CZ307473B6 - A method of preparation of a powder, prebiotic, gluten-free and lactose-free product from waste fruit - Google Patents
A method of preparation of a powder, prebiotic, gluten-free and lactose-free product from waste fruit Download PDFInfo
- Publication number
- CZ307473B6 CZ307473B6 CZ2016-404A CZ2016404A CZ307473B6 CZ 307473 B6 CZ307473 B6 CZ 307473B6 CZ 2016404 A CZ2016404 A CZ 2016404A CZ 307473 B6 CZ307473 B6 CZ 307473B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- fruit
- free
- product
- prebiotic
- preparation
- Prior art date
Links
Landscapes
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
Description
Oblast technikyTechnical field
Vynález se týká způsobu využití dosud potravinářsky málo využívaných jablečných a/nebo hruškových odpadních výlisků pro přípravu sypkého dietního produktu zvláště vhodného jako aditivum do potravin pro diabetiky, pacienty trpící celiakií a/nebo pro zvýšení obsahu nerozpustné vlákniny unikátního složení v dalších dietách. Prebiotické vlastnosti a dlouhá údržnost produktu může být výhodně kombinována i s probiotickými vlastnostmi výrobků, do kterých je přidán.The invention relates to a method of utilizing the hitherto non-food grade apple and / or pear waste moldings for the preparation of a loose dietary product particularly useful as an additive to foods for diabetics, celiac disease patients and / or to increase the insoluble fiber content of unique compositions in other diets. Prebiotic properties and long product shelf life can advantageously be combined with the probiotic properties of the products to which it is added.
Dosavadní stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION
Při produkci a průmyslovém zpracování ovoce se vyprodukuje velké množství odpadního ovoce. U jablek, podle typu výrobku, pak může být množství odpadních produktů v rozmezí 90 až 250 kg na tunu finálního výrobku, jako je ovocná šťáva, ovocný koncentrát, pyré nebo kompot. Likvidace tohoto odpadního ovoce často představuje ekonomickou zátěž pro zpracovatelský průmysl a problém pro životní prostředí. Největší objem ovocných odpadů v tuzemsku je tvořen odpady z jablek a hrušek, nejčastěji v podobě výlisků s významným zastoupením slupek a jádřinců. Tento odpad je v současné době nejčastěji využíván ke kompostování, k výrobě pektinu, bioplynu či slouží jako surovina pro výrobu krmiv. U krmiv se jako zatím nejefektivnější ukazuje přídavek ovocného odpadu do 39 % ke standardním surovinám, používaným na výrobu krmivářských směsí. Dále je ovocný odpad využíván pro výrobu organických kyselin a syntéze enzymových preparátů. V novějších studiích je pak jablečný odpad využíván k extrakci lipidů, zejména vosků ze sušiny. Nepotravinářským využitím je pak výroba briket ze sušeného jablečného odpadu. Ovocný odpad je zdrojem složek s vysokou nutriční hodnotou a může být využit k vývoji nových produktů. Rovněž, epidemiologické studie dokládají, že zvýšený příjem nerozpustné vlákniny hojně zastoupené v odpadních ovocných výliscích způsobuje výrazné snížení rizika chronických onemocnění. Potravinářské zužitkování odpadních produktů z ovoce, zejména jablek a hrušek, je z mnoha hledisek výhodné a zároveň má i ekologický a ekonomický přínos. Významnou nutriční hodnotu mají jablečné a/nebo hruškové výlisky a je žádoucí využít tyto produkty ve výživě obyvatel.A large amount of waste fruit is produced in the production and processing of fruit. For apples, depending on the product, the amount of waste products may range from 90 to 250 kg per tonne of the final product, such as fruit juice, fruit concentrate, puree or compote. Disposal of this fruit is often an economic burden for the manufacturing industry and a problem for the environment. The largest volume of fruit waste in the Czech Republic is made up of apple and pear waste, most often in the form of pressed pieces with a significant proportion of husks and cores. This waste is currently most often used for composting, pectin, biogas production or as a raw material for feed production. In the case of feed, the addition of fruit waste up to 39% to the standard raw materials used for the production of compound feed has proved to be the most effective. Furthermore, fruit waste is used for the production of organic acids and synthesis of enzyme preparations. In recent studies, apple waste is then used to extract lipids, especially waxes from dry matter. Non-food use is then production of briquettes from dried apple waste. Fruit waste is a source of high nutritional ingredients and can be used to develop new products. Also, epidemiological studies have shown that an increased intake of insoluble fiber abundant in fruit waste products causes a significant reduction in the risk of chronic diseases. Food utilization of fruit waste products, especially apples and pears, is beneficial in many respects and at the same time has an environmental and economic benefit. Apple and / or pear pomace have an important nutritional value and it is desirable to use these products in the nutrition of the population.
Některé vynálezy a užitné vzory (např. dokumenty EP 0667106 A a CZ 22460 U) řeší zpracování ovocných složek, ale jako ovocná složka nejsou v těchto případech použity vedlejší produkty zpracování ovoce, ale běžné ovocné šťávy/koncentráty, pyré, protlaky apod. Typickou surovinou pro podstatu vynálezu využívanou v našem technickém řešení jsou ovocné odpady (konkrétně jablečné/hruškové výlisky, slupky a jádřince), které mají specifické vlastnosti, zcela odlišné od ovocných materiálů používaných v ostatních vynálezech.Some inventions and utility models (eg EP 0667106 A and CZ 22460 U) deal with the processing of fruit ingredients, but the fruit ingredient used in these cases is not fruit by-products, but common fruit juices / concentrates, purees, purees and the like. for the essence of the invention utilized in our technical solution are fruit waste (namely apple / pear pomace, husks and pips) having specific properties, quite different from the fruit materials used in other inventions.
Problematika zpracování ovoce a dalších rostlinných materiálů je řešena také v těchto dokumentech WO 8908405 A, WO 9117672 A, US 4056637 A, přičemž se všechny tyto vynálezy odlišují od námi navrhované podstaty vynálezu. V případě dokumentu WO 8908405 A je výsledkem nápoj tvořený převážně z ovesné mouky. V dokumentech WO 9117672 A a US 4056637 A není použita ovocná surovina a/nebo ovocný odpad, vstupním materiálem jsou otruby nebo cereální klíčky. Unikátnost řešení předkládaného vynálezu spočívá jak v povaze vstupních surovin (odpady ze zpracování ovoce), tak v technologickém řešení uvedeného v podstatě vynálezu a dále také v parametrech finálního produktu. Předkládané technické řešení tohoto patentu nevede k přípravě mléčného výrobku (jako např. v patentu EP 0 667 106 A) i přesto, že byly využity bakterie mléčného kvašení. Nezřejmost podstaty tohoto patentu spočívá zejména v unikátní vstupní surovině (ovocné odpady), kdy známé technologické postupy neřešíThe issue of processing fruit and other plant materials is also addressed in these documents WO 8908405 A, WO 9117672 A, US 4056637 A, all of which are distinct from the present invention. In the case of WO 8908405 A, the result is a beverage consisting predominantly of oatmeal. In WO 9117672 A and US 4056637 A no fruit raw material and / or fruit waste is used, the input material being bran or cereal germ. The uniqueness of the solution of the present invention lies both in the nature of the feedstock (fruit processing wastes), in the technological solution mentioned in essence of the invention and in the parameters of the final product. The present technical solution of this patent does not lead to the preparation of a dairy product (such as in EP 0 667 106 A) despite the use of lactic acid bacteria. The unclear nature of this patent lies mainly in the unique raw material (fruit waste), when known technological procedures do not solve
- 1 CZ 307473 B6 specifické vlastnosti těchto materiálů a nelze tedy předpokládat, že na základě jednoduchého experimentování by odborník v oboru dospěl k předmětu podstaty tohoto vynálezu.It is therefore not to be understood that, by simple experimentation, one of ordinary skill in the art would have come to the object of the present invention.
Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION
Podstatou navrhovaného způsobu dle vynálezu je třístupňový proces přípravy sypkého bezlepkového a bezlaktózového ovocného produktu s prebiotickými vlastnostmi, založenými na unikátním složení nerozpustné vlákniny.The principle of the proposed process according to the invention is a three-step process for the preparation of a loose gluten-free and lactose-free fruit product with prebiotic properties based on the unique insoluble fiber composition.
V prvním kroku se připraví substrát pro fermentaci. Jablečné a/nebo hruškové slupky a/nebo jádřince v podobě výlisků se sušinou minimálně 80 % se zhomogenizují při teplotě v rozmezí 20 až 30 °C na zrnitost 0,1 až 0,2 mm a smísí se stejným hmotnostním dílem bezlepkové rýžové a/nebo kukuřičné mouky a dvěma až čtyřmi hmotnostními díly vody.In a first step, a substrate is prepared for fermentation. Apple and / or pear peel and / or kernels in the form of marc with a dry matter content of at least 80% shall be homogenized at a temperature between 20 and 30 ° C to a grain size of 0,1 to 0,2 mm and mixed with equal parts by weight of gluten-free rice and / or corn flour and two to four parts by weight of water.
Ve druhém kroku se substrát zaočkuje při teplotě 20 až 30 °C odděleně připravenou směsí mikroorganismů v poměru 1 díl směsné fermentační kultury s 10 až 100 díly substrátu. Pak se fermentační směs zahřeje na teplotu mezi 30 až 40 °C, typicky 34 °C a fermentuje se v horizontálním fermentoru s frekvencí otáček míchání 10 až 15 otáček/hodinu po dobu 24 až 96 hodin.In a second step, the substrate is seeded at 20-30 ° C with a separately prepared mixture of microorganisms in a ratio of 1 part of a mixed fermentation culture to 10-100 parts of the substrate. Then, the fermentation broth is heated to a temperature between 30 to 40 ° C, typically 34 ° C, and fermented in a horizontal fermenter with a stirring speed of 10 to 15 rpm / hour for 24 to 96 hours.
Směsná očkovací fermentační kultura se získá smícháním stejných hmotnostních dílů kmenů Lactobacillus sanfranciscensis, Lactobacillus plantarum a Lactobacillus pontis odděleně kultivovaných při teplotě 30 až 40 °C, typicky při 34 °C, po dobu 20 až 48 hodin v médiu složeném z bezlepkové mouky rýžové a/nebo kukuřičné.The mixed seed fermentation culture is obtained by mixing equal parts by weight of Lactobacillus sanfranciscensis, Lactobacillus plantarum and Lactobacillus pontis strains separately cultured at 30 to 40 ° C, typically at 34 ° C, for 20 to 48 hours in a medium composed of gluten-free rice flour and / or corn.
Ve třetím kroku se fermentace směsi, po dosažení hodnoty pH 3,5 až 4,0, zastaví sušením fermentu na válcové sušárně, při teplotě válce 125 až 135 °C a otáčkách válce 3 až 8 otáček/minutu. Po dosažení sušiny minimálně 90 %, se produkt samovolně ochladí na teplotu v rozmezí 20 až 25 °C a dále se drtí na zrnitost 0,2 až 2 mm.In the third step, the fermentation of the mixture, after reaching a pH of 3.5 to 4.0, is stopped by drying the ferment in a roller drier, at a roller temperature of 125-135 ° C and a roller speed of 3 to 8 rpm. After reaching a dry matter content of at least 90%, the product is spontaneously cooled to a temperature in the range of 20-25 ° C and further crushed to a grain size of 0.2-2 mm.
Výsledkem tohoto postupu podle vynálezu je sypký, bezlepkový, bezlaktózový ovocný produkt s unikátním složením prebiotických složek, vhodný pro dietní využití, protože obsahuje zanedbatelné množství rozpustných sacharidů. Složení prebiotických složek je unikátní zejména v relativním zastoupení složek nerozpustné vlákniny. Její významnou složkou je kutin z jablečných a/nebo hruškových slupek a jádřinců. Ten se po konzumaci nerozkládá v tlustém střevě přítomnými mikroorganismy za vzniku plynných látek a nezpůsobuje tak zažívací obtíže, jako je tomu v případě některých nestravitelných polysacharidických složek vlákniny, například fruktosanů.This process of the invention results in a free-flowing, gluten-free, lactose-free fruit product with a unique composition of prebiotic ingredients, suitable for dietary use, since it contains negligible amounts of soluble carbohydrates. The composition of prebiotic components is unique especially in the relative proportion of insoluble fiber components. An important ingredient is cuttings of apple and / or pear peel and core fruit. After consumption, it does not decompose in the large intestine by the present microorganisms to form gaseous substances and does not cause digestive problems, as is the case with some indigestible polysaccharide fiber constituents, such as fructosans.
Kutin dále vytváří unikátní texturu u hladkých potravin, do nichž je tento ovocný produkt přidán jako dietní aditivum. Další složkou je nerozpustná vláknina vzniklá z mikrobiální biomasy a nerozpustná vláknina vzniklá z použité bezlepkové mouky během fermentace. Velkou výhodou produktu připraveného dle vynálezu je to, že je samoúdržný a prakticky sterilní. Pro dlouhodobější skladování se proti sekundární mikrobiální kontaminaci konzervuje přídavkem kyseliny sorbové. Takto se eliminuje sezónní charakter nadbytku a nedostatku suroviny tj. jablečných a/nebo hruškových slupek a jádřinců, což je výhodné i z hlediska zajištění plynulých dodávek produktu do tržní sítě. Senzorické vlastnosti produktu se upraví přídavkem sušených bylin a/nebo extraktů z bylin a/nebo kořeni a/nebo extraktů z koření a/nebo potravinářských barviv ve stadiu před sušením nebo před použitím.Kutin also creates a unique texture for smooth foods to which this fruit product is added as a dietary additive. Another component is insoluble fiber derived from microbial biomass and insoluble fiber derived from used gluten-free flour during fermentation. A great advantage of the product prepared according to the invention is that it is self-sustaining and practically sterile. For long-term storage it is preserved against secondary microbial contamination by addition of sorbic acid. This eliminates the seasonal nature of the excess and scarcity of raw material, ie apple and / or pear peel and core fruit, which is also advantageous in terms of ensuring a smooth supply of the product to the market network. The sensory properties of the product are adjusted by the addition of dried herbs and / or extracts of herbs and / or root and / or extracts of spices and / or food colorings at the stage before drying or before use.
-2CZ 307473 B6-2GB 307473 B6
Příklady uskutečnění vynálezu:Examples of the invention:
Příklady realizace vynálezu jsou uvedeny pro ilustraci a nikoliv jako omezení příkladů na uvedené případy.Exemplary embodiments of the invention are given by way of illustration and not by way of limitation of the examples to the indicated cases.
Příklad 1Example 1
K 1 hmotnostnímu dílu, na zrnitost 0,1 až 2 mm, zhomogenizovaných jablečných slupek výlisků s obsahem sušiny 80 % se přidá 1 hmotnostní díl kukuřičné mouky a 3 hmotnostní díly vody a směs se homogenizuje mícháním při teplotě 20 °C.To 1 part by weight, to a particle size of 0.1 to 2 mm, of homogenised apple husks with a dry matter content of 80%, 1 part by weight of corn flour and 3 parts by weight of water are added and the mixture is homogenized by stirring at 20 ° C.
Pak se připravený substrát zahřeje na teplotu 30 °C a v poměru 70 ku 1 zaočkuje směsnou fermentační kulturou, připravenou ze stejných dílů odděleně fermentovaných kultur mikrobiálních kmenů Lactobacillus sanfranciscensis, Lactobacillus plantarum a Lactobacillus pontis kultivovaných při teplotě 34 °C po dobu 24 hodin v médiu složeném z bezlepkové kukuřičné mouky.Subsequently, the prepared substrate is heated to 30 ° C and inoculated at 70 to 1 with a mixed fermentation culture prepared from equal parts of separately fermented cultures of microbial strains of Lactobacillus sanfranciscensis, Lactobacillus plantarum and Lactobacillus pontis cultured at 34 ° C for 24 hours in medium consisting of gluten-free corn flour.
Po promíchání směsné fermentační kultury se substrátem při teplotě 30 °C ve vertikálním míchači, se vzniklá směs fermentuje v horizontálním fermentoru při teplotě 34 °C s frekvencí míchání 15 otáček/hodinu po dobu 48 až 72 hodin. Když hodnota pH dosáhne rozmezí 3,8±0,2, fermentace se zastaví sušením fermentovaného díla na válcové sušárně při teplotě válce 125 °C a otáčkách válce 5 otáček/minutu. Bezlepkový a bezlaktózový prebiotický preparát se stabilizuje dosušením na sušinu minimálně 90 % a po samovolném ochlazení na teplotu 25 °C se produkt drtí pomocí drtiče na zrnitost 0,2 až 2 mm.After mixing the mixed fermentation culture with the substrate at 30 ° C in a vertical mixer, the resulting mixture is fermented in a horizontal fermenter at 34 ° C with a stirring speed of 15 rpm for 48 to 72 hours. When the pH reaches a range of 3.8 ± 0.2, the fermentation is stopped by drying the fermented batch in a roller dryer at a roller temperature of 125 ° C and a roller speed of 5 rpm. The gluten-free and lactose-free prebiotic preparation is stabilized by drying to a dry weight of at least 90% and after spontaneous cooling to 25 ° C, the product is crushed using a grinder to a grain size of 0.2 to 2 mm.
Příklad 2Example 2
Sušený bezlepkový a bezlaktózový prebiotický materiál se připraví způsobem uvedeným v příkladu 1 s tím rozdílem, že se na místo jablečných výlisků použijí ve stejném množství výlisky z hrušek, a kukuřičná mouka v substrátu i kultivačním médiu se ve stejném množství nahradí moukou rýžovou.Dried gluten-free and lactose-free prebiotic material was prepared as described in Example 1 except that pear moldings were used in the same amount instead of apple pomace, and the corn flour in the substrate and culture medium was replaced with rice flour in the same amount.
Průmyslová využitelnost:Industrial Applicability:
Produkt připravený podle vynálezu je využitelný jako dietní potravinářský doplněk zvláště pro nemocné celiakií a konzumenty nesnášející laktózu. Je bez dalších úprav a/nebo po dalším dochucení samostatně konzumovatelný a/nebo využitelný jako dietní přídavek do dalších potravinářských výrobků. Při použití do mléčných kysaných výrobků se velmi výhodně spojí vynikající prebiotické, dietní a textumí vlastnosti produktu s probiotickými vlastnostmi mléčného výrobku. Výhodné je využití produktu jako textumího přídavku do pečivá.The product prepared according to the invention is useful as a dietary food supplement especially for patients with celiac disease and lactose intolerant consumers. It can be consumed and / or used as a dietary supplement to other food products without further processing and / or after further flavoring. When used in dairy fermented products, the excellent prebiotic, dietary and textural properties of the product are very advantageously combined with the probiotic properties of the dairy product. It is advantageous to use the product as a textile baking additive.
Claims (3)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CZ2016-404A CZ307473B6 (en) | 2016-07-01 | 2016-07-01 | A method of preparation of a powder, prebiotic, gluten-free and lactose-free product from waste fruit |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CZ2016-404A CZ307473B6 (en) | 2016-07-01 | 2016-07-01 | A method of preparation of a powder, prebiotic, gluten-free and lactose-free product from waste fruit |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ2016404A3 CZ2016404A3 (en) | 2018-01-10 |
CZ307473B6 true CZ307473B6 (en) | 2018-10-03 |
Family
ID=60937212
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ2016-404A CZ307473B6 (en) | 2016-07-01 | 2016-07-01 | A method of preparation of a powder, prebiotic, gluten-free and lactose-free product from waste fruit |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CZ (1) | CZ307473B6 (en) |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4056637A (en) * | 1976-06-08 | 1977-11-01 | Japan Natural Food Co. Ltd. | Process for preparing food products containing a lactic acid bacteria-fermented product of a cereal germ |
WO1989008405A1 (en) * | 1988-03-09 | 1989-09-21 | Nils Molin | Nutrient composition and method for the preparation thereof |
WO1991017672A1 (en) * | 1990-05-18 | 1991-11-28 | Hannu Salovaara | Food product containing dietary fiber and method of making said product |
EP0667106A1 (en) * | 1994-01-13 | 1995-08-16 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Acidic amylaceous fermented composition for reducing the fermented milk and/or fruit content in foodstuffs |
CZ22460U1 (en) * | 2011-05-05 | 2011-07-11 | Milcom A.S. | Rice dessert with probiotics |
-
2016
- 2016-07-01 CZ CZ2016-404A patent/CZ307473B6/en unknown
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4056637A (en) * | 1976-06-08 | 1977-11-01 | Japan Natural Food Co. Ltd. | Process for preparing food products containing a lactic acid bacteria-fermented product of a cereal germ |
WO1989008405A1 (en) * | 1988-03-09 | 1989-09-21 | Nils Molin | Nutrient composition and method for the preparation thereof |
WO1991017672A1 (en) * | 1990-05-18 | 1991-11-28 | Hannu Salovaara | Food product containing dietary fiber and method of making said product |
EP0667106A1 (en) * | 1994-01-13 | 1995-08-16 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Acidic amylaceous fermented composition for reducing the fermented milk and/or fruit content in foodstuffs |
CZ22460U1 (en) * | 2011-05-05 | 2011-07-11 | Milcom A.S. | Rice dessert with probiotics |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CZ2016404A3 (en) | 2018-01-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2017367535B2 (en) | A process and composition for an improved flour product | |
KR101386879B1 (en) | Method for producing a fermentation food using mixed lactic acid bacteria and a fermentation food | |
CN105274044A (en) | Inactivated lactic acid bacterium cell and application thereof to food | |
EP2615928B1 (en) | Method of production of fermented, pro-healthy, cereal beverages | |
CN103637314A (en) | Compound probiotic fermented fruit juice and preparation method thereof | |
CN104472883A (en) | Liquid biological feed additive | |
Ntsamo et al. | Effect of fermentation using Lactobacillus plantarum A6 on the physicochemical and functional properties of precooked Sorghum bicolor and Voandzeia subterranea blended flour | |
CN103932227B (en) | A kind of powdered egg chewable tablets and preparation method thereof | |
Olaniran et al. | Application and Acceptability of Microbiomes in the Production Process of Nigerian Indigenous Foods: Drive towards Responsible Production and Consumption | |
Basuny et al. | Enhancing The Nutritional Value and Chemical Composition of Functional Yogurt Drink by Adding Bee Honey and Spirulina Powder | |
Adeyemo et al. | Weaning food fortification and improvement of fermented cereal and legume by metabolic activities of probiotics Lactobacillus plantarum | |
Abdulkadir et al. | Microbial profile and nutritional quality during the fermentation of cereal based weaning food fortified with soya bean and tiger nut using starter culture | |
CN104223258A (en) | Compound probiotic fermented fruit juice and preparation method thereof | |
CZ307473B6 (en) | A method of preparation of a powder, prebiotic, gluten-free and lactose-free product from waste fruit | |
CN105309834A (en) | Waxberry slag feed for promoting fat metabolism of lobsters and preparation method thereof | |
CN110959758A (en) | Preparation method of vitamin premixed feed carrier/diluent leavening | |
CZ307474B6 (en) | A method of preparation of a probiotic product with a high portion of prebiotics on based on fruit materials | |
Tripathi et al. | Food processing by-products: Future for food applications | |
Samilyk | Scientific substantiation of the use of plant processing derivatives for enrichment of ferrous milk drinks | |
Dangang et al. | Effects of Lactococcus lactis sp. on nutritional value of formulated non-dairy complementary foods from Irish Potato, Mungbean, Red Kidney Bean and Papaya | |
KR101861624B1 (en) | Process for breeding striped ox | |
Kumar et al. | Probiotics and prebiotics from fruit waste | |
US20230210152A1 (en) | Method for obtaining antioxidants, diet fiber, and other nutrients from plant by-products | |
Bhalani et al. | Recent Insight Into Fermented Foods and Production | |
Wakil et al. | Quality assessment of starter-produced weaning food subjected to different temperatures and pH |