JP2022174641A - Method for extracting allergen in food product - Google Patents
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
本発明は、イムノクロマト法による食品中のアレルゲンの抽出方法に用いる界面活性剤のスクリーニング方法、該スクリーニング方法により得られた界面活性剤を用いる、アレルゲン検出における食品中のアレルゲンの抽出方法、前記スクリーニング方法により得られた界面活性剤を用いる、食品中のアレルゲンの測定方法、及び前記スクリーニング方法により得られた界面活性剤を含む食品中のアレルゲンの測定キットに関する。 The present invention provides a method for screening a surfactant used in a method for extracting allergens in food by immunochromatography, a method for extracting allergens in food in allergen detection using the surfactant obtained by the screening method, and the screening method. and a kit for measuring allergens in food containing the surfactant obtained by the screening method.
本発明者らは、変性及び未変性のアレルゲンに対するモノクローナル抗体に金コロイドを結合した金コロイド標識抗体と、前記金コロイド標識抗体と異なるエピトープを認識する変性及び未変性のアレルゲンに対するモノクローナル抗体が所定の位置に固定された展開支持体と、食品の被検試料から、陰イオン性界面活性剤とチオ硫酸塩、又は、陰イオン性界面活性剤と非イオン性界面活性剤を用いて抽出した変性及び未変性のアレルゲンの測定サンプルを含む展開液を用い、展開支持体に展開させた後、金コロイドの集積の有無により、アレルゲンを検出するイムノクロマト法において、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）が少なくとも１０重量％含まれている展開液を用いることを特徴とするイムノクロマト法によるアレルゲンの検出方法を提案している（特許文献１）。この方法における抽出方法は、沸騰水中１０分間の抽出である。 The present inventors have found that colloidal gold-labeled antibodies obtained by binding colloidal gold to monoclonal antibodies against denatured and native allergens, and monoclonal antibodies against denatured and native allergens that recognize an epitope different from the colloidal gold-labeled antibodies are prescribed. denatured and extracted from a fixed developing support and a test sample of food using an anionic surfactant and thiosulfate or an anionic surfactant and a nonionic surfactant; Fetal bovine serum (FBS) content of at least 10% by weight in an immunochromatographic method in which an allergen is detected by the presence or absence of colloidal gold accumulation after development on a development support using a developing solution containing a measurement sample of an undenatured allergen. A method for detecting allergens by immunochromatography, which is characterized by using the contained developing solution, has been proposed (Patent Document 1). The extraction method in this method is extraction in boiling water for 10 minutes.
また、本発明者らは、変性及び未変性のアレルゲンを共に認識するモノクローナル抗体に金コロイドを結合した金コロイド標識抗体と、変性及び未変性のアレルゲンを共に認識し、前記金コロイド標識抗体と異なるエピトープを認識するモノクローナル抗体が所定の位置に固定された展開支持体と、被検試料から抽出液を用いて抽出したアレルゲンの測定サンプルと、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）が少なくとも１０重量％含まれている展開液とを用い、金コロイド標識抗体と測定サンプルと展開液との混合液を展開支持体に展開させた後、前記所定の位置における金コロイドの集積の有無により、アレルゲンを検出するイムノクロマト法において、前記アレルゲンが大豆７Ｓグロブリン又はごま１１Ｓグロブリンであり、前記抽出液が陰イオン性界面活性剤、チオ硫酸塩、及び非イオン性界面活性剤を含むことを特徴とするイムノクロマト法によるアレルゲンの検出方法を提案している（特許文献２）。この方法における抽出方法も、沸騰水中１０分間の抽出である。 In addition, the present inventors have found a colloidal gold-labeled antibody obtained by binding colloidal gold to a monoclonal antibody that recognizes both denatured and native allergens, and a colloidal gold-labeled antibody that recognizes both denatured and native allergens and is different from the colloidal gold-labeled antibody. A development support on which a monoclonal antibody that recognizes an epitope is immobilized at a predetermined position, an allergen measurement sample extracted from a test sample using an extract, and at least 10% by weight of fetal bovine serum (FBS). an immunochromatographic method in which allergens are detected based on the presence or absence of accumulation of colloidal gold at the predetermined position after a mixture of the colloidal gold-labeled antibody, the sample to be measured, and the developing solution is developed on the developing support. 3, wherein the allergen is soybean 7S globulin or sesame 11S globulin, and the extract contains an anionic surfactant, a thiosulfate, and a nonionic surfactant, allergen detection by immunochromatography. proposed a method (Patent Document 2). The extraction method in this method is also extraction in boiling water for 10 minutes.
ところで、食品表示法（平成２５年６月２８日公布）によると、特定原材料（表示義務品目：卵、乳、小麦、そば、落花生、えび、かにの７品目）中のアレルゲンの定量検査は、通知法であるＥＬＩＳＡ法を使用して実施している。この通知法では、特許第５４５１８５４号（特許権者；森永製菓株式会社、特許文献３）記載の抽出液（０．５％ドデシル硫酸ナトリウム及び１ＭＮａ２ＳＯ３）を用いるＥＬＩＳＡ法によるアレルゲンの定量分析法とされ、検査結果が出るまで約２日を要する。この方法における抽出方法は、室温で１６時間の抽出である。 By the way, according to the Food Labeling Law (promulgated on June 28, 2013), the quantitative inspection of allergens in specific raw materials (items requiring labeling: eggs, milk, wheat, buckwheat, peanuts, shrimp, and crab) is , conducted using the ELISA method, which is a notification method. In this notification method, quantitative analysis of allergens by ELISA using an extract (0.5% sodium dodecyl sulfate and 1M Na 2 SO 3 ) described in Patent No. 5451854 (Patent holder: Morinaga & Co., Ltd., Patent Document 3) It is legal and it takes about two days for the test results to come out. The extraction method in this method is room temperature extraction for 16 hours.
同じく、食品表示法（平成２５年６月２８日公布）によると、特定原材料に準ずるもの（表示推奨品目：２１品目）中のアレルゲンの定量検査は、多くは国内製のＥＬＩＳＡキットがないため、海外製のキットを用いて行われているのが実情である。なお、ＰＣＲ法などの検査法もあるが、定性検査法であり、定量ができないという問題がある。 Similarly, according to the Food Labeling Law (promulgated on June 28, 2013), quantitative testing of allergens in products conforming to specified raw materials (recommended labeling items: 21 items) is mostly without domestic ELISA kits. The actual situation is that kits made overseas are used. Although there are inspection methods such as the PCR method, they are qualitative inspection methods and have the problem that they cannot be quantified.
前述したように、特定原材料に準ずるもの（表示推奨品目：２１品目）中のアレルゲンの定量検査は、海外製のキットを用いて行われているが、日本の表示制度の感度と合致しない、検査精度が不明であるなどの問題があった。 As mentioned above, quantitative testing of allergens in products conforming to specified raw materials (recommended labeling items: 21 items) is performed using a kit made overseas, but the sensitivity of the Japanese labeling system does not match the inspection. There were problems such as the accuracy being unknown.
特定原材料（表示義務品目：７品目）中のアレルゲンの定量検査は、通知法であるＥＬＩＳＡ法を使用して実施されており、この通知法では、特許文献３記載の抽出液（０．５％ドデシル硫酸ナトリウム及び１ＭＮａ２ＳＯ３）が用いられているが、この抽出液に含まれるドデシル硫酸ナトリウムは、生化学の実験で幅広く用いられる陰イオン性界面活性剤であり、タンパク質を可溶化させる能力が高いが、測定溶液中のドデシル硫酸ナトリウム濃度が高いと、抗体が変性して反応性が低下するという問題があった。ドデシル硫酸ナトリウムを用いる通知法の検査手順では、食品１ｇに抽出液１９ｍＬを混合し（２０倍抽出）、室温で一晩（１２時間以上）振とう抽出し、緩衝液で２０倍希釈した測定溶液（２０倍抽出×２０倍希釈＝４００倍希釈した測定溶液）を用いてアレルゲンの定量検査が行われることになる。さらに、ドデシル硫酸ナトリウムは、人の健康や生態系に有害なおそれのある化学物質の排出や移動に関する法律である「化学物質排出把握管理促進法（ＰＲＴＲ法）」に該当する点でも問題がないとはいえない。
本発明の課題は、より安全性が高く、検出感度に優れたＥＬＩＳＡ法を開発することにある。
Quantitative testing of allergens in specified raw materials (labeling obligatory items: 7 items) is performed using the ELISA method, which is a notification method. Sodium dodecyl sulfate and 1M Na 2 SO 3 ) are used, and the sodium dodecyl sulfate contained in this extract is an anionic surfactant widely used in biochemical experiments and has the ability to solubilize proteins. However, when the concentration of sodium dodecyl sulfate in the measurement solution is high, there is a problem that the antibody is denatured and the reactivity is lowered. In the inspection procedure of the notification method using sodium dodecyl sulfate, 19 mL of the extract is mixed with 1 g of food (20-fold extraction), extracted with shaking overnight (12 hours or more) at room temperature, and the measurement solution diluted 20-fold with buffer solution (20-fold extraction×20-fold dilution=400-fold dilution of the measurement solution) is used to perform the allergen quantitative test. In addition, sodium dodecyl sulfate does not pose a problem in that it falls under the Law Concerning the Release and Transfer of Chemical Substances that May Harm Human Health and Ecosystems (PRTR Law). I can't say.
An object of the present invention is to develop an ELISA method with higher safety and superior detection sensitivity.
本発明者らは、化粧品や高級シャンプーに用いられている、安全性が高く、環境負荷の低い界面活性剤に着目し、ＥＬＩＳＡ法に適用可能か評価した。その結果、新規ＥＬＩＳＡ法により、界面活性剤濃度が１～１０％で測定可能であり、希釈せずに高感度で測定可能な界面活性剤として、ラウレス－５カルボン酸ナトリウム、ラウリルグルコシド及びＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ（モノエタノールアミン）硫酸ナトリウム等を選択し、本発明を完成するに至った。 The present inventors paid attention to surfactants with high safety and low environmental impact, which are used in cosmetics and high-end shampoos, and evaluated their applicability to the ELISA method. As a result, by the new ELISA method, it is possible to measure the surfactant concentration at 1 to 10%, and the surfactants that can be measured with high sensitivity without dilution are sodium laureth-5 carboxylate, lauryl glucoside and PEG- 3 coconut fatty acid amide MEA (monoethanolamine) sodium sulfate, etc. were selected, and the present invention was completed.
すなわち本発明は、以下の事項により特定されるとおりのものである。
（１）ＥＬＩＳＡ法を利用する食品中のアレルゲンの検出方法のための食品中のアレルゲンの抽出方法であって、食品と以下の界面活性剤の１種又は２種以上を含有する抽出液とを混合し、前記食品中のアレルゲンを抽出することを特徴とする食品中のアレルゲンの抽出方法。
（界面活性剤）
・ラウレス－５カルボン酸ナトリウム
・ラウリルグルコシド
・ＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウム
・オレイン酸ナトリウム
・Ｎ－ドデカノイルサルコシン酸ナトリウム
・ヤシ脂肪酸カリウム
・２－アルキル－Ｎ－カルボキシメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン
・イソステアリン酸ＰＥＧ－８グリセリル
・ココイルグリシンナトリウム
・ポリオキシエチレンオレイルエーテル
・ラウラミノプロピオン酸ナトリウム
（２）界面活性剤が、ラウレス－５カルボン酸ナトリウム、ラウリルグルコシド又はＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウムであることを特徴とする上記（１）記載の食品中のアレルゲンの抽出方法。
（３）食品１ｇと、以下の界面活性剤を１％含む食品中のアレルゲン抽出液１９ｍＬとを混合し、沸騰水で１０分加熱抽出し、冷却後ろ過した溶液を希釈せずに測定溶液として用いることを特徴とする、サンドイッチＥＬＩＳＡ法により食品中のアレルゲンを測定する方法。
（界面活性剤）
・ラウレス－５カルボン酸ナトリウム
・ラウリルグルコシド
・ＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウム
・Ｎ－ドデカノイルサルコシン酸ナトリウム
・ヤシ脂肪酸カリウム
・２－アルキル－Ｎ－カルボキシメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン
・イソステアリン酸ＰＥＧ－８グリセリル
・ココイルグリシンナトリウム
・ポリオキシエチレンオレイルエーテル
・ラウラミノプロピオン酸ナトリウム
（４）界面活性剤が、ラウレス－５カルボン酸ナトリウム、ラウリルグルコシド又はＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウムであることを特徴とする上記（３）記載の食品中のアレルゲンを測定する方法。
（５）ＥＬＩＳＡ法により食品中のアレルゲンを測定するためのキットであって、以下の界面活性剤を含む抽出液、及び測定対象のアレルゲンを特異的に認識するモノクローナル抗体とを含むことを特徴とするアレルゲン測定キット。
（界面活性剤）
・ラウレス－５カルボン酸ナトリウム
・ラウリルグルコシド
・ＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウム
・Ｎ－ドデカノイルサルコシン酸ナトリウム
・ヤシ脂肪酸カリウム
・２－アルキル－Ｎ－カルボキシメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン
・イソステアリン酸ＰＥＧ－８グリセリル
・ココイルグリシンナトリウム
・ポリオキシエチレンオレイルエーテル
・ラウラミノプロピオン酸ナトリウム
（６）界面活性剤が、ラウレス－５カルボン酸ナトリウム、ラウリルグルコシド又はＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウムであることを特徴とする上記（５）記載のアレルゲン測定キット。
（７）食品１ｇと、界面活性剤を１％含む食品中のアレルゲン抽出液１９ｍＬとを混合し、沸騰水で１０分加熱抽出し、冷却後ろ過した溶液を希釈せずに測定溶液として用いて、サンドイッチＥＬＩＳＡ法により食品中のアレルゲンを検出する方法における測定結果が、アレルゲン５０ｐｐｂの吸光値が０．５以上を示す界面活性剤を選択することを特徴とする食品中のアレルゲンの抽出方法に用いる界面活性剤のスクリーニング方法。
（８）上記（７）記載のスクリーニング方法により得られるアレルゲン測定のための以下の界面活性剤。
（界面活性剤）
・ラウレス－５カルボン酸ナトリウム
・ラウリルグルコシド
・ＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウム
・Ｎ－ドデカノイルサルコシン酸ナトリウム
・ヤシ脂肪酸カリウム
・２－アルキル－Ｎ－カルボキシメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン
・イソステアリン酸ＰＥＧ－８グリセリル
・ココイルグリシンナトリウム
・ポリオキシエチレンオレイルエーテル
・ラウラミノプロピオン酸ナトリウム
That is, the present invention is as specified by the following matters.
(1) A method for extracting allergens in food for a method of detecting allergens in food using the ELISA method, wherein the food and an extract containing one or more of the following surfactants: A method for extracting an allergen in a food, comprising mixing and extracting the allergen in the food.
(Surfactant)
・Laureth-5 sodium carboxylate ・lauryl glucoside ・PEG-3 coconut fatty acid amide MEA sodium sulfate ・sodium oleate ・N-dodecanoyl sodium sarcosinate ・potassium coconut fatty acid ・2-alkyl-N-carboxymethyl-N-hydroxyethyl Imidazolinium betaine, PEG-8 glyceryl isostearate, sodium cocoylglycinate, polyoxyethylene oleyl ether, sodium lauraminopropionate (2) surfactants include sodium laureth-5 carboxylate, lauryl glucoside, or PEG-3 coconut fatty acid A method for extracting an allergen in food according to (1) above, which is amide MEA sodium sulfate.
(3) Mix 1 g of food and 19 mL of allergen extract in food containing 1% of the following surfactant, heat and extract with boiling water for 10 minutes, cool and filter the solution without dilution as a measurement solution. A method for measuring allergens in food by a sandwich ELISA method, characterized by using
(Surfactant)
Sodium laureth-5 carboxylate, lauryl glucoside, PEG-3 coconut fatty acid amide MEA sodium sulfate, sodium N-dodecanoyl sarcosinate, potassium coconut fatty acid, 2-alkyl-N-carboxymethyl-N-hydroxyethylimidazolinium betaine・PEG-8 glyceryl isostearate ・Sodium cocoylglycinate ・Polyoxyethylene oleyl ether ・Sodium lauraminopropionate (4) Surfactant is sodium laureth-5 carboxylate, lauryl glucoside or PEG-3 coconut fatty acid amide MEA sodium sulfate A method for measuring an allergen in food according to (3) above, characterized in that:
(5) A kit for measuring allergens in food by ELISA, characterized by containing an extract containing the following surfactants and a monoclonal antibody that specifically recognizes the allergen to be measured: allergen measurement kit.
(Surfactant)
Sodium laureth-5 carboxylate, lauryl glucoside, PEG-3 coconut fatty acid amide MEA sodium sulfate, sodium N-dodecanoyl sarcosinate, potassium coconut fatty acid, 2-alkyl-N-carboxymethyl-N-hydroxyethylimidazolinium betaine・PEG-8 glyceryl isostearate ・Sodium cocoylglycine ・Polyoxyethylene oleyl ether ・Sodium lauraminopropionate (6) Surfactant is sodium laureth-5 carboxylate, lauryl glucoside or PEG-3 coconut fatty acid amide MEA sodium sulfate The allergen measurement kit according to (5) above, characterized in that:
(7) Mix 1 g of food and 19 mL of allergen extract in food containing 1% surfactant, heat and extract with boiling water for 10 minutes, cool, filter, and use the solution without dilution as a measurement solution. Use in a method for extracting allergens in food, characterized by selecting a surfactant that shows an absorbance value of 0.5 or more for 50 ppb of the allergen in the method for detecting allergens in food by the sandwich ELISA method. Screening method for surfactants.
(8) The following surfactants for allergen measurement obtained by the screening method described in (7) above.
(Surfactant)
Sodium laureth-5 carboxylate, lauryl glucoside, PEG-3 coconut fatty acid amide MEA sodium sulfate, sodium N-dodecanoyl sarcosinate, potassium coconut fatty acid, 2-alkyl-N-carboxymethyl-N-hydroxyethylimidazolinium betaine・PEG-8 Glyceryl Isostearate ・Sodium Cocoylglycinate ・Polyoxyethylene Oleyl Ether ・Sodium Lauraminopropionate
本発明によると、界面活性剤濃度が１～１０％で測定可能であり、希釈せずに高感度で測定可能な界面活性剤を選択することができ、この選択した界面活性剤は食品成分の影響を受けずに定量することができる。 According to the present invention, it is possible to select a surfactant that can be measured at a surfactant concentration of 1 to 10% and can be measured with high sensitivity without dilution, and the selected surfactant is a food ingredient. can be quantified without being affected.
本発明の食品中のアレルゲンの抽出方法に用いる界面活性剤のスクリーニング方法としては、食品１ｇと、界面活性剤を１％含む食品中のアレルゲン抽出液１９ｍＬとを混合し、沸騰水で１０分加熱抽出し、冷却後ろ過した溶液を希釈せずに測定溶液として用いて、サンドイッチＥＬＩＳＡ法により食品中のアレルゲンを検出する方法における測定結果が、アレルゲン５０ｐｐｂの波長４５０-６２０ｎｍにおける吸光値が０．５以上を示す界面活性剤を選択する方法であれば特に制限されず、かかるスクリーニング方法により、ラウレス－５カルボン酸ナトリウム、ラウリルグルコシド、ＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウム、Ｎ－ドデカノイルサルコシン酸ナトリウム、ヤシ脂肪酸カリウム、２－アルキル－Ｎ－カルボキシメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン、イソステアリン酸ＰＥＧ－８グリセリル、ココイルグリシンナトリウム、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、及びラウラミノプロピオン酸ナトリウムをアレルゲン測定のための界面活性剤として選択することができるが、中でもラウレス－５カルボン酸ナトリウム、ラウリルグルコシド、及びＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウムを好適に選択することができる。 As a screening method for surfactants used in the method for extracting allergens in food according to the present invention, 1 g of food and 19 mL of allergen extract in food containing 1% surfactant are mixed and heated in boiling water for 10 minutes. The measurement result of a method for detecting allergens in food by the sandwich ELISA method using the undiluted solution obtained by extracting, cooling and filtering as the measurement solution was 0.5 at a wavelength of 450-620 nm for 50 ppb of the allergen. It is not particularly limited as long as it is a method for selecting a surfactant that exhibits the above, and by such a screening method, sodium laureth-5 carboxylate, lauryl glucoside, PEG-3 coconut fatty acid amide sodium MEA sulfate, sodium N-dodecanoyl sarcosinate , potassium palmate, 2-alkyl-N-carboxymethyl-N-hydroxyethylimidazolinium betaine, PEG-8 glyceryl isostearate, sodium cocoylglycinate, polyoxyethylene oleyl ether, and sodium lauraminopropionate for allergen determination. Among them, sodium laureth-5 carboxylate, lauryl glucoside, and PEG-3 coconut fatty acid amide MEA sodium sulfate can be preferably selected.
本発明の食品中のアレルゲンの抽出方法としては、ＥＬＩＳＡ法を利用する食品中のアレルゲンの検出方法のための食品中のアレルゲンの抽出方法であって、食品と界面活性剤（ラウレス－５カルボン酸ナトリウム、ラウリルグルコシド、ＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウム、オレイン酸ナトリウム、Ｎ－ドデカノイルサルコシン酸ナトリウム、ヤシ脂肪酸カリウム、２－アルキル－Ｎ－カルボキシメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン、イソステアリン酸ＰＥＧ－８グリセリル、ココイルグリシンナトリウム、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、及びラウラミノプロピオン酸ナトリウムをアレルゲン測定のための界面活性剤として選択することができるが、中でもラウレス－５カルボン酸ナトリウム、ラウリルグルコシド、又はＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウム）の１種又は２種以上を含有する抽出液とを混合し、前記食品中のアレルゲンを抽出する方法であれば特に制限されず、上記界面活性剤の中でも、ラウレス－５カルボン酸ナトリウム、ラウリルグルコシド、及びＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウムを好適に用いることができる。 The method for extracting allergens in foods of the present invention is a method for extracting allergens in foods for the method of detecting allergens in foods using the ELISA method, which comprises foods and a surfactant (Laureth-5 carboxylic acid Sodium, lauryl glucoside, PEG-3 cocoamide MEA sodium sulfate, sodium oleate, sodium N-dodecanoyl sarcosinate, potassium cocoate, 2-alkyl-N-carboxymethyl-N-hydroxyethylimidazolinium betaine, isostearin Acid PEG-8 glyceryl, sodium cocoylglycinate, polyoxyethylene oleyl ether, and sodium lauraminopropionate can be selected as surfactants for allergen determination, among others sodium laureth-5 carboxylate, lauryl glucoside, or PEG-3 coconut fatty acid amide MEA sodium sulfate) is not particularly limited as long as it is a method of extracting the allergen in the food by mixing with an extract containing one or more of the above surfactants. Among them, sodium laureth-5 carboxylate, lauryl glucoside, and PEG-3 coconut fatty acid amide MEA sodium sulfate can be preferably used.
本発明のサンドイッチＥＬＩＳＡ法により食品中のアレルゲンを測定する方法としては、食品１ｇと、界面活性剤（ラウレス－５カルボン酸ナトリウム、ラウリルグルコシド、ＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウム、Ｎ－ドデカノイルサルコシン酸ナトリウム、ヤシ脂肪酸カリウム、２－アルキル－Ｎ－カルボキシメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン、イソステアリン酸ＰＥＧ－８グリセリル、ココイルグリシンナトリウム、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、及びラウラミノプロピオン酸ナトリウムから選ばれる１種又は２種以上）を１％含む食品中のアレルゲン抽出液１９ｍＬとを混合し、沸騰水で１０分加熱抽出し、冷却後ろ過した溶液を希釈せずに測定溶液として用いる測定方法であれば特に制限されず、上記界面活性剤の中でも、ラウレス－５カルボン酸ナトリウム、ラウリルグルコシド、及びＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウムを好適に用いることができる。
As a method for measuring allergens in food by the sandwich ELISA method of the present invention, 1 g of food, surfactants (sodium laureth-5 carboxylate, lauryl glucoside, PEG-3 coconut fatty acid amide MEA sodium sulfate, N-dodecanoyl From sodium sarcosinate, potassium cocoate, 2-alkyl-N-carboxymethyl-N-hydroxyethylimidazolinium betaine, PEG-8 glyceryl isostearate, sodium cocoylglycinate, polyoxyethylene oleyl ether, and
上記本発明の測定方法では、［表１］に示すように、緩衝液で２０倍希釈せずに測定することで、２０倍高感度に定量が可能となる。 In the measuring method of the present invention, as shown in [Table 1], quantification with 20 times higher sensitivity is possible by measuring without diluting 20 times with a buffer solution.
本発明のアレルゲン測定キットとしては、ＥＬＩＳＡ法により食品中のアレルゲンを測定するためのキットであって、界面活性剤（ラウレス－５カルボン酸ナトリウム、ラウリルグルコシド、ＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウム、Ｎ－ドデカノイルサルコシン酸ナトリウム、ヤシ脂肪酸カリウム、２－アルキル－Ｎ－カルボキシメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン、イソステアリン酸ＰＥＧ－８グリセリル、ココイルグリシンナトリウム、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、及びラウラミノプロピオン酸ナトリウムから選ばれる１種又は２種以上）を含む抽出液、及び測定対象のアレルゲンを特異的に認識するモノクローナル抗体とを含むキットであれば特に制限されず、上記界面活性剤の中でも、ラウレス－５カルボン酸ナトリウム、ラウリルグルコシド、又はＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウムを含む抽出液を好適に例示することができる。 The kit for measuring allergens of the present invention is a kit for measuring allergens in food by ELISA, and includes surfactants (sodium laureth-5 carboxylate, lauryl glucoside, PEG-3 coconut fatty acid amide sodium MEA sulfate, Sodium N-dodecanoylsarcosinate, potassium cocoate, 2-alkyl-N-carboxymethyl-N-hydroxyethylimidazolinium betaine, PEG-8 glyceryl isostearate, sodium cocoylglycinate, polyoxyethylene oleyl ether, and lauramino There is no particular limitation as long as the kit contains an extract containing one or more selected from sodium propionate) and a monoclonal antibody that specifically recognizes the allergen to be measured. Among the above surfactants, An extract containing sodium laureth-5 carboxylate, lauryl glucoside, or PEG-3 coconut fatty acid amide MEA sodium sulfate can be preferably exemplified.
以下の［表２］に、ドデシル硫酸ナトリウムと本発明に関連する上記界面活性剤の特性等を示す。 [Table 2] below shows the properties of sodium dodecyl sulfate and the above surfactants related to the present invention.
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。 EXAMPLES The present invention will be described in more detail below with reference to examples, but the technical scope of the present invention is not limited to these examples.
［実施例１］
（ごまタンパク質溶液の調製）
アレルゲンタンパク質として、ごまタンパク質を用いて検討を行った。ごまタンパク質溶液は、「アレルギー物質を含む食品の検査法について（参考）（平成２６年３月２６日、消費者庁）」を参照して、ごまをミルサーで粉砕した後、アセトンで脱脂した粉末から調製した。かかるごまタンパク質溶液におけるタンパク質濃度は、２－Ｄ ＱｕａｎｔＫｉｔ（GE Helthcare Life Sciences製、８０－６４８３－５６）を用いて測定した。
[Example 1]
(Preparation of sesame protein solution)
Sesame protein was used as an allergen protein. The sesame protein solution is a powder obtained by grinding sesame with a grinder and defatting it with acetone, referring to "Testing methods for foods containing allergens (reference) (March 26, 2014, Consumer Affairs Agency)". prepared from The protein concentration in the sesame protein solution was measured using a 2-D QuantKit (manufactured by GE Healthcare Life Sciences, 80-6483-56).
［サンドイッチＥＬＩＳＡを用いたアレルゲンタンパク質の測定］
検討に用いた界面活性剤の種類を以下の［表３］に示す。
[Measurement of allergen protein using sandwich ELISA]
The types of surfactants used for the study are shown in [Table 3] below.
（抽出溶液の調製）
０．２％ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０（MP Biomedicals製、１０３１６８）と、０．１％チオ硫酸ナトリウム（和光純薬製、１９７－０３６０５）と、０．０９％アジ化ナトリウム（和光純薬製、１９５－１１０９２）とを含有する、ダルベッコ組成リン酸緩衝生理食塩水（日水製薬製、５９１３（以下、「ＰＢＳ」ともいう））に、上記１２種類の界面活性剤を、それぞれ最終濃度として１．０％、５．０％又は１０．０％添加することにより、上記１２種類の界面活性剤ごとに３種類（合計３６種類）の抽出溶液を調製した。
(Preparation of extraction solution)
0.2% TWEEN (registered trademark) 20 (manufactured by MP Biomedicals, 103168), 0.1% sodium thiosulfate (manufactured by Wako Pure Chemicals, 197-03605), and 0.09% sodium azide (manufactured by Wako Pure Chemicals , 195-11092) and Dulbecco's composition phosphate-buffered saline (manufactured by Nissui Pharmaceutical Co., Ltd., 5913 (hereinafter also referred to as "PBS")), the above 12 types of surfactants, respectively, as final concentrations Three extraction solutions (36 in total) were prepared for each of the above 12 types of surfactants by adding 1.0%, 5.0% or 10.0%.
（抗体の固相化）
抗ごまマウスモノクローナル抗体（ＮＩＴＥ Ｐ－０２０４２）をＰＢＳにて５μｇ／ｍＬとなるように調整した溶液を、マイクロプレート（Nunc-Immuno Module plate F8 NAL、 ４６８６６７）の各ウェルに１００μＬずつ加え、３７℃にて１時間３０分反応させた。反応後、０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０含有ＰＢＳ（以下、「ＰＢＳＴ」ともいう）３００μＬで各ウェルを５回洗浄した。以降、洗浄はすべて同じ手順で実施した。
(Immobilization of antibody)
Add 100 μL of a solution of anti-sesame mouse monoclonal antibody (NITE P-02042) adjusted to 5 μg/mL with PBS to each well of a microplate (Nunc-Immuno Module plate F8 NAL, 468667) and incubate at 37°C. was reacted for 1 hour and 30 minutes. After the reaction, each well was washed 5 times with 300 μL of PBS containing 0.05% TWEEN (registered trademark) 20 (hereinafter also referred to as “PBST”). All subsequent washings were performed in the same manner.
（ブロッキング）
１％ウシ血清アルブミン（シグマアルドリッチ製、Ａ３０５９）とを含有するＰＢＳを各ウェルに２００μＬずつ加え、３７℃にて１時間反応させた後洗浄した。
(blocking)
200 μL of PBS containing 1% bovine serum albumin (manufactured by Sigma-Aldrich, A3059) was added to each well, reacted at 37° C. for 1 hour, and then washed.
（サンプルの反応）
ごまタンパク質溶液を上記３６種類の抽出溶液それぞれに、ごまタンパク質が６２．５ｐｐｂ、２５０ｐｐｂ、１０００ｐｐｂとなるように添加して、粗測定溶液を調製した後、かかる粗測定溶液を０．５％フィッシュゼラチン（シグマアルドリッチ製、７７６５）含有ＰＢＳＴにて２０倍希釈して３．１２５ｐｐｂ、１２．５ｐｐｂ、５０ｐｐｂの各濃度にごまタンパク質がなるように調整して各測定溶液とした。各測定溶液を各ウェルに１００μＬずつ加え、２５℃にて１時間反応させた後洗浄した。なお、上記３６種類の抽出溶液について、ごまタンパク質を添加しない場合をネガティブコントロールとした。
(Sample reaction)
The sesame protein solution was added to each of the above 36 types of extraction solutions so that the sesame protein was 62.5 ppb, 250 ppb, and 1000 ppb to prepare crude measurement solutions. (manufactured by Sigma-Aldrich, 7765) was diluted 20-fold with PBST containing sesame protein and adjusted to each concentration of 3.125 ppb, 12.5 ppb and 50 ppb to prepare each measurement solution. 100 μL of each measurement solution was added to each well, reacted at 25° C. for 1 hour, and then washed. For the above 36 kinds of extraction solutions, the case where no sesame protein was added was used as a negative control.
（酵素標識抗体の反応）
西洋ワサビペルオキシダーゼ標識した抗ごまマウスモノクローナル抗体（ＮＩＴＥ Ｐ－０２０４１）を各ウェルに１００μＬずつ加え、２５℃にて３０分間反応させた後洗浄した。
(Reaction of enzyme-labeled antibody)
100 μL of horseradish peroxidase-labeled anti-sesame mouse monoclonal antibody (NITE P-02041) was added to each well, reacted at 25° C. for 30 minutes, and then washed.
（発色と停止）
３、３’、５、５’テトラメチルベンジジン溶液（プロメガ製、Ｇ７４３１）を各ウェルに１００μＬずつ加え、室温にて遮光して１０分間反応させた。その後、１規定塩酸（和光純薬製、０８０－０１０６６）を各ウェルに１００μＬずつ加え反応を停止し、マイクロプレートリーダーにて主波長４５０ｎｍ、副波長６２０ｎｍにおける吸光度を測定した。
(color development and stop)
100 μL of 3,3′,5,5′ tetramethylbenzidine solution (manufactured by Promega, G7431) was added to each well and allowed to react for 10 minutes at room temperature while shielded from light. Thereafter, 100 μL of 1N hydrochloric acid (080-01066 manufactured by Wako Pure Chemical Industries) was added to each well to stop the reaction, and the absorbance was measured at a major wavelength of 450 nm and a minor wavelength of 620 nm using a microplate reader.
（結果の判定）
１２種類の各界面活性剤における、ごまタンパク質濃度が３．１２５ｐｐｂ、１２．５ｐｐｂ、５０ｐｐｂの場合の吸光度の値を用いてグラフを作成した。界面活性剤の濃度が１．０％、５．０％又は１０．０％のいずれかのときに５０ｐｐｂの吸光度が０．５以上であった場合に測定可能であると判定した。
(Judgment of result)
A graph was created using absorbance values for sesame protein concentrations of 3.125 ppb, 12.5 ppb, and 50 ppb for each of the 12 surfactants. It was determined that the absorbance at 50 ppb was 0.5 or more when the surfactant concentration was 1.0%, 5.0% or 10.0%.
（結果）
結果を図１～図１２（各図の右側の「×２０測定溶液」参照）に示す。これらの結果から、界面活性剤１を除き、界面活性剤２～１２は、界面活性剤の濃度が１．０％、５．０％又は１０．０％のいずれかのときに５０ｐｐｂの吸光度が０．５以上となり、良好に測定可能であることが確認された。界面活性剤１（ドデシル硫酸ナトリウム）は１％では測定可能だが、５％では反応が低くなり、１０％では測定できなかった。その他の界面活性剤２～１２では１％～１０％まで測定が可能であった。
(result)
The results are shown in Figures 1 to 12 (see "x20 measurement solution" on the right side of each figure). From these results, Surfactants 2-12, with the exception of
［実施例２］
（測定溶液中に高濃度の界面活性剤が含まれる条件での測定）
実施例１における１．０％、５．０％又は１０．０％の界面活性剤を含む抽出溶液を緩衝液で２０倍希釈することなく測定した際の反応性を確認した（［表１］参照）。ごまタンパク質溶液を５０ｐｐｂとなるように抽出溶液に添加して、高濃度界面活性剤－測定溶液とし、実施例１と同様にサンドイッチＥＬＩＳＡで測定した。
[Example 2]
(Measurement under conditions where the measurement solution contains a high concentration of surfactant)
The reactivity was confirmed when the extraction solution containing 1.0%, 5.0% or 10.0% surfactant in Example 1 was measured without being diluted 20-fold with a buffer ([Table 1] reference). The sesame protein solution was added to the extract solution to give a concentration of 50 ppb to obtain a high-concentration surfactant-measurement solution.
（結果の判定）
界面活性剤の濃度が１．０％の場合に５０ｐｐｂの吸光度が０．５以上である場合に、当該濃度の界面活性剤は、測定可能であると判定することとした。
(Judgment of result)
If the absorbance at 50 ppb was 0.5 or more when the concentration of the surfactant was 1.0%, it was determined that the concentration of the surfactant was measurable.
（結果）
結果を表４及び図１～図１２（各図の左側の「×１測定溶液」参照）に示す。これらの結果から、界面活性剤１と界面活性剤５とを除き、界面活性剤の濃度が１．０％の場合に５０ｐｐｂの吸光度が０．５以上であり、良好に測定可能であることがあることが確認された。
(result)
The results are shown in Table 4 and FIGS. 1 to 12 (see “×1 measurement solution” on the left side of each figure). From these results, except for
［実施例３］
（食品成分が測定に及ぼす影響の評価）
上記実施例２にて良好な測定可能であった界面活性剤のうち、１．０％で高い吸光度が得られた界面活性剤２、界面活性剤３、及び界面活性剤４について、実際の食品検査の状況を勘案し、加工食品であるハムの共存下で測定が可能か検討した。測定に用いる抽出溶液に含まれる界面活性剤濃度は１．０％にて実施した。
[Example 3]
(Evaluation of influence of food components on measurement)
Of the surfactants that could be measured well in Example 2 above,
５０ｍＬのチューブにハム１ｇと抽出溶液１９ｍＬを混合し、食品（ハム）含有抽出溶液とした。かかる食品含有抽出溶液に、０．０５μｇ、０．２５μｇ、０．５０μｇ、１．００μｇ、５．００μｇ又は１０．００μｇのごまタンパク質を添加し、沸騰水で１０分間加熱した後、室温程度にまで冷却した。遠心分離（室温、３，０００ｒｐｍ、２０分間）した後にろ過した溶液を食品（ハム）検体測定溶液とし、実施例１と同様にサンドイッチＥＬＩＳＡで測定した。同時に、ごまタンパク質溶液を添加した抽出溶液を測定し、得られた標準曲線からハム検体測定溶液中のごまタンパク質濃度を算出した。回収率は添加ごまタンパク質量を１００％とし、測定値より得られたごまタンパク質量を除して算出した。なお、ハム検体測定溶液に含まれるごまタンパク質量が測定範囲を超える場合は、抽出溶液にて範囲内に収まるよう希釈してから測定した。 1 g of ham and 19 mL of extraction solution were mixed in a 50 mL tube to obtain a food (ham)-containing extraction solution. 0.05 μg, 0.25 μg, 0.50 μg, 1.00 μg, 5.00 μg or 10.00 μg of sesame protein was added to the food-containing extraction solution, heated with boiling water for 10 minutes, and then cooled to about room temperature. cooled. The solution obtained by centrifugation (room temperature, 3,000 rpm, 20 minutes) and filtration was used as a food (ham) specimen measurement solution, and was measured by sandwich ELISA in the same manner as in Example 1. At the same time, the extract solution to which the sesame protein solution was added was measured, and the sesame protein concentration in the ham specimen measurement solution was calculated from the obtained standard curve. The recovery rate was calculated by taking the added sesame protein amount as 100% and dividing the obtained sesame protein amount from the measured value. When the amount of sesame protein contained in the ham sample measurement solution exceeded the measurement range, the measurement was performed after diluting it with an extraction solution so that it fell within the range.
（結果）
結果を表５に示す。表５から明らかなとおり、界面活性剤２（ラウレス－５カルボン酸ナトリウム）、界面活性剤３（ラウリルグルコシド）、及び界面活性剤４（ＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウム）のいずれにおいても、添加量が０．０５ｐｐｍ～１０．００ｐｐｍの範囲において、５９．０％～１７５．５％の良好な回収率が得られたことが確認された。
(result)
Table 5 shows the results. As is clear from Table 5, surfactant 2 (sodium laureth-5 carboxylate), surfactant 3 (lauryl glucoside), and surfactant 4 (PEG-3 coconut fatty acid amide sodium MEA sulfate) It was confirmed that a good recovery rate of 59.0% to 175.5% was obtained when the amount added was in the range of 0.05 ppm to 10.00 ppm.
［実施例４］
（アーモンドタンパク質溶液の調製）
アレルゲンタンパク質として、アーモンドタンパク質を用いて検討を行った。アーモンドタンパク質溶液は、「アレルギー物質を含む食品の検査法について（参考）（平成２６年３月２６日、消費者庁）」を参照して、アーモンドをミルサーで粉砕した後、アセトンで脱脂した粉末から調製した。かかるアーモンドタンパク質溶液におけるタンパク質濃度は、２－Ｄ ＱｕａｎｔＫｉｔ（GE Helthcare Life Sciences製、８０－６４８３－５６）を用いて測定した。
[Example 4]
(Preparation of almond protein solution)
Almond protein was used as an allergen protein. The almond protein solution is a powder obtained by grinding almonds with a miller and defatting with acetone, referring to "Testing methods for foods containing allergens (reference) (March 26, 2014, Consumer Affairs Agency)". prepared from Protein concentrations in such almond protein solutions were measured using a 2-D QuantKit (GE Healthcare Life Sciences, 80-6483-56).
（サンドイッチＥＬＩＳＡを用いたアレルゲンタンパク質の測定）
抗アーモンドモノクローナル抗体（ＮＩＴＥ Ｐ－０３３４５及びＮＩＴＥ Ｐ－０３３４６）を用いる以外は、実施例１及び実施例２に準じて実施した。
(Measurement of allergen protein using sandwich ELISA)
Example 1 and Example 2 were followed except that anti-almond monoclonal antibodies (NITE P-03345 and NITE P-03346) were used.
（結果）
結果を図１３～図２４に示す。これらの図１３～図２４の左側の「×１測定溶液」の結果から、界面活性剤１を除き、界面活性剤の濃度が１．０％の場合に５０ｐｐｂの吸光度が０．５以上であり、良好に測定可能であることがあることが確認された。
(result)
The results are shown in FIGS. 13-24. 13 to 24, the absorbance at 50 ppb is 0.5 or more when the surfactant concentration is 1.0%, except for
（まとめ）
通知法と本発明の新規ＥＬＩＳＡ法の概略を図２５に示す。本発明によると、界面活性剤濃度が１～１０％で測定可能であり、希釈をせずに高感度で測定可能な界面活性剤として特に好ましい３種類（ラウレス－５カルボン酸ナトリウム、ラウリルグルコシド又はＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウム）を選択すると、選択した界面活性剤は食品成分の影響を受けずに定量可能であることが確認できた。
(summary)
A schematic of the notification method and the novel ELISA method of the present invention is shown in FIG. According to the present invention, the surfactant concentration can be measured at 1 to 10%, and three types of particularly preferable surfactants (sodium laureth-5 carboxylate, lauryl glucoside or PEG-3 coconut fatty acid amide MEA sodium sulfate) was selected, it was confirmed that the selected surfactant could be quantified without being affected by food ingredients.
Claims (8)
（界面活性剤）
・ラウレス－５カルボン酸ナトリウム
・ラウリルグルコシド
・ＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウム
・オレイン酸ナトリウム
・Ｎ－ドデカノイルサルコシン酸ナトリウム
・ヤシ脂肪酸カリウム
・２－アルキル－Ｎ－カルボキシメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン
・イソステアリン酸ＰＥＧ－８グリセリル
・ココイルグリシンナトリウム
・ポリオキシエチレンオレイルエーテル
・ラウラミノプロピオン酸ナトリウム A method for extracting allergens in food for a method of detecting allergens in food using the ELISA method, wherein the food is mixed with an extract containing one or more of the following surfactants, A method for extracting an allergen in a food, comprising extracting the allergen in the food.
(Surfactant)
・Laureth-5 sodium carboxylate ・lauryl glucoside ・PEG-3 coconut fatty acid amide MEA sodium sulfate ・sodium oleate ・N-dodecanoyl sodium sarcosinate ・potassium coconut fatty acid ・2-alkyl-N-carboxymethyl-N-hydroxyethyl Imidazolinium Betaine, PEG-8 Glyceryl Isostearate, Sodium Cocoylglycinate, Polyoxyethylene Oleyl Ether, Sodium Lauraminopropionate
（界面活性剤）
・ラウレス－５カルボン酸ナトリウム
・ラウリルグルコシド
・ＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウム
・Ｎ－ドデカノイルサルコシン酸ナトリウム
・ヤシ脂肪酸カリウム
・２－アルキル－Ｎ－カルボキシメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン
・イソステアリン酸ＰＥＧ－８グリセリル
・ココイルグリシンナトリウム
・ポリオキシエチレンオレイルエーテル
・ラウラミノプロピオン酸ナトリウム Mix 1 g of food with 19 mL of allergen extract in food containing 1% of the following surfactants, heat and extract with boiling water for 10 minutes, cool, filter, and use the solution without dilution as a measurement solution. A method for measuring allergens in food by a sandwich ELISA method.
(Surfactant)
Sodium laureth-5 carboxylate, lauryl glucoside, PEG-3 coconut fatty acid amide MEA sodium sulfate, sodium N-dodecanoyl sarcosinate, potassium coconut fatty acid, 2-alkyl-N-carboxymethyl-N-hydroxyethylimidazolinium betaine・PEG-8 Glyceryl Isostearate ・Sodium Cocoylglycinate ・Polyoxyethylene Oleyl Ether ・Sodium Lauraminopropionate
（界面活性剤）
・ラウレス－５カルボン酸ナトリウム
・ラウリルグルコシド
・ＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウム
・Ｎ－ドデカノイルサルコシン酸ナトリウム
・ヤシ脂肪酸カリウム
・２－アルキル－Ｎ－カルボキシメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン
・イソステアリン酸ＰＥＧ－８グリセリル
・ココイルグリシンナトリウム
・ポリオキシエチレンオレイルエーテル
・ラウラミノプロピオン酸ナトリウム A kit for measuring allergens in food by the ELISA method, which is characterized by containing an extract containing the following surfactants and a monoclonal antibody that specifically recognizes the allergen to be measured: kit.
(Surfactant)
Sodium laureth-5 carboxylate, lauryl glucoside, PEG-3 coconut fatty acid amide MEA sodium sulfate, sodium N-dodecanoyl sarcosinate, potassium coconut fatty acid, 2-alkyl-N-carboxymethyl-N-hydroxyethylimidazolinium betaine・PEG-8 Glyceryl Isostearate ・Sodium Cocoylglycinate ・Polyoxyethylene Oleyl Ether ・Sodium Lauraminopropionate
（界面活性剤）
・ラウレス－５カルボン酸ナトリウム
・ラウリルグルコシド
・ＰＥＧ－３ヤシ脂肪酸アミドＭＥＡ硫酸ナトリウム
・Ｎ－ドデカノイルサルコシン酸ナトリウム
・ヤシ脂肪酸カリウム
・２－アルキル－Ｎ－カルボキシメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン
・イソステアリン酸ＰＥＧ－８グリセリル
・ココイルグリシンナトリウム
・ポリオキシエチレンオレイルエーテル
・ラウラミノプロピオン酸ナトリウム
The following surfactants for allergen measurement obtained by the screening method according to claim 7.
(Surfactant)
Sodium laureth-5 carboxylate, lauryl glucoside, PEG-3 coconut fatty acid amide MEA sodium sulfate, sodium N-dodecanoyl sarcosinate, potassium coconut fatty acid, 2-alkyl-N-carboxymethyl-N-hydroxyethylimidazolinium betaine・PEG-8 Glyceryl Isostearate ・Sodium Cocoylglycinate ・Polyoxyethylene Oleyl Ether ・Sodium Lauraminopropionate
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|---|---|---|---|---|
| CN116617121A (en) * | 2023-05-10 | 2023-08-22 | 广东丸美生物技术股份有限公司 | Preparation method of ganoderma lucidum extract and cosmetic |
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