CN110702820B - 一种分离洋艾内酯a、b的hplc方法 - Google Patents

一种分离洋艾内酯a、b的hplc方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种分离洋艾内酯A、B的HPLC方法，色谱柱：Waters Sunfire C18液相色谱柱，规格为4.6mm×250mm、5μm；流动相：A相为体积百分浓度10％的甲醇水溶液，其中含有10mM手性添加剂；B相为体积百分浓度90％的甲醇水溶液，其中含有10mM手性添加剂；洗脱程序：0～5min，0％B；5～20min，0％～80％B；20～25min，80％～0％B；流速：1.0mL/min；柱温：35℃。本发明通过在流动相中添加手性添加剂D‑脯氨酰胺，无需借助手性色谱柱即可实现洋艾内酯A和洋艾内酯B的分离。因此本发明HPLC方法可用于检测洋艾内酯A中是否混有洋艾内酯B或洋艾内酯B中是否混有洋艾内酯A。

Description

一种分离洋艾内酯A、B的HPLC方法
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种分离洋艾内酯A、B的HPLC方法。
背景技术
洋艾内酯A和洋艾内酯B是一对同分异构体，其区别仅在一个连接-OH和-CH3的碳原子的手性不同，洋艾内酯A、B的化学结构式如下：
Figure BDA0002284060870000011
由于洋艾内酯A和洋艾内酯B的化学结构极其相似，普通的HPLC方法较难将二者分开，因而无法用于检测洋艾内酯A中是否混有洋艾内酯B或洋艾内酯B中是否混有洋艾内酯A。
为了高效分离洋艾内酯A和洋艾内酯B，特提出本发明。
发明内容
本发明是为了克服现有技术中存在的不足，提供一种分离洋艾内酯A、B的HPLC方法。
本发明技术方案如下：
一种分离洋艾内酯A和洋艾内酯B的HPLC方法，包括如下色谱参数：
色谱柱：Waters Sunfire C18液相色谱柱，规格为4.6mm×250mm、5μm；
流动相：A相为体积百分浓度10％的甲醇水溶液，其中含有10mM手性添加剂；B相为体积百分浓度90％的甲醇水溶液，其中含有10mM手性添加剂；洗脱程序：0～5min，0％B；5～20min，0％～80％B；20～25min，80％～0％B；
流速：1.0mL/min；
柱温：35℃。
进一步地，所述手性添加剂为D-脯氨酰胺。
进一步地，检测波长为234nm。
进一步地，进样量为10μL。
有益技术效果：
本发明通过在流动相中添加手性添加剂D-脯氨酰胺，可以有效分离洋艾内酯A和洋艾内酯B，基于该流动相的HPLC方法无需借助手性色谱柱即可实现手性化合物洋艾内酯A和洋艾内酯B的高效分离。因此本发明提供的HPLC方法可以用于检测洋艾内酯A中是否混有洋艾内酯B或洋艾内酯B中是否混有洋艾内酯A。
附图说明
图1为洋艾内酯A和洋艾内酯B的HPLC分离色谱图(手性流动相)，其中：A为洋艾内酯A对照品溶液，B为洋艾内酯B对照品溶液，C为混合对照品溶液；
图2为洋艾内酯A和洋艾内酯B的HPLC分离色谱图(普通流动相)，其中：A为洋艾内酯A对照品溶液，B为洋艾内酯B对照品溶液，C为混合对照品溶液。
具体实施方式
下面通过具体的实施例详细介绍本发明实质性内容，但不能以此限定本发明的保护范围。
一、试验材料
洋艾内酯A和洋艾内酯B纯度≥98％，手性试剂D-脯氨酰胺纯度≥99％。
甲醇为色谱纯，水为制水机生产的色谱用水。
Waters Sunfire C18液相色谱柱购自Waters，规格为4.6mm×250mm、5μm。
高效液相色谱仪为日本岛津公司HPLC色谱仪。
二、试验方法
1、溶液配制：
混合对照品溶液：分别精密称取洋艾内酯A、洋艾内酯B，用甲醇溶解，配制成洋艾内酯A、洋艾内酯B浓度分别为0.5mg/mL的溶液，临用现配。
洋艾内酯A对照品溶液：精密称取洋艾内酯A，用甲醇溶解，配制成洋艾内酯A浓度为0.1mg/mL的溶液，临用现配。
洋艾内酯B对照品溶液：精密称取洋艾内酯B，用甲醇溶解，配制成洋艾内酯B浓度为0.1mg/mL的溶液，临用现配。
流动相A相：精密称取D-脯氨酰胺，用体积比1:9的甲醇-水溶解，配制成含有10mMD-脯氨酰胺的溶液，超声脱气，临用现配。
流动相B相：精密称取D-脯氨酰胺，用体积比9:1的甲醇-水溶解，配制成含有10mMD-脯氨酰胺的溶液，超声脱气，临用现配。
2、色谱参数
色谱柱：Waters Sunfire C18液相色谱柱，规格为4.6mm×250mm、5μm；
流动相：A相为体积百分浓度10％的甲醇水溶液，其中含有10mM D-脯氨酰胺；B相为体积百分浓度90％的甲醇水溶液，其中含有10mM D-脯氨酰胺；洗脱程序：0～5min，0％B；5～20min，0％～80％B；20～25min，80％～0％B；
流速：1.0mL/min；
柱温：35℃；
检测波长：234nm。
3、注入分析
分析前，流动相A相和流动相B相分别使用装有0.45μm混合膜的抽滤漏斗抽滤，混合对照品溶液、洋艾内酯A对照品溶液、洋艾内酯B对照品溶液分别使用装有0.45μm滤头的过滤器过滤。分别精密量取10μL混合对照品溶液、洋艾内酯A对照品溶液、洋艾内酯B对照品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。
三、试验结果
图1为上述方法分析、记录的色谱图，从该色谱图可以看出，洋艾内酯A和洋艾内酯B实现了有效分离，基线分离程度高，并且洋艾内酯B出峰时间早于洋艾内酯A。
为了突出手性添加剂的作用，研究过程中还用对比方法对洋艾内酯A和洋艾内酯B进行分离，在该对比方法中，除了流动相不添加D-脯氨酰胺，其余色谱仪器、参数和操作方法完全一致，分离效果如图2所示，洋艾内酯A和洋艾内酯B共洗脱，无法有效分离。
以上实施例说明，本发明通过在流动相中添加手性添加剂D-脯氨酰胺，可以有效分离洋艾内酯A和洋艾内酯B，基于该流动相的HPLC方法无需借助手性色谱柱即可实现手性化合物洋艾内酯A和洋艾内酯B的高效分离。因此本发明提供的HPLC方法可以用于检测洋艾内酯A中是否混有洋艾内酯B或洋艾内酯B中是否混有洋艾内酯A。

Claims (2)

1.一种分离洋艾内酯A和洋艾内酯B的HPLC方法，其特征在于，包括如下色谱参数：
色谱柱：Waters Sunfire C18液相色谱柱，规格为4.6mm×250mm、5μm；
流动相：A相为体积百分浓度10%的甲醇水溶液，其中含有10mM手性添加剂；B相为体积百分浓度90%的甲醇水溶液，其中含有10mM手性添加剂；洗脱程序：0~5min，0% B；5~20min，0%~80% B；20~25min，80%~0% B；所述手性添加剂为D-脯氨酰胺；
流动相流速：1.0mL/min；
柱温：35℃；
检测波长：234nm。
2.根据权利要求1所述的HPLC方法，其特征在于：进样量为10μL。
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