CN107418902A - 一种香菇发酵用补料培养基及香菇液体深层连续培养方法 - Google Patents

一种香菇发酵用补料培养基及香菇液体深层连续培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于食用真菌液体深层发酵技术领域，具体涉及一种发酵生产香菇的补料培养基以及应用该补料培养基进行香菇液体深层连续发酵培养的方法。所述补料培养基按重量百分比计，包括4‑6％的葡萄糖、0.5‑1％的多聚蛋白胨、0.5‑1％的酵母浸粉、0.1‑0.3％的磷酸二氢钾、0.05‑0.15％的硫酸镁、0.05‑0.15％的氯化钙、0.3‑0.5％的豆油、0.01‑0.03％的吐温80、0.05‑0.15％的醋酸和91‑93％水。该补料培养基营养全面均衡，用于香菇液体深层连续培养，可有效延长香菇指数生长期，提高香菇液体深层培养效率及生物量，提高香菇多糖产率。

Description

一种香菇发酵用补料培养基及香菇液体深层连续培养方法
技术领域
本发明属于食用真菌液体深层发酵技术领域，具体涉及一种发酵生产香菇的补料培养基和应用该补料培养基进行香菇液体深层连续培养的方法。
背景技术
香菇多糖(Lentinan)(分子式：(C6H10O5)n)是从优质香菇子实体中提取的有效活性成分，具有免疫调节、抗肿瘤、抗感染、抗病毒、抗氧化、延缓衰老、保护肝脏等作用，主要应用于医药和保健品领域。香菇多糖能增强体液免疫和细胞免疫功能，可对抗流感病毒，是一种有待开发的抗流感保健食品。
香菇多糖的生产包括从天然或人工培养的香菇子实体中提取和从发酵培养的菌丝体和发酵液中提取两种方式。采用液体发酵技术生产菌丝体具有周期短、成本低、产量大，且有工业化生产前景等优势，是香菇多糖的主要生产方法。
目前现有的香菇液体发酵都是采用分批发酵的形式。分批发酵又称为分批培养，是指在一个密闭系统内投入有限数量的营养物质后，接入少量的微生物菌种进行培养，使微生物生长繁殖，在特定的条件下只完成一个生长周期的微生物培养方法。分批发酵的优点在于：对发酵条件要求宽泛，不用特意区分菌种类型，对不同菌种类型均可采用类似的方式进行发酵。
分批发酵虽然能够有效获得香菇菌丝体，进而提取香菇多糖。但香菇作为食用真菌，其与单细胞细菌相比，具有培养过程中延迟期长，指数生长期增长缓慢呈算术级增长的特点。因此，香菇液体分批发酵容易呈现出粘度大，贴壁生长，不耐受剪切等技术问题，从而导致香菇液体分批发酵生产效率低下。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种香菇发酵用补料培养基及香菇液体深层连续培养方法。
为了解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：
本发明提供了一种香菇发酵用补料培养基，其特征在于，按重量百分比计，包括4-6％的葡萄糖、0.5-1％的多聚蛋白胨、0.5-1％的酵母浸粉、0.1-0.3％的磷酸二氢钾、0.05-0.15％的硫酸镁、0.05-0.15％的氯化钙、0.3-0.5％的豆油、0.01-0.03％的吐温80、0.05-0.15％的醋酸和91-93％水。
优选的，所述的补料培养基按重量百分比计，还包括0.5-1.5％的木质素。
本发明还提供了一种香菇液体深层连续培养方法，包括如下步骤：
在液体发酵培养基中接种香菇种子液，在22-28℃条件下恒温发酵培养，所述发酵的过程中控制发酵液的溶氧不低于25％，pH值为3.5～4.0；
发酵8-12天后，以稀释率为0.01-0.04/h的补料速率向发酵液中加入权利要求1或2所述的补料培养基，继续连续发酵培养。
优选的，所述香菇种子液的制备方法包括如下步骤：
(1)以孢子液接种法在液体发酵培养基中接种香菇孢子，活化培养8-12天后，得活化菌种；
(2)以火焰接种的方法在液体发酵培养基中接种所述活化菌种，扩繁培养4-6天后，得香菇种子液。
优选的，所述液体发酵培养基按重量百分比计，独立包括4-6％的葡萄糖、0.2-0.3％的多聚蛋白胨、0.2-0.3％的酵母浸粉、0.1-0.3％的磷酸二氢钾、0.05-0.15％的硫酸镁、0.05-0.15％的氯化钙和93-95％水。
优选的，发酵过程中向发酵液中通入无菌空气，所述无菌空气的通气比为0.4-0.6vvm。
优选的，发酵过程中对发酵液进行搅拌，搅拌的初始速度为120-180rpm。
优选的，所述发酵过程中发酵液的pH用质量体积浓度为15～25％的氢氧化钠溶液调节。
优选的，所述液体发酵培养基和/或补料培养基经过灭菌处理；所述灭菌的条件独立为：温度120-122℃、压力103-115kpa；所述灭菌的时间独立为40-60min。
优选的，所述香菇种子液的接种量为0.5-2％。
有益效果：
本发明提供了一种香菇发酵用补料培养基，该补料培养基营养全面均衡，可有效延长香菇指数生长期，提高香菇液体深层培养效率及生物量，提高香菇多糖产率。将所述补料培养基进行香菇的液体深层连续发酵，可有效缩短香菇发酵的延迟期，延长香菇指数生长期至20天，提高香菇液体深层培养生物量72g/L，提高香菇多糖产量至10.8g/L。
本发明还提供了一种香菇液体深层连续发酵培养方法，解决了现有香菇液体分批发酵容易出现的粘度大、贴壁生长、不耐受剪切的技术问题。显著提高香菇菌丝体的生产效率，进而提高香菇多糖的产量。
进一步的，本发明还在连续培养的过程中添加木质素，以提高香菇菌丝的耐剪切力，刺激香菇生长，提高生物量。
本发明所述香菇液体深层连续发酵培养的效果详见表1：
表1：本发明所述香菇液体深层连续发酵培养效果表
具体实施方式
本发明提供了一种香菇发酵用补料培养基，按重量百分比计，包括4-6％的葡萄糖、0.5-1％的多聚蛋白胨、0.5-1％的酵母浸粉、0.1-0.3％的磷酸二氢钾、0.05-0.15％的硫酸镁、0.05-0.15％的氯化钙、0.3-0.5％的豆油、0.01-0.03％的吐温80、0.05-0.15％的醋酸和91-93％水。
优选的，所述补料培养基按重量百分比计，包括5％的葡萄糖、0.75％的多聚蛋白胨、0.75％的酵母浸粉、0.2％的磷酸二氢钾、0.1％的硫酸镁、0.1％的氯化钙、0.4％的豆油、0.02％的吐温80、0.1％的醋酸和92.58％的水。
在本发明中，补料培养基5％的葡萄糖、0.75％的多聚蛋白胨、0.75％的酵母浸粉、0.2％的磷酸二氢钾、0.1％的硫酸镁、0.1％的氯化钙与发酵培养基一致用于保证香菇的正常生长，豆油既可以作为碳源也可以起到消泡作用，吐温80起到豆油增溶的作用，醋酸既可以作为碳源也可以起到一定抑菌作用，保证补料培养基在长时间连续培养过程中不受杂菌污染。
本发明对上述各组分的来源没有特殊限定，常规市售即可。
由上述各用量比组分组合形成的补料培养基营养全面均衡，可有效延长香菇的指数生长期，进而实现香菇菌丝体的连续收获，提高香菇液体深层培养效率及生物量，提高香菇多糖产率。
本发明还提供了一种效果更好的补料培养基，按重量百分比计，包括4-6％的葡萄糖、0.5-1％的多聚蛋白胨、0.5-1％的酵母浸粉、0.1-0.3％的磷酸二氢钾、0.05-0.15％的硫酸镁、0.05-0.15％的氯化钙、0.3-0.5％的豆油、0.01-0.03％的吐温80、0.05-0.15％的醋酸、0.5-1.5％的木质素和91-93％水。
优选的，所述补料培养基按重量百分比计，包括5％的葡萄糖、0.75％的多聚蛋白胨、0.75％的酵母浸粉、0.2％的磷酸二氢钾、0.1％的硫酸镁、0.1％的氯化钙、0.4％的豆油、0.02％的吐温80、0.1％的醋酸、1％的木质素和91.58％的水。
在本发明中，所述木质素的作用在于刺激香菇生长，提高香菇菌丝的耐剪切力，方便香菇菌丝体的采收，避免因剪切力影响造成的菌丝体变形和产量下降，从而进一步地提高香菇菌丝以及香菇多糖的单位产量。
本发明对木质素的来源没有特殊限定，常规市售即可。
本发明对上述补料培养基的制备方法没有特殊限定，采用本领域的常规操作，只要能将上述各组分按规定比例配制成所需的混合水溶液，既得到本发明所述的补料培养基。
本发明还提供了一种香菇液体深层连续培养方法，包括如下步骤：在液体发酵培养基中接种香菇种子液，在22-28℃条件下恒温发酵培养，发酵过程中控制发酵液的溶氧不低于25％，pH值为3.5～4.0；发酵8-12天后，以稀释率为0.01-0.04/h的补料速率向发酵液中加入上述技术方案所述香菇发酵用补料培养基，继续连续发酵培养，8-12天后，开始进行连续的菌丝采收。
本发明在液体发酵培养基中接种香菇种子液，进行前期的恒温发酵培养。
在本发明中，所述液体发酵培养基选用本领域常规的香菇液体发酵培养基即可。作为优选的技术方案，所述的液体发酵培养基按重量百分比计，包括4-6％的葡萄糖、0.2-0.3％的多聚蛋白胨、0.2-0.3％的酵母浸粉、0.1-0.3％的磷酸二氢钾、0.05-0.15％的硫酸镁、0.05-0.15％的氯化钙和93-95％水。更优选的，所述液体发酵培养基按重量百分比计，包括5％的葡萄糖、0.25％的多聚蛋白胨、0.25％的酵母浸粉、0.2％的磷酸二氢钾、0.1％的硫酸镁、0.1％的氯化钙和94.1％的水。由上述各用量比的组分组合形成的液体培养基可满足香菇发酵初期的营养需求，有利于缩短香菇发酵延迟期。
在本发明更具体的实施方式中，所述液体发酵培养基经过灭菌处理后再接种香菇种子液。所述液体发酵培养基灭菌的温度为120-122℃，优选为121℃；压力为103-115kpa，优选为110kpa；灭菌时间为40-60min，优选为50min。在上述条件下进行灭菌，不会对培养基的组分造成破坏，同时可有效保证香菇接种后不受杂菌污染。
本发明对所述香菇种子液的具体制备方法或来源没有特殊限定，只要能作为香菇发酵的菌种来源即可。作为优选的技术方案，所述香菇种子液的制备方法包括如下步骤：
(1)以孢子液接种法在液体发酵培养基中接种香菇孢子，活化培养8-12天后，得活化菌种；
(2)以火焰接种的方法在液体发酵培养基中接种活化菌种，扩繁培养4-6天后，得香菇种子液。
本发明对所述香菇菌种的来源没有特殊限定，常规市售即可。
在本发明中，所述活化培养的温度为22-28℃，优选为25℃；活化培养过程中控制发酵液的溶氧量不低于25％，优选为不低于30％；发酵液的pH值为3.5～4.5；优选为4。在上述条件下进行活化培养，香菇可以在最短的时间内达到指数生长期。
活化培养过程中的液体发酵培养基选用本领域常规的香菇液体发酵培养基即可。作为优选的技术方案，所述的液体发酵培养基按重量百分比计，包括4-6％的葡萄糖、0.2-0.3％的多聚蛋白胨、0.2-0.3％的酵母浸粉、0.1-0.3％的磷酸二氢钾、0.05-0.15％的硫酸镁、0.05-0.15％的氯化钙和93-95％水。更优选的，所述液体发酵培养基按重量百分比计，包括5％的葡萄糖、0.25％的多聚蛋白胨、0.25％的酵母浸粉、0.2％的磷酸二氢钾、0.1％的硫酸镁、0.1％的氯化钙和94.1％的水。
在本发明中，所述孢子液接种法的接种量为5～15％，优选为10％。所述孢子液的孢子密度为105个/ml。
在本发明中，香菇菌种的活化培养时间为8～12天，优选为10天。
在本发明中，所述扩繁培养的温度为22-28℃，优选为香菇的最适生长温度25℃；活化培养过程中控制发酵液的溶氧量不低于25％，优选为不低于30％(通气量为0.5vvm，调整转速100-500rpm)；发酵液的pH值为3.5～4.5；优选为香菇的最适生长pH＝4。在上述条件下进行扩繁培养，以确保香菇在最短时间内达到对数生长期。
扩繁培养过程中的的液体发酵培养基选用本领域常规的香菇液体发酵培养基即可。作为优选的技术方案，所述的液体发酵培养基按重量百分比计，包括4-6％的葡萄糖、0.2-0.3％的多聚蛋白胨、0.2-0.3％的酵母浸粉、0.1-0.3％的磷酸二氢钾、0.05-0.15％的硫酸镁、0.05-0.15％的氯化钙和93-95％水。更优选的，所述液体发酵培养基按重量百分比计，包括5％的葡萄糖、0.25％的多聚蛋白胨、0.25％的酵母浸粉、0.2％的磷酸二氢钾、0.1％的硫酸镁、0.1％的氯化钙和94.1％的水。
在本发明中，所述火焰接种法的接种量为5～15％，优选为10％。
在本发明中，活化菌种的扩繁培养时间为4～6天，优选为5天，能使香菇菌体湿重达到30g/L即可。
在本发明中，液体发酵培养基中接种香菇种子液的接种量优选为0.5-2％，优选为1％，该接种量可有效缩短发酵罐中菌丝繁殖达到高峰的时间，使产物的形成提前到来，并可减少杂菌的生长机会，且更经济。
本发明在液体发酵培养基中接种香菇种子液后，进行恒温发酵培养。所述恒温发酵培养的条件如下：发酵温度为22-28℃，优选为25℃；发酵过程中控制溶氧量不低于25％，优选为不低于30％；发酵液的pH值为3.5～4.5；优选为4。在上述条件下发酵培养，可有效缩短香菇的发酵延迟期。
在本发明中，优选采用质量体积浓度为15～25％的氢氧化钠溶液控制所述发酵液的pH值，更优选为20％的氢氧化钠溶液，以确保发酵液pH环境维持在香菇最适生长pH。
在本发明的实施例2中，随着培养开始，发酵液中的pH和溶氧量如表2所示：
表2：发酵液的pH和溶氧变化表
本发明在恒温发酵8-12天后，进入指数生长期，此时向发酵液中加入上述香菇发酵用补料培养基，配合排放操作，保持发酵液体积恒定，进行连续的发酵培养。
所述连续发酵培养的条件如下：发酵温度为22-28℃，优选为25℃；发酵过程中控制溶氧量不低于25％，优选为不低于30％；发酵液的pH值为3.5～4.5；优选为4。在上述条件下连续培养，可有效延长香菇指数生长期，提高香菇深层培养的效率及生物量，同时提高香菇多糖的产率。
在本发明中，所述添加补料培养基的稀释率为0.01-0.04/h，优选为0.02-0.03/h。在该速率下持续补加补料培养基，可有效延长香菇的指数生长期至20天，提高香菇液体深层培养生物量，提高香菇多糖产量。
在本发明更具体的实施方式中，所述补料培养基经过灭菌处理后再加入到发酵液中。所述补料培养基灭菌的温度为120-122℃，优选为121℃；压力为103-115kpa，优选为110kpa；灭菌时间为40-60min，优选为50min。在上述条件下进行灭菌，不会对培养基的组分造成破坏，同时可有效保证补料培养基加入发酵液后，不会对发酵液造成杂菌。
本发明在连续发酵培养8-12天后，开始进行连续的菌丝采收工作。
下面结合实施例对本发明提供的香菇发酵用补料培养基及香菇液体深层连续培养方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
液体发酵培养基组分重量百分比如下：葡萄糖：5％；多聚蛋白胨：0.25％，酵母浸粉：0.25％，磷酸二氢钾：0.2％，硫酸镁：0.1％，氯化钙：0.1％，其余为自来水。
种子瓶制备：按配方要求制作1000ml液体发酵培养基，分装至500ml的三角烧瓶中，装液量为100ml，分装10瓶。分别以孢子液接种法将香菇孢子液接种到三角瓶中，控制温度为25℃，转速为150rpm，振荡培养10天即可使用。
种子罐的制备：以30L罐作为种子罐，按要求配制20L培养基，在121℃，110kpa的条件下，保持50min进行灭菌，灭菌后冷却至25℃。将上述1000ml种子液，以火焰接种的方法接入种子罐，向种子罐中通入无菌空气，通气比为0.5vvm。调整种子罐搅拌的转速，使发酵液的溶氧不低于30％，培养5天即可转接发酵罐。
发酵罐的制备：以100L罐作为发酵罐，按要求配制60L培养基，在121℃，110kpa的条件下，保持50min进行灭菌，灭菌后冷却至25℃。将种子罐培养液以1％的接种量，接入发酵罐。向发酵罐中通入无菌空气，通气比为0.5vvm。调整发酵罐中搅拌的转速，使发酵液的溶氧不低于30％，培养过程中用20％的氢氧化钠控制发酵液的pH在4.0，培养10天即可进入连续发酵阶段。
补料培养基组分重量百分比如下：葡萄糖：5％；多聚蛋白胨：0.75％，酵母浸粉：0.75％，磷酸二氢钾：0.2％，硫酸镁：0.1％，氯化钙：0.1％，豆油：0.4％，吐温80：0.02％，醋酸：0.1％，其余为自来水。
补料罐的制备：以30L罐作为补料罐，按配方要求配制20L补料培养基，在121℃，110kpa的条件下，保持50min进行灭菌，灭菌后冷却至25℃。当发酵罐培养至10天时，补料罐以稀释率D＝0.03h-1的速率开始补料，连续培养10天后开始收获菌丝。
实施例2
液体发酵培养基组分重量百分比如下：葡萄糖：5％；多聚蛋白胨：0.25％，酵母浸粉：0.25％，磷酸二氢钾：0.2％，硫酸镁：0.1％，氯化钙：0.1％，其余为自来水。
种子瓶制备：按配方要求制作1000ml液体发酵培养基，分装至500ml的三角烧瓶中，装液量为100ml，分装10瓶。分别以孢子液接种法将香菇孢子液接种到三角瓶中，控制温度为25℃，转速为150rpm，振荡培养8天即可使用。
种子罐的制备：以30L罐作为种子罐，按要求配制20L培养基，在121℃，110kpa的条件下，保持50min进行灭菌，灭菌后冷却至25℃。将上述1000ml种子液，以火焰接种的方法接入种子罐，向种子罐中通入无菌空气，通气比为0.5vvm。调整种子罐搅拌的转速，使发酵液的溶氧不低于30％，培养4天即可转接发酵罐。
发酵罐的制备：以100L罐作为发酵罐，按要求配制60L培养基，在121℃，110kpa的条件下，保持40min进行灭菌，灭菌后冷却至22℃。将种子罐培养液以0.5％的接种量，接入发酵罐。向发酵罐中通入无菌空气，通气比为0.4vvm。调整发酵罐中搅拌的转速，使发酵液的溶氧不低于25％，培养过程中用15％的氢氧化钠控制发酵液的pH在3.5，培养10天即可进入连续发酵阶段。
补料培养基组分重量百分比如下：葡萄糖：4％；多聚蛋白胨：0.5％，酵母浸粉：0.5％，磷酸二氢钾：0.1％，硫酸镁：0.05％，氯化钙：0.05％，豆油：0.3％，吐温80：0.01％，醋酸：0.05％，其余为自来水。
补料罐的制备：以30L罐作为补料罐，按配方要求配制20L补料培养基，在121℃，110kpa的条件下，保持40min进行灭菌，灭菌后冷却至22℃。当发酵罐培养至10天时，补料罐以稀释率D＝0.01h-1的速率开始补料，连续培养10天后开始收获菌丝。
实施例3
液体发酵培养基组分重量百分比如下：葡萄糖：5％；多聚蛋白胨：0.25％，酵母浸粉：0.25％，磷酸二氢钾：0.2％，硫酸镁：0.1％，氯化钙：0.1％，其余为自来水。
种子瓶制备：按配方要求制作1000ml液体发酵培养基，分装至500ml的三角烧瓶中，装液量为100ml，分装10瓶。分别以孢子液接种法将香菇孢子液接种到三角瓶中，控制温度为25℃，转速为150rpm，振荡培养12天即可使用。
种子罐的制备：以30L罐作为种子罐，按要求配制20L培养基，在121℃，110kpa的条件下，保持50min进行灭菌，灭菌后冷却至25℃。将上述1000ml种子液，以火焰接种的方法接入种子罐，向种子罐中通入无菌空气，通气比为0.5vvm。调整种子罐搅拌的转速，使发酵液的溶氧不低于30％，培养6天即可转接发酵罐。
发酵罐的制备：以100L罐作为发酵罐，按要求配制60L培养基，在121℃，110kpa的条件下，保持50min进行灭菌，灭菌后冷却至28℃。将种子罐培养液以2％的接种量，接入发酵罐。向发酵罐中通入无菌空气，通气比为0.6vvm。调整发酵罐中搅拌的转速，使发酵液的溶氧不低于25％，培养过程中用25％的氢氧化钠控制发酵液的pH在4.5，培养10天即可进入连续发酵阶段。
补料培养基组分重量百分比如下：葡萄糖：6％；多聚蛋白胨：1％，酵母浸粉：1％，磷酸二氢钾：0.3％，硫酸镁：0.15％，氯化钙：0.15％，豆油：0.5％，吐温80：0.03％，醋酸：0.15％，其余为自来水。
补料罐的制备：以30L罐作为补料罐，按配方要求配制20L补料培养基，在121℃，110kpa的条件下，保持60min进行灭菌，灭菌后冷却至28℃。当发酵罐培养至10天时，补料罐以稀释率D＝0.04h-1的速率开始补料，连续培养10天后开始收获菌丝。
实施例4
液体发酵培养基组分重量百分比如下：葡萄糖：5％；多聚蛋白胨：0.25％，酵母浸粉：0.25％，磷酸二氢钾：0.2％，硫酸镁：0.1％，氯化钙：0.1％，其余为自来水。
种子瓶制备：按配方要求制作1000ml液体发酵培养基，分装至500ml的三角烧瓶中，装液量为100ml，分装10瓶。分别以孢子液接种法将香菇孢子液接种到三角瓶中，控制温度为25℃，转速为150rpm，振荡培养10天即可使用。
种子罐的制备：以30L罐作为种子罐，按要求配制20L培养基，在121℃，110kpa的条件下，保持50min进行灭菌，灭菌后冷却至25℃。将上述1000ml种子液，以火焰接种的方法接入种子罐，向种子罐中通入无菌空气，通气比为0.5vvm。调整种子罐搅拌的转速，使发酵液的溶氧不低于30％，培养5天即可转接发酵罐。
发酵罐的制备：以100L罐作为发酵罐，按要求配制60L培养基，在121℃，110kpa的条件下，保持50min进行灭菌，灭菌后冷却至25℃。将种子罐培养液以1％的接种量，接入发酵罐。向发酵罐中通入无菌空气，通气比为0.5vvm。调整发酵罐中搅拌的转速，使发酵液的溶氧不低于30％，培养过程中用20％的氢氧化钠控制发酵液的pH在4.0，培养10天即可进入连续发酵阶段。
补料培养基组分重量百分比如下：葡萄糖：5％；多聚蛋白胨：0.75％，酵母浸粉：0.75％，磷酸二氢钾：0.2％，硫酸镁：0.1％，氯化钙：0.1％，豆油：0.4％，吐温80：0.02％，醋酸：0.1％，木质素：1％，其余为自来水。
补料罐的制备：以30L罐作为补料罐，按配方要求配制20L补料培养基，在121℃，110kpa的条件下，保持50min进行灭菌，灭菌后冷却至25℃。当发酵罐培养至10天时，补料罐以稀释率D＝0.03h-1的速率开始补料，连续培养10天后开始收获菌丝。
实施例5
按照实施例1-4的方式收获菌丝之后，按照如下方法进行香菇多糖的提取：称取香菇菌丝20g，加水400ml，煎煮60分钟，过滤，滤渣再加水300ml，煎煮60分钟，过滤，合并滤液，浓缩至40ml左右(室温)，加入乙醇使含醇量达60％，边加边搅，静置过夜。过滤，取沉淀，先加50ml 60％乙醇洗涤，再加适量95％的乙醇洗涤，80℃真空干燥，得到3g香菇多糖。
对比例1
除补料培养基的组分不同外，其他同实施例1。
补料培养基组分重量百分比如下：葡萄糖：3％；多聚蛋白胨：0.6％，酵母浸粉：0.6％，磷酸二氢钾：0.1％，硫酸镁：0.07％，氯化钙：0.06％，豆油：0.2％，吐温80：0.01％，醋酸：0.05％，其余为自来水。
对比例2
除补料培养基的组分不同外，其他同实施例1。
补料培养基组分重量百分比如下：葡萄糖：6％；多聚蛋白胨：0.9％，酵母浸粉：0.9％，磷酸二氢钾：0.4％，硫酸镁：0.2％，氯化钙：0.2％，豆油：0.6％，吐温80：0.04％，醋酸：0.2％，其余为自来水。
上述实施例1～4和对比例1～2所述方法进行香菇液体深层连续发酵培养的过程和结果如表3：
表3实施例1～4和对比例1～2所述方法的连续发酵培养效果表
结果表明：使用本发明权利要求1所述的补料培养基，可有效延长香菇指数生长期，提高香菇深层培养的效率及生物量，同时提高香菇多糖的产量。香菇菌丝未加木质素的转速上限500rpm，加木质素后转速上限提高至600rpm。说明木质素的添加提高了菌丝体的抗逆强度。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种香菇发酵用补料培养基，其特征在于，按重量百分比计，包括4-6％的葡萄糖、0.5-1％的多聚蛋白胨、0.5-1％的酵母浸粉、0.1-0.3％的磷酸二氢钾、0.05-0.15％的硫酸镁、0.05-0.15％的氯化钙、0.3-0.5％的豆油、0.01-0.03％的吐温80、0.05-0.15％的醋酸和91-93％水。
2.根据权利要求1所述的补料培养基，其特征在于，按重量百分比计，还包括0.5-1.5％的木质素。
3.一种香菇液体深层连续培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
在液体发酵培养基中接种香菇种子液，在22-28℃条件下恒温发酵培养，所述发酵的过程中控制发酵液的溶氧不低于25％，pH值为3.5～4.0；
发酵8-12天后，以稀释率为0.01-0.04/h的补料速率向发酵液中加入权利要求1或2所述的补料培养基，继续连续发酵培养。
4.根据权利要求3所述的香菇液体深层连续培养方法，其特征在于，所述香菇种子液的制备方法包括如下步骤：
(1)以孢子液接种法在液体发酵培养基中接种香菇孢子，活化培养8-12天后，得活化菌种；
(2)以火焰接种的方法在液体发酵培养基中接种所述活化菌种，扩繁培养4-6天后，得香菇种子液。
5.根据权利要求3或4所述的香菇液体深层连续培养方法，其特征在于，所述液体发酵培养基按重量百分比计，独立包括4-6％的葡萄糖、0.2-0.3％的多聚蛋白胨、0.2-0.3％的酵母浸粉、0.1-0.3％的磷酸二氢钾、0.05-0.15％的硫酸镁、0.05-0.15％的氯化钙和93-95％水。
6.根据权利要求3所述的香菇液体深层连续培养方法，其特征在于，发酵过程中向发酵液中通入无菌空气，所述无菌空气的通气比为0.4-0.6vvm。
7.根据权利要求3所述的香菇液体深层连续培养方法，其特征在于，发酵过程中对发酵液进行搅拌，搅拌的初始速度为120-180rpm。
8.根据权利要求3所述的香菇液体深层连续培养方法，其特征在于，所述发酵过程中发酵液的pH用质量体积浓度为15～25％的氢氧化钠溶液调节。
9.根据权利要求3所述的香菇液体深层连续培养方法，其特征在于，所述液体发酵培养基和/或补料培养基经过灭菌处理；所述灭菌的条件独立为：温度120-122℃、压力103-115kpa；所述灭菌的时间独立为40-60min。
10.根据权利要求3所述的香菇液体深层连续培养方法，其特征在于，所述香菇种子液的接种量为0.5-2％。
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