CZ20004868A3 - 2-(Purin-9-yl)-tetrahydrofuran-3,4-diolové deriváty, způsob jejich přípravy a fármaceutické prostředky, které je obsahují - Google Patents

Description

Oblast techniky

Vynález se týká skupiny nových chemických sloučenin, způsobu jejich výroby a farmaceutických prostředků s jejich obsahem a jejich použití v lékařství.

Dosavadní stav techniky

Zánět je primární reakce na poranění tkáně nebo mikrobiální invazi a je charakterizován adhezí leukocytů na endothel cév, výstupem krevních buněk neporušenou cévní stěnou a aktivací tkáně. Aktivace leukocytů může mít za následek vznik toxických sloučenin kyslíku (například superoxidového aniontu) a uvolnění granulovaných produktů, například peroxidáz a proteáz. Leukocyty v oběhu zahrnují neutrofily, eosinofily, basofily, monocyty a lymfocyty. U různých forem zánětu dochází k infiltraci různými typy leukocytů, zvláště v závislosti na adhezi molekuly, cytokinových a chemotaktických faktorech, k jejichž expresi ve tkáni dochází.

Primární funkcí leukocytů je bránit hostitele před invazí mikroorganismů, jako bakterií a parazitů. Při poranění nebo infekci tkáně dochází k řadě pochodů, v jejichž důsledku dojde k výstupu leukocytů z oběhu do napadené tkáně. Tímto způsobem je zajištěno zničení a fagocytóza cizorodých a mrtvých buněk a pak vstřebání zánětlivého infiltrátu a vyhojení tkáně. U chronických zánětů je však výstup leukocytů často neadekvátní, hojení není správně řízeno a zánětlivá reakce může způsobit destrukci tkáně.

Studie in vitro a in vivo prokazují, že látky s účinkem na receptor A2a adenosinu budou mít protizánětlivý účinek. Příslušné poznatky shrnul například Cronstein (1994). Pokusy na izolovaných neutrofilech prokázaly inhibici tvorby superoxidu, degranulace, shlukování a přilnutí ke stěnám podle (Cronstein a další, 1983 a 1985; Burkey a Webster, 1993; Richter, 1992; Skubitz a další, 1988). V případě použití látek se selektivitou pro receptory A2a spíše než A2b (například CGS21680), zdá se • · · · · · · • · · · · · 9 • · ···· · · ····· ······· « být profil inhibice v souladu s působením na receptor podtypu A2a (Dianzani a další, 1994). Adenosinové receptory mohou také regulovat snížení jiných tříd leukocytů (Elliot a Leonard, 1989; Peachell a další, 1989). Pokusy na zvířatech prokázaly, že protizánětlivý účinek methotrexatu je zprostředkován přes aktivaci adenosinu a A2 receptoru (Asako a další, 1993; Cronstein a další, 1993 a 1994). Adenosin jako takový a také látky, zvyšující jeho koncentraci v oběhu mají rovněž protizánětlivé účinky in vivo (Green a další, 1991; Rosengren a další, 1995). Zvýšená koncentrace adenosinu v krevním oběhu člověka (například při deficienci jeho deaminázy) vyvolává imunosupresivní účinek (Hirschorn, 1993).

Některé substituované 4'-karboxymido- a 4'-thioamidoadenosinové deriváty, použitelné k léčení zánětlivých onemocnění jsou popsány v mezinárodních patentových přihláškách WO 94/17090, WO 96/02553 a WO 96/02543 (Glaxo Group). Substituované 4-karboxamidadenosinové deriváty, které lze použít pro léčení demence byly popsány v AU 8771946 (Hoechst Japan). Substituované 4'hydroxymethyladenosinové deriváty, použitelné pro léčení poruch motility gastrointestinálního systému jsou uvedeny v EP-A-423776 a EP-A-423777 (Searle). Substituované 4'-hydroxymethyladenosinové deriváty, které je možno užít jako inhibitory shlukování krevních destiček jsou předmětem BE 768925 (Takeda). 4'Hydroxymethyladenosinové deriváty a jejich 4'-estery s antihypertensivním účinkem nebo s jiným účinkem na kardiovaskulární systém byly popsány v US 4663313, EP 139358 a US 4767747 (Warner Lambert), US 4985409 (Nippon Zoki) a US 5043325 (Whitby Research). 4-Hydroxymethyladenosinové deriváty pro použití k léčení autoimunních onemocnění jsou uvedeny v US 5106837 (Scripps Research Institute). 4'-Hydroxymethyladenosinové deriváty, jež lze použít jako antialergické látky byly popsány v US 4704381 (Boehringer Mannheim). Některé 4'tetrazolyalkyladenosinové deriváty pro léčení srdečních a oběhových onemocnění jsou obecně předmětem DT-A-2621470 (Pharma- Waldhof). Další 4'karboxamidoadenosinové deriváty, vhodné k léčení chorobných stavů srdeční a cévní soustavy byly popsány v US 5219840, GB 2203149 a GB 2199036 (Sandoz), WO 94/02497 (US Dept. Health), US 4968697 a EP 277917 (Ciba-Geigy), US 5424297 (Univ. Virginia) a EP 232813 (Warner Lambert). Další 4'karboxamidoadenosinové deriváty, které nejsou substituovány v poloze 2 purinového kruhu byly popsány v DT 2317770, DT 2213180, US 4167565, US 3864483 a US 3966917 (Abbott Labs), DT 2034785 (Boehringer Mannheim), JP 58174322 a JP 58167599 (Tanabe Seiyaku), WO 92/05177 a US 5364862 (Rhone Pouleno Rorer), EP 66918 (Procter and Gambie), WO 86/00310 (Nelson), EP 222330, US 4962194, WO 88/03147 a WO 88/03148 (Warner Lambert) a US 5219839, WO 95/18817 a WO 93/14102 (Lab UPSA). 4'-Hydroxymethyladenosinové deriváty bez substituce v poloze 2 purinového kruhu byly popsány také ve WO 95/11904 (Univ. Florida). 4'-Subsituované adenosinové deriváty pro použití jako inhibitory adenosinkinázyjsou popsány ve WO 94/18215 (Gensia). Další 4'-halogenmethylové, methylové, thioalkylmethylové nebo alkoxymethyladenosinové deriváty jsou předmětem EP 161128 a EP 181129 (Warner Lambert) a US 3983104 (Schering). Ještě další 4'karboxamidoadenosinové deriváty byly popsány v US 7577528 (NIH), WO 91/13082 (Whitby Research) a WO 95/02604 (US Dept. Health).

Některé déoxynukleotidy, obsahující tetrazolovou skupinu a prosté protiinfekční účinnosti byly uvedeny v publikaci Baker a další, 1974, Tetrahedron 30, 2939 - 2942. Jiné adenosinové deriváty s obsahem tetrazolové skupiny, účinné jako inhibitory shlukování krevních destiček byly popsány v publikaci Mester a Mester, 1972, Pathologie- Biologie, 20 (Suppl.), 11-14. Některé deriváty s obsahem nitrolových skupin byly popsány v publikaci Schmidt a další, 1974, Liebigs Ann. Chem. 18561863.

Další publikace zahrnují: WO 98/16539 (Novo Nordisk A/S), kde jsou popsány deriváty adenosinu pro léčbu myokardu a cerebrální ischémie a epilepsie; WO 98/01426 (Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals lne.), týkající se adenosinových derivátů vykazujících antihypertenzivní, kardioprotektivní a antiischémické a antilipolytické vlastnosti; a WO 98/01459 (Novo Nordisk), kde jsou popsány N,9substituované adeninové deriváty, které jsou substituované v poloze 4' nesubstituovaným oxazolylem nebo izoxazolylem a použití takových sloučenin pro léčbu chorob zahrnujících cytokiny u lidí. WO 98/28319 (Glaxo Group Limited) publikovaná po nejnovější prioritě této přihlášky popisuje 4'-substituované tetrazolové 2-(purin-9-yl)tetrahydrofuran-3,4-diolové deriváty.

Nyní byla zjištěna nová skupina sloučenin se širokým spektrem protizánětlivé účinnosti, která vyvolává inhibici aktivace leukocytů a jejich výstupu z cév a antagonizuje adenosinový receptor 2a. Tyto látky by tedy měly chránit proti poškození tkání leukocyty u onemocněních, při nichž dochází k nahromadění leukocytů v místě zánětu. Sloučeniny podle vynálezu mohou být bezpečnější alternativou k použití kortikosteroidů při léčení zánětlivých onemocnění vzhledem k tomu, že použití kortikosteroidů je často omezeno jejich vedlejšími účinky.

Sloučeniny podle vynálezu mohou mít zlepšený profil účinnosti vůči známým agonistům selektivním k A2a vzhledem k tomu, že obecně nemají agonistický účinek na receptor A3 u člověka. To je velmi výhodné, protože receptory A3 byly prokázány také na leukocytech (například eosinofilních) a dalších zánětlivých buňkách (například žírná buňka) a aktivace těchto receptorů tedy může podporovat zánět (Kohno a další, 1996; Van Schaick a další, 1996). Je dokonce pravděpodobné, že bronchokonstrikční účinky adenosinu u astmatiků mohou být vyvolány přes receptor A3 adenosinu (Kohno a další 1996).

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoří sloučeniny obecného vzorce I

kde R¹ a R² nezávisle znamenají některou z následujících skupin:

(i) C₃-8 cykioalkyl-, (ii) atom vodíku, iii) (aryl)2CHCH2-, iv) C₃-gcykloalkyl-Ci-8alkyl-

v) Ci-aalkyl-, vi) aryl-Ci-ealkyl-, vii) FÚF^NCvsalkyl-, viii) Ci^alkyl-CH(CH20H)-, ix) arylCi.₅alkyl-CH(CH₂OH)-,

x) arylCi-5alkyl-C(CH₂OH)₂-, xi) Ca-gcykloalkyl nezávisle substituovaný jednou nebo více (například 1, 2 nebo 3 ~(CH₂)_PR⁶ skupinami, xii) H₂NC(=NH)NHC₁.₆alkyl xiii) skupinu obecného vzorce

X (CH₂)_b ^Z nebo takovou skupinu, v níž jeden z uhlíkových atomů methylenové skupiny, sousedící s X nebo oba tyto atomy v případě, že je skupina obsahuje, jsou substituovány methylovým zbytkem, xiv) -C1-6 alkyl-OH, xv) -Ci-s haloalkyl, xvi) skupinu obecného vzorce

NR (xvii) aryl; a (xviii) -(CH₂)fSO₂NHg(Ci-₄alkyl)₂.g nebo -(CH₂)_fSO₂NHg(arylCi^alkyl)₂^;

R³ znamená methyl, ethyl, -CH=CH₂, n-propyl, -CH₂CH=CH₂, -CH=CHCH3, izopropyl, izopropenyl, cyklopropyl, cyklopropenyl, cyklopropylmethyl, cyklopropenylmethyl, cyklobutyl, cyklobutenyl, -(CH₂)_qhalogen, -(CH₂)hY(CH₂)jH, (CH₂)_hCOOCH₃, -(CH₂)hOCOCH₃, -(CH₂)_hCON(CH₂)_mH((CH₂)_nH), (CH₂)_hCO(CH₂)_oH nebo -CH₂C((CH₂)_UH)=NO(CH₂)_VH;

Y znamená O, S nebo N(CH₂)j;

a a b nezávisle znamenají celé číslo 0 až 4, s tím, že a + b je v rozsahu 3 až 5;

c, d a e nezávisle znamenají celé číslo 0 až 3, s tím, že c + d + e je v rozsahu 2 až 3;

f znamená 2 nebo 3 a g znamená celé číslo 0 až 2;

p znamená O nebo 1 ;

q znamená 2 nebo 3;

h znamená 2 nebo 3;

i znamená celé číslo 0 až 2, tak, že h + i je v rozsahu 2 až 4;

j znamená celé číslo 0 až 2, s tím, že h + i + j je v rozsahu 2 až 4;

man nezávisle znamenají celé číslo 0 až 2, tak, že m + n je v rozsahu 0 až 2; o znamená celé číslo 0 až 2, tak, že h + o je celé číslo 2 až 3;

u a v nezávisle znamenají 0 nebo 1, tak, že u + v je v rozsahu 0 až 1;

R⁴ a R⁵ nezávisle znamenají vodík, Ci^alkyl, aryl, arylCi.6alkyl- nebo NR⁴R⁵ společně může znamenat pyrrolidinylový, piperidinylový, morfolinylový, azetidinylový, azepinylový, piperazinylový nebo N-Ci-ealkylpiperazinylový zbytek. R⁶ znamená OH, NH₂, NHCOCH3 nebo halogen;

R⁷ znamená atom vodíku, Ci-ealkyl, C1 ^alkylaryl nebo -COC^alkyl;

X znamená NR⁷, O, S, SO nebo SO₂;

s tím, že když R³ znamená methyl, ethyl nebo izopropyl, pak R¹ a/nebo R² nezávisle musí znamenat:

(a) -(CH₂)_fSO₂NHg(C₁.₄alkyl-)₂^ nebo (CH₂)fSO₂NH_g(arylCi^alkyl-)₂-g kde f je 2 nebo 3 a g je celé číslo 0 až 2;

(b) C3-8cykloalkyl nezávisle substituovaný jednou nebo více skupin -(CH₂)_PNHCOCH₃;

(c) skupinu obecného vzorce

ncoch₃ nebo skupinu, kde jeden methylenový atom uhlíku sousedí s X nebo oba, pokud jsou přítomné, jsou substituované methylem;

(d) skupinu obecného vzorce

(CH₂)cCO(CH₂)d

NCOCH₃ (CH₂)e a jejich soli a solváty.

4 4 ·· 4444·«· ··

4 4 4 4 44

44 4 44444

Ci-6alkyI znamená alifatický uhlovodíkový zbytek s přímým nebo rozvětveným řetězcem, nasycený nebo nenasycený a obsahující 1 až 6 atomů uhlíku. Obdobným způsobem jsou uváděny Ci.4alkyl, C-i-salkyl, C2-4alkyl a Ci^alkyl.

Aryl znamená mono- a bicyklické aromatické kruhy, jako fenyl nebo naftyl a také heterocyklické aromatické kruhy, obsahující 1 až 3 heteroatomy ze skupiny N, O a S, například pyridinyl, pyrimidinyl, imidazolyl, thiofenyl, chinolinyl, furanyl, pyrrolyl, oxazolyl, popřípadě substituované například substituenty ze skupiny Ci_₆alkyl, atom halogenu, hydroxyskupina, nitroskupina, Ci.₆alkoxyskupina, kyanoskupina, aminoskupina, SO2NH2 nebo -CH2OH.

Příkladem C3-8cykloalkylových skupin ve významu R¹ a R² mohou být monocyklické cykloalkylové zbytky, jako cyklopentyl nebo cyklohexyl a bicyklické alkylové skupiny, například norbornyl jako exo-norborn-2-yl.

Ze skupin (aryl)2CHCH2- ve významu R¹ a R² lze uvést skupinu Pi^CHChfe- nebo skupinu, v níž jsou jeden nebo oba fenylové zbytky popřípadě substituovány, například atomem halogenu nebo alkylovým zbytkem o 1 až 4 atomech uhlíku. Příkladem C3-8cykloalkylCi-6alkylových skupin ve významu R¹ a R² může být ethylcyklohexyl.

Jako příklad Ci-salkylového zbytku ve významu R¹ a R² je možno uvést skupiny -(CH₂)2C(Me)₃, -H(Et)₂ a CH₂=C(Me)CH₂CH2-.

Z arylCi-6alkylových skupin ve významu R¹ a R² lze uvést skupiny -(CFUhPh, -ChhPh, v nichž je kterýkoliv zbytek Ph substituován alespoň jedním atomem halogenu, například jodu, aminoskupinou, methoxyskupinou^ hydroxyskupinou, -CH2OH nebo SO2NH2, dále skupiny -(Chhhpyridinyl, například -(CH2)2-pyridin-2-yl, popřípadě substituovaný aminoskupinou, -(Chfek-imidazolyl, popřípadě Nsubstituovaný Ci-ealkylovým zbytkem, zvláště methylovým zbytkem.

Jako příklad skupiny R⁴R⁵N-Ci-6alkyl ve významu R¹ a R²je možno uvést ethylpiperidin-1 -yl, ethylpyrrolidin-1 -yl, ethylmorfolin-1 -yl, -(CH2)2HN(pyridin-2-yl) a -(CH₂)2NH₂.

Příkladem skupiny Ci-6alkyl-CH(CH2OH)-ve významu R¹ a R²je například Me₂CHCH(CH₂OH)-.

Skupiny arylCi^alkyl-CH(CH2OH)- ve významu R¹ a R² zahrnují skupinu PhCH2CH(CH2OH)- a zvláště skupinu vzorce • · · · ·

Jako příklad skupiny arylCi.₅alkyl-C(CH2OH)₂ ve významu R¹ a R² lze uvést skupinu PhCH₂C(CH₂OH)₂-.

Příkladem C₃-ecykloalkylových skupin, nezávisle substituovaných jednou nebo větším počtem (1, 2 nebo 3) skupin -(CH₂)_PR⁶ ve významu R¹ a R² je například možno uvést 2-hydroxycyklopentyl a 4-aminocyklohexyl, zvláště trans-4-aminocyklohexyl.

Příkladem skupiny H₂NC(=NH)NHCi-6alkyl ve významu R¹ a R²je skupina H₂NC(=NH)NH(CH₂)₂-.

Jako příklad skupin vzorce

(0Η2)3χ ---\ X (CH2)b Z

ve významu R¹ a R² lze uvést pyrrolidin-3-yl, piperidin-3-yl, piperidin-4-yl nebo deriváty těchto skupin, v nichž atom dusíku v kruhu je substituován Ci-6alkylovým zbytkem, jako methylovým zbytkem nebo benzylovým zbytkem, tetrahydro-1,1 dioxidthiofen-3-yl, tetrahydropyran-4-yl, tetrahydrothiopyran-4-yl a 1,1dioxohexahydro-1. lambda.6. thiopyran-4-yl.

Skupiny -Ci-6alkyl-OH ve významu R¹ a R² zahrnují například skupinu -CH2CH2OH. Cvshalogenalkylové skupiny ve významu R¹ a R² jsou například skupiny -CH2CH₂CI a (CH₃)2CIC(CH₂)₃-.

Jako příklad skupin obecného vzorce (CH₂)_cCO(CH₂) . NR⁷ ^(CH₂)_e/ ve významu R¹ a R² lze uvést 2-oxopyrrolidin-4-yl, 2-oxopyrrolidin-5-yl nebo deriváty, v nichž je atom dusíku v kruhu substituován Ci_6 alkylovým nebo benzylovým zbytkem.

Jako příklad arylové skupiny ve významu R¹ a R² lze uvést fenyl, popřípadě substituovaný atomem halogenu, například fluoru, zvláště v poloze 4.

Ve významu R⁷ může být příkladem Ci^alkylového zbytku methyl a příkladem Ci. ₆alkylarylového zbytku benzyl. Příkladem COCi.₆alkylového zbytku ve významu R⁷ je -COCH3.

Příkladem C1-5 alkylového zbytku ve významu R³ je n-propyl nebo allyl. Příkladem C34cykloalkylového zbytku ve významu R³ je cyklobutyl. Příkladem -(CH2)hO(CH2)iH ve významu R³ je ~(CH2)₂OMe. Příkladem C₂-4alkylového zbytku substituovaného halogenem nebo hydroxy je -(CH₂)₂CI, -(CH₂)2OH a -(CH₂)3OH.

Výhodně neznamenají oba R¹ a R² vodík.

Výhodně R¹ znamená aryl2CHCH2-, Ci^alkyl, vodík nebo arylCi.6alkylZvlášť výhodně R¹ znamená Ph2CHCH2-, -CH(Et)₂₁ vodík nebo fenylethyl-, zejména Ph₂CHCH₂-.

Výhodně R² znamená R⁴R⁵N-Ci-6alkyl- arylCi-ealkyl-, arylCi-5alkylCH(CH₂OH)-, arylCi-salkyl nebo Ci.6alky[-CH(CH₂OH)-.

Zvlášť výhodně R² znamená (CH₂)2(piperidin-1-yl), 2-(1-methyl-1H-imidazol-4yl)ethyl, 1S-hydroxymethyl-2-fenylethyl, fenylethyl nebo 1 S-hydroxymethyl-2methylpropyl, zejména -(CH₂)₂(piperidin-1-yl).

Výhodně R³ znamená Ci-3alkyl (včetně n-propyl a 2-propenyl), cyklobutyl, cyklopropylmethyl, -(CH2)2OCOCH3, -(CH2)2.30H nebo -(CH2)2halogen. Výhodněji R³ znamená n-propyl, 2-propenyl, cyklobutyl, cyklopropylmethyl, -(CH2)₂OCOCH3 nebo -(CH₂)₂.₃OH.

Zvlášť výhodně R³ znamená -(CH₂)₂OCOCH3, -(CH₂)₂OH nebo (CH₂)3OH, zejména -(CH₂)₂OCOCH₃ nebo -(ChkkOH, obzvláště -(CH₂)2OH.

Výhodně R⁴ a R⁵ nezávisle znamenají vodík, Ci-4alkyl nebo aryl nebo NR⁴R⁵ spolu znamenají pyrrolidinyl, piperidinyl, morfolinyl, azetidinyl, azepinyl, piperazinyl nebo Nmethylpiperazinyl;

Výhodně X znamená NR⁷, O, S nebo SO2, zejména NR⁷ nebo SO2, obzvláště NR⁷.

Výhodně a a b oba znamenají 2 nebo a znamená 1 a b znamená 2.

Výhodně R⁷ znamená vodík.

Výhodně p znamená 0. Výhodně q znamená 2. Výhodně h znamená 2. Výhodně i znamená 0 nebo 1, zejména 0. Výhodně j znamená 1. Výhodně man znamenají 0 nebo 1. Výhodně o znamená 1. Výhodně u a v znamenají 0.

Výhodně R⁶ znamená OH nebo NH2, zejména NH2.

Výhodně c znamená 0 a d znamená buď 2 a e znamená 0 nebo d znamená 1 a e znamená 1.

V obecném vzorci I jsou znázorněny absolutní stereochemické konfigurace v oblasti tetrahydrofuranového kruhu. V případě, že postranní řetězce obsahují středy chirality, zahrnují tyto látky také směsi enantiomerů včetně racemických směsí, diastereoizomerů i jednotlivé enantiomery. Obecně je výhodné použití sloučenin obecného vzorce I ve formě jediného čištěného enantiomerů.

Vynález také poskytuje způsob přípravy sloučenin obecného vzorce í, který zahrnuje:

(a) reakci sloučeniny obecného vzorce II

kde L znamená odštěpitelnou skupinu nebo její chráněný derivát, se sloučeninou R²NH₂ nebo jejím chráněným derivátem,

b) přípravu sloučeniny vzorce I, v němž R¹ znamená atom vodíku redukcí sloučeniny obecného vzorce III ,3

o (III)

44 4 ··4

4 4 4 4 · 4· 4

4 4 4 * 9 · ··

44 4 « 4444444 44

4 4 4 4 44

44 4 44444 nebo jejího chráněného derivátu, nebo

c) odstranění chránící skupiny u sloučeniny vzorce I, která je chráněna, načež se popřípadě, kde to je žádoucí, převede sloučenina obecného vzorce I nebo její sůl na jinou sůl.

Při provádění postupu a) znamená L atom halogenu, například chloru nebo fluoru. Reakce podle postupu a) se obvykle provádí zahřátím reakčních složek na teplotu 50 až 150 °C v přítomnosti rozpouštědla, například DMSO. S výhodou obsahuje reakční směs organickou bázi, například trisubstituovaný organický amin, jako diizopropylethylamin. Za těchto podmínek je zvláště výhodným významem pro Hal atom fluoru (zvláště v případě, že R¹ znamená atom vodíku), protože v tomto případě reakce probíhá rychle a účinně.

Postup b) je možno uskutečnit katalytickou hydrogenací, například při použití Pd na aktivním uhlí obvyklým způsobem.

Při provádění postupu c) je možno příklady ochranných skupin a způsob jejich odstranění nalézt v publikaci T.W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, J. Wiley and Sons, 1991. Vhodnými ochrannými skupinami na hydroxyskupině jsou například alkyl, jako methyl, acetalové skupiny, jako acetonid a acylové skupiny, jako acetyl nebo benzoyl. Tyto skupiny lze odstranit hydrolýzou. Další vhodnou skupinou je arylalkyl (například benzyl), odstranitelný katalytickou hydrogenolýzou. Vhodnými ochrannými skupinami na aminoskupině jsou například sulfonyl, jako tosyl, acyl, jako benzyloxykarbonyl nebo terč, butoxykarbonyl a arylalkyl, jako benzyl, tyto skupiny je rovněž možno odstranit hydrolýzou nebo hydrogenolýzou.

Vhodnými solemi sloučenin obecného vzorce I jsou například fysiologicky přijatelné soli, jako adiční soli s kyselinami, odvozené od anorganických i organických kyselin, například hydrochloridy, hydrobromidy, 1-hydroxy-2-naftoáty, mesyláty, sulfáty, fosfáty, acetáty, benzoáty, citráty, jantarany, mléčnany, vinany, fumaráty a maleáty, může také jít o soli s anorganickými bázemi, například o sodné soli. Ty soli, které nejsou fysiologicky přijatelné, je možno použít k přípravě sloučenin vzorce I a jejich ·· · fysíologicky přijatelných solí. Jako příklady těchto solí je možno uvést trifluoracetáty a mravenčany.

Příkladem vhodných solvátů sloučenin obecného vzorce I mohou být jejich hydráty.

Adični soli uvedených látek s kyselinami je možno připravit tak, že se na volnou látku vzorce I působí příslušnou kyselinou.

Sloučeniny obecného vzorce II nebo jejich chráněné deriváty je možno připravit tak, že se nechá reagovat sloučenina obecného vzorce IV

nebo její chráněný derivát se sloučeninou vzorce R¹NH2. L¹ a L² nezávisle znamenají odštěpující se skupinu, jako atomy halogenu, jako chloru nebo fluoru. Tato reakce se s výhodou provádí v přítomnosti báze, například organického aminu, jako diizopropylethylaminu v rozpouštědle, například alkoholu jako izopropanolu při vyšší teplotě, například za varu pod zpětným chladičem.

Sloučeniny vzorce III a jejich chráněné deriváty lze připravit reakcí sloučenin vzorce

IIIA

O (IIIA) • · · • ·

kde L znamená odštěpitelnou skupinu, jako halogenu, například chloru nebo fluoru, nebo chráněného derivátu této látky se sloučeninou vzorce R²NH₂ za obvyklých podmínek.

Sloučeniny obecného vzorce IIIA nebo jejich chráněné deriváty je možno připravit reakcí sloučeniny vzorce IV nebo jejího chráněného derivátu s azidem, například azidem sodným za obvyklých podmínek.

Sloučeniny vzorce IV nebo jejich chráněné deriváty je možno připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce V

kde L znamená odštěpitelnou skupinu, nebo reakcí chráněného derivátu této látky s 2,6-dihalogenpurinem, například 2,6dichlorpurinem.

Výhodné je použití sloučeniny vzorce V, v níž ve zbytku ribózy jsou hydroxylové skupiny v polohách 2 a 3 chráněny, například acetylovou skupinou. Odštěpitelná skupina L může být hydroxyskupina, s výhodou však jde o C-|.₆alkoxyskupinu, jako methoxyskupinu nebo ethoxyskupinu, esterovou část, například acetyloxy nebo benzyloxyskupinu, nebo o atom halogenu. Výhodnou skupinou L je acetoxyskupina. Reakce se provádí v inertním rozpouštědle, jako MeCN v přítomnosti Lewisovy kyseliny, jako TMSOTf a DBU při 70-80 °C.

Sloučeniny obecného vzorce V je možno připravit ze sloučenin obecného vzorce VI N = N , ' \

R —.C> .Oalk (VI) • ·♦ kde alk znamená Ci-6alkyl, například methyl, tak, že se na sloučeninu vzorce VI působí kyselinou trifluoroctovou ve vodě s následným opětným zavedením ochranných skupin, například reakcí s anhydridem kyseliny octové v pyridinu.

Sloučeniny obecného vzorce V, v nichž L znamená atom halogenu je možno připravit z odpovídajících 1 '-alkoholů nebo 1 '-esterů, například z acetátu. Reakce se obvykle provádí působením bezvodé HCI nebo HBr. 1 '-jodidy je možno připravit přímo působením trimethylsilyljodidu a 1 '-fluoridy je možno připravit působením DAST. Obvykle se užije inertní rozpouštědlo, jako diethylether, DCM, THF nebo CCI4.

Sloučeninu vzorce VI je možno připravit podle následujícího reakčního schématu 1:

Schéma 1

Stupeň 1 MeOH, aceton

D-Ribóza

HCI

>

Obecné podmínky pro stupně 1 až 6 tohoto schématu jsou odborníkům známé. Je také zřejmé, že podmínky a reakční činidla, byly uvedeny pouze jako příklad a odborník snadno zvolí jinou kombinaci k dosažení téhož výsledku. Například ve • · φ ·· Φ· · Φ· φφφφ φφφ * φ φ φ φφφφ φφ φ «φφφφ φ «φφφ φ φ φ φ φ φφφ φ φ ·«· φφ φφ φ φφ stupni 1 je možno užít jiný alkohol, jako Ci-ealkylalkohol k zavedení odlišné odštěpitelné C1.6 alkyloxyskupiny ve sloučeninách VII a VI. Stupeň 1 může být také modifikován náhradou HCI kyselinou chloristou (HCIO4) a 2,2 dimethoxypropanem nebo alternativně acetylchloridem (který má výhodu, že udržuje vysoký výtěžek a nevyžaduje použít chloristanové soli). Alternativní podmínky se mohou použít ve stupni 3, kdy se může využít ethylacetát, thionylchlorid a plynný amoniak (který má výhodu, spočívající v tom, že se nemusí použít chlorované rozpouštědlo a vzniku nečistoty pivaloátu amonného). Stupeň 4 se může provést za použití POCI3, TEA, DMF a ethylacetátu (což umožňuje nepoužívat nebezpečný DMAP). V případě, že ve sloučeninách vzorce VII je vhodná jiná odštěpitelné skupina než OMe, je tuto látku možno získat analogicky postupem, popsaným pro výrobu sloučeniny vzorce V.

Ve stupni 1 je také možno použít jiné ochranné skupiny pro hydroxyskupiny v polohách 2 a 3 zbytku ribózy. Bylo rovněž prokázáno, že stupeň 5 se snadno provádí při použití azidotrimethylsilanu a dibutylcínoxidu v toluenu.

Po ukončení stupně 6 je možno výsledný surový produkt čistit běžným způsobem, zváště rychlou chromatografií pod dusíkem. Dobrých výsledků je možno dosáhnout tak, že se surový produkt nanese v co nejmenším objemu dichlormethanu na sloupec Kieselgel 60 (Měrek 9385) a k eluci se užije gradient 10% až 40% ethylacetátu v cyklohexanu.

Sloučeniny vzorce II a jejich chráněné deriváty je rovněž možno připravit reakcí sloučeniny vzorce V nebo jejího chráněného derivátu se sloučeninou obecného vzorce Vlil

kde L znamená odštěpitelnou skupinu, jako atom halogenu, například chloru nebo fluoru, načež se popřípadě odstraní ochranné skupiny, které se pak popřípadě znovu zavedou.

ft 9 • · C » » · · 9 ·♦· ·«· « · · 9 9 99 ₅x · 999 « · · ···♦ · · ♦·

Ιο · ·····*· ··· ·· ·· 9 99999

Výhodné je použití sloučenin obecného vzorce V v chráněné formě. Zejména výhodně má být alespoň hydroxyskupina v poloze 2 zbytku ribózy chráněna ve formě esterové skupiny, například navázáním acetylové nebo benzoylové skupiny vzhledem k tomu, že tímto způsobem lze dosáhnout vyšší sťereoselektivity reakce. Velmi výhodné je chránit hydroxylové skupiny v polohách 2 i 3 pomocí acetylové skupiny. Vhodné odštěpitelné skupiny ve významu L byly popsány svrchu. Výhodnou skupinou L je zejména acetyloxyskupina.

Tento postup je zvláště výhodný v případě, že L znamená atom fluoru (a zejména v případě, že dále R¹ znamená atom vodíku) vzhledem k tomu, že reakce je rychlá a účinná a obvykle se získá vysoce krystalický produkt.

Produkt této reakce je také možno zbavit ochranných skupin běžným způsobem, například působením alkoholu, jako izopropanolu v mírně bazickém prostředí, například v přítomnosti uhličitanu draselného.

Reakci sloučeniny obecného vzorce V (v chráněné formě) a sloučeniny vzorce Vlil je možno uskutečnit v přítomnosti Lewisovy kyseliny (například TMSOTf) a popřípadě silylačního činidla, jako BSA v intertním rozpouštědle, například acetonitrilu s následným zpracováním směsi s použitím vody. V případě, že L znamená atom halogenu, je při použití silylačního činidla obvykle možno Lewisovu kyselinu vynechat.

Některé sloučeniny vzorce Vlil jsou známé látky. Další sloučeniny vzorce Vlil je možno připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce IX

kde L¹ a L² nezávisle znamenají odštěpitelnou skupinu, jako atomy halogenu, například fluoru nebo chloru, se sloučeninou R¹NH₂, za obvyklých podmínek.

·· t · w · • 0 0 ♦ · • ···» 0 · 0

0 0 0 ··· > ·

Sloučeniny obecného vzorce R¹NH₂, R²NH2 a IX jsou známé nebo se mohou připravit jako takové známými postupy.

Dalším aspektem předkládaného vynálezu je nový postup, který poskytnou sloučeniny obecného vzorce I bez podmínek.

Tak postup přípravy sloučeniny obecného vzorce I bez podmínek zahrnuje

d) reakci odpovídající sloučeniny obecného vzorce X nhr'

HN ý 'N ho

OH se sloučeninou obecného vzorce XI

R³-L (XI) kde L je odštěpitelná skupina; nebo

e) reakci odpovídající sloučeniny obecného vzorce XII

NHR

se sloučeninou obecného vzorce V nebo jejím chráněným derivátem.

Postup (d) se obvykle provede spojením dvou reakčních složek v přítomnosti slabé báze, například K2CO3 a v inertním organickém rozpouštědle, například DMF. Typická odštěpitelná skupina L je halogen (například Br).

• · · ······ • · · · · · ··· ····· ······· ··

9 9 9 9 99 • · ·· 9 99 999

Postup (e) se výhodně bude provádět v přítomnosti Lewisovy kaseliny (například TMSOTf) a případně silylačního činidla (například BSA) v inertním rozpouštědle, jako je MeCN a následně zpracováním s vodou. Výhodně L znamená acetyloxy a dvě hydroxyskupiny mohou být chráněny jako acetylový ester. Deprotekční stupeň (za použití slabé báze, například K2CO3) bude potom nezbytný ke generování sloučeniny obecného vzorce I.

Sloučeniny obecného vzorce X se mohou připravit analogickými způsoby ke způsobům popsaným shora pro přípravu sloučenin obecného vzorce I. Jestliže jsou sloučeniny obecného vzorce X připraveny přes analogy sloučenin obecných vzorců II, III, IIIA a/nebo IV kde R³ se nahradí vodíkem, takové sloučeniny jsou výhodně chráněny v poloze N2 tetrazolu. Vhodná chránící skupina je benzyl, který může být zaveden tak, že se na nechráněný tetrazol působí benzylhalogenidem, například benzylbromidem, v přítomnosti slabé báze (například K2CO3). Ilustrativní způsob přípravy sloučenin obecného vzorce X je uveden ve schématu 2:

• * • ·

Schéma 2

N-N N ‘ň	o	BnBr, KjCOj iOMe DMF
(Vil)	X

(Vil)’

1. TFA. H₂0

2. Ac₂O, EtN₃

2,6-dichloropurin TMSOTf, DBU MeCN

R²NH₂ -90* C, DMSO

BnN.

N

AcO~ OAc (XIII)

Y

Sloučeniny obecného vzorce XI jsou známé nebo se mohou připravit známými způsoby.

Sloučeniny obecného vzorce XII se mohou připravit například podle schématu 3:

Schéma 3 •· · • · ·· • ·· • · ·· · • · • · ·· ·

Sloučenina z literatury

POCI₃, N,N-dimethylanilin, MeCN, reflux

(XII) • · · • · · ·

Postupy (d) a (e)jsou zvlášť vhodné pro přípravu sloučeniny (2R,3R,4S,5R)-2-[6amíno-2-(1S-hydroxymethyl-2-fenylethylamino)punn-9-yl]-5-(2-ethyl-2H-tetrazol-5yl)tetrahydrofuran-3,4-diolu a jejích solí a solvátů, zejména maleátové soli.

Výhodný postup je (e).

Účinnost sloučenin obecného vzorce I vyvolat inhibici leukemie je možno prokázat například jejich schopností zabránit vzniku superoxidu (02') z neutrofilů, stimulovaných chemickými látkami, které neutrofily přitahují, například N-formylmethionylleucylfenylalaninem (fMLP). Sloučeniny podle vynálezu na základě výsledků těchto zkoušek chrání tkáně před poškozením leukocyty při těch onemocněních, při nichž se leukocyty účastní v místě zánětu.

Jako příklady chorobných stavů, při nichž je možno očekávat při podání sloučenin podle vynálezu příznivý protizánětlivý účinek je možno uvést onemocnění dýchacích cest, jako syndrom nedostatečnosti dýchacího systému u dospělých (ARDS), zánět průdušek včetně chronického zánětu, cystickou fibrózu, astma (včetně astmatických • · · • ·· · · reakcí, vyvolaných alergeny), chronická obstruktivní onemocnění plic (COPD), emfyzém, rýmu, a septický šok. Další chorobné stavy, které lze uvedenými látkami zlepšit zahrnují choroby zažívací soustavy, jako jsou zánětlivá onemocnění včetně dráždivého tračníku (Crohnova nemoc nebo ulcerativní colitis), gastritis, vyvolaná Helicobacter pylori a sekundární zánětlivá onemocnění střev po ozáření nebo působení alergenu a také gastropathie, vyvolané nesteroidními protizánětlivými látkami. Mimoto je sloučeniny podle vynálezu možno použít k léčení kožních onemocnění jako jsou lupenka, alergická dermatitis a přecitlivělost a k onemocnění centrálního nervového systému se zánětlivou složkou, jako jsou Alzheimerova nemoc a roztroušená sklerosa.

Dalšími chorobami na něž mohou mít sloučeniny podle vynálezu příznivý vliv jsou choroby oběhového systému, jako choroby periferních cév, postischemické poškození po reperfuzi a idiopathický hypereosinofilický syndrom.

Sloučeniny podle vynálezu, které vyvolávají inhibici funkce leukocytů mohou být vhodné také jako imunosupresivní prostředky při autoimunitních onemocněních, jako jsou rheumatoidní arthritis a cukrovka.

Mimoto mohou sloučeniny podle vynálezu být použity k inhibici tvorby metastáz.

Onemocněními zásadního významu jsou astma a COPD.

Je zřejmé, že v případě, že se uvádí léčení, může jít jak o léčení již vyvinuté choroby, tak o prevenci.

Jak již bylo uvedeno, je možno sloučeniny obecného vzorce I použít v lidském nebo veterinárním lékařství, zvláště jako protizánětlivé látky.

Součást podstaty vynálezu proto tvoří rovněž uvedené sloučeniny a jejich fyziologicky přijatelné soli nebo solváty pro použití v lidském nebo veterinárním lékařství, zvláště při léčení nemocných se zánětlivými chorobami, při nichž dochází k poškození tkání působením leukocytů.

♦ ·· ·· · ·· ···· ··· ···

Podle dalšího aspektu , předkládaný vynález poskytuje použití sloučeniny obecného vzorce I nebo její fyziologicky přijatelné soli nebo solvátu pro výrobu farmaceutických prostředků, určených pro léčení zánětlivých onemocnění, při nichž dochází k poškození tkání působením leukocytů.

Dalším nebo alternativním aspektem předkládaného vynálezu je metoda ošetření lidského nebo zvířecího subjektu se zánětlivým stavem, při kterém dochází k poškození tkání působením leukocytů, kde metoda zahrnuje podání uvedenému lidskému nebo zvířecímu subjektu účinného množství sloučeniny obecného vzorce I nebo její fyziologicky přijatelné soli nebo solvátu.

Sloučeniny podle vynálezu je možno na takové prostředky zpracovávat běžným způsobem. Součást podstaty vynálezu tvoří rovněž farmaceutický prostředek s protizánětlivým účinkem, obsahující jako svou účinnou složku sloučeniny obecného vzorce I nebo jejich fysiologicky přijatelné soli nebo solváty spolu s fysiologicky přijatelnými ředidly nebo nosiči.

Vynález také poskytuje způsob přípravy takové farmaceutické formulace, který zahrnuje smísení složek.

Sloučeniny podle vynálezu je možno například zpracovat na prostředky, určené pro perorální, bukální, parenterálni, místní nebo rektální podání, výhodné je parenterálni nebo místní podání, například ve formě aerosolu.

Tablety a kapsle pro perorální podání mohou obsahovat běžné pomocné látky, jako jsou pojivá, například sirup, akacie, želatina, sorbitol, tragakanth, povařený škrob, celulóza nebo polyvinylpyrrolidon; plniva, jako jsou laktóza, mikrokrystalická celulóza, cukry, kukuřičný škrob, fosforečnan vápenatý nebo sorbitol; kluzné látky, jako jsou stearát hořečnatý, kyselina stearová, mastek, polyethylenglykol nebo oxid křemičitý; desintegrační činidla, jako bramborový škrob, sodná sůl zesítěné karmelózy nebo sodná sůl glykolátu škrobu nebo smáčedla, například laurylsíran sodný. Tablety mohou být povlékány obvyklým způsobem. Kapalné prostředky pro perorální podání mohou mít například formu suspenzí, roztoků nebo emulsí ve vodě nebo v oleji, sirupů nebo elixírů, nebo mohou být dodávány jako suché produkty, určené pro rekonstituci ve vodě nebo jiném nosném prostředí těsně před podáním. Tyto kapalné prostředky mohou obsahovat pomocné složky obvyklého typu, jako jsou sorbitolový sirup, methylcelulóza, glukózový sirup, želatina, hydroxymethylcelulóza, karboxymethylcelulóza, gel stearátu hlinitého nebo hydrogenované jedlé oleje; emulgační činidla, jako lecithin, sorbitanmonooleát nebo akácie, nosná prostředí nevodné povahy, včetně jedlých olejů, jako jsou mandlový olej, frakcionovaný kokosový olej, estery typu olejů, propylenglykol nebo ethylalkohol a konzervační činidla, jako jsou methyl- nebo propylhydroxy- benzoát nebo kyselina sorbová. Tyto prostředky mohou obsahovat také pufry, chuťové látky, barviva a/nebo sladidla, např. mannitol podle potřeby.

Pro bukální podání mohou prostředky mít formu tablet nebo kosočtverečných tablet.

Sloučeniny mohou také být zpracovány na čípky, obsahující běžné báze pro výrobu čípků, například kakaové máslo nebo jiné glyceridy.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být také zpracovány na prostředky, určené pro parenterální podání jednorázovou injekcí nebo kontinuální infuzí a mohou být dodávány ve formě s obsahem jedné nebo většího počtu dávek, například ve formě ampulí, lékovek, infuzí s malým objemem nebo předem naplněných injekčních stříkaček. Tyto prostředky mohou mít formu roztoků, suspenzí nebo emulzí ve vodném nebo nevodném nosném prostředí a mohou obsahovat pomocné látky, jako antioxidační činidla, pufry, antimikrobiální látky a/nebo látky pro úpravu osmotického tlaku. Účinnou složku je také možno dodávat ve formě prášku, určeného ke smísení s vhodným prostředím, například sterilní bezpyrogenní vodou těsně před použitím. V tomto případě se suchý prášek ukládá přímo do lékovek nebo je možno lékovky asepticky naplnit sterilním roztokem s následnou lyofilizací.

Při místním podání je zahrnuto také podání inhalací nebo insuflací. Jinak je jako příklady prostředků pro místní podání možno uvést masti, krémy, lotiony, prášky, pesary, spreje, aerosoly, kapsle nebo zásobníky pro použití v inhalačních nebo insuflačních přístrojích, roztoky, určené k rozprašování nebo kapky (např. oční nebo nosní kapky).

4 4 4 44 *······ ·φ

4···4··

44444 44 Φ φφ ΦΦΦ

Masti nebo krémy mohou být například zpracovány při použití vodné nebo olejové báze s přidáním vhodného zahušťovacího činidla a/nebo gelujícího činidla a/nebo rozpouštědla. Tyto báze mohou obsahovat vodu a/nebo olej, jako kapalný parafin nebo rostlinné oleje, například arašídový olej nebo ricinový olej nebo rozpouštědlo, jako polyethylenglykol. Použitým zahušťovadlem může být měkký parafin, stearan hlinitý, cetostearylalkohol, polyethylenglykoly, mikrokrys- talický vosk a včelí vosk.

Lotiony mohou být vyrobeny s použitím vodné nebo olejové baze a obvykle budou obsahovat emulgační činidla, stabilizátory, dispergační činidla, suspenzní činidla a zahušťovadla.

Prášky pro zevní podání se připravují s použitím vhodného práškového základu, jako je mastek, laktóza nebo škrob. Kapky mohou být připraveny ve vodném nebo nevodném prostředí a mohou obsahovat dispergační, solubilizační nebo suspenzní činidla.

Prostředky, určené k rozprašování, mohou být například vodné roztoky nebo suspenze nebo mohou být jako aerosoly aplikovány z tlakových balení, obsahujících hnací plyn, například dichlordifluormethan, trichlorfluormethan, dichlotetrafluorethan,

1,1,1,2,3,3,3-heptafluorpropan, 1,1,1,2-tetrafluorethan, oxid uhličitý nebo jiný vhodný plyn.

Prostředky pro vstřikování do nosu mohou být získány s použitím vodného nebo nevodného prostředí a pomocných látek, jako jsou zahušťovadla, pufry, kyseliny nebo baze k úpravě pH, látky pro úpravu osmotického tlaku a antioxadační činidla.

Kapsle a zásobníky, například ze želatiny, nebo blistry, například z hliníkové folie pro použití v inhalačních nebo insuflačních přístrojích mohou obsahovat práškovou směs sloučeniny podle vynálezu a vhodného práškového nosiče, například laktózy nebo škrobu.

Roztoky pro inhalaci rozprašováním mohou být vytvořeny s použitím vodného nosného prostředí s přidáním různých pomocných látek, jako kyselin nebo bází, • 0 ···· · 0 00···

000 0 0 0 0 000 « 00000 0000000 00

0«·· 0 «·

000 00 00 0 00 000 pufrů, látek pro úpravu osmotického tlaku nebo antimikrobiálních látek. Prostředky mohou být sterilizovány filtrací nebo zahříváním v autoklávu nebo může jít o nesterilní výrobky.

Farmaceutické prostředky podle vynálezu mohou být užity také společně s jinými látkami s léčebným účinkem, například s protizánětlivými látkami, jako jsou kortikosteroidy, například fluticasonpropionát, beclomethason dipropionát, mometasonfuroát, triamcinolonacetonid nebo budesonid, nebo s látkami typu NSAID, jako je cromoglykát sodný, nebo s beta-adrenergními látkami, jako je salmeterol, salbutamol, formoterol, fenoterol nebo terbutalin a jejich soli nebo s protiinfekčními látkami, jako jsou antibiotika nebo protivirové látky.

Vynález tak poskytuje další aspekt, obsahující kombinaci sloučeniny obecného vzorce I nebo její fyziologicky přijatelné soli nebo solvátu, společně s dalším terapeuticky aktivním činidlem, například protizánětlivé činidlo jako je kortikosteroid nebo NSAID.

Shora uvedená kombinace může být konvenčně ve formě farmaceutické formulace a tyto farmaceutické formulace, zahrnující kombinaci jak je definována shora, společně s fyziologicky přijatelným nosičem zahrnuje další aspekt předkládaného vynálezu.

Individuální složky takových kombinací mohou být podávány následně nebo současně v oddělených nebo kombinovaných farmaceutických prostředcích. Vhodné dávky známých terapeutických činidel určí snadno odborník.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být podávány například v dávkách 0,01 až 500 mg/kg hmotnosti, s výhodou 0,01 až 100 mg/kg hmotnosti 1 až 4krát denně. Přesná dávka bude záviset na věku a celkovém stavu nemocného a na zvoleném způsobu podání.

Sloučeniny podle vynálezu mají ve srovnání se známými látkami s podobnými účinky tu výhodu, že jsou účinnější, selektivnější, mají méně vedlejších účinků, delší trvání účinku, jsou biologicky dostupnější, mají menší systemický účinek při podání inhalací nebo mají jiné žádoucí vlastnosti, které známé látky nemají.

Zvláště mají sloučeniny podle vynálezu tu výhodu, že mají vyšší selektivitu pro podtyp 2a receptoru adenosinu, zejména ve srovnání s podtypy A1 a A3 těchto receptoru než dosud známé látky.

Některé ze sloučenin podle vynálezu jsou také novými cennými meziprodukty pro výrobu dalších látek.

Biologická účinnost sloučenin podle vynálezu byla sledována in vitro i in vivo následujícím způsobem:

1) Agonistický účinek vzhledem k receptorům podtypů 2a, 1 a 3 pro adenosin: Selektivita agonistického účinku vzhledem k lidským receptorům pro adenosin byla určována při použití vaječníkových buněk čínského křečka (CHO), podrobených transfekci genem pro příslušný lidský receptor pro adenosin způsobem, popsaným v Castanon M.J., Spevak W, 1994. Buňky CHO byly rovněž podrobeny transfekci cyklickým prvkem AMP, který je promotorem pro gen pro alkalickou fosfatázu, vylučovanou placentou, SPAP podle Wood, 1995; Účinek zkoumaných látek byl stanoven na základě jejich účinku na základní hladinu cAMP (A2a) nebo na cAMP (A1 a A3) při zesílení účinku forskolinem, což se projeví změnou koncentrace SPAP. Byly stanoveny hodnoty EC50 jako poměr k hodnotám, získaným při použití neselektivního agonisty, N-ethylkarboxamidadenosinu (NECA).

2) Nahromadění eosinofilů v plicní tkáni sensitizovaných morčat působením antigenu:

Morčatům, sensitizovaným ovalbuminem byl podán merypamin v dávce 1 mg/kg i.p. k ochraně proti anafylaktickému bronchospasmu. Pak byly podány sloučeniny podle vynálezu inhalací aerosolu těchto látek po 30 minut bezprostředně před podáním ovalbuminu rovněž inhalací aerosolu z roztoku ovalbuminu 50 rnikrogramů/ml. Po 24 hodinách byla zvířata usmrcena, plíce byly vyjmuty a promyty a vymytím tekutiny z plicních sklípků a průdušek byl získán celkový a diferenciální počet leukocytů. Pak byla stanovena dávka, snižující o 50 % počet eosinofilních leukocytů, ED50 (Sanjar a další, 1992).

φφ φ

Odkazy:

Asako H, Wolf, RE, Granger, DN (1993), Gastroenterology 104, str. 31-37; BurkeyTH, Webster, RO, (1993), Biochem. Biophys Acta 1175, str. 312-318;

Castanon MJ, Spevak W (1994) Biochem. Biophys Res. Commun. 198, str. 626-631; Cronstein BN, Kramer SB, Weismann G, Hirschhorn R, (1983), Trans Assoc. Am. Physicans 96, str. 384-91;

Cronstein BN, Kramer SB, Rosenstein ED, Weismann G, Hirschhorn R, (1985), Ann N.Y. Acad. Sci. 451, str. 291-301;

Cronstein BN, Naime D, Ostad E, (1993), J. Clin. Invest. 92, str. 2675-82;

Cronstein BN, Naime D, Ostad E, (1994), Adv. Exp. Med. Biol. 370, str. 411-6;

Cronstein BN, (1994), J. Appl. Physiol. 76, str. 5-13;

Dinzani C, Brunelleschi S, Viano I, Fantozzi R, (1994), Eur. J. Pharmacol 263 str. 223-226;

Elliot KRF, Leonard EJ (1989) FEBS Letters 254, str. 94-98;

Green PG, Basbaum Al, Helms C, Levine JD, (1991), Proč. Nati. Acad. Sci. 88, str. 4162-4165;

Hischom R, (1993), Pediatr. Res 33, str. S35-41;

Kohno Y; Xiao-duo J; Mawhorter SD; Koshiba M; Jacobson KA. (1996). Blood 88 str. 3569-3574.

Peachell PT, Lichnstein LM, Schleimer RP, (1989), Biochem Pharmacol 38, str. 1717-1725;

Richter J, (1992), J. Leukocyte Biol. 51, str. 270-275;

Rosengren S, Bong GW, Firestein GS, (1985), J. Immunol. 154, str. 5444-5451; Sanjar S, McCabe PJ, Fattah D, Humbles AA, Pole SM, (1992), Am. Rev. Respir. Dis. 145, A40;

Skubitz KM, Wickman NW, Hammerschmidt DE, (1988), Blood 72, str. 29-33

Van Schaick EA; Jacobson KA; Kim HO; Ijzerman AP; Danhof M. (1996) Eur J Pharmacol 308 str. 311-314.

Wood KV. (1995) Curr Opinion Biotechnology 6 str. 50-58.

Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následujícími příklady, které však nemají sloužit k omezení jeho rozsahu.

Příklady provedení vynálezu

Všechny produkty v příkladové části byly čištěny chromatografií na koloně, pod pojmem „rychlá chromatografie“ se rozumí chromatografie na silikagelu s průměrem částic 0,040 až 0,063 mm (např. Měrek 9385), přičemž eluce v koloně je urychlena tlakem dusíku až 0,035 Mpa. V případě chromatografie na tenké vrstvě, TLC, byly užity desky silikagenu 5 x 10 cm (silikagel 60 F254, např. Měrek 5719).

V případě, že produkty byly čištěny preparativní HPLC, byl tento postup prováděn na koloně C18 v reversní fázi (1“ Dynamax) při eluci gradientem acetonitrilu (obsahujícího 0,1 % kyseliny trifluoroctové) ve vodě (obsahující 0,1 % kyseliny trifluoroctové) a sloučeniny se izolují jako jejich trifluoracetátové soli, v případě že není výslovně uvedeno jinak.

Standardní automatizovaná preparativní HPLC, kolona, podmínky a eluční činidlo. Automatizovaná preparativní vysokotlaká kapinová chromatografie (autoprep. HPLC) byla prováděna při použití kolony Supelco ABZ+5 um, 100 x 22 mm, eluce byla prováděna směsí rozpouštědel i) 0,1 % kyselina mravenčí ve vodě a ii) 0,05 % kyselina mravenčí v acetonitrilu, rozpouštědlo je uvedeno jako procentuální obsah složky ii) v rozpouštědlové směsi, rychlost eluce byla 4 ml za minutu. Není-li uvedeno jinak, bylo použito gradientu 5 až 95 % v průběhu 20 minut.

Systém LC/MS:

Pro kombinaci kapalinové chromatografie a hmotové spektroskopie byly použity následující systémy:

Systém A: Supelco ABZ+, 3,3 cm x 4,6 mm vnitřní průměr kolony, k eluci byla užita rozpouštědla: A-0,1 % obj./obj. kyseliny mravenčí + 0,077 % hmotn./obj. octanu amonného ve vodě a B-95:5 acetonitril: voda + 0,05 % obj./obj. kyseliny mravenčí. Byl užit následující gradient: 100% A po 0,7 min., A+B gradient 0 až 100 % B po 3,5 min., 100% B po 3,5 min., návrat k 0% B v průběhu 0,3 min. Byla užita positivní a negativní ionizace.

• ·· ·« · ♦ · ♦ · · · · ···

Systém Β: Supelco ΑΒΖ+, 5 cm χ 2,1 mm vnitřní průměr, k eluci byla užita rozpouštědla: A - 0,1 % obj./obj. kyselina mravenčí + 0,077 % hmotn./obj. octanu amonného ve vodě a B - 95:5 acetonitril: voda + 0,05 % obj./obj. kyseliny mravenčí. Byl užit následující gradient: 0 až 100 % B v průběhu 3,5 min, 100 % B po 1,50 min., návrat k 0 % B v průběhu 0,50 min. Byla užita positivní a negativní ionizace.

Příklad nového postupu

Meziprodukt A: 2-Bromhypoxanthin

Tato sloučenina se připraví z 2-thioxanthinu** oxidací merkaptoskupiny bromem a vytěsněním in šitu bromovodíkem. Jako odkaz na oxidaci a vytěsnění, viz Beaman, A.G.; Gerster, J.F.; Robins, R.K.; J.Org.Chem , 1962, 27, 986,1.

**Elion, G.B.; Lange, H.L.; Hitchings, G,H.; J.Am.Chem.Soc., 1956, 78, 217.

Meziprodukt B: 2-[(1S)-1-benzyl-2-hydroxyethyl]amino-1,9-dihydro-6H-purin-6-on

Směs 10,0 g (46,5 mmol) meziproduktu A a 14,1 g (93,0 mmol) L-fenylalaninolu v 30 ml 2-methoxyethanolu se zahřívá ve 100 ml baňce s kulatým dnem přes noc (12 h). Směs se ochladí na teplotu okolí, aby došlo ke zvýšenému srážení pevných látek.

Další srážení se generuje přidáním 150 ml vody. Poté co se míchá 1 hodinu se směs filtruje a filtrační koláč se promyje 50 ml vody a suší ve vakuu a získá se 7,40 g (56%) sloučeniny uvedené v názvu jako žlutá pevná látka. Produkt je směsí dvou tautomerů ¹H NMR. Spojené a promyté filtráty se nechají stát při teplotě místnosti 2 dny. Výsledné pevné látky se filtrují a suší a získá se 1,12 g (8,4 %) produktu jako bílá pevná látka. Celkový výtěžek je 64 %. TLC (silikagel, 50% MeOH v CH2CI2, detekce 254 nm): Rf 0,9; 2-bromhypoxanthin Rf 0,6. MS (ES): m/z 284 (m-1).

¹H NMR (hlavní tautomer, 300 Mhz) δ 2,76-2,98 (m, 2H), 3,49 (m, 2H), 4,09 (široký s, 1H), 5,04 (2, 1H), 6,36 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,19-7,38 (m, 5H), 7,66 (s, 1H), 10,5 (s, 1H). 12,5 (s, 1H).

Meziprodukt C: (2S)-2-[(9-acetyl-6-oxo-6,9-dihydro-1 H-purin-2-yl)amino]-3fenylpropylacetát

K suspenzi 500 mg (1,75 mmol) meziproduktu B v 3,5 ml DMF v 25 ml baňce s kulatým dnem se postupně přidá 0,66 ml (7,02 mmol) acetanhydridu, 5 mg (katalytický) Ν,Ν-dimethylpyridinu a 0,98 (7,02 mmol) triethylaminu při teplotě okolí. Směs se míchá při teplotě okolí přes noc. Reakce se zakončí 15 ml vody a míchá 2 hodiny, suspenze se filtruje a filtrační koláč se promyje 10 ml vody, suší ve vakuu při teplotě 70 - 100 °C a získá se 470 mg (73 %) sloučeniny uvedené v názvu jako ne zcela bílá pevná látka. TLC (silikagel, 10% MeOH v CH2CI2, detekce 254 nm): Rf 0,45. MS (ES'): m/z 368 (M-1 )*, 326 (M-1-Ac)’, 1H NMR (300 Mhz) 5 1,96 (s, 3H), 2,80 (s, 3H), 2,90 (m, 2H), 4,16 (m, 2H), 4,37 (m, 1H), 6,70 (široký s, 1H), 7,16 - 7,31 (m,5H), 8,16 (s,1H), 10,8 (s,1H).

Meziprodukt D: (2S)-2-[(6-chlor-9H-purin-2-yl)amino]-3-fenylpropylacetát

K 16,7 ml (179 mmol) oxychloridu fosforečného v 100 ml baňce s kulatým dnem se přidá 2,27 ml (17,9 mmol) Ν,Ν-dimethylanilinu při teplotě okolí. Směs se míchá 10 minut; poté se během 15 minut přidá 4,40 g (11,9 mmol) 6-hydroxypurinu meziproduktu C ve dvou stejných částech. Směs se zahřívá při zpětném toku 15 minut. Po ochlazení na teplotu okolí se směs pomalu přidá k 550 ml ledové vody a přitom se míchá. Vodná směs se neutralizuje na pH 3,5 přidáním pevné látky NaOAc a extrahuje CH2CI2 (3x). Spojené organické vrstvy se promyjí vodným NaHCCh (2x), suší nad bezvodým Na2SO4 a koncentrují ve vakuu. Výsledný hnědý olej se chromatografuje na silikagelu. Eluováním 5-10% MeOH v CH2CI2 se získá 3,08 g (75 %) sloučeniny uvedené v názvu jako hnědá pevná látka. TLC (silikagel, 10% MeOH v CH2CI2, detekce 254 nm): Rf 0,50. MS (ES-): m/z 344 (M-1)-, 346 (M-1, izotop)-. 1H NMR (300 MHz) d 2,15 (s, 3H), 2,98 (m, 2H), 4,08-4,35 (m, 2H), 4,49 (m, 1H), 7,26 -7,53 (m, 5H), 7,64 (široký s, 1H), 8,25 (s, 1H), 13,1 (s, 1H).

Meziprodukt E: (2S)-2-[(6-amino-9H-purin-2-yl)amino]-3-fenyl-1 -propanol

Do 200 ml skleněného pouzdra v Parrově tlakovém reaktoru se vloží 288 mg (0,834 mmol) meziproduktu D a 25 ml 2M NH3 v methanolu. Reaktor se utěsní a zahřívá při teplotě 90 - 100 °C 16 hodin. Po ochlazení na teplotu místnosti se rozpouštědlo a přebytek reakční složky odpaří ve vakuu. Nehledě na nekompletnost reakce, jak bylo indikováno TLC, se výsledný olej chromatografuje na silikagelu. Eluováním 10 - 15% MeÓH v CH2CI2 se získá 48 mg (20 %) sloučeniny získané v názvu jako pevná látka. Dalším eluováním se získá 156 (62 %) regenerovaného výchozího materiálu jako deacetylovaná forma. TLC (silikagel, 10% MeOH v CH2CI2, detekce 254 nm): Rf 0,22. 1H NMR (300 MHz) d 2,61 - 2,80 (m, 2H), 3,30 - 3,45 (m, 2H), 3,95 (m, 1H), 4,70 (s, 1H), 5,65 (d, J = 8,0 Hz), 6,41 (s, 2H), 6,99-7,26 (m, 5H), 7,52 (s, 1H), 12,1 (s, 1H).

Meziprodukt F: (3aS,4S,6R,6aR)-Methoxy-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-

d][1,3]dioxol-4-karboxylová kyselina

Do 1 I trojhrdlé baňky s kulatým dnem, opatřené dělící nálevkou, termočlánkem a vstupem pro dusík, se vloží D-ribóza (50 g) a aceton (400 ml). Směs se ochladí na teplotu -5 °C a poté se přidá 2,2-dimethoxypropan (100 ml) a poté chloristá kyselina (20 ml). Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a poté krátce míchá. Přidá se methanol (70 ml) a reakční směs se míchá přes noc. Reakční roztok se ochladí na cca 5 °C a po kapkách se přidá cca 95 ml 30% uhličitanu sodného. Směs se nechá ohřát a poté filtruje. Výsledný koláč se promyje ethylacetátem (50 ml). Filtrát se koncentruje ve vakuu při cca 0,02 MPa na zbytkový objem 250 ml, zředí s ethylacetátem (200 ml) a znovu koncentruje na zbytkový objem 170 ml. Přidá se ethylacetát (200 ml) a voda (200 ml) a fáze se smíchají a oddělí. Vodná fáze se dvakrát promyje ethylacetátem (200 ml) a vrstvy se oddělí. Spojené organické extrakty se koncentrují na výsledný objem 200 ml a znovu zředí ethylacetátem (200 ml) a poskytují roztok ethylacetátu 6R-methoxy-2,2-dimethyltetrahydro-(3aR,6aR)furo[3,4-d][1,3]dioxol-4R-yl)-methanolu.

Do 2 I trojhrdlé baňky s kulatým dnem se vloží roztok ethylacetátu 6R-methoxy-2,2dimethyltetrahydro(3aR,6aR)furo[3,4-d][1,3]dioxol-4R-yl)-methanolu, 6% hydrogenuhličitan sodný (158 ml), bromid draselný (2,3 g) a TEMPO (0,167 g). Reakční směs se ochladí na teplotu -7 °C. Mezitím se hydrogenuhličitan sodný (6,8 g) rozpustí v 10-13% chlornanu sodném (400,5 ml). Bělící roztok se přidává po kapkách během cca 40 minut a teplota se udržuje pod 15 °C. Reakční směs se • ·· ♦ · · φφ « • · » · · · « φ φ φ φ • Φ 9 ΦΦ»· ΦΦ Φ • ΦΦΦ Φ · « ΦΦΦΦ ΦΦΦ ·

Φ ΦΦΦΦ ΦΦΦ

ΦΦΦ Φ Φ ΦΦ Φ «Φ ΦΦΦ míchá cca 2 hodiny a přidá se 10% vodný roztok siřičitanu sodného (47 ml). Reakčni směs se míchá 15 minut, oddělené fáze a vodné fáze se nastaví na pH 2 pomocí 4M HCI a dvakrát extrahují ethylacetátem (225 ml). Extrakty ethylacetátu se koncentrují ve vakuu a bílý zbytek, který zůstal, se trituruje s cyklohexanem (90 ml). Pevné látky se filtrují a suší ve vakuu při teplotě 45 °C a poskytnou produkt uvedený v názvu (46% výtěžek re D-ribóza) jako bílou pevnou látku: t.t. 126 až 129 °C.

Meziprodukt G: Amid (3aS,4S,6R,6aR)-6-methoxy-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-

d][1,3]dioxol-4-karboxylové kyseliny

Do 500 ml trojhrdlé baňky s kulatým dnem se vloží nejprve meziprodukt F (20 g) a ethyl acetát (160 ml) a poté thionylchlorid (9,4 ml). Reakčni roztok se ohřívá při teplotě 50 °C 2 hodiny. Přidá se plynný amoniak (16 g), a to takovou rychlostí, že teplota zůstává mezi 40 až 60 °C. Přidá se voda (120 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se dvakrát promyje ethylacetátem (80 ml). Spojené organické promývací kapaliny se koncentrují ve vakuu do sucha. Zbytek se trituruje cyklohexanem (40 ml) a pevné látky se filtrují. Koláč se promyje cyklohexanem (40 ml) a pevné látky se suší ve vakuu při teplotě 45 °C a poskytnou produkt uvedený v názvu (16,7 g) (83,9% výtěžek) jako světle hnědou pevnou látku: t.t. = 134 až 136 °C; TLC (95/5 chloroform/methanol/cca 5 kapek TFA na sprej 50 ml/ fosfomolybdenová kyselina) rf = 0,49.

Meziprodukt H: (3aS,4S,6R,6aR)-6-Methoxy-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-

d][1,3]dioxol-4-karbonitril

Do 22 I trojhrdlé baňky s kulatým dnem se vloží meziprodukt G (643 g), ethylacetát (7,72 I), N,N-dimethylformamid (1,26 I), a triethylamin (2,15 I). Reakčni roztok se ochladí na teplotu cca 0 °C a poté se přidá oxychlorid fosforečný (1,38 I) takovou rychlostí, že teplota se udržuje pod 25 °C. Reakčni směs se míchá 1 a 1,5 hodiny. Po kapkách se přidá vodný hydrogenuhličitan draselný (20%, 6,5 l) za udržování teploty při nebo pod 20 °C. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se znovu extrahuje ethylacetátem (3,5 I). Spojené organické vrstvy se dvakrát promyjí 20% hydrogenuhličitanem draselným (3,5 I) a koncentrují na výsledný objem cca 1 I.

♦ ·· ·· · «· · ·· · · · · · · ·♦· • ♦ ♦ · · · · ··· • ··· · · · ···· · · «· • ···« <<· ··· ·« ·* · ·· ···

K řídkému oleji se přidá aktivní uhlí (15 gramů) a směs se filtruje přes celit (80 g). Koláč se promyje ethylacetátem (100 ml). Filtrát se koncentruje ve vakuu a poskytne produkt uvedený v názvu (519 g) (88% výtěžek) jako načervenalý oranžový olej: TLC (1:1 Ethylacetát/caklohexan; uvolňování fosfomolybdenové kyseliny) rf = 0,73.

Meziprodukt I: 5-(6R-Methoxy-2,2-dimethyltetrahydro-(3aR,6aR)furo[3,4-d][1,3]dioxol-4R-yl)-1 H-tetrazol

Do 3 I trojhrdlé baňky s kulatým dnem se vloží meziprodukt H (200 g), toluen (2 I), azidotrimethylsilan (332 ml) a dibutyltinoxid (24,9 g). Reakční směs se zahřívá při teplotě 60 °C 15 hodin. Reakční směs se koncentruje ve vakuu na výsledný objem cca 300 ml. Přidá se toluen (1 I) a roztok se znovu koncentruje na výsledný objem cca 470 ml. Přidá se toluen (400 ml) a voda (19,8 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti zhruba 2 hodiny. Směs se koncentruje a poskytne cca 250 ml zbytku, který se rozpustí v toluenu (800 ml) během zahřívání a poté se nechá ochladit na teplotu místnosti a míchá více než 3 dny. Pevné látky se filtrují a dvakrát promyjí toluenem (250 ml). Produkt se suší ve vakuu a poskytne produkt uvedený v názvu (135 g) (55% výtěžek jako bílou pevnou látku: t.t. 130 °C.

Meziprodukt J: 2-Ethyl-5-(6R-methoxy-2,2-dimethyltetrahydro-(3aR,6aR)furo[3,4-

d][1,3]dioxol-4R-yl)-2H-tetrazol

Do 1 I trojhrdlé baňky s kulatým dnem se přidá meziprodukt I (31,8 g), uhličitan draselný (12,7 g) a aceton (238 ml). Injekční stříkačkou se přidá ethyljodid (14,1 ml) a reakční směs se zahřívá při teplotě 42 °C 2,5 až 3 hodiny. Reakční směs se nechá ochladit na teplotu místnosti a poté se přidá cyklohexan (238 ml). Výsledná sraženina se filtruje a koláč se třikrát promyje cyklohexanem (65 ml). Filtrát se koncentruje na výsledný objem 195 ml a poté znovu zředí cyklohexanem (238 ml). Roztok cyklohexanu se ochladí na teplotu 0 až 5 °C 3 na dny a výsledná krystalická pevná látka (N1 alkylační produkt) se filtruje a třikrát promyje cyklohexanem (65 ml).

Spojené filtráty se koncentrují ve vakuu a poskytnou meziproduktový stupeň produktu uvedeného v názvu jako olej. Olej se rozpustí v cyklohexanu (200 ml) při teplotě 60 °C a roztok se nechá ochladit na teplotu místnosti a filtruje. Výsledná krystalická • · ··· · · ·· ······ ··· ··· · · ····«·» · _e • · · · 999 ·· ·· · ·· ··· pevná látka se filtruje a třikrát promyje cyklohexanem (65 ml). Spojené filtráty se koncentrují a poskytnou produkt uvedený v názvu jako žlutý olej: TLC (1:1 Ethylacetát/hexany; uvolňování fosfomolybdenové kyseliny) rf = 0,68.

Meziprodukt K: Ester 4R,5-diacetoxy-2R-(2-ethyl-2H-tetrazol-5-yl)-tetraydrofuran-3Ryl rel-octové kyseliny

Do baňky s kulatým dnem se vloží meziprodukt J (5,0 g). Přidá se roztok acetylchloridu (0,73 g) v methanolu (50 ml) a reakční roztok se zahřívá při zpětném toku za tlaku 0,03 MPa. Reakční směs se destiluje 8 až 9 hodin a během této doby se po částech přidá methanol (135 ml), aby doplnil reakční objem. Reakční směs se nechá ochladit na teplotu místnosti a přidá se pyridin (15 ml). Směs se koncentruje ve vakuu a znovu zředí s pyridinem. K roztoku pyridinu se přidá ethylacetát (25 ml) a acetanhydrid (6,6 g) a výsledná směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs se ochladí na teplotu 5 až 10 °C a po kapkách se během 20 minut přidá přibližně 2M kyselina sírová (cca 45 ml) a teplota se udržuje pod 10 °C. Vrstvy se oddělí a organická vrstva se promyje přibližně 0,7M kyselinou sírovou (cca 25 ml). Organická vrstva se promyje nasyceným hydrogenuhličitanem sodným a solankou a poté koncentruje ve vakuu a poskytne světle žlutý olej, který se rozpustí v 50 ml ethylacetátu. Přidá se acetanhydrid (3,04 g) a koncentrovaná kyselina sírová (0,65 g) a reakční směs se vaří při teplotě 50 °C cca 3,5 hodiny. Reakce se zastaví přidáním nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (25 ml). Organická vrstva se koncentruje ve vakuu a poskytne produkt uvedený v názvu (5,1 g) (82% výtěžek) jako žlutou pevnou látku: TLC (1:1 Ethylacetát/hexany; detekce fosfomolbdenová kyselina) rf = 0,44.

Meziprodukt L: (2R,3S,4S,5R)-4-(acetyloxy)-2-(6-amino-2-[(1 S)-1-benzyl-2hydroxyethyl]amino-9H-purin-9-yl)-5-(2-ethyl-2H-1,2,3,4-tetraazol-5-yl)tetrahydro-3furanylacetát

Ke směsi 65 mg (0,19 mmol) meziproduktu K a 45 mg (0,16 mmol) meziproduktu E v 2,5 MeCN v baňce s kulatým dnem se postupně přidá 88 ml (0,36 mmol) N,Obis(trimethylsilyl)acetamidu a 34 ml (0,19 mmol) trimethylsilyltrifluormethansulfonátu • ·♦····· • ···· · ·· ··· · · · ···· « · ·· • · · · · ·· • · ·· · · · ·· · při teplotě okolí. Žlutá suspenze se zahřívá při zpětném toku a stane se z ní tmavě žlutý roztok. Po 5 hodinovém zahřívání při zpětném toku se směs ochladí na teplotu místnosti, reakce se přeruší 2 ml 10% KHCO3 a extrahuje CH2CI2 (2x8 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí 10% solankou (3 ml) a odpaří ve vakuu. Výsledná žlutá pěna se chromatografuje na silikagelu. Eluováním 5% MeOH v CH2CI2 se získá 70 mg (78 %) sloučeniny uvedené v názvu jako pevná látka. Přes nízkou čistotu se materiál použije v dalším kroku bez dalšího čištění. TLC (silikagel, 10% MeOH v CH2CI2, detekce 254 nm): Rf 0,54.

Příklad A: (2R,3R,4S,5R)-2-[6-Amino-2-(1 S-hydroxymethyl-2-fenyl-ethylamino)-purin9-yl]-5-(2-ethyl)-2H-tetrazol-5-yl)tetrahydrofuran-3,4-diol

Směs 70 mg (0,12 mmol) meziproduktu L a 20 mg (0,15 mmol) bezvodého K2CO3 v 5 ml methanolu se míchá při teplotě okolí 2,5 hodiny. Směs se odpaří téměř do sucha, zředí s 2 ml vody a extrahuje EtOAc (3x5 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad Na₂SO4 a odpaří ve vakuu. Výsledný surový produkt se chromatografuje na silikagelu. Eluováním 10% MeOH v CH2CI2 se získá 24,5 mg (41 %) sloučeniny uvedené v názvu jako pevné látky.

TLC (silikagel, 10% MeOH v CH₂Cl2, detekce 254 nm): Rf 0,35.

Nové příklady

Meziprodukty

Meziprodukt 1: 2-Benzyl-5-(6-methoxy-2,2-dimethyltetrahydro-(3aR,6aR)furo[3,4-

d][1,3]dioxol-4R-yl)-2H-tetrazol

K míchanému roztoku meziproduktu 10 (10 g, 41,3 mM) v dimethylformamidu (50 ml) se pod dusíkem přidá uhličitan draselný (5,7 g, 41,3 mmol) a následně benzylbromid (6 ml, 49,6 mM). Směs se míchá při teplotě místnosti 18 hodin. Přidá se voda (100 ml) a směs se extrahuje ethylacetátem (2 x 100 ml). Organické fáze se spojí, promyjí vodou, solankou a suší nad síranem hořečnatým. Zbytek získaný po odpaření za sníženého tlaku se čistí sloupcovou chromatografií na mžikovém silikagelu eluováním 20% směsi ethylacetátu a cyklohexanu a získá se sloučenina uvedená v názvu jako voskovitá pevná látka (2,98 g).

TLC SiO₂ (20% ethylacetát v cyklohexanu) Rf = 0,45.

Meziprodukt 2: Ester 4R,5-diacetoxy-2R-(2-benzyl-2H-tetrazol-5-yl)tetrahydrofuran3R-yl kyseliny octové

K meziproduktu 1 (2,98 g, 8,9 mM) se přidá směs TFA a vody (40 ml/4 ml) při teplotě místnosti a směs se míchá 1 hodinu. Směs se odpaří za sníženého tlaku, azeotropuje toluenem (3 x 20 ml). Zbytek se přenese do dichlormethanu (100 ml) a přidá se (katalytický) dimethylaminopyridin a triethylamin (40 ml, 356 mM). Směs se ochladí na teplotu 0 °C a po kapkách se během 15 minut přidá acetanhydrid (17 ml, 166 mM). Směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 16 hodin. Směs se odpaří za sníženého tlaku a čistí sloupcovou chromatografií na mžikovém silikagelu eluováním 50% směsi ethylacetátu a cyklohexanu a získá se sloučenina uvedená v názvu jako olej (2,44 g).

LC/MS Systém A Rt = 3,39 min, m/z = 279 (MH+).

Meziprodukt 3: Ester 4R-acetoxy-5R-(2-benzyl-2H-tetrazol-5-yl)-2R-(2,6-dichlorpurin9-yl)tetrahydrofuran-3R-yl kyseliny octové

K míchanému roztoku meziproduktu 2 (2,43 g, 6 mM) pod dusíkem v acetonitrilu (18 ml) se přidá 1,8-diazobicyklo[5,4,0]undec-7-en (1,35 ml, 9 mM) a poté 2,6dichlorpurin (1,5 g). Směs se ochladí na teplotu 0 °C a po kapkách se během 15 minut přidá trimethylsilytriflát (1,87 ml, 10,2 mM), nechá se ohřát na teplotu 20 °C a míchá 38 hodin. Reakce se přeruší nasyceným vodným hydrogenuhličitanem sodným (35 ml) a extrahuje ethylacetátem (3 x 50 ml). Organické podíly se spojí a promyjí vodou (50 ml), suší nad síranem horečnatým a odpaří za sníženého tlaku. Získaný zbytek se čistí sloupcovou chromatografií na mžikovém silikagelu eluováním 30% směsi ethylacetátu a cyklohexanu a získá se sloučenina uvedená v názvu jako olej (2,36 g). LC/MS Systém B Rt = 3,43 min, m/z = 535 (MH+).

• ·

Meziprodukt 4: Ester 4R-acetoxy-5R-(2-benzyl-2H-tetrazol-5-yl)-2R-[2-chlor-6-(2,2difenylethylamino)purin-9-yl]tetráhydrofuran-3R-yl kyseliny octové

K míchanému roztoku meziproduktu 3 (2,3 g, 4,3 mM) pod dusíkem v izopropanolu (40 ml) se přidá diizopropylethylamin (1,12 ml, 6,5 mM) a poté difenylethylamin (1,02 g, 5,2 mM), výsledná směs se zahřívá při teplotě 50 °C 18 hodin. Reakční směs se odpaří za sníženého tlaku a získaný zbytek se čistí sloupcovou chromatografií na mžikovém silikagelu eluováním 50% směsi ethylacetátu a cyklohexanu a získá se sloučenina uvedená v názvu jako ne zcela bílá látka (2,9 g). LC/MS Systém B Rt = 3,68 min, m/z = 6,94 (MH⁺).

Meziprodukt 5: (2R,3S,4R,5R)-2-(2-Benzyl-2H-tetrazol-5-yl)-5-[6-(2,2difenylethylamino)-2-(2-piperidin-1-ethylamino)purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol

Roztok meziproduktu 4 (2,9 g, 4,2 mM) a 2-piperidinethylaminu (3 ml, 20,9 mM) v dimethylsulfoxidu (1 ml) pod dusíkem se zahřívá při teplotě 90 °C 72 hodin. Směs se nechá ochladit a čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu eluovánám 20% methanolu, 79% chloroformu a 1% ammoniaku a získá se sloučenina uvedená v názvu jako olej (1,6 g). LC(MS Systém A Rt = 3,86 min, m/z = 702 (MH⁺).

Meziprodukt 6: (2R,3S,4R,5R)-2-(2H-tetrazol-5-yl)-5-[6-(2,2-difenylethylamino)-2-(2piperidin-1-yl-ethylamino)purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol

K10% palladiu na uhlíku (1,6 g) pod dusíkem se přidá roztok meziproduktu 5 (1,67 g, 2,38 mM) v ethanolu (50 ml) a poté formiát ammoný (0,72 g 11,9 mM). Směs se zahřívá při teplotě 50 °C 4 hodiny, filtruje přes polštářek Harborlite®. Filtrát se odpaří za sníženého tlaku a získá se sloučenina uvedená v názvu jako bledě žlutá látka (1,45 g).

LC/MS Systém A Rt = 3,66 min, m/z = 612 (MH⁺).

Meziprodukt 7: (3aS,4S,6R,6aR)-Methoxy-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4d][1,3]dioxol-4-karboxylová kyselina

Do 1 I trojhrdlé baňky s kulatým dnem, opatřené dělící nálevkou, termočlánkem a vstupem pro dusík, se vloží D-ribóza (50 g) a aceton (400 ml). Směs se ochladí na teplotu -5 °C a přidá se 2,2-dimethoxypropan (100 ml) a poté kyselina chloristá (20 ml). Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a poté se chvíli míchá . Přidá se methanol (70 ml) a reakční směs se míchá pres noc. Reakční roztok se ochladí na teplotu cca 5 °C a po kapkách se přidá cca 95 ml 30% uhličitanu sodného. Směs se nechá ohřát a poté se filtruje. Vzniklý koláč se promyje ethylacetátem (50 ml). Filtrát se koncentruje ve vakuu při cca 0,02 MPa až zůstane 250 ml zbývajícího objemu, zředí s ethylacetátem (200 ml) a znovu koncentruje do zbývajícího objemu 170 ml.

Přidá se ethylacetát (200 ml) a voda (200 ml) a fáze se smíchají a oddělí. Vodná fáze se dvakrát promyje ethylacetátem (200 ml) a vrstvy se oddělí. Spojené organické extrakty se koncentrují na zbývající objem 200 ml a znovu zředí s ethylacetátem (200 ml) a poskytnou roztoko ethylacetátu 6R-methoxy-2,2-dimethyltetrahydro(3aR,6aR)furo[3,4-d][1,3]dioxol-4R-yl)methanolu.

Do 2 I trojhrdlé baňky s kulatým dnem se vloží roztok ethylacetátu 6R-methoxy-2,2dimethyltetrahydro-(3aR,6aR)furo[3,4-d][1,3]dioxol-4R-yl)methanolu, 6% hydrogenuhličitan sodný (158 ml), bromid draselný (2,3 g) a TEMPO (0,167 g). Reakční směs se ochladí na teplotu -7 °C. Mezitím se hydrogenuhličitan sodný (6,8 g) rozpustí v 10-13% chlornanu sodném (400,5 ml). Po kapkách se během cca 40 minut přidá bělící roztok, přičemž teplota se udržuje pod 15 °C. Reakční směs se míchá cca 2 hodiny a přidá se 10% vodný roztok siřičitanu sodného (47 ml). Reakční směs se míchá 15 minut, fáze se oddělí a vodná fáze se okyselí na pH 2 4M HCI a dvakrát extrahuje ethylacetátem (225 ml). Extrakty ethylacetátu se koncentrují ve vakuu a poskytnou bílý zbytek, který se trituruje s cyklohexanem (90 ml). Pevné látky se filtrují a suší ve vakuu při teplotě 45 °C a poskytnou produkt uvedený v názvu (33,6 g) (46% výtěžek re D-ribózy) jako bílou pevnou látku: t.t 126 až 129 °C.

Meziprodukt 8

Amid (3aS,4S,6R,6aR)-6-methoxy-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxll-4karboxylové kyseliny • ·

Do 500 ml trojhrdlé baňky s kulatým dnem se vloží meziprodukt 1 (20 g) a ethylacetát (160 ml) a poté thionylchlorid (9,4 ml). Reakční roztok se zahřívá při teplotě 50 °C 2 hodiny. Přidává se plynný ammoniak takovou rychlostí, aby teplota zůstala mezi 40 60 °C. Přidá se voda (120 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se dvakrát promyje ethylacetátem (80 ml). Spojené organické promývací kapaliny se koncentrují ve vakuu do sucha. Zbytek se trituruje s cyklohexanem (40 ml) a pevné látky se odfiltrují. Koláč se promyje cyklohexanem (40 ml) a pevné látky se suší ve vakuu při teplotě 45 °C a poskytnou produkt uvedený v názvu (16,7 g) (83,9 % výtěžek) jako světlou hnědou látku: t.t. = 134 až 136 °C; TLC (95/5 chloroform/methanol/cca5 kapek TFA na sprej 50ml/fosfomolybdenová kyselina) rf = 0,49.

Meziprodukt 9: (3aS,4S,6R,6aR)-6-Methoxy-2,2-dimethyltetrahydrofuro[3,4d][1,3]dioxol-4-karbonitril

Do 22 I trojhrdlé baňky s kulatým dnem se vloží meziprodukt 2 (643 g), ethylacetát (7,72 I), N,N-dimethylformamid (1,26 I) a triethylamin (2,15 I). Reakční roztok se ochladí na teplotu cca 0 °C a přidá se roztok oxychlordu fosforečného (1,38 ml) takovou rychlostí, aby se teplota udržela pod 25 °C. Reakční směs se míchá jednu a jednu a půl hodiny. Po kapkách se přidá vodný hydrogenuhličitan draselný (20%, 6,5 I), přičemž teplota se udržuje pod 20 °C. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se znovu extrahuje ethylacetátem (3,5 I). Kombinované organické vrstvy se dvakrát promyjí 20% hydrogenuhličitanem draselným (3,5 I) a koncentrují na výsledný objem cca 11. K řídkému oleji se přidá aktivní uhlí (15 gramů) a směs se filtruje přes celit (80 g). Koláč se promyje ethylacetátem (100 ml). Filtrát se koncentruje ve vakuu a poskytne produkt uvedený v názvu (519 g) (88% výtěžek) jako načervenalý oranžový olej: TLC (1:1 Ethylacetát/cyklohexan; uvolňování fosfomolybdenonové kyseliny) rf = 0,73.

Meziprodukt 10: 5-(6R-Methoxy-2,2-dimethyltetrahydro-(3aR,6aR)furo[3,4d][1,3]dioxol-4R-yl)-1 H-tetrazol

Do 3 I trojhrdlé baňky s kulatým dnem se vloží meziprodukt 3 (200 g), toluen (2I), azidotrimethylsilan (332 ml) a dibutyltinoxid (24,9 g). Reakční směs se zahřívá při teplotě 60 °C 15 hodin. Reakční směs se koncentruje ve vakuu na výsledný objem .:. ..· ·..· : ·..· cca 300 ml. Přidá se toluen (11) a roztok se znovu koncentruje na výsledný objem cca 470 ml. Přidá se toluen (400 ml) a voda (19,8 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti přibližně 2 hodiny. Směs se koncentruje a poskytne cca 250 ml zbytku. Zbytek se rozpustí v toluenu (800 ml) během zahřívání, poté se nechá ochladit na teplotu místnosti a míchá více než 3 dny. Pevné látky se filtrují a dvakrát promyjí toluenem (250 ml). Produkt se suší ve vakuu a poskytne produkt uvedený v názvu (135 g) (55% výtěžek) jako bílou pevnou látku: t.t. 130 °C.

Příklady

Příklad 1: (2R,3R,4S,5R)-2-[6-(2,2-Difenylethylamino)-2-(2-piperidin-1ylethylamino)purin-9-yl]-5-[2-(3-hydroxypropyl)-2H-tetrazol-5-yl]tetrahydrofuran-3,4diol bis(trifluoracetát)

K roztoku meziproduktu 6 (0,06 g, 0,098 mM) v dimethylformamidu (1 ml) se přidá uhličitan draselný (0,023 g, 0,167 mM) a poté 3-brompropanol (0,013 ml, 0,147 mM) v utěsněné lékovce (například Reacti-vial™), reakční směs se míchá 18 hodin. Směs se filtruje a filtrát se odpaří za sníženého tlaku a čistí za použití preparativní HPLC, (za použití kolony Capital ODS2-IK5 15mm x 20 mm vnitřní průměr, 30 min. gradient z 5% na 95% acetonitril obsahující 0,1% trifluoroctovou kyselinu) a získá se po lyofilizaci sloučenina uvedená v názvu jako bílá pevná látka (0,022 g) LC/MS Systém A Rt = 3,59 min, m/z = 670 (MH⁺).

Příklad 2: (2R,3R,4S,5R)-2-[6-(2,2-Difenylethylamino)-2-(2-piperidin-1 ylethylamino)purin-9-yl]-5-(2-propyl-2H-tetrazol-5-yl)tetrahydrofuran-3,4-diol bis(trifluoracetát)

Příklad 2 se připraví analogickým postupem k příkladu 1, použije se 1-brompropan (0,013 ml, 0,147 mM) a po lyofilizaci se získá sloučenina uvedená v názvu jako bílá pevná látka (0,026 g). LC/MS Systém A Rt = 3,76 min, m/z = 654 (MH⁺).

Příklad 3: Ester bis(trifluoracetát) 2-(5-{5R-[6-(2,2-difenylethylamino)-2-(2-piperidin~ 1-ylethylamino)purin-9-yl]-3S,4R-dihydroxytetrahydrofuran-2R-yl}tetrazol-2-yl)ethyl kyseliny octové

Příklad 3 se připraví analogickým postupem k příkladu 1, použije se 2bromethylacetát (0,017 ml, 0,147 mM) a po lyofilizaci se získá sloučenina uvedená v názvu jako bílá pevná látka (0,029 g). LC/MS Systém A Rt = 3,68 min, m/z = 698 (MH⁺).

Příklad 4: (2R,3S,4R,5R)-2-(2-Cyklopropylmethyl-2H-tetrazol-5-yl)-5-[6-(2,2difenylethylamino)-2-(2-piperidin-1-ylethylamino)purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol bis(trifluoracetát)

Příklad 4 se připraví analogickým postupem k příkladu 1, použije se (brommethyl)cyklopropan (0,0165 ml, 0,147 mM) a po lyofilizaci se získá sloučenina uvedená v názvu jako bílá pevná látka (0,023 g). LC/MS Systém A = 3,74 min, m/z = 666 (MH⁺).

Příklad 5: (2R,3R,4S,5R)-2-[6-(2,2-Difenylethylamino)-2-(2-piperidin-1 ylethylamino)purin-9-yl]-5-[2-(2-hydroxyethyl)-2H-tetrazol-5-yl]tetrahydrofuran-3,4diol bis(trifluoracetát)

K příkladu 3 (0,01 g) v methanolu pod dusíkem se přidá roztok methoxidu sodného (0,005 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 18 hodin. Reakční směs se odpaří za sníženého tlaku, čistí se za použití preparativní HPLC (za použití kolony Capital ODS2-IK5 15mm x 20mm vnitřní průměr, 30 min. gradient z 5% na 95% acetonitril) a získá se sloučenina uvedená v názvu jako guma (0,006 g). LC/MS Systém C Rt = 2,54 min, m/z = 656 (MH⁺).

Příklad 6: (2R,3S,4R,5R)-2-[2-(2-Chlorethyl)-2H-tetrazol-5-yl]-5-[6-(2,2difenylethylamino)-2-(2-piperidin-1-ylethylamino)purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol bis(trifluoracetát)

Příklad 6 se připraví analogickým postupem k příkladu 1, použije se 1 -brom-2chlorethan (0,012 ml, 0,147 mM) a po lyofilizaci se získá sloučenina uvedená v názvu jako bílá pevná látka (0,004 g). LC/MS Systém A = 3,79 min, m/z = 674 (MH⁺).

Příklad 7: (2R,3S,4R,5R)-2-(2-Cyklobutyl-2H-tetrazol-5-yl)-5-[6-(2,2difenylethylamino)-2-(2-piperidin-1-ylethylamino)purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol bis(trifluoracetát)

Příklad 7 se připraví analogickým postupem k příkladu 1, použije se bromcyklobutan (0,014 ml, 0,147 mM) a po lyofilizaci se získá sloučenina uvedená v názvu jako bílá pevná látka (0,008 g). LC/MS Systém = 2,76 min, m/z = 666 (MH⁺).

Příklad 8: (2R,3S,4R,5R)-2-(2-Allyl-2H-tetrazol-5-yl)-5-[6-(2,2-difenylethylamino)-2(2-piperidin-1-ylethylamino)purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol bis(trifluoracetát)

Příklad 8 se připraví analogickým postupem k příkladu 1, použije se allybromid (0,014 ml, 0,147 mM) při teplotě 0 °C a směs se poté míchá při teplotě 0 °C 3 hodiny a získá se sloučenina uvedená v názvu jako čirá guma (0,004g). LC/MS Systém C Rt = 2,68 min, m/z = 652 (MH⁺).

Biolkogická data (A) Biologická aktivita

Sloučeniny v příkladech podle vynálezu byly testovány (1) na agonistickou účinnost proti receptářovým subtypům a výsledky jsou následující:

Příklad č.	A2a	A1	A3
1	22,64	434,8	>93
2	30,95	755,4	>93
3	16,59	310,5	>93
4	37,24	1318,09	>93
5	10,54	159,5	>94

• ·

6	24,05	411,9	>97
7	22,98	597,82	>95
8	26,38	>6131	>165

Data představují minimální hodnoty, jelikož po zkouškách bylo nalezeno, že prostředek obsahuje okolo 20 % inaktivních nečistot.

Hodnoty uvedené v tabulce jsou hodnoty EC50 jako poměr NECA.

Zkratky TMS	trimethylsilyl
TFA	kyselina trifluoroctová
DMF	N,N-dimethylformamid
NECA	N-ethylkarboxamidoadenosin
DMAP	4-dimethylaminopyridin
TEMPO	2,2,6,6-tetramethyl-1~piperidinyloxy, volný radikál
TMSOTf	trimethylsilyltrifluormethylsulfonát
DBU	1,8-diazabicyklo[5.4.0]undec-7-en
BSA	bistrimethylsilylacetamid
DCM	dichlormethan
DAST	diethylaminosulfurtrifluorid
Ph	fenyl
CDI	karbonyldiimidazol
NSAID	nesteroidní protizánětlivé léčivo
Bn	benzyl

.........w w-w

Claims (27)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Sloučenina obecného vzorce I (i) kde R¹ a R² jsou vybrány ze souboru, který zahrnuje (i) C₃-8 cykloalkyl- (ii) atom vodíku, (iii) aryl₂CHCH2-, (iv) C3-8cykloalkylCi.₆alkyl- (v) Ci.₈alkyl-, (vi) arylGi-6alkyl-, (vii) R⁴R⁵N-Ci.₆alkyl-, (viii) C₁.6alkyl-CH(CH₂OH)- (ix) arylCi-5alkyl-CH(CH2OH)- (x) arylCi-5alkyl-C(CH₂OH)₂-, (xi) C3-8cykloalkyl nezávisle substituovaný jednou nebo více (například 1, 2 nebo 3) -(CH₂)_PR⁶ skupinami, (xii) H₂NC(=NH)NHCi.₆alkyl-, (xiii) skupinu obecného vzorce (0Η₂)_3χ

   X (CH/ nebo skupinu, ve které jeden nebo více atomů uhlíku sousedících s X nebo oba, pokud existují, je substituovaný methylovou skupinou, (xiv) -Ci.₆alkyl-OH, (xv) -Ci-shaloalkyl, (xvi) skupinu obecného vzorce

   4 4

   4 4 • 44 •

   4 4

   4 ·4 • 44 • Φ ΦΦ • ·444

   Φ 4·

   444 • Φ •

   • 4 •

   4 4# (CH₂)_cCO(CH₂)

   NR⁷ ^(CH₂)_e/ (xvii) aryl, a (xviii) -(CH2)fSO2NHg(Ci-4alkyl)2-g nebo -(CH2)fSO2NH_g(arylCi^alkyl)2^;

   R³ znamená methyl, ethyl, -CH=CH2, n-propyl, -CH₂CH=CH2, -CH=CHCH₃, izopropyl, izopropenyl, cyklopropyl, cyklopropenyl, cyklopropylmethyl, cyklopropenylmethyl, cyklobutyl, cyklobutenyl, -(CH₂)_qhalogen, -(CH2)hY(CH2)iH, (CH₂)_hCOOCH₃, -(CH₂)hOCOCH₃, -(CH₂)hC0N(CH2)mH((CH₂)nH), (CH₂)hCO(CH₂)oH nebo -CH₂C((CH2)uH)=NO(CH₂)_vH;

   Y znamená O, S nebo N(CH2)j·;

   a a b nezávisle znamenají celé číslo 0 až 4, s tím, že a + b je v rozsahu 3 až 5;

   c, d a e nezávisle znamenají celé Číslo 0 až 3, s tím, že c + d + e je v rozsahu 2 až 3;

   f znamená 2 nebo 3 a g znamená celé číslo 0 až 2;

   p znamená 0 nebo 1;

   q znamená 2 nebo 3;

   h znamená 2 nebo 3;

   i znamená celé číslo 0 až 2, tak, že h + i je v rozsahu 2 až 4;

   j znamená celé číslo 0 až 2, s tím, že h + i + j je v rozsahu 2 až 4;

   man nezávisle znamenají celé číslo 0 až 2, tak, že m + n je v rozsahu 0 až 2;

   o znamená celé číslo 0 až 2, tak, že h + o je celé číslo 2 až 3;

   u a v nezávisle znamenají 0 nebo 1, tak, že u + v je v rozsahu 0 až 1;

   R⁴ a R⁵ nezávisle znamenají vodík, Ci^alkyl, aryl, arylCi-ealkyl- nebo NR⁴R⁵ společně může znamenat pyrrolidinylový, piperidinylový, morfolinylový, azetidinylový, azepinylový, piperazinylový nebo N-Ci-6alkylpiperazinylový zbytek. R⁶ znamená OH, NH2, NHCOCH₃ nebo halogen;

   R⁷ znamená atom vodíku, Ci_6alkyl, C1 -salkylaryl nebo -COCi-6alkyl;

   X znamená NR⁷, O, S, SO nebo SO2;

   s tím, že když R³ znamená methyl, ethyl nebo izopropyl, pak R¹ a/nebo R² nezávisle musí znamenat:

   a) -(CH2)fSO₂NHg(Ci^alkyl-)2-g nebo (CH2)fSO₂NH_g(arylCMalkyl-)2^ kde f je 2 nebo 3 a g je celé číslo 0 až 2;

   • ♦ ·9

   9 999 9 99

   9·9 • ·

   b) C3-8cykloalkyl nezávisle substituovaný jednou nebo více skupin -(CH₂)pNHCOCH₃;

   c) skupinu obecného vzorce (CH₂)_h nebo skupinu, kde jeden methylenový atom uhlíku sousedí s X nebo oba, pokud jsou přítomné, jsou substituované methylem;

   d) skupinu obecného vzorce (CH₂)cCO(CH₂)d \

   NCOCH.

   (CH₂)_e a jejich soli a solváty.
2. 2. Sloučenina obecného vzorce i podle nároku 1, kde oba R¹ a R² nejsou vodík.
3. 3. Sloučenina podle nároku 1 nebo 2, kde R¹ znamená aryl₂CHCH2-, Ci^alkyl, vodík nebo arylCi^alkyl-.
4. 4. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, kde R¹ znamená Ph₂CHCH₂-
5. 5. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, kde R² znamená R⁴R⁵N-Ci^alkyl-, arylCi.₆alkyl, arylCi.5alkylCH(CH₂OH)-, arylCi.₆alkyl nebo Ci-6alkyl-CH(CH₂OH)-.
6. 6. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, kde R² znamená -(CH₂)2(pipendin1-yl).
7. 7. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6, kde R³ znamená C-i-3alkyl, cyklobutyl, cyklopropylmethyl, -(ΟΗ₂)₂ΟΟΟΟΗ3, -(CH₂)2-3OH nebo -(CH₂)2halogen.
8. 8. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7, kde R³ znamená n-propyl, 2propenyl, cyklobutyl, cyklopropylmethyl, -(CH₂)₂OCOCH3 nebo -(CH₂)2-3OH.

   ·* ·· · _e • · ♦ · · ··· * t · · · · ··

   999 9 9 ······«· · ♦ · * · ·9

   99 ·· _e<·
9. 9. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až 8, kde R⁴ a R⁵ nezávisle znamená vodík, Ci.₆alkyl nebo aryl nebo NR⁴R⁵ společně mohou znamenat pyrrolidinyl, piperidinyl, morfolinyl, azetidinyl, azepinyl, piperazinyl nebo N-methylpiperazinyl.
10. 10. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9, kde R⁶ znamená OH nebo NH2.
11. 11. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až 10, kde X znamená NR⁷, O, S nebo

    SO₂.
12. 12. Sloučenina obecného vzorce I, kterou je (2R,3R,4S,5R)-2-[6-(2,2-Difenylethylamino)-2-(2-piperidin-1-ylethylamino)purin-9-yl]-

    5-[2-(3-hydroxypropyl)-2H-tetrazol-5-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol;

    (2R,3R,4S,5R)-2-[6-(2,2-Difenylethylamino)-2-(2-piperidin-1-ylethylamino)purin-9-ylJ5-(2-propyl-2H-tetrazol-5-yl)tetrahydrofuran-3,4-diol;

    Ethylester 2-(5-{ 5R-[6-(2,2-difenylethylamino)-2-(2-piperidin-1 -ylethylamino)purin-9yl]-3S,4R-dihydroxytetrahydrofuran-2R-yl)tetrazol-2-yl)ethyl octové kyseliny;

    (2R,3S,4R,5R)-2-(2-Cyklopropylmethyl-2H-tetrazol-5-yl)-5-[6-(2,2-difenylethylamino)2-(2-piperidin-1-ylethylamino)purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol;

    (2R,3R,4S,5R)-2-[6-(2,2-Difenylethylamino)-2-(2-piperidin-1-ylethylamino)purin-9-ylJ5-[2-(2-hydroxyethyl)-2H-tetrazol-5-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol;

    (2R,3S,4R,5R)-2-[2-(2-Chlorethyl)-2H-tetrazol-5-yl]-5-[6-(2,2-difenylethylamino)-2piperidin-1-ylethylamino)purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol;

    (2R,3S,4R,5R)-2-(2-Cyklobutyl-2H-tetrazol-5-yl)-5-[6-(2,2-difenylethylamino)-2-(2piperidin-1 -ylethylamino)purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol (2R,3S,4R,5R)-2-(2-Allyl-2H-tetrazol-5-yl)-5-[6-(2,2difenylethylamíno)-2-(2-piperidin1-ylethylamino)purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol nebo jejich sůl nebo solvát.
13. 13. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu obecného vzorce I, podle nároků 1 až 12, nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo solvát ve směsi s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.

    • · • ·
14. 14. Sloučenina obecného vzorce I, podle kteréhokoliv z nároků 1 až 12 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát pro použití jako léčivo.
15. 15. Použití sloučeniny obecného vzorce I, podle kteréhokoliv z nároků 1 až 12 nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo solvátu pro přípravu léčiva pro léčbu zánětlivých nemocí.
16. 16. Způsob léčení nebo profylaxe zánětlivé nemoci, například astma, vyznačující se t í m, že zahrnuje podání pacientovi účinného množství sloučeniny obecného vzorce I, podle kteréhokoliv z nároků 1 až 12 nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo solvátu.
17. 17. Způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I, podle kteréhokoliv z nároků 1 až

    12, vyznačující se t í m, že zahrnuje (a) reakci sloučeniny obecného vzorce II kde L znamená odštépitelnou skupinu nebo její chráněný derivát, se sloučeninou R²NH2 nebo jejím chráněným derivátem, kde R¹, R² a R³ mají význam uvedený v nárocích 1 až 12; nebo

    b) přípravu sloučeniny vzorce I, v němž R¹ znamená atom vodíku redukcí sloučeniny obecného vzorce III o

    nebo jejího chráněného derivátu, kde R² a R³ mají význam definovaný v nárocích 1 až 12; nebo

    c) odstranění chránící skupiny u sloučeniny vzorce I, která je chráněna, načež se popřípadě, kde to je žádoucí, převede sloučenina obecného vzorce I nebo její sůl na jinou sůl.
18. 18. Způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I, podle kteréhokoliv z nároků 1 až

    12 bez podmínek; v y z n a č u j í c í se t í m, že zahrnuje

    a) reakci sloučeniny obecného vzorce X (X) se sloučeninou obecného vzorce XI

    R³ - L (XI) kde L znamená odštěpitelnou skupinu a R¹, R² a R³ mají význam definovaný v kterémkoliv z nároků 1 až 12; nebo

    b) reakci odpovídající sloučeniny obecného vzorce XII (XII) se sloučeninou obecného vzorce V nebo jejím chráněným derivátem, kde R¹ a R¹² mají význam uvedený v kterémkoliv z nároků 1 až 12.
19. 19. Způsob podle nároku 12, v y z n a č u j í c í se t í m, že je způsob přípravy sloučeniny (2R,3R,4S,5R)-2-[6-amino-2-(1S-hydroxymethyl-2-fenylethylamino)purin9-yl]-5-ethyl-2H-tetrazol-5-yl)tetrahydrofurarL3,4-diolu a jeho solí a solvátů.
20. 20. Způsob podle nároku 19, v y z n ač u j í c í se t í m, že zahrnuje reakci odpovídající sloučeniny vzorce se sloučeninou vzorce nebo jejím chráněným derivátem, kde L znamená odštěpitelnou skupinu.
21. 21, Sloučenina obecného vzorce II kde L znamená odštěpitelnou skupinu a R¹ má význam v kterémkoliv z nároků 1 až 12 a R³ znamená n-propyl, 2-propenyl, cyklobutyl, cyklopropylmethyl, -(CH₂)₂OCOCH₃ nebo -(CH₂)2-3OH nebo její chráněný derivát.
22. 22. Sloučenina obecného vzorce III * · (III) kde R² má význam definovaný v kterémkoliv z nároků 1 až 12 a R³ znamená npropyl, 2-propenyl, cyklobutyl, cyklopropylmethyl, -(CH₂)2OCOCH3 nebo -(CH₂)₂-3OH.
23. 23. Sloučenina obecného vzorce IIIA (ΠΙΑ) kde L znamená odštěpitelnou skupinu a R³ znamená n-propyl, 2-propenyl, cyklobutyl, cyklopropylmethyl, -(CH₂)2OCOCH₃ nebo -(CH₂)2-3OH nebo její chráněný derivát.
24. 24. Sloučenina obecného vzorce IV kde L¹ a L² znamená odštěpitelnou skupinu a R³ znamená n-propyl, 2-propenyl, cyklobutyl, cyklopropylmethyl, -(CH₂)2OCOCH3 nebo -(CH₂)2-3OH nebo její chráněný derivát.
25. 25. Sloučenina obecného vzorce V (V) kde L znamená odštěpitelnou skupinu a R³ znamená n-propyl, 2-propenyl, cyklobutyl, cyklopropylmethyl, -(CH₂)20C0CH₃ nebo -(CH₂)₂.₃OH nebo její chráněný derivát.
26. 26. Sloučenina obecného vzorce VI (VI) kde alk znamená Ci_6 alkyl, například methyl a R³ znamená n-propyl, 2-propenyl, cyklobutyl, cyklopropylmethyl, -(CH₂)₂OCOCH₃ nebo -(CH₂)₂.₃OH.
27. 27. Sloučenina obecného vzorce X kde R¹ a R² mají význam v kterémkoliv z nároků 1 až 12 nebo její chráněný derivát.