CS215112B2 - Storeable waterous cholestroloxidaze preparation containg the puffer and stabilization agent - Google Patents
Storeable waterous cholestroloxidaze preparation containg the puffer and stabilization agent Download PDFInfo
- Publication number
- CS215112B2 CS215112B2 CS788159A CS815978A CS215112B2 CS 215112 B2 CS215112 B2 CS 215112B2 CS 788159 A CS788159 A CS 788159A CS 815978 A CS815978 A CS 815978A CS 215112 B2 CS215112 B2 CS 215112B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- cholesterol oxidase
- sodium chloride
- cholestroloxidaze
- waterous
- storeable
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Vynález se týká skladovatelného vodného cholesteroloxidázového preparátu, obsahujícího pufr a stabilizační činidlo. Oblastí použití tohoto preparátu podle vynálezu je analytické stanovení cholesterolu a esterů cholesterolu.
Enzymatická účinnost proteinu je určena prostorovým uspořádáním zbytků aminokyselin v jeho polypeptidových řetězcích. Tato „konformace“ je ve vodném roztoku ovlivněna přítomností elektricky nabitých nebo nenabitých anorganických i organických molekul. Proto jsou enzymy ve vodném roztoku zpravidla velmi citlivé a snadno u nich dochází ke snížení účinnosti. Vodné enzymatické preparáty musí být proto stabilizovány.
O účinku nízkornolekulárních anorganických solí je známo, že jejich aniontové i kationtové složky mohou působit na konformaci enzymu buď více stabilizačně, nebo více denaturačně. Takovéto anionty a kationty jsou podle tohoto účinku zařazeny v tak zvané Hoffmeisterově řadě („Structure and Stability of biological Macromolecules“ od Timasheffa a Fasmana, nakl. Mercel Dekker, lne., New York, 1969, str. 427). Podle Hoffmeisterovy řady jsou anionty a kationty vždy nezávisle na sobě účinné buď více stabilizačně, nebo více denaturačně. V čele stabilizačního účinku jsou přitom síranový anion a kvartérní amoniové ionty, za nimiž následuje amoniový ion. Je proto snadno vysvětlitelné, že převážná část komerčních enzymových preparátů obsahuje jako stabilizační činidlo síran amonný, samotný nebo popřípadě s dalšími specifickými stabilizačními činidly. I cholesteroloxidáza je v komerčním vodném roztoku až dosud stabilizována síranem amonným.
Ukázalo se však, že stabilita cholesteroloxidázy v roztoku síranu amonného skýtá podnět к výtkám. Nejlepšího stabilizačního účinku bylo dosaženo asi při 1 M roztoku síranu amonného; tento účinek se však při vyšší koncentraci síranu amonného snižuje. Již při 1 M koncentraci však někdy dochází к vylučování hrubě vločkových mastných sraženin enzymu, které jsou sice stále ještě enzymaticky účinné, avšak ovlivňují dávkování při plnění.
Překvapivě bylo nyní zjištěno, že lze tuto obtíž odstranit a jednak zcela zabránit vylučování sraženin, jednak dosáhnout vynikající stabilizace, když se jako stabilizačního činidla použije chloridu sodného nebo chloridu draselného v koncentraci v rozmezí 2,0 až 3,5 M.
Předmětem vynálezu je proto skladovatelný vodný cholesteroloxidázový preparát, obsahující pufr a stabilizační činidlo, který se vyznačuje tím, že v 1 litru obsahuje jakožto stabilizační činidlo 2 až 3,5 molu chloridu sodného nebo chloridu draselného. Výhodně obsahuje chlorid sodný v koncentraci 2,5 až 3,2 M.
Nadřazený stabilizační účinek uvedených solí nebylo možno očekávat, poněvadž podle Hoffmeisterovy řady draslík a sodík stabilizují značně méně, to znamená desaktivují silněji než amonium, a i chlorid desaktivuje podstatně silněji než síran. K tomu ještě přistupuje, že — jak známo — flavinové enzymy, k nimž patří i cholesteroloxidáza, jsou desaktivovány chloridy alkalických kovů při ’ vyšší koncentraci (Theorell, v časopisu Acta Chem. Scand. 3, 1954, str. 1649 j.
Za výše uvedených podmínek dochází k dobré stabilitě při hodnotách pH v rozmezí 4,5 až 8,5. Cholesteroloxidázový preparát podle vynálezu má hodnotu pH výhodně v rozmezí 5,0 až 6,5. Molární koncentrace pufru je obecně v rozmezí 0,01 až 0,5 M/l, výhodné rozmezí je 0,01 až 0,1 M/l.
Jako pufrů je možno použít všech solí pufrujících ve výše uvedeném rozmezí, například fosforečnanu draselného, fosforečnanu sodného, · směsi fosforečnanu drasel ného a kyseliny citrónové, dále octanu sodného atd.
V jednotlivých případech sice již byly enzymy skladovány v roztocích chloridů alkalických kovů, byly však pro to směrodatně provozní důvody, například lepší schopnost krystalizace papainu v chloridu sodném ve srovnání s chloridem amonným nebo · čištění ' lectinů chromatograficky v roztocích chloridu sodného, takže bylo možno se smířit se zhoršenou stabilitou. Pro flavinové enzymy však nebyla taková forma skladování známa, poněvadž vede k odštěpení prostetické skupiny při hodnotách pH v kyselé oblasti.
Nadřazená stabilita při skladování cholesteroloxidázových preparátů _ podle vynálezu oproti cholesteroloxidázóvým preparátům stabilizovaným síranem amonným vyplývá z těchto pokusů:
Dávka cholesteroloxidázy s obsahem enzymu 450 j./ml v 0,05 M roztoku fosforečnanu draselného jakožto pufru, o pH 6, se nastaví na koncentraci soli uvedenou v následující tabulce I a udržuje se čtyři ' týdny při teplotě 4 °C, popřípadě +35 C°. Zbytková účinnost, zjištěná po uplynutí této doby, je patrná z tabulky (údaje po dvou týdnech jsou uvedeny v závorce).
Tabulka I druh ikoincenurace přísad teplota, na níž se zkoušená 3 M chlorid oxidáza udržuje 1 M síran amonný 3 M chlorid sodný draselný
| +4 °C | (100 %) | (96 %) | (100 o/o) |
| 100 % | 96 ·% | 100 % | |
| kalný | čirý | čirý | |
| +33 °C | (86 l%!) | (88 %) | (91 </) |
| 55 % | 88 · <% | 87 % | |
| kalný | čirý | čirý |
Nadřazené stabilizace podle vynálezu se dosahuje nezávisle na koncentraci enzymu a na dávce enzymu (jednotlivé · násady se často liší svou stabilitou) a stabilizace je ještě výraznější, · když se porovná nikoliv s 1 M roztokem síranu amonného, nýbrž· s 3· M roztokem síranu amonného.
Dvě různé dávky enzymu s výše uvede ným pufrem se nastaví · na koncentraci 300 j/ml, popřípadě 30 g/ml, a pak se — jak · výše popsáno — udržují čtyři týdny při teplotě 35 °C. V dále uvedené tabulce II jsou uvedeny zbytkové účinnosti měřené po čtyřech týdnech. V závorkách jsou uvedeny hodnoty po dvou týdnech.
Tabulka II dávka · koncentrace enzymu 1 M síran amonný 3 M síran amonný 3 M chlorid sodný
| 1 | 300 j/ml 30 j/ml | (73 O/o;) 58 % (77 O/o) 67 % | (68 %) 49 0/0 | (100 O/0) 92 % (100 %) 96 O/o |
| 2 | 300 j/ml | (73 %) 68 % | (100 o/0) 88 % | |
| 30 j/ml | (55 '%() 55 % | (87 %) 33 % | (100 · o/oí) 88 o/o |
Aby bylo doloženo, že nadřazená · stabilizace podle vynálezu je omezena na určitý rozsah koncentrace, byl při dávce enzymu o koncentraci 30 j/ml proveden výše popsaný test stárnutí při teplotě 4 OC, popřípadě °C, po dobu čtyř týdnů [dvou týdnů) s dvěma různými koncentracemi síranu · amonného a čtyřmi různými koncentracemi chloridu sodného. Výsledky jsou uvedeny v tabulce III.
Tabulka II I
| teplota | síran amonný chlorid amonný 1 M 3,2 M 2 M 3 M 4 M 5 M |
| +4 °C +35 °C | (95 «/o) 100%% (100%:)90%o (72 % ) 95 % (64 % ] 95 % (76 % ) 80 %o (100%) 80% (72 % J 46 % (61 %) 45 % (88%) 71 % (88 %) 77 % (26 %) 40 % (16 %.) 0 |
Níže je uveden příklad výroby a složení skladovatelného vodného chloresteroloxidázového preparátu podle vynálezu, stabilizovaného přídavkem chloridu sodného.
Příklad 1
100 ml suspenze cholesteroloxidázy v síranu amonném se dialyzuje proti nadbytku 0,07 molárního fosforečnanového pufru o pH 6,0. Dialyzát se zředí dialyzovým pufrem na enzymovou aktivitu 300 j. cholesteroloxldázy/ml a po přidání tuhého chloridu sodného se upraví na konečnou koncentraci 3 molů NaCl.
Takto vyrobený skladovatelný chlolesteroloxidázový preparát má toto složení:
cholesteroloxidáza 10g chlorid sodný 175g hydrofosforečnan dvojsodný1,5 g dihydrofosforečnan draselný8,1 g voda doplnit do 1000 g
Příklad 2
0,02 ml séra se přidá k 10,0 ml 0,5 M roztoku fosforečnanu draselného jakožto pufru, o pH 7,5, který obsahuje 0,4 % hydroxypolyethoxydodekanu. Ve spektrálním fotometru se odečte extinkce (EJ při 240 nm a . zahájí se reakce přidáním 0,02 ml (což odpovídá 0,5 j.) cholesteroloxidázy, obsahující 3,0 M chloridu sodného, 0,05 M fosforečnanu draselného, jakožto pufru, o pH 6,0.
Po 5 minutách se znovu odečte extinkce (E2). Koncentrace vzniklého A4-cholesten-3-onu a tím 1 volného cholesterolu vyplývá z rozdílu mezi prvním a druhým odečtením s přihlédnutím molárního extinkčního koeficientu pro A--cholesten-3-on při 240 nm (ε = 15,5 cm2/-mol).
Claims (3)
1. Skladovatelný vodný cholesteroloxidázový preparát, obsahující pufr a stabilizační činidlo, pro stanovení hladiny cholesterolu v biologickém materiálu, vyznačující se tím, že v 1 litru obsahuje · jakožto stabilizační činidlo 2 až 3,5 molu chloridu sodného nebo chloridu draselného, má hodnotu pH v rozmezí od 4,5 do 8,5 a koncen traci pufrovací soli v rozmezí od 0,01 do 0,5 M/l.
2. Cholesterol-oxidázový preparát podle bodu 1, vyznačující se tím, že v 1 litru obsahuje 2,5 až 3,2 molu chloridu sodného.
3. Cholesteroloxidázový preparát podle bodu 1, vyznačující se tím, že má hodnotu pH v rozmezí od 5 do 6,5.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2755799A DE2755799B1 (de) | 1977-12-14 | 1977-12-14 | Lagerfaehige Cholesterinoxidasepraeparation |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS215112B2 true CS215112B2 (en) | 1982-07-30 |
Family
ID=6026143
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS788159A CS215112B2 (en) | 1977-12-14 | 1978-12-08 | Storeable waterous cholestroloxidaze preparation containg the puffer and stabilization agent |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4366249A (cs) |
| EP (1) | EP0002438B1 (cs) |
| JP (1) | JPS5489015A (cs) |
| AT (1) | AT363893B (cs) |
| CA (1) | CA1108050A (cs) |
| CS (1) | CS215112B2 (cs) |
| DD (1) | DD140259A5 (cs) |
| DE (2) | DE2755799B1 (cs) |
| DK (1) | DK145614C (cs) |
| HU (1) | HU179431B (cs) |
| IL (1) | IL55946A (cs) |
| IT (1) | IT1099545B (cs) |
| ZA (1) | ZA786974B (cs) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5047327A (en) * | 1982-04-02 | 1991-09-10 | Ivan E. Modrovich | Time-stable liquid cholesterol assay compositions |
| JPS60194373U (ja) * | 1984-06-04 | 1985-12-24 | 株式会社ピ−エフユ− | フエライトコアの実装構造 |
| AU2008201734B2 (en) * | 1999-06-21 | 2012-07-05 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Method of pretreatment of sample for quantitating cholesterol and method for quantitating cholesterol in specific lipoproteins by using the same |
| PT1197564E (pt) * | 1999-06-21 | 2006-10-31 | Daiichi Pure Chemicals Co Ltd | Metodo de pre-tratamento de amostra para quantificar colestrol e metodo para quantificar colestrol em lipoproteinas especificas por utilizacao do mesmo |
| AU2015202990B2 (en) * | 1999-06-21 | 2017-11-02 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Method of pretreatment of sample for quantitating cholesterol and method for quantitating cholesterol in specific lipoproteins by using the same |
| JP4542234B2 (ja) * | 1999-06-21 | 2010-09-08 | 積水メディカル株式会社 | コレステロール定量用試料の前処理方法およびこれを利用する特定のリポ蛋白中のコレステロール定量法 |
| JP6124414B2 (ja) | 2012-04-27 | 2017-05-10 | 協和メデックス株式会社 | コレステロールオキシダーゼの安定化方法 |
| WO2022032148A1 (en) | 2020-08-06 | 2022-02-10 | Mate Precision Technologies Inc. | Tooling base assembly |
| US11759914B2 (en) | 2020-08-06 | 2023-09-19 | Mate Precision Technologies Inc. | Vise assembly |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2344567A1 (fr) * | 1976-03-17 | 1977-10-14 | Mitsubishi Chem Ind | Procede de preservation de glucose-isomerase et solution de glucose-isomerase |
| US4077842A (en) * | 1976-03-19 | 1978-03-07 | Cory Robert Paul | Stabilized glucose isomerase enzyme concentrate |
| JPS52143285A (en) * | 1976-05-26 | 1977-11-29 | Kikkoman Corp | Stabilization of cholesterol-oxydase |
-
1977
- 1977-12-14 DE DE2755799A patent/DE2755799B1/de active Granted
-
1978
- 1978-10-03 AT AT0712678A patent/AT363893B/de not_active IP Right Cessation
- 1978-10-04 DE DE7878101065T patent/DE2860583D1/de not_active Expired
- 1978-10-04 EP EP78101065A patent/EP0002438B1/de not_active Expired
- 1978-10-26 IT IT29156/78A patent/IT1099545B/it active
- 1978-11-02 DK DK489278A patent/DK145614C/da not_active IP Right Cessation
- 1978-11-08 CA CA315,983A patent/CA1108050A/en not_active Expired
- 1978-11-14 IL IL55946A patent/IL55946A/xx unknown
- 1978-11-30 DD DD78109434A patent/DD140259A5/de not_active IP Right Cessation
- 1978-12-08 CS CS788159A patent/CS215112B2/cs unknown
- 1978-12-12 JP JP15275878A patent/JPS5489015A/ja active Granted
- 1978-12-13 ZA ZA00786974A patent/ZA786974B/xx unknown
- 1978-12-13 HU HU78BO1754A patent/HU179431B/hu unknown
-
1982
- 1982-01-15 US US06/339,760 patent/US4366249A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA1108050A (en) | 1981-09-01 |
| DE2755799C2 (cs) | 1979-04-12 |
| US4366249A (en) | 1982-12-28 |
| IL55946A (en) | 1981-11-30 |
| IT7829156A0 (it) | 1978-10-26 |
| HU179431B (en) | 1982-10-28 |
| DE2860583D1 (en) | 1981-04-23 |
| JPS5724760B2 (cs) | 1982-05-26 |
| EP0002438B1 (de) | 1981-04-01 |
| DE2755799B1 (de) | 1978-08-03 |
| ATA712678A (de) | 1981-02-15 |
| DD140259A5 (de) | 1980-02-20 |
| DK145614C (da) | 1983-06-13 |
| EP0002438A1 (de) | 1979-06-27 |
| JPS5489015A (en) | 1979-07-14 |
| IL55946A0 (en) | 1979-01-31 |
| DK489278A (da) | 1979-06-15 |
| AT363893B (de) | 1981-09-10 |
| IT1099545B (it) | 1985-09-18 |
| ZA786974B (en) | 1979-12-27 |
| DK145614B (da) | 1982-12-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Levashov et al. | Enzymes entrapped into reversed micelles in organic solvents: Sedimentation analysis of the protein—aerosol OT-H2O-Octane system | |
| KR100417593B1 (ko) | 트레할로스를포함하는건조혈액인자조성물 | |
| Wohlrab | Molecular aspects of inorganic phosphate transport in mitochondria | |
| Van Dam et al. | A suggested mechanism of uncoupling of respiratory-chain phosphorylation. | |
| Bisaccia et al. | Kinetic characterization of the reconstituted tricarboxylate carrier from rat liver mitochondria | |
| HU200101B (en) | Process for producing stabilized pharmaceutical compositions containing human tissue plasminogene activator | |
| CS215112B2 (en) | Storeable waterous cholestroloxidaze preparation containg the puffer and stabilization agent | |
| Danisi et al. | Unidirectional influx of phosphate across the mucosal membrane of rabbit small intestine | |
| Kaufmann et al. | Purification, characterization and inhibition by fluoride of enolase from Streptococcus mutans DSM320523 | |
| DK147812B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af et stabilt lyofiliseret urokinasepraeparat | |
| Hayashi et al. | Factors affecting the interactions of collagen molecules as observed by in vitro fibril formation II. Effects of species and concentration of anions | |
| Nakaura et al. | Effects of missense mutations Phe110Ile and Glu244Asp in human cardiac troponin T on force generation in skinned cardiac muscle fibers | |
| CN111909922B (zh) | 一种高稳定性的肌酸激酶保护基质 | |
| KR100523537B1 (ko) | 우레아 함유 피부용 화장품 조성물_ | |
| Cavalieri et al. | The isolation of a dimer of gene 8 protein of bacteriophage fd | |
| Stipani et al. | Citrate transport in liposomes reconstituted with Triton extracts from mitochondria | |
| Cuenda et al. | Distances between functional sites of the Ca2++ Mg2+‐ATPase from sarcoplasmic reticulum using Co2+ as a spectroscopic ruler | |
| JPH0699325B2 (ja) | モノクロナ−ル抗体の安定化 | |
| Ahmad | Free energy changes in denaturation of ribonuclease A by mixed denaturants. Effects of combinations of guanidine hydrochloride and one of the denaturants lithium bromide, lithium chloride, and sodium bromide. | |
| Glerum et al. | The tricarboxylate carrier from rat liver mitochondria: Purification, reconstitution and kinetic characterization | |
| US6514940B2 (en) | Stabilized antithrombin III preparation | |
| Loghman-Adham | Renal and intestinal Pi transport adaptation to low phosphorus diet in uremic rats. | |
| JPS6112675B2 (cs) | ||
| WO1998049272A2 (en) | Enzyme concentrate | |
| Valente et al. | Isolation and characterization of the Mg2+-ATPase from rabbit skeletal muscle sarcoplasmic reticulum membrane preparations |