ES2613720T3 - Composición de conjugado polivalente de polisacárido de neumococos-proteína - Google Patents

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Abstract

Una composición inmunogénica multivalente, que comprende: 15 conjugados distintos de polisacárido-proteína, junto con un vehículo fisiológicamente aceptable, en la que cada uno de los conjugados de polisacárido-proteína comprende un polisacárido capsular de un serotipo diferente de Streptococcus pneumoniae conjugado a una proteína vehículo, y los polisacáridos capsulares se preparan a partir de los serotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9N, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F.

Description

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DESCRIPCION
Composicion de conjugado polivalente de polisacarido de neumococos-protema Campo tecnico
La presente invencion se refiere a una composicion inmunogenica multivalente que comprende: 15 conjugados distintos de polisacarido-protema preparados conjugando polisacarido capsular derivado de Streptococcus pneumoniae serotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9N, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F a una protema vehmulo tal como CRM 197. La presente invencion se refiere, en lmeas generales, al campo de la medicina y, especialmente, a la microbiologfa, inmunologfa, vacunas y la prevencion de enfermedades por neumococos en lactantes, ninos y adultos por inmunizacion.
Tecnica anterior
Streptococcus pneumoniae es una causa principal de neumoma. De acuerdo con 2010 Mortality Trend by Cause publicado por The National Statistical Office, la neumoma fue una de las 10 causas principales de muerte, con 14,9 muertes por cada 100.000 personas, que es un aumento del 82,9% desde 2000. La Organizacion Mundial de la Salud (OMS) tambien estimo en 2012 que, globalmente, 476.000 ninos VIH negativos menores de 5 anos de edad murieron de infeccion por Streptococcus pneumoniae, que supone el 5% de la mortalidad infantil general para ninos por debajo de cinco anos.
En 1977, el Dr. Robert Austrian desarrollo una vacuna 14-valente de polisacarido de neumococos para prevenir la enfermedad por neumococos y despues la vacuna evoluciono a una vacuna 23-valente de polisacarido. Las vacunas multivalentes de polisacarido de neumococos han demostrado ser valiosas en la prevencion de enfermedad por neumococos en adultos ancianos y pacientes de alto riesgo. Sin embargo, los lactantes y ninos pequenos responden peor a la mayona de polisacaridos de neumococos debido a una respuesta inmunitaria independiente de celulas T. La vacuna 7-valente de conjugado de neumococos (7vPnC, Prevnar®) contiene los polisacaridos capsulares de los siete serotipos mas prevalentes 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F y 23F. Desde que se aprobo en Estados Unidos en 2000, Prevnar ha demostrado ser muy inmunogenica y eficaz contra enfermedad invasiva y otitis media en lactantes y ninos pequenos. Esta vacuna esta ahora aprobada en aproximadamente 80 pafses en todo el mundo. Prevnar cubre aproximadamente el 80-90%, 60-80% y 40-80% de las enfermedades invasivas por neumococos (IPD) en Estados Unidos, Europa y otras regiones del mundo, respectivamente. Como se esperaba, los datos de control recogidos en los anos posteriores a la introduccion de Prevnar han demostrado claramente una reduccion de las enfermedades invasivas por neumococos causadas por los serotipos cubiertos por Prevnar en Estados Unidos. Sin embargo, la cobertura de los serotipos estaba limitada en algunas regiones y las enfermedades invasivas por neumococos causadas por los serotipos que no estan cubiertos por Prevnar, en particular 19A, han aumentado.
El Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP) presento en febrero de 2010 su recomendacion de una vacuna 13-valente de conjugado de neumococos (PCV-13) recien aprobada para la vacunacion. PCV-13 es una vacuna de conjugado de neumococos que comprende seis serotipos adicionales (1, 3, 5, 6A, 7F, 19A) ademas de los siete serotipos (4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 23F) comprendidos en Prevnar. De acuerdo con la US Active Bacterial Core surveillance (ABCs), un total del 64% en los casos de IPD conocidos como los serotipos patogenicos entre ninos menores de 5 anos de edad esta cubierto por PCV-13. En 2007, solamente 70 casos entre 4600 IPD en ninos menores de 5 anos de edad estaban cubiertos por PCV7, mientras que 2900 casos estaban cubiertos por PCV-13, que representa la mayona. Ahora, estan en desarrollo una vacuna 15-valente de conjugado de neumococos que cubre serotipos adicionales cuya incidencia aumenta con el remplazo de serotipos.
Descripcion detallada de la invencion
Por consiguiente, la presente invencion proporciona una composicion inmunogenica multivalente para la prevencion de enfermedades por neumococos en lactantes, ninos y adultos, que comprende polisacaridos capsulares derivados de 15 serotipos de neumococos, incluyendo los serotipos 2 y 9N. Espedficamente, la presente invencion proporciona una composicion 15-valente de conjugando de neumococos (PCV-15) que comprende los serotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9N, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F.
Solucion tecnica
De acuerdo con un aspecto de la invencion, se proporciona una composicion inmunogenica multivalente, que comprende 15 conjuntados distintivos de polisacarido-protema junto con un vehmulo fisiologicamente aceptable, donde cada uno de los conjugados comprende un polisacarido capsular derivado de un serotipo diferente de Streptococcus pneumoniae conjugado a una protema vehmulo, y los polisacaridos capsulares se preparan a partir de los serotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9N, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F.
En la composicion inmunogenica multivalente de acuerdo con la presente invencion, la protema vehmulo puede ser CRM 197. La composicion inmunogenica multivalente de acuerdo con la presente invencion puede comprender
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adicionalmente un adyuvante, por ejemplo, el adyuvante que comprende un adyuvante basado en aluminio. El adyuvante puede seleccionarse del grupo que consiste en fosfato de aluminio, sulfato de aluminio e hidroxido de aluminio y, preferiblemente, fosfato de aluminio.
De acuerdo con un aspecto adicional de la invencion, se proporciona una composicion farmaceutica para inducir una respuesta inmunitaria contra un conjugado de polisacarido capsular de Streptococcus pneumoniae, que comprende una cantidad inmunologicamente eficaz de dicha composicion inmunogenica.
En una realizacion, la composicion farmaceutica puede ser una composicion inmunogenica formulada para que contenga: 2 |jg de cada sacarido, excepto por 6B a 4 |jg; aproximadamente 34 |jg de protema vehmulo CRM197; 0,125 mg de adyuvante de aluminio elemental (0,5 mg de fosfato de aluminio); y tampon cloruro sodico y succinato sodico como excipientes.
Efecto tecnico
La composicion inmunogenica multivalente comprende polisacaridos capsulares derivados de 15 serotipos distintivos de neumococos, incluyendo los serotipos 2 y 9N, conduciendo de ese modo a un tttulo elevado de IgG en suero y actividad de anticuerpos funcionales. Por lo tanto, la composicion inmunogenica multivalente puede usarse ventajosamente para la prevencion de enfermedades por neumococos en lactantes, ninos y adultos.
Descripcion de los dibujos
Las FIG. 1 a 15 muestran el nivel de IgG espedfica de serotipo medido 3 semanas despues de la inyeccion secundaria (es decir, un total de 6 semanas) de la composicion de vacuna de la presente invencion y el ejemplo comparativo (Prevnar 7 y Prevnar 13).
Modo de la invencion
El remplazo de serotipos se ha hecho por algunos serotipos con resistencia a antibioticos y resistencia a multiples farmacos. La diferencia regional en la distribucion de serotipos ha conducido a una diferencia en la cobertura de Prevnar por region (Harboe ZB, Benfield TL, Valentiner-Branth P, et al. Temporal Trends in Invasive Pneumococcal Disease and Pneumococcal Serotypes over 7 Decades. Clin Infect Dis 2010; 50:329-37). Por tanto, no hay razones para retirar ninguno de los serotipos en las vacunas existentes de conjugado de neumococos. En su lugar, existe la necesidad de expandir adicionalmente la cobertura mediante la adicion de serotipos.
En 2008, el Pneumococcal Global Serotype Project (GSP) presento un informe basado en los datos de IPD seleccionados desde 1980 hasta 2007, que muestran que, despues del serotipo 18C, el serotipo 2 era el 11° serotipo de mayor incidencia entre los 20 serotipos globales principales. Ademas, Samir K. Saha et al. Informaron de que el serotipo 2 puede llegar a ser una amenaza porque el serotipo 2 tiene una alta probabilidad de causar meningitis neumococica en Bangladesh, pero no esta incluido en ninguna vacuna de conjugado de neumococos (Saha SK, Al Emran HM, Hossain B, Darmstadt GL, Saha S, et al. (2012) Streptococcus pneumoniae Serotype-2 Childhood Meningitis in Bangladesh: A Newly Recognized Pneumococcal Infection Threat. PLoS ONE 2012; 7(3): e32134). Por tanto, si se incluye el serotipo 2, puede reducirse la cantidad de enfermedades por neumococos y puede prepararse adicionalmente para el remplazo de serotipos, que puede suceder con la vacunacion por PCV-13.
Los serotipos de neumococos muestran diferentes patrones de distribucion por edad. En particular, se ha descubierto que el serotipo 9N es relativamente importante en lactantes con edades de 0 a 23 meses, en comparacion con ninos con edades de 24 a 59 meses. El serotipo 9N era el 14° mas comun despues de los 13 serotipos incluidos en PCV-13. Esto indica que la inclusion del serotipo 9N contribuira a reduccion en las enfermedades por neumococos, en particular entre lactantes.
La presente invencion proporciona una composicion inmunogenica multivalente que comprende polisacaridos capsulares derivados de 15 serotipos de neumococos, incluyendo los serotipos 2 y 9N. Espedficamente, la presente invencion proporciona una composicion inmunogenica multivalente, que comprende: 15 conjugados distintos de polisacarido-protema, junto con un vehmulo fisiologicamente aceptable, donde cada uno de los conjugados comprende un polisacarido capsular de un serotipo diferente de Streptococcus pneumoniae conjugado a una protema vehmulo, y los polisacaridos capsulares se preparan a partir de los serotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9N, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F.
Los polisacaridos capsulares pueden prepararse por tecnicas convencionales conocidas para los expertos en la materia. Los polisacaridos capsulares pueden reducirse en tamano para disminuir la viscosidad o aumentar la solubilidad de los polisacaridos capsulares activados. En la presente invencion, los polisacaridos capsulares se preparan a partir de los serotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9n, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F de Streptococcus pneumoniae. Estos conjugados de neumococos se preparan por procesos diferentes y se formulan en una unica formulacion de dosificacion. Por ejemplo, cada serotipo de polisacarido neumococico se cultiva en un medio basado en soja y despues se purifica a traves de centrifugacion, precipitacion y ultrafiltracion.
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Las protemas vehroulo son preferiblemente protemas que son no toxicas y no reactogenicas y que se pueden obtener en suficiente cantidad y pureza. Las protemas vehroulo deben ser susceptibles a procedimientos convencionales de conjugacion. En la composicion inmunogenica multivalente de la presente invencion, la protema vehroulo puede ser CRM197. CRM197 es una variante no toxica (es decir, toxoide) de toxina difterica aislada de cultivos de Corynebacterium diphteria cepa C7 (p197) cultivada en medio basado en casaminoacidos y extracto de levadura. CRM197 se purifica a traves de ultrafiltracion, precipitacion con sulfato de amonio y cromatograrta de intercambio ionico. Como alternativa, CRM197 se prepara de forma recombinante de acuerdo con la patente de Estados Unidos n.° 5.614.382.
Otros toxoides diftericos tambien son adecuados para su uso como protemas vehroulo. Otras protemas vehroulo adecuadas incluyen toxinas bacterianas inactivadas tales como toxoide tetanico, toxoide pertussis; toxoide colerico (documento WO2004/083251), LT de E. coli, ST de E. coli y exotoxina A de Pseudomonas aeruginosa. Tambien pueden usarse protemas de membrana externa bacteriana tales como complejo C de membrana externa (OMPC), porinas, protemas de union a transferrina, neumolisina, protema A de superficie de neumococos (PspA), protema adhesina de neumococos (PsaA), peptidasa C5a de estreptococos del grupo A o grupo B o protema D de Haermophilus influenzae. Tambien pueden usarse otras protemas, tales como ovalbumina, hemocianina de lapa californiana (KLH), albumina serica bovina (BSA) o derivado proteico purificado de tuberculina (PPD) como protemas vehroulo. Pueden usarse variantes de toxina difterica tales como CRM173, CRM228 y CRM45 como protema vehroulo.
Para preparar polisacaridos para su reaccion con una protema vehroulo, se activan qmmicamente polisacaridos purificados. Una vez activados, cada polisacarido capsular se conjuga por separado a una protema vehroulo para formar un glucoconjugado. En una realizacion, cada polisacarido capsular se conjuga a la misma protema vehroulo. La activacion qmmica de los polisacaridos y la posterior conjugacion a la protema vehroulo se consiguen por medios convencionales (por ejemplo, patentes de Estados Unidos n.° 4.673.574 y 4.902.506). Los grupos hidroxilo en los polisacaridos se oxidan en grupos aldehndo por agentes oxidantes tales como peryodatos (incluyendo peryodato sodico, peryodato potasico, peryodato calcico o acido peryodico). La activacion qmmica conduce a una degradacion oxidativa irregular de los grupos hidroxilo adyacentes. La conjugacion se consigue por aminacion reductora. Por ejemplo, los polisacaridos capsulares activados y la protema vehroulo se hacen reaccionar con un agente reductor tal como cianoborohidruro sodico. Los grupos aldehndo sin reaccionar pueden retirarse por la adicion de un agente oxidante fuerte.
Despues de la conjugacion del polisacarido capsular a la protema vehroulo, se purifican los conjugados de polisacarido-protema (enriquecidos con respecto a la cantidad de conjugado de polisacarido-protema) por una diversidad de tecnicas. Estas tecnicas incluyen concentracion/diafiltracion, cromatograffa en columna y filtracion profunda. Los conjugados purificados de polisacarido-protema se componen para formular la composicion inmunogenica de la presente invencion, que puede usarse como vacuna. La formulacion de la composicion inmunogenica de la presente invencion puede realizarse usando metodos reconocidos en la tecnica. Por ejemplo, los 15 conjugados de neumococos individuales pueden formularse con un vehroulo fisiologicamente aceptable para preparar la composicion. Ejemplos de dichos vehroulos incluyen, aunque sin limitacion, agua, solucion salina tamponada, polioles (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, polietilenglicol lfquido) y soluciones de dextrosa.
En una realizacion, la composicion inmunogenica de la presente invencion puede comprender uno o mas adyuvantes. Como se define en este documento, un "adyuvante" es una sustancia que sirve para potenciar la inmunogenicidad de una composicion inmunogenica de esta invencion. Por tanto, a menudo se dan adyuvantes para reforzar la respuesta inmunitaria y son bien conocidos para los expertos en la materia. Los adyuvantes adecuados para potenciar la eficacia de la composicion incluyen, aunque sin limitacion:
(1) sales de aluminio (alumbre), tales como hidroxido de aluminio, fosfato de aluminio, sulfato de aluminio, etc.;
(2) formulaciones de emulsion de aceite en agua (con o sin otros agentes inmunoestimulantes espedficos tales como muramil peptidos (definidos a continuacion) o componentes de la pared celular bacteriana) tales como, por ejemplo, (a) MF59 (documento WO 90/14837), que contiene escualeno al 5%, Tween 80 al 0,5% y Span 85 al 0,5% (que contiene opcionalmente diversas cantidades de MTP-PE (vease a continuacion), aunque no es necesario) formulado en partroulas submicrometricas usando un microfluidizer tal como microfluidizer modelo 110Y (Microfluidics, Newton, MA), (b) SAF, que contiene escualeno al 10%, Tween 80 al 0,4%, polfmero L121 bloqueado con pluronic al 5% y thr-MDP (vease a continuacion) microfluidizado en una emulsion submicrometrica o agitado con vortice para generar una emulsion de un tamano de particular mas grande, y (c) sistema adyuvante Ribi™ (RAS), (Corixa, Hamilton, MT) que contiene escualeno al 2%, Tween 80 al 0,2% y uno o mas componentes de pared celular bacteriana del grupo que consiste en monofosforil lfpido A 3-O-desacilado (MPL™) descrito en la patente de Estados Unidos n.° 4.912.094 (Corixa), dimicolato de trehalosa (TDM) y esqueleto de pared celular (CWS), preferiblemente MPL + CWS (Detox™);
(3) adyuvantes de saponina, tales como Quil A o STIMULON™ QS-21 (Antigenics, Framingham, MA) (patente de Estados Unidos n.° 5.057.540) o partroulas generadas a partir de los mismos tales como ISCOM (complejos inmunoestimulantes);
(4) lipopolisacaridos bacterianos, analogos sinteticos de lfpido A tales como compuestos de fosfato de aminoalquil glucosamina (AGP), o derivados o analogos de los mismos, que estan disponibles en Corixa, y que se
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describen en la patente de Estados Unidos n.° 6.113.918; uno de dichos AGP es 2-desoxi-4-0-fosfono-3-0-[(R)-3- tetradecanoiloxitetradecanoil]-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]-b-D-glucopiranosido de 2-[(R)-3- tetradecanoiloxitetradecanoilamino]etilo, que tambien se conoce como 529 (antiguamente conocido como RC529), que se formula como una forma acuosa o como una emulsion estable,
(5) polinucleotidos sinteticos tales como oligonucleotidos que contienen uno o mas motivos CpG (patente de Estados Unidos n.° 6.207.646);
(6) citoquinas, tales como interleuquinas (por ejemplo, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18, etc.), interferones (por ejemplo, interferon gamma), factor estimulador de colonias de granulocitos-macrofagos (GM-CSF), factor estimulador de colonias de macrofagos (M-CSF), factor de necrosis tumoral (TNF), moleculas coestimuladoras B7-1 y B7-2, etc.;
(7) mutantes destoxificados de una toxina ADP-ribosilante bacteriana tal como toxina colerica (CT) en una forma de tipo silvestre o mutante, por ejemplo, donde el acido glutamico en la posicion del aminoacido 29 esta remplazado por otro aminoacido, preferiblemente una histidina, de acuerdo con el documento WO 00/18434 (vease tambien el documento WO 02/098368 y el documento WO 02/098369), una toxina pertussis (PT) o una toxina termoinestable de (LT) E. coli, particularmente LT-K63, LT-R72, CT-S109, PT-K9/G129 (vease, por ejemplo, el documento WO 93/13302 y el documento WO 92/19265); y
(8) componentes del complemento tal como el tnmero del componente C3d del complemento.
Los muramil peptidos incluyen, aunque sin limitacion, N-acetil-muramil-L-treonil-D-isoglutamina (thr-MDP), N-acetil- normuramil-L-alanina-2-(1'-2'-dipalmitoil-sn-glicero-3-hidroxifosforiloxi)-etilamina (MTP-PE), etc.
En una realizacion espedfica, se usa una sal de aluminio como adyuvante. El adyuvante de sal de aluminio puede ser una vacuna precipitada con alumbre o vacuna adsorbida en alumbre. Las sales de aluminio incluyen, aunque sin limitacion, alumina hidratada, alumina trihidrato (ATH), aluminio hidrato, aluminio trihidrato, Alhydrogel, Superfos, Amphojel, hidroxido de aluminio (III), hidroxifosfato sulfato de aluminio (adyuvante de fosfato de aluminio (APA)), y alumina amorfa. APA es una suspension de hidroxifosfato de aluminio. Si se mezclan cloruro de aluminio y fosfato sodico en una relacion de 1:1, se precipita hidroxifosfato sulfato de aluminio. Los precipitados se modifican en tamano hasta 2-8 pm usando una mezcladora de alto corte y se dializan con solucion salina fisiologica, seguido de esterilizacion. En una realizacion, se usa Al(OH)3 disponible en el mercado (por ejemplo, Alhydrogel o Superfos) para adsorber protemas. Pueden adsorberse 50-200 g de protema por 1 mg de hidroxido de aluminio, y esta relacion es dependiente del punto isoelectrico (pi) de las protemas y el pH de los disolventes. Las protemas de bajo pi se adsorben fuertemente en comparacion con protemas de alto pi. Las sales de aluminio forman un deposito de antfgeno que libera lentamente antfgenos durante 2 a 3 semanas, activando de forma no espedfica los fagocitos, los complementos y el mecanismo inmunitario congenito.
La presente invencion proporciona una composicion farmaceutica (por ejemplo, una formulacion de vacuna) para inducir una respuesta inmunitaria contra un conjugado de polisacarido capsular de Streptococcus pneumoniae, que comprende una cantidad inmunologicamente eficaz de la composicion inmunogenica.
Las formulaciones de vacuna de la presente invencion pueden usarse para proteger o tratar a un ser humano susceptible a infeccion por neumococos, administrando la vacuna mediante una via sistemica o a la mucosa. Como se define en este documento, la expresion "dosis eficaz" se refiere a la cantidad necesaria para inducir anticuerpos hasta un nivel suficiente para reducir significativamente la probabilidad de infeccion por Streptococcus pneumoniae o la gravedad de la misma. Estas administraciones pueden incluir inyeccion mediante las vfas intramuscular, intraperitoneal, intradermica o subcutanea; o mediante administracion a la mucosa a los tractos oral/alimentario, respiratorio o genitourinario.
En una realizacion, se usa administracion intranasal para el tratamiento de neumoma u otitis media ya que el transporte nasofarmgeo de neumococos puede prevenirse de forma mas eficaz, atenuando, por tanto, la infeccion en su fase mas prematura. La cantidad de conjugado en cada dosis de vacuna se selecciona como una cantidad que induce una respuesta inmunoprotectora sin efectos adversos significativos. Dicha cantidad puede variar dependiendo del serotipo de neumococos. Generalmente, cada dosis comprendera de 0,1 a 100 pg de polisacarido, particularmente de 0,1 a 10 pg, y mas particularmente de 1 a 5 pg. Las cantidades optimas de componentes para una vacuna particular pueden averiguarse por estudios convencionales que implican la observacion de respuestas inmunitarias apropiadas en los sujetos. Por ejemplo, la cantidad para la vacunacion de un sujeto humano puede determinarse extrapolando el resultado de ensayo en animales. Ademas, la dosificacion puede determinarse de forma empmica.
En una realizacion particular de la presente invencion, la composicion de vacuna es una formulacion lfquida esteril de polisacaridos capsulares de neumococos de los serotipos 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F individualmente conjugados a CRM197. Cada dosis de 0,5 ml se formula para que contenga: 2 pg de cada sacarido, excepto para 6B a 4 pg; aproximadamente 34 pg de protema vehmulo CRM197; 0,125 mg de adyuvante de aluminio elemental (0,5 mg de fosfato de aluminio); y tampon cloruro sodico y succinato sodico como excipientes. El lfquido se carga en jeringas de dosis individuales son un conservante. Despues de agitar, la vacuna es una suspension blanca, homogenea lista para administracion intramuscular.
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En una realizacion adicional, la composicion de la presente invencion puede administrarse en una unica inyeccion. Por ejemplo, la composicion de vacuna de la presente invencion puede administrarse 2, 3, 4 o mas veces a intervalos especiados apropiadamente, tal como con un intervalo de 1, 2, 3, 4, 5 o 6 meses o combinacion de los mismos. El calendario de inmunizacion puede seguir el disenado para la vacuna Prevnar. Por ejemplo, el calendario rutinario para lactantes y parvulos contra enfermedad invasiva causada por S. pneumoniae debido a los serotipos incluidos en la vacuna Prevnar es a los 2, 4, 6 y 12-15 meses de edad. Por tanto, en este aspecto, la composicion se administra 4 veces, es decir, a los 2, 4, 6 y 12-15 meses de edad.
Las composiciones de la presente invencion tambien pueden incluir una o mas protemas de Streptococcus pneumoniae. Ejemplos de protemas de Streptococcus pneumoniae adecuadas para su inclusion incluyen las identificadas en la solicitud de patente internacional WO02/083855, asf como las descritas en la solicitud de patente internacional WO02/053761.
La composicion de la presente invencion puede administrarse a un sujeto mediante una o mas vfas de administracion conocidas para los expertos en la materia, tal como via parenteral, transdermica o transmucosa, intranasal, intramuscular, intraperitoneal, intracutanea, intravenosa o subcutanea y puede formularse en consecuencia. En una realizacion, la composicion de la presente invencion puede administrarse como una formulacion lfquida por inyeccion intramuscular, intraperitoneal, subcutanea, intravenosa, intraarterial o transdermica o inyeccion a la mucosa respiratoria. La formulacion lfquida para inyeccion incluye una solucion o similar.
La composicion de la presente invencion puede formularse en una forma de vial monodosis, vial de multiples dosis o jeringa precargada. Un vehmulo farmaceuticamente aceptable para una formulacion lfquida incluye disolvente acuoso o no acuoso, suspension, emulsion o aceite. Ejemplos de un disolvente no acuoso incluyen propilenglicol, polietilenglicol y oleato de etilo. Los vehmulos acuosos incluyen agua, alcohol/disolvente acuoso, emulsion o suspension, solucion salina fisiologica, solucion tamponante. Ejemplos de aceite incluyen aceite vegetal o animal, aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite de oliva, aceite de girasol, aceite de hngado, aceite sintetico tal como aceite marino y lfpidos obtenidos de la leche o los huevos. La composicion farmaceutica puede ser isotonica, hipertonica o hipotonica. Sin embargo, es deseable que la composicion farmaceutica para infusion o inyeccion sea basicamente isotonica. Por tanto, la isotonicidad o hipertonicidad puede ser ventajosa para el almacenamiento de la composicion. Cuando la composicion farmaceutica es hipertonica, la composicion puede diluirse hasta isotonicidad antes de la administracion. El agente de tonicidad puede ser un agente ionico de tonicidad tal como sal o un agente no ionico de tonicidad tal como carbohidrato. El agente ionico de tonicidad incluye cloruro sodico, cloruro calcico, cloruro potasico y cloruro de magnesio, pero no se limita a los mismos. El agente no ionico de tonicidad incluye sorbitol y glicerol, pero no se limita a los mismos. Preferiblemente, se incluye al menos un tampon farmaceuticamente aceptable. Por ejemplo, cuando la composicion farmaceutica es una infusion o inyeccion, es preferible formularla en un tampon con capacidad tamponante a pH 4 a 10, tal como pH 5-9 o 6-8. El tampon puede seleccionarse del grupo que consiste en solucion tamponante TRIS, acetato, glutamato, lactato, maleato, tartrato, fosfato, citrato, carbonato, glicinato, histidina, glicina, succinato y trietanolamina.
En particular, si la composicion farmaceutica es para administracion parenteral, puede seleccionarse un tampon de los adecuados para la Farmacopea de Estados Unidos (USP). Por ejemplo, el tampon puede seleccionarse del grupo que consiste en acido monobasico tal como acido acetico, acido benzoico, acido gluconico, acido glicerico y acido lactico; acido polibasico tal como acido acomtico, acido adfpico, acido ascorbico, acido carbonico, acido glutamico, acido malico, acido succmico y acido tartarico; y base tal como amoniaco, dietanolamina, glicina, trietanolamina y TRIS. Para administracion parenteral, los vehnculos (para inyeccion subcutanea, intravenosa, intraarticular e intramuscular) incluyen solucion de cloruro sodico, solucion de dextrosa de Ringer, dextrosa y cloruro sodico, solucion de Ringer lactada y aceites fijos. Los vehnculos para administracion intravenosa incluyen solucion de dextrosa de Ringer o una solucion de infusion basada en dextrosa similar, suplementos nutricionales y suplementos de electrolito. El ejemplo incluye un lfquido esteril tal como agua y aceite, con o sin un agente tensioactivo y adyuvante farmaceuticamente aceptable. Generalmente, el agua, solucion salina fisiologica, solucion de dextrosa, solucion de azucar relacionada y glicoles tales como propilenglicol o polietilenglicol, en particular, polisorbato 80, son adecuados para una inyeccion. Ejemplos de aceite incluyen aceite animal y vegetal, aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite de oliva, aceite de girasol, aceite de tngado, aceite sintetico tal como aceite marino y lfpidos de la leche o los huevos.
La formulacion de la presente invencion puede comprender agentes tensioactivos. Preferiblemente, ester de polioxietilen sorbitan (generalmente mencionado como Tween), en particular, polisorbato 20 y polisorbato 80; copolfmeros (tal como DOWFAXTM) de oxido de etileno (EO), oxido de propileno (PO), oxido de butileno (BO); oxtocinoles con diferentes repeticiones del grupo etoxi(oxi-1,2-etanodiilo), en particular, octoxinol-9(Triton-100); etilfenoxipolietoxietanol (IGEPAL CA-630/NP-40); fosfolfpido tal como lecitina; etoxilato de nonilfenol tal como TergitolTM serie NP; eter graso de polioxietileno derivado de alcohol launlico, cetflico, esteanlico, oleflico (tensioactivo Brij), en particular, monolauril eter de trietilenglicol (Brij 30); eter de sorbitan conocido como SPAN, en particular, trioleato de sorbitan (Span 85) y monolaurato de sorbitan aunque sin limitacion a los mismos. Tween 80 esta preferiblemente comprendido en una emulsion.
Pueden usarse mezclas de agentes tensioactivos tales como Tween 80/Span 85. Tambien es adecuada una
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combinacion de ester de polioxietilen sorbitan tal como Tween 80 y octocinol tal como Triton X-100. Tambien es ventajosa una combinacion de Laureth 9 y Tween y/u octocinol. Preferiblemente, la cantidad de ester de polioxietilen sorbitan (tal como Tween 80) incluida es del 0,01% al 1% (p/v), en particular el 0,1%; la cantidad de octilfenoxi polioxietanol o nonilfenoxi polioxietanol (tal como Triton X-100) incluida es del 0,001% al 0,1% (p/v), en particular del 0,005% al 0,02%; y la cantidad de eter de polioxietileno (tal como laureth 9) incluida es del 0,1% al 20% (p/v), posiblemente del 0,1% al 10%, en particular del 0,1% al 1% o de aproximadamente el 0,5%. En una realizacion, la composicion farmaceutica se suministra mediante un sistema de control de la liberacion. Por ejemplo, puede usarse infusion intravenosa, parche transdermico, liposoma u otras vfas para la administracion. En un aspecto, pueden usarse macromoleculas tales como microesfera o implante.
La descripcion anterior describe en lmeas generales la presente invencion. Puede obtenerse una compresion mas completa por referencia a los siguientes ejemplos espedficos. Estos ejemplos se describen unicamente con fines de ilustracion y no pretenden limitar el alcance de la invencion.
Ejemplos
Ejemplo 1. Preparacion de polisacarido capsular de S. pneumoniae
El cultivo de S. pneumoniae y la purificacion de polisacaridos capsulares se realizaron como saben los expertos en la materia. Los serotipos de S. pneumoniae se obtuvieron de la American Type Culture Collection (ATCC). Los S. pneumoniae se caracterizaron por las capsulas y la inmovilidad, diplococo con forma de lanceta Gram-positivo y alfa hemolisis en un medio de agar con sangre. Los serotipos se identificaron por ensayo Quelling usando anticuerpos espedficos (patente de Estados Unidos n.° 5.847.112).
Preparacion de bancos celulares
Se crearon varias generaciones de reservas de siembra para expandir la cepa y retirar los componentes de origen animal (generaciones F1, F2 y F3). Se produjeron dos generaciones adicionales de reservas de siembra. La primera generacion adicional se preparo a partir de un vial F3, y la posterior generacion se preparo a partir de un vial de la primera generacion adicional. Los viales de siembra se almacenaron congelados (< -70°C) con glicerol sintetico como crioconservante. Para la preparacion del banco celular, todos los cultivos se cultivaron en un medio basado en soja. Antes de la congelacion, las celulas se concentraron por centrifugacion, el medio usado se retiro y los sedimentos celulares se resuspendieron en un medio fresco que contema un crioconservante (tal como glicerol sintetico).
Inoculacion
Se usaron cultivos del banco celular de trabajo para inocular frascos de siembra que conteman un medio basado en soja. El frasco de siembra se uso para inocular un fermentador de siembra que contema un medio basado en soja.
Fermentacion de siembra
La fermentacion de la siembra se realizo en un fermentador de siembra con la temperatura y el pH controlados. Despues de que se alcanzar la densidad optica diana, el fermentador de siembra se uso para inocular el fermentador de produccion que contema el medio basado en soja.
Fermentacion de produccion
La fermentacion de produccion es la ultima etapa en la fermentacion. La temperatura, el pH y la velocidad de agitacion estaban controlados.
Inactivacion
La fermentacion se termino despues de que cesara el crecimiento por la adicion de un inactivador. Despues de la inactivacion, se enfriaron los contenidos en el fermentador y se ajusto el pH del caldo de cultivo lisado.
Purificacion
El caldo del fermentador se centrifugo y se filtro para retirar los desechos de las celulas bacterianas. Se usaron varias operaciones de concentracion/diafiltracion, etapas de precipitacion/elucion y filtracion profunda para retirar los contaminantes y purificar los polisacaridos capsulares.
Ejemplo 2. Preparacion de conjugado de polisacarido capsular de S. pneumoniae-CRM-^
Se activaron los polisacaridos de diferentes serotipos siguiendo diferentes rutas y despues se conjugaron a CRMw. El proceso de activacion comprende la reduccion del tamano de los polisacaridos capsulares hasta los pesos
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moleculares diana, activacion qmmica e intercambio de tampon mediante ultrafiltracion. Se conjuga CRM197 purificado a polisacaridos capsulares activados, y los conjugados se purifican usando ultrafiltracion y finalmente se filtran a traves de un filtro de 0,22 pm. Los parametros del proceso, tales como pH, temperatura, concentracion y tiempo son los siguientes.
(1) Activacion Etapa 1
Cada polisacarido de serotipo se diluyo con agua para inyeccion, acetato sodico y fosfato sodico hasta una concentracion final en un intervalo de 1,0 a 2,0 mg/ml. Para el serotipo 1, se anadio hidroxido sodico (0,05 M de concentracion de base final) y la solucion se incubo a 50°C ± 2°C. Despues, la solucion se enfrio hasta 21 a 25°C y se detuvo la hidrolisis anadiendo HCl 1 M hasta que se alcanzo un pH diana de 6,0 ± 0,1. Para el serotipo 3, se anadio HCl (0,01 M de concentracion de acido final) y la solucion se incubo a 50°C ± 2°C. Despues, la solucion se enfrio hasta 21 a 25°C y se detuvo la hidrolisis anadiendo fosfato sodico 1 M hasta que se alcanzo un pH diana de 6,0 ± 0,1. Para el serotipo 4, se anadio HCl (0,1 M de concentracion de acido final) y la solucion se incubo a 45°C ± 2°C. Despues, la solucion se enfrio hasta 21 a 25°C y se detuvo la hidrolisis anadiendo fosfato sodico 1 M hasta que se alcanzo un pH diana de 6,0 ± 0,1. Para el serotipo 6A, se anadio acido acetico glacial (0,2 M de concentracion de acido final) y la solucion se incubo a 60°C ± 2°C. Despues, la solucion se enfrio hasta 21 a 25°C y se detuvo la hidrolisis anadiendo hidroxido sodico 1 M hasta que se alcanzo un pH diana de 6,0 ± 0,1. Para el serotipo 14 y 18C, se anadio acido acetico glacial (0,2 M de concentracion de acido final) y la solucion se incubo a 94°C ± 2°C. Despues, la solucion se enfrio hasta 21 a 25°C y se detuvo la hidrolisis anadiendo fosfato sodico 1 M hasta que se alcanzo un pH diana de 6,0 ± 0,1.
Etapa 2: Reaccion con peryodato
Los equivalentes molares de peryodato sodico necesarios para la activacion de sacaridos de neumococos se determinaron usando el contenido total de sacarido. Con mezcla minuciosa, se permitio que la reaccion de oxidacion continuara entre 16 a 20 horas a 21 - 25°C para todos los serotipos excepto 1, 7f y 19F, para los que la temperatura fue < 10°C.
Etapa 3: Ultrafiltracion
El sacarido oxidado se concentro y se diafiltro con agua para inyeccion (WFI) en un ultrafiltro de 100 kDa de MWCO (ultrafiltro de 30 kDa para el serotipo 1 y ultrafiltro de 5 kDa para el serotipo 18C). La diafiltracion se consiguio usando solucion de cloruro sodico al 0,9% para el serotipo 1, tampon acetato sodico 0,01 M (pH 4,5) para el serotipo 7F y tampon fosfato sodico 0,01 M (pH 6,0) para el serotipo 19F. El permeado se descarto y el retenido se filtro a traves de un filtro de 0,22 pm.
Etapa 4: Liofilizacion
Para los serotipos 3, 4, 5, 9N, 9V y 14, el sacarido concentrado se mezclo con la protema vehfculo CRM197, se cargo en frascos de vidrio, se liofilizo y despues se almaceno a -25°C ± 5°C.
Para los serotipos 2, 6A, 6B, 7F, 19A, 19F y 23F, se anadio una cantidad especificada de sacarosa que se calculo para conseguir una concentracion de sacarosa del 5% ± 3% en la mezcla de reaccion de conjugacion. Los serotipos 1 y 18C no requirieron adicion de sacarosa. El sacarido concentrado despues se cargo en frascos de vidrio, se liofilizo y despues se almaceno a -25°C ± 5°C.
(2) Proceso de conjugacion
Se realizo conjugacion acuosa para los serotipos 1, 3, 4, 5, 9N, 9V, 14 y 18C, y se realizo conjugacion con DMSO para los serotipos 2, 6A, 6B, 7F, 19A, 19F y 23F.
Etapa 1: Disolucion
Conjugacion acuosa
Para los serotipos 3, 4, 5, 9N, 9V y 14, la mezcla liofilizada de sacarido activado-CRMw se descongelo y se equilibro a temperatura ambiente. El sacarido activado-CRMw liofilizado despues se reconstituyo en un tampon fosfato sodico 0,1 M a una relacion tfpica por serotipo. Para los serotipos 1 y 18C, el sacarido liofilizado se reconstituyo en una solucion de CRM197 en fosfato sodico dibasico 1 M a una relacion tfpica de 0,11 l de fosfato sodico por 1 l de solucion de CRM197.
Conjugacion con dimetil sulfoxido (DMSO)
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Los serotipos 2, 6A, 6B, 7F, 19A, 19F, 23F de sacarido activado liofilizado y la protema vehmulo CRM197 liofilizada se equilibraron a temperatura ambiente y se reconstituyeron en DMSO.
Etapa 2: Reaccion de conjugacion
Conjugacion acuosa
Para los serotipos 1, 3, 4, 5, 9N, 9V, 14 y 18C, la reaccion de conjugacion se inicio anadiendo la solucion de cianoborohidruro sodico (100 mg/ml) para conseguir 1,0 -1,2 moles de cianoborohidruro sodico por mol de sacarido. La mezcla de reaccion se incubo durante 44 - 96 horas a 23°C hasta 37°C. La temperatura y el tiempo de reaccion se ajustaron por serotipo. La temperatura despues se redujo hasta 23°C ± 2°C y se anadio cloruro sodico al 0,9% al reactor. Se anadio solucion de borohidruro sodico (100 mg/ml) para conseguir 1,8 - 2,2 equivalentes molares de borohidruro sodico por mol de sacarido. La mezcla se incubo durante 3-6 horas a 23°C ± 2°C. Este procedimiento redujo cualquier aldehfdo sin reaccionar presente en los sacaridos. La mezcla se diluyo con cloruro sodico al 0,9% y la mezcla de conjugacion diluida se filtro usando un prefiltro de 1,2 pm en un recipiente de mantenimiento.
Conjugacion con DMSO
Para los serotipos 2, 6A, 6B, 7F, 19A, 19F y 23F, se mezclaron sacarido activado y protema vehmulo CRM197 a un intervalo de relacion de 0,8 g - 1,25 g de sacarido/g de CRM197. La reaccion de conjugacion se inicio anadiendo la solucion de cianoborohidruro sodico (100 mg/ml) a una relacion de 0,8 - 1,2 equivalentes molares de cianoborohidruro sodico a un mol de sacarido activado. Se anadio WFI a la mezcla de reaccion hasta una diana del 1% (v/v), y la mezcla se incubo durante 11 - 27 horas a 23°C ± 2°C. Se anadieron solucion de borohidruro sodico, 100 mg/ml (1,8 - 2,2 equivalentes molares tfpicos de borohidruro sodico por mol de sacarido activado) y WFI (diana del 5% v/v) a la reaccion y la mezcla se incubo durante 3-6 horas a 23°C ± 2°C. Este procedimiento redujo cualquier aldehfdo sin reaccionar presente en los sacaridos. Despues, la mezcla de reaccion se diluyo con cloruro sodico al 0,9%, y la mezcla de conjugacion diluida se filtro usando un prefiltro de 1,2 pm en un recipiente de mantenimiento.
Etapa 3: Ultrafiltracion
La mezcla de conjugado diluida se concentro y se diafiltro en un filtro de ultrafiltracion de 100 kDa de MWCO con un mmimo de 20 volumenes de cloruro sodico al 0,9% o tampon. El permeado se descarto.
Etapa 4: Filtracion esteril
El retenido despues de la diafiltracion de 100 kDa de MWCO se filtro a traves de un filtro de 0,22 pm. Los controles en el proceso (contenido de sacarido, protema libre, sacarido libre, DMSO residual y cianuro residual; para conjugacion con DMSO, DMSO residual ademas de los mismos) se realizaron sobre el producto filtrado. Los controles en el proceso sobre el retenido filtrado se realizaron para determinar si era necesario concentracion, diafiltracion y/o dilucion adicional. Segun lo necesario, el conjugado filtrado se diluyo con cloruro sodico al 0,9% para conseguir una concentracion final de menos de 0,55 g/l. Se realizaron ensayos de liberacion para el contenido de sacarido, contenido de protema y relacion de sacarido:protema en esta fase. Finalmente, el conjugado se filtro (0,22 pm) y se realizo el ensayo de liberacion (aspecto, protema libre, sacarido libre, endotoxina, determinacion de tamano molecular, cianuro residual, DMSO residual, identidad de sacarido e identidad de CRM197). La solucion concentrada en bruto final se almaceno a 2 - 8°C.
Ejemplo 3. Formulacion de una vacuna multivalente de conjugado de neumococos
Los volumenes requeridos de concentrados en bruto finales se calcularon basandose en el volumen del lote y las concentraciones de sacarido en bruto. Despues de que se anadieran las cantidades requeridas del cloruro sodico (solucion salina fisiologica) al 0,85%, polisorbato 80 y tampon succinato al recipiente de formulacion premarcado, se anadieron los concentrados en bruto. La preparacion despues se mezclo minuciosamente y se filtro a esterilidad a traves de una membrana de 0,22 pm. La masa formulada se mezclo suavemente durante y despues de la adicion de fosfato de aluminio en bruto. El pH se comprobo y se ajusto si era necesario. El producto en bruto formulado se almaceno a 2 - 8°C. El producto contema, en un volumen de 0,5 ml, 2 pg de cada sacarido, excepto para 6B a 4 pg; aproximadamente 34 pg de protema vehmulo CRM197; 0,125 mg de adyuvante de aluminio elemental (0,5 mg de fosfato de aluminio); 4,25 mg de cloruro sodico; 295 pg de tampon succinato sodico; y 100 pg de polisorbato 80.
Ejemplo 4. Inmunogenicidad de la vacuna multivalente de conjugado de neumococos
La vacuna multivalente de neumococos, es decir, la composicion de vacuna (SK-15) preparada en el ejemplo 3 se ensayo para su capacidad de inducir una respuesta inmunogenica en conejos. Estos efectos inmunogenicos se caracterizaron por ELISA espedfico de antfgeno para las concentraciones de IgG en suero y por ensayo opsonofagodtico (OPA) para la funcion de los anticuerpos. Se inmunizaron conejos blancos de Nueva Zelanda por via intramuscular en la semana 0 y la semana 3 con la dosis clmica humana programada de cada polisacarido (2 pg
5
10
15
20
25
30
35
de cada PS, excepto para 6B a 4 |jg). Los sueros se muestrearon cada 3 semanas despues de la inmunizacion. Medicion de la concentracion de IgG especifica de serotipo
Se recubrieron polisacaridos capsulares (PnPs) para cada serotipo sobre una placa de 96 pocillos a 500 ng/pocillo. Se muestreo una cantidad equivalente de suero de cada sujeto y se combino por grupo. La combinacion de suero se diluyo en serie en factor 10 con un tampon de dilucion de anticuerpos que comprendfa Tween 20, C-PS 4 jg/ml y polisacarido capsular de serotipo 22F (PnPs 22F) 4 jg/ml y despues se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 30 minutos. La placa se lavo 5 veces con un tampon de lavado y despues la placa de pocillos se recubrio con 50 jl de suero preadsorbido y diluido y se incubo a temperatura ambiente durante 18 horas. La placa de pocillos se lavo del mismo modo y despues se anadieron conjugados de anticuerpo de cabra anti-IgG de conejo-fosfatasa alcalina (1:50000) a cada pocillo, seguido de incubacion a temperatura ambiente durante 2 horas. Las placas se lavaron como se ha descrito anteriormente y se anadio 1 mg/ml de tampon p-nitrofenilamina como sustrato a cada pocillo y despues se hicieron reaccionar a temperatura ambiente durante 2 horas. La reaccion se interrumpio anadiendo 50 jl de NaOH 3 M y se midieron las absorbancias a 405 nm y 690 nm. Como ejemplos comparativos, la vacuna 7-valente (Prevnar 7, Pfizer) y la vacuna 13-valente (Prevnar 13, Pfizer) se sometieron al mismo procedimiento. Los resultados se muestran en las figuras 1-15.
Ensayo de inmunogenicidad funcional (OPA)
Se evaluaron las funciones de los anticuerpos ensayando suero en ensayo OPA. Se muestreo una cantidad equivalente de suero de cada sujeto, se combino por grupo y se diluyo en factor 10. Se cultivo S. pneumoniae en un medio THY por serotipo y se diluyo hasta 1000 CFU/10 pi. Se mezclaron 200 jl de tampon de opsonizacion, 10 jl de suero diluido y 10 jl de S. pneumoniae diluido y se hicieron reaccionar a temperatura ambiente durante 1 hora. Se anadio una mezcla de celulas HL-60 prediferenciadas y complementos y se hizo reaccionar en una incubadora de CO2 (37°C) durante una hora. La temperatura se redujo para detener la fagocitosis y los 5 pl de reaccion se extendieron en una placa de agar presecada durante 30 - 60 minutos. La placa se incubo en una incubadora de CO2 (37°C) durante 12 -18 horas y despues se contaron las colonias. El tftulo OPA se expreso como una tasa de dilucion a la que se observo eliminacion del 50%. Como ejemplo comparativo, la vacuna 13-valente (Prevnar 13, Pfizer) se sometio al mismo procedimiento. Los resultados se muestran en las Tablas 1-3.
[Tabla 1]
Titulo OPA de 15 serotipos de polisacarido 3 semanas despues de la inmunizacion primaria
Serotipo
Prevnar 13 SK-15 Serotipo Prevnar 13 SK-15
1
1:16 1:4 9V 1:256 1:256
2
- 1:128 9N - 1:512
3
Sin dilucion Sin dilucion 14 1:256 1:256
4
1:128 1:128 18C 1:1024 1:1024
5
1:64 1:32 19A 1:512 1:256
6A
1:512 1:256 19F 1:256 1:128
6B
1:256 1:128 23F 1:256 1:256
7F
1:1024 1:1024 - - -
[Tabla 2]
Titulos OPA de 15 serotipos de polisacarido 3 semanas despues de la inmunizacion secundaria
Serotipo
Prevnar 13 SK-15 Serotipo Prevnar 13 SK-15
1
1:64 1:64 9V 1:512 1:512
2
- 1:512 9N - 1:2048
3
1:2 1:4 14 1:1024 1:1024
4
1:1024 1:1024 18C 1:1024 1:512
5
1:256 1:256 19A 1:1024 1:1024
6A
1:2048 1:2048 19F 1:1024 1:512
6B
1:2048 1:2048 23F 1:2048 1:2048
7F
1:2048 1:2048 - - -
[Tabla 3]
Titulos OPA de 15 serotipos de polisacarido 6 semanas despues de la inmunizacion secundaria
Serotipo
Prevnar 13 SK-15 Serotipo Prevnar 13 SK-15
1
1:64 1:64 9V 1:512 1:512
2
- 1:512 9N - 1:2048
3
1:4 1:4 14 1:1024 1:1024
4
1:1024 1:1024 18C 1:2048 1:2048
5
1:512 1:512 19A 1:2048 1:1024
6A
1:2048 1:2048 19F 1:1024 1:512
6B
1:2048 1:1024 23F 1:2048 1:2048
7F
1:2048 1:2048 - - -
La respuesta inmunitaria espedfica de serotipo por la formulacion de vacuna de la presente invencion y la del ejemplo comparativo se evaluaron mediante ELISA de IgG y OPA mediada por el complemento para anticuerpos funcionales. Las Fig. 1 a 15 muestran los resultados de ELISA de IgG y las tablas 1 a 3 muestran los resultados de 5 mediciones de inmunogenicidad funcional obtenidas por OPA, que comparan las respuestas inmunitarias entre los grupos de tratamiento. Estos resultados indican que la vacuna 15-valente de conjugado de polisacarido de neumococos inducina un tftulo de IgG y una actividad de anticuerpos funcionales equivalentes a o mejores que Prevnar-13.
10

Claims (8)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    REIVINDICACIONES
    1. Una composicion inmunogenica multivalente, que comprende: 15 conjugados distintos de polisacarido-protema, junto con un vehmulo fisiologicamente aceptable, en la que cada uno de los conjugados de polisacarido-protema comprende un polisacarido capsular de un serotipo diferente de Streptococcus pneumoniae conjugado a una protema vehmulo, y los polisacaridos capsulares se preparan a partir de los serotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9N, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F.
  2. 2. La composicion inmunogenica multivalente de la reivindicacion 1, en la que la protema vehmulo es CRM197.
  3. 3. La composicion inmunogenica multivalente de la reivindicacion 1, que comprende adicionalmente un adyuvante.
  4. 4. La composicion inmunogenica multivalente de la reivindicacion 3, en la que el adyuvante es un adyuvante basado en aluminio.
  5. 5. La composicion inmunogenica multivalente de la reivindicacion 4, en la que el adyuvante se selecciona del grupo que consiste en fosfato de aluminio, sulfato de aluminio e hidroxido de aluminio.
  6. 6. La composicion inmunogenica multivalente de la reivindicacion 5, en la que el adyuvante es fosfato de aluminio.
  7. 7. Una composicion farmaceutica para su uso en la induccion de una respuesta inmunitaria contra un conjugado de polisacarido capsular de Streptococcus pneumoniae, que comprende una cantidad inmunologicamente eficaz de la composicion inmunogenica multivalente de una cualquiera de las realizaciones 1 a 6.
  8. 8. La composicion farmaceutica para su uso de acuerdo con la reivindicacion 7, en la que la composicion inmunogenica multivalente es una unica dosis de 0,5 ml formulada para que contenga:
    2 |jg de cada sacarido, excepto para 6B a 4 |jg; aproximadamente 34 jg de la protema vehmulo CRM197;
    0,125 mg de adyuvante de aluminio elemental (0,5 mg de fosfato de aluminio); y tampon cloruro sodico y succinato sodico como excipientes.
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