JP2620727B2

JP2620727B2 - ペプチド脂質

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Publication number: JP2620727B2
Application number: JP2333335A
Authority: JP
Inventors: 尚之西川
Original assignee: Fuji Photo Film Co Ltd
Current assignee: Fujifilm Holdings Corp
Priority date: 1990-10-26
Filing date: 1990-11-29
Publication date: 1997-06-18
Anticipated expiration: 2012-06-18
Also published as: JPH04221394A

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、Arg−Gly−Aspのトリペプチド単位を有す
る、リポソームあるいはミセル等の分子集合体を形成す
るのに最適なペプチド脂質に関する。

〔従来の技術〕

フィブロネクチンは細胞−細胞外基質の接着に関与す
るタンパク質であり、血小板凝集やガン転移にも関与し
ていると考えられている。これらの相互作用は一連の細
胞表面のレセプターにより仲介されること、これらのレ
セプターが、分子量約25万の巨大分子であるフィブロネ
クチンのアルギニン−グリシン−アスパラギン酸（Arg
−Gly−AspまたはRGD）配列を特異的に認識することが
明らかにされ、レセプターとの相互作用に重要なもので
あることが報告されている（ネイチャー（Nature）、第
309巻、30頁、1984年）。

以来、Arg−Gly−Asp配列を有するオリゴあるいはポ
リペプチドを用いる研究が進められている。

例えば、Arg−Gly−Asp配列を有する種々の鎖状およ
び環状のオリゴペプチドを用いて血小板凝集を阻害する
方法（高分子学会予縞集（Polymer Preprints,Japa
n）、第38巻、3149頁、1989年、特開平２−174797
号）、Arg−Gly−Asp配列を有するペプチドを細胞移動
抑制剤として用いる方法（特開平２−4716号）、Arg−G
ly−Aspを固定化したPMMA膜を細胞接着膜として用いる
方法（高分子学会予縞集（Polymer Preprints,Japa
n）、第37巻、705頁、1988年）が報告されている。さら
に、ポリマーにArg−Gly−Aspを必須構成単位とするペ
プチドを共有結合させ動物細胞培養基体、生体複合人工
臓器用基体として用いる方法（特開平１−309682号、特
開平１−305960号）、Arg−Gly−Asp−Ser配列を有する
ポリペプチドを体外血液用血小板保護剤として用いる方
法が開示されている（特開昭64−6217号）。

また、Arg−Gly−Asp配列を有するオリゴペプチドあ
るいはその繰り返し構造を有するポリペプチドを用い
て、ガン転移を抑制する方法が知られている（インター
ナショナル・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・マク
ロモレキュルズ（Int.J.Biol.Macromol.）、第11巻、23
頁、1989年、同誌、第11巻、226頁、1989年、ジャパン
・ジャーナル・オブ・キャンサー・リサーチ（Jpn.J.Ca
ncer Res.）第60巻、722頁、1989年）。

一方、リポソームやミセル等の分子集合体をドラッグ
キャリアーとして用いる方法が多数検討されている
（例えば、リポソーム、245頁〜271頁、南江堂、1988
年、キャンサー・リサーチ（Cancer Res.）第43巻、532
8頁、1983年、ジャーナルオブコントロールド・リ
リース（J.Controlled Release）269頁、1990年）。

しかし、リポソーム等の分子集合体形成脂質にArg−G
ly−Asp配列を有するペプチド脂質を用いた例は知られ
ていない。

〔発明が解決しようとする課題〕

本発明の目的は、Arg−Gly−Aspのトリペプチド単位
を有する、リポソームあるいはミセル等の分子集合体を
形成するのに最適なペプチド脂質誘導体及びその合成法
を提供することである。

〔課題を解決するための手段〕

本発明の化合物は下記、一般式〔Ｉ〕で示される合成
ペプチド脂質またはその塩である。

R²−（［Ｘ］−Arg−Gly−Asp−［Ｙ］）ｎ−Ｚ−R¹ ・・・〔Ｉ〕式中、Arg、Gly、Aspはそれぞれアルギニン、グリシ
ン、アスパラギン酸残基を示す。

〔Ｘ〕、〔Ｙ〕は、存在するかあるいは存在しないア
ミノ酸残基または、二つあるいは三つのアミノ酸残基か
らなるペプチド残基を示す。存在する場合には〔Ｘ〕
〔Ｙ〕は、Ser、Gly、Val、Asn、Pro、Cys、Thrから選
択されるアミノ酸残基または、これらのアミノ酸残基の
組み合わせにより構成されるペプチド残基が好ましい。
特に〔Ｙ〕はSerであることが好ましい。また、
〔Ｘ〕、〔Ｙ〕が共に存在しない場合も特に好ましい。
さらに、〔Ｘ〕はGly、〔Ｙ〕はSer−Proであることも
特に好ましい。Ser、Val、Asn、Pro、Cys、Thrはそれぞ
れセリン、バリン、アスパラギン、プロリン、システイ
ン、トレオニン残基を示す。ｎは１〜５の整数を示し、
特に１〜３が好ましい。Ｚは−Ｏ−または−NH−を示
す。

R²は水素原子、HOOC−（CH₂）_ｍ−CO−基またはHOOC
−CH＝CH−CO−基を示し、特に水素原子、HOOC−（C
H₂）_２−CO−基、HOOC−CH＝CH−CO−基が好ましい。ｍ
は１〜４の整数を示す。

本発明において、アミノ酸はＬ−、Ｄ−、ラセミ体い
ずれでもよいが、Ｌ−アミノ酸が好ましい。

R¹は3,7,11,15−テトラメチルヘキサデシル基または
フィチル基を示す。

またこれらの化合物の塩も好ましい。

好ましい塩の例として、トリフルオロ酢酸塩、塩酸
塩、酢酸塩、硫酸塩、乳酸塩があげられる。

以下に本発明の好ましい具体例を物性値とともに示す
が、本発明はこれらに限定されるものではない。ただ
し、ペプチド脂質−９、ペプチド脂質−14及びペプチド
脂質−15は本発明のペプチド脂質であるが、その他のペ
プチド脂質は参考例として示すものである。

各塩に関して、そのFAB−マススペクトルはフリー体
のペアレントピークを与える。また、塩の確認はFAB−
マススペクトルの塩に由来するピークにより行なわれ
る。（例えばトリフルオロ酢酸塩（Ｍ−CF₃COO）^＋（Ｍ
−CF₃COOH）⁻、CF₃COO^-（113）、塩酸塩（Ｍ−C
l^-）^＋、（Ｍ−HCl）⁻、Cl^-（35）のピークにより確認
できる。）ペプチド脂質−１Ｈ−Arg−Gly−Asp−Ｏ−C₁₄H₂₉ FAB−MS（Pos.）（Ｍ＋Ｈ）⁺543 FAB−MS（Neg.）（Ｍ−Ｈ）^-541 アミノ酸分析:Arg0.97,Gly0.97,Asp0.95, ペプチド脂質−２Ｈ−Arg−Gly−Asp−Ser−Ｏ−C₁₆H₃₃ FAB−MS（Pos.）（Ｍ＋Ｈ）⁺658 FAB−MS（Neg.）（Ｍ−Ｈ）^-656 アミノ酸分析:Arg0.96,Gly1.11,Asp0.97,Ser0.76 ペプチド脂質−３Ｈ−Gly−Arg−Gly−Asp−Ser−Ｏ−C₁₀H₂₁ FAB−MS（Pos.）（Ｍ＋Ｈ）⁺631 FAB−MS（Neg.）（Ｍ−Ｈ）^-629 アミノ酸分析:Arg0.96,Gly2.01,Asp0.94,Ser0.77 ペプチド脂質−４Ｈ−Gly−Arg−Gly−Asp−Cys−Ｏ−C₁₈H₃₇ FAB−MS（Pos.）（Ｍ＋Ｈ）⁺805 FAB＋MS（Neg.）（Ｍ−Ｈ）^-803 アミノ酸分析:Arg0.96,Gly0.95,Asp0.91,Cys1.88 ペプチド脂質−５Ｈ−Gly−Arg−Gly−Asp−Thr−Ｏ−C₂₀H₄₁ FAB−MS（Pos.）（Ｍ＋Ｈ）⁺785 FAB−MS（Neg.）（Ｍ−Ｈ）^-783 アミノ酸分析:Arg0.94,Gly1.93,Asp0.98,Thr0.71 ペプチド脂質−６Ｈ−Arg−Gly−Asp−NH−C₁₄H₂₉ FAB−MS（Pos.）^＋（Ｍ＋Ｈ）⁺542 FAB−MS（Neg.）（Ｍ−Ｈ）^-540 アミノ酸分析:Arg1.00,Gly0.99,Asp0.93, ペプチド脂質−７Ｈ−Arg−Gly−Asp−Ser−NH−C₁₆H₃₃ FAB−MS（Pos.）（Ｍ＋Ｈ）⁺657 FAB−MS（Neg.）（Ｍ−Ｈ）^-655 アミノ酸分析:Arg0.98,Gly0.96,Asp0.99,Ser0.79 ペプチド脂質−８Ｈ−Gly−Arg−Gly−Asp−Thr−NH−C₁₈H₃₇ FAB−MS（Pos.）（Ｍ＋Ｈ）⁺756 FAB−MS（Neg.）（Ｍ−Ｈ）^-754 アミノ酸分析:Arg0.96,Gly1.94,Asp0.99,Thr0.71 ペプチド脂質−９ FAB−MS（Pos.）（Ｍ＋Ｈ）⁺627 FAB−MS（Neg.）（Ｍ−Ｈ）^-625 アミノ酸分析:Arg1.03,Gly1.06,Asp0.98, ペプチド脂質−10 Ｈ−（Arg−Gly−Asp）_２−Ｏ−C₁₈H₃₇ FAB−MS（Pos.）（Ｍ＋Ｈ）⁺927 FAB−MS（Neg.）（Ｍ−Ｈ）^-925 アミノ酸分析:Arg2.03,Gly2.10,Asp2.12, ペプチド脂質−11 Ｈ−（Arg−Gly−Asp−Ser）_２−NH−C₁₄H₂₉ FAB−MS（Pos.）（Ｍ−Ｈ）⁺1044 FAB−MS（Neg.）（Ｍ−Ｈ）^-1042 アミノ酸分析:Arg1.98,Gly1.98,Asp1.89,Ser1.63 ペプチド脂質−12 Ｈ−（Arg−Gly−Asp−）_３−Ｏ−C₁₆H₃₃ FAB−MS（Pos.）（Ｍ＋Ｈ）⁺1227 FAB−MS（Neg.）（Ｍ−Ｈ）^-1225 アミノ酸分析:Arg3.12,Gly2.94,Asp3.05, ペプチド脂質−13 Ｈ−Arg−Gly−Asp−Ser−Pro−NH−C₁₀H₂₁ FAB−MS（Pos.）（Ｍ＋Ｈ）⁺670 FAB−MS（Neg.）（Ｍ−Ｈ）^-668 アミノ酸分析:Arg0.98,Gly0.98,Asp0.95,Ser0.64,Pro0.
91 ペプチド脂質−14 FAB−MS（Pos.）（Ｍ＋Ｈ）⁺798 FAB−MS（Neg.）（Ｍ−Ｈ）^-796 アミノ酸分析:Arg0.99,Gly2.10,Asp0.98,Ser0.77,Pro0.
91 ペプチド脂質−15 FAB−MS（Pos.）（Ｍ＋Ｈ）⁺971 FAB−MS（Neg.）（Ｍ−Ｈ）^-969 アミノ酸分析:Arg1.05,Gly2.16,Asp0.98,Ser0.78,Pro0.
95,Cys0.94 ペプチド脂質−16 HOOC−（CH₂）_２−CO−Arg−Gly−Asp−Ｏ−C₁₄H₂₉ FAB−MS（Pos.）（Ｍ＋Ｈ）⁺643 アミノ酸分析:Arg1.12,Gly1.18,Asp1.03 ペプチド脂質−17 HOOC−（CH₂）_２−CO−Arg−Gly−Asp−Ser−Ｏ−C₁₆H
₃₃ FAB−MS（Pos.）（Ｍ＋Ｈ）⁺758 アミノ酸分析:Arg1.01,Gly1.11,Asp1.04,Ser0.78 本発明の化合物は、たとえば次の４段階の工程により
合成することができる。

保護アミノ酸と、R¹−Ｚ−Ｈとの縮合（R¹は相当するアルキル基、Ｚは−Ｏ−または−NH−を
示す。）保護アミノ酸の逐次延伸脱保護、精製脱塩及び塩形成以下、各段階の工程について詳細に説明する。

一般式〔Ｉ〕で示される化合物の場合、Ｙで示され
るアミノ酸の保護体またはＹが存在しない場合はAspの
保護体とR¹−Ｚ−Ｈとを縮合し、エステルあるいはアミ
ドとする。

縮合に関しては、DCC法、DCC−additive法、CDI法等
一般の手法が採用される。

保護アミノ酸を逐次伸長する方法としては、既知の
方法、すなわち泉屋ら編「ペプチド合成の基礎と実験」
（丸善）やBodanszky著“PRINCIPLES OF PEPTIDE SYNTH
ESIS"THE PRACTICE OF PEPTIDE SYNTHESIS"（Springer
Verlag,New York）に記載されている方法がいずれも有
効である。縮合反応の段階では、DCC（ジシクロヘキシ
ルカルボジイミド）法、DCC−additive法、アジド法、C
DI法、混合酸無水物法、活性化エステル法のいずれを採
用してもよいが、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
（HOBt）とDCCを併用するDCC−additive法が最も良い結
果を与える。

保護基を脱保護するのに用いられる条件は、用いた
保護基の種類に大きく依存する。通常使用される脱保護
方法は、加水素分解、トリフルオロ酢酸、無水フッ化水
素、トリフルオロメタンスルホン酸−チオアニソール混
合系、トリフルオロ酢酸−チオアニソール混合系等であ
るが、保護基の種類によってはさらに多様な手段が可能
である。

脱保護後の脱塩に関しては、イオン交換樹脂を用い
る方法が容易である。メタノールあるいはTHFとクロロ
ホルム混合液を用いて、最初に、酸性樹脂、つづいて塩
基性樹脂によりイオン交換すればよい。

また、塩形成に関してもイオン交換樹脂を用いる方法
が好ましい。

以下に、ペプチド脂質−２、ペプチド脂質−６、ペプ
チド脂質−12、ペプチド脂質−14及びペプチド脂質17の
合成例を示すが、本発明の合成法はこれらに限定される
ものではない。

また、化合物の好ましい具体例で示したペプチド脂質
（１）〜（17）は、アミノ酸側鎖をベンジルエーテル、
ベンジルチオエーテルあるいは、ベンジルエステルで保
護したBoc−アミノ酸と相当するR¹−OHあるいはR¹−NH₂
を用いて以下に示す合成例と同様にして合成できる。

実施例１ペプチド脂質−２の合成 Boc−セリンベンジルエーテル5.9g、ヘキサデシルア
ルコール（カテコール60、花王品）4.8g、ジシクロヘキ
シルカルボジイミド4.6g、ジメチルアミノピリジン0.24
g、をジクロメタンに溶解し10℃で一昼夜撹拌した。反
応液をろ過し、ろ液を減圧濃縮してシリカゲルクロマト
グラフィーにて精製（溶離液クロロホルム）し、Boc−S
er（Bzl）−OC₁₆H₃₃10.3gを得た。

次に、Boc−Ser（Bzl）−OC₁₆H₃₃10.3gをジクロロメ
タン、トリフルオロ酢酸混合液（20ml/20ml）に溶解し3
0分間撹拌した。

溶媒を減圧留去した後、クロロホルムに溶解し、飽和
炭酸水素ナトリウム水溶液で処理して有機層をボウ硝乾
燥した後、クロロホルムを減圧留去してSer（Bzl）−OC
₁₆H₃₃9.3gを得た。

Boc−アスパラギン酸−β−ベンジルエステル7.1g、S
er（Bzl）−OC₁₆H₃₃9.3g、１−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール3.7gのジクロロメタン、ジメチルホルムアミド混
合液60mlにジシクロヘキシルカルボジイミド4.9gを加え
一昼夜撹拌した。

反応液をろ過し、ろ液を減圧留去した後、クロロホル
ムに溶解した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で有機層
を洗いボウ硝乾燥した後、クロロホルムを減圧留去し、
残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにて精製（溶離
液ヘキサン／酢酸エチル＝6/4）してBoc−Asp（OBzl）
−Ser（Bzl）−OC₁₆H₃₃14.2gを得た。

次に、Boc−Asp（OBzl）−Ser（Bzl）−OC₁₆H₃₃14.2g
をジクロロメタン、トリフルオロ酢酸混合液（20ml/20m
l）に溶解し30分間撹拌した。

溶媒を減圧留去した後、クロロホルムに溶解し飽和炭
酸水素ナトリウム水溶液で処理して有機層をボウ硝乾燥
した後、クロロホルムを減圧留去してAsp（OBzl）−Ser
（Bzl）−OC₁₆H₃₃13.5gを得た。

Asp（OBzl）−Ser（Bzl）−OC₁₆H₃₃13.5gをジクロロ
メタン50mlに溶解し、Boc−グリシン無水物8.7gを加え
一昼夜撹拌した。反応液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶
液で洗い、ボウ硝乾燥した後、ジクロロメタンを減圧留
去し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにて精製
（溶離液ジクロロメタン／酢酸エチル＝6/4）して Boc−Gly−Asp（OBzl）−Ser（Bzl）−OC₁₆H₃₃11.8gを
得た。

次に、Boc−Gly−Asp（OBzl）−Ser（Bzl）−OC₁₆H₃₃
11.8gをジクロロメタン、トリフルオロ酢酸混合液（20m
l/20ml）に溶解し30分間撹拌した。

溶媒を減圧留去した後、クロロホルムに溶解し飽和炭
酸水素ナトリウム水溶液で処理して有機層をボウ硝乾燥
した後、クロロホルムを減圧留去してGly−Asp（OBzl）
−Ser（Bzl）−OC₁₆H₃₃10.2gを得た。

Boc−Arg（Ｚ）²8.4g、１−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール2.4g、Gly−Asp（OBzl）−Ser（Bzl）−OC₁₆H₃₃1
0.2gのジクロロメタン、ジメチルホルムアミド混合液60
mlにジシクロヘキシルカルボジイミド3.2gのジクロロメ
タン溶液を20mlを加え、一昼夜撹拌した。

反応液をろ過し、ろ液を減圧留去した後、クロロホル
ムに溶解した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で有機層
を洗いボウ硝乾燥した後、クロロホルムを減圧留去し、
残留物をシリカゲルクロマトラフィーにて精製（溶離液
ジクロロメタン／酢酸エチル＝6/4）した後、酢酸エチ
ルで再結晶しBoc−Arg（Ｚ）^２−Gly−Asp（OBzl）−Se
r（Bzl）−OC₁₆H₃₃6.6gを得た。

Boc−Arg（Ｚ）^２−Gly−Asp（OBzl）−Ser（Bzl）−
OC₁₆H₃₃2.0gジクロロメタン、トリフルオロ酢酸混合液
（20ml/20ml）に溶解し30分間撹拌した。

溶媒を減圧留去した後、残留物の500mgを酢酸エチ
ル、メタノール混合液70mlに溶解し二酸化白金150mgを
加え加水素分解を50℃で行った。反応液をセライトにて
ろ過し、ろ液を減圧濃縮した。残留物を酢酸、酢酸エチ
ルにて再結晶し、TFA−Arg−Gly−Asp−Ser−OC₁₆H₃₃20
6mgを得た。

FAB−MS（Pos.）（Ｍ−CF₃COO）⁺658 FAB−MS（Neg.）（Ｍ−CF₃COOH）^-656、CF₃COO^-113TF
A−Arg−Gly−Asp−Ser−OC₁₆H₃₃をクロロホルム−メタ
ノール（1:1）混合液に溶解し、アンバーライトIR−120
B（H⁺フォーム）続いてアンバーライトIRA−93ZUで処理
してＨ−Arg−Gly−Asp−Ser−OC₁₆H₃₃を定量的に得
た。

FAB−MS（Pos.）（Ｍ＋Ｈ）⁺658 FAB−MS（Neg.）（Ｍ−Ｈ）^-656 Arg−Gly−Asp−Ser−OC₁₆H₃₃をクロロホルム−メタ
ノール（1:1）混合液に溶解し、アンバーライトIRA−93
ZU（Cl^-フォーム）で処理してＨ−Arg−Gly−Asp−Ser
−OC₁₆H₃₃・HClを得た。

FAB−MS（Pos.）（Ｍ−Cl^-）⁺658 FAB−MS（Neg.）（Ｍ−HCl）⁺656、Cl^-35 実施例２ペプチド脂質−６の合成 Boc−アスパラギン酸−β−ベンジルエステル4.5g、
１−テトラデシルアミン4.3g、１−ヒドロキシベンゾト
リアゾール3.1g、ジシクロヘキシルカルボジイミド4.6
g、ジメチルアミノピリジン0.24g、をジクロロメタン、
ジメチルホルムアミド混合液に溶解し10℃で一昼夜撹拌
した。反応液をろ過し、ろ液を減圧濃縮してシリカゲル
クロマトグラフィーにて精製（溶離液クロロホルム）
し、Boc−Asp（OBzl）−NH−C₁₄H₂₉9.7gを得た。

次に、Boc−Asp（OBzl）−NH−C₁₄H₂₉9.7gをジクロロ
メタン、トリフルオロ酢酸混合液（20ml/20ml）に溶解
し30分間撹拌した。

溶媒を減圧留去した後、クロロホルムに溶解し、飽和
炭酸水素ナトリウム水溶液で処理して有機層をボウ硝乾
燥した後、クロロホルムを減圧留去してAsp（OBzl）−N
H−C₁₄H₂₉9.3gを得た。

Asp（OBzl）−NH−C₁₄H₂₉9.3gをジクロロメタン40ml
に溶解し、Boc−グリシン無水物10.0gを加え一昼夜撹拌
した。反応液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗いボ
ウ硝乾燥した後、ジクロロメタンを減圧留去し、残留物
をシリカゲルクロマトグラフィーにて精製（溶離液ジク
ロロメタン／酢酸エチル＝6/4）してBoc−Gly−Asp（OB
zl）−NH−C₁₄H₂₉9.1gを得た。

次に、Boc−Gly−Asp（OBzl）−NH−C₁₄H₂₉9.1gをジ
クロロメタン、トリフルオロ酢酸混合液（20ml/20ml）
に溶解し30分間撹拌した。

溶媒を減圧留去した後、クロロホルムに溶解し、飽和
炭酸水素ナトリウム水溶液で処理して有機層をボウ硝乾
燥した後、クロロホルムで減圧留去してGly−Asp（OBz
l）−NH−C₁₄H₂₉8.8gを得た。

Boc−Arg（Ｚ）²9.2g、１−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール2.8g、Gly−Asp（OBzl）−NH−C₁₄H₂₉8.8gのジク
ロロメタン、ジメチルホルムアミド混合液60mlにジシク
ロヘキシルカルボジイミド3.7gのジクロロメタン溶液20
mlを加え、一昼夜撹拌した。

反応液をろ過し、ろ液を減圧留去した後、クロロホル
ムに溶解した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で有機層
を洗いボウ硝乾燥した後、クロロホルムを減圧留去し、
残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにて精製（溶離
液ジクロロメタン／酢酸エチル＝7/3）した後、酢酸エ
チルで再結晶しBoc−Arg（Ｚ）^２−Gly−Asp（OBzl）−
NH−C₁₄H₂₉12.4gを得た。

Boc−Arg（Ｚ）^２−Gly−Asp（OBzl）−NH−C₁₄H₂₉2.
0gをジクロロメタン、トリフルオロ酢酸混合液（20ml/2
0ml）に溶解し30分間撹拌した。

溶媒を減圧留去した後、残留物の500mgを酢酸エチル
−メタノール混合液70mlに溶解し二酸化白金150mgを加
え加水分解を50℃で行った。反応液をセライトにてろ過
し、ろ液を減圧濃縮した。残留物を酢酸、酢酸エチルに
て再結晶し、TFA−Arg−Gly−Asp−NH−C₁₄H₂₉210mgを
得た。

FAB−MS（Pos.）（Ｍ−CF₃COO）⁺542 FAB−MS（Neg.）（Ｍ−CF₃COOH）^-540、CF₃COO^-113TF
A−Arg−Gly−Asp−NH−C₁₄H₂₉をクロロホルム−メタノ
ール（1:1）混合液に溶解し、アンバーライトIR−120B
（H⁺フォーム）続いてアンバーライトIRA−93ZUで処理
してＨ−Arg−Gly−Asp−NH−C₁₄H₂₉を定量的に得た。

FAB−MS（Pos.）（Ｍ＋Ｈ）⁺542 FAB−MS（Neg.）（Ｍ−Ｈ）^-540 Ｈ−Arg−Gly−Asp−NH−C₁₄H₂₉をクロロホルムメタ
ノール（1:1）混合液に溶解し、アンバーライトIRA−93
ZU（Cl^-フォーム）で処理してＨ−Arg−Gly−Asp−NH−
C₁₄H₂₉・HClを得た。

FAB−MS（Pos.）（Ｍ−Cl）⁺542 FAB−MS（Neg.）（Ｍ−HCl）^-540、Cl^-35 実施例３ペプチド脂質−12の合成 Boc−アスパラギン酸−β−ベンジルエステル6.5g、
ヘキサデシルアルコール5.4g（カテコール60花王品）、
ジシクロヘキシルカルボジイミド4.6g、ジメチルアミノ
ピリジン0.24g、をジクロロメタンに溶解し10℃で一昼
夜撹拌した。反応液をろ過し、ろ液を減圧濃縮してシリ
カゲルクロマトグラフィーにて精製（溶離液クロロホル
ム）し、Boc−Asp（OBzl）−Ｏ−C₁₆H₃₃10.1gを得た。

次に、Boc−Asp（OBzl）−Ｏ−C₁₆H₃₃10.1gをジクロ
ロメタン、トリフルオロ酢酸混合液（20ml/20ml）に溶
解し30分間撹拌した。

溶媒を減圧留去した後、クロロホルムに溶解し、飽和
炭酸水素ナトリウム水溶液で処理して有機層をボウ硝乾
燥した後、クロロホルムを減圧留去してAsp（OBzl）−
Ｏ−C₁₆H₃₃9.5gを得た。

Asp（OBzl）−Ｏ−C₁₆H₃₃9.5gをジクロロメタン40ml
に溶解し、Boc−グリシン無水物12.0gを加え一昼夜撹拌
した。反応液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗いボ
ウ硝乾燥した後、ジクロロメタンを減圧留去し、残留物
をシリカゲルクロマトグラフィーにて精製（溶離液ジク
ロロメタン／酢酸エチル＝6/4）してBoc−Gly−Asp（OB
zl）−Ｏ−C₁₆H₃₃9.4gを得た。

次に、Boc−Gly−Asp（OBzl）−Ｏ−C₁₆H₃₃9.4gをジ
クロロメタン、トリフルオロ酢酸混合液（20ml/20ml）
に溶解し30分間撹拌した。

溶媒を減圧留去した後、クロロホルムに溶解し、飽和
炭酸水素ナトリウム水溶液で処理して有機層をボウ硝乾
燥した後、クロロホルムを減圧留去してGly−Asp（OBz
l）−Ｏ−C₁₆H₃₃8.5gを得た。

Boc−Arg（Ｚ）²9.5g、１−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール2.8g、Gly−Asp（OBzl）−Ｏ−C₁₆H₃₃8.5gのジク
ロロメタン、ジメチルホルムアミド混合液60mlにジシク
ロヘキシルカルボジイミド3.7gのジクロロメタン溶液20
mlを加え、一昼夜撹拌した。

反応液をろ過し、ろ液を減圧濃縮した後、クロロホル
ムに溶解した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で有機層
を洗いボウ硝乾燥した後、クロロホルムを減圧留去し、
残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにて精製（溶離
液ジクロロメタン／酢酸エチル＝7/3）した後、酢酸エ
チルで再結晶し、Boc−Arg（Ｚ）^２−Gly−Asp（OBzl）
−Ｏ−C₁₆H₃₃12.4gを得た。

Boc−Arg（Ｚ）^２−Gly−Asp（OBzl）−Ｏ−C₁₆H₃₃1
2.0gをジクロロメタン、トリフルオロ酢酸混合液（20ml
/20ml）に溶解し30分間撹拌した。

溶媒を減圧留去した後、クロロホルムに溶解し飽和炭
酸水素ナトリウム水溶液で処理して有機層をボウ硝乾燥
した後、クロロホルムを減圧留去してArg（Ｚ）^２−Gly
−Asp（OBzl）−Ｏ−C₁₆H₃₃10.6gを得た。

Boc−アスパラギン酸−β−ベンジルエステル3.3g、A
rg（Ｚ）^２−Gly−Asp（OBzl）−Ｏ−C₁₆H₃₃9.3g、ジシ
クロヘキシルカルボジイミド2.3g、ジメチルアミノピリ
ジン0.12g、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール1.4gを
ジクロロメタンに溶解し10℃で一昼夜撹拌した。反応液
をろ過し、ろ液を減圧濃縮してシリカゲルクロマトグラ
フィーにて精製（溶離液クロロホルム／酢酸エチル＝1/
1）し、Boc−Asp−（OBzl）−Arg（Ｚ）^２−Gly−Asp
（OBzl）−Ｏ−C₁₆H₃₃11.0gを得た。

次に、Boc−Asp（OBzl）−Arg（Ｚ）^２−Gly−Asp（O
Bzl）−Ｏ−C₁₆H₃₃11.0gをジクロロメタン、トリフルオ
ロ酢酸混合液（20ml/20ml）に溶解し30分間撹拌した。

溶媒を減圧留去した後、クロロホルムに溶解し、飽和
炭酸水素ナトリウム水溶液で処理して有機層をボウ硝乾
燥した後、クロロホルムを減圧留去してAsp（OBzl）−A
rg（Ｚ）^２−Gly−Asp（OBzl）−Ｏ−C₁₆H₃₃9.8gを得
た。

Boc−Arg（Ｚ）^２−Gly−Asp（OBzl）−Arg（Ｚ）^２
−Gly10.8g、Asp（OBzl）−Arg（Ｚ）^２−Gly−Asp（OB
zl）−Ｏ−C₁₆H₃₃9.8g、ジシクロヘキシルカルボジイミ
ド2.0g、ジメチルアミノピリジン0.12g、をジクロロメ
タンに溶解し10℃で一昼夜撹拌した。反応液をろ過し、
ろ液を減圧濃縮してシリカゲルクロマトグラフィーにて
精製（溶離液クロロホルム／メタノール＝9/1）し、Boc
−（Arg（Ｚ）^２−Gly−Asp（OBzl））_３−Ｏ−C₁₆H₃₃1
0.5gを得た。

次に、Boc−（Arg（Ｚ）^２−Gly−Asp（OBzl））_３−
Ｏ−C₁₆H₃₃2.0gをジクロロメタン、トリフルオロ酢酸混
合液（20ml/20ml）に溶解し30分間撹拌した。

反応液を減圧留去して、残留物に酢酸を50ml加え溶解
し、二酸化白金0.5g、パラジウム炭素0.5gを加え50℃で
加水素分解した。

反応液をろ過し、ろ液で減圧留去した。残留物を酢
酸、クロロホルム系にて再沈殿させTFA−（Arg−Gly−A
sp）_３−Ｏ−C₁₆H₃₃280mgを得た。

FAB−MS（Pos.）（Ｍ−CF₃COO）⁺1227 FAB−MS（Neg.）（Ｍ−CF₃COOH）^-1225,CF₃COO^-113 TFA−（Arg−Gly−Asp）_３−Ｏ−C₁₆H₃₃100mgをクロ
ロホルム、メタノールに溶解し、アンバーライトIR−12
0B（H⁺フォーム）、続いてアンバーライトIRA−93ZUで
処理しＨ−（Arg−Gly−Asp）_３−Ｏ−C₁₆H₃₃を定量的
に得た。

FAB−MS（Pos.）1227 FAB−MS（Neg.）1225 実施例４ペプチド脂質−14の合成ファルネソール50gをエタノール350mlに溶解し、二酸
化白金500mgを加えて12時間加水分解を行った。反応液
をセライトを用いてろ過し、ろ液を減圧濃縮して定量的
に3,7,11−トリメチルドデシルアルコールを得た。

Boc−Pro21.5g、ジシクロヘキシルカルボジイミド（D
CC）20.6g、3,7,11−トリメチルドデシルアルコール22.
8g、トリエチルアミン10.1gを用いて実施例１と同様にD
CC縮合を行った。反応液をろ過し、ろ液を減圧濃縮し
た。残留物をジクロロメタン50mlに溶解し、トリフルオ
ロ酢酸50mlを加えて30分間撹拌した。反応液を減圧濃縮
した。

続いて実施例１と同様にして、DCC−additive法、対
称酸無水物法によりBoc−Ser（Bzl）、Boc−Asp（OBz
l）、Boc−グリシン無水物,Boc−Arg（Ｚ）^２、Boc−グ
リシン無水物を用いてペプチドを伸長し、トリフルオロ
酢酸、５％−パラジウム炭素を用いて脱保護を行った。

精製も実施例１と同様に再結晶法、イオン交換を行い
ペプチド脂質−14を得た。

実施例５ペプチド脂質−17の合成実施例１と同様に合成したBoc−Arg（Ｚ）^２−Gly−A
sp（OBzl）−Ser（Bzl）−Ｏ−C₁₆H₃₃2.1gをジクロロメ
タン20mlに溶解して、トリフルオロ酢酸20mlを加えた。
30分間攪拌した後に反応液を減圧濃縮した。残留物をジ
クロロメタン100mlに溶解し、コハク酸無水物0.20g、ジ
イソプロピルエチルアミン0.26gを加えて12時間攪拌し
た。反応液を1N−炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、有
機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ジクロロメタンを
減圧留去した。

残留物を酢酸に溶解して、二酸化白金300mgを加えて
室温で加水素分解を行った。反応液をセライトでろ過
し、ろ液を減圧濃縮して白金固体を得た。これをクロロ
ホルム、酢酸エチル系で再沈殿を行い精製し、HOOC−
（CH₂）_２−CO−Arg−Gly−Asp−Ser−Ｏ−C₁₆H₃₃400mg
を得た。

〔有用性〕

本発明の化合物は、細胞移動抑制剤、細胞接着膜、細
胞培養基体として有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所 // Ａ６１Ｋ 47/42 Ａ６１Ｋ 47/42 ＢＣ１２Ｎ 5/06 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｅ

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】下記一般式〔Ｉ〕で示される合成ペプチド
脂質またはその塩。 R²−（［Ｘ］−Arg−Gly−Asp−［Ｙ］）ｎ−Ｚ−R¹ ・・・〔Ｉ〕式中、Arg、Gly、Aspはそれぞれアルギニン、グリシ
ン、アスパラギン酸残基を示す。〔Ｘ〕、〔Ｙ〕は、存在するかあるいは存在しないアミ
ノ酸残基または、二つあるいは三つのアミノ酸残基から
なるペプチド残基を示す。ｎは１〜５の整数を示す。Ｚ
は−Ｏ−または−NH−を示す。 R¹は3,7,11,15−テトラメチルヘキサデシル基またはフ
ィチル基を示す。 R²は水素原子、HOOC−（CH₂）ｍ−CO−基またはHOOC−C
H＝CH−CO−基を示す。ｍは１〜４の整数を示す。
【請求項２】〔Ｘ〕、〔Ｙ〕が、存在するアミノ酸残基
または、二つあるいは三つのアミノ酸残基からなるペプ
チド残基を示し、〔Ｘ〕、〔Ｙ〕は、Ser、Gly、Val、A
sn、Pro、Cys、Thrから選択されるアミノ酸残基また
は、これらのアミノ酸残基の組み合わせにより構成され
るペプチド残基である請求項（１）記載の合成ペプチド
脂質。Ser、Val、Asn、Pro、Cys、Thrはそれぞれセリ
ン、バリン、アスパラギン、プロリン、システイン、ト
レオニン残基を示す。
【請求項３】下記式〔II〕で示される請求項（１）記載
の合成ペプチド脂質。 R²−（Arg−Gly−Asp−Ser）ｎ−Ｚ−R¹ ・・・〔II〕式中、ｎは１〜５の整数を示し、Ｚは−Ｏ−または−NH
−を示す。 R¹は3,7,11,15−テトラメチルヘキサデシル基またはフ
ィチル基を示す。 R²は水素原子、HOOC−（CH₂）ｍ−CO−基またはHOOC−C
H＝CH−CO−基を示す。ｍは１〜４の整数を示す。
【請求項４】下記式〔III〕で示される請求項（１）記
載の合成ペプチド脂質。 R²−（Arg−Gly−Asp）ｎ−Ｚ−R¹ ・・・〔III〕式中、ｎは１〜５の整数を示し、Ｚは−Ｏ−または−NH
−を示す。 R¹は3,7,11,15−テトラメチルヘキサデシル基またはフ
ィチル基を示す。 R²は水素原子、HOOC−（CH₂）ｍ−CO−基またはHOOC−C
H＝CH−CO−基を示す。ｍは１〜４の整数を示す。