜１０００であることがより好ましい。 The number of repeating units of formula (4) contained in one molecule of the polyamic acid is preferably 1 to 1300, more preferably 1 to 1000.

前記ポリアミド酸の分子量は、重量平均分子量として、１０００〜１００万であることが好ましく、５０００〜７０万であることがより好ましい。分子量がこの範囲内であると重合時にゲル化する恐れが無く、低粘度で重合やフィルム化が容易になり、適当な耐熱性や膜強度の付与と維持が期待できる。重量平均分子量は更に好ましくは１万〜５０万である。 The weight average molecular weight of the polyamic acid is preferably from 1,000 to 1,000,000, more preferably from 5,000 to 700,000. When the molecular weight is within this range, there is no fear of gelation during polymerization, low viscosity facilitates polymerization and film formation, and it is expected that appropriate heat resistance and film strength are imparted and maintained. The weight average molecular weight is more preferably 10,000 to 500,000.

上記重量平均分子量は、後述する実施例と同様に、ゲルパーミエーションクロマトグラフ（ＧＰＣ）により、標準ポリスチレンの検量線を用いて測定することができる。 The weight average molecular weight can be measured by gel permeation chromatograph (GPC) using a calibration curve of standard polystyrene, as in Examples described later.

前記ポリアミド酸は、好ましくは芳香族ポリアミド酸又は脂肪族ポリアミド酸であり、より好ましくは芳香族ポリアミド酸である。以下にポリアミド酸の好適な実施形態を説明する。 The polyamic acid is preferably an aromatic polyamic acid or an aliphatic polyamic acid, more preferably an aromatic polyamic acid. Hereinafter, preferred embodiments of the polyamic acid will be described.

１．１．１．芳香族ポリアミド酸の具体例
芳香族酸二無水物とはＸ^０が芳香族基を含む式（１）の化合物であり、芳香族ジアミンとはＹ^０が芳香族基を含む式（２）の化合物である。芳香族ポリアミド酸は、酸二無水物とジアミンとを各々１種又は２種以上重合させたポリアミド酸であって、重合に用いられる酸二無水物が、Ｘ^０が芳香族基を含む式（１）の酸二無水物を少なくとも含み、重合に用いられるジアミンが、Ｙ^０が芳香族基を含む式（２）のジアミンを少なくとも含む。含フッ素芳香族ポリアミド酸とは、式（４）において、重合繰り返し単位に含まれる酸二無水物に由来するＸ^０とジアミンに由来するＹ^０の一方又は両方が１個以上のフッ素原子及び１個以上の芳香族環構造を有するものである。 1.1.1. Specific examples of aromatic polyamic acid An aromatic acid dianhydride is a compound of the formula (1) in which X ⁰ contains an aromatic group, and an aromatic diamine is a compound of the formula (2) in which Y ⁰ contains an aromatic group. It is a compound. The aromatic polyamic acid is a polyamic acid obtained by polymerizing one kind or two or more kinds of an acid dianhydride and a diamine, and the acid dianhydride used for the polymerization has a formula in which X ⁰ contains an aromatic group ( The diamine used in the polymerization contains at least the acid dianhydride of 1) and at least the diamine of the formula (2) in which Y ⁰ contains an aromatic group. Fluorine-containing aromatic polyamic acid means, in the formula (4), one or both of X ⁰ derived from an acid dianhydride and Y ⁰ derived from a diamine contained in the polymerization repeating unit have at least one fluorine atom and 1 It has one or more aromatic ring structures.

芳香族ポリアミド酸の好ましい実施形態では、酸二無水物とジアミンとを各々１種又は２種以上重合させたポリアミド酸であって、重合に用いられる酸二無水物が式（１）においてＸ^０が式（Ｅ^１）

で示される基である酸二無水物を少なくとも含み、重合に用いられるジアミンが式（２）においてＹ^０が後述するＹ^１で示される基であるジアミンを少なくとも含むポリアミド酸である。該ポリアミド酸は好ましくは、下記式（Ｉ）で表される重合単位を含む。 In a preferred embodiment of the aromatic polyamic acid, a polyamic acid obtained by polymerizing one kind or two or more kinds of an acid dianhydride and a diamine, wherein the acid dianhydride used in the polymerization is X ⁰ in the formula (1). Is the formula (E ¹ )

Is a polyamic acid containing at least an acid dianhydride which is a group represented by and a diamine used in the polymerization containing at least a diamine which is a group represented by Y ¹ described below in which Y ⁰ is represented by formula (2). The polyamic acid preferably contains polymerized units represented by the following formula (I).

ここで、Ｘ^１は２価の有機基を示し、Ｙ^１は芳香族基を有する２価の有機基を示す。
Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６は互いに独立して水素原子、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子のいずれかを示し、Ｘ^１、Ｙ^１、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６の少なくとも１つはフッ素原子を１個以上含む。 Here, X ¹ represents a divalent organic group, and Y ¹ represents a divalent organic group having an aromatic group.
Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ and Z ⁶ each independently represent a hydrogen atom, a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, and X ¹ , Y ¹ , Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ and Z ⁶ include at least one fluorine atom.

ｐは０又は１である。
上記式（Ｉ）及び（Ｅ^１）中、ｐ＝０である場合は、Ｘ^１は存在せず、左右のベンゼン環が直接結合しており、ｐ＝１である場合は、左右のベンゼン環がＸ^１を介して結合する。 p is 0 or 1.
In the above formulas (I) and (E ¹ ), when p = 0, X ¹ does not exist and the left and right benzene rings are directly bonded, and when p = 1, the left and right benzene rings are present. Binds via X ¹ .

Ｘ^１としては、具体的には、アルキレン基、アリーレン基、アリーレンオキシ基、アリーレンチオ基、−Ｏ−及び−Ｓ−からなる群から選択される少なくとも１つの基であり、、これらの中でも、アルキレン基、アリーレン基、アリーレンオキシ基及びアリーレンチオ基からなる群から選択される少なくとも１つの基が好ましく、アルキレン基、アリーレンオキシ基及びアリーレンチオ基からなる群から選択される少なくとも１つの基がより好ましく、アルキレン基及びアリーレンオキシ基からなる群から選択される少なくとも１つの基が更に好ましく、これらはハロゲン原子（フッ素原子等）で置換されていてもよい。 X ¹ is specifically at least one group selected from the group consisting of an alkylene group, an arylene group, an aryleneoxy group, an arylenethio group, —O— and —S—, and among these, At least one group selected from the group consisting of an alkylene group, an arylene group, an aryleneoxy group and an arylenethio group is preferable, and at least one group selected from the group consisting of an alkylene group, an aryleneoxy group and an arylenethio group is more preferable. At least one group selected from the group consisting of an alkylene group and an aryleneoxy group is more preferable, and these may be substituted with a halogen atom (such as a fluorine atom).

Ｘ^１の例であるアルキレン基としては、−Ｃ（ＣＡ_３）_２−及び−Ｃ（ＣＡ_３）_２−Ｃ（ＣＡ_３）_２−からなる群から選択される少なくとも１つの基を例示することができ、式中Ａは独立して水素原子又はフッ素原子であり、好ましくは全てがフッ素原子である。Ｘ^１の例である上述したアルキレン基の中では、Ａが全てフッ素原子である−Ｃ（ＣＡ_３）_２−、すなわち−Ｃ（ＣＦ_３）_２−が好適である。かかるフッ素置換アルキレン基は、嵩高い構造を取り接触角が大きくなるため、生体物質付着防止性が向上するとともに三次元培養が容易となる。アルキレン基は、Ｙ^１にフッ素原子が含まれない場合は、フッ素置換されたアルキレン基であることが特に好ましい。 Examples of the alkylene group which is an example of X ¹ include at least one group selected from the group consisting of —C (CA ₃ ) ₂ — and —C (CA ₃ ) ₂ —C (CA ₃ ) ₂ —. Wherein A is independently a hydrogen atom or a fluorine atom, and preferably all are fluorine atoms. Among the above-mentioned alkylene groups which are examples of X ¹ , —C (CA ₃ ) ₂ — in which all A are fluorine atoms, that is, —C (CF ₃ ) ₂ — is preferable. Since such a fluorine-substituted alkylene group has a bulky structure and a large contact angle, the property of preventing attachment of biological substances is improved and three-dimensional culture is facilitated. The alkylene group is particularly preferably a fluorine-substituted alkylene group when Y ¹ does not contain a fluorine atom.

Ｘ^１の例であるアリーレン基としては、例えば、以下の群から選択される少なくとも１つの基を例示することができる。 Examples of the arylene group which is an example of X ¹ include at least one group selected from the following groups.

Ｘ^１の例であるアリーレンオキシ基としては、例えば、以下の群から選択される少なくとも１つの基を例示することができる。 Examples of the aryleneoxy group which is an example of X ¹ include at least one group selected from the following groups.

Ｘ^１の例であるアリーレンチオ基としては、例えば、以下の群から選択される少なくとも１つの基を例示することができる。 Examples of the arylenethio group which is an example of X ¹ include at least one group selected from the following groups.

Ｘ^１の例である上述したアリーレン基、アリーレンオキシ基及びアリーレンチオ基は、各々独立して、ハロゲン原子（例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子であり、好ましくはフッ素原子又は塩素原子、より好ましくはフッ素原子である。）、メチル基及びトリフルオロメチル基よりなる群から選択される少なくとも１つの基により置換されていてもよい。これら置換基は複数であってもよく、その場合には置換基の種類は互いに同一であっても異なっていてもよい。アリーレン基、アリーレンオキシ基及びアリーレンチオ基に置換している好適な置換基は、フッ素原子及び／又はトリフルオロメチル基であり、最も好適にはフッ素原子である。アリーレン基、アリーレンオキシ基及びアリーレンチオ基は、Ｙ^１にフッ素原子が含まれない場合、少なくとも１つ以上のフッ素原子で置換されることが好ましい。 The above-mentioned arylene group, aryleneoxy group and arylenethio group which are examples of X ¹ are each independently a halogen atom (for example, a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, preferably a fluorine atom or a chlorine atom). Atom, more preferably a fluorine atom), a methyl group and at least one group selected from the group consisting of trifluoromethyl groups. There may be a plurality of these substituents, in which case the substituents may be the same or different from each other. Suitable substituents for the arylene group, aryleneoxy group and arylenethio group are a fluorine atom and / or a trifluoromethyl group, most preferably a fluorine atom. When Y ¹ does not contain a fluorine atom, the arylene group, the aryleneoxy group and the arylenethio group are preferably substituted with at least one fluorine atom.

Ｘ^１の例である上述したアリーレン基、アリーレンオキシ基及びアリーレンチオ基の中では、以下の群から選択される少なくとも１つの基が好適である。 Among the above-mentioned arylene group, aryleneoxy group and arylenethio group which are examples of X ¹ , at least one group selected from the following group is preferable.

［上記式中、Ｗ¹及びＷ²はそれぞれ独立して酸素原子又は硫黄原子を示す。］

[In the above formula, W ¹ and W ² each independently represent an oxygen atom or a sulfur atom. ]

この場合、Ｗ¹とＷ²は同一である、即ちＷ¹とＷ²は共に酸素原子であるか或いは硫黄原子であることが好ましく、共に酸素原子であることがより好ましい。 In this case, W ¹ and W ² are the same, that is, both W ¹ and W ² are preferably oxygen atoms or sulfur atoms, and more preferably both oxygen atoms.

Ｙ^１で示される芳香族基を有する２価の有機基としては、特に制限されないが、１個のベンゼン環からなる基若しくは、２個以上のベンゼン環が炭素原子、酸素原子又は硫黄原子を介して又は直接結合した構造を有する基が挙げられる。具体的には、以下の群から選択される少なくとも１つの基を例示することができる。 The divalent organic group having an aromatic group represented by Y ¹ is not particularly limited, but a group consisting of one benzene ring or two or more benzene rings having a carbon atom, an oxygen atom or a sulfur atom therebetween. Or a group having a structure directly bonded thereto. Specifically, at least one group selected from the following groups can be exemplified.

Ｙ^１の例である上述した芳香族基を有する２価の有機基は、置換可能であれば、ハロゲン原子（例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子であり、好ましくはフッ素原子又は塩素原子、より好ましくはフッ素原子である。）、メチル基、エチル基、及びトリフルオロメチル基からなる群から選択される少なくとも１つの基により置換されていてもよく、前記置換基はより好ましくは、ハロゲン原子、メチル基、及びトリフルオロメチル基からなる群から選択される少なくとも１つの基である。これら置換基は複数であってもよく、その場合には置換基の種類は互いに同一であっても異なっていてもよい。芳香環基を有する２価の有機基に置換している好適な置換基は、特にＸ^１にフッ素原子が含まれない場合は、フッ素原子及び／又はトリフルオロメチル基であり、最も好適にはフッ素原子である。 The divalent organic group having an aromatic group described above which is an example of Y ¹ is a halogen atom (for example, a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, and preferably a fluorine atom or A chlorine atom, more preferably a fluorine atom), a methyl group, an ethyl group, and a trifluoromethyl group may be substituted with at least one group, and the substituent is more preferably At least one group selected from the group consisting of a halogen atom, a methyl group, and a trifluoromethyl group. There may be a plurality of these substituents, in which case the substituents may be the same or different from each other. A preferable substituent substituting the divalent organic group having an aromatic ring group is a fluorine atom and / or a trifluoromethyl group, particularly when X ¹ does not include a fluorine atom, and most preferably It is a fluorine atom.

Ｙ^１の他の例としては下記の式（５）：

で示される２価の有機基が好ましい。式（５）において、Ｂ^１は、ＣＦ_３又はＣＮを表す。Ｂ^２は、同一若しくは異なって、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩを表す。Ｒ^１は、炭素数１〜２０のハロゲン置換アルキル基を表す。Ｘ^Ａは、同一若しくは異なって、Ｏ又はＳを表す。Ｘ^Ｂは、Ｏ又はＳを表す。ｎは、Ｂ^２の数を表し、０〜２の整数である。ｍは、Ｒ^１Ｘ^Ｂで表される基の置換数を表し、１〜３の整数である。また、ｎ＋ｍ＝３である。 As another example of Y ¹ , the following formula (5):

The divalent organic group represented by is preferable. In Formula (5), B ¹ represents CF ₃ or CN. B ² is the same or different and represents H, F, Cl, Br or I. R ¹ represents a halogen-substituted alkyl group having 1 to 20 carbon atoms. X ^A is the same or different and represents O or S. X ^B represents O or S. n represents the number of ^{B 2,} it is an integer of 0-2. m represents the substitution number of the group represented by R ¹ X ^B , and is an integer of 1 to 3. Also, n + m = 3.

Ｙ^０がＹ^１であり、かつ該Ｙ^１が式（５）で示される基である式（２）のジアミンは国際公開２０１０／１５０９０８に記載されている。 The diamine of the formula (2) in which Y ⁰ is Y ¹ and the Y ¹ is a group represented by the formula (5) is described in WO 2010/150908.

式（５）において、Ｒ^１はハロゲン置換アルキル基を表すが、ハロゲン置換アルキル基とは、アルキル基を構成する炭素原子に結合した水素原子の少なくとも一部がハロゲン原子で置換された基を意味し、構造は特に制限されず、直鎖、分岐、環状アルキル基のいずれの構造であってもよい。また、ハロゲン置換アルキル基中にエーテル結合を有するものであってもよい。 In formula (5), R ¹ represents a halogen-substituted alkyl group, and the halogen-substituted alkyl group means a group in which at least a part of hydrogen atoms bonded to carbon atoms constituting the alkyl group are substituted with halogen atoms. However, the structure is not particularly limited, and may be any of linear, branched, and cyclic alkyl groups. Further, the halogen-substituted alkyl group may have an ether bond.

上記ハロゲン原子としては、フッ素原子（Ｆ）、塩素原子（Ｃｌ）、臭素原子（Ｂｒ）、又はヨウ素原子（Ｉ）が好ましく、これらの２種以上の原子で置換されていてもよい。Ｒ^１は炭素数１〜２０のフッ素置換アルキル基であることが好ましい。 The halogen atom is preferably a fluorine atom (F), a chlorine atom (Cl), a bromine atom (Br) or an iodine atom (I), and may be substituted with two or more kinds of these atoms. R ¹ is preferably a fluorine-substituted alkyl group having 1 to 20 carbon atoms.

Ｒ^１の炭素数は、２〜１８であることがより好ましく、更に好ましくは３〜１５である。 The carbon number of R ¹ is more preferably 2-18, and further preferably 3-15.

Ｒ^１として特に好適な基としては、例えば、下記化学式で表される群から選択される少なくとも１つの基が挙げられる。
ＣＦ_３−（ＣＦ_２）_７−（ＣＨ_２）_２−
ＣＦ_３−（ＣＦ_２）_９−（ＣＨ_２）_２−
ＣＦ_３−（ＣＦ_２）_２−ＣＨ_２−
ＣＦ_３−（ＣＦ_２）_３−ＣＨ_２−
ＣＨＦ_２−（ＣＦ_２）_７−ＣＨ_２−
（ＣＦ_３）_２−ＣＦ（ＣＦ_２）_２−（ＣＨ_２）_２−
ＣＦ_３ＣＨ_２−
ＨＣＦ_２ＣＨ_２−
Ｆ（ＣＦ_２）_２ＣＨ_２−
ＣＨＦ_２ＣＦ_２ＣＨ_２−
（ＣＦ_３）_２ＣＨ−
ＣＦ_３ＣＨ_２ＣＨ_２−
Ｈ（ＣＦ_２）_２ＣＨ_２−
Ｃｌ（ＣＦ_２）_２ＣＨ_２−
（ＣＦ_３）Ｃ（ＣＨ_３）Ｈ−
Ｆ（ＣＦ_２）_３ＣＨ_２−
Ｆ（ＣＦ_２）_２（ＣＨ_２）_２−
ＣＦ_３ＣＨＦＣＦ_２ＣＨ_２−
ＣＦ_３（ＣＨ_２）_３−
Ｆ（ＣＦ_２）_２Ｃ（ＣＨ_３）Ｈ−
ＣＦ_３Ｃ（ＣＨ_３）_２−
ＣＨ_３Ｃ（ＣＦ_３）_２−
（ＣＦ_３）_４Ｃ−
（ＣＦ_３）_２Ｃ（ＣＣｌ_３）−
Ｆ（ＣＦ_２）_４ＣＨ_２−
Ｆ（ＣＦ_２）_３（ＣＨ_２）_２−
Ｆ（ＣＦ_２）_２（ＣＨ_２）_３−
ＣＦ_３（ＣＨ_２）_４−
（ＣＦ_３）_２ＣＦＣＨ_２ＣＨ_２−
（ＣＦ_３）_２Ｃ（ＣＨ_３）ＣＨ_２−
Ｈ（ＣＦ_２）_４ＣＨ_２−
Ｃｌ（ＣＦ_２）_４ＣＨ_２−
Ｂｒ（ＣＦ_２）_２（ＣＨ_２）_３−
ＣＦ_３ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２−
ＣＦ_３ＣＦ（ＯＣＦ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２−
（ＣＦ_３）_２ＣＨＯＣＨ_２ＣＨ_２−
Ｆ（ＣＦ_２）_３Ｃ（ＣＨ_３）Ｈ−
Ｆ（ＣＦ_２）_５ＣＨ_２−
Ｆ（ＣＦ_２）_４（ＣＨ_２）_２−
Ｆ（ＣＦ_２）_３（ＣＨ_２）_３−
Ｆ（ＣＦ_２）_２（ＣＨ_２）_４−
（ＣＦ_３）_２ＣＦ（ＣＨ_２）_３−
（ＣＦ_３）_３ＣＣＨ_２ＣＨ_２−
ＣＦ_３ＣＦ（ＯＣＦ_３）（ＣＨ_２）_３−
Ｆ（ＣＦ_２）_３ＯＣＦ（ＣＦ_３）ＣＨ_２−
Ｈ（ＣＦ_２）_５ＣＨ_２−
Ｆ（ＣＦ_２）_２Ｃ（ＣＨ_３）_２−
ＣＦ_３ＣＨＦＣＦ_２Ｃ（ＣＨ_３）_２−
Ｆ（ＣＦ_２）_６ＣＨ_２−
Ｆ（ＣＦ_２）_５（ＣＨ_２）_２−
Ｆ（ＣＦ_２）_４（ＣＨ_２）_３−
（ＣＦ_３）_２ＣＦ（ＣＦ_２）_２（ＣＨ_２）_２−
（ＣＦ_３）_２ＣＦＣＨＦＣＦ（ＣＦ_３）ＣＨ_２−
ＣＦ_３ＣＦ_２ＣＦ（ＣＦ_３）（ＣＨ_２）_３−
Ｈ（ＣＦ_２）_６ＣＨ_２−
Ｃｌ（ＣＦ_２）_６ＣＨ_２−
Ｆ（ＣＦ_２）_７ＣＨ_２−
Ｆ（ＣＦ_２）_６（ＣＨ_２）_２−
Ｆ（ＣＦ_２）_５（ＣＨ_２）_３−
Ｆ（ＣＦ_２）_４（ＣＨ_２）_４−
Ｆ（ＣＦ_２）_２（ＣＨ_２）_６−
Ｆ（ＣＦ_２）_３ＯＣＦ（ＣＦ_３）（ＣＨ_２）_３−
（ＣＦ_３）_３Ｃ（ＣＨ_２）_４−
Ｈ（ＣＦ_２）_７ＣＨ_２−
Ｆ（ＣＦ_２）_８ＣＨ_２−
Ｆ（ＣＦ_２）_６（ＣＨ_２）_３−
（ＣＦ_３）_２ＣＦ（ＣＨ_２）_６−
（ＣＦ_３）_２ＣＦ（ＣＦ_２）_４（ＣＨ_２）_２−
Ｆ（ＣＦ_２）_３ＯＣＦ（ＣＦ_３）ＣＦ_２ＯＣＦ（ＣＦ_３）ＣＨ_２−
Ｈ（ＣＦ_２）_８ＣＨ_２−
Ｆ（ＣＦ_２）_４（ＣＨ_２）_６−
ＣＦ_３（ＣＦ_２）_７（ＣＨ_２）_２−
Ｆ（ＣＦ_２）_８（ＣＨ_２）_３−
（ＣＦ_３）_２ＣＦ（ＣＦ_２）_６（ＣＨ_２）_２−
Ｈ（ＣＦ_２）_１０ＣＨ_２−
Ｆ（ＣＦ_２）_６（ＣＨ_２）_６−
Ｆ（ＣＦ_２）_１０（ＣＨ_２）_２−
Ｈ（ＣＦ_２）_１２ＣＨ_２−
Ｆ（ＣＦ_２）_８（ＣＨ_２）_６− Examples of particularly suitable groups as R ¹ include at least one group selected from the group represented by the following chemical formula.
_{_{_{CF 3 - (CF 2) 7}}} - (CH 2) 2 -
_{_{_{CF 3 - (CF 2) 9}}} - (CH 2) 2 -
_{_{_{CF 3 - (CF 2) 2}}} -CH 2 -
_{_{_{CF 3 - (CF 2) 3}}} -CH 2 -
_{_{_{CHF 2 - (CF 2) 7}}} -CH 2 -
_{_{_{_{(CF 3) 2 -CF (CF}}}} 2) 2 - (CH 2) 2 -
CF ₃ CH ₂ -
HCF ₂ CH ₂ −
_{_{_{F (CF 2) 2 CH 2}}} -
CHF _{_₂} CF ₂ CH ₂ -
_(CF ₃₎ 2 CH-
CF ₃ CH ₂ CH ₂ -
_{_{_{H (CF 2) 2 CH 2}}} -
_{_{_{Cl (CF 2) 2 CH 2}}} -
_{_{(CF 3) C (CH 3}} ) H-
_{_{_{F (CF 2) 3 CH 2}}} -
_{_{_{F (CF 2) 2 (CH}}} 2) 2 -
CF ₃ CHFCF _₂ CH ₂ -
CF ₃ (CH ₂ ) ₃ −
_{_{_{F (CF 2) 2 C (}}} CH 3) H-
_{_{_{CF 3 C (CH 3) 2}}} -
_{_{_{CH 3 C (CF 3) 2}}} -
_(CF ₃₎ 4 C-
_{_{_{(CF 3) 2 C (CCl}}} 3) -
_{_{_{F (CF 2) 4 CH 2}}} -
_{_{_{F (CF 2) 3 (CH}}} 2) 2 -
F (CF ₂ ) ₂ (CH ₂ ) ₃ −
CF ₃ (CH ₂ ) ₄ −
_{_{_{(CF 3) 2 CFCH 2 CH}}} 2 -
_{_{_{(CF 3) 2 C (CH}}} 3) CH 2 -
_{_{_{H (CF 2) 4 CH 2}}} -
_{_{_{Cl (CF 2) 4 CH 2}}} -
_{_{_{Br (CF 2) 2 (CH}}} 2) 3 -
_{_{_{CF 3 CH 2 CH (CH 3}}} ) CH 2 -
_{_{_{CF 3 CF (OCF 3) CH}}} 2 CH 2 -
_{_{_{(CF 3) 2 CHOCH 2 CH}}} 2 -
_{_{_{F (CF 2) 3 C (}}} CH 3) H-
_{_{_{F (CF 2) 5 CH 2}}} -
_{_{_{F (CF 2) 4 (CH}}} 2) 2 -
F (CF ₂ ) ₃ (CH ₂ ) ₃ −
F (CF ₂ ) ₂ (CH ₂ ) ₄ −
_{_{_{(CF 3) 2 CF (CH}}} 2) 3 -
_{_{_{(CF 3) 3 CCH 2 CH}}} 2 -
_{_{CF 3 CF (OCF 3) (}} CH 2) 3 -
_{_{_{F (CF 2) 3 OCF (}}} CF 3) CH 2 -
_{_{_{H (CF 2) 5 CH 2}}} -
_{_{F (CF 2) 2 C (}} CH 3) 2 -
_{_{_{CF 3 CHFCF 2 C (CH 3}}} ) 2 -
_{_{_{F (CF 2) 6 CH 2}}} -
_{_{_{F (CF 2) 5 (CH}}} 2) 2 -
F (CF ₂ ) ₄ (CH ₂ ) ₃ −
_{_{_{_{(CF 3) 2 CF (CF}}}} 2) 2 (CH 2) 2 -
_{_{_{(CF 3) 2 CFCHFCF (CF}}} 3) CH 2 -
_{_{_{CF 3 CF 2 CF (CF 3}}} ) (CH 2) 3 -
_{_{_{H (CF 2) 6 CH 2}}} -
_{_{_{Cl (CF 2) 6 CH 2}}} -
_{_{_{F (CF 2) 7 CH 2}}} -
_{_{_{F (CF 2) 6 (CH}}} 2) 2 -
_{_{_{F (CF 2) 5 (CH}}} 2) 3 -
_{_{_{F (CF 2) 4 (CH}}} 2) 4 -
_{_{_{F (CF 2) 2 (CH}}} 2) 6 -
_{_{_{F (CF 2) 3 OCF (}}} CF 3) (CH 2) 3 -
_{_{_{(CF 3) 3 C (CH}}} 2) 4 -
_{_{_{H (CF 2) 7 CH 2}}} -
_{_{_{F (CF 2) 8 CH 2}}} -
_{_{_{F (CF 2) 6 (CH}}} 2) 3 -
_{_{_{(CF 3) 2 CF (CH}}} 2) 6 -
_{_{_{_{(CF 3) 2 CF (CF}}}} 2) 4 (CH 2) 2 -
_{_{_{_{F (CF 2) 3 OCF (}}}} CF 3) CF 2 OCF (CF 3) CH 2 -
_{_{_{H (CF 2) 8 CH 2}}} -
_{_{_{F (CF 2) 4 (CH}}} 2) 6 -
_{_{_{CF 3 (CF 2) 7 (}}} CH 2) 2 -
_{_{_{F (CF 2) 8 (CH}}} 2) 3 -
_{_{_{_{(CF 3) 2 CF (CF}}}} 2) 6 (CH 2) 2 -
_{_{_{H (CF 2) 10 CH 2}}} -
_{_{_{F (CF 2) 6 (CH}}} 2) 6 -
_{_{_{F (CF 2) 10 (CH}}} 2) 2 -
_{_{_{H (CF 2) 12 CH 2}}} -
_{_{_{F (CF 2) 8 (CH}}} 2) 6 -

式（５）中、ｍは１〜３の整数であり、より好ましくは２〜３である。
式（５）中、Ｘ^Ａは２つともＯであるか、２つともＳであることが好ましく、２つともＯであることが最も好ましい。 In formula (5), m is an integer of 1 to 3, more preferably 2 to 3.
In formula (5), X ^A is preferably both O, or both are S, and most preferably both are O.

式（５）において、Ｂ^２は、同一若しくは異なって、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩを表すが、Ｂ^２の少なくとも１つがハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩ）であることが好適である。中でも式（５）における２個のＢ^２が、いずれもハロゲン原子であることが好ましい。また、ハロゲン原子の中でも塩素原子（Ｃｌ）やフッ素原子（Ｆ）が好ましく、より好ましくはフッ素原子（Ｆ）である。特に好ましくは、式（５）における２個のＢ^２が、いずれもフッ素原子（Ｆ）であることであり、このように上記Ｂ^２がＦ（フッ素原子）である形態もまた、本発明の好適な実施形態の１つである。 In formula (5), B ² is the same or different and represents H, F, Cl, Br or I, but it is preferable that at least one of B ² is a halogen atom (F, Cl, Br or I). Is. Among them, it is preferable that each of the ^two B ² in the formula (5) is a halogen atom. Among the halogen atoms, chlorine atom (Cl) and fluorine atom (F) are preferable, and fluorine atom (F) is more preferable. Particularly preferably, each of the ^two B ^{2 s} in the formula (5) is a fluorine atom (F), and thus the form in which the B ² is F (fluorine atom) is also the present invention. This is one of the preferred embodiments.

Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６は、各々同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して、水素原子、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子から選ばれる。Ｘ^１、Ｙ^１にフッ素原子が含まれない場合、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６の少なくとも１つはフッ素原子である。 Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ and Z ⁶ may be the same or different, and each independently, a hydrogen atom, a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom or iodine. Selected from atoms. When X ¹ and Y ¹ do not contain a fluorine atom, at least one of Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ and Z ⁶ is a fluorine atom.

式（Ｉ）で示される繰り返し単位の更に好ましい実施形態では、
ｐが１であり、
Ｘ^１が、上記のＸ^１のうち、フッ素原子を含有するアルキレン基であるか、フッ素原子を有していてもよいアリーレンオキシ基であり、
Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６がフッ素原子又は水素原子であり、
Ｙ^１が、上記の有機基である。 In a further preferred embodiment of the repeating unit of formula (I),
p is 1,
X ¹ is an alkylene group containing a fluorine atom in the above X ¹ , or an aryleneoxy group which may have a fluorine atom,
Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ and Z ⁶ are fluorine atoms or hydrogen atoms,
Y ¹ is the above organic group.

式（Ｉ）で示される繰り返し単位の別の更に好ましい実施形態では、
Ｘ^１は、基ｘ１：
−Ｃ（ＣＦ_３）_２−
基ｘ２：

In another more preferred embodiment of the repeating unit of formula (I),
X ¹ is a group x1:
-C _(CF _{3) 2} -
Group x2:

又は、基ｘ３：

であることが好ましく、
Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６は、全て水素原子であるか、全てフッ素原子であることが好ましく、
Ｙ^１は以下の基ｙ１〜ｙ９から選ばれる少なくとも１種であることが特に好ましい。 Or group x3:

Is preferred,
Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ and Z ⁶ are preferably all hydrogen atoms or all fluorine atoms,
It is particularly preferable that Y ¹ is at least one selected from the following groups y1 to y9.

基ｙ１：

Group y1:

基ｙ２：

Group y2:

基ｙ３：

Group y3:

基ｙ４：

Group y4:

基ｙ５：

Group y5:

基ｙ６：

Group y6:

基ｙ７：

Group y7:

基ｙ８：

Group y8:

基ｙ９：

Group y9:

ただし、Ｘ^１、Ｙ^１、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６の少なくとも１つはフッ素原子を含む。
この実施形態において、Ｘ^１が基ｘ１のときＺ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６は全て水素原子であることが好ましく、Ｘ^１が基ｘ２又はｘ３のときＺ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６は全てフッ素原子であることが好ましい。
この実施形態において、Ｘ^１は、基ｘ１であることがより好ましい。 However, at least one of X ¹ , Y ¹ , Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ and Z ⁶ contains a fluorine atom.
In this embodiment, ^{Z 1} when ^{^{^{^{Z 1, Z 2, Z 3}}}} , Z 4, Z 5 and preferably ^{Z 6} are all hydrogen atoms, ^{X 1} is a group x2 or x3 when ^{X 1} is a group x1 , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ and Z ⁶ are preferably all fluorine atoms.
In this embodiment, X ¹ is more preferably the group x ¹ .

基ｘ２は好ましくは基ｘ２−１：

である。 The group x2 is preferably a group x2-1:

Is.

基ｘ３は好ましくは基ｘ３−１：

である。 Group x3 is preferably group x3-1:

Is.

基ｙ１は好ましくは基ｙ１−１：

The group y1 is preferably the group y1-1:

又は基ｙ１−２：

である。 Or group y1-2:

Is.

基ｙ２は好ましくは基ｙ２−１：

である。 The group y2 is preferably the group y2-1:

Is.

基ｙ３は好ましくは基ｙ３−１：

である。 The group y3 is preferably the group y3-1:

Is.

基ｙ４は好ましくは基ｙ４−１：

である。 The group y4 is preferably the group y4-1:

Is.

基ｙ５は好ましくは基ｙ５−１：

である。 The group y5 is preferably the group y5-1:

Is.

基ｙ６は好ましくは基ｙ６−１：

である。 Group y6 is preferably group y6-1:

Is.

基ｙ７は好ましくは基ｙ７−１：

である。 The group y7 is preferably the group y7-1:

Is.

基ｙ８は好ましくは基ｙ８−１：

である。 The group y8 is preferably the group y8-1:

Is.

基ｙ９は好ましくは基ｙ９−１：

である。 Group y9 is preferably group y9-1:

Is.

上記構造を有するポリアミド酸の製造に用いられる式（１）の酸二無水物のうち、Ｘ^０が式（Ｅ^１）で示される基である酸二無水物の割合は特に限定されず、Ｘ^０が式（Ｅ^１）で示される基である酸二無水物の特性が発揮される範囲であれば他の酸二無水物を併用することもできる。酸二無水物の総使用量を１００モル％としたとき、Ｘ^０が式（Ｅ^１）で示される基である酸二無水物の使用量は２５モル％以上が好ましく、５０モル％以上がより好ましく、８０モル％以上が更に好ましく、１００モル％が最も好ましい。用い得る他の酸二無水物としては、特に限定されないが、Ｘ^０が後述する式（Ｅ^２）で示される基である酸二無水物や、Ｘ^０が後述する式（Ｅ^３）で示される基である酸二無水物や、Ｘ^０が後述する式（Ｅ^４）で示される基である酸二無水物が挙げられる。酸二無水物の総使用量を１００モル％としたとき、Ｘ^０が式（Ｅ^１）で示される基である酸二無水物と、Ｘ^０が式（Ｅ^２）で示される基である酸二無水物と、Ｘ^０が式（Ｅ^３）で示される基である酸二無水物と、Ｘ^０が式（Ｅ^４）で示される基である酸二無水物との合計が９０モル％以上であることがより好ましく、１００モル％であることが最も好ましい。 Among the acid dianhydrides of the formula (1) used for producing the polyamic acid having the above structure, the ratio of the acid dianhydride in which X ⁰ is a group represented by the formula (E ¹ ) is not particularly limited, and X Other acid dianhydrides may be used in combination as long as ⁰ is a group represented by the formula (E ¹ ) and the characteristics of the acid dianhydride are exhibited. When the total amount of the acid dianhydride is 100 mol%, the amount of the acid dianhydride in which X ⁰ is a group represented by the formula (E ¹ ) is preferably 25 mol% or more, and 50 mol% or more. It is more preferably 80 mol% or more, still more preferably 100 mol%. Other dianhydrides that can be used, but are not limited to, Formula (E ³⁾ that group and dianhydride is that X ⁰ is represented by the formula (E ²⁾ to be described later, is X ⁰ will be described later And an acid dianhydride in which X ⁰ is a group represented by the formula (E ⁴ ) described later. When the total amount of the dianhydride was 100 mole%, is a group and dianhydride X ⁰ is a group represented by the formula (E ^1), the X ⁰ Formula (E ²⁾ The total amount of the acid dianhydride, the acid dianhydride in which X ⁰ is a group represented by the formula (E ³ ) and the acid dianhydride in which X ⁰ is a group represented by the formula (E ⁴ ) is 90 mol. % Or more is more preferable, and 100 mol% is the most preferable.

上記構造を有するポリアミド酸の製造に用いられる式（２）のジアミンのうち、Ｙ^０がＹ^１であるジアミンの割合は特に限定されず、Ｙ^０がＹ^１であるジアミンの特性が発揮される範囲であれば他のジアミンを併用することもできる。ジアミンの総使用量を１００モル％としたとき、Ｙ^０がＹ^１であるジアミンの使用量は２５モル％以上が好ましく、５０モル％以上がより好ましく、８０モル％以上が更に好ましく、１００モル％が最も好ましい。用い得る他のジアミンとしては、特に限定されないが、Ｙ^０が後述するＹ^２であるジアミンや、Ｙ^０が後述するＹ^３であるジアミンや、Ｙ^０が後述するＹ^４であるジアミンが挙げられる。ジアミンの総使用量を１００モル％としたとき、Ｙ^０がＹ^１であるジアミンと、Ｙ^０がＹ^２であるジアミンと、Ｙ^０がＹ^３であるジアミンと、Ｙ^０がＹ^４であるジアミンとの合計が９０モル％以上であることがより好ましく、１００モル％であることが最も好ましい。 Among the diamines of the formula (2) used for producing the polyamic acid having the above structure, the ratio of the diamine in which Y ⁰ is Y ¹ is not particularly limited, and the characteristics of the diamine in which Y ⁰ is Y ¹ are exhibited. Other diamines can be used in combination within the range. When the total amount of diamine used is 100 mol%, the amount of diamine in which Y ⁰ is Y ¹ is preferably 25 mol% or more, more preferably 50 mol% or more, still more preferably 80 mol% or more, and 100 mol%. % Is most preferred. Other diamines that can be used include, but are not limited to, diamines in which Y ⁰ is Y ² described later, diamines in which Y ⁰ is Y ³ described later, and diamines in which Y ⁰ is Y ⁴ described later. . When the total amount of diamines used is 100 mol%, Y ⁰ is Y ¹ , diamines where Y ⁰ is Y ² , diamines where Y ⁰ is Y ³ , and Y ⁰ is Y ⁴ . The total amount with the diamine is more preferably 90 mol% or more, and most preferably 100 mol%.

ここで、式（１）及び（２）におけるＸ^１、Ｙ^１、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６は式（Ｉ）に関し上記で定義した通りである。 Here, X ¹ , Y ¹ , Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ and Z ⁶ in formulas (1) and (2) are as defined above for formula (I).

１．１．２．脂肪族ポリアミド酸
本発明において、着色の観点から芳香族ポリアミド酸樹脂の代わりに又はこれと共に脂肪族ポリアミド酸樹脂を採用することができる。 1.1.2. Aliphatic Polyamic Acid In the present invention, an aliphatic polyamic acid resin can be used instead of or together with the aromatic polyamic acid resin from the viewpoint of coloring.

脂肪族ポリアミド酸樹脂は、例えば（１）芳香族ジアミンと脂肪族酸二無水物、（２）脂肪族ジアミンと芳香族酸二無水物、又は（３）脂肪族ジアミンと脂肪族酸二無水物の重合物である。脂肪族ポリアミド酸樹脂は、芳香族又は脂肪族のジアミン及び酸二無水物の一方又は両方が１分子中に１個以上のフッ素原子及び１個以上の脂肪族構造を有することが好ましく、前記脂肪族ポリアミド酸樹脂は、下記式（ＩＩ）〜（ＩＶ）で表される構造を有する少なくとも１種の脂肪族ポリアミド酸樹脂であることが好ましい。 The aliphatic polyamic acid resin may be, for example, (1) an aromatic diamine and an aliphatic dianhydride, (2) an aliphatic diamine and an aromatic dianhydride, or (3) an aliphatic diamine and an aliphatic dianhydride. It is a polymer of. In the aliphatic polyamic acid resin, it is preferable that one or both of an aromatic or aliphatic diamine and an acid dianhydride have one or more fluorine atoms and one or more aliphatic structures in one molecule. The group polyamic acid resin is preferably at least one aliphatic polyamic acid resin having a structure represented by the following formulas (II) to (IV).

式（ＩＩ）で表される脂肪族ポリアミド酸
好適な脂肪族ポリアミド酸は、酸二無水物とジアミンとを各々１種又は２種以上重合させたポリアミド酸であって、重合に用いられる酸二無水物が式（１）においてＸ^０が式（Ｅ^２）

で示される基である酸二無水物を少なくとも含み、重合に用いられるジアミンが式（２）においてＹ^０が下記のＹ^２であるジアミンを少なくとも含むポリアミド酸である。該ポリアミド酸は好ましくは、下記式（ＩＩ）で表される重合単位を含む。 Aliphatic Polyamic Acid Represented by Formula (II) A suitable aliphatic polyamic acid is a polyamic acid obtained by polymerizing one kind or two or more kinds of acid dianhydride and diamine, respectively. An anhydride is represented by formula (1), X ⁰ is represented by formula (E ² ).

Is a polyamic acid containing at least an acid dianhydride which is a group represented by and a diamine used for the polymerization containing at least a diamine in which Y ⁰ is the following Y ² in the formula (2). The polyamic acid preferably contains polymerized units represented by the following formula (II).

ここでＸ^２は２価の有機基を示し、Ｙ^２は脂肪族基を有する２価の有機基を示す；Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６は互いに独立して水素原子、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子のいずれかを示し、Ｘ^２、Ｙ^２、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６の少なくとも１つはフッ素原子を１個以上含み、ｐは０又は１である。 Here, X ² represents a divalent organic group, Y ² represents a divalent organic group having an aliphatic group; Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ and Z ⁶ are independent of each other. Represents a hydrogen atom, a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, and at least one of X ² , Y ² , Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ and Z ⁶ is fluorine. It contains one or more atoms and p is 0 or 1.

上記式（ＩＩ）及び式（Ｅ^２）中、ｐ＝０である場合は、Ｘ^２は存在せず、左右のベンゼン環が直接結合しており、ｐ＝１である場合は、左右のベンゼン環がＸ^２を介して結合する。 In the above formulas (II) and (E ² ), when p = 0, X ² does not exist, the left and right benzene rings are directly bonded, and when p = 1, the left and right benzene rings are present. The rings are attached via X ² .

Ｘ^２で示される２価の有機基は、上記Ｘ^１として示されるものと同様の基であることができる。 The divalent organic group represented by X ² can be the same group as that represented by X ¹ .

上記式（ＩＩ）及び式（Ｅ^２）中、Ｙ^２で示される脂肪族基を有する２価の有機基としては、特に制限されないが、１個の脂環族基若しくは、２個以上の脂環族基が炭素原子、酸素原子、硫黄原子を介して又は直接結合した構造を有する基が挙げられる。具体的には、以下の群から選択される少なくとも１つの基を例示することができる。 In the above formulas (II) and (E ² ), the divalent organic group having an aliphatic group represented by Y ² is not particularly limited, but may be one alicyclic group or two or more alicyclic groups. Examples thereof include groups having a structure in which a cyclic group is bonded directly or via a carbon atom, an oxygen atom, a sulfur atom. Specifically, at least one group selected from the following groups can be exemplified.

Ｙ^２の例である上述した脂肪族基を有する２価の有機基は、置換可能であれば、ハロゲン原子（例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子であり、好ましくはフッ素原子又は塩素原子、より好ましくはフッ素原子である。）、メチル基及びトリフルオロメチル基からなる群から選択される少なくとも１つの基により置換されていてもよい。これら置換基は複数であってもよく、その場合には置換基の種類は互いに同一であっても異なっていてもよい。脂肪族基を有する２価の有機基に置換している好適な置換基は、特にＸ^２にフッ素原子が含まれない場合は、フッ素原子及び／又はトリフルオロメチル基であり、最も好適にはフッ素原子である。 The divalent organic group having an aliphatic group described above, which is an example of Y ² , is a halogen atom (for example, a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, and preferably a fluorine atom or It may be substituted with at least one group selected from the group consisting of chlorine atom, more preferably fluorine atom), methyl group and trifluoromethyl group. There may be a plurality of these substituents, in which case the substituents may be the same or different from each other. A preferable substituent substituting the divalent organic group having an aliphatic group is a fluorine atom and / or a trifluoromethyl group, particularly when X ² does not include a fluorine atom, and most preferably It is a fluorine atom.

上記式（ＩＩ）及び式（Ｅ^２）中、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６は、各々同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して、水素原子、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子から選ばれ、Ｘ^２、Ｙ^２にフッ素原子が含まれない場合、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６の少なくとも１つはフッ素原子である。 In the formulas (II) and (E ² ), Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ and Z ⁶ may be the same or different, and each independently, Selected from a hydrogen atom, a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, and when X ² and Y ² do not include a fluorine atom, Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ and Z ⁶ At least one is a fluorine atom.

Ｘ^２、Ｙ^２、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６の少なくとも１つはフッ素原子を１個以上含むことが好ましく、Ｘ^２はフッ素原子含有アルキレン基が好ましく、Ｙ^２は上記の脂肪族基であることが好ましく、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６は全て水素原子がより好ましい。 At least one of X ² , Y ² , Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ and Z ⁶ preferably contains at least one fluorine atom, and X ² is preferably a fluorine atom-containing alkylene group, Y ² is preferably an aliphatic group described above, and Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ and Z ⁶ are all preferably hydrogen atoms.

上記構造を有するポリアミド酸の製造に用いられる式（１）の酸二無水物のうち、Ｘ^０が式（Ｅ^２）で示される基である酸二無水物の割合は特に限定されず、Ｘ^０が式（Ｅ^２）で示される基である酸二無水物の特性が発揮される範囲であれば他の酸二無水物を併用することもできる。酸二無水物の総使用量を１００モル％としたとき、Ｘ^０が式（Ｅ^２）で示される基である酸二無水物の使用量は２５モル％以上が好ましく、５０モル％以上がより好ましく、８０モル％以上が更に好ましく、１００モル％が最も好ましい。用い得る他の酸二無水物としては、特に限定されないが、Ｘ^０が前記式（Ｅ^１）で示される基である酸二無水物や、Ｘ^０が後述する式（Ｅ^３）で示される基である酸二無水物や、Ｘ^０が後述する式（Ｅ^４）で示される基である酸二無水物が挙げられる。酸二無水物の総使用量を１００モル％としたとき、Ｘ^０が式（Ｅ^１）で示される基である酸二無水物と、Ｘ^０が式（Ｅ^２）で示される基である酸二無水物と、Ｘ^０が式（Ｅ^３）で示される基である酸二無水物と、Ｘ^０が式（Ｅ^４）で示される基である酸二無水物との合計が９０モル％以上であることがより好ましく、１００モル％であることが最も好ましい。 The ratio of the acid dianhydride in which X ⁰ is a group represented by the formula (E ² ) in the acid dianhydride of the formula (1) used in the production of the polyamic acid having the above structure is not particularly limited. Other acid dianhydrides can be used in combination as long as ⁰ is a group represented by the formula (E ² ) and the characteristics of the acid dianhydride are exhibited. When the total amount of the acid dianhydride is 100 mol%, the amount of the acid dianhydride in which X ⁰ is a group represented by the formula (E ² ) is preferably 25 mol% or more, and 50 mol% or more. It is more preferably 80 mol% or more, still more preferably 100 mol%. Other dianhydrides that can be used, but are not limited to, groups and acid dianhydride is that X ⁰ is represented by the formula (E ^1), the X ⁰ is shown by the formula described below (E ³⁾ Examples thereof include an acid dianhydride which is a group, and an acid dianhydride where X ⁰ is a group represented by the formula (E ⁴ ) described later. When the total amount of the dianhydride was 100 mole%, is a group and dianhydride X ⁰ is a group represented by the formula (E ^1), the X ⁰ Formula (E ²⁾ The total amount of the acid dianhydride, the acid dianhydride in which X ⁰ is a group represented by the formula (E ³ ) and the acid dianhydride in which X ⁰ is a group represented by the formula (E ⁴ ) is 90 mol. % Or more is more preferable, and 100 mol% is the most preferable.

上記構造を有するポリアミド酸の製造に用いられる式（２）のジアミンのうち、Ｙ^０がＹ^２であるジアミンの割合は特に限定されず、Ｙ^０がＹ^２であるジアミンの特性が発揮される範囲であれば他のジアミンを併用することもできる。ジアミンの総使用量を１００モル％としたとき、Ｙ^０がＹ^２であるジアミンの使用量は２５モル％以上が好ましく、５０モル％以上がより好ましく、８０モル％以上が更に好ましく、１００モル％が最も好ましい。用い得る他のジアミンとしては、特に限定されないが、Ｙ^０が前記Ｙ^１であるジアミンや、Ｙ^０が後述するＹ^３であるジアミンや、Ｙ^０が後述するＹ^４であるジアミンが挙げられる。ジアミンの総使用量を１００モル％としたとき、Ｙ^０がＹ^１であるジアミンと、Ｙ^０がＹ^２であるジアミンと、Ｙ^０がＹ^３であるジアミンと、Ｙ^０がＹ^４であるジアミンとの合計が９０モル％以上であることがより好ましく、１００モル％であることが最も好ましい。 Of the diamines of the formula (2) used for producing the polyamic acid having the above structure, the proportion of diamines in which Y ⁰ is Y ² is not particularly limited, and the characteristics of diamines in which Y ⁰ is Y ² are exhibited. Other diamines can be used in combination within the range. When the total amount of diamines used is 100 mol%, the amount of diamines in which Y ⁰ is Y ² is preferably 25 mol% or more, more preferably 50 mol% or more, still more preferably 80 mol% or more, and 100 mol%. % Is most preferred. Other diamines that can be used include, but are not limited to, diamines in which Y ⁰ is Y ¹ described above, diamines in which Y ⁰ is Y ³ described later, and diamines in which Y ⁰ is Y ⁴ described later. When the total amount of diamines used is 100 mol%, Y ⁰ is Y ¹ , diamines where Y ⁰ is Y ² , diamines where Y ⁰ is Y ³ , and Y ⁰ is Y ⁴ . The total amount with the diamine is more preferably 90 mol% or more, and most preferably 100 mol%.

ここで、式（１）及び（２）におけるＸ^２、Ｙ^２、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６は式（ＩＩ）に関し上記で定義した通りである。 Here, X ² , Y ² , Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ and Z ⁶ in formulas (1) and (2) are as defined above for formula (II).

式（ＩＩＩ）で表される脂肪族ポリアミド酸
好適な脂肪族ポリアミド酸は、酸二無水物とジアミンとを各々１種又は２種以上重合させたポリアミド酸であって、重合に用いられる酸二無水物が式（１）においてＸ^０が式（Ｅ^３）

で示される基である酸二無水物を少なくとも含み、重合に用いられるジアミンが式（２）においてＹ^０が下記のＹ^３であるジアミンを少なくとも含むポリアミド酸である。該ポリアミド酸は好ましくは、下記式（ＩＩＩ）で表される重合単位を含む。 Aliphatic Polyamic Acid Represented by Formula (III) A suitable aliphatic polyamic acid is a polyamic acid obtained by polymerizing one kind or two or more kinds of acid dianhydride and diamine, respectively. An anhydride is represented by formula (1), X ⁰ is represented by formula (E ³ ).

Is a polyamic acid containing at least an acid dianhydride which is a group represented by and a diamine used in the polymerization containing at least a diamine in which Y ⁰ is the following Y ³ in formula (2). The polyamic acid preferably contains polymerized units represented by the following formula (III).

ここで、Ｘ^３は２価の有機基を示し、Ｙ^３は脂肪族基又は芳香族基を有する２価の有機基を示す；Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６は互いに独立して水素原子、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子のいずれかを示し、Ｘ^３、Ｙ^３、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６の少なくとも１つはフッ素原子を１個以上含み、ｐは０又は１である。 Here, X ³ represents a divalent organic group, Y ³ represents a divalent organic group having an aliphatic group or an aromatic group; Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ and Z. ⁶ independently of one another represents a hydrogen atom, a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, and each of X ³ , Y ³ , Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ and Z ⁶ At least one contains one or more fluorine atoms, and p is 0 or 1.

上記式（ＩＩＩ）及び式（Ｅ^３）中、ｐ＝０である場合は、Ｘ^３は存在せず、左右のエチレン基が直接結合しており、ｐ＝１である場合は、左右のエチレン基がＸ^３を介して結合する。Ｘ^３で示される２価の有機基は、好ましくは脂肪族基を有する２価の有機基であり、炭素数１〜４０の脂肪族炭化水素基が特に好ましい。前記有機基としては、環構造を２以上含む場合、環同士が１個以上の結合を共有する多環式構造、スピロ炭化水素構造、及び環と環とを単結合等の結合基で結合した構造からなる群から選択される少なくとも１種の構造を有する有機基が含まれる。前記結合基としては、前記単結合の他にエーテル結合、チオエーテル基、ケトン基、エステル結合、スルフォニル基、アルキレン基、アミド基及びシロキサン基からなる群から選択される少なくとも１つが挙げられる。Ｘ^３で示される２価の有機基は、例えば以下に示される群から選択される少なくとも１つの基であることが好ましい。 In the above formulas (III) and (E ³ ), when p = 0, X ³ does not exist, the left and right ethylene groups are directly bonded, and when p = 1, the left and right ethylene groups are present. The group is attached via X ³ . The divalent organic group represented by X ³ is preferably a divalent organic group having an aliphatic group, and an aliphatic hydrocarbon group having 1 to 40 carbon atoms is particularly preferable. When the organic group includes two or more ring structures, a polycyclic structure in which the rings share one or more bonds, a spiro hydrocarbon structure, and the ring and the ring are bonded by a bonding group such as a single bond. An organic group having at least one structure selected from the group consisting of structures is included. Examples of the bonding group include at least one selected from the group consisting of an ether bond, a thioether group, a ketone group, an ester bond, a sulfonyl group, an alkylene group, an amide group, and a siloxane group, in addition to the single bond. The divalent organic group represented by X ³ is preferably, for example, at least one group selected from the group shown below.

Ｘ^３の例である２価の有機基（ｐは１の場合）は、置換可能であれば、ハロゲン原子（例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子であり、好ましくはフッ素原子又は塩素原子、より好ましくはフッ素原子である。）、メチル基及びトリフルオロメチル基からなる群から選択される少なくとも１つの基により置換されていてもよい。これら置換基は複数であってもよく、その場合には置換基の種類は互いに同一であっても異なっていてもよい。 The divalent organic group (when p is 1) which is an example of X ³ is a halogen atom (for example, a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom), preferably a fluorine atom or It may be substituted with at least one group selected from the group consisting of chlorine atom, more preferably fluorine atom), methyl group and trifluoromethyl group. There may be a plurality of these substituents, in which case the substituents may be the same or different from each other.

Ｙ^３は脂肪族基又は芳香族基を有する２価の有機基を示し、上記Ｘ^１、Ｙ^１、Ｙ^２又はＸ^３に示されるものと同様の基であることができる。 Y ³ represents a divalent organic group having an aliphatic group or an aromatic group, and can be a group similar to those represented by X ¹ , Y ¹ , Y ² or X ³ above.

上記式（ＩＩＩ）及び（Ｅ^３）中、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６は、各々同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して、水素原子、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子から選ばれ、Ｘ^３、Ｙ^３にフッ素原子が含まれない場合、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６の少なくとも１つはフッ素原子である。 In the formula (III) and ^{^{^{(E 3), Z 1,}}} Z 2, Z 3, Z 4, Z 5 and ^{Z 6,} which may be different may be respectively the same, each independently, hydrogen At least ^one of Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ and Z ⁶ is selected from an atom, a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, and when X ³ and Y ³ do not include a fluorine atom. One is a fluorine atom.

上記構造を有するポリアミド酸の製造に用いられる式（１）の酸二無水物のうち、Ｘ^０が式（Ｅ^３）で示される基である酸二無水物の割合は特に限定されず、Ｘ^０が式（Ｅ^３）で示される基である酸二無水物の特性が発揮される範囲であれば他の酸二無水物を併用することもできる。酸二無水物の総使用量を１００モル％としたとき、Ｘ^０が式（Ｅ^３）で示される基である酸二無水物の使用量は２５モル％以上が好ましく、５０モル％以上がより好ましく、８０モル％以上が更に好ましく、１００モル％が最も好ましい。用い得る他の酸二無水物としては、特に限定されないが、Ｘ^０が前記式（Ｅ^１）で示される基である酸二無水物や、Ｘ^０が前記式（Ｅ^２）で示される基である酸二無水物や、Ｘ^０が後述する式（Ｅ^４）で示される基である酸二無水物が挙げられる。酸二無水物の総使用量を１００モル％としたとき、Ｘ^０が式（Ｅ^１）で示される基である酸二無水物と、Ｘ^０が式（Ｅ^２）で示される基である酸二無水物と、Ｘ^０が式（Ｅ^３）で示される基である酸二無水物と、Ｘ^０が式（Ｅ^４）で示される基である酸二無水物との合計が９０モル％以上であることがより好ましく、１００モル％であることが最も好ましい。 Of the acid dianhydrides of formula (1) used for the production of the polyamic acid having the above structure, the proportion of the acid dianhydride in which X ⁰ is a group represented by formula (E ³ ) is not particularly limited, and X Other acid dianhydrides may be used in combination as long as ⁰ is a group represented by the formula (E ³ ) and the characteristics of the acid dianhydride are exhibited. When the total amount of the acid dianhydride is 100 mol%, the amount of the acid dianhydride in which X ⁰ is a group represented by the formula (E ³ ) is preferably 25 mol% or more, and 50 mol% or more. It is more preferably 80 mol% or more, still more preferably 100 mol%. Other dianhydrides that can be used is not particularly limited, groups groups and acid dianhydride is that X ⁰ is represented by the formula (E ^1), the X ⁰ is represented by the formula (E ²⁾ And an acid dianhydride in which X ⁰ is a group represented by the formula (E ⁴ ) described later. When the total amount of the dianhydride was 100 mole%, is a group and dianhydride X ⁰ is a group represented by the formula (E ^1), the X ⁰ Formula (E ²⁾ The total amount of the acid dianhydride, the acid dianhydride in which X ⁰ is a group represented by the formula (E ³ ) and the acid dianhydride in which X ⁰ is a group represented by the formula (E ⁴ ) is 90 mol. % Or more is more preferable, and 100 mol% is the most preferable.

上記構造を有するポリアミド酸の製造に用いられる式（２）のジアミンのうち、Ｙ^０がＹ^３であるジアミンの割合は特に限定されず、Ｙ^０がＹ^３であるジアミンの特性が発揮される範囲であれば他のジアミンを併用することもできる。ジアミンの総使用量を１００モル％としたとき、Ｙ^０がＹ^３であるジアミンの使用量は２５モル％以上が好ましく、５０モル％以上がより好ましく、８０モル％以上が更に好ましく、１００モル％が最も好ましい。用い得る他のジアミンとしては、特に限定されないが、Ｙ^０が前記Ｙ^１であるジアミンや、Ｙ^０が前記Ｙ^２であるジアミンや、Ｙ^０が後述するＹ^４であるジアミンが挙げられる。ジアミンの総使用量を１００モル％としたとき、Ｙ^０がＹ^１であるジアミンと、Ｙ^０がＹ^２であるジアミンと、Ｙ^０がＹ^３であるジアミンと、Ｙ^０がＹ^４であるジアミンとの合計が９０モル％以上であることがより好ましく、１００モル％であることが最も好ましい。 Among the diamines of the formula (2) used for producing the polyamic acid having the above structure, the ratio of the diamine in which Y ⁰ is Y ³ is not particularly limited, and the characteristics of the diamine in which Y ⁰ is Y ³ are exhibited. Other diamines can be used in combination within the range. When the total amount of diamine used is 100 mol%, the amount of diamine in which Y ⁰ is Y ³ is preferably 25 mol% or more, more preferably 50 mol% or more, still more preferably 80 mol% or more, and 100 mol%. % Is most preferred. Other diamines that can be used include, but are not limited to, diamines in which Y ⁰ is Y ¹ described above, diamines in which Y ⁰ is Y ² described above, and diamines in which Y ⁰ is Y ⁴ described later. When the total amount of diamines used is 100 mol%, Y ⁰ is Y ¹ , diamines where Y ⁰ is Y ² , diamines where Y ⁰ is Y ³ , and Y ⁰ is Y ⁴ . The total amount with the diamine is more preferably 90 mol% or more, and most preferably 100 mol%.

ここで、式（１）及び（２）におけるＸ^３、Ｙ^３、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６は式（ＩＩＩ）に関し上記で定義した通りである。 Here, X ³ , Y ³ , Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ and Z ⁶ in formulas (1) and (2) are as defined above for formula (III).

式（ＩＶ）で表される脂肪族ポリアミド酸
好適な脂肪族ポリアミド酸は、酸二無水物とジアミンとを各々１種又は２種以上重合させたポリアミド酸であって、重合に用いられる酸二無水物が式（１）においてＸ^０が式（Ｅ^４）

で示される基である酸二無水物を少なくとも含み、重合に用いられるジアミンが式（２）においてＹ^０が下記のＹ^４であるジアミンを少なくとも含むポリアミド酸である。該ポリアミド酸は好ましくは、下記式（ＩＶ）で表される重合単位を含む。 Aliphatic Polyamic Acid Represented by Formula (IV) A suitable aliphatic polyamic acid is a polyamic acid obtained by polymerizing one kind or two or more kinds of acid dianhydride and diamine, respectively. An anhydride is represented by formula (1), X ⁰ is represented by formula (E ⁴ ).

Is a polyamic acid containing at least an acid dianhydride which is a group represented by and a diamine used for the polymerization containing at least a diamine in which Y ⁰ in the formula (2) is Y ⁴ below. The polyamic acid preferably contains polymerized units represented by the following formula (IV).

ここで、Ｘ^４は脂肪族基を有する４価の有機基を示し、Ｙ^４は脂肪族基又は芳香族基を有する２価の有機基を示す；Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、及びＺ^４は互いに独立して水素原子、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子のいずれかを示し、Ｘ^４、Ｙ^４、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、及びＺ^４の少なくとも１つはフッ素原子を１個以上含む。 Here, X ⁴ represents a tetravalent organic group having an aliphatic group, Y ⁴ represents a divalent organic group having an aliphatic group or an aromatic group; Z ¹ , Z ² , Z ³ , and Z ⁴ each independently represent a hydrogen atom, a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom, and at least one of X ⁴ , Y ⁴ , Z ¹ , Z ² , Z ³ and Z ⁴ is fluorine. Contains one or more atoms.

Ｘ^４で示される脂肪族基を有する４価の有機基としては、炭素数１〜４０の脂肪族炭化水素基が好ましい。前記有機基としては、環構造を２以上含む場合、環同士が１個以上の結合を共有する多環式構造、スピロ炭化水素構造、及び環と環とを単結合等の結合基で結合した構造からなる群から選択される少なくとも１種の構造を有する有機基が含まれる。前記結合基としては、前記単結合の他にエーテル結合、チオエーテル基、ケトン基、エステル結合、スルフォニル基、アルキレン基、アミド基及びシロキサン基からなる群から選択される少なくとも１つが挙げられる。具体的に、Ｘ^４は、下記から選ばれる少なくとも１つの基であることが好ましく、これらは、ハロゲン原子（例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子であり、好ましくはフッ素原子又は塩素原子、より好ましくはフッ素原子である。）、メチル基及びトリフルオロメチル基からなる群から選択される少なくとも１つの基により置換されていてもよい。 As the tetravalent organic group having an aliphatic group represented by X ⁴ , an aliphatic hydrocarbon group having 1 to 40 carbon atoms is preferable. When the organic group includes two or more ring structures, a polycyclic structure in which the rings share one or more bonds, a spiro hydrocarbon structure, and the ring and the ring are bonded by a bonding group such as a single bond. An organic group having at least one structure selected from the group consisting of structures is included. Examples of the bonding group include at least one selected from the group consisting of an ether bond, a thioether group, a ketone group, an ester bond, a sulfonyl group, an alkylene group, an amide group, and a siloxane group, in addition to the single bond. Specifically, X ⁴ is preferably at least one group selected from the following, and these are halogen atoms (for example, fluorine atom, chlorine atom, bromine atom, iodine atom, preferably fluorine atom or chlorine atom). Atom, more preferably a fluorine atom), and at least one group selected from the group consisting of a methyl group and a trifluoromethyl group.

Ｙ^４は、上記Ｙ^３と同意義である。
上記式（ＩＶ）及び（Ｅ^４）中、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、及びＺ^４は、各々同じであってもよく異なっていてもよく、それぞれ独立して、水素原子、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子から選ばれ、Ｘ^４、Ｙ^４にフッ素原子が含まれない場合、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、及びＺ^４の少なくとも１つはフッ素原子である。 Y ⁴ has the same meaning as Y ³ above.
In the above formulas (IV) and (E ⁴ ), Z ¹ , Z ² , Z ³ and Z ⁴ may be the same or different, and each independently, a hydrogen atom, a fluorine atom, When a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom is selected and X ⁴ and Y ⁴ do not include a fluorine atom, at least one of Z ¹ , Z ² , Z ³ and Z ⁴ is a fluorine atom.

上記構造を有するポリアミド酸の製造に用いられる式（１）の酸二無水物のうち、Ｘ^０が式（Ｅ^４）で示される基である酸二無水物の割合は特に限定されず、Ｘ^０が式（Ｅ^４）で示される基である酸二無水物の特性が発揮される範囲であれば他の酸二無水物を併用することもできる。酸二無水物の総使用量を１００モル％としたとき、Ｘ^０が式（Ｅ^４）で示される基である酸二無水物の使用量は２５モル％以上が好ましく、５０モル％以上がより好ましく、８０モル％以上が更に好ましく、１００モル％が最も好ましい。用い得る他の酸二無水物としては、特に限定されないが、Ｘ^０が前記式（Ｅ^１）で示される基である酸二無水物や、Ｘ^０が前記式（Ｅ^２）で示される基である酸二無水物や、Ｘ^０が前記式（Ｅ^３）で示される基である酸二無水物が挙げられる。酸二無水物の総使用量を１００モル％としたとき、Ｘ^０が式（Ｅ^１）で示される基である酸二無水物と、Ｘ^０が式（Ｅ^２）で示される基である酸二無水物と、Ｘ^０が式（Ｅ^３）で示される基である酸二無水物と、Ｘ^０が式（Ｅ^４）で示される基である酸二無水物との合計が９０モル％以上であることがより好ましく、１００モル％であることが最も好ましい。 Of the acid dianhydrides of formula (1) used for the production of the polyamic acid having the above structure, the proportion of the acid dianhydride in which X ⁰ is a group represented by formula (E ⁴ ) is not particularly limited, and X Other acid dianhydrides can be used in combination as long as ⁰ is a group represented by the formula (E ⁴ ), so long as the characteristics of the acid dianhydride can be exhibited. When the total amount of the acid dianhydride is 100 mol%, the amount of the acid dianhydride in which X ⁰ is a group represented by the formula (E ⁴ ) is preferably 25 mol% or more, and 50 mol% or more. It is more preferably 80 mol% or more, still more preferably 100 mol%. Other dianhydrides that can be used is not particularly limited, groups groups and acid dianhydride is that X ⁰ is represented by the formula (E ^1), the X ⁰ is represented by the formula (E ²⁾ And an acid dianhydride in which X ⁰ is a group represented by the formula (E ³ ). When the total amount of the dianhydride was 100 mole%, is a group and dianhydride X ⁰ is a group represented by the formula (E ^1), the X ⁰ Formula (E ²⁾ The total amount of the acid dianhydride, the acid dianhydride in which X ⁰ is a group represented by the formula (E ³ ) and the acid dianhydride in which X ⁰ is a group represented by the formula (E ⁴ ) is 90 mol. % Or more is more preferable, and 100 mol% is the most preferable.

上記構造を有するポリアミド酸の製造に用いられる式（２）のジアミンのうち、Ｙ^０がＹ^４であるジアミンの割合は特に限定されず、Ｙ^０がＹ^４であるジアミンの特性が発揮される範囲であれば他のジアミンを併用することもできる。ジアミンの総使用量を１００モル％としたとき、Ｙ^０がＹ^４であるジアミンの使用量は２５モル％以上が好ましく、５０モル％以上がより好ましく、８０モル％以上が更に好ましく、１００モル％が最も好ましい。用い得る他のジアミンとしては、特に限定されないが、Ｙ^０が前記Ｙ^１であるジアミンや、Ｙ^０が前記Ｙ^２であるジアミンや、Ｙ^０が前記Ｙ^３であるジアミンが挙げられる。ジアミンの総使用量を１００モル％としたとき、Ｙ^０がＹ^１であるジアミンと、Ｙ^０がＹ^２であるジアミンと、Ｙ^０がＹ^３であるジアミンと、Ｙ^０がＹ^４であるジアミンとの合計が９０モル％以上であることがより好ましく、１００モル％であることが最も好ましい。 Of the diamines of the formula (2) used for producing the polyamic acid having the above structure, the proportion of diamines in which Y ⁰ is Y ⁴ is not particularly limited, and the characteristics of diamines in which Y ⁰ is Y ⁴ are exhibited. Other diamines can be used in combination within the range. When the total amount of diamines used is 100 mol%, the amount of diamines in which Y ⁰ is Y ⁴ is preferably 25 mol% or more, more preferably 50 mol% or more, still more preferably 80 mol% or more, and 100 mol%. % Is most preferred. Other diamines that can be used include, but are not limited to, diamines in which Y ⁰ is Y ¹ described above, diamines in which Y ⁰ is Y ² described above, and diamines in which Y ⁰ is Y ³ described above. When the total amount of diamines used is 100 mol%, Y ⁰ is Y ¹ , diamines where Y ⁰ is Y ² , diamines where Y ⁰ is Y ³ , and Y ⁰ is Y ⁴ . The total amount with the diamine is more preferably 90 mol% or more, and most preferably 100 mol%.

ここで、式（１）及び（２）におけるＸ^４、Ｙ^４、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３及びＺ^４は式（ＩＶ）に関し上記で定義した通りである。 Here, X ⁴ , Y ⁴ , Z ¹ , Z ² , Z ³ and Z ⁴ in the formulas (1) and (2) are as defined above with respect to the formula (IV).

１．１．３．含フッ素ポリアミド酸の製造方法
式（４）或いはその具体例である式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）で示される前記ポリアミド酸は、式（１）で示される芳香族又は脂肪族の酸二無水物と、式（２）で示される芳香族又は脂肪族のジアミンとを溶媒中で公知の手法によりアミド化反応させることにより、製造することができる。ここで、原料として用いる酸二無水物及びジアミン化合物は、得ようとするポリアミド酸樹脂の構造に応じて適宜選択すればよい。 1.1.3. Method for producing fluorinated polyamic acid Formula (4) or the polyamic acid represented by Formula (I), (II), (III) or (IV) which is a specific example thereof is an aromatic compound represented by Formula (1). Alternatively, it can be produced by subjecting an aliphatic acid dianhydride and an aromatic or aliphatic diamine represented by the formula (2) to an amidation reaction in a solvent by a known method. Here, the acid dianhydride and the diamine compound used as the raw materials may be appropriately selected according to the structure of the polyamic acid resin to be obtained.

式（１）で示される芳香族酸酸二無水物としては、３，３’，４，４’−ビフェニルテトラカルボン酸酸二無水物、２，３，３’，４’−ビフェニルテトラカルボン酸酸二無水物、４，４’−オキシジフタル酸、４，４’−［（２，３，５，６−テトラフルオロ−１，４−フェニレン）ビス（オキシ）］ビス（３，５，６−トリフルオロフタル酸無水物）（１０ＦＥＤＡＮ）、４，４’−［（１，４−フェニレン）ビス（オキシ）］ビス（３，５，６−トリフルオロフタル酸無水物）（６Ｆ４ＨＥＤＡＮ）、４，４’−ヘキサフルオロイソプロピリデンジフタル酸無水物（６ＦＤＡ）等が挙げられる。 Examples of the aromatic acid dianhydride represented by the formula (1) include 3,3 ′, 4,4′-biphenyltetracarboxylic acid dianhydride and 2,3,3 ′, 4′-biphenyltetracarboxylic acid. Acid dianhydride, 4,4'-oxydiphthalic acid, 4,4 '-[(2,3,5,6-tetrafluoro-1,4-phenylene) bis (oxy)] bis (3,5,6- Trifluorophthalic anhydride) (10FEDAN), 4,4 '-[(1,4-phenylene) bis (oxy)] bis (3,5,6-trifluorophthalic anhydride) (6F4HEDAN), 4, 4'-hexafluoroisopropylidene diphthalic anhydride (6FDA) and the like can be mentioned.

式（１）で示される脂肪族酸二無水物としては、シクロブタン−１，２，３，４−テトラカルボン酸二無水物、１−カルボキシメチル−２，３，５−シクロペンタントリカルボン酸−２，６：３，５−二無水物、ブタン−１，２，３，４−テトラカルボン酸二無水物、シクロヘキサン−１，２，４，５−テトラカルボン酸酸二無水物等が挙げられる。 Examples of the aliphatic acid dianhydride represented by the formula (1) include cyclobutane-1,2,3,4-tetracarboxylic acid dianhydride and 1-carboxymethyl-2,3,5-cyclopentanetricarboxylic acid-2. , 6: 3,5-dianhydride, butane-1,2,3,4-tetracarboxylic acid dianhydride, cyclohexane-1,2,4,5-tetracarboxylic acid dianhydride and the like.

式（２）で示される芳香族ジアミンとしては、ｐ−フェニレンジアミン、ｍ−フェニレンジアミン、２，４−ジアミノトルエン、２，５−ジアミノトルエン、２，４−ジアミノキシレン、２，４−ジアミノデュレン、４，４’−ジアミノジフェニルメタン、４，４’−メチレンビス（２−メチルアニリン）、４，４’−メチレンビス（２−エチルアニリン）、４，４’−メチレンビス（２，６−ジメチルアニリン）、４，４’−メチレンビス（２，６−ジエチルアニリン）、４，４’−ジアミノジフェニルエーテル（ＯＤＡ）、３，４’−ジアミノジフェニルエーテル、３，３’−ジアミノジフェニルエーテル、２，４’−ジアミノジフェニルエーテル、４，４’−ジアミノジフェニルスルホン、３，３’−ジアミノジフェニルスルホン、４，４’−ジアミノベンゾフェノン、３，３’−ジアミノベンゾフェノン、４，４’−ジアミノベンズアニリド、４−アミノフェニル−４’−アミノベンゾエート、ベンジジン、３，３’−ジヒドロキシベンジジン、３，３’−ジメトキシベンジジン、ｏ−トリジン、ｍ−トリジン、２，２’−ビス（トリフルオロメチル）ベンジジン（ＴＦＭＢ）、１，４−ビス（４−アミノフェノキシ）ベンゼン（ＴＰＥＱ）、１，３−ビス（４−アミノフェノキシ）ベンゼン（ＴＰＥＲ）、１，３−ビス（３−アミノフェノキシ）ベンゼン、４，４’−ビス（４−アミノフェノキシ）ビフェニル（ＢＡＰＢ）、ビス（４−（３−アミノフェノキシ）フェニル）スルホン、ビス（４−（４−アミノフェノキシ）フェニル）スルホン、２，２−ビス（４−（４−アミノフェノキシ）フェニル）プロパン（ＢＡＰＰ）、２，２−ビス（４−（４−アミノフェノキシ）フェニル）ヘキサフルオロプロパン（ＨＦＢＡＰＰ）、２，２−ビス（４−アミノフェニル）ヘキサフルオロプロパン（６ＦＡＰ）、１，３−ジアミノ−２，４，５，６−テトラフルオロベンゼン（４ＦＭＰＤ）、２，６−ビス（４−アミノフェノキシ）−３，５−ジフルオロ−４−（１Ｈ，１Ｈ，２Ｈ，２Ｈ−ヘプタデカフルオロ−ｎ−デカノキシ）ベンゾニトリル（ＡＦＤＭ）等が挙げられる。 Examples of the aromatic diamine represented by the formula (2) include p-phenylenediamine, m-phenylenediamine, 2,4-diaminotoluene, 2,5-diaminotoluene, 2,4-diaminoxylene and 2,4-diaminodurene. , 4,4'-diaminodiphenylmethane, 4,4'-methylenebis (2-methylaniline), 4,4'-methylenebis (2-ethylaniline), 4,4'-methylenebis (2,6-dimethylaniline), 4,4'-methylenebis (2,6-diethylaniline), 4,4'-diaminodiphenyl ether (ODA), 3,4'-diaminodiphenyl ether, 3,3'-diaminodiphenyl ether, 2,4'-diaminodiphenyl ether, 4,4'-diaminodiphenyl sulfone, 3,3'-diaminodiphenyl sulfone, 4 4'-diaminobenzophenone, 3,3'-diaminobenzophenone, 4,4'-diaminobenzanilide, 4-aminophenyl-4'-aminobenzoate, benzidine, 3,3'-dihydroxybenzidine, 3,3'-dimethoxy Benzidine, o-tolidine, m-tolidine, 2,2'-bis (trifluoromethyl) benzidine (TFMB), 1,4-bis (4-aminophenoxy) benzene (TPEQ), 1,3-bis (4- Aminophenoxy) benzene (TPER), 1,3-bis (3-aminophenoxy) benzene, 4,4′-bis (4-aminophenoxy) biphenyl (BAPB), bis (4- (3-aminophenoxy) phenyl) Sulfone, bis (4- (4-aminophenoxy) phenyl) sulfone, 2,2-bis (4- (4 Aminophenoxy) phenyl) propane (BAPP), 2,2-bis (4- (4-aminophenoxy) phenyl) hexafluoropropane (HFBAPP), 2,2-bis (4-aminophenyl) hexafluoropropane (6FAP) , 1,3-diamino-2,4,5,6-tetrafluorobenzene (4FMPD), 2,6-bis (4-aminophenoxy) -3,5-difluoro-4- (1H, 1H, 2H, 2H -Heptadecafluoro-n-decanoxy) benzonitrile (AFDM) and the like.

式（２）で示される脂肪族ジアミンとしては、４，４’−メチレンビス(シクロヘキシルアミン)、イソホロンジアミン、２，５−ビス（アミノメチル）ビシクロ〔２．２．１〕ヘプタン、２，６−ビス（アミノメチル）ビシクロ〔２．２．１〕ヘプタン、３，８−ビス（アミノメチル）トリシクロ〔５．２．１．０〕デカン、１，３−ジアミノアダマンタン、２，２−ビス（４−アミノシクロヘキシル）プロパン、２，２−ビス（４−アミノシクロヘキシル）ヘキサフルオロプロパン等が挙げられる。 As the aliphatic diamine represented by the formula (2), 4,4′-methylenebis (cyclohexylamine), isophoronediamine, 2,5-bis (aminomethyl) bicyclo [2.2.1] heptane, 2,6- Bis (aminomethyl) bicyclo [2.2.1] heptane, 3,8-bis (aminomethyl) tricyclo [5.2.1.0] decane, 1,3-diaminoadamantane, 2,2-bis (4 -Aminocyclohexyl) propane, 2,2-bis (4-aminocyclohexyl) hexafluoropropane and the like.

また、式（２）で示される脂肪族又は芳香族ジアミンは、以下の化合物の群から選択される少なくとも１つの化合物であってもよい。 Further, the aliphatic or aromatic diamine represented by the formula (2) may be at least one compound selected from the group of compounds below.

アミド化反応は、溶媒中に酸二無水物とジアミンとを溶解させた溶液を、例えば、窒素等の不活性ガス雰囲気中、室温で攪拌して均一溶液とすることにより進行する。溶媒は、原料として用いる酸二無水物及びジアミンに応じて適宜選択すればよい。アミド化反応終了後の反応混合物は、溶媒中にポリアミド酸を含む。当該反応混合物はそのまま熱イミド化に供することができる。また、生成されたポリアミド酸を反応混合物から分離し再度適当な溶媒に溶解してから熱イミド化に供することも可能である。 The amidation reaction proceeds by stirring a solution prepared by dissolving acid dianhydride and diamine in a solvent at room temperature in an atmosphere of an inert gas such as nitrogen to form a uniform solution. The solvent may be appropriately selected depending on the acid dianhydride and diamine used as the raw materials. The reaction mixture after completion of the amidation reaction contains the polyamic acid in the solvent. The reaction mixture can be directly subjected to thermal imidization. It is also possible to separate the generated polyamic acid from the reaction mixture, dissolve it again in a suitable solvent, and then subject it to thermal imidization.

アミド化反応は有機溶媒中で行われることが好適である。上記有機溶媒としては、原料である酸二無水物とジアミンとの反応が効率よく進行でき、かつこれらの原料に対して不活性であれば、特に限定されるものではない。例えば、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、スルホラン、メチルイソブチルケトン、アセトニトリル、ベンゾニトリル、ニトロベンゼン、ニトロメタン、ジメチルスルフォキシド、アセトン、メチルエチルケトン、イソブチルケトン、メタノール等の極性溶媒；トルエンやキシレン等の非極性溶媒等が挙げられる。中でも、極性溶媒を用いることが好ましい。これらの有機溶媒は、単独で使用されてもよいし、２種以上の混合物として使用されてもよい。 The amidation reaction is preferably carried out in an organic solvent. The organic solvent is not particularly limited as long as the reaction between the raw material acid dianhydride and the diamine can proceed efficiently and is inert to these raw materials. For example, N-methylpyrrolidone, N-methyl-2-pyrrolidinone, N, N-dimethylacetamide, N, N-dimethylformamide, tetrahydrofuran, dimethylsulfoxide, sulfolane, methyl isobutyl ketone, acetonitrile, benzonitrile, nitrobenzene, nitromethane, dimethyl. Examples thereof include polar solvents such as sulfoxide, acetone, methyl ethyl ketone, isobutyl ketone, and methanol; nonpolar solvents such as toluene and xylene. Above all, it is preferable to use a polar solvent. These organic solvents may be used alone or as a mixture of two or more kinds.

１．２．含フッ素ポリイミドの製造方法
本発明の特徴の１つは、前記ポリアミド酸を、加熱処理によりイミド化（熱イミド化）してポリイミドを含む樹脂組成物を得ることである。 1.2. Method for producing fluorine-containing polyimide One of the features of the present invention is to obtain a resin composition containing polyimide by imidizing (thermal imidizing) the polyamic acid by heat treatment.

ポリアミド酸をイミド化する際、ポリアミド酸が完全にポリイミドに転化されるとは限らず、生成された樹脂組成物中には、ポリイミドだけでなくポリアミド酸や、その他の成分が含まれていてよい。後述するイミド化率の範囲内でイミド化されていることが好ましい。 When imidizing a polyamic acid, the polyamic acid is not always completely converted to a polyimide, and the resin composition thus produced may contain not only polyimide but also polyamic acid and other components. . It is preferably imidized within the range of the imidization ratio described below.

例えば、前記ポリアミド酸を、窒素雰囲気下で、好ましくは温度５０〜４００℃、より好ましくは１００〜３８０℃、好ましくは時間０．１〜１０時間、より好ましくは０．２〜５時間の条件下で焼成してイミド化反応を行うことによりポリイミドを含む樹脂組成物を得ることができる。熱イミド化反応に供する前記ポリアミド酸は、適当な溶媒中に溶解された形態であることが好ましい。溶媒としては、ポリアミド酸を溶解するものであれば良く、アミド化反応に関して上記した溶媒を用いることもできる。例えば、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、スルホラン、メチルイソブチルケトン、アセトニトリル、ベンゾニトリル、ニトロベンゼン、ニトロメタン、ジメチルスルフォキシド、アセトン、メチルエチルケトン、イソブチルケトン、メタノール等の極性溶媒；トルエンやキシレン等の非極性溶媒等が挙げられる。中でも、極性溶媒を用いることが好ましい。これらの有機溶媒は、単独で使用されてもよいし、２種以上の混合物として使用されてもよい。上記の通り、アミド化反応後の反応混合物をそのまま熱イミド化に供してもよい。前記ポリアミド酸の溶液中の前記ポリアミド酸の濃度は特に限定されないが、得られる樹脂組成物の重合反応性と重合後の粘度、その後の製膜、焼成での取り扱いやすさから、好ましくは、５重量％以上、より好ましくは１０重量％、好ましくは５０％以下、より好ましくは４０％以下である。 For example, the polyamic acid is preferably heated under a nitrogen atmosphere at a temperature of 50 to 400 ° C., more preferably 100 to 380 ° C., preferably 0.1 to 10 hours, and more preferably 0.2 to 5 hours. A resin composition containing a polyimide can be obtained by baking at 4 to perform an imidization reaction. The polyamic acid used in the thermal imidization reaction is preferably dissolved in a suitable solvent. Any solvent can be used as long as it can dissolve the polyamic acid, and the solvent described above for the amidation reaction can also be used. For example, N-methylpyrrolidone, N-methyl-2-pyrrolidinone, N, N-dimethylacetamide, N, N-dimethylformamide, tetrahydrofuran, dimethylsulfoxide, sulfolane, methyl isobutyl ketone, acetonitrile, benzonitrile, nitrobenzene, nitromethane, dimethyl. Examples thereof include polar solvents such as sulfoxide, acetone, methyl ethyl ketone, isobutyl ketone, and methanol; nonpolar solvents such as toluene and xylene. Above all, it is preferable to use a polar solvent. These organic solvents may be used alone or as a mixture of two or more kinds. As described above, the reaction mixture after the amidation reaction may be directly subjected to thermal imidization. The concentration of the polyamic acid in the solution of the polyamic acid is not particularly limited, but is preferably 5 from the viewpoint of polymerization reactivity of the obtained resin composition and viscosity after polymerization, and ease of handling in subsequent film formation and firing. It is not less than 10% by weight, more preferably not more than 10% by weight, preferably not more than 50%, more preferably not more than 40%.

前記ポリアミド酸の加熱処理は、第三級アミン化合物の不存在条件下で行われることが好ましい。 The heat treatment of the polyamic acid is preferably carried out under the absence of a tertiary amine compound.

化学イミド化法においてイミド化触媒として用いられる第三級アミン化合物としては、例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルジアミノメタン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１，３−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１，４−フェニレンジアミン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１，６−ヘキサンジアミン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラエチルメチレンジアミン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラエチルエチレンジアミン等が挙げられる。第三級アミン化合物は１種のみで用いられるとは限らず、２種以上組み合されることもあるが、本発明のポリアミド酸の加熱処理は、イミド化触媒である第三級アミンのいずれもが存在しない条件下で行われることが好ましい。 Examples of the tertiary amine compound used as an imidization catalyst in the chemical imidization method include trimethylamine, triethylamine, tripropylamine, tributylamine, pyridine, 1,4-diazabicyclo [2.2.2] octane (DABCO). , 1,8-diazabicyclo [5.4.0] undec-7-ene, 1,5-diazabicyclo [4.3.0] non-5-ene, N, N, N ', N'-tetramethyldiamino Methane, N, N, N ', N'-tetramethylethylenediamine, N, N, N', N'-tetramethyl-1,3-propanediamine, N, N, N ', N'-tetramethyl-1 , 4-phenylenediamine, N, N, N ', N'-tetramethyl-1,6-hexanediamine, N, N, N', N'-tetraethylmethylenediamine N, N, N ', N'- tetramethyl ethylenediamine, and the like. The tertiary amine compound is not necessarily used alone, but may be used in combination of two or more kinds. However, in the heat treatment of the polyamic acid of the present invention, any of the tertiary amine which is an imidization catalyst is used. It is preferably carried out under non-existing conditions.

第三級アミン化合物とは、アンモニア分子の３つの水素原子がいずれも炭化水素基により置換された構造を有する化合物である。本発明においては、イミド化合物、アミド化合物のようにカルボニル基（Ｃ＝Ｏ）の炭素原子が窒素原子に結合した構造は第三級アミン化合物の範囲から除外する。すなわち、本発明での第三級アミン化合物とは、アンモニア分子の３つの水素原子がいずれも炭化水素基により置換された構造（ただし、イミド化合物、アミド化合物のようにカルボニル基（Ｃ＝Ｏ）の炭素原子が窒素原子に結合した構造を除く）を有する第三級アミン化合物を指す。 The tertiary amine compound is a compound having a structure in which all three hydrogen atoms of the ammonia molecule are replaced with a hydrocarbon group. In the present invention, structures in which a carbon atom of a carbonyl group (C═O) is bonded to a nitrogen atom, such as an imide compound and an amide compound, are excluded from the scope of the tertiary amine compound. That is, the tertiary amine compound in the present invention means a structure in which all three hydrogen atoms of an ammonia molecule are replaced by a hydrocarbon group (provided that a carbonyl group (C═O) like an imide compound or an amide compound). (Excluding the structure in which the carbon atom of is bonded to the nitrogen atom).

化学イミド化法では、上記の第三級アミンが単独で用いられるだけでなく、上記の第三級アミンとカルボン酸無水物とが併用される場合もある。第三級アミンと併用され得るカルボン酸無水物としては、例えば、無水酢酸、無水トリフルオロ酢酸、無水プロピオン酸、無水酪酸、無水イソ酪酸、無水コハク酸、無水マレイン酸等の１種又は２種以上に組み合わせが挙げられる。本発明のポリアミド酸の加熱処理は、イミド化触媒として第三級アミンに加えてカルボン酸無水物も存在しない条件下で行われることが好ましい。 In the chemical imidization method, not only the above tertiary amine is used alone, but also the above tertiary amine and carboxylic acid anhydride may be used in combination. Examples of the carboxylic acid anhydride that can be used in combination with the tertiary amine include, for example, acetic anhydride, trifluoroacetic anhydride, propionic anhydride, butyric anhydride, isobutyric anhydride, succinic anhydride, maleic anhydride, etc. Combinations are mentioned above. The heat treatment of the polyamic acid of the present invention is preferably carried out under the condition that no carboxylic acid anhydride is present in addition to the tertiary amine as the imidization catalyst.

１．３．含フッ素ポリイミドの化学構造
以上のようにして得られた樹脂組成物は、繰り返し単位構造中に１個以上のフッ素原子を有するポリイミドを含有する。該ポリイミドは、より好ましくは、下記式（Ｖ）で表される繰り返し単位構造を含む芳香族ポリイミドである。かかる特定構造を有するポリイミドを表面に含む基材では、細胞の三次元的な培養が可能である。 1.3. Chemical Structure of Fluorine-Containing Polyimide The resin composition obtained as described above contains a polyimide having one or more fluorine atoms in the repeating unit structure. The polyimide is more preferably an aromatic polyimide containing a repeating unit structure represented by the following formula (V). A substrate containing a polyimide having such a specific structure on its surface enables three-dimensional culture of cells.

上記式（Ｖ）において、Ｘ^１、Ｙ^１、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５、Ｚ^６及びｐの定義と好適な具体例は、式（Ｉ）の定義で説明したものと同様である。 In the above formula (V), the definitions and preferable specific examples of X ¹ , Y ¹ , Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ , Z ⁶ and p are explained in the definition of the formula (I). It is similar to the one.

また、以上のようにして得られた樹脂組成物は、繰り返し単位構造中に１個以上のフッ素原子を有する脂肪族基を有する脂肪族ポリイミド、より好ましくは、下記式（ＶＩ）〜（ＶＩＩＩ）のいずれかで表される繰り返し単位構造を含む少なくとも１種の脂肪族ポリイミドを含むことができる。かかる特定構造を有するポリイミドを表面に含む基材では、細胞の三次元的な培養が可能である。 The resin composition obtained as described above is an aliphatic polyimide having an aliphatic group having one or more fluorine atoms in the repeating unit structure, more preferably the following formulas (VI) to (VIII). At least one aliphatic polyimide containing a repeating unit structure represented by any of the above can be included. A substrate containing a polyimide having such a specific structure on its surface enables three-dimensional culture of cells.

［上記式（ＶＩ）中、Ｘ^２、Ｙ^２、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５、Ｚ^６及びｐの定義と好適な具体例は、式（ＩＩ）の定義で説明したものと同様とする。］

[In the above formula (VI), the definition of X ² , Y ² , Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ , Z ⁶ and p and preferable specific examples are described in the definition of formula (II). The same as what was done. ]

［上記式（ＶＩＩ）中、Ｘ^３、Ｙ^３、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５及びＺ^６の定義と好適な具体例は、式（ＩＩＩ）の定義で説明したものと同様とする。］

[In the formula (VII), the definitions and preferable specific examples of X ³ , Y ³ , Z ¹ , Z ² , Z ³ , Z ⁴ , Z ⁵ and Z ⁶ are the same as those described in the definition of the formula (III). Same as. ]

［上記式（ＶＩＩＩ）中、Ｘ^４、Ｙ^４、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３及びＺ^４の定義と好適な具体例は、式（ＩＶ）の定義で説明したものと同様とする。］

[In the formula (VIII), the definitions and preferable specific examples of X ⁴ , Y ⁴ , Z ¹ , Z ² , Z ³ and Z ⁴ are the same as those described in the definition of the formula (IV). ]

前記ポリイミドを含む樹脂組成物は、必要に応じて、通常用いられる各種添加剤、例えば、分散剤、有機溶媒、無機充填材、離型剤、カップリング剤、難燃剤等を本発明の効果を損なわない範囲で適宜含有することができる。前記ポリイミドとその前駆体である未反応のポリアミド酸とを主成分とする樹脂組成物である。ポリイミドと前記ポリアミド酸との合計量が、樹脂組成物の全量に対して、好ましくは８５質量％以上、より好ましくは９０質量％以上、最も好ましくは９５質量％以上である。 The resin composition containing the polyimide, if necessary, various additives usually used, for example, a dispersant, an organic solvent, an inorganic filler, a release agent, a coupling agent, a flame retardant, etc. It can be appropriately contained within a range that does not impair it. It is a resin composition containing the polyimide and an unreacted polyamic acid as a precursor thereof as main components. The total amount of the polyimide and the polyamic acid is preferably 85% by mass or more, more preferably 90% by mass or more, and most preferably 95% by mass or more based on the total amount of the resin composition.

本発明において「ポリイミドを含む樹脂組成物」は、典型的には、酸二無水物とジアミンとを各々１種以上重合させて得られるポリアミド酸をイミド化することにより得られるポリイミド樹脂を指す。 In the present invention, the “resin composition containing a polyimide” typically refers to a polyimide resin obtained by imidizing a polyamic acid obtained by polymerizing one or more kinds of acid dianhydride and diamine.

本発明で用いられる樹脂組成物中のポリイミドは、製法に関わりなく、式（３）で示される繰り返し単位を含むポリイミドであることができ、前記式（３）中のＸ^０及びＹ^０は、本明細書中で説明した酸二無水物、ジアミン及び／又はポリアミド酸におけるＸ^０及びＹ^０と同様の構造であることができる。特に好ましい式（３）で示される繰り返し単位の例は、上記の式（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）及び（ＶＩＩＩ）のいずれかで表される構造である。 The polyimide in the resin composition used in the present invention can be a polyimide containing a repeating unit represented by the formula (3) regardless of the production method, and X ⁰ and Y ⁰ in the formula (3) are It may have a structure similar to X ⁰ and Y ⁰ in the acid dianhydride, diamine and / or polyamic acid described herein. Particularly preferred examples of the repeating unit represented by the formula (3) are the structures represented by any of the above formulas (V), (VI), (VII) and (VIII).

式（Ｖ）で示される繰り返し単位は、式（３）におけるＸ^０が式（Ｅ^１）で表される基であり且つＹ^０がＹ^１である構造である。式（Ｖ）で示される繰り返し単位を含むポリイミドは、式（Ｖ）において、式（Ｅ^１）で示される基が他の４価の有機基に置換され及び／又はＹ^１が他の２価の有機基に置換された繰り返し単位を更に含んでいてもよい。ここで便宜上、式（Ｅ^１）で示される基及び他の４価の有機基を総称して「４価残基」といい、Ｙ^１及び他の２価の有機基を総称して「２価残基」と呼ぶ。式（Ｖ）で示される繰り返し単位を含むポリイミドは、好ましくは、４価残基の総量を１００モル％としたとき、式（Ｅ^１）で示される基の割合は２５モル％以上が好ましく、５０モル％以上がより好ましく、８０モル％以上が更に好ましく、１００モル％が最も好ましい。他の４価残基としては、式（Ｅ^２）で示される基、式（Ｅ^３）で示される基、式（Ｅ^４）で示される基等が挙げられる。４価残基の総量を１００モル％としたとき、式（Ｅ^１）で示される基と、式（Ｅ^２）で示される基と、式（Ｅ^３）で示される基と、式（Ｅ^４）で示される基との合計が９０モル％以上であることがより好ましく、１００モル％であることが最も好ましい。また、式（Ｖ）で示される繰り返し単位を含むポリイミドは、２価残基の総量を１００モル％としたとき、Ｙ^１の割合は２５モル％以上が好ましく、５０モル％以上がより好ましく、８０モル％以上が更に好ましく、１００モル％が最も好ましい。他の２価残基としてはＹ^２、Ｙ^３、Ｙ^４等が挙げられる。２価残基の総量を１００モル％としたとき、Ｙ^１と、Ｙ^２と、Ｙ^３と、Ｙ^４との合計が９０モル％以上であることがより好ましく、１００モル％であることが最も好ましい。 The repeating unit represented by the formula (V) is a structure in which X ⁰ in the formula (3) is a group represented by the formula (E ¹ ) and Y ⁰ is Y ¹ . A polyimide containing a repeating unit represented by the formula (V) has a structure in which the group represented by the formula (E ¹ ) is substituted with another tetravalent organic group in the formula (V) and / or Y ¹ is another divalent group. It may further include a repeating unit substituted with the organic group of. Here, for convenience, the group represented by the formula (E ¹ ) and other tetravalent organic groups are collectively referred to as “tetravalent residue”, and Y ¹ and other divalent organic groups are collectively referred to as “2 Called "valent residue". The polyimide containing the repeating unit represented by the formula (V) preferably has a proportion of the group represented by the formula (E ¹ ) of 25 mol% or more when the total amount of tetravalent residues is 100 mol%. 50 mol% or more is more preferable, 80 mol% or more is still more preferable, and 100 mol% is the most preferable. Examples of the other tetravalent residue include a group represented by the formula (E ² ), a group represented by the formula (E ³ ), a group represented by the formula (E ⁴ ), and the like. When the total amount of tetravalent residues is 100 mol%, a group represented by the formula (E ¹ ), a group represented by the formula (E ² ), a group represented by the formula (E ³ ), and a group represented by the formula (E ³ The total amount with the group represented by ⁴ ) is more preferably 90 mol% or more, and most preferably 100 mol%. Further, in the polyimide containing the repeating unit represented by the formula (V), the proportion of Y ¹ is preferably 25 mol% or more, more preferably 50 mol% or more, when the total amount of divalent residues is 100 mol%. 80 mol% or more is more preferable, and 100 mol% is the most preferable. Other divalent residues include Y ² , Y ³ , Y ^{4 and the} like. When the total amount of divalent residues is 100 mol%, the total of Y ¹ , Y ² , Y ³ , and Y ⁴ is more preferably 90 mol% or more, and preferably 100 mol%. Most preferred.

式（ＶＩ）で示される繰り返し単位は、式（３）におけるＸ^０が式（Ｅ^２）で表される基であり且つＹ^０がＹ^２である構造である。式（ＶＩ）で示される繰り返し単位を含むポリイミドは、式（ＶＩ）において、式（Ｅ^２）で示される基が他の４価の有機基に置換され及び／又はＹ^２が他の２価の有機基に置換された繰り返し単位を更に含んでいてもよい。ここで便宜上、式（Ｅ^２）で示される基及び他の４価の有機基を総称して「４価残基」といい、Ｙ^２及び他の２価の有機基を総称して「２価残基」と呼ぶ。式（ＶＩ）で示される繰り返し単位を含むポリイミドは、好ましくは、４価残基の総量を１００モル％としたとき、式（Ｅ^２）で示される基の割合は２５モル％以上が好ましく、５０モル％以上がより好ましく、８０モル％以上が更に好ましく、１００モル％が最も好ましい。他の４価残基としては、式（Ｅ^１）で示される基、式（Ｅ^３）で示される基、式（Ｅ^４）で示される基等が挙げられる。４価残基の総量を１００モル％としたとき、式（Ｅ^１）で示される基と、式（Ｅ^２）で示される基と、式（Ｅ^３）で示される基と、式（Ｅ^４）で示される基との合計が９０モル％以上であることがより好ましく、１００モル％であることが最も好ましい。また、式（ＶＩ）で示される繰り返し単位を含むポリイミドは、２価残基の総量を１００モル％としたとき、Ｙ^２の割合は２５モル％以上が好ましく、５０モル％以上がより好ましく、８０モル％以上が更に好ましく、１００モル％が最も好ましい。他の２価残基としてはＹ^１、Ｙ^３、Ｙ^４等が挙げられる。２価残基の総量を１００モル％としたとき、Ｙ^１と、Ｙ^２と、Ｙ^３と、Ｙ^４との合計が９０モル％以上であることがより好ましく、１００モル％であることが最も好ましい。 The repeating unit represented by the formula (VI) is a structure in which X ⁰ in the formula (3) is a group represented by the formula (E ² ) and Y ⁰ is Y ² . A polyimide containing a repeating unit represented by the formula (VI) has a structure in which the group represented by the formula (E ² ) in formula (VI) is substituted with another tetravalent organic group and / or Y ² is another divalent group. It may further include a repeating unit substituted with the organic group of. Here, for convenience, the group represented by the formula (E ² ) and other tetravalent organic groups are collectively referred to as “tetravalent residue”, and Y ² and other divalent organic groups are collectively referred to as “2”. Called "valent residue". The polyimide containing the repeating unit represented by the formula (VI) preferably has a proportion of the group represented by the formula (E ² ) of 25 mol% or more when the total amount of tetravalent residues is 100 mol%. 50 mol% or more is more preferable, 80 mol% or more is still more preferable, and 100 mol% is the most preferable. Examples of the other tetravalent residue include a group represented by the formula (E ¹ ), a group represented by the formula (E ³ ), a group represented by the formula (E ⁴ ), and the like. When the total amount of tetravalent residues is 100 mol%, a group represented by the formula (E ¹ ), a group represented by the formula (E ² ), a group represented by the formula (E ³ ), and a group represented by the formula (E ³ The total amount with the group represented by ⁴ ) is more preferably 90 mol% or more, and most preferably 100 mol%. Further, in the polyimide containing the repeating unit represented by the formula (VI), the proportion of Y ² is preferably 25 mol% or more, more preferably 50 mol% or more, when the total amount of divalent residues is 100 mol%. 80 mol% or more is more preferable, and 100 mol% is the most preferable. Other divalent residues include Y ¹ , Y ³ , Y ^{4 and the} like. When the total amount of divalent residues is 100 mol%, the total of Y ¹ , Y ² , Y ³ , and Y ⁴ is more preferably 90 mol% or more, and preferably 100 mol%. Most preferred.

式（ＶＩＩ）で示される繰り返し単位は、式（３）におけるＸ^０が式（Ｅ^３）で表される基であり且つＹ^０がＹ^３である構造である。式（ＶＩＩ）で示される繰り返し単位を含むポリイミドは、式（ＶＩＩ）において、式（Ｅ^３）で示される基が他の４価の有機基に置換され及び／又はＹ^３が他の２価の有機基に置換された繰り返し単位を更に含んでいてもよい。ここで便宜上、式（Ｅ^３）で示される基及び他の４価の有機基を総称して「４価残基」といい、Ｙ^３及び他の２価の有機基を総称して「２価残基」と呼ぶ。式（ＶＩＩ）で示される繰り返し単位を含むポリイミドは、好ましくは、４価残基の総量を１００モル％としたとき、式（Ｅ^３）で示される基の割合は２５モル％以上が好ましく、５０モル％以上がより好ましく、８０モル％以上が更に好ましく、１００モル％が最も好ましい。他の４価残基としては、式（Ｅ^１）で示される基、式（Ｅ^２）で示される基、式（Ｅ^４）で示される基等が挙げられる。４価残基の総量を１００モル％としたとき、式（Ｅ^１）で示される基と、式（Ｅ^２）で示される基と、式（Ｅ^３）で示される基と、式（Ｅ^４）で示される基との合計が９０モル％以上であることがより好ましく、１００モル％であることが最も好ましい。また、式（ＶＩＩ）で示される繰り返し単位を含むポリイミドは、２価残基の総量を１００モル％としたとき、Ｙ^３の割合は２５モル％以上が好ましく、５０モル％以上がより好ましく、８０モル％以上が更に好ましく、１００モル％が最も好ましい。他の２価残基としてはＹ^１、Ｙ^２、Ｙ^４等が挙げられる。２価残基の総量を１００モル％としたとき、Ｙ^１と、Ｙ^２と、Ｙ^３と、Ｙ^４との合計が９０モル％以上であることがより好ましく、１００モル％であることが最も好ましい。 The repeating unit represented by the formula (VII) is a structure in which X ⁰ in the formula ( ³ ) is a group represented by the formula (E ³ ) and Y ⁰ is Y ³ . A polyimide containing a repeating unit represented by the formula (VII) has a structure in which the group represented by the formula (E ³ ) in formula (VII) is substituted with another tetravalent organic group and / or Y ³ is another divalent group. It may further include a repeating unit substituted with the organic group of. Here, for convenience, the group represented by the formula (E ³ ) and other tetravalent organic groups are collectively referred to as “tetravalent residue”, and Y ³ and other divalent organic groups are collectively referred to as “2. Called "valent residue". The polyimide containing a repeating unit represented by the formula (VII) preferably has a proportion of the group represented by the formula (E ³ ) of 25 mol% or more when the total amount of tetravalent residues is 100 mol%. 50 mol% or more is more preferable, 80 mol% or more is still more preferable, and 100 mol% is the most preferable. Examples of the other tetravalent residue include a group represented by the formula (E ¹ ), a group represented by the formula (E ² ), a group represented by the formula (E ⁴ ), and the like. When the total amount of tetravalent residues is 100 mol%, a group represented by the formula (E ¹ ), a group represented by the formula (E ² ), a group represented by the formula (E ³ ), and a group represented by the formula (E ³ The total amount with the group represented by ⁴ ) is more preferably 90 mol% or more, and most preferably 100 mol%. Further, in the polyimide containing the repeating unit represented by the formula (VII), when the total amount of divalent residues is 100 mol%, the proportion of Y ³ is preferably 25 mol% or more, more preferably 50 mol% or more, 80 mol% or more is more preferable, and 100 mol% is the most preferable. Examples of other divalent residues include Y ¹ , Y ² and Y ⁴ . When the total amount of divalent residues is 100 mol%, the total of Y ¹ , Y ² , Y ³ , and Y ⁴ is more preferably 90 mol% or more, and preferably 100 mol%. Most preferred.

式（ＶＩＩＩ）で示される繰り返し単位は、式（３）におけるＸ^０が式（Ｅ^４）で表される基であり且つＹ^０がＹ^４である構造である。式（ＶＩＩＩ）で示される繰り返し単位を含むポリイミドは、式（ＶＩＩＩ）において、式（Ｅ^４）で示される基が他の４価の有機基に置換され及び／又はＹ^４が他の２価の有機基に置換された繰り返し単位を更に含んでいてもよい。ここで便宜上、式（Ｅ^４）で示される基及び他の４価の有機基を総称して「４価残基」といい、Ｙ^４及び他の２価の有機基を総称して「２価残基」と呼ぶ。式（ＶＩＩＩ）で示される繰り返し単位を含むポリイミドは、好ましくは、４価残基の総量を１００モル％としたとき、式（Ｅ^４）で示される基の割合は２５モル％以上が好ましく、５０モル％以上がより好ましく、８０モル％以上が更に好ましく、１００モル％が最も好ましい。他の４価残基としては、式（Ｅ^１）で示される基、式（Ｅ^２）で示される基、式（Ｅ^３）で示される基等が挙げられる。４価残基の総量を１００モル％としたとき、式（Ｅ^１）で示される基と、式（Ｅ^２）で示される基と、式（Ｅ^３）で示される基と、式（Ｅ^４）で示される基との合計が９０モル％以上であることがより好ましく、１００モル％であることが最も好ましい。また、式（ＶＩＩＩ）で示される繰り返し単位を含むポリイミドは、２価残基の総量を１００モル％としたとき、Ｙ^４の割合は２５モル％以上が好ましく、５０モル％以上がより好ましく、８０モル％以上が更に好ましく、１００モル％が最も好ましい。他の２価残基としてはＹ^１、Ｙ^２、Ｙ^３等が挙げられる。２価残基の総量を１００モル％としたとき、Ｙ^１と、Ｙ^２と、Ｙ^３と、Ｙ^４との合計が９０モル％以上であることがより好ましく、１００モル％であることが最も好ましい。 The repeating unit represented by the formula (VIII) is a structure in which X ⁰ in the formula (3) is a group represented by the formula (E ⁴ ), and Y ⁰ is Y ⁴ . A polyimide containing a repeating unit represented by the formula (VIII) has a structure in which the group represented by the formula (E ⁴ ) is substituted with another tetravalent organic group in the formula (VIII) and / or Y ⁴ is another divalent group. It may further include a repeating unit substituted with the organic group of. Here, for convenience, the group represented by the formula (E ⁴ ) and other tetravalent organic groups are collectively referred to as “tetravalent residue”, and Y ⁴ and other divalent organic groups are collectively referred to as “2 Called "valent residue". The polyimide containing the repeating unit represented by the formula (VIII) preferably has a proportion of the group represented by the formula (E ⁴ ) of 25 mol% or more when the total amount of tetravalent residues is 100 mol%. 50 mol% or more is more preferable, 80 mol% or more is still more preferable, and 100 mol% is the most preferable. Examples of the other tetravalent residue include a group represented by the formula (E ¹ ), a group represented by the formula (E ² ), a group represented by the formula (E ³ ), and the like. When the total amount of tetravalent residues is 100 mol%, a group represented by the formula (E ¹ ), a group represented by the formula (E ² ), a group represented by the formula (E ³ ), and a group represented by the formula (E ³ The total amount with the group represented by ⁴ ) is more preferably 90 mol% or more, and most preferably 100 mol%. Further, in the polyimide containing the repeating unit represented by the formula (VIII), the proportion of Y ⁴ is preferably 25 mol% or more, more preferably 50 mol% or more, when the total amount of divalent residues is 100 mol%. 80 mol% or more is more preferable, and 100 mol% is the most preferable. Examples of other divalent residues include Y ¹ , Y ² and Y ³ . When the total amount of divalent residues is 100 mol%, the total of Y ¹ , Y ² , Y ³ , and Y ⁴ is more preferably 90 mol% or more, and preferably 100 mol%. Most preferred.

１．４．ポリイミド含有樹脂組成物の化学的、物理的特徴
１．４．１．イミド化率
前記含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物は、イミド化の時点又は後述する細胞培養用基材の形態とする時点で加熱処理又は環化触媒処理を行うことによりイミド化率を高めることができる。 1.4. Chemical and physical characteristics of polyimide-containing resin composition
1.4.1. Imidization ratio The resin composition containing the fluorine-containing polyimide may increase the imidization ratio by performing heat treatment or cyclization catalyst treatment at the time of imidization or at the time of forming a cell culture substrate form described below. it can.

本発明において基材の表面を構成するポリイミドを含む樹脂組成物でのイミド化率は、２０％以上であり、好ましくは２５％以上、より好ましくは３０％以上、さらに好ましくは３５％以上、特に好ましくは４０％以上であり、好ましくは１００％以下、より好ましくは９９．５％以下、さらに好ましくは９９％以下である。イミド化率をこの範囲とすることにより、樹脂組成物の柔軟性と疎水性が、細胞の三次元培養が可能となる範囲に調整され好適である。また、得られた膜をオートクレーブ等による滅菌処理等により再加熱した場合もクラックや寸法変化を起こすことがなく好ましい。なお、イミド化率とは、ポリアミド酸をイミド化して得られるポリイミドにおいて、ポリアミド酸のアミド結合から脱水縮合してイミド基へと変換された割合である。芳香族基を有するポリイミドのイミド化率は実施例に記載の方法で測定することができる。また脂肪族基を有するポリイミドのイミド化率は、実施例に記載のＩＲ測定を用いたイミド化測定法における、「ベンゼン環骨格振動に由来する１５００ｃｍ^−１付近の吸光度」の代わりに、Ｃ−Ｈ変角に由来する１４６０ｃｍ^−１付近の吸光度」を基準ピークとすることで、同様にＩＲ測定を用いたイミド化測定法により測定可能である。ここで、上述したイミド化の条件でポリアミド酸をポリイミドに変換することにより、イミド化率を上記範囲に調節することができる。また、以下の基準を満たすことによって上記範囲のイミド化率を実現することが可能である。基準：加熱処理によりイミド化率を高める場合には、好ましくは温度５０〜４００℃、より好ましくは１００〜３８０℃、好ましくは時間０．１〜１０時間、より好ましくは０．２〜５時間の条件下で処理する。 In the present invention, the imidization ratio of the resin composition containing the polyimide constituting the surface of the substrate is 20% or more, preferably 25% or more, more preferably 30% or more, further preferably 35% or more, particularly It is preferably 40% or more, preferably 100% or less, more preferably 99.5% or less, still more preferably 99% or less. By setting the imidization ratio within this range, the flexibility and hydrophobicity of the resin composition are preferably adjusted to a range that enables three-dimensional culture of cells. Also, when the obtained membrane is reheated by sterilization treatment such as an autoclave, cracks and dimensional change do not occur, which is preferable. The imidization ratio is a ratio of a polyimide obtained by imidizing a polyamic acid and converted into an imide group by dehydration condensation from an amide bond of the polyamic acid. The imidization ratio of the polyimide having an aromatic group can be measured by the method described in Examples. Further, the imidization ratio of the polyimide having an aliphatic group is C-instead of "absorbance near 1500 cm ^-1 derived from benzene ring skeleton vibration" in the imidization measurement method using IR measurement described in Examples. It is possible to measure by the imidization measurement method using IR measurement in the same manner by using the “absorbance around 1460 cm ⁻¹ derived from the H bending angle” as a reference peak. Here, the imidization ratio can be adjusted within the above range by converting the polyamic acid into polyimide under the above-mentioned imidization conditions. Further, it is possible to realize the imidization ratio within the above range by satisfying the following criteria. Standard: When increasing the imidization rate by heat treatment, the temperature is preferably 50 to 400 ° C., more preferably 100 to 380 ° C., preferably 0.1 to 10 hours, more preferably 0.2 to 5 hours. Treat under conditions.

１．４．２．水接触角
本発明の細胞培養用基材においてポリイミドを含む樹脂組成物（フィルム状、膜状、板状等の形状に加工された状態）により構成される表面の水接触角は、好ましくは７０°以上、より好ましくは７３°以上、更に好ましくは７５°以上であり、好ましくは１１５°以下、より好ましくは１１２°以下、更に好ましくは１１０°以下である。水接触角がこの範囲内であるとき、細胞が基材表面に適度な強度で付着し易く、該表面を足場として細胞が三次元的な組織を形成することが可能となる。なお、接触角は自動接触角計（協和界面科学製：ＤＭ−５００）を用いて温度２５℃において水による接触角測定を行うことにより算出できる。 1.4.2. Water Contact Angle The water contact angle of the surface of the cell culture substrate of the present invention formed by the resin composition containing polyimide (in the state of being processed into a film shape, a film shape, a plate shape, etc.) is preferably 70. Or more, more preferably 73 ° or more, further preferably 75 ° or more, preferably 115 ° or less, more preferably 112 ° or less, still more preferably 110 ° or less. When the water contact angle is within this range, the cells easily attach to the surface of the substrate with appropriate strength, and the cells can form a three-dimensional tissue by using the surface as a scaffold. The contact angle can be calculated by measuring the contact angle with water at a temperature of 25 ° C. using an automatic contact angle meter (DM-500 manufactured by Kyowa Interface Science).

１．４．３．引張弾性率
前記ポリイミドを含む樹脂組成物はまた、柔軟性に優れるものであることが好ましい。柔軟性は、引張弾性率によって評価することができる。例えば、引張弾性率が２ＧＰａ以下とすることができる。このように前記樹脂組成物が引張弾性率が２ＧＰａ以下である形態もまた、本発明の好適な形態の１つである。引張弾性率がこの範囲である柔軟性を有する樹脂組成物により構成される表面上において細胞は三次元組織を形成し易い。前記樹脂組成物の引張弾性率は、より好ましくは１．５ＧＰａ以下、更に好ましくは１．２ＧＰａ以下である。引張弾性率の下限は特に限定されないが、好ましくは０．３ＧＰa以上、より好ましくは０．５ＧＰa以上である。引張弾性率（ＧＰａ）は、実施例に示す、動的粘弾性測定方法により測定することができる。 1.4.3. Tensile Elastic Modulus The resin composition containing the polyimide is also preferably excellent in flexibility. Flexibility can be evaluated by the tensile modulus. For example, the tensile elastic modulus can be 2 GPa or less. The form in which the resin composition has a tensile elastic modulus of 2 GPa or less is also one of the preferred forms of the present invention. The cells easily form a three-dimensional tissue on the surface composed of the flexible resin composition having a tensile elastic modulus in this range. The tensile modulus of elasticity of the resin composition is more preferably 1.5 GPa or less, and further preferably 1.2 GPa or less. The lower limit of the tensile elastic modulus is not particularly limited, but it is preferably 0.3 GPa or more, more preferably 0.5 GPa or more. The tensile modulus (GPa) can be measured by the dynamic viscoelasticity measuring method shown in the examples.

１．４．４．ポリイミドの分子量
前記樹脂組成物中での前記ポリイミドの分子量は、重量平均分子量として、１０００〜１００万であることが好ましく、５０００〜７０万であることがより好ましい。分子量がこの範囲内であると重合時にゲル化する恐れが無く、低粘度で重合やフィルム化が容易になり、適当な耐熱性や膜強度の付与と維持が期待できる。重量平均分子量は更に好ましくは１万〜５０万である。 1.4.4. Molecular Weight of Polyimide The molecular weight of the polyimide in the resin composition is preferably 1,000 to 1,000,000, and more preferably 5,000 to 700,000 in terms of weight average molecular weight. When the molecular weight is within this range, there is no fear of gelation during polymerization, low viscosity facilitates polymerization and film formation, and it is expected that appropriate heat resistance and film strength are imparted and maintained. The weight average molecular weight is more preferably 10,000 to 500,000.

１．４．５．イミド化触媒の含有量
前記樹脂組成物中の第三級アミン化合物であるイミド化触媒の量は、前記樹脂組成物中のポリイミド及び残存する前記ポリアミド酸の合計量に対して好ましくは０．０３０質量％以下であり、より好ましくは０．０１５質量％以下であり、更に好ましくは０．００５質量％以下であり、最も好ましくは前記イミド化触媒が全く存在しない。 1.4.5. Content of Imidization Catalyst The amount of the imidization catalyst which is the tertiary amine compound in the resin composition is preferably 0.030 with respect to the total amount of the polyimide and the remaining polyamic acid in the resin composition. The content is not more than 0.01% by mass, more preferably not more than 0.015% by mass, still more preferably not more than 0.005% by mass, and most preferably, the imidization catalyst is not present at all.

本発明者らは驚くべきことに、前記樹脂組成物中の第三級アミン化合物が前記樹脂組成物中のポリイミド及び残存する前記ポリアミド酸の合計量に対して０．０３０質量％を超える場合、該樹脂組成物により構成される平坦な面上では細胞の三次元培養ができず、０．０３０質量％以下の場合に三次元培養が可能になることを見出した。 The present inventors have surprisingly found that when the tertiary amine compound in the resin composition exceeds 0.030 mass% with respect to the total amount of the polyimide in the resin composition and the remaining polyamic acid, It has been found that cells cannot be three-dimensionally cultivated on a flat surface composed of the resin composition, and that when the amount is 0.030 mass% or less, the three-dimensional culturing becomes possible.

ここで「第三級アミン化合物」とは、イミド化触媒として用いられる第三級アミン化合物を指し、具体例はイミド化触媒として例示した通りである。上述の通り、本発明においては、イミド化合物、アミド化合物のようにカルボニル基（Ｃ＝Ｏ）の炭素原子が窒素原子に結合した構造は第三級アミン化合物の範囲から除外する。すなわち、本発明での第三級アミン化合物とは、アンモニア分子の３つの水素原子がいずれも炭化水素基により置換された構造（ただし、イミド化合物、アミド化合物のようにカルボニル基の炭素原子が窒素原子に結合した構造を除く）を有する第三級アミン化合物を指す。 Here, the “tertiary amine compound” refers to a tertiary amine compound used as an imidization catalyst, and specific examples are as exemplified as the imidization catalyst. As described above, in the present invention, structures in which a carbon atom of a carbonyl group (C═O) is bonded to a nitrogen atom, such as an imide compound and an amide compound, are excluded from the scope of the tertiary amine compound. That is, the tertiary amine compound in the present invention has a structure in which all three hydrogen atoms of the ammonia molecule are replaced by a hydrocarbon group (however, the carbon atom of the carbonyl group is a nitrogen atom like an imide compound and an amide compound). (Excluding structures bonded to atoms).

前記樹脂組成物中の第三級アミン化合物の量は、プロトン核磁気共鳴（^１Ｈ−ＮＭＲ）スペクトル、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、ガスクロマトグラフィー−質量分析（ＧＣ−ＭＳ）（ＳＩＭ法）等の任意の測定手段により定量することができ、適当な標準試料の分析結果を参照することで、前記樹脂組成物中のポリイミド及び残存する前記ポリアミド酸の合計量に対する量を求めることができる。ポリイミド及び残存する前記ポリアミド酸の合計量は、ポリイミドを製造するための酸二無水物及び／又はジアミンが有する基のうち重合後も保持される基の化学構造に由来する特性値に基づき評価することができる。 The amount of the tertiary amine compound in the resin composition is determined by a proton nuclear magnetic resonance ( ¹ H-NMR) spectrum, gas chromatography (GC), gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) (SIM method), etc. The amount of the polyimide and the remaining polyamic acid in the resin composition with respect to the total amount can be determined by referring to the analysis results of an appropriate standard sample. The total amount of the polyimide and the remaining polyamic acid is evaluated based on the characteristic value derived from the chemical structure of the group that is retained even after the polymerization among the groups of the acid dianhydride and / or the diamine for producing the polyimide. be able to.

２．細胞培養用基材
本発明の細胞培養用基材は、表面の少なくとも一部が前記含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物により構成されていることを特徴とする。 2. Cell Culture Substrate The cell culture substrate of the present invention is characterized in that at least a part of its surface is composed of a resin composition containing the above-mentioned fluorine-containing polyimide.

細胞培養用基材とは、細胞培養に用いられる、細胞の増殖の足場となる表面を有する部材である限り形態は特に限定されない。例えばフィルム状又は板状の形態である細胞培養用基材は、その一方の表面に細胞を含む培地を載せて細胞培養を実施することや、該基材をシングル若しくはマルチウェルプレートなどの培養用のプレート、培養シャーレ、培養ディッシュ、フラスコ、培養バック等の各種細胞培養用容器に収容して固定し、該容器に細胞を含む培地を加えて細胞培養を実施することができる。また、細胞培養用基材は、それ自体が、シングル若しくはマルチウェルプレートなどの培養用のプレート、培養シャーレ、培養ディッシュ、フラスコ、培養バック等の各種細胞培養用容器の形態であってもよい。培養バックは浮遊細胞や幹細胞等を浮遊状態で培養する等の際に用いることが可能である。 The form of the cell culture substrate is not particularly limited as long as it is a member used for cell culture and having a surface that serves as a scaffold for cell growth. For example, a substrate for cell culture in the form of a film or a plate is used for cell culture by placing a medium containing cells on one surface of the substrate, or for culturing the substrate such as a single or multi-well plate. The cell culture can be carried out by accommodating and fixing it in various cell culture vessels such as plates, culture petri dishes, culture dishes, flasks, culture bags, etc., and adding a medium containing cells to the vessels. Further, the cell culture substrate may itself be in the form of various cell culture vessels such as culture plates such as single or multi-well plates, culture petri dishes, culture dishes, flasks, and culture bags. The culture bag can be used for culturing floating cells, stem cells, etc. in a floating state.

前記樹脂組成物により構成される表面は、細胞培養用基材の表面のうち、細胞培養時に細胞を含む培地と接触する表面の一部又は全部であり、好ましくは、細胞培養用基材の表面のうち、細胞培養時に細胞を含む培地の鉛直方向下方に位置する表面の一部又は全部である。細胞培養用基材の表面の全体が前記樹脂組成物から構成されていてもよい。細胞培養用基材の、前記樹脂組成物により表面が構成されている部分では、培養時に細胞が足場として利用する最表面が前記樹脂組成物により構成されていればよく、該部分の厚さ方向に沿って前記最表面から離れた位置の材料は特に限定されない。すなわち本発明の細胞培養用基材は、少なくとも、細胞培養時に細胞を含む培地と接触する表面の一部又は全部に、前記樹脂組成物により構成される層を備えていればよい。例えば、図１に示す実施形態１のように、細胞培養用基材の、前記樹脂組成物を表面Ｓに含む部分は、表面だけでなく、厚さ方向の全体にわたって前記樹脂組成物により構成されていてもよく、或いは、図２に示す実施形態２のように、培養時に細胞にとっての足場となる最表面Ｓ及びその近傍に前記樹脂組成物のフィルム１が形成され、フィルム１の前記最表面Ｓと反対の側には任意の材料からなる支持体２が配置されていてもよい。 The surface constituted by the resin composition is, of the surface of the cell culture substrate, a part or all of the surface that comes into contact with the medium containing cells during cell culture, and preferably the surface of the cell culture substrate. Among them, it is a part or all of the surface located vertically below the medium containing cells during cell culture. The entire surface of the cell culture substrate may be composed of the resin composition. In the portion of the cell culture substrate whose surface is constituted by the resin composition, the outermost surface used by the cells as a scaffold during culturing may be constituted by the resin composition, and the thickness direction of the portion There is no particular limitation on the material located along the distance from the outermost surface. That is, the cell culture substrate of the present invention is required to have at least a part of the surface that comes into contact with a medium containing cells during cell culture, or a layer formed of the resin composition. For example, as in Embodiment 1 shown in FIG. 1, the portion of the cell culture substrate containing the resin composition on the surface S is formed not only on the surface but also in the entire thickness direction by the resin composition. Alternatively, as in the second embodiment shown in FIG. 2, a film 1 of the resin composition is formed on the outermost surface S which becomes a scaffold for cells during culture and in the vicinity thereof, and the outermost surface of the film 1 is formed. A support 2 made of any material may be arranged on the side opposite to S.

本発明の細胞培養用基材の好ましい実施形態は、前記樹脂組成物により構成されるフィルム状の細胞培養用基材（実施形態１）、又は、支持体と、該支持体に一体化され表面の少なくとも一部を覆う、前記樹脂組成物により構成されるフィルムとを備える細胞培養用基材（実施形態２）である。すなわち、図１に示すように、実施形態１に係る細胞培養用基材１０は前記樹脂組成物により構成されるフィルム１を備える。図２に示すように、実施形態２に係る細胞培養用基材１０は前記樹脂組成物により構成されるフィルム１と支持体２とを備える。どちらの実施形態においても、前記樹脂組成物により構成されるフィルムは同様の方法で形成することができる。実施形態２において支持体は、フィルム状、多孔質の支持体や、メッシュ状の支持体等を使用しても良く、板状、培養ディッシュ、シャーレ、シングル若しくはマルチプレート、フラスコ等の各種細胞培養用容器の形状等の、細胞培養用途に用いることができる任意の形状とすることができる。 A preferred embodiment of the cell culture substrate of the present invention is a film-shaped cell culture substrate (Embodiment 1) composed of the resin composition, or a support and a surface integrated with the support. A cell culture substrate (embodiment 2) including a film formed of the resin composition, which covers at least a part of the above. That is, as shown in FIG. 1, the cell culture substrate 10 according to the first embodiment includes a film 1 made of the resin composition. As shown in FIG. 2, the cell culture substrate 10 according to the second embodiment includes a film 1 made of the resin composition and a support 2. In any of the embodiments, a film composed of the resin composition can be formed by the same method. In the second embodiment, the support may be a film-shaped or porous support, a mesh-shaped support, or the like, and various cell cultures such as plate-shaped, culture dish, petri dish, single or multi-plate, and flask. It can be any shape that can be used for cell culture applications, such as the shape of a container for use.

本発明の細胞培養用基材における、含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物により構成される層（「フィルム」或いは「膜」ともいう）の厚さ（支持体の厚さを含まない）は、基材全体として適度な酸素ガス透過度となるように適宜調整することができるが、典型的には０．１μｍ以上、５ｍｍ以下とすることが好ましく、０．５μｍ以上、３ｍｍ以下とすることがより好ましく、１μｍ以上、２ｍｍ以下とすることが更に好ましく、５μｍ以上、１ｍｍ以下とすることが特に好ましい。 In the cell culture substrate of the present invention, the thickness (not including the thickness of the support) of the layer (also referred to as “film” or “membrane”) composed of the resin composition containing a fluorine-containing polyimide is The material can be appropriately adjusted to have an appropriate oxygen gas permeability, but typically, it is preferably 0.1 μm or more and 5 mm or less, more preferably 0.5 μm or more and 3 mm or less. The thickness is preferably 1 μm or more and 2 mm or less, more preferably 5 μm or more and 1 mm or less.

このように本発明の細胞培養用基材は、表面の少なくとも一部にポリイミドを含む樹脂組成物により構成されたフィルムを備えた細胞培養用基材であることが好ましい。該フィルムを形成する方法としては、特に限定されるものではないが、例えば、溶液流延法、溶液キャスト法などの溶液製膜法；カレンダー法；プレス成形法などが挙げられる。これらの方法のなかでは、生産性に優れていることから、溶液製膜法が好ましい。 As described above, the cell culture substrate of the present invention is preferably a cell culture substrate provided with a film made of a resin composition containing polyimide on at least a part of the surface. The method for forming the film is not particularly limited, and examples thereof include a solution casting method such as a solution casting method and a solution casting method; a calender method; and a press molding method. Among these methods, the solution film forming method is preferable because it has excellent productivity.

フィルム形成のための溶液としては、前記含フッ素ポリアミド酸の溶液や、前記含フッ素ポリイミドの溶液が利用できるが、前記含フッ素ポリアミド酸の溶液が特に好ましい。前記ポリアミド酸の溶液を用いたフィルム形成では、熱イミド化とフィルム形成を同時に行うことができる。 As the solution for forming the film, the solution of the fluorinated polyamic acid or the solution of the fluorinated polyimide can be used, but the solution of the fluorinated polyamic acid is particularly preferable. In the film formation using the solution of the polyamic acid, thermal imidization and film formation can be performed simultaneously.

すなわち本発明の細胞培養用容器は、
前記含フッ素ポリアミド酸が溶媒中に溶解された溶液の膜を形成する工程と、
前記膜を加熱処理することにより前記膜中のポリアミド酸をイミド化して前記フィルムを形成する工程と
を含む方法により製造することができる。 That is, the container for cell culture of the present invention,
A step of forming a film of a solution in which the fluorinated polyamic acid is dissolved in a solvent,
It can be manufactured by a method including a step of imidizing the polyamic acid in the film by heat-treating the film to form the film.

本発明では、前記含フッ素ポリアミド酸が溶媒中に溶解した溶液を「ポリアミド酸溶液」と呼ぶ。 In the present invention, a solution prepared by dissolving the fluorinated polyamic acid in a solvent is referred to as a “polyamic acid solution”.

ポリアミド酸溶液においてポリアミド酸を溶解するための溶媒としては、熱イミド化及びアミド化反応に関して上記したのと同様の溶媒が好適である。例えば、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、スルホラン、メチルイソブチルケトン、アセトニトリル、ベンゾニトリル、ニトロベンゼン、ニトロメタン、ジメチルスルフォキシド、アセトン、メチルエチルケトン、イソブチルケトン、メタノール等の極性溶媒；トルエンやキシレン等の非極性溶媒等が挙げられる。中でも、極性溶媒を用いることが好ましい。これらの有機溶媒は、単独で使用されてもよいし、２種以上の混合物として使用されてもよい。 As the solvent for dissolving the polyamic acid in the polyamic acid solution, the same solvent as described above for the thermal imidization and amidation reaction is suitable. For example, N-methylpyrrolidone, N-methyl-2-pyrrolidinone, N, N-dimethylacetamide, N, N-dimethylformamide, tetrahydrofuran, dimethylsulfoxide, sulfolane, methyl isobutyl ketone, acetonitrile, benzonitrile, nitrobenzene, nitromethane, dimethyl. Examples thereof include polar solvents such as sulfoxide, acetone, methyl ethyl ketone, isobutyl ketone, and methanol; nonpolar solvents such as toluene and xylene. Above all, it is preferable to use a polar solvent. These organic solvents may be used alone or as a mixture of two or more kinds.

ポリアミド酸溶液中のポリアミド酸の濃度は、得られる樹脂組成物の重合反応性と重合後の粘度、その後の製膜、焼成での取り扱いやすさから、好ましくは５重量％以上、より好ましくは１０重量％以上であり、好ましくは５０重量％以下より好ましくは４０重量％以下である。具体的な濃度は予備実験で決定すればよい。 The concentration of the polyamic acid in the polyamic acid solution is preferably 5% by weight or more, and more preferably 10% from the viewpoint of the polymerization reactivity of the obtained resin composition and the viscosity after the polymerization, and the ease of handling in the subsequent film formation and firing. It is not less than 50% by weight, preferably not more than 50% by weight, more preferably not more than 40% by weight. The specific concentration may be determined in a preliminary experiment.

ポリアミド酸溶液の膜を形成する典型的な方法としては、前記ポリアミド酸溶液を製膜用支持体の表面に、例えば、スピンコーティング法、キャスティング法、ロールコーティング法、ダイコーティング法、グラビアコーティング法、スプレイコーティング法、バーコーティング法、フレキソ印刷法、ディップコーティング法等の通常の方法で塗布して塗膜を形成する方法が挙げられる。前記ポリアミド酸溶液を製膜用支持体に塗布する際の塗布量は、乾燥膜厚が０．１μｍ以上、１ｍｍ以下となるようにすることが好ましく、０．５μｍ以上、５００μｍ以下となるように調整することがより好ましい。その後、溶媒を除去し、焼成することで熱イミド化された含フッ素ポリイミドを含むフィルムを得ることができる。 As a typical method of forming a film of a polyamic acid solution, the polyamic acid solution on the surface of a film-forming support, for example, spin coating method, casting method, roll coating method, die coating method, gravure coating method, Examples thereof include a spray coating method, a bar coating method, a flexographic printing method, and a dip coating method, which are applied to form a coating film. The coating amount of the polyamic acid solution applied to the film-forming support is preferably such that the dry film thickness is 0.1 μm or more and 1 mm or less, and is 0.5 μm or more and 500 μm or less. It is more preferable to adjust. After that, the solvent is removed and the film is baked to obtain a film containing the thermally imidized fluorine-containing polyimide.

ポリアミド酸溶液の膜を加熱処理する際の条件は、ポリアミド酸がイミド化することができる条件であれば特に限定されないが、空気中で、好ましくは、窒素、ヘリウム、アルゴン等の不活性ガスの雰囲気下で、或いは真空中で、好ましくは温度５０〜４００℃、より好ましくは１００〜３８０℃、好ましくは時間０．１〜１０時間、より好ましくは０．２〜５時間の条件である。加熱処理は、複数回に分けて段階的に行ってもよいし、連続的に行ってもよい。 The conditions for the heat treatment of the film of the polyamic acid solution are not particularly limited as long as the polyamic acid can be imidized, but in air, preferably, nitrogen, helium, an inert gas such as argon. In an atmosphere or in vacuum, the temperature is preferably 50 to 400 ° C., more preferably 100 to 380 ° C., preferably 0.1 to 10 hours, more preferably 0.2 to 5 hours. The heat treatment may be performed stepwise by dividing it into a plurality of times or continuously.

製膜用支持体を構成する材料としては、例えば、石英；ガラス、ホウ珪酸ガラス、ソーダガラス等の無機ガラス；カーボン；金、銀、銅、シリコン、ニッケル、チタン、アルミニウム、タングステン等の金属；ポリエチレン、ポリプロピレン等のポリオレフィン；ポリブチレンテレフタレート（ＰＢＴ）、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）等のポリエステル；環状オレフィン開環重合／水素添加体（ＣＯＰ）、環状オレフィン共重合体（ＣＯＣ）等の環状オレフィン系樹脂；ポリメタクリル酸メチル（ＰＭＭＡ）等のアクリル系樹脂；エポキシ樹脂；ＡＳ樹脂（アクリロニトリル−スチレン共重合体）、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン、ポリスチレン（ＰＳＴ）、ポリスチレン樹脂、ポリ酢酸ビニル、ＡＢＳ樹脂、ポリカーボネート樹脂、ビニルエーテル、ポリアセタール（ＰＯＭ）、ポリアミド、ポリフェニレンエーテル（ＰＰＥ）、ポリアリールエーテル、ポリフェニレンスルファイド（ＰＰＳ）、ポリスルホン（ＰＳ）、ポリエーテルサルフォン（ＰＥＳ）、ポリエーテルエーテルケトン（ＰＥＥＫ）、ポリアリールエーテルケトン（ＰＥＫ）、ポリイミド（ＰＩ）、ポリアミド酸（ＰＡＡ）、ポリアミドイミドアクリル樹脂、フェノール樹脂、ポリエーテルケトン樹脂、ポリエーテルニトリル（ＰＥＮ）樹脂等の樹脂；上記金属、又はその酸化物若しくは混合酸化物等を表面に有するガラス、金属、樹脂；木材等が挙げられる。前記混合酸化物としては、例えば、ＩＴＯ（酸化インジウムスズ）等の透明導電性酸化物、ＳｉＯ_２等が挙げられる。混合酸化物等を表面に有する金属としては、ＳｉＯ_２／Ｓｉ基材等が挙げられる。製膜用支持体は、それ自体が実施形態２における「支持体」であることができ、この場合は、フィルムと該支持体との組み合わせによって本発明の細胞培養用基材が形成される。この実施形態２において、該支持体は、板状、フィルム状等の任意の形態であることができ、細胞培養用容器の形態を有していてもよい。また、製膜用支持体上で形成されたフィルムは、フィルム形成後に剥離され、フィルム単体で前記実施形態１の細胞培養用基材として用いられてもよい。或いは、製膜用支持体から剥離されたフィルムを他の支持体の表面に貼付して一体化し、フィルムと支持体とを備える前記実施形態２の細胞培養用基材としてもよい。フィルムと支持体とを一体化する手段としては接着剤等の任意の手段を採用することができる。この場合の支持体の材料及び形状は、実施形態２において支持体として製膜用支持体を用いる場合の製膜用支持体の材料及び形状と同様である。 Examples of the material forming the film-forming support include quartz; inorganic glass such as glass, borosilicate glass and soda glass; carbon; metals such as gold, silver, copper, silicon, nickel, titanium, aluminum and tungsten; Polyolefins such as polyethylene and polypropylene; polyesters such as polybutylene terephthalate (PBT) and polyethylene terephthalate (PET); cyclic olefin ring-opening polymerization / hydrogenates (COP), cyclic olefin resins such as cyclic olefin copolymers (COC) Acrylic resin such as polymethylmethacrylate (PMMA); epoxy resin; AS resin (acrylonitrile-styrene copolymer), polyvinyl chloride, polyvinylidene chloride, polystyrene (PST), polystyrene resin, polyvinyl acetate, ABS resin , Polycarbonate Resin, vinyl ether, polyacetal (POM), polyamide, polyphenylene ether (PPE), polyaryl ether, polyphenylene sulfide (PPS), polysulfone (PS), polyether sulfone (PES), polyether ether ketone (PEEK), Resins such as polyaryletherketone (PEK), polyimide (PI), polyamic acid (PAA), polyamideimide acrylic resin, phenol resin, polyetherketone resin, polyethernitrile (PEN) resin; the above metals or oxides thereof Alternatively, examples thereof include glass, metal, resin and wood having a mixed oxide on the surface. Examples of the mixed oxide include transparent conductive oxides such as ITO (indium tin oxide) and SiO ₂ . Examples of the metal having a mixed oxide or the like on its surface include a SiO ₂ / Si base material and the like. The film-forming support itself may be the “support” in Embodiment 2. In this case, the cell culture substrate of the present invention is formed by the combination of the film and the support. In the second embodiment, the support may have any shape such as a plate shape and a film shape, and may have a shape of a cell culture container. The film formed on the film-forming support may be peeled off after the film is formed, and the film alone may be used as the cell culture substrate of the first embodiment. Alternatively, the film separated from the film-forming support may be attached to the surface of another support to be integrated, and the cell culture substrate of the second embodiment including the film and the support may be used. As a means for integrating the film and the support, any means such as an adhesive can be adopted. The material and shape of the support in this case are the same as the material and shape of the support for film formation when the support for film formation is used as the support in the second embodiment.

さらに、前記組成物のフィルムは、延伸されていてもよい。該フィルムの延伸は、一軸延伸であってもよく、二軸延伸であってもよい。一軸延伸は、縦延伸（フィルムの巻取り方向の延伸）であってもよく、横延伸（フィルムの幅方向の延伸）であってもよい。縦延伸の場合、フィルムの幅方向の変化を自由とする自由端一軸延伸であってもよく、フィルムの幅方向の変化を固定とする固定端一軸延伸であってもよい。二軸延伸は、縦延伸後に横延伸を行なう逐次二軸延伸であってもよく、縦横延伸を同時に行なう同時二軸延伸であってもよい。また、フィルムの厚さ方向の延伸又はフィルムのロールに対して斜め方向の延伸を行なってもよい。延伸方法、延伸温度及び延伸倍率は、目的とする前記含フッ素ポリイミドフィルムの光学特性、機械的強度などに応じて適宜選択することが好ましい。 Further, the film of the composition may be stretched. The stretching of the film may be uniaxial stretching or biaxial stretching. The uniaxial stretching may be longitudinal stretching (stretching in the film winding direction) or horizontal stretching (stretching in the width direction of the film). In the case of longitudinal stretching, it may be free-end uniaxial stretching in which the change in the width direction of the film is free, or fixed-end uniaxial stretching in which the change in the width direction of the film is fixed. The biaxial stretching may be either sequential biaxial stretching in which transverse stretching is performed after longitudinal stretching, or simultaneous biaxial stretching in which longitudinal and transverse stretching are performed simultaneously. Further, the film may be stretched in the thickness direction or may be stretched in an oblique direction with respect to the roll of the film. The stretching method, the stretching temperature and the stretching ratio are preferably selected as appropriate depending on the desired optical properties, mechanical strength and the like of the fluorine-containing polyimide film.

含フッ素ポリイミド含有樹脂組成物から構成されるフィルムの全体厚み（支持体を含まない）は、０．１μｍ以上、１ｍｍ以下とすることが好ましく、０．５μｍ以上、５００μｍ以下とすることがより好ましく、１μｍ以上、３００μｍ以下とすることがさらに好ましい。 The total thickness (not including the support) of the film composed of the fluorine-containing polyimide-containing resin composition is preferably 0.1 μm or more and 1 mm or less, more preferably 0.5 μm or more and 500 μm or less. More preferably, it is 1 μm or more and 300 μm or less.

本発明の細胞培養用基材における、前記含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物により構成される表面は、平滑な表面であることが好ましい。平滑な表面としては、例えば表面粗さ（中心線平均粗さ：Ｒａ）が０．５μｍ以下である表面が好ましい。好ましくは、０．１μｍ以下、さらに好ましくは０．０１μｍ以下であることが好ましい。本発明において中心線平均粗さ（Ｒａ）はレーザー法で測定した値であり、例えば菱化システム製表面粗さ計Ｒ５３００ＧＬ−Ｌ−Ａ１００−ＡＣを用いて測定することができる。 In the cell culture substrate of the present invention, the surface composed of the resin composition containing the fluorine-containing polyimide is preferably a smooth surface. As the smooth surface, for example, a surface having a surface roughness (center line average roughness: Ra) of 0.5 μm or less is preferable. It is preferably 0.1 μm or less, and more preferably 0.01 μm or less. In the present invention, the center line average roughness (Ra) is a value measured by a laser method, and can be measured using, for example, a surface roughness meter R5300GL-L-A100-AC manufactured by Ryoka Systems.

本発明によれば、作成が容易な平滑な表面上で細胞を三次元的に培養することが可能となる。ただし、本発明の細胞培養用基材でのポリイミドを含む樹脂組成物により構成される表面は目的に応じて適切な粗さとなるよう加工されていてもよく、例えば、非特許文献１に記載されているようなラビング処理により微細な凹凸を形成することも可能である。また、本発明の細胞培養用基材に直径５０〜５００μｍ、深さ５０〜３００μｍの円柱又は円錐の穴（キャビティ）を付与することで大きさが均一なスフェロイド、三次元細胞集合体等を形成することが可能となる。さらにキャビティ構造を付与することで、培地除去時に培地ととともにスフェロイド、三次元細胞集合体等が基材から除かれることも回避することができる。 According to the present invention, cells can be three-dimensionally cultured on a smooth surface that can be easily produced. However, the surface of the cell culture substrate of the present invention formed by the resin composition containing the polyimide may be processed to have an appropriate roughness according to the purpose, for example, described in Non-Patent Document 1. It is also possible to form fine irregularities by such a rubbing treatment. Further, by forming a columnar or conical hole (cavity) having a diameter of 50 to 500 μm and a depth of 50 to 300 μm in the cell culture substrate of the present invention, a spheroid having a uniform size, a three-dimensional cell aggregate or the like is formed. It becomes possible to do. Further, by providing a cavity structure, it is possible to avoid removing spheroids, three-dimensional cell aggregates and the like from the substrate together with the medium when removing the medium.

本発明の細胞培養用基材は、これまでに述べた効果に加えて、好ましくは更に以下の効果を有する。本発明の基材は好ましくは高い耐熱性を有するため高圧蒸気滅菌が可能である。高圧蒸気滅菌を行うことで、γ線滅菌時にみられる基材の品質の変化がなく、またＥＯＧ滅菌時の残存ガスの除去等が不要となり、簡便な滅菌処理により、細胞培養時の雑菌混入のリスク及び培養細胞の増殖を抑制する成分が混入するリスクが低減できる。なお、一般的なポリスチレン製細胞培養用基材は耐熱性が低いため高圧蒸気滅菌を行うことはできない。上記滅菌方法以外にも、本発明の細胞培養用基材は一般的な滅菌方法での滅菌が可能である上述の高圧蒸気滅菌の他、γ線滅菌、電子線滅菌、エタノールなどのアルコール滅菌、ＥＯＧ滅菌などの方法により滅菌することができるが、これらは一例であり他の滅菌方法を採用しても良い。また、本発明の基材は好ましくは透明で、一般的に免疫染色等で使用されている蛍光色素の励起波長、蛍光波長付近に自家蛍光がなく、蛍光色素を用いた免疫染色にも利用することができる。本発明の細胞培養用基材が前記樹脂組成物により構成されるフィルム状の細胞培養用基材である場合、一般的に本段落で述べた効果を有する。 The cell culture substrate of the present invention preferably has the following effects in addition to the effects described above. Since the base material of the present invention preferably has high heat resistance, it can be autoclaved. By performing high-pressure steam sterilization, there is no change in the quality of the base material seen during γ-ray sterilization, there is no need to remove residual gas during EOG sterilization, and a simple sterilization process prevents contamination of bacteria during cell culture. It is possible to reduce the risk and the risk that a component that suppresses the growth of cultured cells is mixed. A general polystyrene cell culture substrate has low heat resistance and cannot be subjected to high-pressure steam sterilization. In addition to the above sterilization method, the cell culture substrate of the present invention can be sterilized by a general sterilization method in addition to the above-mentioned high-pressure steam sterilization, γ-ray sterilization, electron beam sterilization, alcohol sterilization such as ethanol, Sterilization can be performed by a method such as EOG sterilization, but these are examples and other sterilization methods may be adopted. Further, the substrate of the present invention is preferably transparent, and it is also used for immunostaining using a fluorescent dye, since there is no autofluorescence around the excitation wavelength and fluorescence wavelength of the fluorescent dye generally used in immunostaining and the like. be able to. When the cell culture substrate of the present invention is a film-shaped cell culture substrate composed of the resin composition, it generally has the effects described in this paragraph.

３．細胞培養用容器
本発明はまた、前記細胞培養用基材を少なくとも一部に備える細胞培養用容器を提供する。本発明の細胞培養用容器は、図９−１及び９−２に示すような、細胞培養用基材を容器内部又は底部に設置したり、一方の表面が、細胞及び培地の収容部の底面を形成し、他方の表面が容器外に露出するように配置された細胞培養用基材、を少なくとも一部に備えるものであってもよい。 3. Cell Culture Vessel The present invention also provides a cell culture vessel provided with the cell culture substrate at least in part. In the cell culture container of the present invention, as shown in FIGS. 9-1 and 9-2, a cell culture substrate is placed inside or on the bottom of the container, or one surface of the container is the bottom surface of the cell and culture medium container. And a cell culture substrate arranged such that the other surface is exposed to the outside of the container.

本発明の細胞培養用容器では、含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物により構成される表面が培養される細胞の足場として機能する為、細胞の生存率が高く、細胞の機能を高く維持しながらの細胞培養、特に三次元的な細胞培養が可能となる。 In the cell culture container of the present invention, since the surface composed of the resin composition containing the fluorine-containing polyimide functions as a scaffold for the cells to be cultured, the cell viability is high, while maintaining the high function of the cells. It enables cell culture, especially three-dimensional cell culture.

本発明の細胞培養用容器は、本発明の細胞培養用基材を備えていればよく、全体としてどのような形状であってもよい。例えば、シングル若しくはマルチウェルプレートなどの培養用のプレート、シャーレ、ディッシュ、フラスコ、バッグ等の各種容器の形状であることができる。本発明の細胞培養用容器はまた、大量培養装置や潅流培養装置などの培養装置における細胞培養用容器の形態であってもよい。 The cell culture container of the present invention only needs to have the cell culture substrate of the present invention, and may have any shape as a whole. For example, it may be in the shape of various plates such as a plate for culture such as a single or multi-well plate, a petri dish, a dish, a flask and a bag. The cell culture container of the present invention may also be in the form of a cell culture container in a culture device such as a mass culture device or a perfusion culture device.

本発明の細胞培養用容器は、本発明の細胞培養用基材と他の部材とが組み合わされて構成されていてもよいし、本発明の細胞培養用基材と他の部材とが一体化されて構成されていてもよいし、本発明の細胞培養用基材のみにより構成されていてもよい。本発明の細胞培養用基材がフィルム状等の柔軟な基材である場合は、剛性を有する適当な支持部材（フレーム等）を用いて張設した状態で細胞培養用容器の底を形成することも可能である。 The cell culture container of the present invention may be configured by combining the cell culture substrate of the present invention and other members, or the cell culture substrate of the present invention and other members are integrated. The cell culture medium may be constituted by the above, or may be constituted only by the cell culture substrate of the present invention. When the cell culture substrate of the present invention is a flexible substrate such as a film, the bottom of the cell culture container is formed in a stretched state using a suitable supporting member (frame or the like) having rigidity. It is also possible.

図９−１には、本発明の細胞培養用容器の一実施形態である細胞培養用容器１００を示す。図９−１に示す細胞培養用容器１００は、容器底部及びその縁から起立した容器側壁を形成する壁部材２０を備え、容器底部に細胞培養用基材１０が配置されて、収容部１０１が形成される。細胞培養用基材１０の構成は上記の通りである。壁部材２０を、開口した側から平面視したときの内郭形状及び外郭形状はそれぞれ例えば円、多角形（四角形、三角形等）などの任意の形状であることができる。 FIG. 9-1 shows a cell culture container 100 which is an embodiment of the cell culture container of the present invention. The cell culture container 100 shown in FIG. 9-1 includes a wall member 20 that forms a container bottom and a container side wall standing upright from the edge thereof, and the cell culture substrate 10 is arranged on the container bottom, and a container 101 is provided. It is formed. The structure of the cell culture substrate 10 is as described above. The inner contour shape and the outer contour shape of the wall member 20 when viewed in plan from the opening side can be arbitrary shapes such as a circle and a polygon (quadrangle, triangle, etc.), respectively.

図９−２（ａ）には、本発明の細胞培養用容器の一実施形態である細胞培養用容器１００を示す。図９−２（ａ）に示す細胞培養用容器１００は、容器底部を形成する細胞培養用基材１０と、細胞培養用基材１０の縁から起立した容器側壁を形成する壁部材２０とを備え、細胞培養用基材１０と壁部材２０とにより収容部１０１が形成される。細胞培養用基材１０の構成は上記の通りであり、含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物により構成される表面Ｓは容器内（収容部１０１）に臨むように配置される。壁部材２０を、開口した側から平面視したときの内郭形状及び外郭形状はそれぞれ例えば円、多角形（四角形、三角形等）などの任意の形状であることができる。 FIG. 9-2 (a) shows a cell culture container 100 which is an embodiment of the cell culture container of the present invention. The cell culture container 100 shown in FIG. 9-2 (a) includes a cell culture substrate 10 that forms a container bottom, and a wall member 20 that forms a container sidewall standing upright from the edge of the cell culture substrate 10. The housing portion 101 is formed by the cell culture substrate 10 and the wall member 20. The structure of the cell culture substrate 10 is as described above, and the surface S formed of the resin composition containing the fluorine-containing polyimide is arranged so as to face the inside of the container (accommodation portion 101). The inner contour shape and the outer contour shape of the wall member 20 when viewed in plan from the opening side can be arbitrary shapes such as a circle and a polygon (quadrangle, triangle, etc.), respectively.

図１０（ａ）、１０（ｂ）及び１０（ｃ）に示す細胞培養用容器１００は、本発明の細胞培養用容器の他の実施形態である、マルチウェルプレートである。図１０（ａ）、１０（ｂ）及び１０（ｃ）に示す細胞培養用容器１００は、細胞培養用基材１０と、細胞培養用基材１０の含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物により構成される表面Ｓを覆うように配置された、厚さ方向に貫通する複数（図では２４）の貫通孔が形成されたプレート状の壁部材２０とを備える。壁部材２０の各貫通孔を囲う部分と細胞培養用基材１０とにより細胞及び培地を収容する収容部１０１が複数形成される。細胞培養用基材１０の構成は上記の通りであり、含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物により構成される表面Ｓは容器内（収容部１０１）に臨むように配置される。ここで図１０（ｃ）では、含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物により構成される表面Ｓが容器内（収容部１０１）に臨み、且つ、細胞培養用基材１０の表面Ｓと反対側の面が、平坦面上に細胞培養用容器１００を置いた時に前記平坦面に接触せず、前記表面Ｓと反対側の面と前記平坦面との間に空隙４が形成されるように壁部材２０に接続されている。 The cell culture container 100 shown in FIGS. 10 (a), 10 (b) and 10 (c) is a multi-well plate which is another embodiment of the cell culture container of the present invention. The cell culture container 100 shown in FIGS. 10 (a), 10 (b) and 10 (c) is composed of a cell culture substrate 10 and a resin composition containing the fluorine-containing polyimide of the cell culture substrate 10. And a plate-shaped wall member 20 having a plurality of (24 in the drawing) through holes penetrating in the thickness direction and arranged so as to cover the surface S. A plurality of accommodating portions 101 for accommodating cells and medium are formed by the portion of the wall member 20 that surrounds each through hole and the cell culture substrate 10. The structure of the cell culture substrate 10 is as described above, and the surface S formed of the resin composition containing the fluorine-containing polyimide is arranged so as to face the inside of the container (accommodation portion 101). Here, in FIG. 10C, a surface S formed of a resin composition containing a fluorine-containing polyimide faces the inside of the container (housing portion 101) and is a surface opposite to the surface S of the cell culture substrate 10. However, when the cell culture container 100 is placed on the flat surface, the wall member 20 does not come into contact with the flat surface and a space 4 is formed between the surface opposite to the surface S and the flat surface. It is connected to the.

図１１に示す細胞培養用容器１００は、本発明の細胞培養用容器の更なる実施形態である。図１１に示す細胞培養用容器１００は、容器底部を形成する細胞培養用基材１０と、容器側壁を形成する壁部材２０とを備え、細胞培養用基材１０と壁部材２０とにより収容部１０１が形成される。ここで細胞培養用基材１０は、含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物により構成される表面Ｓが容器内（収容部１０１）に臨み、且つ、細胞培養用基材１０の表面Ｓと反対側の面が、平坦面上に細胞培養用容器１００を置いた時に前記平坦面に接触せず、前記表面Ｓと反対側の面と前記平坦面との間に空隙４が形成されるように壁部材２０に接続されている。 The cell culture container 100 shown in FIG. 11 is a further embodiment of the cell culture container of the present invention. The cell culture container 100 shown in FIG. 11 includes a cell culture substrate 10 that forms a container bottom portion and a wall member 20 that forms a container side wall. The cell culture substrate 10 and the wall member 20 form an accommodating portion. 101 is formed. Here, in the cell culture substrate 10, the surface S formed of a resin composition containing a fluorine-containing polyimide is exposed to the inside of the container (accommodation portion 101), and the surface S of the cell culture substrate 10 opposite to the surface S is formed. The wall member does not come into contact with the flat surface when the cell culture container 100 is placed on the flat surface, and a space 4 is formed between the surface opposite to the surface S and the flat surface. Connected to 20.

図９−１、図９−２（ａ）、図１０（ａ）、１０（ｂ）及び１０（ｃ）、並びに図１１に記載されている各実施形態の細胞培養用容器１００ではいずれにおいても、壁部材２０と細胞培養用基材１０とがどのような手段で接続されていてもよく、例えば感圧式の両面テープ等の接着性材料又は接着性部材を介して接続することができる。 9-1, 9-2 (a), 10 (a), 10 (b) and 10 (c), and the cell culture container 100 of each embodiment described in FIG. The wall member 20 and the cell culture substrate 10 may be connected by any means, for example, they can be connected via an adhesive material or an adhesive member such as a pressure-sensitive double-sided tape.

以上のように容器内の底面に含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物により構成される表面Ｓが配置され、細胞培養用容器を製造することができる。本発明の細胞培養用容器はこの形態には限定されず、任意の形態であることができる。 As described above, the surface S made of the resin composition containing the fluorine-containing polyimide is arranged on the bottom surface in the container, and the cell culture container can be manufactured. The cell culture container of the present invention is not limited to this form, and may have any form.

４．培養方法
本発明はまた、細胞を培養する方法であって、前記細胞培養用基材の、前記ポリイミドを含む樹脂組成物により構成される表面上で細胞を培養する工程を含む方法を提供する。 4. Cultivation method The present invention also provides a method for culturing cells, comprising a step of culturing cells on the surface of the substrate for cell culture, which is constituted by the resin composition containing the polyimide.

本発明の細胞培養用基材の、前記ポリイミドを含む樹脂組成物により構成される表面上において、三次元的な組織を形成可能な細胞を適当な時間培養することにより、三次元培養することができる。しかしながら、本発明の細胞培養方法は必ずしもこのような形態に限定されず、三次元的な組織を形成しない細胞を培養する形態や、三次元的な組織を形成可能な細胞を三次元的な組織が形成される前の段階まで培養する形態なども包含される。 The cell culture substrate of the present invention, on the surface composed of the resin composition containing the polyimide, by culturing cells capable of forming a three-dimensional tissue for a suitable time, three-dimensional culture can be performed. it can. However, the cell culture method of the present invention is not necessarily limited to such a morphology, and a morphology in which cells that do not form a three-dimensional tissue are cultivated or a cell that can form a three-dimensional tissue is a three-dimensional tissue. It also includes forms such as culturing up to the stage before the formation of.

別の実施形態において、本発明はまた、細胞を培養する方法であって、前記細胞培養用基材の含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物により構成された表面に細胞及び培地が接し、細胞を培養する工程を特徴とする方法を提供する。 In another embodiment, the present invention is also a method for culturing cells, in which cells and a medium are contacted with the surface of the cell culture substrate made of a resin composition containing a fluorinated polyimide, and the cells are cultured. A method characterized by the steps of:

具体的には図９−１に示すように、細胞培養用基材１０（図１又は図２に示す構造を有する）を容器に入れて設置し、含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物により構成された表面Ｓ（図１、２参照）に細胞３及び培地２が接した状態で細胞を培養しても良い。 Specifically, as shown in FIG. 9-1, the cell culture substrate 10 (having the structure shown in FIG. 1 or FIG. 2) is placed in a container and installed, and is composed of a resin composition containing a fluorine-containing polyimide. The cells may be cultured with the surface 3 (see FIGS. 1 and 2) in contact with the cells 3 and the medium 2.

その他に例えば、図８に示すように、細胞培養用基材１０（図１又は図２に示す構造を有する）の、含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物により構成された表面Ｓ（図１、２参照）に細胞３及び培地２が接し、細胞培養用基材１０の他方の表面が空気等の酸素含有ガスに接した状態で細胞を培養しても良い。例えば図９−２（ｂ）に示すように、平坦面３００上に幅の狭い適当なスペーサー２００を配置し、スペーサー２００上に細胞培養用容器１００を載せても良い。図１０（ａ）（ｂ）（ｃ）に示す細胞培養用容器１００も同様に使用することができる。図１０（ｃ）及び図１１に示す細胞培養用容器１００は、壁部材２０の底側の端部が、細胞培養用基材１０よりも下に突出していても良い。平坦面上に置いたとき、壁部材２０の前記端部がスペーサーとして機能し、細胞培養用基材１０の表面Ｓとは反対側の表面と平坦面との間には空隙４が形成され、該空隙４に酸素含有ガス（空気等）が存在できる。 In addition, for example, as shown in FIG. 8, the surface S (FIGS. 1 and 2) of the cell culture substrate 10 (having the structure shown in FIG. 1 or 2) made of a resin composition containing a fluorine-containing polyimide. The cells 3 may be cultured in a state where the cells 3 and the medium 2 are in contact with each other and the other surface of the cell culture substrate 10 is in contact with an oxygen-containing gas such as air. For example, as shown in FIG. 9-2 (b), a suitable spacer 200 having a narrow width may be arranged on the flat surface 300, and the cell culture container 100 may be placed on the spacer 200. The cell culture container 100 shown in FIGS. 10A, 10B, and 10C can be similarly used. In the cell culture container 100 shown in FIGS. 10C and 11, the bottom end of the wall member 20 may protrude below the cell culture substrate 10. When placed on a flat surface, the end portion of the wall member 20 functions as a spacer, and a gap 4 is formed between the surface opposite to the surface S of the cell culture substrate 10 and the flat surface. An oxygen-containing gas (air or the like) can be present in the void 4.

以上の培養方法は、例示であり本発明の細胞培養方法は必ずしもこのような形態に限定されず、前記細胞培養用基材の含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物により構成された表面に細胞及び培地が接し、細胞を培養する工程であれば、特に限定されない。 The above culturing method is an example, and the cell culturing method of the present invention is not necessarily limited to such a form, and cells and a medium are formed on the surface composed of a resin composition containing the fluorine-containing polyimide of the cell culture substrate. Are not particularly limited as long as they are in contact with each other and culturing the cells.

本発明の細胞培養用基材を用いて培養される細胞の種類は特に限定されないが、例えば、ヒト正常肝細胞、ラット正常肝細胞、マウス正常肝細胞、ヒト肝臓癌細胞、ヒト肝芽腫細胞、ラットヘパトーマ細胞、マウスヘパトーマ細胞、人工多能性幹細胞（Ｉｎｄｕｃｅｄｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔｓｔｅｍｃｅｌｌｓ：ｉＰＳ細胞）、胚性幹細胞（Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ：ＥＳ細胞）、間葉系幹細胞等の一般的に３次元培養を行うことが求められている細胞や、各種前駆細胞及び幹細胞を含む、脂肪細胞、肝細胞、腎細胞、膵臓細胞、乳腺細胞、内皮細胞、上皮細胞、平滑筋細胞、筋芽細胞、心筋細胞、神経細胞、グリア細胞、樹状細胞、軟骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、骨細胞、線維芽細胞、各種血液系細胞、その他間葉系前駆細胞、各種癌細胞等の他の細胞が挙げられる。 The type of cells cultured using the cell culture substrate of the present invention is not particularly limited, and examples thereof include human normal hepatocytes, rat normal hepatocytes, mouse normal hepatocytes, human liver cancer cells, human hepatoblastoma cells. Three-dimensional culture of rat hepatoma cells, mouse hepatoma cells, induced pluripotent stem cells (iPS cells), embryonic stem cells (Embryonic stem cells: ES cells), mesenchymal stem cells, etc. Cells, including various progenitor cells and stem cells, adipocytes, hepatocytes, kidney cells, pancreatic cells, mammary gland cells, endothelial cells, epithelial cells, smooth muscle cells, myoblasts, cardiomyocytes , Nerve cells, glial cells, dendritic cells, chondrocytes, osteoblasts, osteoclasts, osteocytes, fibroblasts, various blood cells, etc. Other cells such as leaflet progenitor cells and various cancer cells can be mentioned.

細胞は適当な培地中で培養することができる。培地の種類は特に限定されないが、例えば、任意の細胞培養基本培地や分化培地、初代培養専用培地等を用いることができる。具体的にはダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、グラスゴーＭＥＭ（ＧＭＥＭ）、ＲＰＭＩ１６４０、ハムＦ１２、ＭＣＤＢ培地、ウィリアムス培地Ｅ等が挙げられるが、これらには限定されず、細胞が増殖や分化に必要な成分が含まれる培地であれば利用可能である。さらに、血清や各種増殖因子、分化誘導因子を添加した培地を使用してもよい。 The cells can be cultured in a suitable medium. The type of medium is not particularly limited, but for example, any cell culture basic medium, differentiation medium, primary culture medium, etc. can be used. Specific examples thereof include Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM), Glasgow MEM (GMEM), RPMI1640, Ham's F12, MCDB medium, Williams medium E, etc., but are not limited to these, and the cells are necessary for proliferation and differentiation. Any medium containing the components can be used. Further, a medium to which serum, various growth factors and differentiation inducing factors are added may be used.

５．三次元培養
本発明はまた、細胞を三次元培養する方法であって、前記細胞培養用基材の、前記ポリイミドを含む樹脂組成物により構成される表面上で細胞を三次元培養する工程を含む方法を提供する。 5. Three-dimensional culture The present invention is also a method of three-dimensionally culturing cells, comprising the step of three-dimensionally culturing cells on the surface of the substrate for cell culture, which is composed of the resin composition containing the polyimide. Provide a way.

ここで三次元培養により形成される組織としては、スフェロイド、三次元細胞集合体等が挙げられる。スフェロイド又は三次元細胞集合体はラット正常肝細胞のような単一な細胞で形成されたスフェロイド又は三次元細胞集合体でも、各種線維芽細胞や血管内皮細胞等とラット正常肝細胞のような２種以上の異なる細胞種が混在したスフェロイド又は三次元細胞集合体でも良い。使用できる細胞としては、上記の各種細胞が挙げられる。 Examples of tissues formed by three-dimensional culture include spheroids and three-dimensional cell aggregates. Spheroids or three-dimensional cell aggregates are spheroids or three-dimensional cell aggregates formed by a single cell such as rat normal hepatocytes. It may be a spheroid or a three-dimensional cell aggregate in which different types of cells are mixed. Examples of cells that can be used include the above-mentioned various cells.

三次元培養する際の培地の種類は特に限定されないが、例えば任意の細胞培養基本培地や分化培地、初代培養専用培地等を用いることができる。具体的にはダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、グラスゴーＭＥＭ（ＧＭＥＭ）、ＲＰＭＩ１６４０、ハムＦ１２、ＭＣＤＢ培地、ウィリアムス培地Ｅ等が挙げられるが、これらには限定されず、細胞が増殖や分化に必要な成分が含まれる培地であれば利用可能である。さらに、血清や各種増殖因子、分化誘導因子を添加した培地を使用してもよい。 The type of medium for three-dimensional culture is not particularly limited, but for example, an arbitrary cell culture basic medium, differentiation medium, primary culture medium, or the like can be used. Specific examples thereof include Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM), Glasgow MEM (GMEM), RPMI1640, Ham's F12, MCDB medium, Williams medium E, etc., but are not limited to these, and the cells are necessary for proliferation and differentiation. Any medium containing the components can be used. Further, a medium to which serum, various growth factors and differentiation inducing factors are added may be used.

以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はもとより下記実施例によって制限を受けるものではなく、前・後記の趣旨に適合し得る範囲で適当に変更を加えて実施することも勿論可能であり、それらはいずれも本発明の技術的範囲に包含される。なお、以下においては、特に断りのない限り、「部」は「質量部」を、「％」は「質量％」を意味する。 Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples, but the present invention is not limited by the following examples as well as the present invention, and may be appropriately modified within a range compatible with the gist of the preceding and the following. Of course, it is possible to carry out, and all of them are included in the technical scope of the present invention. In the following, "parts" means "parts by mass" and "%" means "% by mass" unless otherwise specified.

＜イミド化触媒の残存量の測定＞
ＮＭＲでの測定
装置名：核磁気共鳴装置Ｕｎｉｔｙｐｌｕｓ４００（バリアンインスツルメンツ社製）
溶媒ｄ−ＤＭＳＯを使用して^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）を測定した。内部標準としてテトラメチルシラン（ＴＭＳ）のＨの位置を０ｐｐｍとした。 <Measurement of residual amount of imidization catalyst>
Measurement by NMR Device name: Nuclear magnetic resonance device Unity plus 400 (manufactured by Varian Instruments Inc.)
¹ H-NMR (400 MHz) was measured using the solvent d-DMSO. As the internal standard, the H position of tetramethylsilane (TMS) was set to 0 ppm.

ポリアミド酸に既知量のイミド化触媒（トリエチルアミン、ＴＥＡ）を加えイミド化反応させた後の比較例の試料の^１Ｈ−ＮＭＲを測定した（焼成前試料）。また、上記イミド化した樹脂組成物を焼成した後のポリイミドフィルムをｄ−ＤＭＳＯに溶解し^１Ｈ−ＮＭＲを測定した（焼成後試料）。焼成前後のどちらの試料においても、８ｐｐｍ付近にポリイミドのＨ由来のピーク（ポリアミド酸が残留する場合は、ポリアミド酸にも由来する）、１ｐｐｍと６ｐｐｍ付近にＴＥＡのＨ由来のピークを確認した。 ¹ H-NMR of a sample of a comparative example after adding a known amount of an imidization catalyst (triethylamine, TEA) to polyamic acid and performing an imidization reaction was measured (sample before firing). Also, the polyimide film after firing the resin composition described above imidized measure dissolved ^{1 H-NMR} in d-DMSO (after firing samples). In both of the samples before and after firing, the peak derived from H of polyimide was derived at around 8 ppm (also derived from polyamic acid when polyamic acid remains), and the peaks derived from H of TEA were found at around 1 ppm and 6 ppm.

焼成前後の各試料について８ｐｐｍのポリイミド及び残留するポリアミド酸のピーク強度を基準とした１ｐｐｍのＴＥＡ由来ピークの相対強度を求め、焼成前後の試料間で比較した。該比較結果に基づき、焼成前試料におけるポリイミド及び残留するポリアミド酸の総和に対するＴＥＡの量（既知）を参照して、焼成後試料におけるポリイミド及び残留するポリアミド酸の総和に対するＴＥＡの量を算出した。 For each sample before and after firing, the relative intensity of the peak derived from TEA of 1 ppm based on the peak intensity of 8 ppm of polyimide and residual polyamic acid was determined and compared between the samples before and after firing. Based on the comparison result, the amount of TEA with respect to the total amount of polyimide and residual polyamic acid in the sample after firing was calculated with reference to the amount of TEA (known) with respect to the total amount of polyimide and residual polyamic acid in the sample before firing.

＜フッ素含有量の測定方法＞
元素分析装置（ジェイサイエンス製マイクロコーダーＪＭ−１０）により、ポリイミドフィルム中のフッ素含有量の定量を行った。 <Method of measuring fluorine content>
The fluorine content in the polyimide film was quantified with an elemental analysis device (Microcoder JM-10 manufactured by J Science).

＜イミド化率の測定方法＞
ＦＴ−ＩＲ（サーモフィッシャーサイエンティフィック製ＮｉｃｏｌｅｔＮｅｘｕｓ６７０）によるポリイミドフィルム分析で、ポリイミドのＣＮ伸縮振動に由来する１３７０ｃｍ^-1付近の吸光度（Ａ(１３７０ｃｍ^-1)）とベンゼン環骨格振動に由来する１５００ｃｍ^-1付近の吸光度（Ａ(１５００ｃｍ^-1)）との吸光度比（Ａ(１３７０ｃｍ^-1)／Ａ(１５００ｃｍ^-1)）を用いて、以下の式に基づいてポリイミドフィルムのイミド化率を算出した。
イミド化率（％）
＝［試料ポリイミドフィルムの（Ａ(１３７０ｃｍ^-1)）／（Ａ(１５００ｃｍ^-1)）］÷［熱処理後の試料ポリイミドフィルムの（Ａ(１３７０ｃｍ^-1)）／（Ａ(１５００ｃｍ^-1)）］×１００ <Measurement method of imidization ratio>
By polyimide film analysis by FT-IR (Nicolet Nexus 670 manufactured by Thermo Fisher Scientific), the absorbance (A (1370 cm ⁻¹ )) near 1370 cm ⁻¹ derived from CN stretching vibration of polyimide and 1500 cm derived from benzene ring skeleton vibration. with ^-1 near the absorbance (a (1500cm ^-1)) and absorbance ratio of ^{(a (1370cm -1) / a} (1500cm -1)), calculates the imidization of the polyimide film on the basis of the following formula did.
Imidization rate (%)
= [(A (1370 cm ^-1 )) of sample polyimide film / (A (1500 cm ^-1 ))] / [(A (1370 cm ^-1 )) / (A (1500 cm ^-1 )) of sample polyimide film after heat treatment ] X 100

なお、上記「熱処理後の試料ポリイミドフィルムの（Ａ(１３７０ｃｍ^-1)）／（Ａ(１５００ｃｍ^-1)）」は、試料ポリイミドフィルムを、完全イミド化（イミド化率：１００％）する温度及び時間の条件で処理したポリイミドフィルムにおける測定値である。 The above “(A (1370 cm ⁻¹ )) / (A (1500 cm ⁻¹ )) of the sample polyimide film after heat treatment” means the temperature at which the sample polyimide film is completely imidized (imidization ratio: 100%) and It is a measured value in the polyimide film processed under the condition of time.

＜重量平均分子量の測定＞
装置：東ソー株式会社製ＨＣＬ−８２２０ＧＰＣ
カラム：ＴＳＫｇｅｌＳｕｐｅｒＡＷＭ−Ｈ
溶離液（ＬｉＢｒ・Ｈ_２Ｏ、リン酸入りＮＭＰ）：０．０１ｍｏｌ／Ｌ
測定方法：０．５％の溶液を溶離液で作製し、ポリスチレンで作製した検量線をもとに分子量を算出した。
ポリアミド酸、ポリイミドともに同じ方法で測定可能である。 <Measurement of weight average molecular weight>
Device: Tosoh Corporation HCL-8220GPC
Column: TSKgel Super AWM-H
Eluent (LiBr.H ₂ O, NMP containing phosphoric acid): 0.01 mol / L
Measurement method: A 0.5% solution was prepared with an eluent, and the molecular weight was calculated based on a calibration curve prepared with polystyrene.
Both polyamic acid and polyimide can be measured by the same method.

＜動的粘弾性測定方法＞
装置：ティー・エイ・インスツルメント社製
動的粘弾性ＲＳＡＩＩＩ
測定方法：厚さ２０μｍのポリイミドフィルムを５×４０ｍｍの短冊状に作製し、２５℃での伸びと応力を測定し、引っ張り弾性率を算出した。 <Dynamic viscoelasticity measuring method>
Device: TA Instruments Dynamic Viscoelasticity RSA III
Measurement method: A polyimide film having a thickness of 20 μm was formed in a strip shape of 5 × 40 mm, elongation and stress at 25 ° C. were measured, and a tensile elastic modulus was calculated.

＜水接触角の測定＞
装置：自動接触角計（協和界面科学製：ＤＭ−５００）
測定方法：２５℃の温度での水２μｌの滴下直後の液滴の付着角度を測定した。 <Measurement of water contact angle>
Device: Automatic contact angle meter (Kyowa Interface Science: DM-500)
Measurement method: The adhesion angle of the droplet was measured immediately after the addition of 2 μl of water at a temperature of 25 ° C.

＜酸二無水物＞
酸二無水物として、４，４’−［（２，３，５，６−テトラフルオロ−１，４−フェニレン）ビス（オキシ）］ビス（３，５，６−トリフルオロフタル酸無水物）（１０ＦＥＤＡＮ）（自社合成品）、４，４’−ヘキサフルオロイソプロピリデンジフタル酸無水物（６ＦＤＡ）（自社合成品）を用いた。 <Acid dianhydride>
As the acid dianhydride, 4,4 ′-[(2,3,5,6-tetrafluoro-1,4-phenylene) bis (oxy)] bis (3,5,6-trifluorophthalic anhydride) (10FEDAN) (in-house synthesized product) and 4,4′-hexafluoroisopropylidene diphthalic anhydride (6FDA) (in-house synthesized product) were used.

＜ジアミン＞
ジアミンとして、１，４−ビス（４−アミノフェノキシ）ベンゼン（ＴＰＥＱ）（和歌山静加工業株式会社）、２，６−ビス（４−アミノフェノキシ）−３，５−ジフルオロ−４−（１Ｈ，１Ｈ，２Ｈ，２Ｈ−ヘプタデカフルオロ−ｎ−デカノキシ）ベンゾニトリル（ＡＦＤＭ）（自社合成品）、２，２−ビス（４−（４−アミノフェノキシ）フェニル）ヘキサフルオロプロパン（ＨＦＢＡＰＰ）（和歌山静加工業株式会社）、２，２−ビス（４−（４−アミノフェノキシ）フェニル）プロパン（ＢＡＰＰ）（和歌山静加工業株式会社）、４，４’−ビス（４−アミノフェノキシ）ビフェニル（ＢＡＰＢ）（和歌山静加工業株式会社）、４，４’−ジアミノジフェニルエーテル（ＯＤＡ）（和歌山静加工業株式会社）、１，３−ビス（４−アミノフェノキシ）ベンゼン（ＴＰＥＲ）（和歌山静加工業株式会社）、１，３−ジアミノ−２，４，５，６−テトラフルオロベンゼン（４ＦＭＰＤ）（自社合成品）、２，２−ビス（４−アミノフェニル）ヘキサフルオロプロパン（６ＦＡＰ）（東京化成工業製）、２，２’−ビス（トリフルオロメチル）ベンジジン（ＴＦＭＢ）（東京化成工業製）を用いた。
各化合物の化学構造と分子中のフッ素原子の数は次表に示す通りである。 <Diamine>
As the diamine, 1,4-bis (4-aminophenoxy) benzene (TPEQ) (Wakayama Shizu Kogyo Co., Ltd.), 2,6-bis (4-aminophenoxy) -3,5-difluoro-4- (1H, 1H, 2H, 2H-heptadecafluoro-n-decanoxy) benzonitrile (AFDM) (synthesized in-house), 2,2-bis (4- (4-aminophenoxy) phenyl) hexafluoropropane (HFBAPP) (Shizu Wakayama) Processing Industry Co., Ltd.), 2,2-bis (4- (4-aminophenoxy) phenyl) propane (BAPP) (Wakayama Shizuka Corporation), 4,4′-bis (4-aminophenoxy) biphenyl (BAPB) ) (Wakayama Shizuka Kogyo Co., Ltd.), 4,4′-diaminodiphenyl ether (ODA) (Wakayama Shizuka Kogyo Co., Ltd.), 1,3-bis (4-ami) Phenoxy) benzene (TPER) (Wakayama Shizu Kogyo Co., Ltd.), 1,3-diamino-2,4,5,6-tetrafluorobenzene (4FMPD) (in-house synthesized product), 2,2-bis (4-amino) Phenyl) hexafluoropropane (6FAP) (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) and 2,2′-bis (trifluoromethyl) benzidine (TFMB) (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) were used.
The chemical structure of each compound and the number of fluorine atoms in the molecule are as shown in the following table.

酸二無水物とジアミンを下記表に示すように組み合わせて実施例及び比較例のポリイミドのフィルムを調製した。 Acid dianhydride and diamine were combined as shown in the following table to prepare polyimide films of Examples and Comparative Examples.

≪調製例１≫６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ
１００ｍｌ容量の三口フラスコに１，４−ビス（アミノフェノキシ）ベンゼン２．９７６ｇ（１０．２ミリモル）、４，４’−ヘキサフルオロイソプロピリデンジフタル酸無水物４．５２４ｇ（１０．２ミリモル）、Ｎ、Ｎ−ジメチルアセトアミド４２．５ｇを仕込んだ。窒素雰囲気下、室温で、５日間攪拌することで、含フッ素ポリアミド酸樹脂組成物（固形分濃度１５．０質量％）を得た。該ポリアミド酸の重量平均分子量は１８万であった。 << Preparation Example 1 >> 6FDA / TPEQ
2.976 g (10.2 mmol) of 1,4-bis (aminophenoxy) benzene, 4.524 g (10.2 mmol) of 4,4′-hexafluoroisopropylidene diphthalic anhydride in a 100 ml three-necked flask. 42.5 g of N, N-dimethylacetamide was charged. By stirring for 5 days at room temperature under a nitrogen atmosphere, a fluorinated polyamic acid resin composition (solid content concentration 15.0% by mass) was obtained. The weight average molecular weight of the polyamic acid was 180,000.

≪調製例２≫６ＦＤＡ／ＡＦＤＭ
１００ｍｌ容量の三口フラスコに２，６−ビス（４−アミノフェノキシ）−３，５−ジフルオロ−４−（１Ｈ，１Ｈ，２Ｈ，２Ｈ−ヘプタデカフルオロ−ｎ−デカノキシ）ベンゾニトリル４．８５５ｇ（５．９５ミリモル）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド４２．５ｇを仕込み溶解した。そこへ４，４’−ヘキサフルオロイソプロピリデンジフタル酸無水物２．６４５ｇ（５．９５ミリモル）を加え、窒素雰囲気下、室温で５日間攪拌することで、含フッ素ポリアミド酸樹脂組成物（固形分濃度１５．０質量％）を得た。該ポリアミド酸の重量平均分子量は７万であった。 << Preparation Example 2 >> 6FDA / AFDM
In a 100 ml three-necked flask, 2,6-bis (4-aminophenoxy) -3,5-difluoro-4- (1H, 1H, 2H, 2H-heptadecafluoro-n-decanooxy) benzonitrile 4.855 g (5 0.95 mmol) and 42.5 g of N, N-dimethylacetamide were charged and dissolved. 2,645 g (5.95 mmol) of 4,4′-hexafluoroisopropylidene diphthalic anhydride was added thereto, and the mixture was stirred at room temperature for 5 days under a nitrogen atmosphere to give a fluorine-containing polyamic acid resin composition (solid A partial concentration of 15.0% by mass was obtained. The weight average molecular weight of the polyamic acid was 70,000.

≪調製例３≫６ＦＤＡ／ＨＦＢＡＰＰ
１００ｍｌ容量の三口フラスコに２，２−ビス（４−（４−アミノフェノキシ）フェニル）ヘキサフルオロプロパン２．６９３ｇ（５．１９ミリモル）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド４２．５ｇを仕込み溶解した。そこへ４，４’−ヘキサフルオロイソプロピリデンジフタル酸無水物２．３０７ｇ（５．１９ミリモル）を加え、窒素雰囲気下、室温で５日間攪拌することで、含フッ素ポリアミド酸樹脂組成物（固形分濃度１５．０質量％）を得た。該ポリアミド酸の重量平均分子量は５０万であった。 << Preparation Example 3 >> 6FDA / HFBAPP
2.693 g (5.19 mmol) of 2,2-bis (4- (4-aminophenoxy) phenyl) hexafluoropropane and 42.5 g of N, N-dimethylacetamide were charged and dissolved in a 100 ml three-necked flask. 2.307 g (5.19 mmol) of 4,4′-hexafluoroisopropylidene diphthalic anhydride was added thereto, and the mixture was stirred at room temperature for 5 days under a nitrogen atmosphere to give a fluorine-containing polyamic acid resin composition (solid A partial concentration of 15.0% by mass was obtained. The weight average molecular weight of the polyamic acid was 500,000.

≪調製例４≫６ＦＤＡ／ＢＡＰＰ
１００ｍｌ容量の三口フラスコに２，２−ビス（４−（４−アミノフェノキシ）フェニル）プロパン３．６０２ｇ（８．７７ミリモル）、Ｎ,Ｎ−ジメチルアセトアミド４２．５ｇを仕込み溶解した。そこへ４，４’−ヘキサフルオロイソプロピリデンジフタル酸無水物３．８９８ｇ（８．７７ミリモル）を加え、窒素雰囲気下、室温で５日間攪拌することで、含フッ素ポリアミド酸樹脂組成物（固形分濃度１５．０質量％）を得た。該ポリアミド酸の重量平均分子量は２８万であった。 << Preparation Example 4 >> 6FDA / BAPP
A 3-neck flask having a capacity of 100 ml was charged with 3.602 g (8.77 mmol) of 2,2-bis (4- (4-aminophenoxy) phenyl) propane and 42.5 g of N, N-dimethylacetamide and dissolved. 3.84 g (8.77 mmol) of 4,4′-hexafluoroisopropylidene diphthalic anhydride was added thereto, and the mixture was stirred under a nitrogen atmosphere at room temperature for 5 days to give a fluorine-containing polyamic acid resin composition (solid A partial concentration of 15.0% by mass was obtained. The weight average molecular weight of the polyamic acid was 280,000.

≪調製例５≫６ＦＤＡ／ＢＡＰＢ
１００ｍｌ容量の三口フラスコに４，４’−ビス（４−アミノフェノキシ）ビフェニル３．４００ｇ（９．２３ミリモル）、Ｎ,Ｎ−ジメチルアセトアミド４２．５ｇを仕込み溶解した。そこへ４，４’−ヘキサフルオロイソプロピリデンジフタル酸無水物４．１００ｇ（９．２３ミリモル）を加え、窒素雰囲気下、室温で５日間攪拌することで、含フッ素ポリアミド酸樹脂組成物（固形分濃度１５．０質量％）を得た。該ポリアミド酸の重量平均分子量は２２万であった。 << Preparation Example 5 >> 6FDA / BAPB
A three-necked flask having a capacity of 100 ml was charged with 3.400 g (9.23 mmol) of 4,4′-bis (4-aminophenoxy) biphenyl and 42.5 g of N, N-dimethylacetamide and dissolved. 4.100 g (9.23 mmol) of 4,4′-hexafluoroisopropylidene diphthalic anhydride was added thereto, and the mixture was stirred under a nitrogen atmosphere at room temperature for 5 days to give a fluorine-containing polyamic acid resin composition (solid A partial concentration of 15.0% by mass was obtained. The weight average molecular weight of the polyamic acid was 220,000.

≪調製例６≫６ＦＤＡ／ＯＤＡ（ＤＰＥ）
１００ｍｌ容量の三口フラスコに４，４’−ジアミノジフェニルエーテル２．３３０ｇ（１１．６４ミリモル）、Ｎ,Ｎ−ジメチルアセトアミド４２．５ｇを仕込み溶解した。そこへ４，４’−ヘキサフルオロイソプロピリデンジフタル酸無水物５．１７０ｇ（１１．６４ミリモル）を加え、窒素雰囲気下、室温で５日間攪拌することで、含フッ素ポリアミド酸樹脂組成物（固形分濃度１５．０質量％）を得た。該ポリアミド酸の重量平均分子量は１９万であった。 << Preparation Example 6 >> 6FDA / ODA (DPE)
2.330 g (11.64 mmol) of 4,4′-diaminodiphenyl ether and 42.5 g of N, N-dimethylacetamide were charged and dissolved in a 100 ml three-necked flask. Thereto, 5.170 g (11.64 mmol) of 4,4′-hexafluoroisopropylidene diphthalic anhydride was added, and the mixture was stirred under a nitrogen atmosphere at room temperature for 5 days to give a fluorine-containing polyamic acid resin composition (solid A partial concentration of 15.0% by mass was obtained. The weight average molecular weight of the polyamic acid was 190,000.

≪調製例７≫６ＦＤＡ／ＴＰＥＲ
１００ｍｌ容量の三口フラスコに１，３−ビス（４−アミノフェノキシ）ベンゼン２．９７６ｇ（１０．２ミリモル）、Ｎ,Ｎ−ジメチルアセトアミド４２．５ｇを仕込み溶解した。そこへ４，４’−ヘキサフルオロイソプロピリデンジフタル酸無水物４．５２４ｇ（１０．２ミリモル）を加え、窒素雰囲気下、室温で５日間攪拌することで、含フッ素ポリアミド酸樹脂組成物（固形分濃度１５．０質量％）を得た。該ポリアミド酸の重量平均分子量は１８万であった。 << Preparation Example 7 >> 6FDA / TPER
A 100-ml three-necked flask was charged with 2.976 g (10.2 mmol) of 1,3-bis (4-aminophenoxy) benzene and 42.5 g of N, N-dimethylacetamide and dissolved. 4.54 g (10.2 mmol) of 4,4′-hexafluoroisopropylidene diphthalic anhydride was added thereto, and the mixture was stirred at room temperature for 5 days under a nitrogen atmosphere to give a fluorine-containing polyamic acid resin composition (solid A partial concentration of 15.0% by mass was obtained. The weight average molecular weight of the polyamic acid was 180,000.

≪調製例８≫６ＦＤＡ／６ＦＡＰ
１００ｍｌ容量の三口フラスコに２，２−ビス（４−アミノフェニル）ヘキサフルオロプロパン３．２２０ｇ（９．６３ミリモル）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド４２．５ｇを仕込み溶解した。そこへ４，４’−ヘキサフルオロイソプロピリデンジフタル酸無水物４．２８０ｇ（９．６３ミリモル）を加え、窒素雰囲気下、室温で５日間攪拌することで、含フッ素ポリアミド酸樹脂組成物（固形分濃度１５質量％）を得た。該ポリアミド酸の重量平均分子量は８万であった。 << Preparation Example 8 >> 6FDA / 6FAP
A 2-neck flask having a capacity of 100 ml was charged with 3.22 g (9.63 mmol) of 2,2-bis (4-aminophenyl) hexafluoropropane and 42.5 g of N, N-dimethylacetamide and dissolved. 4,280 g (9.63 mmol) of 4,4′-hexafluoroisopropylidene diphthalic anhydride was added thereto, and the mixture was stirred under a nitrogen atmosphere at room temperature for 5 days to give a fluorine-containing polyamic acid resin composition (solid A partial concentration of 15% by mass) was obtained. The weight average molecular weight of the polyamic acid was 80,000.

≪調製例９≫６ＦＤＡ／ＴＦＭＢ
１００ｍｌ容量の三口フラスコに２，２’−ビス（トリフルオロメチル）ベンジジン３．１４１ｇ（９．８１ミリモル）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド４２．５ｇを仕込み溶解した。そこへ４，４’−ヘキサフルオロイソプロピリデンジフタル酸無水物４．３５９ｇ（９．８１ミリモル）を加え、窒素雰囲気下、室温で５日間攪拌することで、含フッ素ポリアミド酸樹脂組成物（固形分濃度１５質量％）を得た。該ポリアミド酸の重量平均分子量は２５万であった。 << Preparation Example 9 >> 6FDA / TFMB
A 100-ml three-necked flask was charged with 3.141 g (9.81 mmol) of 2,2′-bis (trifluoromethyl) benzidine and 42.5 g of N, N-dimethylacetamide and dissolved. Then, 4.359 g (9.81 mmol) of 4,4′-hexafluoroisopropylidene diphthalic anhydride was added thereto, and the mixture was stirred at room temperature for 5 days under a nitrogen atmosphere to give a fluorine-containing polyamic acid resin composition (solid A partial concentration of 15% by mass) was obtained. The weight average molecular weight of the polyamic acid was 250,000.

≪実施例１≫
調製例１において得られた含フッ素ポリアミド酸樹脂組成物を、硝子基材上に、ダイコーターを用いて、焼成後の含フッ素ポリイミドフィルムの厚みが３０μｍとなるようにフィルム状に製膜し、３００℃で１時間、窒素雰囲気下で焼成を行った後、硝子より剥離し、含フッ素ポリイミドフィルムを得た。 << Example 1 >>
The fluorinated polyamic acid resin composition obtained in Preparation Example 1 was formed into a film on a glass substrate using a die coater so that the thickness of the fluorinated polyimide film after firing would be 30 μm, After baking in a nitrogen atmosphere at 300 ° C. for 1 hour, the film was peeled from the glass to obtain a fluorine-containing polyimide film.

得られた含フッ素ポリイミドフィルムのフッ素含有量は１７質量％であり、イミド化率は９０％であり、水接触角は８８°であり、引張弾性率は２．３１ＧＰａであった。引張弾性率の値は当初の測定では６３．９ＭＰａであったが誤りがあり再測定した結果２．３１ＧＰａに訂正した。 The fluorine content of the obtained fluorine-containing polyimide film was 17% by mass, the imidization ratio was 90%, the water contact angle was 88 °, and the tensile elastic modulus was 2.31 GPa. The value of the tensile elastic modulus was 63.9 MPa in the initial measurement, but there was an error, and the result was re-measured and corrected to 2.31 GPa.

≪実施例２≫
調製例２の含フッ素ポリアミド酸樹脂組成物を用いた以外は実施例１と同様の方法により含フッ素ポリイミドフィルムを得た。ポリイミドフィルムにおけるフッ素含有量、イミド化率、水接触角、引張弾性率をそれぞれ測定した。結果を表２に示す。なお、引張弾性率の値は当初の測定では２０．８ＭＰａであったが誤りがあり再測定した結果０．９３ＧＰａに訂正した。 << Example 2 >>
A fluorinated polyimide film was obtained in the same manner as in Example 1 except that the fluorinated polyamic acid resin composition of Preparation Example 2 was used. The fluorine content, imidization ratio, water contact angle, and tensile modulus of the polyimide film were measured. Table 2 shows the results. The value of the tensile modulus was 20.8 MPa in the initial measurement, but there was an error, and the result of remeasurement was corrected to 0.93 GPa.

≪実施例３≫
調製例３の含フッ素ポリアミド酸樹脂組成物を用いた以外は実施例１と同様の方法により含フッ素ポリイミドフィルムを得た。ポリイミドフィルムにおけるフッ素含有量、イミド化率、水接触角、引張弾性率をそれぞれ測定した。結果を表２に示す。なお、引張弾性率の値は当初の測定では４２．６ＭＰａであったが誤りがあり再測定した結果２．３ＧＰａに訂正した。 << Example 3 >>
A fluorinated polyimide film was obtained in the same manner as in Example 1 except that the fluorinated polyamic acid resin composition of Preparation Example 3 was used. The fluorine content, imidization ratio, water contact angle, and tensile modulus of the polyimide film were measured. Table 2 shows the results. The value of the tensile elastic modulus was 42.6 MPa in the initial measurement, but there was an error, and the result of remeasurement was corrected to 2.3 GPa.

≪実施例４≫
調製例４の含フッ素ポリアミド酸樹脂組成物を用いた以外は実施例１と同様の方法により含フッ素ポリイミドフィルムを得た。ポリイミドフィルムにおけるフッ素含有量、イミド化率、水接触角、引張弾性率をそれぞれ測定した。結果を表２に示す。なお、引張弾性率の値は当初の測定では４８．４ＭＰａであったが誤りがあり再測定した結果１．９４ＧＰａに訂正した。 << Example 4 >>
A fluorinated polyimide film was obtained in the same manner as in Example 1 except that the fluorinated polyamic acid resin composition of Preparation Example 4 was used. The fluorine content, imidization ratio, water contact angle, and tensile modulus of the polyimide film were measured. Table 2 shows the results. The value of the tensile elastic modulus was 48.4 MPa in the initial measurement, but there was an error, and the result was re-measured and corrected to 1.94 GPa.

≪実施例５≫
調製例５の含フッ素ポリアミド酸樹脂組成物を用いた以外は実施例１と同様の方法により含フッ素ポリイミドフィルムを得た。ポリイミドフィルムにおけるフッ素含有量、イミド化率、水接触角、引張弾性率をそれぞれ測定した。結果を表２に示す。なお、引張弾性率の値は当初の測定では４４．６ＭＰａであったが誤りがあり再測定した結果１．９４ＧＰａに訂正した。 << Example 5 >>
A fluorinated polyimide film was obtained in the same manner as in Example 1 except that the fluorinated polyamic acid resin composition of Preparation Example 5 was used. The fluorine content, imidization ratio, water contact angle, and tensile modulus of the polyimide film were measured. Table 2 shows the results. The value of the tensile elastic modulus was 44.6 MPa in the initial measurement, but there was an error, and the result of remeasurement was corrected to 1.94 GPa.

≪実施例６≫
調製例６の含フッ素ポリアミド酸樹脂組成物を用いた以外は実施例１と同様の方法により含フッ素ポリイミドフィルムを得た。ポリイミドフィルムにおけるフッ素含有量、イミド化率、水接触角、引張弾性率をそれぞれ測定した。結果を表２に示す。なお、引張弾性率の値は当初の測定では５７．７ＭＰａであったが誤りがあり再測定した結果２．６２ＧＰａに訂正した。 << Example 6 >>
A fluorinated polyimide film was obtained in the same manner as in Example 1 except that the fluorinated polyamic acid resin composition of Preparation Example 6 was used. The fluorine content, imidization ratio, water contact angle, and tensile modulus of the polyimide film were measured. Table 2 shows the results. The value of the tensile elastic modulus was 57.7 MPa in the initial measurement, but there was an error, and the result of remeasurement was corrected to 2.62 GPa.

≪実施例７≫
調製例７の含フッ素ポリアミド酸樹脂組成物を用いた以外は実施例１と同様の方法により含フッ素ポリイミドフィルムを得た。ポリイミドフィルムにおけるフッ素含有量、イミド化率、水接触角、引張弾性率をそれぞれ測定した。結果を表２に示す。なお、引張弾性率の値は当初の測定では２３．９ＭＰａであったが誤りがあり再測定した結果１．０２ＧＰａに訂正した。 << Example 7 >>
A fluorinated polyimide film was obtained in the same manner as in Example 1 except that the fluorinated polyamic acid resin composition of Preparation Example 7 was used. The fluorine content, imidization ratio, water contact angle, and tensile modulus of the polyimide film were measured. Table 2 shows the results. The value of the tensile elastic modulus was 23.9 MPa in the initial measurement, but there was an error, and the result of remeasurement was corrected to 1.02 GPa.

≪実施例８≫
調製例８の含フッ素ポリアミド酸樹脂組成物を用いた以外は実施例１と同様の方法により含フッ素ポリイミドフィルムを得た。ポリイミドフィルムにおけるフッ素含有量、イミド化率、水接触角、引張弾性率をそれぞれ測定した。結果を表２に示す。なお、引張弾性率の値は当初の測定では２７．６ＭＰａであったが誤りがあり再測定した結果１．３９ＧＰａに訂正した。 << Example 8 >>
A fluorinated polyimide film was obtained in the same manner as in Example 1 except that the fluorinated polyamic acid resin composition of Preparation Example 8 was used. The fluorine content, imidization ratio, water contact angle, and tensile modulus of the polyimide film were measured. Table 2 shows the results. The value of the tensile elastic modulus was 27.6 MPa in the initial measurement, but there was an error, and the result of remeasurement was corrected to 1.39 GPa.

≪実施例９≫
調製例９の含フッ素ポリアミド酸樹脂組成物を用いた以外は実施例１と同様の方法により含フッ素ポリイミドフィルムを得た。ポリイミドフィルムにおけるフッ素含有量、イミド化率、水接触角、引張弾性率をそれぞれ測定した。結果を表２に示す。なお、引張弾性率の値は当初の測定では５０．８ＭＰａであったが誤りがあり再測定した結果１．６８ＧＰａに訂正した。 << Example 9 >>
A fluorinated polyimide film was obtained by the same method as in Example 1 except that the fluorinated polyamic acid resin composition of Preparation Example 9 was used. The fluorine content, imidization ratio, water contact angle, and tensile modulus of the polyimide film were measured. Table 2 shows the results. The value of the tensile modulus was 50.8 MPa in the initial measurement, but there was an error, and the result of remeasurement was corrected to 1.68 GPa.

≪比較例≫
１００ｍｌ容量の三口フラスコに２，２−ビス（４−アミノフェニル）ヘキサフルオロプロパン１．３３０ｇ（３．９８ミリモル）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド２１．１０ｇを仕込み溶解した。そこへ４，４’−ヘキサフルオロイソプロピリデンジフタル酸無水物１．７６８ｇ（３．９８ミリモル）を加え、室温で１５時間攪拌することで、含フッ素ポリアミド酸樹脂組成物（固形分濃度１２．８質量％）を得た。 ≪Comparison example≫
1.330 g (3.98 mmol) of 2,2-bis (4-aminophenyl) hexafluoropropane and 21.10 g of N, N-dimethylacetamide were charged and dissolved in a 100 ml three-necked flask. 1,768 g (3.98 mmol) of 4,4'-hexafluoroisopropylidene diphthalic anhydride was added thereto, and the mixture was stirred at room temperature for 15 hours to give a fluorine-containing polyamic acid resin composition (solid concentration: 12. 8% by mass) was obtained.

この溶液１５ｇに５倍の脱水触媒である無水酢酸１．２６ｇ、トリエチルアミン１．２５ｇを滴下し、２４時間撹拌した。該ポリイミドの重量平均分子量は２５万であった。この溶液の^１Ｈ−ＮＭＲを測定した。 To this solution (15 g), 5-fold dehydration catalyst (1.26 g of acetic anhydride) and 1.25 g of triethylamine were added dropwise, and the mixture was stirred for 24 hours. The weight average molecular weight of the polyimide was 250,000. ¹ H-NMR of this solution was measured.

得られた、ポリマー溶液を貧溶媒であるメタノール中に滴下し、再沈殿した後、自然乾燥後、１５０℃１５時間真空乾燥機で乾燥した。乾燥後のポリイミド粒０．５５ｇにテトラヒドロフランを１０．３ｇで溶解させ一晩撹拌してポリイミド溶液を得た。 The obtained polymer solution was dropped into methanol, which is a poor solvent, reprecipitated, naturally dried, and then dried at 150 ° C. for 15 hours in a vacuum dryer. 10.3 g of tetrahydrofuran was dissolved in 0.55 g of dried polyimide particles and stirred overnight to obtain a polyimide solution.

得られた溶液をシャーレに入れて、真空で１０ｈｒ脱溶媒を行い、シャーレから剥離した後、１５０℃で１５時間熱処理をした。得られた膜の^１Ｈ−ＮＭＲを測定し残存トリエチルアミン量を定量した。 The obtained solution was put in a petri dish, desolvated in vacuum for 10 hours, and after peeling from the petri dish, heat treatment was performed at 150 ° C. for 15 hours. ¹ H-NMR of the obtained film was measured to quantify the amount of residual triethylamine.

^１Ｈ−ＮＭＲを用いた測定では、熱処理後の上記ポリイミド膜における、ポリイミド及び残留するポリアミド酸の総和に対するトリエチルアミンの含有量は０．０３９質量％であった。なお、引張弾性率の値は当初の測定では２８．５ＭＰａであったが誤りがあり再測定した結果１．２５ＧＰａに訂正した。 ^In the measurement using ¹ H-NMR, the content of triethylamine in the polyimide film after the heat treatment was 0.039 mass% with respect to the total amount of the polyimide and the residual polyamic acid. The value of the tensile modulus was 28.5 MPa in the initial measurement, but there was an error, and the result of remeasurement was corrected to 1.25 GPa.

＜細胞培養によるスフェロイドの形成−１＞
ラット初代肝細胞の取得
Ｗｉｓｔａｒラット、オス、６週齢、体重１３０ｇを日本エスエルシー株式会社より購入した。ラット初代肝細胞の取得は培養細胞実験ハンドブック (羊土社) 第１０章、肝細胞記載の方法に従って実施した。具体的には、Ｗｉｓｔａｒラットをペントバルビタール麻酔下で開腹し、門脈にカテーテルを挿入して前かん流液（Ｃａ^２＋とＭｇ^２＋不含のＥＧＴＡ溶液）を注入した。同時に肝臓下部の下大静脈を切開して血液を放出させた。次に胸腔を開き、右心房に入る下大静脈を切開し、肝臓下部の下大静脈をかん止で止めてかん流を行った。肝臓からの脱血が十分になされたことを確認した後にかん流を止め、かん流液をコラゲナーゼ溶液に換えて、かん流を行った。細胞間組織がコラゲナーゼにより消化されたことを確認した後、かん流を止めた。肝臓を切り離し、ガラスシャーレに移した後、冷したハンクス溶液を添加して、ピペッティングにより細胞を分散させた。次に１５０ｍｍ濾過器により未消化の組織を除去した。細胞懸濁液は、５０Ｇ、１分の遠心分離を数回繰り返して非実質細胞を除去した。得られた肝細胞の生存率はトリパンブルー排除法で計測し、生存率７０％以上の肝細胞をラット初代肝細胞として培養試験に使用した。 <Spheroid formation by cell culture-1>
Acquisition of rat primary hepatocytes Wistar rat, male, 6 weeks old, and weight 130 g were purchased from Japan SLC, Inc. The acquisition of rat primary hepatocytes was performed according to the method described in Hepatocytes, Chapter 10, Cultured Cell Experiment Handbook (Yodosha). Specifically, Wistar rats were laparotomized under pentobarbital anesthesia, a catheter was inserted into the portal vein, and a preperfusion fluid (Ca ²⁺ and Mg ²⁺ free EGTA solution) was injected. At the same time, the inferior vena cava of the lower part of the liver was incised to release blood. Next, the thoracic cavity was opened, the inferior vena cava entering the right atrium was incised, and the inferior vena cava under the liver was stopped by perfusion to perform perfusion. After confirming that the blood was sufficiently removed from the liver, the perfusion was stopped, the perfusate was replaced with a collagenase solution, and the perfusion was performed. After confirming that the intercellular tissue was digested with collagenase, perfusion was stopped. The liver was cut off, transferred to a glass petri dish, and a cold Hanks solution was added thereto to disperse the cells by pipetting. The undigested tissue was then removed with a 150 mm filter. Non-parenchymal cells were removed from the cell suspension by repeating centrifugation at 50 G for 1 minute several times. The survival rate of the obtained hepatocytes was measured by the trypan blue exclusion method, and hepatocytes having a survival rate of 70% or more were used in the culture test as rat primary hepatocytes.

ラット初代肝細胞の培養
前述の方法で取得したラット初代肝細胞を、以下組成の培地で懸濁し、５．３×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｃｍ^２となるようにマルチウェルセルカルチャープレート２４ｗｅｌｌ（ＢＤＦａｌｃｏｎ社）、実施例８記載の方法で取得した熱イミド化６ＦＤＡ／６ＦＡＰ膜に播種し、３７℃，５％ＣＯ_２条件下で培養した。なお、６ＦＤＡ／６ＦＡＰ膜は高圧蒸気滅菌処理後に細胞培養に使用した。培地は毎日交換した。 Culturing of rat primary hepatocytes Rat primary hepatocytes obtained by the above-mentioned method were suspended in a medium having the following composition, and multiwell cell culture plate 24 well (BD Falcon, Inc.) was prepared so as to have a concentration of 5.3 × 10 ⁴ cells / cm ^2. ), Seeded on the thermally imidized 6FDA / 6FAP membrane obtained by the method described in Example 8, and cultured under conditions of 37 ° C. and 5% CO ₂ . The 6FDA / 6FAP membrane was used for cell culture after autoclaving. The medium was changed every day.

培地組成
Ｗｉｌｌｉａｍ’ｓＥｍｅｄｉｕｍ（和光純薬）＋１０％ＦＢＳ（和光純薬）＋８．６ｎＭインスリン＋２５５ｎＭデキサメサゾン＋５０ｎｇ／ｍＬＥＧＦ＋５ＫＩＵ／ｍＬアプロチニン＋抗生物質（ペニシリン（１００ｕｎｉｔ／ｍＬ）／ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）／アムホテリシンＢ（０．２５μｇ／ｍＬ）） Medium composition William's E medium (Wako Pure Chemical Industries) + 10% FBS (Wako Pure Chemical Industries) + 8.6 nM insulin + 255 nM dexamethasone + 50 ng / mL EGF + 5 KIU / mL aprotinin + antibiotics (penicillin) (100 units / 100 / units) (100 μg / mL) / amphotericin B (0.25 μg / mL))

培養５日目の位相差顕微鏡写真を図３に示した。
一般的に付着細胞の培養で使用されるマルチウェルセルカルチャープレート２４ｗｅｌｌ（ＢＤＦａｌｃｏｎ社）では単層状に細胞が増殖し細胞凝集塊の形成は見られなかったが、熱イミド化６ＦＤＡ／６ＦＡＰ膜では３次元的な構造の細胞凝集塊の形成が確認された。この細胞凝集塊は大きさが均一で、適度なサイズであり、また基材全面に均一にスフェロイドが分布していた。 The phase contrast micrograph on the 5th day of culture is shown in FIG.
In the multi-well cell culture plate 24well (BD Falcon), which is generally used for culturing adherent cells, cells grew in a monolayer and no formation of cell aggregates was observed, but in the thermoimidated 6FDA / 6FAP membrane, The formation of cell aggregates having a three-dimensional structure was confirmed. This cell aggregate had a uniform size and an appropriate size, and the spheroids were uniformly distributed over the entire surface of the base material.

＜化学イミド化により形成されたポリイミドフィルム上での培養（比較例）＞
ラット初代肝細胞を使用して比較例記載の方法で調製した化学イミド化６ＦＤＡ／６ＦＡＰ膜の培養試験を実施した。上述と同様の方法でＷｉｓｔａｒラット、オス、６週齢、体重１３０ｇからラット初代肝細胞を取得し、上述と同様の培養条件及び培地を用いて培養試験を行った。培養５日目に位相差顕微鏡を用いて培養細胞の様子を観察したところ、化学イミド化６ＦＤＡ／６ＦＡＰ膜上では細胞凝集塊の形成が確認されなかった。 <Culture on polyimide film formed by chemical imidization (comparative example)>
A culture test of a chemically imidized 6FDA / 6FAP membrane prepared by the method described in Comparative Example using rat primary hepatocytes was carried out. Rat primary hepatocytes were obtained from Wistar rat, male, 6 weeks old, and body weight 130 g by the same method as described above, and a culture test was performed using the same culture conditions and medium as described above. When the appearance of the cultured cells was observed using a phase contrast microscope on the 5th day of culture, formation of cell aggregates was not confirmed on the chemically imidized 6FDA / 6FAP membrane.

＜細胞培養によるスフェロイドの形成−２＞
１：線維芽様細胞の培養
線維芽様細胞であるＬ９２９細胞をＤＳファーマバイオメディカル社より購入した。Ｌ９２９細胞を、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（ＤＳファーマバイオメディカル社）を終濃度１０ｖｏｌ％となるように添加したＤＭＥＭ培地（ＤＳファーマバイオメディカル社）で懸濁し、１００ｍｍセルカルチャーディッシュ（ＢＤＦａｌｃｏｎ社）に播種、３７℃，５％ＣＯ_２条件下で培養した。９０％コンフルエントの状態となるまで培養後、０．２５％トリプシン／５０ｍＭＥＤＴＡ溶液で処理、１０％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を添加してトリプシン反応を停止させ、Ｌ９２９細胞の浮遊細胞懸濁液を得た。Ｌ９２９細胞の浮遊細胞懸濁液中の細胞数を０．４ｗ／ｖ％トリパンブルー溶液（和光純薬）及び血球計算盤を用いて測定し、５．３×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｃｍ^２となるようにマルチウェルセルカルチャープレート２４ｗｅｌｌ（ＢＤＦａｌｃｏｎ社）、実施例１で得られた６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ膜、浮遊細胞用ペトリディッシュ（Ｎｕｎｃ社）及び超低接着表面２４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）に播種、３７℃，５％ＣＯ_２条件下で培養した。なお、６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ膜は高圧蒸気滅菌処理後に細胞培養に使用した。培養５日目の位相差顕微鏡写真を図４に示す。 <Spheroid formation by cell culture-2>
1: Culture of fibroblast-like cells L929 cells, which are fibroblast-like cells, were purchased from DS Pharma Biomedical. L929 cells were suspended in a DMEM medium (DS Pharma Biomedical) supplemented with fetal bovine serum (FBS) (DS Pharma Biomedical) at a final concentration of 10 vol%, and a 100 mm cell culture dish (BD Falcon). The cells were seeded and cultured at 37 ° C. under 5% CO ₂ . After culturing to a 90% confluent state, the cells were treated with a 0.25% trypsin / 50 mM EDTA solution, the DMEM medium containing 10% FBS was added to stop the trypsin reaction, and a suspension cell suspension of L929 cells was obtained. . The number of cells in the suspension of L929 cells in a suspension cell suspension was measured using a 0.4 w / v% trypan blue solution (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and a hemocytometer so as to be 5.3 × 10 ⁴ cells / cm ^2. A multiwell cell culture plate 24well (BD Falcon), the 6FDA / TPEQ membrane obtained in Example 1, a Petri dish for floating cells (Nunc) and an ultra-low adhesion surface 24-well plate (Corning), 37 Cultivation was carried out at 5 ° C. and 5% CO ₂ . The 6FDA / TPEQ membrane was used for cell culture after autoclaving. The phase contrast micrograph on the 5th day of culture is shown in FIG.

一般的に付着細胞の培養で使用されるマルチウェルセルカルチャープレート２４ｗｅｌｌ（ＢＤＦａｌｃｏｎ社）では単層状に細胞が増殖し細胞凝集塊の形成は見られなかったが、６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ膜、浮遊細胞用ペトリディッシュ（Ｎｕｎｃ社）及び超低接着表面２４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）では３次元的な構造の細胞凝集塊の形成が確認された。この細胞凝集塊は大きさが均一で、適度なサイズであり、また基材全面に均一にスフェロイドが分布していた。 In a multi-well cell culture plate 24well (BD Falcon), which is generally used for culturing adherent cells, cells were grown in a monolayer and cell aggregates were not formed, but for 6FDA / TPEQ membrane and floating cells The formation of cell aggregates having a three-dimensional structure was confirmed in the Petri dish (Nunc) and the ultra-low adhesion surface 24-well plate (Corning). This cell aggregate had a uniform size and an appropriate size, and the spheroids were uniformly distributed over the entire surface of the base material.

培養５日後に、各試験区の細胞を０．２５％トリプシン／５０ｍＭＥＤＴＡ溶液で処理後、０．４ｗ／ｖ％トリパンブルー溶液（和光純薬）及び血球計算盤を用いたトリパンブルー色素排除法による生細胞数の測定を行った。以下に培養５日目の各試験区の細胞の生存率を示した。 After 5 days of culturing, cells in each test section were treated with 0.25% trypsin / 50 mM EDTA solution, and then trypan blue dye exclusion method using 0.4 w / v% trypan blue solution (Wako Pure Chemical Industries) and a hemocytometer. The number of viable cells was measured by. The viability of cells in each test plot on the 5th day of culture is shown below.

本発明の６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ膜では、一般的に付着細胞の培養で使用されるセルカルチャープレートと同程度の高い生存率が確認されたが、浮遊細胞用ペトリディッシュ（Ｎｕｎｃ社）及び超低接着表面２４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）では死細胞が多く観察された。よって、６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ膜では生存率が高い細胞凝集塊を形成可能なことが確認された。 The 6FDA / TPEQ membrane of the present invention was confirmed to have the same high survival rate as that of the cell culture plate generally used for culturing adherent cells, but the Petri dish for floating cells (Nunc) and the ultra-low adhesion surface Many dead cells were observed in the 24-well plate (Corning). Therefore, it was confirmed that the 6FDA / TPEQ membrane can form a cell aggregate having a high survival rate.

２：ラット初代肝細胞の取得
Ｗｉｓｔａｒラット、オス、６週齢、体重１３０ｇを日本エスエルシー株式会社より購入した。ラット初代肝細胞の取得は培養細胞実験ハンドブック (羊土社) 第１０章、肝細胞記載の方法に従って実施した。具体的には、Ｗｉｓｔａｒラットをペントバルビタール麻酔下で開腹し、門脈にカテーテルを挿入して前かん流液（Ｃａ^２＋とＭｇ^２＋不含のＥＧＴＡ溶液）を注入した。同時に肝臓下部の下大静脈を切開して血液を放出させた。次に胸腔を開き、右心房に入る下大静脈を切開し、肝臓下部の下大静脈をかん止で止めてかん流を行った。肝臓からの脱血が十分になされたことを確認した後にかん流を止め、かん流液をコラゲナーゼ溶液に換えて、かん流を行った。細胞間組織がコラゲナーゼにより消化されたことを確認した後、かん流を止めた。肝臓を切り離し、ガラスシャーレに移した後、冷したハンクス溶液を添加して、ピペッティングにより細胞を分散させた。次に１５０ｍｍ濾過器により未消化の組織を除去した。細胞懸濁液は、５０Ｇ、１分の遠心分離を数回繰り返して非実質細胞を除去した。得られた肝細胞の生存率はトリパンブルー排除法で計測し、生存率７０％以上の肝細胞をラット初代肝細胞として培養試験に使用した。 2: Acquisition of rat primary hepatocytes Wistar rat, male, 6 weeks old, and weight 130 g were purchased from Japan SLC, Inc. The acquisition of rat primary hepatocytes was performed according to the method described in Hepatocytes, Chapter 10, Cultured Cell Experiment Handbook (Yodosha). Specifically, Wistar rats were laparotomized under pentobarbital anesthesia, a catheter was inserted into the portal vein, and a preperfusion fluid (Ca ²⁺ and Mg ²⁺ free EGTA solution) was injected. At the same time, the inferior vena cava of the lower part of the liver was incised to release blood. Next, the thoracic cavity was opened, the inferior vena cava entering the right atrium was incised, and the inferior vena cava under the liver was stopped by perfusion to perform perfusion. After confirming that the blood was sufficiently removed from the liver, the perfusion was stopped, the perfusate was replaced with a collagenase solution, and the perfusion was performed. After confirming that the intercellular tissue was digested with collagenase, perfusion was stopped. The liver was cut off, transferred to a glass petri dish, and a cold Hanks solution was added thereto to disperse the cells by pipetting. The undigested tissue was then removed with a 150 mm filter. Non-parenchymal cells were removed from the cell suspension by repeating centrifugation at 50 G for 1 minute several times. The survival rate of the obtained hepatocytes was measured by the trypan blue exclusion method, and hepatocytes having a survival rate of 70% or more were used in the culture test as rat primary hepatocytes.

３：ラット初代肝細胞の培養
前述の方法で取得したラット初代肝細胞を、以下組成の培地で懸濁し、５．３×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｃｍ^２となるようにマルチウェルセルカルチャープレート２４ｗｅｌｌ（ＢＤＦａｌｃｏｎ社）、６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ膜、ＮａｎｏＣｕｌｔｕｒｅ（登録商標）ＰｌａｔｅＭＳパターン／高接着／２４ウェル（サイバックス社）及びＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅマルチウェルプレート２４ｗｅｌｌ（住友ベークライト社）に播種し、３７℃，５％ＣＯ^２条件下で培養した。６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ膜は高圧蒸気滅菌処理後に細胞培養に使用した。培地は毎日交換した。なお、ＮａｎｏＣｕｌｔｕｒｅ（登録商標）ＰｌａｔｅＭＳパターン／高接着／２４ウェル（サイバックス社）には微細な凹凸が存在するため、細胞懸濁液を播種する前に以下の操作を行い、凹凸内の気泡を除去する脱気作業を実施した。 3: Culture of rat primary hepatocytes The rat primary hepatocytes obtained by the above-mentioned method were suspended in a medium having the following composition, and a multiwell cell culture plate 24well (BD was prepared so as to have a concentration of 5.3 × 10 ⁴ cells / cm ^2. Falcon), 6FDA / TPEQ membrane, NanoCulture (registered trademark) Plate MS pattern / high adhesion / 24 well (Cybacs) and PrimeSurface multiwell plate 24well (Sumitomo Bakelite Co., Ltd.), 37 ° C., 5% CO ² Cultured under conditions. The 6FDA / TPEQ membrane was used for cell culture after autoclaving. The medium was changed every day. Since NanoCulture (registered trademark) Plate MS pattern / high adhesion / 24 wells (Cybacs) have fine irregularities, the following operations are performed before seeding the cell suspension, and bubbles in the irregularities are performed. Degassing work was performed to remove.

脱気作業
・Ｗｉｌｌｉａｍ’ｓＥｍｅｄｉｕｍ（和光純薬）を１ｗｅｌｌあたり５００μＬづつ分注した。
・３００−５００×ｇ、３分間遠心分離。
・室温で３０分間静置。
培地組成
Ｗｉｌｌｉａｍ’ｓＥｍｅｄｉｕｍ（和光純薬）＋１０％ＦＢＳ（和光純薬）＋８．６ｎＭインスリン＋２５５ｎＭデキサメサゾン＋５０ｎｇ／ｍＬＥＧＦ＋５ＫＩＵ／ｍＬアプロチニン＋抗生物質（ペニシリン（１００ｕｎｉｔ／ｍＬ）／ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）／アムホテリシンＢ（０．２５μｇ／ｍＬ）） Deaeration work-William's E medium (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was dispensed at 500 µL per well.
-Centrifuge at 300-500 xg for 3 minutes.
-Stand for 30 minutes at room temperature.
Medium composition William's E medium (Wako Pure Chemical Industries) + 10% FBS (Wako Pure Chemical Industries) + 8.6 nM insulin + 255 nM dexamethasone + 50 ng / mL EGF + 5 KIU / mL aprotinin + antibiotics (penicillin) (100 units / 100 / units) (100 μg / mL) / amphotericin B (0.25 μg / mL))

培養５日目の位相差顕微鏡写真を図５に示した。
一般的に付着細胞の培養で使用されるマルチウェルセルカルチャープレート２４ｗｅｌｌ（ＢＤＦａｌｃｏｎ社）では単層状に細胞が増殖し細胞凝集塊の形成は見られなかったが、６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ膜、ＮａｎｏＣｕｌｔｕｒｅ（登録商標）ＰｌａｔｅＭＳパターン／高接着／２４ウェル（サイバックス社）及びＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅマルチウェルプレート２４ｗｅｌｌ（住友ベークライト社）では３次元的な構造の細胞凝集塊の形成が確認された。なお、ＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅマルチウェルプレート２４ｗｅｌｌ（住友ベークライト社）では細胞凝集塊は確認できたが、その数は極僅かであった。培地交換時に細胞が培地とともに除去されたと考えられる。加えて、ＰｌａｔｅＭＳパターン／高接着／２４ウェル（サイバックス社）及びＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅマルチウェルプレート２４ｗｅｌｌ（住友ベークライト社）で形成された細胞凝集塊は大きさが不均一で、かつ細胞凝集塊のほとんどがウェル中央部分に密集していた。一方で、本発明の培養基材上で培養した細胞凝集塊は大きさが均一で、かつ基材全面にスフェロイドが分布していた。 The phase contrast micrograph on the 5th day of culture is shown in FIG.
In the multi-well cell culture plate 24well (BD Falcon), which is generally used for culturing adherent cells, cells proliferated in a monolayer and no formation of cell aggregates was observed, but 6FDA / TPEQ membrane, NanoCulture (registered) (Trademark) Plate MS pattern / high adhesion / 24 well (Cybacs) and PrimeSurface multiwell plate 24well (Sumitomo Bakelite) confirmed formation of cell aggregates having a three-dimensional structure. In the PrimeSurface multiwell plate 24well (Sumitomo Bakelite Co., Ltd.), cell aggregates could be confirmed, but the number was extremely small. It is considered that the cells were removed together with the medium when the medium was replaced. In addition, the cell aggregates formed by Plate MS pattern / high adhesion / 24 well (Cybacs) and PrimeSurface multiwell plate 24well (Sumitomo Bakelite) are non-uniform in size, and most of the cell aggregates are It was dense in the center of the well. On the other hand, the cell aggregates cultured on the culture substrate of the present invention had a uniform size and spheroids were distributed over the entire surface of the substrate.

培養２４時間毎に０．２５％トリプシン／５０ｍＭＥＤＴＡ溶液で処理後、０．４ｗ／ｖ％トリパンブルー溶液（和光純薬）及び血球計算盤を用いて総細胞数の測定を行った。また、培養２４時間毎に培養液をサンプリングし、−２０℃で保存した。 After culturing every 24 hours, the cells were treated with a 0.25% trypsin / 50 mM EDTA solution, and then the total cell number was measured using a 0.4 w / v% trypan blue solution (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and a hemocytometer. The culture solution was sampled every 24 hours of culture and stored at -20 ° C.

４：免疫染色
培養５日目に６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ膜上に形成された細胞凝集塊のカドヘリン及びアクチンの免疫染色を実施した。具体的には、固定液として４％パラホルムアルデヒド／ＰＢＳ（−）溶液、ブロッキング液として０．１％ＢＳＡ添加ＰＢＳ（−）溶液、洗浄液として０．０５％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ／ＰＢＳ（−）溶液を使用した。また、抗体としては、Rabbit E-cadherin polyclonal antibody(Santa Cruz社)、Biotinylated anti-rabbit IgG antibody(Vector Laboratories社)、Streptavidin-Fluorescein(PerkinElumer社)、Rhodamine phalloidin(Invitrogen社)を使用し、共焦点レーザースキャン顕微鏡 LSM700 (ZEISS社）を使用して蛍光顕微鏡写真の撮影を行った。図６に蛍光顕微鏡像を示した。緑色がカドヘリン（図６Ａ）、赤色がアクチン（図６Ｂ）である。 4: Immunostaining On day 5 of culture, cadherin and actin of cell aggregates formed on the 6FDA / TPEQ membrane were immunostained. Specifically, a 4% paraformaldehyde / PBS (-) solution as a fixing solution, a 0.1% BSA-added PBS (-) solution as a blocking solution, and a 0.05% Triton-X / PBS (-) solution as a washing solution were used. used. As the antibody, Rabbit E-cadherin polyclonal antibody (Santa Cruz), Biotinylated anti-rabbit IgG antibody (Vector Laboratories), Streptavidin-Fluorescein (PerkinElumer), Rhodamine phalloidin (Invitrogen) are used, and confocal. Fluorescence micrographs were taken using a laser scanning microscope LSM700 (ZEISS). The fluorescence microscope image is shown in FIG. Green is cadherin (Fig. 6A) and red is actin (Fig. 6B).

これにより、６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ膜上に形成された細胞凝集塊がカドヘリンを発現したスフェロイドであることが確認された。 From this, it was confirmed that the cell aggregate formed on the 6FDA / TPEQ membrane was a spheroid expressing cadherin.

５：アルブミン定量
培養５日目の各試験区の培養液を用いてアルブミンの定量を実施した。アルブミンの定量にはRat Albumin ELISA Quantitation Set (Bethyl Laboratories社)を使用し、添付されているプロトコールに従ってアルブミンの定量実験を行った。各試験区のアルブミン定量の結果を図７に示した。なお、ＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅマルチウェルプレート２４ｗｅｌｌ（住友ベークライト社）ではアルブミンが検出されなかった。 5: Albumin quantitative culture The albumin was quantified using the culture solution of each test section on the 5th day. Rat Albumin ELISA Quantitation Set (Bethyl Laboratories) was used for the quantification of albumin, and the albumin quantification experiment was performed according to the attached protocol. The result of albumin quantification of each test group is shown in FIG. 7. Albumin was not detected in the PrimeSurface multiwell plate 24well (Sumitomo Bakelite Co., Ltd.).

凹凸がない６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ膜を使用してもＮａｎｏＣｕｌｔｕｒｅＰｌａｔｅＭＳパターン／高接着と同程度のアルブミン生成が可能であることがわかった。 It was found that even if the 6FDA / TPEQ film having no unevenness was used, albumin generation comparable to that of NanoCulture Plate MS pattern / high adhesion was possible.

＜他の基材を用いた細胞培養によるスフェロイドの形成＞
熱イミド化された６ＦＤＡ／ＡＦＤＭ膜（実施例２）、６ＦＤＡ／ＨＦＢＡＰＰ膜（実施例３）、６ＦＤＡ／ＢＡＰＰ膜（実施例４）、６ＦＤＡ／ＢＡＰＢ膜（実施例５）、６ＦＤＡ／ＯＤＡ膜（実施例６）、６ＦＤＡ／ＴＰＥＲ膜（実施例７）、６ＦＤＡ／ＴＦＭＢ膜（実施例９）を用いた培養試験を実施した。なお、各試験膜は高圧蒸気滅菌後に培養試験に使用した。上述と同様の方法でＷｉｓｔａｒラット、オス、６週齢、体重１３０ｇからラット初代肝細胞を取得し、上述と同様の培養条件及び培地を用いて培養試験を行った。培養５日目に位相差顕微鏡を用いて各試験区の培養細胞の様子を観察したところ、いずれの試験区においても細胞凝集塊の形成が確認された。 <Formation of spheroids by cell culture using other substrate>
Thermally imidized 6FDA / AFDM film (Example 2), 6FDA / HFBAPP film (Example 3), 6FDA / BAPP film (Example 4), 6FDA / BAPB film (Example 5), 6FDA / ODA film (Example 5) Culture tests using Example 6), 6FDA / TPER membrane (Example 7) and 6FDA / TFMB membrane (Example 9) were performed. Each test membrane was used for a culture test after autoclaving. Rat primary hepatocytes were obtained from Wistar rat, male, 6 weeks old, and body weight 130 g by the same method as described above, and a culture test was performed using the same culture conditions and medium as described above. On the 5th day of culture, the appearance of the cultured cells in each test section was observed using a phase contrast microscope, and formation of cell aggregates was confirmed in all test sections.

＜細胞培養によるスフェロイドの形成−３＞
１．ラット初代肝細胞の取得
ＳｐｅｃｉｆｉｃｖｉｒａｌｐａｔｈｏｇｅｎｆｒｅｅのＷｉｓｔａｒラット、オス、９週齢、体重２００ｇを日本エスエルシー株式会社より購入した。ラット初代肝細胞の取得は培養細胞実験ハンドブック (羊土社) 第１０章、肝細胞記載の方法を参考に実施した。具体的には、Ｗｉｓｔａｒラットをイソフルラン麻酔下で開腹し、門脈にカテーテルを挿入して以下の表４に示す組成の前かん流液を注入した。同時に肝臓下部の下大静脈を切開して血液を放出させた。次に胸腔を開き、右心房に入る下大静脈を切開し、肝臓下部の下大静脈をかん止で止めてかん流を行った。肝臓からの脱血が十分になされたことを確認した後にかん流を止め、かん流液を以下の表４に示す組成のコラゲナーゼ溶液に換えて、かん流を行った。細胞間組織がコラゲナーゼにより消化されたことを確認した後、かん流を止めた。肝臓を切り離し、ガラスシャーレに移した後、冷したハンクス溶液を添加して、ピペッティングにより細胞を分散させた。次に１５０ｍｍ濾過器により未消化の組織を除去した。細胞懸濁液は、５０Ｇ、１分の遠心分離を数回繰り返して非実質細胞を除去した。得られた肝細胞の生存率はトリパンブルー排除法で計測し、生存率８５％以上の肝細胞をラット初代肝細胞として培養試験に使用した。 <Spheroid formation by cell culture-3>
1. Acquisition of rat primary hepatocytes Wistar rats, male, 9 weeks old, and 200 g in body weight of Specific viral pathogen free were purchased from Japan SLC, Inc. The acquisition of rat primary hepatocytes was carried out with reference to the method described in Hepatocytes, Chapter 10, Cultured Cell Experiment Handbook (Yodosha). Specifically, Wistar rats were subjected to laparotomy under isoflurane anesthesia, a catheter was inserted into the portal vein, and a preperfusion solution having the composition shown in Table 4 below was injected. At the same time, the inferior vena cava of the lower part of the liver was incised to release blood. Next, the thoracic cavity was opened, the inferior vena cava entering the right atrium was incised, and the inferior vena cava under the liver was stopped by perfusion to perform perfusion. After confirming that blood was sufficiently removed from the liver, the perfusion was stopped, the perfusate was replaced with a collagenase solution having the composition shown in Table 4 below, and perfusion was performed. After confirming that the intercellular tissue was digested with collagenase, perfusion was stopped. The liver was cut off, transferred to a glass petri dish, and a cold Hanks solution was added thereto to disperse the cells by pipetting. The undigested tissue was then removed with a 150 mm filter. Non-parenchymal cells were removed from the cell suspension by repeating centrifugation at 50 G for 1 minute several times. The survival rate of the obtained hepatocytes was measured by the trypan blue exclusion method, and hepatocytes with a survival rate of 85% or more were used in the culture test as rat primary hepatocytes.

２．無血清培地を用いたラット初代肝細胞の培養
前述の方法で取得したラット初代肝細胞を、以下の表５に示す組成の無血清培地で懸濁し、１．３３×１０^４細胞／ｃｍ^２となるように、６．２５×１０^５細胞／ｍＬのラット初代肝細胞懸濁液０．４ｍＬを、ＮａｎｏＣｕｌｔｕｒｅＰｌａｔｅＭＳパターン／高接着／２４ウェル（サイバックス社）、ＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅマルチウェルプレート２４ｗｅｌｌ（住友ベークライト社）、及び６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ（実施例１）２４ｗｅｌｌプレートに添加し、３７℃，５％ＣＯ_２条件下で培養を行った。培地交換は播種後４時間、培養１日目、３日目、５日目に培地を全量除去後、無血清培地を０．４ｍＬ添加して行った。なお、ＮａｎｏＣｕｌｔｕｒｅＰｌａｔｅＭＳパターン／高接着／２４ウェル（サイバックス社）には微細な凹凸が存在するため、細胞懸濁液を播種する前に以下の操作を行い、凹凸内の気泡を除去する脱気作業を実施した。 2. Culturing of rat primary hepatocytes using serum-free medium The rat primary hepatocytes obtained by the method described above were suspended in a serum-free medium having the composition shown in Table 5 below to obtain 1.33 × 10 ⁴ cells / cm ² . As a result, 0.45 mL of a rat primary hepatocyte suspension containing 6.25 × 10 ⁵ cells / mL was added to NanoCulture Plate MS pattern / high adhesion / 24 wells (Cybacs), PrimeSurface multiwell plate 24well (Sumitomo Bakelite). And 6FDA / TPEQ (Example 1) on 24 well plates and cultured under the conditions of 37 ° C. and 5% CO ₂ . The medium was exchanged for 4 hours after seeding, and on the first, third, and fifth days of the culture, the entire amount of the medium was removed, and 0.4 mL of serum-free medium was added. Since the NanoCulture Plate MS pattern / high adhesion / 24 wells (Cybacs) have fine irregularities, the following operation is performed before seeding the cell suspension to remove bubbles in the irregularities. Careful work was carried out.

図１２に、培養５日目のＮａｎｏＣｕｌｔｕｒｅＰｌａｔｅＭＳパターン／高接着／２４ウェル（サイバックス社）（図１２Ａ）、ＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅマルチウェルプレート２４ｗｅｌｌ（住友ベークライト社）（図１２Ｂ）、及び６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ（実施例１）２４ｗｅｌｌプレート（図１２Ｃ）の位相差顕微鏡写真を示した。 In FIG. 12, NanoCulture Plate MS pattern / high adhesion / 24 wells (Cybacs) (FIG. 12A) on day 5 of culture, PrimeSurface multiwell plate 24well (Sumitomo Bakelite) (FIG. 12B), and 6FDA / TPEQ (implementation). Example 1) A phase contrast micrograph of a 24 well plate (FIG. 12C) is shown.

ＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅマルチウェルプレート２４ｗｅｌｌ（住友ベークライト社）では細胞凝集体を形成したが凝集体は培地中に浮遊し、大きな塊を形成していた（図１２Ｂ）。さらに、細胞の数も少なく、培地交換時に培地中に浮遊した細胞を培地とともに除去したことが原因と考えられる。また、ＮａｎｏＣｕｌｔｕｒｅＰｌａｔｅＭＳパターン／高接着／２４ウェル（サイバックス社）では一部凝集体の形成は確認できたが、大半の細胞は単層状に細胞が基材に付着していた（図１２Ａ）。一方で、ＦＤＡ／ＴＰＥＱ（実施例１）２４ｗｅｌｌプレートでは単層状に基材に付着した細胞は少なく、３次元的な構造の細胞凝集塊が形成された（図１２Ｃ）。 In the PrimeSurface multiwell plate 24well (Sumitomo Bakelite Co., Ltd.), cell aggregates were formed, but the aggregates floated in the medium and formed large clumps (FIG. 12B). Furthermore, the number of cells was small, and it is considered that the cells floating in the medium were removed together with the medium when the medium was replaced. In addition, formation of some aggregates could be confirmed in NanoCulture Plate MS pattern / high adhesion / 24 wells (Cybacs), but most cells were attached in a monolayer to the substrate (FIG. 12A). . On the other hand, in the FDA / TPEQ (Example 1) 24 well plate, the number of cells attached to the substrate in a single layer was small, and a cell aggregate having a three-dimensional structure was formed (FIG. 12C).

３．ＣＹＰ１Ａ活性測定
各培養５日目にＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅマルチウェルプレート２４ｗｅｌｌ（住友ベークライト社）及び６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ（実施例１）２４ｗｅｌｌプレート上の細胞を用いて、ＣＹＰ１Ａ活性の測定を実施した。培地を除去し、３−メチルコラントレンが終濃度で２μＭとなるように調整した上記無血清培地を添加した。培地を添加してから２４時間経過した後に、培地を除去した。次に、エトキシ−レゾルフィンが終濃度で１０μＭとなるように調整した上記無血清培地を添加して、３７℃，５％ＣＯ_２条件下で７５分インキュベートした。インキュベート後の各ウェル内の蛍光強度を蛍光光度計を用いて測定した。結果を図１３に示した。 3. CYP1A activity measurement CYP1A activity was measured using cells on PrimeSurface multiwell plate 24well (Sumitomo Bakelite Co., Ltd.) and 6FDA / TPEQ (Example 1) 24well plate on the 5th day of each culture. The medium was removed and the above serum-free medium adjusted so that the final concentration of 3-methylcholanthrene was 2 μM was added. The medium was removed 24 hours after the medium was added. Next, the serum-free medium adjusted so that the final concentration of ethoxy-resorufin was 10 μM was added, and the mixture was incubated at 37 ° C. under 5% CO ₂ for 75 minutes. The fluorescence intensity in each well after incubation was measured using a fluorometer. The results are shown in Fig. 13.

６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ（実施例１）２４ｗｅｌｌプレート上の細胞と比較して、ＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅマルチウェルプレート２４ｗｅｌｌ（住友ベークライト社）上の細胞はＣＹＰ１Ａ活性が低い値となった。ＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅマルチウェルプレート２４ｗｅｌｌ（住友ベークライト社）上の細胞は大きな塊を形成していたために、細胞塊中央部の細胞に培地成分や酸素が十分に供給されなかったため、細胞の機能が低下したと考えられる。また、ＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅマルチウェルプレート２４ｗｅｌｌ（住友ベークライト社）上の大きな細胞塊では、３−メチルコラントレンやエトキシ−レゾルフィンの細胞内への取り込みが効率的に行われずＣＹＰ１Ａ遺伝子の発現量が低下したことも原因と考えられる。 The cells on the PrimeSurface multiwell plate 24well (Sumitomo Bakelite Co., Ltd.) had lower CYP1A activity than the cells on the 6FDA / TPEQ (Example 1) 24well plate. The cells on the PrimeSurface multiwell plate 24well (Sumitomo Bakelite Co., Ltd.) formed large clumps, and it was considered that the functions of the cells were deteriorated because the medium components and oxygen were not sufficiently supplied to the cells in the central part of the cell clumps. To be In addition, in a large cell mass on the PrimeSurface multiwell plate 24well (Sumitomo Bakelite Co., Ltd.), 3-methylcholanthrene and ethoxy-resorufin were not efficiently taken up into the cell, and the expression level of the CYP1A gene was decreased. Probably the cause.

４．血清培地を用いたラット初代肝細胞の培養
前述の方法で取得したラット初代肝細胞を、以下組成の血清培地で懸濁し、１．３３×１０^４細胞／ｃｍ^２となるように、６．２５×１０^５細胞／ｍＬのラット初代肝細胞懸濁液０．４ｍＬを、コラーゲンタイプＩコートマイクロプレート２４ウェル（旭硝子社）、ＮａｎｏＣｕｌｔｕｒｅＰｌａｔｅＭＳパターン／高接着／２４ウェル（サイバックス社）、ＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅマルチウェルプレート２４ｗｅｌｌ（住友ベークライト社）、Ｌｕｍｏｘマルチウェルプレート２４ウェル（グライナー社）、及び６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ（実施例１）２４ｗｅｌｌプレートに添加し、３７℃，５％ＣＯ_２条件下で培養を行った。培地交換は播種後４時間、培養１日目、３日目、５日目に培地を全量除去後、血清培地を０．４ｍＬ添加して行った 4. Culturing of rat primary hepatocytes using serum medium The rat primary hepatocytes obtained by the above-mentioned method were suspended in a serum medium having the following composition to give a concentration of 6.25 × 10 ⁴ cells / cm ^2. 0.4 mL of a primary rat hepatocyte suspension of × 10 ⁵ cells / mL was used in 24 wells of collagen type I-coated microplate (Asahi Glass Co., Ltd.), NanoCulture Plate MS pattern / high adhesion / 24 wells (Cybacs), PrimeSurface Multi. It was added to a well plate 24well (Sumitomo Bakelite Co., Ltd.), a Lumox multiwell plate 24well (Greiner Co., Ltd.), and a 6FDA / TPEQ (Example 1) 24well plate, and cultured at 37 ° C. under 5% CO ₂ condition. The medium was exchanged for 4 hours after seeding, on the first day, third day, and fifth day of the culture, after removing all the medium, 0.4 mL of serum medium was added.

血清培地の組成
Ｗｉｌｌｉａｍ’ｓＥｍｅｄｉｕｍ（和光純薬）＋１０％ＦＢＳ（和光純薬）＋８．６ｎＭインスリン＋２５５ｎＭデキサメサゾン＋５０ｎｇ／ｍＬＥＧＦ＋５ＫＩＵ／ｍＬアプロチニン＋抗生物質（ペニシリン（１００ｕｎｉｔ／ｍＬ）／ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）／アムホテリシンＢ（０．２５μｇ／ｍＬ）） Composition of serum medium William's E medium (Wako Pure Chemical) + 10% FBS (Wako Pure Chemical) + 8.6 nM insulin + 255 nM dexamethasone + 50 ng / mL EGF + 5 KIU / mL aprotinin + antibiotics (penicillin (100 unit / mL) / streptomycin (100 μg / 100 μg / 100 μg / mL) / amphotericin B (0.25 μg / mL))

培養５日目の各ウェル上の細胞の位相差顕微鏡写真を図１４に示した。
コラーゲンタイプＩコートマイクロプレート２４ウェル（旭硝子社）（図１４Ａ）及びＬｕｍｏｘマルチウェルプレート２４ウェル（グライナー社）（図１４Ｄ）では多数の細胞が単層状に増殖し細胞凝集塊の形成はほとんど見られなかった。また、ＮａｎｏＣｕｌｔｕｒｅＰｌａｔｅＭＳパターン／高接着／２４ウェル（サイバックス社）（図１４Ｂ）及びＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅマルチウェルプレート２４ｗｅｌｌ（住友ベークライト社）（図１４Ｃ）では細胞凝集塊は形成されたが細胞凝集塊は基材には付着せずに培地中に浮遊しており、浮遊した細胞凝集塊同士がさらに大きな塊を形成していた。細胞凝集塊のサイズが大きすぎると細胞凝集塊中央部の細胞まで培地成分や酸素が供給されないため、中央部の細胞が壊死することが知られている。一方で、６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ（実施例１）２４ｗｅｌｌプレートでは適度な大きさの細胞凝集塊が基材に付着した状態でウェル全体に均一に分布して形成された（図１４Ｅ）。細胞凝集塊が基材に付着したことで、細胞凝集塊同士が会合することが抑制され、適度な大きさを保てていると考えられる。さらに、細胞凝集塊が基材に付着していることで、培地交換時に培地とともに細胞が取り除かれることも抑制されたと考えられる。 The phase contrast micrograph of the cells on each well on the 5th day of culture is shown in FIG.
In the collagen type I-coated microplate 24 wells (Asahi Glass Co., Ltd.) (FIG. 14A) and the Lumox multiwell plate 24 wells (Greiner Co., Ltd.) (FIG. 14D), a large number of cells proliferated in a monolayer, and formation of cell aggregates was almost observed. There wasn't. In addition, in the NanoCulture Plate MS pattern / high adhesion / 24 wells (Cybacs) (FIG. 14B) and PrimeSurface multiwell plate 24well (Sumitomo Bakelite Co., Ltd.) (FIG. 14C), cell clumps were formed, but the cell clumps were the bases. They did not adhere to the material and floated in the medium, and the floating cell aggregates formed larger clusters. It is known that when the size of the cell aggregate is too large, the medium component and oxygen are not supplied to the cells in the center of the cell aggregate, and the cells in the center are necrotic. On the other hand, in the 6FDA / TPEQ (Example 1) 24 well plate, cell aggregates of appropriate size were formed uniformly distributed throughout the well in a state of being attached to the substrate (FIG. 14E). It is considered that the attachment of the cell aggregates to the base material suppresses the association of the cell aggregates with each other and maintains the appropriate size. Furthermore, it is considered that the cell aggregates attached to the base material also suppressed the removal of cells together with the medium when the medium was replaced.

５．アルブミン定量
培養５日目の各試験区の培養液を用いてアルブミンの定量を実施した。アルブミンの定量にはRat Albumin ELISA Quantitation Set (Bethyl Laboratories社)を使用し、添付されているプロトコールに従ってアルブミンの定量実験を行った。各試験区のアルブミン定量の結果を図１５に示した。 5. Quantification of albumin Quantification of albumin was carried out using the culture solution of each test section on the 5th day of culturing albumin. Rat Albumin ELISA Quantitation Set (Bethyl Laboratories) was used for the quantification of albumin, and the albumin quantification experiment was performed according to the attached protocol. The result of albumin quantification of each test group is shown in FIG.

６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ（実施例１）２４ｗｅｌｌプレートでもっとも高いアルブミン生成を確認した。６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ（実施例１）２４ｗｅｌｌプレート上で形成された適切な大きさの細胞凝集塊では効率的に培地成分や酸素が細胞に供給され、高い肝機能を発現したと考えられる。 The highest albumin production was confirmed in 6 FDA / TPEQ (Example 1) 24 well plate. 6FDA / TPEQ (Example 1) It is considered that the medium components and oxygen were efficiently supplied to the cells in the cell aggregate of appropriate size formed on the 24 well plate, and high liver function was expressed.

６．ＨｅｐＧ２細胞の培養
ＨｅｐＧ２細胞をＤＳファーマバイオメディカル社より購入した。ＨｅｐＧ２細胞を、終濃度１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）（ＤＳファーマバイオメディカル社）、１００×ＭＥＭ用非必須アミノ酸（ＤＳファーマバイオメディカル社）、及び終濃度２ｍＭのグルタミン溶液（ＤＳファーマバイオメディカル社）を添加したＥＭＥＭ培地（ＤＳファーマバイオメディカル社）で懸濁し、１００ｍｍセルカルチャーディッシュ（ＢＤＦａｌｃｏｎ社）に播種、３７℃，５％ＣＯ_２条件下で培養した。７０％コンフルエントの状態となるまで培養後、０．２５％トリプシン／５０ｍＭＥＤＴＡ溶液で処理、前述の培地を添加してトリプシン反応を停止させ、ＨｅｐＧ２細胞の浮遊細胞懸濁液を得た。ＨｅｐＧ２細胞の浮遊細胞懸濁液中の細胞数を０．４ｗ／ｖ％トリパンブルー溶液（和光純薬）を用いて測定し、３．１３×１０^４細胞／ｃｍ^２となるようにマルチウェルセルカルチャープレート２４ｗｅｌｌ（ＢＤＦａｌｃｏｎ社）、６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ膜（実施例１）、ＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅマルチウェルプレート２４ｗｅｌｌ（住友ベークライト社）に播種し、３７℃，５％ＣＯ_２条件下で培養した。培養４日目に培地全量を除去後、前述の培地１ｍＬを添加して培地交換を実施した。なお、６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ膜は高圧蒸気滅菌処理後に細胞培養に使用した。 6. Culture of HepG2 cells HepG2 cells were purchased from DS Pharma Biomedical. HepG2 cells were treated with a final concentration of 10% fetal bovine serum (FBS) (DS Pharma Biomedical), 100 × MEM non-essential amino acids (DS Pharma Biomedical), and a final concentration of 2 mM glutamine solution (DS Pharma Biomedical). Suspended in EMEM medium (DS Pharma Biomedical Co., Ltd.) to which 100 mm cell culture dish (BD Falcon) was added, and cultured at 37 ° C. under 5% CO ₂ condition. After culturing until it became 70% confluent, it was treated with a 0.25% trypsin / 50 mM EDTA solution, the trypsin reaction was stopped by adding the above-mentioned medium, and a suspension cell suspension of HepG2 cells was obtained. The number of cells in the HepG2 cell suspension cell suspension was measured using a 0.4 w / v% trypan blue solution (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), and the multiwell cell was adjusted to 3.13 × 10 ⁴ cells / cm ^2. A culture plate 24well (BD Falcon), a 6FDA / TPEQ membrane (Example 1), and a PrimeSurface multiwell plate 24well (Sumitomo Bakelite Co., Ltd.) were seeded and cultured under conditions of 37 ° C. and 5% CO ₂ . On the 4th day of culture, the entire amount of the medium was removed, and then 1 mL of the above-mentioned medium was added to perform medium exchange. The 6FDA / TPEQ membrane was used for cell culture after autoclaving.

培養７日目の倒立顕微鏡写真を図１６に示した。
一般的に付着細胞の培養で使用されるマルチウェルセルカルチャープレート２４ｗｅｌｌ（ＢＤＦａｌｃｏｎ社）では単層状に細胞が増殖し細胞凝集塊の形成は見られなかった（図１６Ａ）。またＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅマルチウェルプレート２４ｗｅｌｌ（住友ベークライト社）では細胞凝集塊は形成されたが細胞凝集塊は基材には付着せずに培地中に浮遊しており、浮遊した細胞凝集塊同士がさらに大きな塊を形成していた（図１６Ｂ）。細胞凝集塊のサイズが大きすぎると細胞凝集塊中央部の細胞まで培地成分や酸素が供給されないため、中央部の細胞が壊死することが知られている。一方で、６ＦＤＡ／ＴＰＥＱ膜（実施例１）上では適度な大きさの細胞凝集塊が基材に付着した状態でウェル全体に均一に分布して形成された（図１６Ｃ）。細胞凝集塊が基材に付着したことで、細胞凝集塊同士が会合することが抑制され、適度な大きさを保てていると考えられる。さらに、細胞凝集塊が基材に付着していることで、培地交換時に培地とともに細胞が取り除かれることも抑制されたと考えられる。 The inverted micrograph of the 7th day of culture is shown in FIG.
In a multi-well cell culture plate 24well (BD Falcon), which is generally used for culturing adherent cells, cells proliferated in a monolayer and no formation of cell aggregates was observed (Fig. 16A). Also, in PrimeSurface Multiwell Plate 24well (Sumitomo Bakelite Co., Ltd.), cell aggregates were formed, but the cell aggregates did not adhere to the base material and floated in the medium, and the suspended cell aggregates were larger. Had been formed (FIG. 16B). It is known that when the size of the cell aggregate is too large, the medium component and oxygen are not supplied to the cells in the center of the cell aggregate, and the cells in the center are necrotic. On the other hand, on the 6FDA / TPEQ membrane (Example 1), cell aggregates having an appropriate size were formed in a state in which they were evenly distributed throughout the well while being attached to the substrate (FIG. 16C). It is considered that the attachment of the cell aggregates to the base material suppresses the association of the cell aggregates with each other and maintains the appropriate size. Furthermore, it is considered that the cell aggregates attached to the base material also suppressed the removal of cells together with the medium when the medium was replaced.

Claims

A cell culture substrate comprising at least a part of the surface of a resin composition containing a polyimide,
The polyimide is a fluorine-containing polyimide obtained by imidizing polyamic acid by heat treatment, and having one or more fluorine atoms in the repeating unit.
The polyimide has the formula (V)

An aromatic polyimide containing a repeating unit structure represented by:
p is 1 ,
X ¹ is
Group x1:
-C _(CF _{3) 2} -
And
^{^{^{^{Z 1, Z 2, Z 3}}}} , Z 4, Z 5 and ^{Z 6} are all hydrogen atoms,
Y ¹ is
Group y1:

Group y2:

Group y3:

Group y4:

Group y5:

Group y6:

Group y8:

as well as,
Group y9:

Ru at least 1 Tanedea selected from the group consisting of
Cell culture substrate, wherein the this.

The polyimide is a polyimide obtained by imidizing a polyamic acid obtained by polymerizing one kind or two or more kinds of acid dianhydride and diamine, respectively, by heat treatment,
At least one compound of the acid dianhydride and the diamine has a fluorine atom in the molecule,
The acid dianhydride has the formula (1)

Is represented by
The diamine has the formula (2)

Is represented by
X ⁰ is the formula (E ¹ )

Is a group represented by
Y ⁰ is Y ¹ .
The cell culture substrate according to claim 1.

The substrate for cell culture according to claim 1 or 2, wherein the resin composition has a fluorine content of 1 to 60 mass% and an imidization ratio of 20% or more.

The cell culture substrate according to any one of claims 1 to 3, wherein the imidization of the polyamic acid by heat treatment is performed in the absence of a tertiary amine compound.

A cell culture substrate comprising at least a part of the surface of a resin composition containing a polyimide,
The polyimide is a fluorine-containing polyimide obtained by imidizing polyamic acid by heat treatment, and having one or more fluorine atoms in the repeating unit.
The amount of the tertiary amine compound in the resin composition is 0.030 mass% or less with respect to the total amount of the polyimide and the remaining polyamic acid in the resin composition,
The polyimide has the formula (V)

Group y2:

Group y3:

Group y4:

Group y5:

Group y6:

Group y8:

as well as,
Group y9:

A cell culture substrate comprising at least a part of the surface of a resin composition containing a polyimide,
The polyimide is a polyimide obtained by reacting one or more kinds of acid dianhydride and diamine,
The amount of the tertiary amine compound in the resin composition is 0.030 mass% or less with respect to the total amount of the polyimide and the remaining polyamic acid in the resin composition,
At least one compound of the acid dianhydride and the diamine has a fluorine atom in the molecule,
The acid dianhydride has the formula (1)

Is represented by
The diamine has the formula (2)

Is represented by
X ⁰ is the formula (E ¹ )

Is a group represented by
Y ⁰ is Y ¹ ,
p is 1 ,
X ¹ is
Group x1:
-C _(CF _{3) 2} -
And
^{^{^{^{Z 1, Z 2, Z 3}}}} , Z 4, Z 5 and ^{Z 6} are all hydrogen atoms,
Y ¹ is
Group y1:

Group y2:

Group y3:

Group y4:

Group y5:

Group y6:

Group y8:

as well as,
Group y9:

The cell culture substrate according to claim 5 or 6, wherein the resin composition has a fluorine content of 1 to 60 mass% and an imidization ratio of 20% or more.

A container for cell culture,
A container for cell culture, wherein at least a part of the container is composed of the substrate for cell culture according to any one of claims 1 to 7.

A method of culturing cells,
A method comprising culturing cells on the surface of the substrate according to any one of claims 1 to 7 constituted by the resin composition.

A method of three-dimensionally culturing cells, comprising:
A method comprising three-dimensionally culturing cells on the surface of the substrate according to any one of claims 1 to 7 formed by the resin composition.

The method according to claim 10, wherein the three-dimensional tissue is a spheroid or a three-dimensional cell aggregate.

A method for producing a cell culture substrate comprising a film composed of a resin composition containing polyimide on at least a part of the surface,
Forming a film of a solution in which a polyamic acid having one or more fluorine atoms in the molecule is dissolved in a solvent;
A step of forming the film by imidizing the polyamic acid in the film by heat-treating the film,
The polyamic acid has the formula (I)

Including a polymerized unit represented by
p is 1 ,
X ¹ is
Group x1:
-C _(CF _{3) 2} -
And
^{^{^{^{Z 1, Z 2, Z 3}}}} , Z 4, Z 5 and ^{Z 6} are all hydrogen atoms,
Y ¹ is
Group y1:

Group y2:

Group y3:

Group y4:

Group y5:

Group y6:

Group y8:

as well as,
Group y9:

Ru at least 1 Tanedea selected from the group consisting of,
Method.

A method for producing a cell culture substrate comprising a film composed of a resin composition containing polyimide on at least a part of the surface,
A polyamic acid obtained by polymerizing one kind or two or more kinds of acid dianhydride and diamine, respectively, wherein at least one compound of the acid dianhydride and the diamine has a fluorine atom in the molecule. Forming a film of a solution of polyamic acid dissolved in a solvent,
A step of forming the film by imidizing the polyamic acid in the film by heat-treating the film,
The acid dianhydride has the formula (1)