JP5758174B2

JP5758174B2 - Antioxidants and antioxidant cosmetics

Info

Publication number: JP5758174B2
Application number: JP2011079710A
Authority: JP
Inventors: 田中　弘; 弘田中
Original assignee: Naris Cosmetics Co Ltd
Current assignee: Naris Cosmetics Co Ltd
Priority date: 2011-03-31
Filing date: 2011-03-31
Publication date: 2015-08-05
Anticipated expiration: 2031-03-31
Also published as: JP2012214392A

Description

本発明は、特定培地で培養したＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ酵母の菌体抽出液からなることを特徴とする抗酸化剤、およびこれを配合した化粧料に関する。 TECHNICAL FIELD The present invention relates to an antioxidant comprising a cell extract of Saccharomyces cerevisiae yeast cultured in a specific medium, and a cosmetic containing the same.

近年、老化の原因としてフリーラジカルや活性酸素がとりあげられ、生体成分の酸化による機能低下が大きな問題となっている。なかでも紫外線に常にさらされている皮膚は、このような酸化ストレスのダメージが最も大きな器官の一つであり、紫外線により発生した種々の活性酸素が、皮脂や脂質の過酸化、蛋白変性、酵素阻害等を引き起こし、皮膚の炎症などの原因となる。また、紫外線により真皮のヒアルロン酸やコラーゲンの産生が低下すると共に、コラーゲンの変性が生じ、肌の弾力やハリが低下しシワの原因になる。さらに、表皮細胞が紫外線に照射されると各種のサイトカインを産生し、メラニン産生を増大させることが知られている。例えばエンドセリンやチオレドキシンなどのサイトカインは、紫外線照射により表皮細胞から産生され、メラノサイトに働きかけてメラニン産生を促進させ光老化によるシミの原因になっている。これら紫外線が原因となって生じるシワ・シミを防ぐ方法の一つにフリーラジカルや活性酸素を除去する抗酸化剤を配合する方法が知られている。 In recent years, free radicals and active oxygen have been taken up as causes of aging, and functional degradation due to oxidation of biological components has become a major problem. The skin that is constantly exposed to ultraviolet rays is one of the organs that are most damaged by such oxidative stress, and various active oxygen generated by ultraviolet rays is used to peroxidize sebum and lipids, protein denaturation, enzymes Causes inhibition and other causes of skin irritation. In addition, the production of hyaluronic acid and collagen in the dermis is reduced by ultraviolet rays, and collagen is denatured, and the elasticity and firmness of the skin is reduced, causing wrinkles. Furthermore, it is known that when epidermal cells are irradiated with ultraviolet rays, various cytokines are produced and melanin production is increased. For example, cytokines such as endothelin and thioredoxin are produced from epidermal cells by ultraviolet irradiation and act on melanocytes to promote melanin production and cause spots due to photoaging. As one of methods for preventing wrinkles and spots caused by ultraviolet rays, a method of blending an antioxidant that removes free radicals and active oxygen is known.

生体は活性酸素種を除去する自己防御機構としてＳＯＤなどの抗酸化機構を有しているものの、生体組織の防御能力を超えた活性酸素が生体組織の老化の原因となっている。フリーラジカルを捕捉する能力を備える抗酸化剤は、ラジカル連鎖反応を抑制・停止させることができるので、このような抗酸化剤を配合した皮膚外用剤は、光酸化ストレスによる皮膚老化、例えば、シミ、しわ、たるみなどの予防・改善効果が期待できる。このため、従来より光老化によるシワ防止を目的として用いられるフリーラジカル消去剤にはアスコルビン酸、トコフェロール、３，５−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）等が用いられてきた。 Although the living body has an antioxidant mechanism such as SOD as a self-protecting mechanism for removing reactive oxygen species, active oxygen exceeding the defense ability of living tissue causes aging of living tissue. Antioxidants with the ability to scavenge free radicals can suppress and stop the radical chain reaction. Therefore, topical skin preparations containing such antioxidants can cause skin aging due to photooxidative stress, such as stains. Can be expected to prevent, improve wrinkles and sagging. For this reason, ascorbic acid, tocopherol, 3,5-tert-butyl-4-hydroxytoluene (BHT), superoxide dismutase (SOD) and the like have been conventionally used for the purpose of preventing wrinkles due to photoaging. Has been used.

しかし、皮膚の光老化防止又は抗酸化を目的として用いられるＳＯＤは不安定であり、製剤化が難しく、トコフェロールも効果が充分であるとは言えない。また、合成化合物であるＢＨＴ等は安全性に問題があり、配合量に制限があることから、化学合成品ではなく、安定でかつ副作用が少ないとともにより効果の高い天然原料が望まれてきた。 However, SOD used for the purpose of preventing skin photoaging or anti-oxidation is unstable, difficult to formulate, and tocopherol is not effective enough. Moreover, since BHT etc. which are synthetic compounds have a safety | security problem and there exists a restriction | limiting in compounding quantity, it is not a chemically synthesized product but the natural raw material which is stable and has few side effects, and was more effective has been desired.

抗酸化性の高い天然物質として、健康食品や化粧品にはハーブ植物が多く用いられてきた。しかし、これらの植物抽出物は色、臭いが強く、化粧料に配合するには脱色、脱臭などの精製処理を施す必要があり、その際に抗酸化効果が減少することが多く、充分な効果を有する抽出物を得ることが困難であった。 As a natural substance with high antioxidant properties, herb plants have been used in health foods and cosmetics. However, these plant extracts are strong in color and odor, and need to be subjected to purification treatments such as decoloring and deodorizing in order to be incorporated into cosmetics. It was difficult to obtain an extract having

酵母の菌体抽出液には抗酸化効果があることは既に知られており、特開平８−１００１７５（特許文献１）には、酵母を細胞壁溶解酵素あるいはタンパク質分解酵素により処理し抽出した水溶性の抗酸化作用を有する酵母タンパク質分解物の記載がなされている。 It is already known that the yeast cell extract has an antioxidant effect, and JP-A-8-1000017 (Patent Document 1) discloses a water-soluble extract obtained by treating yeast with a cell wall lytic enzyme or a proteolytic enzyme. There is a description of a yeast protein degradation product having an antioxidative action.

また、培地に植物体を添加して発酵させた組成物を利用するものとして、特開２００４−１４１１６３（特許文献２）には、モモタマナ（Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａｃａｔａｐｐａ）の葉を乳酸菌、酵母を用いて発酵させた組成物が、特開２００４−７３０５０（特許文献３）には、ミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）植物及び／又はキク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）植物を、乳酸菌、酵母を用いて発酵させた発酵組成物、特開２００２−３３５８８１（特許文献４）には、イチゴ、イチジク、ウメ、ブルーベリー、ラズベリー、リンゴ、キウイ等の果実、あるいは柑橘類の皮を加熱殺菌し、酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
を接種して発酵させた組成物が記載されている。 Moreover, as what utilizes the composition fermented by adding the plant body to a culture medium, Unexamined-Japanese-Patent No. 2004-141163 (patent document 2) is made to ferment the leaf of a motama mana (Terminalia catappa) using lactic acid bacteria and yeast. JP-A-2004-73050 (Patent Document 3) discloses a fermented composition obtained by fermenting a Rutaceae plant and / or Asteraceae plant using lactic acid bacteria and yeast, In 2002-335881 (Patent Document 4), fruits such as strawberries, figs, ume, blueberries, raspberries, apples and kiwi, or citrus peels are heat sterilized, and then yeast Saccharomyces cerevisiae.
A composition that has been inoculated and fermented is described.

さらに、培地に植物抽出物を添加して発酵させた組成物を利用するものとして、特開２００４−４３５０５（特許文献５）には、グアバ抽出物と、米糠類、大豆類及び炭素源を含む培地に微生物を接種し、発酵培養して得られる米糠・大豆発酵物を含有することを特徴とする発酵組成物が記載されている。 Furthermore, as what uses the composition which added the plant extract to the culture medium and was fermented, Unexamined-Japanese-Patent No. 2004-43505 (patent document 5) contains a guava extract, rice bran, soybeans, and a carbon source. A fermentation composition characterized by containing a rice bran / soybean fermented product obtained by inoculating a culture medium with a microorganism and fermenting culture is described.

特許２６１８２８６（特許文献６）には、スイカズラ（金銀花）を添加した培養物の記載がなされている。当該特許は酵母菌を培養した後に、スイカズラなどの植物抽出液を混合して利用するものであり、本発明に記載した金銀花抽出液を酵母菌の培養によって、臭い、色を除去し、かつ、金銀花の有する抗酸化効果を減ずることなく利用できるようにした本願発明とは全く異なるものである。 Japanese Patent No. 2618286 (Patent Document 6) describes a culture to which honeysuckle (gold and silver flowers) is added. The patent uses a mixture of plant extracts such as honeysuckle after culturing yeast, and removes odor and color from the gold and silver flower extract described in the present invention by culturing yeast, and This is completely different from the present invention in which the antioxidant effect of gold and silver flowers can be used without reducing.

特開平５−３３６９５３（特許文献７）では、月桂樹、ニンニク、タマネギ、オレガノ、ローズマリー、サルビア、タイム、生姜、クローブ、キャラウェー、松、檜、楠、竹を配合したことを特徴とする微生物培養用培地が記載されている。しかし、記載されている内容は、微生物の中でも細菌類（とりわけ嫌気性菌）には、培養に伴いインドールなどの硫化化合物、酢酸アミル、トリメチルアミンなどの臭気の強い化合物を産生し悪臭を発するものが多いため、上記のような植物体からの抽出物を、消臭物質として培地に添加している。これらの成分は、揮発性を有するため培養中に微量ずつ揮発する。
このため、培養に伴い微生物から産生される成分が、上記の揮発性の成分と反応することにより微生物が産生する悪臭を脱臭することを目的としている。上記特許は、微生物用培養培地と記載されているが、具体的には細菌用培地に関する内容しか記載されておらず、すべての微生物にその効果が適用されると納得できるデータも説明も明細書には記載されていない。また、上記特許の内容は、細菌が代謝する硫化化合物、およびアミン物質を上記の植物抽出物の臭いでマスキングしようとするものであり、植物抽出物の臭い自体を減じようとするものではない。しかし、本願特許は、植物抽出液自体の臭い、色を減じることを目的として、酵母菌の培養培地に植物抽出液を添加してその臭い、色を減じるものである。また、酵母菌は分類上も原核生物である細菌とは異なる真核生物であり、かつ清酒の吟醸講に代表されるように、代謝により硫化化合物、アミン化合のような不快な臭気を出すものではないことは明らかであり、本願特許とは全く異なるものである。 In JP-A-5-336953 (Patent Document 7), a microorganism characterized by blending laurel, garlic, onion, oregano, rosemary, salvia, thyme, ginger, clove, caraway, pine, bamboo shoots, bamboo A culture medium is described. However, what is described is that microorganisms (especially anaerobic bacteria) produce microorganisms (especially anaerobic bacteria) that produce strong odor compounds such as sulfur compounds such as indole, amyl acetate, and trimethylamine, and produce malodors. Since there are many, the extract from the above plant bodies is added to the culture medium as a deodorizing substance. Since these components are volatile, they are volatilized in small amounts during the culture.
For this reason, it aims at deodorizing the malodor which a microbe produces by the component produced from a microorganism accompanying culture | cultivation reacting with said volatile component. Although the above patent is described as a culture medium for microorganisms, it specifically describes only the contents related to the culture medium for bacteria, and the description, description and description that can be accepted when the effect is applied to all microorganisms. Is not listed. In addition, the contents of the above patent are intended to mask sulfur compounds and amine substances that are metabolized by bacteria with the odor of the above plant extract, and are not intended to reduce the odor of the plant extract itself. However, in this patent, for the purpose of reducing the smell and color of the plant extract itself, the plant extract is added to the yeast culture medium to reduce the smell and color. In addition, yeasts are eukaryotes that are different from prokaryotic bacteria in terms of classification, and, as represented by the sake brewing course of sake, give off unpleasant odors such as sulfur compounds and amine compounds. It is clear that this is not the case and is quite different from the patent of the present application.

上記に記載したように培地に各種植物抽出物を添加し、各種微生物を用いて培養した組成物が記載されている。しかしながら、金銀花および女貞子の抽出液を完全合成培地に添加し、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ酵母菌で培養し、培養後の菌体抽出液を利用した抗酸化剤の記載はなされていない。 As described above, a composition in which various plant extracts are added to a medium and cultured using various microorganisms is described. However, there is no description of an antioxidant using the extract of gold and silver flowers and Sadako on a completely synthetic medium, culturing with Saccharomyces cerevisiae yeast, and using the cell extract after the culture.

特開平８−１００１７５号公報Japanese Patent Laid-Open No. 8-100195 特開２００４−１４１１６３号公報JP 2004-141163 A 特開２００４−７３０５０号公報JP 2004-73050 A 特開２００２−３３５８８１号公報JP 2002-335881 A 特開２００４−４３５０５号公報JP 2004-43505 A 特許２６１８２８６公報Japanese Patent No. 2618286 特開平５−３３６９５３号公報JP-A-5-336953

上述の技術文献のように、各種培地にて微生物を培養した培養組成物を得ているが、いずれも満足いく効果ではなかった。そこで、本願においては、これまでにない高い抗酸化効果を有する培養組成物を開発し、化粧料に応用することを課題とする。 Like the above-mentioned technical literature, although the culture composition which culture | cultivated microorganisms with various culture media was obtained, all were not a satisfactory effect. Therefore, an object of the present application is to develop a culture composition having an unprecedented high antioxidant effect and apply it to cosmetics.

さらに、本発明において培地に添加する植物抽出液は、その植物抽出液単独でもこれまで多くの化粧料に利用されてきた。しかし、いずれも抽出物の色、臭いが強く、脱色、脱臭などの精製を行う必要があり、その際に抗酸化効果も減少することが多く、充分な効果を発揮する化粧料を開発することが困難であった。そこで、本願においては、植物抽出液を酵母菌で発酵させ、その酵母菌体抽出液を利用することで、植物抽出物の色や臭いが無く、かつ高い抗酸化効果を有する化粧料を開発することを課題とする。 Furthermore, the plant extract added to the medium in the present invention has been used in many cosmetics so far, even the plant extract alone. However, the color and smell of the extract are strong, and it is necessary to purify decolorization, deodorization, etc. At that time, the antioxidant effect often decreases, and a cosmetic that exhibits sufficient effects should be developed. It was difficult. Therefore, in the present application, a plant extract is fermented with yeast, and the yeast cell extract is used to develop a cosmetic that does not have the color or odor of the plant extract and has a high antioxidant effect. This is the issue.

完全合成培地に、金銀花抽出液及び／又は女貞子抽出液を加え、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ酵母で培養し、培養終了後、菌体と培養液とに分離し、本培養菌体抽出液を効果成分として用いる。 Gold and silver flower extract and / or Sadako extract are added to the complete synthetic medium, cultured in Saccharomyces cerevisiae yeast, and after completion of the culture, it is separated into cells and culture medium, and the main culture cell extract is used as an effective ingredient. Use.

本発明による金銀花、女貞子の抽出物を添加した培地でＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ酵母を培養した培養後の菌体抽出液は、高い抗酸化性物質を含有し、紫外線による細胞の損傷を抑制する作用がある。酵母を用いて植物抽出液を発酵することにより、臭いが少なくかつ、高い抗酸化性物質を含有する酵母菌体抽出液が得られる。さらに、一般的に酵母の培養培地に用いられるペプトン、酵母エキス、および麦芽エキスなどの天然物を配合しない完全合成培地で培養することにより、臭いの無い酵母菌体抽出液を得ることができる。 The cell extract after culturing Saccharomyces cerevisiae yeast in a medium supplemented with extracts of gold and silver flowers and Sadako according to the present invention contains a high antioxidant substance and has an action of suppressing cell damage due to ultraviolet rays. is there. By fermenting a plant extract using yeast, a yeast cell extract containing a low odor and containing a high antioxidant substance can be obtained. Furthermore, an odorless yeast cell extract can be obtained by culturing in a completely synthetic medium not containing natural products such as peptone, yeast extract, and malt extract, which are generally used for yeast culture media.

ところで、紫外線は皮膚内で活性酸素を生成し、表皮細胞にアポトーシスを起こさせると共に、種々のサイトカインを産生しメラニン産生を促進させる。紫外線照射により表皮細胞は傷害され細胞数の減少を招くと共に、表皮の角化が抑制され表皮バリアーの形成が不十分となる。このため、皮膚の水分保持がすくなくなり、かさかさした肌になると共に炎症も起こり易い肌となる。また、真皮の線維芽細胞は、紫外線照射によりコラーゲン・ヒアルロン酸の産生が抑制され、肌のハリ・弾力が低下する。 By the way, ultraviolet rays generate active oxygen in the skin, cause apoptosis in epidermal cells, and produce various cytokines to promote melanin production. Irradiation with ultraviolet rays damages the epidermal cells, leading to a decrease in the number of cells, and suppresses keratinization of the epidermis, resulting in insufficient formation of the epidermal barrier. For this reason, the water | moisture content of a skin becomes sluggish, and it becomes the skin which becomes easy to cause inflammation while becoming a bulky skin. In addition, the production of collagen and hyaluronic acid in dermal fibroblasts is suppressed by ultraviolet irradiation, and the firmness and elasticity of the skin are reduced.

従って、かかるＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ酵母菌体抽出液を配合してなる本発明の化粧料は、それら両作用の複合に基づく相乗的効果により、紫外線によるシワ・シミ・タルミなどの皮膚の老化や不健全化の症状の予防或いは改善に多面的かつすぐれた効果を発揮して、皮膚を真に健全で若々しい状態に維持し、改善する効果を有する。又、本発明化粧料で活性成分として用いるＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ酵母菌体抽出液は、皮膚に対する刺激性が全くなく、このため本発明の化粧料は生体安全性にも大変すぐれたものである。 Therefore, the cosmetic composition of the present invention comprising the Saccharomyces cerevisiae yeast cell extract is a synergistic effect based on the combination of both of these actions, so that aging and unhealing of skin such as wrinkles, stains and tarmi due to ultraviolet rays are achieved. It has a multifaceted and excellent effect in the prevention or improvement of symptoms, and has the effect of maintaining and improving the skin in a truly healthy and youthful state. In addition, the Saccharomyces cerevisiae yeast cell extract used as an active ingredient in the cosmetics of the present invention has no irritation to the skin, and therefore the cosmetics of the present invention are also excellent in biological safety.

以下、本発明について詳細に説明する。
本発明で用いるＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ酵母は市販されているパン酵母、または分譲されているＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
に属する酵母であれば使用できる。また、酵母は糖類が存在する自然界からも容易に分離することができるため、植物や土などから分離した酵母でＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅに属する酵母であれば使用できる。 Hereinafter, the present invention will be described in detail.
The Saccharomyces cerevisiae yeast used in the present invention is a commercially available baker's yeast or a distributed Saccharomyces cerevisiae yeast.
Any yeast belonging to the above can be used. In addition, since yeast can be easily separated from the natural world where saccharides are present, it can be used as long as it is yeast isolated from plants and soils and belonging to Saccharomyces cerevisiae.

培地に添加する金銀花（Lonicera japonica Thunb.）はスイカズラ科スイカズラ属の植物で、別名忍冬とも呼ばれる。春に咲いた白色の花がだんだんと黄色くなるので金色と銀色の花が混じって咲くように見えることに由来している。山野や道端に普通に生える蔓性の植物である。金銀花には、利尿、抗炎症、抗菌作用があって、解熱、解毒、発熱、血痢、伝染性肝炎、化膿性疾患、神経痛、リューマチなどの関節筋骨の疼痛に薬効があるとされ、その花蕾の乾燥物が古くから利用されてきた。スイカズラ属植物はスイカズラ、ウグイスカグラ、ヒョウタンボクをはじめ20種ほどある。がいずれの種類でも利用可能である。 Gold and silver flowers (Lonicera japonica Thunb.) Added to the medium are plants belonging to the genus Honeysuckle family, also known as Shinobifu. This is because the white flowers that bloom in spring gradually become yellow and appear to bloom in a mixture of golden and silver flowers. It is a vine plant that normally grows in the mountains and roadsides. Gold and silver flowers have diuretic, anti-inflammatory and antibacterial effects and are said to be effective for antipyretic, detoxification, fever, diarrhea, contagious hepatitis, purulent disease, neuralgia, rheumatism, etc. The dried flowers are used for a long time. There are about 20 species of honeysuckle genus plants, including honeysuckle, warbler, and gourd. Can be used in any type.

女貞子（Ligustrum lucidum ）はモクセイ科イボタノキ属トウネズミモチの果実を乾燥したものである。トウネズミモチは、中国原産の常緑高木で、花期は6〜7月頃で黄白色の花を多数咲かせる。公害に強いことから、公園緑化樹などに利用されている。果実は紫黒色に熟するが、これが女貞子という生薬で強壮作用があるといわれている。冬でも葉が青いことから、様子を貞女になぞらえて女貞といわれている。含有成分としては、オレアノール酸、ウルソール酸、マンニトールなどが知られており、古くから利用されてきた。 Sadako (Ligustrum lucidum) is a dried fruit of the genus Coleoptera spp. The Japanese hornworm is an evergreen tree native to China, and the flowering period is from June to July, and many yellowish white flowers bloom. Because it is resistant to pollution, it is used for park greening trees. The fruit ripens purple-black, but this is said to have a tonic effect with herbal medicine called Sadako. Even in winter, the leaves are blue. As components, oleanolic acid, ursolic acid, mannitol and the like are known and have been used for a long time.

本発明に用いる金銀花および女貞子抽出液の調製法は特に限定されないが、例えば種々の適当な有機溶媒を用いて低温下から加温下で抽出することができる。抽出溶媒としては、例えば、水；メチルアルコール、エチルアルコール等の低級１価アルコール；グリセリン、プロピレングリコール、１、３−ブチレングリコール等の液状多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン；酢酸エチルなどのアルキルエステル；ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素；ジエチルエーテル等のエーテル類；ジクロルメタン、クロロホルム等のハロゲン化アルカン等の１種または２種以上を用いることが出来る。そのうち、水、エチルアルコール、１、３−ブチレングリコールの１種または２種以上の混合溶媒が特に好適に示される。 The method for preparing the gold and silver flower and Sadako extract used in the present invention is not particularly limited, and for example, it can be extracted from a low temperature to a high temperature using various appropriate organic solvents. Examples of the extraction solvent include water; lower monohydric alcohols such as methyl alcohol and ethyl alcohol; liquid polyhydric alcohols such as glycerin, propylene glycol, and 1,3-butylene glycol; ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; and ethyl acetate. One kind or two or more kinds of alkyl esters; hydrocarbons such as benzene and hexane; ethers such as diethyl ether; halogenated alkanes such as dichloromethane and chloroform can be used. Among them, water, ethyl alcohol, and one or more mixed solvents of 1,3-butylene glycol are particularly preferable.

また抽出方法は金銀花或いは女貞子をそのまま、あるいは粉砕したものを質量比で２〜１０００倍量、特に５〜１００倍量の溶媒を用いることが出来る。常温抽出の場合には、０℃以上、特に２０℃〜４０℃で１時間以上、特に３〜７日間行うのが好適である。また、６０〜１００℃で０．５〜２４時間、加熱抽出しても良い。 Further, the extraction method can use a solvent of 2 to 1000 times, particularly 5 to 100 times the amount of gold-silver-flower or Sadako as it is or after pulverization. In the case of normal temperature extraction, it is preferable to carry out at 0 ° C. or higher, particularly 20 ° C. to 40 ° C. for 1 hour or longer, particularly 3 to 7 days. Moreover, you may heat-extract at 60-100 degreeC for 0.5 to 24 hours.

以上のような条件で得られる金銀花、女貞子抽出液は、ろ過等の処理をして溶液のまま用いても良いが、更に必要により、濃縮、粉末化したものを適宜使い分けて用いることが出来る。 The gold and silver flower and Sadako extracts obtained under the above conditions may be used as they are after filtration or the like, but if necessary, concentrated and powdered ones may be used appropriately. I can do it.

酵母菌は一般的にグルコースに代表される炭素源と、ペプトンに代表されるペプチド類からなる窒素源、酵母エキスに代表される微量ビタミン類、ミネラル類などの栄養素を含有する物質が含まれていれば培養が可能である。一般的には天然物からなるＹＭ（Yeast-Malt）培地、ＹＰＤ（Yeast-Polypeptone-Dextrose）培地などが用いられている。しかしながら、酵母菌はこれら天然物を配合した培地で培養すると、不快な臭いを有する培養物になることが知られている。 Yeasts generally contain substances containing nutrients such as carbon sources typified by glucose, nitrogen sources consisting of peptides typified by peptones, trace vitamins typified by yeast extracts, and minerals. Culture is possible. Generally, a YM (Yeast-Malt) medium, a YPD (Yeast-Polypeptone-Dextrose) medium, or the like made of a natural product is used. However, it is known that yeasts become a culture having an unpleasant odor when cultured in a medium containing these natural products.

そこで、本特許においては天然物を配合しない合成培地を基本培地としている。
培地組成としては、最低限の炭素源と窒素源とリン源を含んでいれば良く、炭素源としては、リボース、アラビノース、キシロース、グルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、ラムノース、等の単糖類、シュクロース、マルトース、ラクトース、トレハロース、セロビオース、等の二糖類、またラフィノース、マルトトリオース等の三糖類を用いることができる。これらから1種以上含有していれば良い。
窒素源としては、尿素、硝酸塩として硝酸カリウム、硝酸ナトリウム、硝酸カルシウム、アンモニウム塩として硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、また、アミノ酸として、トリプトファン、
リシン、メチオニン、フェニルアラニン、トレオニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、ヒスチジン、アラニン、アルギニン、アスパラギン、セリン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、プロリン、チロシン等の窒素含有化合物を用いることができ、これらから1種以上含有していれば良い。
リン源としては、リン酸塩を用いることが出来、リン酸１水素カリウム、リン酸２水素カリウム、リン酸アンモニウムを用いることができ、これらから1種以上含有していれば良い。 Therefore, in this patent, a synthetic medium not containing a natural product is used as a basic medium.
The medium composition may include a minimum carbon source, nitrogen source, and phosphorus source. Examples of the carbon source include ribose, arabinose, xylose, glucose, fructose, mannose, galactose, rhamnose, etc. Disaccharides such as claus, maltose, lactose, trehalose and cellobiose, and trisaccharides such as raffinose and maltotriose can be used. One or more of these may be contained.
Nitrogen sources include urea, potassium nitrate as nitrate, sodium nitrate, calcium nitrate, ammonium sulfate as ammonium sulfate, ammonium chloride, amino acid as tryptophan,
Nitrogen-containing compounds such as lysine, methionine, phenylalanine, threonine, valine, isoleucine, leucine, histidine, alanine, arginine, asparagine, serine, aspartic acid, cysteine, glutamine, glutamic acid, glycine, proline, tyrosine, etc. can be used. As long as it contains at least one kind.
As the phosphorus source, phosphate can be used, and potassium monohydrogen phosphate, potassium dihydrogen phosphate, and ammonium phosphate can be used, and one or more of these may be contained.

合成培地の基本培地としては、前記炭素源と窒素源とリン源を含んでいれば十分であるが、その他にビタミン源、ミネラル源を追加することも可能である。
ビタミン源としては、例えばビオチン、チアミン（ビタミンＢ１）、リボフラビン、ピリドキシン（ビタミンＢ６）、パントテン酸、アスコルビン酸、ヨウ酸、シアノコバラミン、イノシトール、ニコチン酸、コリン、カルニチン、パラアミノ安息香酸、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド等を用いることができる。
ミネラル源としては、カリウム、カルシウム、マグネシウム、イオウ、鉄、マンガン、亜鉛、ホウ素、銅、モリブデン、ナトリウム、ヨウ素、コバルト等が挙げられ、これらを供給できる具体的な成分としては、例えば、硝酸カルシウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、ホウ酸、硫酸銅、モリブデン酸ナトリウム、三酸化モリブデン、ヨウ化カリウム、塩化コバルト等の化合物を用いることができる。 The basic medium of the synthetic medium is sufficient as long as it contains the carbon source, nitrogen source and phosphorus source, but it is also possible to add a vitamin source and a mineral source.
Examples of vitamin sources include biotin, thiamine (vitamin B1), riboflavin, pyridoxine (vitamin B6), pantothenic acid, ascorbic acid, iodic acid, cyanocobalamin, inositol, nicotinic acid, choline, carnitine, paraaminobenzoic acid, nicotinamide adenidine Nucleotides and the like can be used.
Examples of mineral sources include potassium, calcium, magnesium, sulfur, iron, manganese, zinc, boron, copper, molybdenum, sodium, iodine, cobalt, and the like. Specific components that can supply these include, for example, calcium nitrate. , Potassium chloride, calcium chloride, magnesium sulfate, sodium sulfate, ferrous sulfate, ferric sulfate, manganese sulfate, zinc sulfate, boric acid, copper sulfate, sodium molybdate, molybdenum trioxide, potassium iodide, cobalt chloride, etc. These compounds can be used.

本発明においては、上記成分を適宜組み合わせて基本培地とする。
勿論、天然成分を含まない合成培地であるCzapek培地、Burkholder培地、YNB（Yeast Nitrogen Base）培地を基本培地とすることも出来る。 In the present invention, the above components are appropriately combined to form a basic medium.
Of course, a Czapek medium, a Burkholder medium, or a YNB (Yeast Nitrogen Base) medium, which is a synthetic medium not containing natural components, can be used as a basic medium.

前記以外の培地組成であっても、酵母菌が資化・増殖できる物質であれば、本発明に適用されるのは勿論である。さらに、培地には水或いは水と低級アルコール類（メタノール、エタノール、プロパノールなど）もしくはグリコール類（エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリンなど）との混液等を添加して基本培地としても良い。 Of course, the medium composition other than the above can be applied to the present invention as long as it is a substance that can be assimilated and grown by yeast. Furthermore, the basic medium is prepared by adding water or a mixture of water and lower alcohols (methanol, ethanol, propanol, etc.) or glycols (ethylene glycol, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, glycerin, etc.) to the medium. It is also good.

本発明に用いられる培地は、前記基本培地に、金銀花抽出液及び／又は女貞子抽出液を加えたものを培地として利用する。 As the medium used in the present invention, a medium obtained by adding the gold and silver flower extract and / or Sadako extract to the basic medium is used as the medium.

前記の培地は、これを培養工程に供する前に、殺菌を行って培養の障害となる雑菌を除去する。この場合殺菌除去方法としては、培地の組成物を予め殺菌した上、無菌水等の無菌媒体に懸濁する方法を用いてもよく、又培地の組成物を媒体に懸濁した後、懸濁液を加熱殺菌する方法を用いるようにしてもよい。加熱殺菌法としては、懸濁液を１２０〜１３０℃で１０〜２０分間加熱するオートクレーブ殺菌法や、懸濁液を８０〜９０℃に６０〜１２０分間保持することを１日１回２〜３日間繰り返す間断殺菌法が一般に用いられる。 The above-mentioned medium is sterilized to remove various germs that hinder culture before being subjected to the culture step. In this case, the sterilization removal method may be a method in which the medium composition is sterilized in advance and suspended in a sterile medium such as sterile water, or the medium composition is suspended in the medium and then suspended. You may make it use the method of heat-sterilizing a liquid. Examples of the heat sterilization method include an autoclave sterilization method in which the suspension is heated at 120 to 130 ° C. for 10 to 20 minutes, and holding the suspension at 80 to 90 ° C. for 60 to 120 minutes once to 2-3 times a day. An intermittent sterilization method is generally used for repeated days.

次に、この無菌化した培地を培養タンクに入れ、これにＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ酵母を植菌して培養を行う。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ酵母の接種量は１０^７〜１０^８個／ｍＬが適量である。接種量が上記の範囲より多くなっても培養の進行時間は殆ど変わらず、一方上記の範囲より少なくなると培養完了までに長時間を要することとなって好ましくない。 Next, the sterilized medium is placed in a culture tank, and Saccharomyces cerevisiae yeast is inoculated into the culture tank and cultured. The appropriate amount of Saccharomyces cerevisiae yeast inoculation is 10 ⁷ to 10 ⁸ cells / mL. Even if the inoculation amount is larger than the above range, the culturing time hardly changes. On the other hand, if the inoculation amount is smaller than the above range, it takes a long time to complete the cultivation, which is not preferable.

培養温度は一般に５〜５０℃の範囲、好ましくはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ酵母の生育至適温度である２０〜３５℃の範囲である。培養日数は、至適温度に於いて一般に１〜１０日、好ましくは２〜５日の範囲である。培養日数が上記の一般的範囲より短くなると培養が十分に行われず培養物の有効性が低下する傾向にあり、一方１０日を越えて長くしても有効性のそれ以上の上昇は認められないだけでなく、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ酵母菌体への色や培養臭の増加が生ずることとなっていずれも好ましくない。 The culture temperature is generally in the range of 5 to 50 ° C., preferably in the range of 20 to 35 ° C., which is the optimum temperature for growth of Saccharomyces cerevisiae yeast. The number of culture days is generally in the range of 1 to 10 days, preferably 2 to 5 days at the optimum temperature. When the culture days are shorter than the above general range, the culture is not sufficiently performed, and the effectiveness of the culture tends to decrease. On the other hand, if the culture days are longer than 10 days, no further increase in effectiveness is observed. Not only that, but also an increase in color and culture odor to Saccharomyces cerevisiae yeast cells is undesirable.

以上の培養が終ったならば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ酵母菌体と培養液を分離させ培養の進行を止める。培養物はろ過、或いは遠心分離などの固液分離手段によって培養液を分取し、酵母菌体と分離する。得られたＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ酵母は、菌体中の抗酸化性物質を抽出するために、水と有機溶媒の混液などで抽出する。このとき用いる有機溶媒は特に限定されないが、例えば種々の適当な有機溶媒を用いて低温下から加温下で抽出することができる。抽出溶媒としては、例えば、水；メチルアルコール、エチルアルコール等の低級１価アルコール；グリセリン、プロピレングリコール、１、３−ブチレングリコール等の液状多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン；酢酸エチルなどのアルキルエステル；ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素；ジエチルエーテル等のエーテル類；ジクロルメタン、クロロホルム等のハロゲン化アルカン等の１種または２種以上を用いることが出来る。そのうち、水、エチルアルコール、１、３−ブチレングリコールの１種または２種以上の混合溶媒が特に好適に示される。また、酵母菌体の細胞壁を分解させるβ-グルカナーゼなどの酵素を作用させる方法や、酸、アルカリによる加水分解により、菌体内成分を抽出する方法が可能である。 When the above culture is completed, the yeast cells and the culture medium are separated from the Saccharomyces cerevisiae yeast and the progress of the culture is stopped. The culture is separated from yeast cells by separating the culture solution by solid-liquid separation means such as filtration or centrifugation. The obtained Saccharomyces cerevisiae yeast is extracted with a mixture of water and an organic solvent in order to extract an antioxidant substance in the microbial cells. Although the organic solvent used at this time is not specifically limited, For example, it can extract under low temperature from warm using various suitable organic solvents. Examples of the extraction solvent include water; lower monohydric alcohols such as methyl alcohol and ethyl alcohol; liquid polyhydric alcohols such as glycerin, propylene glycol, and 1,3-butylene glycol; ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; and ethyl acetate. One kind or two or more kinds of alkyl esters; hydrocarbons such as benzene and hexane; ethers such as diethyl ether; halogenated alkanes such as dichloromethane and chloroform can be used. Among them, water, ethyl alcohol, and one or more mixed solvents of 1,3-butylene glycol are particularly preferable. In addition, a method in which an enzyme such as β-glucanase that degrades the cell wall of yeast cells is allowed to act, or a method in which bacterial cell components are extracted by hydrolysis with acid or alkali is possible.

本発明のＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ酵母の培養後の菌体抽出液を配合してなる化粧料としては、例えば乳液、クリーム、ローション、エッセンス、パック、洗顔料などの基礎化粧料、口紅、ファンデーション、リキッドファンデーション、メイクアッププレスドパウダーなどのメイクアップ化粧料、洗顔料、ボディーシャンプー、石けんなどの清浄用化粧料、さらには浴剤等が挙げられるが、勿論これらに限定されるものではない。 Examples of cosmetics obtained by blending the cell extract after culturing the yeast of the Saccharomyces cerevisiae of the present invention include basic cosmetics such as emulsions, creams, lotions, essences, packs, facial cleansers, lipsticks, foundations, liquid foundations, Examples include makeup cosmetics such as makeup pressed powder, cleansing cosmetics such as facial cleansers, body shampoos, and soaps, and bath agents, but are not limited thereto.

本発明の化粧料中に於けるＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ酵母の培養後の菌体抽出液の配合量は、菌体抽出液の蒸発残分に換算して０．０００１〜１０質量％、好ましくは０．０１〜１質量％の範囲である。 The blending amount of the bacterial cell extract after culturing the Saccharomyces cerevisiae yeast in the cosmetic of the present invention is 0.0001 to 10% by mass, preferably 0.01% in terms of the evaporation residue of the bacterial cell extract. It is in the range of ˜1% by mass.

本発明の化粧料には、上記の必須成分の他に、通常化粧料に用いられる配合成分、例えば油性成分、界面活性剤、保湿剤、増粘剤、防腐・殺菌剤、粉体成分、紫外線吸収剤、色素、香料等を必要に応じて適宜配合することができる。 In addition to the above-mentioned essential ingredients, the cosmetics of the present invention include compounding ingredients usually used in cosmetics, such as oily ingredients, surfactants, moisturizers, thickeners, antiseptic / disinfectants, powder ingredients, ultraviolet rays. Absorbers, pigments, fragrances and the like can be appropriately blended as necessary.

ここで、油性成分としては、例えばオリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、大豆油、米油、米胚芽油、ヤシ油、パーム油、カカオ油、メドウフォーム油、シアーバター、ティーツリー油、アボガド油、マカデミアナッツ油、植物由来スクワランなどの植物由来の油脂類；ミンク油、タートル油などの動物由来の油脂類；ミツロウ、カルナウバロウ、ライスワックス、ラノリンなどのロウ類；流動パラフィン、ワセリン、パラフィンワックス、スクワランなどの炭化水素類；ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸、ｃｉｓ−１１−エイコセン酸などの脂肪酸類；ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコールなどの高級アルコール類；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸ブチル、２−エチルヘキシルグリセライド、高級脂肪酸オクチルドデシル（ステアリン酸オクチルドデシル等）などの合成エステル類及び合成トリグリセライド類等が挙げられる。 Here, as the oil component, for example, olive oil, jojoba oil, castor oil, soybean oil, rice oil, rice germ oil, palm oil, palm oil, cacao oil, meadow foam oil, sheer butter, tea tree oil, avocado oil, Oils derived from plants such as macadamia nut oil and plant-derived squalane; Fats derived from animals such as mink oil and turtle oil; waxes such as beeswax, carnauba wax, rice wax, lanolin; liquid paraffin, petrolatum, paraffin wax, squalane, etc. Hydrocarbons; fatty acids such as myristic acid, palmitic acid, stearic acid, oleic acid, isostearic acid, cis-11-eicosenoic acid; higher alcohols such as lauryl alcohol, cetanol, stearyl alcohol; isopropyl myristate, palmitic acid Isopropyl, me Butyl phosphate, 2-ethylhexyl glycerides, higher fatty acid octyldodecyl (octyl stearate dodecyl and the like), and the synthetic esters and synthetic triglycerides such like.

界面活性剤としては，例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルなどの非イオン界面活性剤；脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレン脂肪酸アミン硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル燐酸塩、α−スルホン化脂肪酸アルキルエステル塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル燐酸塩などのアニオン界面活性剤；第四級アンモニウム塩、第一級〜第三級脂肪酸アミン塩、トリアルキルベンジルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、２−アルキル−１−アルキル−１−ヒドロキシエチルイミダゾリニウム塩、Ｎ，Ｎ−ジアルキルモルフォルニウム塩、ポリエチレンポリアミン脂肪酸アミド塩などのカチオン界面活性剤；Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−アルキル−Ｎ−カルボキシメチルアンモニオベタイン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリアルキル−Ｎ−アルキレンアンモニオカルボキシベタイン、Ｎ−アシルアミドプロピル−Ｎ′，Ｎ′−ジメチル−Ｎ′−β−ヒドロキシプロピルアンモニオスルホベタインなどの両性界面活性剤等を使用することができる。 Examples of the surfactant include polyoxyethylene alkyl ether, polyoxyethylene fatty acid ester, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, glycerin fatty acid ester, polyglycerin fatty acid ester, polyoxyethylene glycerin fatty acid ester, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, polyoxyethylene Nonionic surfactants such as oxyethylene sorbitol fatty acid esters; fatty acid salts, alkyl sulfates, alkylbenzene sulfonates, polyoxyethylene alkyl ether sulfates, polyoxyethylene fatty acid amine sulfates, polyoxyethylene alkyl phenyl ether sulfates, Polyoxyethylene alkyl ether phosphates, α-sulfonated fatty acid alkyl ester salts, polyoxyethylene alkyl phenyl ether phosphates, etc. ON surfactant: quaternary ammonium salt, primary to tertiary fatty acid amine salt, trialkylbenzylammonium salt, alkylpyridinium salt, 2-alkyl-1-alkyl-1-hydroxyethylimidazolinium salt, N N, N-dimethyl-N-alkyl-N-carboxymethylammoniobetaine, N, N, N-trialkyl-N-, N, N-dimethyl-N-alkyl-N-carboxymethylammoniobetaine Amphoteric surfactants such as alkylene ammoniocarboxybetaine and N-acylamidopropyl-N ′, N′-dimethyl-N′-β-hydroxypropylammoniosulfobetaine can be used.

保湿剤としては、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコールなどのグリコール類、マルチトール、ソルビトール、キシリトール、トレハロース、グルコース等の糖類、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、乳酸菌発酵米、ムコ多糖類（例えば、ヒアルロン酸及びその誘導体、コンドロイチン及びその誘導体、ヘパリン及びその誘導体など）、エラスチン及びその誘導体、コラーゲン及びその誘導体、加水分解シルク蛋白質、ＮＭＦ関連物質、乳酸、尿素、高級脂肪酸オクチルドデシル、フィトステロール、大豆リン脂質、イソステアリン酸コレステリル、海藻抽出物、各種アミノ酸及びそれらの誘導体等が挙げられる。 Examples of humectants include glycols such as glycerin, propylene glycol, dipropylene glycol, 1,3-butylene glycol, and polyethylene glycol, sugars such as maltitol, sorbitol, xylitol, trehalose, glucose, sodium pyrrolidonecarboxylate, and lactic acid bacteria fermentation. Rice, mucopolysaccharide (eg, hyaluronic acid and its derivatives, chondroitin and its derivatives, heparin and its derivatives), elastin and its derivatives, collagen and its derivatives, hydrolyzed silk protein, NMF related substances, lactic acid, urea, high grade Examples include fatty acid octyldodecyl, phytosterol, soybean phospholipid, cholesteryl isostearate, seaweed extract, various amino acids, and derivatives thereof.

増粘剤としては、例えばアルギン酸、寒天、カラギーナン、フコイダン、ファーセララン等の褐藻、緑藻或いは紅藻由来成分、ビャッキュウ抽出物、ペクチン、ローカストビーンガム、アロエ多糖体等の多糖類、キサンタンガム、トラガントガム、グアーガム等のガム類、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アクリル酸・メタクリル酸共重合体等の合成高分子類；ヒアルロン酸及びその誘導体、ポリグルタミン酸及びその誘導体、グルコシルトレハロースと加水分解水添デンプンを主体とする糖化合物等が挙げられる。 Examples of thickeners include, for example, brown algae such as alginic acid, agar, carrageenan, fucoidan, and fartheraran, green algae or red algae-derived components, beech extract, pectin, locust bean gum, polysaccharides such as aloe polysaccharide, xanthan gum, tragacanth gum, guar gum Synthetic polymers such as gums such as carboxymethylcellulose, hydroxyethylcellulose, etc., polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone, carboxyvinyl polymer, acrylic acid / methacrylic acid copolymer; hyaluronic acid and its derivatives, polyglutamic acid and its Examples thereof include sugar compounds mainly composed of derivatives, glucosyl trehalose and hydrolyzed hydrogenated starch.

防腐・殺菌剤としては、例えばパラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチルなどのパラオキシ安息香酸エステル類；フェノキシエタノール、ジクロロフェン、ヘキサクロロフェン、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、サリチル酸、エタノール、ウンデシレン酸、フェノール類、ジャーマル（イミダゾデイニールウレア）、１，２−ペンタンジオール、各種精油類、樹皮乾留物、プロポリスエキス等がある。 Examples of the antiseptic / bactericidal agent include paraoxybenzoates such as methyl paraoxybenzoate, ethyl paraoxybenzoate, propyl paraoxybenzoate, and butyl paraoxybenzoate; phenoxyethanol, dichlorophene, hexachlorophene, chlorhexidine hydrochloride, benzalkonium chloride , Salicylic acid, ethanol, undecylenic acid, phenols, jarmal (imidazodenyl urea), 1,2-pentanediol, various essential oils, bark distillate, propolis extract and the like.

粉体成分としては、例えばセリサイト、酸化チタン、タルク、カオリン、ベントナイト、酸化亜鉛、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、無水ケイ酸、雲母、６−又は１２−ナイロンパウダー、ポリエチレンパウダー、シルクパウダー、セルロース系パウダー等がある。 Examples of the powder component include sericite, titanium oxide, talc, kaolin, bentonite, zinc oxide, magnesium carbonate, magnesium oxide, zirconium oxide, barium sulfate, silicic anhydride, mica, 6- or 12-nylon powder, polyethylene powder. , Silk powder, cellulosic powder and the like.

紫外線吸収剤としては、例えばパラアミノ安息香酸エチル、パラジメチルアミノ安息香酸エチルヘキシル、サリチル酸アミル及びその誘導体、パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル、桂皮酸オクチル、オキシベンゾン、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸塩、４−ターシャリーブチル−４−メトキシベンゾイルメタン、２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、アロエ抽出物等がある。 Examples of the ultraviolet absorber include ethyl paraaminobenzoate, ethylhexyl paradimethylaminobenzoate, amyl salicylate and derivatives thereof, 2-ethylhexyl paramethoxycinnamate, octyl cinnamate, oxybenzone, 2,4-dihydroxybenzophenone, 2-hydroxy-4 -Methoxybenzophenone-5-sulfonate, 4-tertiarybutyl-4-methoxybenzoylmethane, 2- (2-hydroxy-5-methylphenyl) benzotriazole, urocanic acid, ethyl urocanate, aloe extract, etc. .

抗酸化剤としては、例えばスーパーオキシドディスムターゼ（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ）、カタラーゼなどの生体内活性酸素分解酵素、ビタミンＥ、ビタミンＤなどのビタミン類及びその誘導体、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、ユビデカキノン（ユビキノン）、ルチン、ルチングルコシド、γ−オリザノール等がある。 Antioxidants include, for example, superoxide dismutase, bioactive oxygen-degrading enzymes such as catalase, vitamins such as vitamin E and vitamin D and derivatives thereof, butylhydroxyanisole, butylhydroxytoluene, propyl gallate, There are ubidecaquinone (ubiquinone), rutin, rutin glucoside, γ-oryzanol and the like.

さらに必要ならば、本発明で用いる発酵物の作用効果及び特長を損なわない範囲で、他の活性成分（美白剤、皮膚老化防止・肌荒れ改善剤、抗炎症剤等）を配合してもよく、かかるものとしては、例えば美白剤であれば、トラネキサム酸及びその誘導体、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アスコルビン酸及びその誘導体、ハイドロキノン誘導体、エラグ酸及びその誘導体、レゾルシノール誘導体、胎盤抽出物、システイン、ソウハクヒ抽出物、ユキノシタ抽出物、ハマメリス抽出物、イタドリ抽出物、甘草抽出物、ゲンノショウコ抽出物、ナツメ抽出物、シャクヤク抽出物、トウキ抽出物、モモ抽出物、緑藻類、紅藻類又は褐藻類の海藻の抽出物、リノール酸及びその誘導体もしくは加工物（例えばリノール酸メントールエステルなど）、２，５−ジヒドロキシ安息香酸誘導体等が、皮膚老化防止・肌荒れ改善成分であれば、動物又は魚由来のコラーゲン及びその誘導体、エラスチン及びその誘導体、セラミドなどの細胞間脂質、胎盤抽出物、ニコチン酸及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体（ジカリウム塩等）、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、ビタミンＡ前駆体、ビタミンＡ及びその誘導体、ビタミンＥ及びその誘導体、アラントイン、α−ヒドロキシ酸類、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸、コエンザイムＱ−１０、アデノシン、α−リポ酸、ピコリン、カルニチン及びその誘導体、ゲンチアナエキス、甘草エキス、ハトムギエキス、カミツレエキス、ニンジンエキス、アロエエキスなどの生薬抽出エキス、米発酵エキス、緑藻類、紅藻類又は褐藻類の海藻の抽出物、ソウハクヒエキス、ブナ抽出物、キダチアロエ抽出物、マンネンロウ抽出物、イチョウ抽出物、スギナ抽出物、ベニバナ抽出物、オタネニンジン抽出物、セイヨウニワトコ抽出物、ハゴロモグサ抽出物、レンゲ抽出物、マンゴー抽出物、卵殻膜抽出タンパク質、デオキシリボ核酸カリウム塩、紫蘭根抽出物、ムラサキシキブ抽出物、イネ抽出物等が、又抗炎症成分であれば、例えばグアイアズレンスルホン酸ナトリウム、グアイアズレンスルホン酸エチルなどのアズレン誘導体、グリチルリチン酸ジカリウム、グリチルレチン酸ステアリルなどのグリチルリチン酸誘導体、アラントイン、カンゾウ抽出物、クジン抽出物、シャクヤク抽出物、ボタンピ抽出物、レンギョウ抽出物、リュウタン抽出物、トウキンセンカ抽出物、パセリ抽出物、オトギリソウ抽出物等が挙げられる。 Furthermore, if necessary, other active ingredients (whitening agent, skin aging prevention / rough skin improvement agent, anti-inflammatory agent, etc.) may be blended within the range that does not impair the effects and features of the fermented product used in the present invention. Examples of such a whitening agent include tranexamic acid and its derivatives, t-cycloamino acid derivatives, kojic acid and its derivatives, ascorbic acid and its derivatives, hydroquinone derivatives, ellagic acid and its derivatives, resorcinol derivatives, placental extraction , Cysteine, Sakuhakuhi extract, Yukinoshita extract, Hamamelis extract, Itadori extract, Licorice extract, Gentian extract, Jujube extract, Peonies extract, Sugi extract, Peach extract, Green algae, Red algae or Brown algae Seaweed extracts, linoleic acid and its derivatives or processed products (eg menthol linoleate) Ester, etc.), 2,5-dihydroxybenzoic acid derivatives, etc., are components for preventing skin aging and improving rough skin, collagen derived from animals or fish and derivatives thereof, elastin and derivatives thereof, intercellular lipids such as ceramide, placenta extraction Nicotinic acid and derivatives thereof, glycyrrhizic acid and derivatives thereof (dipotassium salt, etc.), t-cycloamino acid derivatives, vitamin A precursor, vitamin A and derivatives thereof, vitamin E and derivatives thereof, allantoin, α-hydroxy acids, diisopropyl Amine dichloroacetate, γ-amino-β-hydroxybutyric acid, coenzyme Q-10, adenosine, α-lipoic acid, picoline, carnitine and its derivatives, gentian extract, licorice extract, pearl barley extract, chamomile extract, carrot extract, aloe extract, etc. Herbal medicine extract , Rice fermented extract, green algae, red algae or brown algae seaweed extract, Sakuhakuhi extract, beech extract, beetle aloe extract, mannenrou extract, ginkgo biloba extract, horsetail extract, safflower extract, ginseng extract, If it is an anti-inflammatory component such as elderberry extract, garlic extract, lotus extract, mango extract, eggshell membrane extract protein, deoxyribonucleic acid potassium salt, purple orchid root extract, purple extract, rice extract, etc. For example, azulene derivatives such as sodium guaiazulene sulfonate and ethyl guaiazulene sulfonate, glycyrrhizic acid derivatives such as dipotassium glycyrrhizinate and stearyl glycyrrhetinate, allantoin, licorice extract, cucumber extract, peonies extract, button pie extract, forsythia extract Ryuutan extract, tow calendula extract, parsley extract, Hypericum extract, and the like.

以下、本発明における酵母菌体抽出液の効果試験の実施例を示す。さらに、その酵母菌体抽出液を用いた皮膚組成物への応用処方例等について述べるが、ここに記載された実施例に限定されるものではない。なお、以下に於いて、部はすべて質量部を、又％はすべて質量％を意味する。 Hereinafter, the Example of the effect test of the yeast cell extract in this invention is shown. Furthermore, although the example of application prescription etc. to the skin composition using the yeast cell extract is described, it is not limited to the Example described here. In the following, all parts are parts by mass, and all% are% by mass.

Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ酵母の採取方法
市販されているパン酵母（日清スパーカメリア・ドライイースト：日清フーズ（株））を購入し、１２０℃で１５分間滅菌したＹＭ培地１００ｍｌを添加した三角フラスコに０．１ｇ懸濁し、２８℃、１５０ｒｐｍで３日間回転培養を行った。懸濁液を１白金耳取り、ＹＭ寒天培地上で引き伸ばして単独コロニーを得、これを以下の実験に使用した。
以下、培地組成においてｇ/Ｌ等とあるのは、各成分を該当ｇ計量し、精製水で１Ｌにしたという意味である。
＜YM培地＞
ペプトン５g/L、酵母エキス３g/L、麦芽エキス３g/L、グルコース１０g/L
＜YM寒天培地＞
YM培地に寒天２０g/Lを添加し、加熱溶解して作成。 Saccharomyces cerevisiae Yeast Collection Method A commercially available baker's yeast (Nisshin Supercamellia Dry Yeast: Nisshin Foods Co., Ltd.) was purchased and added to an Erlenmeyer flask containing 100 ml of YM medium sterilized at 120 ° C. for 15 minutes. 1 g of the suspension was suspended, and rotational culture was performed at 28 ° C. and 150 rpm for 3 days. One platinum loop was taken from the suspension and stretched on a YM agar medium to obtain a single colony, which was used in the following experiment.
Hereinafter, “g / L” or the like in the medium composition means that each g was weighed and made 1 L with purified water.
<YM medium>
Peptone 5g / L, yeast extract 3g / L, malt extract 3g / L, glucose 10g / L
<YM agar>
Prepared by adding 20 g / L agar to YM medium and dissolving with heating.

金銀花、女貞子抽出液の調製
金銀花抽出液は、漢方薬として市販されている金銀花乾燥物を購入し、粉砕機で粉砕した。粉砕物１０ｇに精製水９０ｇを加え、８０℃で２時間加熱抽出した。抽出液は遠心分離器で上澄み液を取り、金銀花抽出液とした。女貞子抽出液は漢方薬として市販されている女貞子を購入し、以下金銀花抽出液と同じ処理を行い、女貞子抽出液を得た。尚、得られた抽出液の濃度は、金銀花抽出液は蒸発残分に換算して４．０W/V％、女貞子抽出液は、蒸発残分に換算して２．８W/V％であった。 Preparation of gold and silver flower and Sadako extract The gold and silver flower extract was obtained by purchasing a gold and silver flower dried product marketed as a Chinese medicine and pulverizing with a pulverizer. 90 g of purified water was added to 10 g of the pulverized product, and the mixture was extracted by heating at 80 ° C. for 2 hours. The supernatant was extracted with a centrifuge to obtain a gold and silver flower extract. The Sadako extract was purchased as a Chinese herbal medicine, and the same treatment as the gold and silver flower extract was performed to obtain a Sadako extract. The concentration of the resulting extract is 4.0 W / V% in terms of evaporation residue for gold and silver flower extract, and 2.8 W / V% for Sadako extract in terms of evaporation residue. there were.

酵母の培養と培地の調製
培地はＹＮＢ（ＹｅａｓｔＮｉｔｒｏｇｅｎＢａｓｅ）ｗｉｔｈＡｍｍｏｎｉｕｍＳｕｌｆａｔｅ合成培地にグルコースを２．０％添加した（以下、本明細書中では、YNB-SG培地と称す）。
培地５０ｍｌに〔実施例２〕で調製した金銀花及び/又は女貞子抽出液を加え（配合量は表中に記載）、１２０℃、１５分間オートクレーブで滅菌処理を行った。培地を冷却後、１白金耳の酵母菌を植え付け、２８℃、１５０ｒｐｍ、で４日間培養を行った。培養後、３，０００ｒｐｍ、５分間の遠心分離により、菌体と培養液を分離した。分離した菌体に５０％エタノール水溶液３ｍｌを加え、室温で１昼夜放置した。その後３０００ｒｐｍで５分間遠心分離を行い、上清を取り菌体抽出液とした。
＜YNB-SG培地組成＞
硫酸アンモニウム５，０００、リン酸二水素カリウム１，０００、硫酸マグネシウム５００、塩化ナトリウム１００、塩化カルシウム１００、ビオチン０．００２、パントテン酸カルシウム０．４、葉酸０．００２、イノシトール２．０、ナイアシン０．４、パラアミノ安息香酸０．２、塩酸ピリドキシン０．４、リボフラビン０．２、塩酸チアミン０．４、ホウ酸０．５、硫酸銅０．０４、ヨウ化カリウム０．１、塩化第二鉄０．２、硫酸マンガン０．４、モリブデン酸ナトリウム０．２、硫酸亜鉛０．４、グルコース２０，０００（単位は全てｍｇ/L）。 Yeast culture and medium preparation As a medium, 2.0% glucose was added to YNB (Yeast Nitrogen Base) with Ammonium Sulfate synthetic medium (hereinafter referred to as YNB-SG medium).
The gold and silver flowers and / or Sadako extract prepared in [Example 2] were added to 50 ml of the medium (the blending amount is described in the table), and sterilization was performed in an autoclave at 120 ° C. for 15 minutes. After cooling the medium, 1 platinum ear yeast was planted and cultured at 28 ° C. and 150 rpm for 4 days. After culturing, the cells and the culture solution were separated by centrifugation at 3,000 rpm for 5 minutes. 3 ml of 50% ethanol aqueous solution was added to the separated cells and left at room temperature for 1 day. Thereafter, centrifugation was performed at 3000 rpm for 5 minutes, and the supernatant was taken to obtain a cell extract.
<YNB-SG medium composition>
Ammonium sulfate 5,000, potassium dihydrogen phosphate 1,000, magnesium sulfate 500, sodium chloride 100, calcium chloride 100, biotin 0.002, calcium pantothenate 0.4, folic acid 0.002, inositol 2.0, niacin 0 .4, 0.2 paraaminobenzoic acid, pyridoxine hydrochloride 0.4, riboflavin 0.2, thiamine hydrochloride 0.4, boric acid 0.5, copper sulfate 0.04, potassium iodide 0.1, ferric chloride 0.2, manganese sulfate 0.4, sodium molybdate 0.2, zinc sulfate 0.4, glucose 20,000 (unit is mg / L).

YM培地５０ｍｌに〔実施例２〕で調製した金銀花及び／又は女貞子抽出液（配合量は表中に記載：％は抽出液として添加した濃度ある。）を加え、１２０℃、１５分間オートクレーブで滅菌処理を行った。培地を冷却後、１白金耳の酵母菌を植え付け、２８℃、１５０ｒｐｍ、で４日間培養を行った。培養後、３，０００ｒｐｍ、５分間の遠心分離により、菌体と培養液を分離した。分離した菌体に５０％エタノール水溶液３ｍｌを加え、室温で１昼夜放置した。その後３０００ｒｐｍで５分間遠心分離を行い、上清を取り菌体抽出液とした。 The gold and silver flower and / or Sadako extract prepared in [Example 2] was added to 50 ml of YM medium (the amount is shown in the table:% is the concentration added as the extract), and autoclaved at 120 ° C. for 15 minutes. And sterilized. After cooling the medium, 1 platinum ear yeast was planted and cultured at 28 ° C. and 150 rpm for 4 days. After culturing, the cells and the culture solution were separated by centrifugation at 3,000 rpm for 5 minutes. 3 ml of 50% ethanol aqueous solution was added to the separated cells and left at room temperature for 1 day. Thereafter, centrifugation was performed at 3000 rpm for 5 minutes, and the supernatant was taken to obtain a cell extract.

（処方例３）の化粧水の処方で、金銀花抽出液を添加して培養した酵母菌体抽出液の代わりに〔実施例２〕で示した金銀花抽出液、および女貞子抽出液を用いて作成した化粧水（比較品１、２）、及び天然成分を含有するＹＭ培地に、〔実施例３〕で示した金銀花抽出液、女貞子抽出液を添加して培養した酵母の菌体抽出液を用いた化粧水（比較品３〜５）、合成培地（天然成分を含有しない培地）であるYNB-SG培地に、〔実施例３〕で示した金銀花抽出液、女貞子抽出液を添加して培養した酵母の菌体抽出液を用いた化粧水（試験品１〜３）を作成し、１０名の臭い判定専門の官能パネラーを用いて臭いの官能評価を行った。なお、比較品１〜３における金銀花抽出液、女貞子抽出液の化粧水中の濃度、および比較品４〜５、試験品１〜３における酵母菌体抽出液の化粧水中の濃度は蒸発残留物として０．１％になるように調製して化粧水を作成した。 In the formula of the lotion of (Prescription Example 3), the gold and silver flower extract shown in [Example 2] and the Sadako extract are used instead of the yeast cell extract added and cultured with the gold and silver flower extract. The yeast cells cultured by adding the gold and silver flower extract and Sadako extract shown in [Example 3] to the skin lotion (comparative products 1 and 2) prepared in this manner and the YM medium containing natural ingredients. To the lotion (comparative products 3 to 5) using the extract and the YNB-SG medium, which is a synthetic medium (a medium not containing natural ingredients), the gold and silver flower extract and Sadako extract shown in [Example 3] A lotion (test products 1 to 3) was prepared using a yeast cell extract cultivated with the addition of odor, and the sensory evaluation of the odor was performed using 10 panelists specializing in odor determination. In addition, the concentration in the lotion of the gold and silver flower extract and Sadako extract in the comparison products 1 to 3 and the concentration in the lotion of the yeast cell extract in the comparison products 4 to 5 and the test samples 1 to 3 are evaporation residues. As a result, the skin lotion was prepared to 0.1%.

結果を〔表1〕に示した。金銀花、女貞子抽出液を配合した化粧水（比較品１、２）では、臭いが強く、大変気になると答えたパネラーが６名および７名という結果であった。一方、天然物を含むＹＭ培地に金銀花及び/又は女貞子抽出液を添加して培養した酵母菌体抽出液を配合した化粧水（比較品３〜５）では、大変気になるがそれぞれ４名、４名、及び2種混合培養物でも４名となり、いずれも臭いが気になることがわかる。しかし、合成培地であるYNB-SG培地に金銀花、女貞子抽出液を添加して培養した酵母の菌体抽出液を配合した化粧水（試験品１〜３）では、臭いが気にならないと答えたパネラーがそれぞれ６名、５名、および５名となり、金銀花抽出液及び／又は女貞子抽出液含有合成培地で酵母を培養することにより、金銀花抽出液、女貞子抽出液、及び酵母特有の臭いが大幅に低減されたことが分かる。
尚、比較品１〜５、試験品１〜３の色は、化粧品に添加する前の状態で、比較品１、２は、生薬特有の濃い茶色を示し、酵母で培養した比較品３〜５及び試験品１〜３については、透明淡黄色であった。 The results are shown in Table 1. In the lotion (comparative products 1 and 2) containing gold and silver flower and female Sadako extract, the panelists who responded that the smell was strong and they were very worried were 6 and 7. On the other hand, lotions (comparative products 3 to 5) containing a yeast cell extract obtained by adding a gold and silver flower and / or Sadako extract to a YM medium containing a natural product were very anxious. The name, 4 people, and the mixed culture of 2 species are 4 people, and it can be seen that all of them are worried about odor. However, in the skin lotion (test products 1 to 3) containing the yeast cell extract obtained by adding the gold and silver flower and Sadako extract to the synthetic medium YNB-SG medium, the odor does not matter. The responding panelists were 6, 5 and 5, respectively. By culturing yeast in a synthetic medium containing a gold and silver flower extract and / or a female Sadako extract, the gold and silver flower extract, the female Sadako extract, and the yeast It can be seen that the characteristic odor has been greatly reduced.
In addition, the colors of the comparative products 1 to 5 and the test products 1 to 3 are in a state before being added to the cosmetic, and the comparative products 1 and 2 are dark brown peculiar to herbal medicines, and the comparative products 3 to 5 cultured in yeast. And about the test products 1-3, it was transparent light yellow.

以上の結果から、金銀花及び/又は女貞子抽出液における生薬特有の色は、酵母で培養することにより低減するものの、天然物を含む培地で培養した際には、依然臭いを低減することは出来ていないことが分かる。
それに対し、本願発明である、天然物を含まない合成培地に金銀花及び/又は女貞子抽出液を添加する形で培養した場合においては、生薬特有の色も臭いも大幅に低減することが出来、汎用性が広がったと言える。 From the above results, the herbal medicine-specific color in the gold and silver flowers and / or Sadako extract is reduced by culturing in yeast, but when cultured in a medium containing natural products, the odor is still reduced. You can see that it was not done.
On the other hand, when cultivated in the form of adding the gold and silver flower and / or Sadako extract to a synthetic medium that does not contain natural products, which is the present invention, the color and odor peculiar to herbal medicines can be greatly reduced. It can be said that versatility has spread.

ＤＰＰＨ試験
＜ＤＰＰＨ溶液の調製＞
ＤＰＰＨ溶液は、以下に示す各成分を、（Ａ）：（Ｂ）：（Ｃ）＝１：４：３容量の割合で混合し調製する。
（Ａ）ＥＳ（２-（N-モルホリノ)エタンスルホン酸）５．５２gを水１００mlに溶かし、１Ｎ−ＮａＯＨでＰＨ６．１に調製する。
（Ｂ）ＤＰＰＨ（１，１−ジフェニルー２−ピクリルヒドラジル）１５．７ｍｇをエタノール１００ｍｌに溶解する。
（Ｃ）精製水
＜Trolox溶液の調製＞
Trolox２５ｍｇをDMSO（ジメチルスルホキシド）１０ｍｌに溶解し、１０ｍM溶液を作成した。
＜DPPH試験＞
測定は試験溶液１０μｌを９６ｗｅｌｌｐｌａｔｅの１ｗｅｌｌ中に加え、次いでＤＰＰＨ溶液１９０μｌを迅速に加え混合する。１０分後、各ｗｅｌｌの吸光度を５４０ｎｍで測定する。試験溶液のTrolox当量は、０．１mM、０．３mM、０．５mM、１.０mM、３．０mM、５．０mM、１０mMのTrolox溶液１０μｌをとり、DPPH溶液１９０μｌを加え混合し、10分後の５４０nmの吸光度を測定し、Trolox濃度と５４０nmの吸光度値の検量線を作成する。試験溶液の５４０nmの吸光度値から、検量線によりTrolox当量を算出した。標準物質として使用するTroloxは、トコフェロールと類似した構造を有する物質である。Troloxを１とした場合、α-トコフェロール、γ-トコフェロール、δ-トコフェロールは、それぞれ０．５０、０．７４、１．３６を示すといわれているので、Trolox当量が０．５以上であれば、十分な抗酸化効果であると言える。 DPPH test <Preparation of DPPH solution>
The DPPH solution is prepared by mixing the following components in a ratio of (A) :( B) :( C) = 1: 4: 3 volume.
(A) 5.52 g of ES (2- (N-morpholino) ethanesulfonic acid) is dissolved in 100 ml of water and adjusted to pH 6.1 with 1N NaOH.
(B) 15.7 mg of DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) is dissolved in 100 ml of ethanol.
(C) Purified water <Preparation of Trolox solution>
25 mg of Trolox was dissolved in 10 ml of DMSO (dimethyl sulfoxide) to prepare a 10 mM solution.
<DPPH study>
For the measurement, 10 μl of the test solution is added to one well of 96 well plate, and then 190 μl of DPPH solution is rapidly added and mixed. After 10 minutes, the absorbance of each well is measured at 540 nm. The Trolox equivalent of the test solution is 0.1 mM, 0.3 mM, 0.5 mM, 1.0 mM, 3.0 mM, 5.0 mM, 10 mM, 10 μl of Trolox solution, 190 μl of DPPH solution is added and mixed, and 10 minutes later The absorbance at 540 nm is measured, and a calibration curve for the Trolox concentration and the absorbance value at 540 nm is prepared. From the absorbance value of the test solution at 540 nm, Trolox equivalent was calculated using a calibration curve. Trolox used as a standard substance is a substance having a structure similar to that of tocopherol. When Trolox is 1, α-tocopherol, γ-tocopherol, and δ-tocopherol are said to show 0.50, 0.74, and 1.36, respectively, so if Trolox equivalent is 0.5 or more It can be said that this is a sufficient antioxidant effect.

［表２］には、［実施例２］で調製した金銀花抽出液を[実施例３]で示したYNB-SG培地に添加して培養した場合（培養前培地及び培養後の菌体抽出液）のDPPH消去活性をTrolox当量（mM）で示した。尚、各酵母菌体抽出液の濃度は、蒸発残分に換算して約０．３５Ｗ/Ｖ％であった。金銀花抽出液添加濃度０％において、培養前培地のTrolox当量が０ｍＭであることから、YNB-SG培地そのものには、DPPH消去活性がないことが分かる。つまり、金銀花抽出液が実質的に添加されている培養前培地のTrolox当量は、各添加濃度の金銀花抽出液そのもののTrolox当量を示していると言える。
酵母培養後の菌体抽出液のTrolox当量は、金銀花抽出液の添加濃度に依存して高くなっている。尚、表には示していないが、金銀花抽出液を更に添加した場合においても、濃度依存性が確認された。培養前培地及び培養後の菌体抽出液のTrolox当量が、近似した数値になっていることから、金銀花抽出液を酵母で培養しても、金銀花抽出液そのものの抗酸化効果は低減していないことが分かる。
尚、金銀花抽出液の各添加濃度において、当初の抽出液に存在した特有の臭い、色は、培養後には大幅に低減されており、金銀花抽出液の当初の抗酸化効果は維持したままで、臭い、色を大幅に低減することが出来ることが確認出来た。 In [Table 2], the gold and silver flower extract prepared in [Example 2] is added to the YNB-SG medium shown in [Example 3] and cultured (pre-culture medium and bacterial cell extraction after culture). The DPPH scavenging activity of the liquid was shown as Trolox equivalent (mM). The concentration of each yeast cell extract was about 0.35 W / V% in terms of evaporation residue. Since the Trolox equivalent of the pre-culture medium is 0 mM at a gold / silver flower extract addition concentration of 0%, it can be seen that the YNB-SG medium itself has no DPPH elimination activity. That is, it can be said that the Trolox equivalent of the pre-culture medium to which the gold and silver flower extract is substantially added indicates the Trolox equivalent of the gold and silver flower extract itself at each added concentration.
The Trolox equivalent of the cell extract after culturing yeast is high depending on the concentration of the gold and silver flower extract added. Although not shown in the table, concentration dependency was confirmed even when the gold and silver flower extract was further added. Since the Trolox equivalents of the culture medium before culture and the cell extract after culture are close to each other, even if the gold and silver flower extract is cultured in yeast, the antioxidant effect of the gold and silver flower extract itself is reduced. I understand that it is not.
In addition, at each added concentration of the gold and silver flower extract, the characteristic odor and color present in the original extract are greatly reduced after the culture, and the original antioxidant effect of the gold and silver flower extract is maintained. It was confirmed that the odor and color could be greatly reduced.

［表３］には、［実施例２］で調製した女貞子抽出液を[実施例３]で示したYNB-SG培地に添加して培養した場合（培養前培地及び培養後の菌体抽出液）のDPPH消去活性をTrolox当量（mM）で示した。尚、各酵母菌体抽出液の濃度は、蒸発残分に換算して約０．３５Ｗ/Ｖ％であった。女貞子抽出液添加濃度０％において、培養前培地のTrolox当量が０ｍＭであることから、YNB-SG培地そのものには、DPPH消去活性がないことが分かる。つまり、女貞子抽出液が実質的に添加されている培養前培地のTrolox当量は、各添加濃度の女貞子抽出液そのもののTrolox当量を示していると言える。
酵母培養後の菌体抽出液のTrolox当量は、女貞子抽出液の添加濃度に依存して高くなっている。尚、表には示していないが、女貞子抽出液を更に添加した場合においても、濃度依存性が確認された。培養前培地及び培養後の菌体抽出液のTrolox当量が、近似した数値になっていることから、女貞子抽出液を酵母で培養しても、女貞子抽出液そのものの抗酸化効果は低減していないことが分かる。
尚、女貞子抽出液の各添加濃度において、当初の抽出液に存在した特有の臭い、色は、培養後には大幅に低減されており、女貞子抽出液の当初の抗酸化効果は維持したままで、臭い、色を大幅に低減することが出来ることが確認出来た。 In [Table 3], when the Sadako extract prepared in [Example 2] is added to the YNB-SG medium shown in [Example 3] and cultured (the medium before and after the cultivation) The DPPH scavenging activity of the liquid was shown as Trolox equivalent (mM). The concentration of each yeast cell extract was about 0.35 W / V% in terms of evaporation residue. Since the Trolox equivalent of the pre-culture medium is 0 mM at 0% Sadako extract concentration, it can be seen that the YNB-SG medium itself does not have DPPH elimination activity. That is, it can be said that the Trolox equivalent of the pre-culture medium to which the Sadako extract is substantially added indicates the Trolox equivalent of the Sadako extract itself at each added concentration.
The Trolox equivalent of the cell extract after yeast culture is high depending on the concentration of the Sadako extract. Although not shown in the table, concentration dependency was confirmed even when the Sadako extract was further added. Since the Trolox equivalents of the culture medium before culture and the cell extract after culture are close to each other, even if the Sadako extract is cultured in yeast, the antioxidant effect of the Sadako extract itself is reduced. I understand that it is not.
In addition, at each added concentration of Sadako extract, the characteristic odor and color that existed in the original extract were greatly reduced after cultivation, and the original antioxidant effect of Sadako extract was maintained. It was confirmed that the odor and color could be greatly reduced.

[表４]には、［実施例２］で調製した金銀花抽出液及び女貞子抽出液を[実施例３]で示したYNB-SG培地に添加して培養した場合（培養前培地及び培養後の菌体抽出液）のDPPH消去活性をTrolox当量（mM）で示した。尚、各酵母菌体抽出液の濃度は、蒸発残分に換算して約０．３５Ｗ/Ｖ％であった。
金銀花抽出液及び女貞子抽出液を併用した場合においても、各抽出液を単独で添加した場合同様の傾向が見られた。つまり、金銀花抽出液及び女貞子抽出液を酵母で培養しても、金銀花抽出液及び女貞子抽出液そのものの抗酸化効果は低減せず、金銀花抽出液及び女貞子抽出液の各添加濃度において、当初の抽出液に存在した特有の臭い、色は、培養後には大幅に低減されており、金銀花抽出液及び女貞子抽出液の当初の抗酸化効果は維持したままで、臭い、色を大幅に低減することが出来ることが確認出来た。 In [Table 4], the gold and silver flower extract and Sadako extract prepared in [Example 2] were added to the YNB-SG medium shown in [Example 3] and cultured (pre-culture medium and culture). The DPPH scavenging activity of the subsequent bacterial cell extract) was shown as Trolox equivalent (mM). The concentration of each yeast cell extract was about 0.35 W / V% in terms of evaporation residue.
Even when the gold and silver flower extract and Sadako extract were used in combination, the same tendency was observed when each extract was added alone. In other words, culturing the gold and silver flower extract and Sadako extract in yeast does not reduce the antioxidant effect of the gold and silver flower extract and Sadako extract itself. In terms of concentration, the characteristic odor and color that were present in the original extract were greatly reduced after the culture, while maintaining the original antioxidant effect of the gold and silver flower extract and Sadako extract, while maintaining the odor, It was confirmed that the color could be greatly reduced.

次に、［表５］に示した酵母菌の生育に必要な最小限の栄養源からなる合成培地（詳細は表に記載；各成分の単位はｇ/１００ｍｌ）を１００ｍｌの三角フラスコに５０ｍｌ作成し、本願発明の金銀花抽出液を培地に５％添加して（表中は蒸発残分に換算した濃度Ｗ/Ｖ％）滅菌した後、酵母菌を植菌し１週間、24℃にて150rpmで回転培養を行い、菌体の生育度、Trolox当量、臭いを確認した。比較例としてYNB-SG培地で培養したものについても同様の項目を確認した。
菌体抽出液は得られた菌体に、５０％エタノール水溶液を3ml添加し、5℃、24時間放置撹拌後、5,000rpmにて遠心分離した上清を菌体抽出液とした。
＜菌体の生育度＞
培養して得られた、培養液を３，０００rpmで１０分間遠心分離を行い、培養上清を除去し、増殖した酵母菌体を回収し、回収した菌体湿重量を測定した。
＜Trolox当量＞
前述の［実施例５］と同様の方法で行った。
＜臭いの確認＞
各培地において培養後に、上記方法で得られた菌体抽出液を作成して臭いを確認した。
（判定基準）
◎：臭いなし。
○：やや臭いはあるが、気にならない。
×：臭いあり。
＜色の確認＞
各培地において培養後に、得られた前記菌体抽出液の色を下記の判定基準に従って評価した。
（判定基準）
◎：色なし。
○：やや色はあるが、気にならない。
×：色あり。 Next, 50 ml of a synthetic medium (details are given in the table; the unit of each component is g / 100 ml) composed of the minimum nutrients necessary for the growth of yeast shown in [Table 5] is prepared in 50 ml. Then, after adding 5% of the gold and silver flower extract of the present invention to the medium (concentration W / V% converted to evaporation residue in the table) and sterilizing, inoculate the yeast and incubate at 24 ° C for 1 week. Rotational culture was performed at 150 rpm, and the growth degree, Trolox equivalent and odor of the cells were confirmed. As a comparative example, the same items were confirmed for those cultured in YNB-SG medium.
As a bacterial cell extract, 3 ml of 50% ethanol aqueous solution was added to the obtained bacterial cells, left to stir at 5 ° C. for 24 hours, and then centrifuged at 5,000 rpm to obtain a bacterial cell extract.
<Growth of cells>
The culture solution obtained by culturing was centrifuged at 3,000 rpm for 10 minutes, the culture supernatant was removed, the grown yeast cells were collected, and the collected wet cell weight was measured.
<Trolox equivalent>
The same method as in [Example 5] was performed.
<Odor confirmation>
After culturing in each medium, the microbial cell extract obtained by the above method was prepared to confirm the odor.
(Criteria)
A: No smell.
○: There is a slight smell, but I do not mind.
X: There is a smell.
<Check color>
After culturing in each medium, the color of the obtained bacterial cell extract was evaluated according to the following criteria.
(Criteria)
A: No color.
○: There is a slight color, but I do not care.
X: There is color.

[表５]中、上段は金銀花抽出液を添加した培地におけるＴｒｏｌｏｘ量、臭い、色について評価した。下段は、金銀花抽出液を添加していない培地のＴｒｏｌｏｘ量を参考に示した。下段は金銀花抽出液を培地中に添加していないので、臭いはなく、色も無色であった。
表５の結果より、（Ａ）炭素源、（Ｂ）窒素源、（Ｃ）リン源からなる合成培地に金銀花抽出液を添加した培地で培養した場合であっても、高い抗酸化効果を維持し、臭いも色も気にならない抗酸化剤が得ることが出来た。
尚、（Ａ）炭素源を含まない場合は、極端に菌が生育しなかった為、表に示さず。 In [Table 5], the upper part evaluated the amount of Trolox, smell, and color in the culture medium to which the gold and silver flower extract was added. The lower row shows the Trolox amount of the medium not added with the gold and silver flower extract for reference. In the lower row, no gold and silver flower extract was added to the medium, so there was no odor and the color was colorless.
From the result of Table 5, even when it is a case where it culture | cultivates with the culture medium which added the gold-silver flower extract to the synthetic culture medium which consists of (A) carbon source, (B) nitrogen source, and (C) phosphorus source, it has a high antioxidant effect. It was possible to obtain an antioxidant that was maintained and did not bother with odor or color.
In addition, when (A) a carbon source is not included, since a microbe did not grow extremely, it does not show in a table | surface.

次に、本発明の培養処理液を配合した処方例を示すが、本発明はこれに限定されるものでない。 Next, although the formulation example which mix | blended the culture processing liquid of this invention is shown, this invention is not limited to this.

化粧料の処方例
以下の化粧料の処方例で示す酵母菌体抽出液は、YNB-SG培地で、金銀花及び/又は女貞子抽出液を０．２％添加して培養した酵母菌体抽出液を示す。尚、下記に示した酵母菌体抽出液の配合量は、抽出液としての量である。カッコ内に蒸発残分としての量を併記した。
（処方例１）化粧用クリーム（質量％）
ａ）ミツロウ・・・２．０
ｂ）ステアリルアルコール・・・５．０
ｃ）ステアリン酸・・・８．０
ｄ）スクワラン・・・１０．０
ｅ）自己乳化型グリセリルモノステアレート・・・３．０
ｆ）ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．０
ｇ）金銀花抽出液を添加して培養した酵母菌体抽出液・・・１０．０（０．０３５）
ｈ）１，３−ブチレングリコール・・・５．０
ｉ）水酸化カリウム・・・０．３
ｊ）防腐剤・酸化防止剤・・・適量
ｋ）精製水・・・残部
製法
ａ）〜ｆ）までを加熱溶解し、８０℃に保つ。ｈ）〜ｋ）までを加熱溶解し、８０℃に保ち、ａ）〜ｆ）に加えて乳化し、４０℃まで撹拌しながら冷却する。その後、ｇ）を加え、攪拌し均一に溶解する。 Example of cosmetic formulation The yeast cell extract shown in the following cosmetic formulation example is YNB-SG medium, and 0.2% of gold and silver flower and / or Sadako extract is added and cultured. Indicates liquid. In addition, the compounding quantity of the yeast cell extract shown below is the quantity as an extract. The amount as evaporation residue is also shown in parentheses.
(Formulation Example 1) Cosmetic cream (mass%)
a) Beeswax 2.0
b) Stearyl alcohol ... 5.0
c) Stearic acid ... 8.0
d) Squalane ... 10.0
e) Self-emulsifying glyceryl monostearate 3.0
f) Polyoxyethylene cetyl ether (20E.O.) ... 1.0
g) Extract of yeast cells cultured by adding gold and silver flower extract ... 10.0 (0.035)
h) 1,3-butylene glycol ... 5.0
i) Potassium hydroxide ... 0.3
j) Preservative / Antioxidant: appropriate amount k) Purified water: Remaining preparation methods a) to f) are heated and dissolved and kept at 80 ° C. Heat up to h) to k), keep at 80 ° C., add to a) to f), emulsify, and cool to 40 ° C. with stirring. Then g) is added and stirred to dissolve uniformly.

（処方例２）乳液（質量％）
ａ）ミツロウ・・・０．５
ｂ）ワセリン・・・２．０
ｃ）スクワラン・・・８．０
ｄ）ソルビタンセスキオレエート・・・０．８
ｅ）ポリオキシエチレンオレイルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．２
ｆ）女貞子抽出液を添加して培養した酵母菌体抽出液・・・０．１（０．０００３５）
ｇ）１，３−ブチレングリコール・・・７．０
ｈ）カルボキシビニルポリマー・・・０．２
ｉ）水酸化カリウム・・・０．１
ｊ）精製水・・・残部
ｋ）防腐剤・酸化防止剤・・・適量
ｌ）エタノール・・・７．０
製法
ａ）〜ｅ）までを加熱溶解し、８０℃に保つ。ｇ）〜ｋ）までを加熱溶解し、８０℃に保ち、ａ）〜ｅ）に加えて乳化し、５０℃まで撹拌しながら冷却する。５０℃でｆ）、ｌ）を添加し、４０℃まで攪拌、冷却する。 (Prescription Example 2) Emulsion (mass%)
a) Beeswax 0.5
b) Petrolatum 2.0
c) Squalane ... 8.0
d) Sorbitan sesquioleate ... 0.8
e) Polyoxyethylene oleyl ether (20EO) 1.2
f) Yeast extract extracted with Sadako extract and cultured 0.1 ... (0.00035)
g) 1,3-butylene glycol 7.0
h) Carboxyvinyl polymer 0.2
i) Potassium hydroxide ... 0.1
j) Purified water: balance k) antiseptic / antioxidant ... appropriate amount l) ethanol ... 7.0
The production methods a) to e) are dissolved by heating and kept at 80 ° C. G) to k) are heated and dissolved, kept at 80 ° C., added to a) to e), emulsified, and cooled to 50 ° C. with stirring. Add f), l) at 50 ° C., stir to 40 ° C. and cool.

（処方例３）化粧水（質量％）
ａ）金銀花抽出液を添加して培養した酵母菌体抽出液・・・５．０（０．０１７５）
ｂ）グリセリン・・・５．０
ｃ）ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．０
ｄ）エタノール・・・６．０
ｅ）香料・・・適量
ｆ）防腐剤・酸化防止剤・・・適量
ｇ）精製水・・・残部
製法
ａ）〜ｇ）までを混合し、均一に溶解する。 (Formulation Example 3) Lotion (mass%)
a) Extract of yeast cells cultured by adding gold and silver flower extract ... 5.0 (0.0175)
b) Glycerin ... 5.0
c) Polyoxyethylene sorbitan monolaurate (20EO) ... 1.0
d) Ethanol ... 6.0
e) Perfume ... appropriate amount f) antiseptic / antioxidant ... appropriate amount g) purified water ... the remaining preparation methods a) to g) are mixed and dissolved uniformly.

（処方例４）洗顔料（質量％）
ａ）ステアリン酸・・・１２．０
ｂ）ミリスチン酸・・・１４．０
ｃ）ラウリン酸・・・５．０
ｄ）ホホバ油・・・３．０
ｅ）グリセリン・・・１０．０
ｆ）ソルビトール・・・１５．０
ｇ）１，３−ブチレングリコール・・・１０．０
ｈ）ＰＯＥ（２０）グリセロールモノステアリン酸・・・２．０
ｉ）水酸化カリウム・・・５．０
ｊ）水・・・残部
ｋ）キレート剤・・・適量
ｌ）香料・・・適量
ｍ）金銀花抽出液を添加して培養した酵母菌体抽出液・・・１．０（０．００３５）
ｎ）女貞子抽出液を添加して培養した酵母菌体抽出液・・・１．０（０．００３５）
製法
ａ）〜ｈ）までを加熱溶解し７０℃に保つ。ｊ）にｉ）を溶解後ａ）〜ｈ）に加えケン化する。その後ｋ）、ｌ）を入れ攪拌しながら冷却する。５０℃でｍ）、n)を添加し、４０℃まで攪拌、冷却する。 (Formulation example 4) Face wash (mass%)
a) Stearic acid ... 12.0
b) Myristic acid 14.0
c) Lauric acid ... 5.0
d) Jojoba oil ... 3.0
e) Glycerin 10.0
f) Sorbitol ... 15.0
g) 1,3-butylene glycol ... 10.0
h) POE (20) Glycerol monostearic acid 2.0
i) Potassium hydroxide ... 5.0
j) Water ... balance k) chelating agent ... appropriate amount l) perfume ... appropriate amount m) yeast cell extract added with gold and silver flower extract and cultured 1.0 (0.0035)
n) Yeast cell extract cultivated with Sadako extract added ... 1.0 (0.0035)
The manufacturing methods a) to h) are dissolved by heating and maintained at 70 ° C. After i) is dissolved in j), it is added to a) to h) and saponified. Then, k) and l) are added and cooled with stirring. Add m), n) at 50 ° C., stir to 40 ° C. and cool.

（処方例５）化粧水（質量％）
ａ）金銀花抽出液を添加して培養した酵母菌体抽出液・・・１０．０（０．０３５）
ｂ）女貞子抽出液を添加して培養した酵母菌体抽出液・・・５．０（０．０１７５）
ｃ）グリセリン・・・５．０
ｄ）ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．０
e）エタノール・・・６．０
ｆ）香料・・・適量
ｇ）防腐剤・酸化防止剤・・・適量
ｈ）精製水・・・残部
製法
ａ）〜ｈ）までを混合し、均一に溶解する。 (Formulation Example 5) Lotion (mass%)
a) Extract of yeast cells cultured by adding gold and silver flower extract 10.0 (0.035)
b) Yeast cell extract extracted with female Sadako extract added and cultured 5.0 (0.0175)
c) Glycerin ... 5.0
d) Polyoxyethylene sorbitan monolaurate (20EO) ... 1.0
e) Ethanol ... 6.0
f) Perfume ... appropriate amount g) antiseptic / antioxidant ... appropriate amount h) purified water ... the remaining preparation methods a) to h) are mixed and dissolved uniformly.

（処方例６）化粧水（質量％）
ａ）金銀花抽出液と女貞子抽出液を添加して培養した酵母菌体抽出液・・・５．０（０．０１７５）
b）グリセリン・・・５．０
ｃ）ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．０
ｄ）エタノール・・・６．０
e）香料・・・適量
ｆ）防腐剤・酸化防止剤・・・適量
ｇ）精製水・・・残部
製法
ａ）〜ｇ）までを混合し、均一に溶解する。 (Formulation Example 6) Lotion (mass%)
a) Extract of yeast cells cultured by adding the gold and silver flower extract and Sadako extract ... 5.0 (0.0175)
b) Glycerin ... 5.0
c) Polyoxyethylene sorbitan monolaurate (20EO) ... 1.0
d) Ethanol ... 6.0
e) Perfume ... appropriate amount f) antiseptic / antioxidant ... appropriate amount g) purified water ... the remaining preparation methods a) to g) are mixed and dissolved uniformly.

以上詳述したごとく、本発明によれば、色及び臭いが大幅に低減された、高い抗酸化剤を得る事が可能になる。本抗酸化剤を添加した抗酸化化粧料は、紫外線や、外的環境から受ける肌の炎症などにより生じる光老化によるシワの改善に幅広く適用することができる。
As described in detail above, according to the present invention, it is possible to obtain a high antioxidant with greatly reduced color and odor. Antioxidant cosmetics to which the present antioxidant is added can be widely applied to the improvement of wrinkles caused by photoaging caused by ultraviolet rays and skin inflammation from the external environment.

Claims

An antioxidant comprising a cell extract of Saccharomyces cerevisiae cultured in a synthetic medium containing a carbon source, a nitrogen source, and a phosphorus source and containing a gold and silver flower and / or Sadako extract.

The antioxidant according to claim 1, which is a synthetic medium comprising the following (A), (B) and (C).
(A) One or more types selected from monosaccharides, disaccharides and trisaccharides as a carbon source (B) One or more types selected from nitrates, ammonium salts, urea and amino acids as a nitrogen source (C) As a phosphorus source One or more selected from phosphates

The antioxidant according to any one of claims 1 to 2, which is a synthetic medium comprising the following (A), (B), and (C).
(A) One or more types selected from ribose, arabinose, xylose, glucose, fructose, mannose, galactose, rhamnose, sucrose, maltose, lactose, trehalose, cellobiose, raffinose, maltotriose as a carbon source (B) nitrogen Sources include potassium nitrate, sodium nitrate, calcium nitrate, ammonium sulfate, ammonium chloride, tryptophan, lysine, methionine, phenylalanine, threonine, valine, isoleucine, leucine, histidine, alanine, arginine, asparagine, serine, aspartic acid, cysteine, glutamine, glutamic acid As one or more (C) phosphorus sources selected from glycine, proline and tyrosine, potassium monohydrogen phosphate, potassium dihydrogen phosphate, phosphoric acid One or more selected from Moniumu

The extract added in addition to the synthetic medium is 0.1% by mass or more of the evaporation residue of the gold and silver flower extract, or the Sadako extract is 0.1% by mass or more of the evaporation residue. The antioxidant in any one of Claims 1-3.

An antioxidant cosmetic comprising the antioxidant according to any one of claims 1 to 4.