CN107406853A - 新颖的Bt毒素受体和使用方法 - Google Patents

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Abstract

本披露涉及Bt毒素抗性管理。一个实施例涉及对应于新颖的Bt毒素受体的多核苷酸和多肽的分离和表征。这些多核苷酸和多肽可用于鉴定或设计包含新颖的杀昆虫毒素的新颖的Bt毒素受体配体。

Description

新颖的Bt毒素受体和使用方法
发明领域
本披露涉及植物有害生物中Bt毒素易感性的操纵。一个实施例涉及新颖Bt毒素受体的核酸和多肽的分离和表征。核酸和多肽可用于改进杀昆虫剂，开发新的杀昆虫剂并且监测昆虫抗性。
发明背景
昆虫有害生物是全世界农作物损失中的一个主要因素。例如，粘虫摄食、黑色地老虎损害、或欧洲玉米蛀虫损害对农业生产者来说在经济上可能是破坏性的。仅来自在田间和甜玉米上的攻击的昆虫有害生物相关的作物损失每年在损失和控制费用方面已经达到约十亿美元。
传统上，种植者已经使用化学杀有害生物剂作为控制农业重要有害生物的手段。引入携带来自苏云金芽孢杆菌的δ-内毒素(Bt)的转基因植物提供了非化学的控制方法。传统上，Bt毒素通过其对特定昆虫类别的特定毒性来分类。例如，Cry1组的毒素对鳞翅目是有毒的。Cry1组包括但不限于：Cry1Aa、Cry1Ab和Cry1Ac。参见Hofte等人(1989)MicrobiolRev[微生物学评论]53：242-255。
鳞翅目昆虫对整个北美和世界的玉蜀黍作物造成相当大的损害。主要的有害生物之一是欧洲玉米螟(Ostrinia nubulalis)，通常称为欧洲玉米蛀虫(ECB)。编码来自Bt的晶体蛋白Cry1Ab和Cry1Ac的基因已经作为ECB控制和其他有害生物控制的手段被引入玉蜀黍中。这些转基因玉蜀黍杂合体已经有效地控制了ECB。然而，所形成的对Bt毒素的抗性对有害生物的控制提出了挑战。参见McGaughey等人(1998)Nature Biotechnology[自然生物技术]16：144-146；Estruch等人(1997)Nature Biotechnology[自然生物技术]15：137-141；Roush等人(1997)Nature Biotechnology[自然生物技术]15 816-817；以及Hofte等人(1989)Microbiol.Rev.[微生物学评论]53：242-255。
Cry1毒素的主要作用位点是易感昆虫幼虫如鳞翅目昆虫的中肠上皮的刷状缘膜。已经从各种鳞翅目物种表征了Cry1A毒素结合多肽。已经报道了与氨基肽酶N具有同源性的来自烟草天蛾、舞毒蛾、玉米穗虫和烟芽夜蛾的Cry1A(c)结合多肽。参见Knight等人(1994)Mol Micro.[分子微生物学]11：429-436；Lee等人(1996)Appl Environ Micro[应用与环境微生物学]63：2845-2849；Gill等人(1995)J Biol.Chem[生物化学杂志]270：27277-27282；以及Garczynski等人(1991)Appl Environ Microbiol[应用与环境微生物学]10：2816-2820。
另一个从烟草天蛾克隆的Bt毒素结合多肽(BTR1)与钙粘蛋白多肽超家族具有同源性，并结合Cry1A(a)、Cry1A(b)和Cry1A(c)。参见Vadlamudi等人(1995)J Biol Chem[生物化学杂志]270(10)：5490-4，Keeton等人(1998)Appl Environ Microbiol[应用与环境微生物学]64(6)：2158-2165；Keeton等人(1997)Appl Environ Microbiol[应用与环境微生物学]63(9)：3419-3425和美国专利号5,693,491。
从家蚕中分离出证实与Cry1A(a)结合的BTR1的同系物，如在以下各项中所述：Ihara等人(1998)Comparative Biochemistry and Physiology，Part B[比较生物化学与生理学，B部]120：197-204以及Nagamatsu等人(1998)Biosci.Biotechnol.Biochem.[生物科学 生物技术 生物化学]62(4)：727-734。此外，从烟芽夜蛾(烟草夜蛾幼虫)分离出还是钙粘蛋白超家族的成员的Bt-结合蛋白。参见Gahan等人(2001)Science[科学]293：857-860和Genbank登录号AF367362。
同样，Cry2类的Bt毒素对鳞翅目昆虫，并且具体来说，玉米穗虫是有毒的。Cry2Ab特异性地与玉米穗虫中肠组织结合于结合位点，该结合位点类似于其他Cry2A家族毒素的，但不同于Cry1Ac毒素的结合位点。参见Hemandez-Rodriguez等人(2008)Appl EnvironMicrobiol[应用与环境微生物学]74(24)：7654-7659。Cry2A类毒素的特异性受体尚未鉴定。此外，受体的结合位点改变已经被提议作为对Cry2A类毒素的抗性机制。参见Caccia等人(2010)Plos One 5(4)：e9975。
鉴定Bt毒素的植物有害生物结合多肽可用于调研Bt毒素-Bt毒素受体相互作用、选择和设计改进的毒素或其他杀昆虫剂、开发新颖的杀昆虫剂、以及筛选抗性或其他抗性管理策略和工具。
简要概述
提供了用于调节细胞对Bt毒素的易感性的组合物和方法。组合物包括来自鳞翅目昆虫玉米穗蛾(CEW，玉米穗虫)和欧洲玉米蛀虫(ECB，欧洲玉米螟)，秋粘虫(FAW，草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda))和大豆夜蛾(SBL，大豆尺蠖)的Bt毒素受体多肽及其片段和变体。还提供了编码多肽的核酸，对多肽具有特异性的抗体，以及用于在感兴趣的细胞中表达多肽的核酸构建体。
在此提供的方法可用于调研Bt毒素受体的结构-功能关系；调研毒素-受体相互作用；阐明Bt毒素的作用方式；筛选和鉴定包含新颖的杀昆虫毒素的新颖的Bt毒素受体配体；设计并开发新颖的Bt毒素受体配体；并产生对杀昆虫毒素具有改变的易感性的昆虫或昆虫群落。
在此提供的方法也可用于管理植物有害生物中的Bt毒素抗性，用于监测植物有害生物中的毒素抗性，以及用于保护植物免受植物有害生物的损害。
附图简要说明
图1A：使用40μg来自玉米穗虫(玉米穗蛾)的中肠衍生的刷状缘膜囊泡(BBMV)以及用Alexa-488(下文Alexa-488或Alexa；英杰生命技术公司(Life TechnologiesInvitrogen))荧光分子标记的10nM IP2.127(Alexa IP2.127)进行溶液内竞争结合测定，该IP2.127是通过用纯化的胰蛋白酶处理从全长IP2.127酶促衍生的，以模拟宿主中肠加工。用于IP2.127结合的结合缓冲液是由50mM碳酸钠/HCl(pH 9.6)、150mM NaCl、0.1％Tween 20组成的碳酸钠缓冲液。总结合样品(图上的“总”)在结合缓冲液中包含40μg来自玉米穗虫(玉米穗蛾)的BBMV和10nM Alexa IP2.127。非特异性结合样品(图上的“非特异性”)包含与总结合样品相同内容物，添加了1μM IP2.127，并反映了标记的IP2.127的非受体介导的相互作用。样品在室温下孵育，并且然后通过离心分离未结合的IP2.127，允许与BBMV结合的IP2.127经受SDS-PAGE。使用激光扫描仪通过凝胶内荧光监测结合信号，并通过光密度测定法进行定量。针对“非特异性”样品所测量的结合信号与针对“总”样品所测量信号之间的差异表示Alexa-IP2.127与其一种或多种受体在玉米穗虫BBMV中的特异性相互作用。
图1B：使用40μg来自欧洲玉米螟(欧洲玉米蛀虫)的中肠衍生的刷状缘膜囊泡(BBMV)以及用Alexa-488荧光分子标记的10nM IP2.127(Alexa IP2.127)进行溶液内竞争结合测定，该IP2.127是通过用纯化的胰蛋白酶处理从全长IP2.127酶促衍生的，以模拟宿主中肠加工。用于IP2.127结合的结合缓冲液是由50mM碳酸钠/HCl(pH 9.6)、150mM NaCl、0.1％Tween 20组成的碳酸钠缓冲液。总结合样品(图上的“总”)在结合缓冲液中包含40μg来自欧洲玉米螟(欧洲玉米蛀虫)的BBMV和10nM Alexa IP2.127。非特异性结合样品(图上的“非特异性”)包含与总结合样品相同内容物，添加了1μM IP2.127，并反映了标记的IP2.127的非受体介导的相互作用。样品在室温下孵育，并且然后通过离心分离未结合的IP2.127，允许与BBMV结合的IP2.127经受SDS-PAGE。使用激光扫描仪通过凝胶内荧光监测结合信号，并通过光密度测定法进行定量。针对“非特异性”样品所测量的结合信号与针对“总”样品所测量信号之间的差异表示Alexa-IP2.127与其一种或多种受体在欧洲玉米螟BBMV中的特异性相互作用。
图1C：使用20μg的来自草地贪夜蛾(秋粘虫)的中肠衍生的刷状缘膜囊泡(BBMV)以及用Alexa-488荧光分子标记的10nM IP2.127(Alexa IP2.127)进行溶液内竞争结合测定，该IP2.127是通过用纯化的胰蛋白酶处理从全长IP2.127酶促衍生的，以模拟宿主中肠加工。用于IP2.127结合的结合缓冲液是由50mM碳酸钠/HCl(pH 9.6)、150mM NaCl、0.1％Tween 20组成的碳酸钠缓冲液。总结合样品(图上的“总”)在结合缓冲液中包含20μg来自草地贪夜蛾(秋粘虫)的BBMV和10nM Alexa IP2.127。非特异性结合样品(图上的“非特异性”)包含与总结合样品相同内容物，添加了1μM IP2.127，并反映了标记的IP2.127的非受体介导的相互作用。样品在室温下孵育，并且然后通过离心分离未结合的IP2.127，允许与BBMV结合的IP2.127经受SDS-PAGE。使用激光扫描仪通过凝胶内荧光监测结合信号，并通过光密度测定法进行定量。
图1D：使用40μg来自大豆尺蠖(大豆夜蛾)的中肠衍生的刷状缘膜囊泡(BBMV)以及用Alexa-488荧光分子标记的5nM IP2.127(Alexa IP2.127)进行溶液内竞争结合测定，该IP2.127是通过用纯化的胰蛋白酶处理从全长IP2.127酶促衍生的，以模拟宿主中肠加工。用于IP2.127结合的结合缓冲液是由20mM CAPS、150mM NaCl、0.1％Tween 20组成的CAPS缓冲液(pH 10.5)。总结合样品(图上的“总”)在结合缓冲液中包含40μg来自大豆尺蠖(大豆夜蛾)的BBMV和5nM Alexa IP2.127。非特异性结合样品(图上的“非特异性”)包含与总结合样品相同内容物，添加了1μM IP2.127，并反映了标记的IP2.127的非受体介导的相互作用。样品在室温下孵育，并且然后通过离心分离未结合的IP2.127，允许与BBMV结合的IP2.127经受SDS-PAGE。使用激光扫描仪通过凝胶内荧光监测结合信号，并通过光密度测定法进行定量。
图2A：结合测定/共沉淀样品组成为：泳道1，结合缓冲液；泳道2，分子量标准品；泳道3，100nM生物素标记的IP2.127和1μM IP2.127；泳道4，100nM生物素标记的IP2.127；泳道5，1μM IP2.127；泳道6，500μg玉米穗虫BBMV；泳道7，1μM生物素标记的IP2.127和500μg玉米穗虫BBMV；泳道8，100nM生物素标记的IP2.127和500μg玉米穗虫BBMV；注意泳道6(在生物素标记的IP2.127不存在下的BBMV)中不存在的泳道7和8中的独特条带(由箭头指示)。从凝胶中提取出该独特条带，并且进一步分析。
图2B：结合测定/共免疫沉淀样品组成为：泳道1和8，分子量标准品；泳道2，结合缓冲液；泳道3，1μM IP2.127；泳道4，500μg欧洲玉米螟BBMV；泳道5，没有抗体的1μM IP2.127和500μg欧洲玉米螟BBMV；泳道6，1μM IP2.127和500μg欧洲玉米螟BBMV；泳道7，100nMIP2.127和500μg欧洲玉米螟BBMV；泳道9，用作凝胶标准品的100nM IP2.127(测定/共免疫沉淀样品)。注意第6道中具有箭头的独特条带，该独特条带也存在于泳道7中，但处于与IP2.127的较低浓度相一致的较低强度。从凝胶中提取出该独特条带，并且进一步分析。
图2C：结合测定/共免疫沉淀样品组成为：泳道1和8，分子量标准品；泳道2，结合缓冲液；泳道3，1μM IP2.127；泳道4，500μg草地贪夜蛾BBMV；泳道5，没有抗体的1μM IP2.127和500μg草地贪夜蛾BBMV；泳道6，1μM IP2.127和500μg草地贪夜蛾BBMV；泳道7，100nMIP2.127和500μg草地贪夜蛾BBMV；泳道9，用作凝胶标准品的100nM IP2.127(测定/共免疫沉淀样品)。从凝胶中提取出由箭头指示的条带，并且进一步分析。
图2D：结合测定/共免疫沉淀样品组成为：泳道1和8，分子量标准品；泳道2，结合缓冲液；泳道3，1uM IP2.127；泳道4，500μg大豆尺蠖BBMV；泳道5，没有抗体的1μM IP2.127和500μg大豆尺蠖BBMV；泳道6，1μM IP2.127和500μg大豆尺蠖BBMV；泳道7，100nM IP2.127和500μg大豆尺蠖BBMV；泳道9，用作凝胶标准品的100nM IP2.127(测定/共免疫沉淀样品)。从凝胶中提取出由箭头指示的条带，并且进一步分析。
图3A：图3A表示来自通过质谱鉴定的蛋白质条带的SEQ ID NO：2的肽序列。通过质谱鉴定的肽是粗体的。
图3B：图3B表示来自通过质谱鉴定的蛋白质条带的SEQ ID NO：4的肽序列。通过质谱鉴定的肽是粗体的。
图3C：图3C表示来自通过质谱鉴定的蛋白质条带的SEQ ID NO：8的肽序列。通过质谱鉴定的肽是粗体的。
图3D：图3D表示来自通过质谱鉴定的蛋白质条带的SEQ ID NO：10的肽序列。通过质谱鉴定的肽是粗体的。
图4：SEQ ID NO：2的描绘，其中菱形代表跨膜区域并且虚线表示通过质谱鉴定的肽序列。跨膜区域1是由约氨基酸22至约氨基酸65所定义的；跨膜区域2是由约氨基酸332至约氨基酸375所定义的；跨膜区域3是由约氨基酸375至约氨基酸418所定义的；跨膜区域4是由约氨基酸407至约氨基酸447所定义的；跨膜区域5是由约氨基酸479至约氨基酸522所定义的；跨膜区域6是由约氨基酸1116至约氨基酸1139所定义的；跨膜区域7是由约氨基酸1158至约氨基酸1201所定义的；跨膜区域8是由约氨基酸1195至约氨基酸1238所定义的；跨膜区域9是由约氨基酸1234至约氨基酸1267所定义的；跨膜区域10是由约氨基酸1261至约氨基酸1304所定义的；并且跨膜区域11是由约氨基酸1334至约氨基酸1377所定义的。
详细说明
本文提供的实施例涉及具有Bt毒素结合活性的新颖受体多肽，这些受体衍生自鳞翅目。本文披露的受体多肽衍生自包括以下科并且具有Bt结合活性的超家族：夜蛾科，具体而言是玉米穗虫、草地贪夜蛾、以及大豆尺蠖，和草螟科，具体而言是欧洲玉米螟。该多肽与蛋白质的ABC转运蛋白家族的成员，更具体地，与ABC转运蛋白亚家族A和G的成员具有同源性。
因此，一个实施例提供了包含如下核苷酸序列的分离的核酸分子：编码具有Bt毒素结合活性的在SEQ ID NO：2、4、6、8、10或12中所示的多肽的核苷酸序列；或SEQ ID NO：1、3、5、7、9或11的各自编码多核苷酸序列。进一步提供了本文所述的片段和变体多肽。
术语“核酸”是指所有形式的DNA(如cDNA)和RNA(如mRNA)，以及使用核苷酸类似物产生的DNA或RNA的类似物。核酸分子可以是单链的或双链的。链可以包括编码链或非编码链。
一个实施例涵盖分离的或实质纯化的核酸或多肽组合物。“分离的”或“纯化的”核酸分子或多肽、或其生物活性部分实质上不含其他细胞物质，或者当通过重组技术产生时实质上不含培养基，或者当经化学合成时实质上不含化学前体或其他化学品。“分离的”核酸可以不含在衍生出该核酸的生物体的基因组DNA中天然地位于该核酸侧翼的的序列(即，位于该核酸的5′和3′末端的序列)(优选编码多肽的序列)。例如，在一个实施例中，分离的核酸分子可以包含小于约5kb、4kb、3kb、2kb、1kb、0.5kb、或0.1kb的核酸序列，该核酸序列在衍生出该核酸的细胞的基因组DNA中天然地位于该核酸分子的侧翼。一个实施例考虑实质上不含细胞物质的多肽，该细胞物质包括具有小于约30％、20％、10％、5％(以干重计)的污染多肽的多肽制剂。当重组产生多肽或其生物活性部分时，培养基可以代表小于约30％、20％、10％、或5％(以干重计)的化学前体或非感兴趣多肽的化学品。
在另一个实施例中，多肽制剂可以包含不干扰多肽具体所需活性的污染物质。组合物还涵盖所披露的核苷酸序列的片段和变体以及由此编码的多肽。在一个实施例中，片段包含跨膜片段(图4)。
除了其他用途之外，多核苷酸组合物可用于在感兴趣的细胞中表达受体多肽以产生所述多肽的细胞或分离制剂，用于调研Bt毒素受体的结构-功能和/或序列-功能关系，评估毒素-受体相互作用，阐明Bt毒素的作用方式，筛选测试化合物以鉴定包括新颖的杀昆虫毒素的新颖的Bt毒素受体配体，并且设计并开发包括新颖的杀昆虫毒素的新颖的Bt毒素受体配体。
编码实施例的受体多肽的分离的多核苷酸可以在感兴趣的细胞中表达；并且所产生的Bt毒素受体多肽可用于完整的细胞或体外受体结合测定、和/或完整细胞毒性测定。Bt毒素结合和毒性测定的方法和条件是本领域已知的，并且包括但不限于美国专利号：5,693,491；T.P.Keeton等人(1998)Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]64(6)：2158-2165；B.R.Francis等人(1997)Insect Biochem.Mol.Biol.[昆虫生物化学与分子生物学]27(6)：541-550；T.P.Keeton等人(1997)Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]63(9)：3419-3425；R.K.Vadlamudi等人(1995)J.Biol.Chem.[生物化学杂志]270(10)：5490-5494；Ihara等人(1998)Comparative Biochem.Physiol.B[比较生物化学与生理学B]120：197-204；以及Nagamatsu等人(1998)Biosci.Biotechnol.Biochem.[生物科学生物技术生物化学]62(4)：727-734。
如本文所用，“Bt毒素”是指编码苏云金芽孢杆菌蛋白质的基因，其衍生物或基于其建模的合成多肽。参见，例如，Geiser，等人，(1986)Gene[基因]48：109，其披露了Bt δ-内毒素基因的克隆和核苷酸序列。此外，编码δ-内毒素基因的DNA分子可购自美国典型培养物保藏中心(罗克维尔(Rockville)，马里兰州)，例如在登录号40098、67136、31995和31998下。这些类别的苏云金芽孢杆菌杀昆虫蛋白的成员包括但不限于：本领域技术人员熟知的Cry蛋白(参见，Crickmore，等人，“Bacillus thuringiensis toxin nomenclature[苏云金芽孢杆菌毒素命名法]”(2011)，在可以使用“www”前缀在万维网上访问的lifesci.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/)。
“感兴趣的细胞”是指其中本文披露的多肽的表达是所希望的任何细胞。感兴趣的细胞包括但不限于：哺乳动物、禽类、昆虫、植物、细菌、真菌和酵母细胞。感兴趣的细胞包括但不限于：所培养的细胞系，原代细胞培养物、体内细胞、和转基因生物体的细胞。
如本文所用，“修饰的”或“改变的”序列是指与野生型序列不同的序列。在一个实施例中，修饰或改变的多核苷酸序列与SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、或13-15不同。在另一个实施例中，修饰或改变的氨基酸序列与SEQ ID NO：2、4、6、8、10或12不同。在一个实施例中，可以筛选序列中的修饰或改变以确定对Bt毒素的改变的易感性。所实施的方法考虑了本文披露的多肽和多核苷酸在受体结合和/或毒性测定中筛选测试化合物以鉴定新颖的Bt毒素受体配体(包括受体激动剂和拮抗剂)或筛选抗性的用途。测试化合物包括可从由组合合成方法产生的小分子的不同文库获得的分子。测试化合物还包括但不限于：抗体、结合肽、和被设计或推断与本实施例的受体多肽相互作用的其他小分子。测试化合物还可以包括受体的肽片段、抗受体抗体、模仿毒素的一个或多个受体结合结构域的抗独特型抗体、结合肽、嵌合肽、和融合物、或异源多肽，其通过将两个或更多个毒素或其片段，如本文披露的受体的细胞外部分等组合而产生。通过实施例的筛选方法所鉴定的配体包括潜在的新颖的杀昆虫毒素，其杀昆虫活性可以通过已知方法确定；例如，如美国专利号中所描述的：5,407,454、5,986,177、和6,232,439。
在一个实施例中，方法涉及分离昆虫中肠毒素的受体，这些方法包括解剖昆虫中肠组织；对该昆虫中肠组织进行膜富集步骤，如BBMV制备；用昆虫毒素在富集的膜上进行溶液内结合测定；并且进行亲和纯化，其中该毒素是该亲和纯化靶标。在另一个实施例中，可以对整个昆虫进行膜富集步骤。在另一个实施例中，亲和纯化可以在溶液内结合步骤之前进行。在一个实施例中，亲和纯化靶标是昆虫毒素。在另一个实施例中，亲和纯化靶标是受体多肽。
该实施例提供了用于筛选与本文披露的多肽结合的配体的方法。多肽及其片段(例如，毒素结合肽)都可以用于化合物的筛选测定，这些化合物与受体肽结合并且表现出所需结合特征。所需结合特征包括但不限于：结合亲和力、结合位点特异性、缔合和解离速率等。筛选测定可以在完整细胞中或在体外测定中进行，这些测定包括将配体结合结构域暴露于样品配体并检测配体结合多肽复合物的形成。测定可以是直接配体-受体结合测定，配体竞争测定、或被设计用于测量结合对转运蛋白功能(例如ATP水解，构象变化、或溶质转运)的影响的间接测定。
这些方法包括提供至少一个本文披露的Bt毒素受体多肽，在促进结合的条件下，将多肽与样品和对照配体接触，并确定样品配体相对于对照配体的结合特征。用于进行结合测定的方法是本领域已知的。针对体外结合测定，多肽可以作为分离的、裂解的、或均质的细胞制剂来提供。分离的多肽可以在溶液中提供，或固定在基质上。用于固定多肽的方法是本领域熟知的，并且包括但不限于具有市售高亲和力配体的融合多肽的构建和使用。例如，GST融合蛋白可以吸附在谷胱甘肽琼脂糖凝胶珠(西格玛化学品公司(SigmaChemical)，圣路易斯，密苏里州)上或谷胱甘肽衍生的微量滴定板上。也可以使用生物素和链霉亲和素固定多肽，或通过本领域已知的技术将多肽化学偶联(连接)到基质中。可替代地，这些多肽可以在完整的细胞结合测定中提供，其中这些多肽通常表达为细胞表面Bt毒素受体。
本披露提供了使用完整细胞毒性测定来筛选与本文披露的受体多肽结合的配体并对在Bt毒素的存在下表达多肽的感兴趣的细胞赋予毒性的方法。通过该筛选所选择的配体是对于表达受体多肽(特别是肠内表达受体多肽)的昆虫的潜在的杀昆虫毒素。具体Bt毒素的昆虫特异性可以通过特定昆虫物种中受体的存在来确定。毒素的结合可能对一些昆虫物种的受体是特异性的，并且同时对其他变体受体是不显著的或非特异性的。参见，例如Hofte等人(1989)Microbiol Rev[微生物学评论]53：242-255。毒性测定包括在表达实施例的多肽的完整细胞中将多肽的毒素结合结构域暴露于样品配体并检测在表达多肽的细胞中受影响的毒性。“毒性”是指降低的细胞活力。“活力”是指在特定细胞毒剂的不存在下细胞以该细胞特征的方式增殖和/或分化和/或维持其生物特征的能力。
在一个实施例中，这些方法包括提供至少一个包括SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12或其细胞外毒素结合结构域的细胞表面Bt毒素受体多肽，在促进结合的条件下将受体多肽与样品和对照配体接触，并相对于对照配体，确定表达细胞表面Bt毒素受体多肽的细胞活力。
“接触”是指将样品和对照试剂呈递到实施例的多肽的预期配体结合位点。
“促进结合的条件”是指物理和生物化学条件的任何组合，其使本实施例的多肽的配体能够在背景水平上结合预期多肽。用于将Cry2毒素与Bt毒素受体结合的此类条件的实例，以及用于评估该结合的方法是本领域已知的，并且包括但不限于以下各项中所述的那些：Keeton等人(1998)Appl Environ Microbiol[应用与环境微生物学]64(6)：2158-2165；Francis等人(1997)Insect Biochem Mol Biol[昆虫生物化学与分子生物学]27(6)：541-550；Keeton等人(１997)Appl Environ Microbiol[应用与环境微生物学]63(9)：3419-3425；Vadlamudi等人(1995)J Biol Chem[生物化学杂志]270(10)：5490-5494；Ihara等人(1998)Comparative Biochemistry and Physiology，PartB[比较生物化学与生理学，B部]120：197-204；以及Nagamatsu等人(1998)Biosci.Biotechnol.Biochem.[生物科学生物技术生物化学]62(4)：727-734。在此方面，也可以使用用于研究蛋白质-蛋白质相互作用的市售方法，如酵母和/或细菌双杂交系统。双杂交系统可从例如Clontech(帕洛阿尔托，加利福尼亚州)或Display Systems Biotech公司(维斯塔(Vista)，加利福尼亚州)获得。
本文披露的组合物和筛选方法可用于设计和开发包括新颖的杀昆虫毒素的新颖的Bt毒素受体配体。各种候选配体；针对结合、毒性、和物种特异性所筛选和表征的配体；和/或具有已知特征和特异性的配体可以被连接或修饰以产生具有特别期望的特征和特异性的新颖的配体。用于评估结合、毒性和杀昆虫活性的本文所述的方法可以用于筛选和表征新颖的配体。
本文披露的组合物和筛选方法可用于设计和开发新颖的Bt毒素受体-配体复合物，其中受体和配体都在同一细胞中表达。“复合物”是指使受体与配体的缔合足以防止与细胞中配体的其他相互作用。受体可以是本文所述的受体，或其变体或片段。此外，受体可以是保留本文所述的受体多肽的生物学活性的异源多肽。
在一个实施例中，将编码受体的序列及其变体和片段与酵母和细菌双杂交系统一起使用以筛选感兴趣的Bt毒素(例如，更具体和/或更有效的毒素)或筛选结合受体并可用于开发新颖的杀昆虫剂的昆虫分子。
“连接”是指在两个或更多个分子之间产生共价键。可用于修饰和/或连接多肽配体如毒素的方法包括诱变和引起重组方法，包括但不限于定点诱变、嵌合多肽构建、和DNA改组。多肽修饰方法还包括用于共价修饰多肽的方法。“可操作地连接”意指所连接的分子通过连接执行预期的功能。
组合物和筛选方法可用于将配体靶向表达受体多肽的细胞。为了靶向，将不结合受体多肽的次级多肽和/或小分子与一个或多个结合本文披露的受体多肽的主要配体连接，这些主要配体包括但不限于Cry2A毒素，并且更具体地是IP2.127毒素(SEQ ID NO：20和21)、其变体或片段。(参见，美国专利号：7,208,474的SEQ ID NO：133和134)。通过连接，可以将连接到主要配体的任何多肽和/或小分子靶向受体多肽，从而靶向表达受体多肽的细胞；其中配体结合位点可在细胞的细胞外表面获得。
在一个实施例中，将至少一种次级多肽毒素与主要Cry2A毒素连接，该主要Cry2A毒素能够结合SEQ ID NO：2、4、6、8、10、或12的受体多肽，以产生所靶向的并且对表达主要毒素的受体的昆虫有毒性的毒素。这种昆虫包括鳞翅目那些，超家族包括：夜蛾科，具体而言是玉米穗虫、草地贪夜蛾、以及大豆尺蠖，和草螟科，具体而言是欧洲玉米螟。这种组合毒素对于消除或减少对主要毒素已经形成抗性的昆虫的作物损害特别有用。
为了在感兴趣的细胞中表达SEQ ID NO：2、4、6、8、10、或12的Bt毒素受体多肽、变体或片段，该Bt毒素受体序列可以在表达盒中提供。该盒可以包括可操作地连接到Bt毒素受体序列上的5’和3’调节序列。在此方面，“可操作地连接”是指在启动子和第二序列之间的功能性连接，其中该启动子序列启动并介导对应于第二序列的DNA序列的转录。关于核酸，通常，可操作地连接意味着所连接的核酸序列是连续的，并且在需要结合两个多肽编码区域时，是连续的并在同一阅读框中。该盒可以另外包含至少一种待共转化入生物体中的额外的基因。可替代地，一种或多种额外的基因可以在多个表达盒上提供。
这样的表达盒可以配备有多个用于将Bt毒素受体序列插入到调节区域的转录调节下的限制性位点。该表达盒可另外包含选择性标记基因。
该表达盒以5’-3’转录方向包含转录和翻译起始区域(即启动子)、Bt毒素受体核苷酸序列、和在宿主细胞中起作用的转录和翻译终止区域(即终止区域)。转录起始区域，启动子，对植物宿主和/或对Bt毒素受体序列可以是天然的或类似的，或者是外源的或异源的。此外，该启动子可以是天然序列或者，可替代地，是合成序列。当启动子对于植物宿主是“外源的”或“异源的”时，其意指在引入该启动子的天然宿主细胞中没有发现该启动子。当启动子对Bt毒素受体序列是“外源的”或“异源的”时，其意指该启动子不是可操作地连接的Bt毒素受体序列的天然或天然存在的启动子。
异源启动子或天然启动子序列可用于构建体设计。这样的构建体可以改变感兴趣的细胞中Bt毒素受体的表达水平，导致细胞表型的改变。
该终止区域可以与该转录起始区域一起是天然的，可以与感兴趣的可操作地连接的DNA序列一起是天然的，可以与该宿主植物一起是天然的，或者可以衍生自另一种来源(即，对于该启动子、该感兴趣的Bt毒素受体序列、该宿主植物、或其任何组合是外源的或异源的)。方便的终止区域可从根瘤土壤杆菌的Ti-质粒获得，如章鱼碱合酶和胭脂氨酸合酶终止区域。还参见Guerineau等人(1991)Mol.Gen.Genet.[分子遗传和基因组学]262：141-144；Proudfoot(1991)Cell[细胞]64：671-674；Sanfacon等人(1991)Genes Dev.[基因与发育]5：141-149；Mogen等人(1990)Plant Cell[植物细胞]2：1261-1272；Munroe等人(1990)Gene[基因]91：151-158；Ballas等人(1989)Nucleic Acids Res.[核酸研究]17：7891-7903；以及Joshi等人(1987)Nucleic Acids Res.[核酸研究]15：9627-9639。
在适当的情况下，可以优化基因以在感兴趣的特定转化细胞中增加表达。也就是说，可以使用宿主细胞优选的密码子来合成基因以改进表达。
额外的序列修饰可增强细胞宿主中的基因表达。这些包括：消除编码假的聚腺苷酸化信号和外显子-内含子剪接位点信号的序列、转座子样重复序列、及可能不利于基因表达的其他经充分表征的序列。可将序列的G-C含量调整至通过参考宿主细胞中表达的已知基因而计算出的给定细胞宿主的平均水平。当可能时，修饰序列以避免出现预测的发夹二级mRNA结构。
表达盒可另外在表达盒构建体中包含5′前导序列。这些前导序列可以起到增强翻译的作用。翻译前导序列是本领域已知的并且包括：小核糖核酸病毒前导序列，例如，EMCV前导序列(脑心肌炎5’非编码区；Elroy-Stein等人(1989)PNAS USA 86：6126-6130)；马铃薯Y病毒组前导序列，例如，TEV前导序列(烟草蚀纹病毒；Allison等人(1986))；MDMV前导序列(玉米矮花叶病毒)、及人类免疫球蛋白重链结合多肽(BiP)(Macejak等人(1991)Nature[自然]353：90-94)；来自苜蓿花叶病病毒的外壳多肽mRNA的非翻译前导序列(AMV RNA 4)(Jobling等人(1987)Nature[自然]325：622-625)；烟草花叶病毒前导序列(TMV；Gallie等人(1989)，Molecular Biology of RNA[RNA的分子生物学]，Cech编辑(利斯公司(Liss)，纽约)，第237-256页)；和玉米褪绿斑驳病毒前导序列(MCMV；Lommel等人(1991)Virology[病毒学]81：382-385)。还参见，Della-Cioppa等人(1987)Plant Physiol.[植物生物学]84：965-968。还可以利用其他增强翻译的方法，例如内含子等。
在制备表达盒时，可以操作各种DNA片段，以提供处于适当方向以及合适时，处于适当阅读框中的DNA序列。为此，可采用衔接子(adapter)或接头以连接DNA片段，或可以涉及其他操纵以提供方便的限制位点、移除多余的DNA、移除限制位点等。出于这个目的，可以涉及体外诱变、引物修复、限制性酶切(restriction)、退火、再取代(例如转换和颠换)。
使用本文披露的核酸，多肽可以在感兴趣的任何细胞中表达，细胞的具体选择取决于如下因素，如所需表达水平和/或受体活性。感兴趣的细胞包括但不限于：哺乳动物、植物、昆虫、细菌、和酵母宿主细胞。启动子、终止子和其他表达载体组分的选择也将取决于所选择的细胞。细胞在非天然条件下(例如数量，组成，位置和/或时间)产生蛋白质，因为它们已通过人为干预进行遗传改变而这样做。
本领域技术人员在可用于表达编码本实施例的蛋白质的核酸的众多表达系统方面是了如指掌的。简而言之，编码本实施例的蛋白质的分离的核酸的表达将通常通过将例如DNA或cDNA可操作地连接至启动子，然后并入表达载体中来实现。载体可以适用于原核生物或真核生物的复制和整合。典型的表达载体包含用于调节编码本实施例的蛋白质的DNA的表达的转录和翻译终止子、起始序列、以及启动子。为了获得克隆基因的高水平表达，所希望的是构建最低包含指导转录的强启动子、用于翻译起始的核糖体结合位点、以及转录或翻译终止子的表达载体。技术人员将认识到可以对本实施例的蛋白质进行修饰，而不会降低其生物学活性。可以进行一些修饰以促进靶向分子克隆、表达或并入到异源多肽中。这样的修饰包括，例如，在氨基末端添加的甲硫氨酸以提供起始位点，或者置于任一末端上的额外的氨基酸(例如，聚His)以产生方便定位的限制性位点或终止密码子或纯化序列。
原核细胞可用作表达的宿主。原核生物最常由多种大肠杆菌菌株代表；然而，也可以使用其他微生物菌株。本文定义的包含转录起始启动子的、任选与操纵基因连同核糖体结合位点序列一起的常用原核生物控制序列包括，包含作为β内酰胺酶(青霉素酶)和乳糖(lac)启动子系统的这种常用的启动子(Chang等人(1977)Nature[自然]198：1056)，色氨酸(trp)启动子系统(Goeddel等人(1980)Nucleic Acids Res.[核酸研究]8：4057)和λ-衍生的PL启动子和N-基因核糖体结合位点(Shimatake等人(1981)Nature[自然]292：128)。在大肠杆菌中转染的DNA载体中包含选择标记也是有用的。这些标记的实例包括指定对氨苄青霉素、四环素、或氯霉素具有抗性的基因。
选择载体以允许引入到适当的宿主细胞中。细菌载体通常是质粒或噬菌体来源的。用噬菌体载体颗粒感染或用裸的噬菌体载体DNA转染适当的细菌细胞。如果使用质粒载体，则用质粒载体DNA转染细菌细胞。用于表达本实施例的蛋白质的表达系统可以使用芽胞杆菌属物种和沙门氏菌属。参见，Palva等人(1983)Gene[基因]22：229-235以及Mosbach等人(1983)Nature[自然]302：543-545。
各种真核表达系统如酵母、昆虫细胞系、植物和哺乳动物细胞是本领域技术人员已知的。本文披露的序列可以在这些真核系统中表达。在一些实施例中，采用转化/转染的植物细胞作为用于生产受体蛋白质的表达系统。
酵母中异源蛋白的合成是熟知的。参见，例如，Sherman，F.等人(1982)Methods inYeast Genetics[酵母遗传学方法]，冷泉港实验室，其描述了可用于在酵母中生产蛋白质的各种方法。用于生产真核蛋白质的两种广泛使用的酵母是酿酒酵母和巴斯德毕赤酵母。用于在酵母属和毕赤酵母中表达的载体、菌株、和方案是本领域已知的并且可从供应商(例如，英杰生命技术公司(Invitrogen Life Technologies)，卡尔斯巴德，加利福尼亚州)获得。合适的载体通常具有表达控制序列，如启动子，例如3-磷酸甘油酸激酶或醇氧化酶，以及根据需要具有复制起点、终止序列等。
本文披露的多肽，一旦表达，可以通过裂解细胞并将标准蛋白质分离技术应用于裂解物从酵母中分离出来。纯化过程的监测可以通过使用蛋白质印迹技术或放射性免疫测定或其他标准免疫测定技术来完成。
本文披露的编码多肽的序列也可以连接到用于转染例如哺乳动物、昆虫、或植物来源的细胞培养物的各种表达载体。用于生产肽的细胞培养物的示例是哺乳动物细胞。哺乳动物细胞系统通常将是单层细胞的形式，尽管也可使用哺乳动物细胞悬浮液。本领域已经开发了许多能够表达完整蛋白质的合适的宿主细胞系，并且包括COS、HEK293、BHK21、和CHO细胞系。这些细胞的表达载体可以包括表达控制序列，如复制起点、启动子(例如，CMV启动子，HSV tk启动子或pgk(磷酸甘油酸酯激酶启动子))、增强子(Queen等人(1986)Immunol.Rev.[免疫学研究]89：49)，以及必需的加工信息位点，如核糖体结合位点、RNA剪接位点、聚腺苷酸化位点(例如，SV40大T Ag聚A添加位点)和转录终止子序列。可获得可用于生产蛋白质的其他动物细胞，例如，自美国典型微生物保藏中心细胞系和杂交瘤目录(第7版，1992)。用于表达Bt毒素受体并评估由受体介导的Bt毒素细胞毒性的哺乳动物细胞的一个实例是人胚胎肾293细胞。参见美国专利号5,693,491，其通过引用并入本文。
用于在昆虫细胞中表达本文披露的多肽的合适载体通常衍生自SF9杆状病毒。合适的昆虫细胞系包括蚊幼虫、蚕、粘虫、蛀虫和果蝇细胞系如Schneider细胞系(Schneider等人(1987)J.Embryol.Exp.Morphol.[胚胎学与实验学杂志]27：353-365)。一个实施例考虑了无细胞多肽表达系统。
与酵母一样，当采用高等动物或植物宿主细胞时，通常将聚腺苷酸化或转录终止子序列并入载体中。终止子序列的实例是来自牛生长激素基因的聚腺苷酸化序列。还可以包括用于准确剪接转录物的序列。剪接序列的实例是来自SV40的VP1内含子(Sprague等人(1983)J.Virol.[病毒学杂志]45：773-781)。此外，可将控制宿主细胞中的复制的基因序列引入到载体中，如在牛乳头瘤病毒型载体中发现的那些。Saveria-Campo，M.，BovinePapilloma Virus DNA a Eukaryotic Cloning Vector in DNA Cloning Vol.II aPractical Approach，D.M.Glover，ed.，IRL Pres，Arlington，Virginia pp.213-238(1985)[塞弗利亚-坎普，M.，牛乳头瘤病毒DNA真核克隆载体于DNA克隆中，第II卷，实用方法，D.M.格洛弗编辑，IRL出版社，阿林顿，弗吉尼亚州，第213-238页(1985)]。
在一个具体实施例中，可能需要负面控制受体结合；特别是当不再需要对细胞的毒性或者希望将毒性降低到较低水平时。在这种情况下，配体-受体多肽结合测定可用于筛选结合受体多肽但不对表达受体的细胞赋予毒性的化合物。可用于阻断配体结合的分子的实例包括一种抗体，该抗体特异性识别受体多肽的配体结合结构域，这样使得根据需要减少或阻止配体结合。
在另一个实施例中，可以改变受体多核苷酸或多肽表达，例如通过介导RNA干扰(RNAi)的还原，包括使用针对特异性受体多核苷酸序列的沉默元件。沉默元件可以包括但不限于：正义抑制元件、反义抑制元件、双链RNA(dsRNA)、siRNA、amiRNA、miRNA、或发夹抑制元件。通过沉默元件抑制受体多核苷酸或多肽的编码序列的表达可以通过向昆虫提供外源核酸沉默元件构建体，例如dsRNA来进行。沉默元件构建体包含靶向受体多核苷酸的至少一个沉默元件。
在具体实施例中，减少有害生物中靶序列的多核苷酸水平和/或多肽水平导致在适当的靶昆虫中的小于95％、小于90％、小于80％、小于70％、小于60％、小于50％、小于40％、小于30％、小于20％、小于10％、或小于5％的相同靶序列的多核苷酸水平，或由其编码的多肽的水平。测定RNA转录物水平的方法包括但不限于：qRT-PCR、RNA印迹法、RT-PCR、和数字PCR。
在具体实施例中，沉默元件与靶受体多核苷酸具有100％的序列同一性。在其他实施例中，沉默元件与靶多肽具有同源性，该靶多肽与靶多核苷酸的区域具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或更大序列同一性，其中与靶多核苷酸的序列同一性仅需足以降低靶受体多核苷酸的表达即可。通常，可以使用至少19个核苷酸、21个核苷酸、24个核苷酸、50个核苷酸、100个核苷酸、200个核苷酸、或更多核苷酸的序列。
本文考虑了所披露的核苷酸序列和由其编码的多肽的片段和变体。“片段”是指核苷酸序列的一部分，或氨基酸序列的一部分，以及因此由此编码的多肽的一部分。核苷酸序列的片段可以编码多肽片段，这些多肽片段保留天然多肽的生物活性并且例如结合Bt毒素。可替代地，是可用作杂交探针的核苷酸序列的片段。因此，核苷酸序列的片段范围可以是从至少约20个核苷酸、约50个核苷酸、约100个核苷酸、至高达编码本实施例的多肽的全长核苷酸序列。
编码Bt毒素受体多肽的生物活性部分的Bt毒素受体核苷酸序列的片段可以编码至少15、25、30、50、100、150、200或250个连续氨基酸，或多达全长Bt毒素受体多肽中存在的氨基酸的总数。用作PCR引物的杂交探针的Bt毒素受体核苷酸序列的片段通常不需要编码Bt毒素受体多肽的生物活性部分。
因此，Bt毒素受体核苷酸序列的片段可以编码Bt毒素受体多肽的生物活性部分，或者它可以是可以使用下文披露的方法用作杂交探针或PCR引物的片段。Bt毒素受体多肽的生物活性部分可以通过如下来制备：分离Bt毒素受体核苷酸序列之一的一部分，表达Bt毒素受体多肽的编码部分(例如，通过体外重组表达)，并且评估Bt毒素受体多肽的编码部分的活性。是Bt毒素受体核苷酸序列片段的核酸分子包含至少16、20、50、75、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、800、900、1，000、1，100、1，200、1，300、1，400、1500、2000、或2500个核苷酸，或多达本文披露的全长Bt毒素受体核苷酸序列中存在的核苷酸的数目。
“变体”是指实质相似的序列。对于核苷酸序列，由于遗传密码的简并性，保守变体包括编码Bt毒素受体多肽之一的氨基酸序列的那些序列。可以使用熟知的分子生物学技术来鉴定天然存在的等位基因变体如，例如使用下文概述的聚合酶链反应(PCR)和杂交技术鉴定。变异核苷酸序列还包括合成衍生的核苷酸序列，如，例如通过利用定点诱变产生的，但是仍然编码Bt毒素受体蛋白质的那些。通常，该实施例的特定核苷酸序列的变体将与特定核苷酸序列具有至少约40％、50％、60％、65％、70％，通常至少约75％、80％、85％、86％、87％、88、89％，如至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％，例如至少约98％、99％或更高的序列同一性，如通过使用默认参数的本文别处描述的序列比对程序所确定的。
还可以通过比较由变体核苷酸序列编码的多肽与由参比核苷酸序列编码的多肽之间的百分比序列同一性来评估实施例的特定核苷酸序列(即，参比核苷酸序列)的变体。因此，例如，披露了编码与SEQ ID NO：2、4、6、8、10、或12的多肽具有给定百分比序列同一性的多肽的分离的核酸。可以使用默认参数使用本文别处描述的序列比对程序来计算任何两个多肽之间的序列同一性百分比。当本文披露的任何给定的多核苷酸对通过比较由它们编码的两个多肽共有的序列同一性百分比来评估时，两个所编码的多肽之间的序列同一性百分比为至少约40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％，通常至少约75％、80％、85％，如至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％，例如至少约98％、99％或更高的序列同一性。
还可以通过比较由变体核苷酸序列编码的多肽与由参比核苷酸序列编码的多肽之间的序列同一性百分比来评估本文披露的特定核苷酸序列(即，参比核苷酸序列)的变体。因此，例如，披露了编码与SEQ ID NO：2、4、6、8、10、或12的多肽具有给定百分比序列同一性的多肽的分离的核酸。可以使用默认参数使用本文别处描述的序列比对程序来计算任何两个多肽之间的序列同一性百分比。当任何给定的多核苷酸对通过比较由它们编码的两个多肽共有的序列同一性百分比来评估时，两个所编码的多肽之间的序列同一性百分比为至少约40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％，通常至少约75％、80％、85％，优选地至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％，并且更优选地至少约98％、99％或更高的序列同一性。
“变异”蛋白质是指通过以下各项由天然蛋白质衍生的一种蛋白质：在天然蛋白质的N端和/或C端缺失(所谓的截短)或者添加一个或多个氨基酸；在天然蛋白质中的一个或多个位点处缺失或添加一个或多个氨基酸；或在天然蛋白质中的一个或多个位点处取代一个或多个氨基酸。本实施例中的变体多肽和多核苷酸还包括同源和直向同源多肽序列。本文考虑的变体蛋白是生物活性的，即它们仍然具有天然蛋白质的所需生物学活性，即本文所述的活性(例如，Bt毒素结合活性)。此类变体可以由例如遗传多态性或人为操作产生。天然Bt毒素受体蛋白质的生物活性变体将与天然蛋白质的氨基酸序列具有至少约40％、50％、60％、65％、70％，通常至少约75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％，如至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％，例如至少约如98％、99％或更高的序列同一性，如通过使用默认参数的本文别处描述的序列比对程序所确定的。蛋白质的生物活性变体与该蛋白质可能相差仅仅1-15个氨基酸残基，仅仅1-10个，如6-10个，仅仅5个，仅仅4、3、2个，或甚至1个氨基酸残基。
在一个实施例中，靶受体的变体可用于高通量筛选，如但不限于：如下所报道的噬菌体展示Femandez等人(2008)Peptides[肽]，29(2)324-329)。还参见Guo等人ApplMicrobiol Biotechnology.[应用微生物与生物技术]93(3)1249-1256。这种筛选可用于发展毒性增加的杀昆虫剂，或筛选新颖的作用位点。也可以将高通量筛选应用于筛选对杀昆虫剂的改变易感性的昆虫或昆虫群体。此外，多于一个变体，片段，受体，或变体、片段、或受体的组合可用于一个大的但多重的筛选测定中。
可以以各种方式改变实施例的多肽，这些方式包括氨基酸取代、缺失、截短、和插入。这种操作的方法在本领域中是普遍已知的。例如，可以通过DNA中的突变来制备Bt毒素受多肽的氨基酸序列变体。用于诱变和核苷酸序列改变的方法是本领域熟知的。参见，例如，Kunkel(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[差国国家科学院院刊]82：488-492；Kunkel等人(1987)Methods in Enzymol.[酶学方法]154：367-382；US专利号4,873,192；Walker和Gaastra，编.(1983)Techniques in Molecular Biology[分子生物学技术](麦克米兰出版有限公司(MacMillan Publishing Company)，纽约)和在其中引用的参考文献。关于不影响感兴趣的蛋白质的生物活性的适当的氨基酸取代的指导可以发现于Dayhoff等人(1978)Atlas of Protein Sequence and Structure[蛋白质序列和结构图谱](国家生物医学研究基金会(Natl.Biomed.Res.Found.)，华盛顿)的模型中，将其通过引用结合在此。可以进行保守取代，如将一个氨基酸与具有相似性质的另一个氨基酸交换。
因此，本文考虑的基因和核苷酸序列包含天然存在的序列以及突变形式。同样，本实施例的蛋白质包括天然存在的蛋白质以及其变体和修饰形式。这些变体将仍然具有所需的毒素结合活性。可以在编码变体的DNA中进行的突变不能将序列置于阅读框之外，并且在一些实施例中不会产生可能产生次级mRNA结构的互补区域。参见，欧洲专利公开号75，444。
本文涵盖的蛋白质序列的缺失、插入、和取代预期不会产生蛋白质特征的根本性变化。例如，应认识到至少约10、20、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、以及多达960个氨基酸可以从具有SEQ ID NO：2、4、6、8、10、或12中所示氨基酸序列的多肽的N末端缺失，并且仍保留结合功能。进一步认识到，至少约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、和多达119个氨基酸可以从具有SEQ ID NO：2、4、6、8、10、或12中所示氨基酸序列的多肽的C末端缺失，并且仍保留结合功能。缺失变体涵盖具有这些缺失的多肽。认识到保留结合功能的缺失变体涵盖具有这些N-末端或C-末端缺失，或在C-和N-末端具有其任何缺失组合的多肽。在一个实施例中，蛋白质序列的缺失、插入、和/或取代可以改变或表示对Bt毒素的易感性的改变。
对于事先预测取代、缺失、或插入的确切效果，本领域技术人员将理解，可以通过常规筛选测定评价这种效果。也就是说，活性可以通过受体结合和/或毒性测定来评估。参见，例如，美国专利号5,693,491；Keeton等人(1998)Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]64(6)：2158-2165；Francis等人(1997)Insect Biochem.Mol.Biol.[昆虫生物化学与分子生物学]27(6)：541-550；Keeton等人(1997)Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]63(9)：3419-3425；Vadlamudi等人(1995)J.Biol.Chem.[生物化学杂志]270(10)：5490-5494；Ihara等人(1998)Comparative Biochem.Physiol.B[比较生物化学与生理学B]120：197-204；以及Nagamatsu等人(1998)Biosci.Biotechnol.Biochem.[生物科学生物技术生物化学]62(4)：727-734；其各自通过引用并入本文。
变体核苷酸序列和多肽还涵盖衍生自诱变和引起重组过程如DNA改组的序列和多肽。用这样的方法，可以操纵一种或多种不同的毒素受体编码序列以产生新的毒素受体，这些新的毒素受体包括但不限于：具有所需的性质的新的Bt毒素受体。用这种方式，从相关序列多核苷酸的群体产生重组多核苷酸文库，这些相关序列多核苷酸包括如下序列区域，这些序列区域具有实质的序列同一性并且可以在体外或体内进行同源重组。例如，使用这种方法，编码感兴趣结构域的序列基序可以在Bt毒素受体基因和其他已知的Bt毒素受体基因之间进行改组，以获得编码具有改进的感兴趣性质(如在受体的情况下增加的配体亲和力)的多肽的新基因。这种DNA改组的策略在本领域中是已知的。参见，例如，Stemmer(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[差国国家科学院院刊]91：10747-10751；Stemmer(1994)Nature[自然]370：389-391；Crameri等人(1997)Nature Biotech.[自然生物技术]15：436-438；Moore等人(1997)J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]272：336-347；Zhang等人(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]94：4504-4509；Crameri等人(1998)Nature[自然]391：288-291；和美国专利号5,605,793和5,837,448。
当受体多肽在细胞中表达并与细胞膜缔合(例如，通过跨膜区段)时，为了使受体结合所需配体，例如Cry2A毒素，受体的配体结合结构域对于配体而言必须是可获得的。在此方面，认识到将天然Bt毒素受体定向，这样使得毒素结合位点可以在细胞外获得。
因此，在包括使用完整细胞的方法中，该实施例提供了细胞表面Bt-毒素受体。“细胞表面毒素受体”是指包括至少一个细胞外Bt毒素结合位点的膜结合受体多肽。该实施例的细胞表面受体包括信号序列和跨膜区段的适当组合，用于在细胞膜处引导和保留受体，这样使得毒素结合位点可在细胞外获得。当天然的Bt毒素受体用于表达，推断信号序列和跨膜区段的组成和构型时，没有必要确保多肽在细胞外显示毒素结合位点的适当拓扑结构。作为天然信号和跨膜序列的替代方案，异源信号和跨膜序列可用于产生细胞表面受体多肽。
认识到，可能令人感兴趣的是产生在细胞内在细胞质中、在细胞核或其他胞器中、在其他亚细胞空间中；或在细胞外空间中能够与受体的配体相互作用的Bt毒素受体。因此，该实施例涵盖受体的变体，其中受体多肽的一个或多个区段被修饰以将多肽靶向所需的细胞内或细胞外位置。
除其他事项之外，还涵盖用作与本文披露的细胞表面受体竞争的结合拮抗剂的受体片段和变体。这样的片段或变体可以例如结合毒素，但不能向特定细胞赋予毒性。在此方面，实施例提供了分泌Bt毒素受体，即没有膜结合的受体。在另一个实施例中，除其他事项之外，受体片段和变体可用作与Bt毒素具有协同关系的结合拮抗剂。分泌的受体可以包含异源或同源的信号序列，促进其从表达受体的细胞分泌；并且进一步包括对应于跨膜区段的区域的分泌变化。“分泌变化”是指对应于膜结合受体的跨膜区段的氨基酸包括一个或多个缺失、取代、插入、或其任何组合；这样使得该区域不再保留必要的疏水性以用作跨膜区段。可以通过确认包括来自表达多肽的细胞的变化的多肽的分泌来测试产生分泌变化的序列改变。
实施例的多肽可以从天然表达它们的细胞纯化，从被改变以表达它们的细胞中纯化(例如，重组宿主细胞)或使用多肽合成技术合成。在一个实施例中，通过重组DNA方法产生多肽。在这些方法中，将编码该多肽的核酸分子克隆到本文更全面描述的表达载体中，并根据本领域已知方法在适当的宿主细胞中表达。然后使用多肽纯化技术从细胞中分离多肽。可替代地，可以使用肽合成方法合成多肽或片段。
本文还考虑了其中一种或多种多肽与至少一种感兴趣的多肽融合的异源多肽。一个实施例涵盖融合多肽，其中感兴趣的异源多肽具有与受体多肽实质上不同源的氨基酸序列。在该实施例中，受体多肽和感兴趣的多肽可以或不可以可操作地连接。可操作连接的一个实例是框架内融合，这样使得在翻译时产生单个多肽。这样的融合多肽可以例如促进重组多肽的纯化。
在另一个实施例中，感兴趣的融合多肽在N末端可以包含异源信号序列，有利于其从特异性宿主细胞的分泌。因此可以通过使用异源信号序列增加多肽的表达和分泌。
该实施例还涉及多肽，其中本文所述多肽中的一个或多个结构域可操作地连接到具有同源功能的异源结构域。因此，毒素结合结构域可以用其他毒素的毒素结合结构域代替。因此，受体的毒素特异性基于除由Bt毒素受体编码的结构域之外的毒素结合结构域，但是多肽的其他特征，例如膜定位和拓扑结构是基于SEQ ID NO：2、4、6、8、10、或12的Bt毒素受体。
可替代地，可以保留天然Bt毒素结合结构域，而受体包括额外的异源配体结合结构域，包括但不限于：异源毒素结合结构域。因此，本文还考虑了融合多肽，其中感兴趣的多肽是包括异源毒素结合结构域的异源多肽。包括Cry1毒素结合结构域的异源多肽的实例包括但不限于以下各项中所披露的那些：Knight等人(1994)Mol.Micro.[分子微生物学]11：429-436；Lee等人(1996)Appl.Environ.Micro.[应用与环境微生物学]63：2845-2849；Gill等人(1995)J.Biol.Chem.[生物化学杂志]270：27277-27282；Garczynski等人(1991)Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]10：2816-2820；Vadlamudi等人(1995)J.Biol.Chem.[生物化学杂志]270(10)：5490-4，和美国专利号5,693,491。
还可以将SEQ ID NO：2、4、6、8、10、或12的Bt毒素受体多肽与ABC转运蛋白超家族的其他成员融合。这种融合多肽可以提供超家族成员的结合特性的重要反映。这样的组合可以进一步用于扩展这些分子在广泛范围的系统或物种中的适用范围，否则这些系统或物种可能无法适用于天然或相对同源的多肽。融合构建体可以被取代成系统，其中天然构建体由于物种特异性约束而不起作用。杂交构建体可以进一步显示出以其他方式用天然多肽的组合不可获得的所需或不寻常的特征。
本文考虑的多肽变体包括包含增强或减少一个或多个结构域功能的突变的那些。例如，在毒素结合结构域中，可以引入增加或降低结构域对特定毒素的敏感性的突变。
作为引入突变的替代方案，可以通过增加配体结合结构域的拷贝数来实现活性的增加。因此，该实施例还涵盖受体多肽，其中以多于一个拷贝提供毒素结合结构域。
该实施例进一步涵盖包含受体表达载体的细胞，这些受体表达载体包括Bt毒素受体序列、及其片段和变体。表达载体可以包含用于转化感兴趣的细胞的一个或多个表达盒。这些基因的转录可以置于组成型或诱导型启动子的控制下(例如，组织或细胞周期优选的)。
当使用多于一种的表达盒时，除包括至少一个受体序列的盒外的盒可以包括本文披露的受体序列或任何其他所需序列。
本文披露的核苷酸序列可用于分离昆虫物种(除玉米穗虫、大豆尺蠖、草地贪夜蛾、以及欧洲玉米螟以外，具体而言是其他鳞翅目物种，更具体而言是其他夜蛾科或草螟科物种)中的同源序列。
下列术语用来描述两种或更多种核酸或多核苷酸之间的序列关系：(a)“参比序列”，(b)“比较窗口”，(c)“序列同一性”，(d)“序列同一性百分比”，和(e)“实质同一性”。
(a)如本文所用，“参比序列”是用作序列比较的基础的所定义的序列。参比序列可以是指定序列的子集或整体；例如，作为全长cDNA或基因序列的区段、或完整的cDNA或基因序列。
(b)如本文所用，“比较窗口”参考了多核苷酸序列的连续并指定的区段，其中与用于两种序列的最佳比对的参比序列(其不包括添加或缺失)相比，比较窗口中的多核苷酸序列可能包括添加或缺失(即空位)。通常，比较窗口的长度为至少20个连续核苷酸，并且任选地可以是30、40、50、100个或更长。本领域技术人员应当理解，由于多核苷酸序列中包括空位，为了避免与参比序列的高相似性，一般引入空位罚分，并且从匹配数中减去。
用于比较的序列的比对方法是本领域熟知的。因此，可以使用数学算法来完成任何两个序列之间的同一性百分比的确定。此类数学算法的非限制性实例是Myers与Miller(1988)CABIOS4：11-17的算法；Smith等人(1981)Adv.Appl.Math.[应用数学进展]2：482的局部比对；Needleman和Wunsch(1970)J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48：443-453的全局比对算法；Pearson和Lipman(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：2444-2448的局部检索比对法(search-for-local alignment method)；Karlin and Altschul(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]87：2264的算法，如在Karlin和Altschul(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]90：5873-5877中修改的。
这些数学算法的计算机实现可以用于序列比较，来确定序列同一性。这些实现包括但不限于：PC/Gene程序中的CLUSTAL(可从智能遗传学公司(Intelligenetics)，山景城，加利福尼亚州获得)；ALIGN程序(版本2.0)以及GCG威斯康辛遗传软件包版本10中的GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA、以及TFASTA(可从材料科学软件公司(Accelrys Inc.)，9685斯克兰顿路，圣地亚哥，加利福尼亚州，美国获得)。使用这些程序的比对可以使用默认参数进行。以下各项充分描述了CLUSTAL程序：Higgins等人(1988)Gene[基因]73：237-244(1988)；Higgins等人(1989)CABIOS 5：151-153；Corpet等人(1988)Nucleic Acids Res.[核酸研究]16：10881-90；Huang等人(1992)CABIOS 8：155-65；以及Pearson等人(1994)Meth.Mol.Biol.[分子生物学方法]24：307-331。ALIGN程序基于Myers与Miller(1988)同上的算法。当比较氨基酸序列时，ALIGN程序可以使用PAM120权重残基表，缺口长度罚分为12、缺口罚分为4。Altschul等人(1990)J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]215：403D的BLAST程序是基于Karlin和Altschul(1990)的算法，同上。使用BLASTN程序、分数＝100、词长＝12可以进行BLAST核苷酸搜索，以便获得与编码实施例的蛋白质的核苷酸序列序列同源的核苷酸序列。使用BLASTX程序、分数＝50、词长＝3可以进行BLAST蛋白质搜索，以便获得与实施例的蛋白质或多肽同源的氨基酸序列。为了获得用于比较目的的有缺口的比对，可以使用如Altschul等人(1997)Nucleic Acids Res.[核酸研究]25：3389中所述的Gapped BLAST(在BLAST 2.0中)。可替代地，PSI-BLAST(在BLAST 2.0中)可以用于进行检测分子之间远缘关系的迭代搜索。参见Altschul等人(1997)，同上。当使用BLAST、缺口BLAST、PSI-BLAST时，可以使用各自程序的默认参数(例如，用于核苷酸序列的BLASTN、用于蛋白质的BLASTX)。参见www.ncbi.hlm.nih.gov。比对也可以通过检查手动进行。
除非另有说明，本文提供的序列同一性/相似性值是指使用GAP版本10使用以下参数获得的值：对于核苷酸序列的同一性％和相似性％，使用GAP加权50和长度加权3、以及nwsgapdna.cmp评分矩阵；对于氨基酸序列的同一性％和相似性％，使用GAP加权8和长度加权2、以及BLOSUM62评分矩阵；或其任何等效程序。“等效的程序”是指任何序列比较程序，该程序对于任何两个所讨论的序列产生一个比对，当与GAP版本10所产生的对应的比对相比较时，该比对具有相同的核苷酸或氨基酸残基配对以及相同的序列同一性百分比。
GAP使用Needleman和Wunsch(1970)J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48：443-453的算法，以找到使匹配数量最大化并使空位数量最小化的两个完整序列的比对。GAP考虑所有可能的比对和空位位置，并且产生具有最大匹配碱基数量和最少空位的比对。它允许以匹配碱基单位提供空位产生罚分和空位延伸罚分。GAP必须为它插入的每个空位获取空位产生罚分匹配数目的收益。如果选择大于零的空位延伸罚分，GAP必须另外地为每个所插入空位获取空位长度乘以空位延伸罚分的收益。在GCG威斯康辛遗传软件包的版本10中，蛋白质序列默认空位产生罚分值和空位延伸罚分值分别为8和2。对于核苷酸序列，默认空位产生罚分为50，而默认空位延伸罚分为3。空位产生和空位延伸罚分可以表示为选自由以下各项组成的组的整数：从0至200。因此，例如，空位产生和空位延伸罚分可以为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65或更多。
GAP代表最佳比对家族的一个成员。这个家庭可能有很多成员，但没有其他成员有更好的质量。GAP展现出四个比对优值：质量、比率、同一性、和相似性。为了比对序列，质量是是最大化的度量。比例是质量除以较短区段中的碱基数。同一性百分比是实际匹配的符号的百分比。相似性百分比是相似符号的百分比。空位对面的符号被忽略。当一对符号的评分矩阵值大于或等于相似性阈值0.50时，相似性得分。GCG威斯康辛遗传软件包版本10中使用的评分矩阵为BLOSUM62。参见Henikoff和Henikoff(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]89：10915。
(c)如本文所用，在两个核酸或多肽序列的上下文中的“序列同一性”或“同一性”是指，当在指定比较窗口上比对最大对应性时，两个序列中的相同残基。当使用关于蛋白质的序列同一性百分比时，认识到不相同的残基位置通常相差保守氨基酸取代，其中氨基酸残基被具有相似化学性质(例如电荷或疏水性)的其他氨基酸残基取代，并且因此不改变分子的功能性质。当序列在保守取代方面不同时，可以向上调节序列同一性百分比，以校正该取代的保守性质。相差这些保守取代的序列被称为具有“序列相似性”或“相似性”。用于进行该调整的方法是本领域技术人员所熟知的。典型地，这涉及作为部分而不是完全错配对保守取代打分，从而提高百分比序列同一性。因此，例如，当相同的氨基酸得分为1，并且非保守取代的得分为零时，保守取代的得分在零和1之间。计算保守取代的评分，例如，如在程序PC/GENE(智能遗传学(Intelligenetics)，山景城，加利福尼亚州)中实现的。
(d)如本文所用，“序列同一性百分比”意指在比较窗口上比较两个最佳比对序列所确定的值，其中与参比序列(其不包含添加或缺失)相比，该比较窗中的多核苷酸序列部分可以包含添加或缺失(即空位)，以进行这两个序列的最佳比对。百分比如下计算：测定两条序列中出现相同核酸碱基或氨基酸残基的位置数，得到匹配位置数，匹配位置数除以比较窗口中的位置总数，结果乘以100，得到百分序列同一性。
(e)(i)术语多核苷酸序列的“实质同一性”意指，使用所描述的比对程序之一使用标准参数与参比序列比较时，多核苷酸包括具有至少70％同一性列、至少80％、至少90％、或至少95％的序列。本领域技术人员将认识到，可以适当地调整这些值以通过考虑密码子简并性、氨基酸相似性、阅读框定位等来确定由两个核苷酸序列编码的蛋白质的相应同一性。用于这些目的的氨基酸序列的实质同一性通常意指至少60％、至少70％、至少80％、至少90％，如至少95％的序列同一性。
核苷酸序列实质相同的另一个指示是两个分子在严格条件下是否彼此杂交。通常，严格条件选择为比特定序列在规定的离子强度和pH下的热熔点(Tm)低约5℃。然而，严格条件涵盖比Tm低约1℃至约20℃范围的温度，这取决于如本文其他部分确定的所需的严格程度。如果在严格条件下彼此不杂交的核酸编码的多肽实质上相同的，则这些核酸仍然是实质上相同的。例如，当使用遗传编码允许的最大密码子简并性产生一个拷贝的核酸时，这可能发生。两种核酸序列实质上相同的一个指征是，由第一种核酸序列编码的多肽与第二种核酸编码的多肽具有免疫交叉反应性。
(e)(ii)在肽的上下文中，术语“实质同一性”表示，在指定的比较窗口上，肽包括与参比序列具有至少70％序列同一性，与参比序列具有至少80％、至少85％、如至少90％或95％序列同一性的序列。优选地，使用Needleman和Wunsch(1970)J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48：443-453的同源性比对算法进行最佳比对。两种肽序列实质上相同的一个指征是一种肽与针对第二种肽的抗体具有免疫反应性。因此，肽与第二肽实质上相同，例如，其中两个肽仅相差保守取代。除了不同的残基位置可能相差保守氨基酸改变之外，“实质上相似的”肽共有如上所述的序列。
本文披露的核苷酸序列可用于从其他生物体，特别是其他昆虫，更特别是其他鳞翅目物种分离相应的序列。以这种方式，可以使用如PCR、杂交等方法来鉴定这样的序列(基于其与本文所述序列的序列同源性)。此外，可以使用转录组来鉴定这样的序列(基于其与本文所述序列的序列同源性)。参见Yinu等人(2012).Plos One，7(8)：e43713。本文考虑了基于其与本文所述的整个Bt毒素受体序列或其片段的序列同一性分离的序列。这些序列包含作为披露序列的直向同源物的序列。“直向同源物”是指衍生自共同祖先基因并且由于物种形成而在不同物种中发现的基因。当其核苷酸序列和/或其编码的蛋白质序列共有如本文其他地方所定义的实质同一性时，在不同物种中发现的基因被认为是直向同源物。直向同源物的功能通常在物种间是高度保守的。因此，本文考虑了编码具有Bt毒素受体活性的多肽的并且在严格条件下与本文披露的玉米穗虫Bt毒素受体序列、或与其片段杂交的多肽的分离序列。
在基于PCR的方法中，可以设计寡核苷酸引物用于PCR反应，以从由感兴趣的任何生物体提取的cDNA或基因组DNA扩增相应的DNA序列。用于设计PCR引物以及PCR克隆的方法在本领域中是普遍已知的并且披露于Sambrook等人(1989)Molecular Cloning：ALaboratory Manual[分子克隆：实验手册](第2版，冷泉港实验室出版社，普莱恩维尤，纽约州)中。还参见Innis等人编辑，(1990)PCR Protocols：A Guide to Methodsa ndApplications[PCR方案：方法与应用指南](学术出版社，纽约)；Innis和Gelfand编辑，(1995)PCR Strategies[PCR策略](学术出版社，纽约)；以及Innis和Gelfand编辑，(1999)PCR Methods Manual[PCR方法手册](学术出版社，纽约)。已知的PCR方法包括但不限于：使用成对引物、巢式引物、单特异性引物、简并引物、基因特异性引物、载体特异性引物、部分错配引物等的方法。
简并碱基，也称为摆动，是序列内给定位置处两个或更多个不同碱基的等摩尔混合物。由于遗传密码是简并的(例如，组氨酸可以由CAC或CAT编码)，所以可以在简并位点(例如，对于组氨酸，使用CAY，其中Y＝C+T)用摆动制备寡核苷酸探针。有十一种标准摆动混合物。用于指定摆动的标准代码字母如下：R＝A+G；Y＝C+T；M＝A+C；K＝G+T；S＝C+G；W＝A+T；B＝C+G+T；D＝A+G+T；H＝A+C+T；V＝A+C+G；并且N＝A+C+G+T。
简并碱基用于产生简并探针和引物。通常将简并碱基掺入设计成与编码已知氨基酸序列的未知基因杂交的寡核苷酸探针或引物中。它们也可以用于基于相似基因之间的同源性区域设计的探针或引物，以便鉴定以前未知的直向同源物。具有摆动的寡核苷酸也可用于随机诱变和组合化学。
在杂交技术中，将全部或部分已知的核苷酸序列用作与克隆的基因组DNA片段或cDNA片段(即，基因组或cDNA文库)的群体中存在的其他相应核苷酸序列进行选择性杂交的探针。这些杂交探针可以是基因组DNA片段、cDNA片段、RNA片段、或其他寡核苷酸，并且可以用可检测基团，如32P或任何其他可检测标记进行标记。因此，例如，可以通过基于Bt毒素受体序列标记合成的寡核苷酸来制备用于杂交的探针。制备用于杂交和用于构建cDNA和基因组文库的探针的方法通常是本领域已知的并且披露在Sambrook等人(1989)MolecularCloning：A Laboratory Manual[分子克隆：实验室手册](第2版，冷泉港实验室出版社，普莱恩维尤，纽约州)中。
例如，本文披露的整个Bt毒素受体序列或其一个或多个部分可以用作能够与相应的Bt毒素受体序列和信使RNA特异性杂交的探针。为了在多种条件下实现特异性杂交，这种探针包括在Bt毒素受体序列中是独特的并且长度为至少约10个核苷酸或长度至少约20个核苷酸的序列。此类探针可用于通过PCR对来自所选植物生物体的相应Bt毒素受体序列进行扩增。可以使用这种技术从所希望的生物体中分离另外的编码序列，或作为用于确定生物体中存在编码序列的诊断试验。杂交技术包括铺板的DNA文库的杂交筛选(斑块或群落；参见，例如，Sambrook等人(1989)Molecular Cloning：A Laboratory Manual[分子克隆：实验室手册](第2版，冷泉港实验室出版社，普莱恩维尤，纽约州)。
这种序列的杂交可以在严格条件下进行。“严格条件”或“严格杂交条件”是指探针与其靶序列杂交的程度将比它与其他序列杂交的程度可检测地更高(例如，比背景高至少2倍)的条件。严格条件是序列依赖性的，并且在不同情况下将有所不同。通过控制杂交和/或洗涤条件的严格性，可以鉴定与该探针100％互补的靶序列(同源探测)。可替代地，也能够调节严格条件以允许序列中的某些错配，以便检测到更低程度的相似性(异源探测)。通常，探针长度小于约1000个核苷酸，如长度小于500个核苷酸。
典型地，严格条件将是以下条件：在pH 7.0至8.3下盐浓度为小于约1.5M Na+离子、典型地约0.01至1.0M Na+离子浓度(或其他盐类)，并且温度对于短探针(例如，10至50个核苷酸)为至少约30℃，并且对于长探针(例如，超过50个核苷酸)为至少约60℃。添加去稳定剂例如甲酰胺也可以实现严格条件。示例性低严格条件包括在37℃下与30％至35％甲酰胺、1M NaCl、1％SDS(十二烷基硫酸钠)的缓冲溶液杂交，并且在50℃至55℃下在1X至2XSSC(20X SSC＝3.0M NaCl/0.3M柠檬酸三钠)中洗涤。示例性中严格条件包括在37℃下在40％至45％甲酰胺、1.0M NaCl、1％SDS中进行杂交，并且在55℃至60℃下在0.5X至1X SSC中洗涤。示例性高严格条件包括在37℃下在50％甲酰胺、1M NaCl、1％SDS中杂交，并且在60℃至65℃下在0.1X SSC中洗涤。杂交持续时间通常小于约24小时，通常为约4至约12小时。
特异性典型地取决于杂交后洗涤的功能，关键因素是最终洗涤溶液的离子强度以及温度。对于DNA-DNA杂合体，Tm可以从Meinkoth and Wahl(1984)Anal.Biochem.138：267-284[Meinkoth和Wahl(1984)，分析生物化学138：267-284]的方程粗略估计：Tm＝81.5℃+16.6(log M)+0.41(％GC)-0.61(％form)-500/L；其中M为单价阳离子的摩尔浓度，％GC为DNA中鸟苷和胞嘧啶核苷酸的百分比，％form为杂交溶液中甲酰胺的百分比，并且L为杂合体的碱基对长度。Tm是50％的互补靶序列与完全匹配的探针杂交的温度(在所定义的离子强度和pH下)。对于每1％的错配，Tm降低约1℃；因此，可调整Tm、杂交和/或洗涤条件以与所需同一性的序列杂交。例如，如果寻找具有＞90％同一性的序列，则可将Tm降低10℃。通常，选择严格条件为在限定离子强度和pH下低于特定序列及其互补序列的热熔点Tm约5℃。然而，极严格条件能够在比热熔点(Tm)低1℃、2℃、3℃、或4℃下杂交和/或洗涤；中严格条件能够在比热熔点(Tm)低6℃、7℃、8℃、9℃、或10℃下杂交和/或洗涤；低严格条件能够在比热熔点(Tm)低11℃、12℃、13℃、14℃、15℃、或20℃下杂交和/或洗涤。使用方程式、杂交和洗涤组合物以及所需的Tm，本领域普通技术人员将理解，本质上描述了杂交和/或洗涤溶液的严格性的变化。如果所希望的错配程度导致Tm小于45℃(水溶液)或32℃(甲酰胺溶液)，则优选增加SSC浓度以使得可使用较高温度。对核酸杂交的全面指导见于以下文献：Tijssen(1993)Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology-Hybridization with Nucleic Acid Probes[生物化学与分子生物学技术-与核酸探针的杂交]，第I部分，第2章(Elsevier(爱思唯尔)，纽约)；以及Ausubel等人编辑，(1995)Current Protocols in Molecular Biology[分子生物学当前方案]，第2章(格林出版与威利交叉科学出版社(Greene Publishing and Wiley-Interscience)，纽约)。参见Sambrook等人(1989)Molecular Cloning：A Laboratory Manual[分子克隆：实验室手册](第2版，冷泉港实验室出版社，普莱恩维尤，纽约)。
因此，本文涵盖了编码Bt毒素受体蛋白并且在严格条件下与本文披露的Bt毒素受体序列或其片段杂交的分离的序列。
该实施例的组合物和筛选方法可用于鉴定表达Bt素受体的细胞，其变体和同系物。这种鉴定可以利用蛋白质水平(如配体-受体结合)或核苷酸水平的检测方法。可以通过组织切片的原位杂交原位检测多肽，但也可以通过大量多肽纯化和随后通过蛋白质印迹的分析或大量制剂的免疫学测定来分析多肽。可替代地，受体基因表达可以在核酸水平下通过任何技术领域的普通技术人员已知的技术使用互补多核苷酸来评估基因组DNA、mRNA等的水平来进行检测。作为实例，可以使用与感兴趣的核酸互补的PCR引物来鉴定表达水平。被鉴定为表达实施例的受体序列的组织和细胞被确定为对结合受体多肽的毒素是易感的。
当被鉴定为表达受体多肽的细胞来源是生物体，例如昆虫植物有害生物时，确定生物体对能够结合多肽的毒素是易感的。在一个具体实施例中，鉴定是在表达本文所示的Bt毒素受体的鳞翅目昆虫植物有害生物中进行的。
该实施例涵盖对受体多肽具有特异性的抗体制剂。在另外的实施例中，抗体用于检测细胞中的受体表达。
在一方面，该实施例涉及用于调节植物有害生物对Bt毒素的易感性的组合物和方法。然而，认识到这些方法和组合物可用于调节任何细胞或生物体对毒素的易感性。“调节”是指细胞或生物体对毒素的细胞毒性作用的易感性增加或降低。“易感性”是指与毒素接触的细胞的活力降低。因此，该实施例涵盖表达细胞表面受体多肽以增加靶细胞或器官对Bt毒素的易感性。毒素易感性的这种增加对于医疗和兽医学目的是有用的，在该医疗和兽医学目的中需要消除或减少一组细胞的活力。易感性的这种增加对于农业应用也是有用的，在该农业应用中需要消除或减少特定植物有害生物的群体。
感兴趣的植物有害生物包括但不限于昆虫，线虫等。线虫包括寄生线虫如根结线虫、胞囊线虫、和腐线虫，包括异皮线虫属物种、根结线虫属物种、和球异皮线虫属物种；特别是胞囊线虫的成员，包括但不限于：大豆胞囊线虫(大豆异皮线虫)；甜菜胞囊线虫(甜菜异皮线虫)；禾谷孢囊线虫(小麦禾谷孢囊线虫)；以及马铃薯金线虫和马铃薯白线虫(马铃薯胞囊线虫)。腐线虫包括短体线虫属物种。
在一个实施例中，这些方法包括产生遗传编辑或修饰的昆虫或其群落。靶受体的多核苷酸序列可以用于通过本领域技术人员已知的手段来敲除或突变昆虫中的靶受体多核苷酸，这些手段包括但不限于使用Cas9/CRISPR系统、TALEN、同源重组、和病毒转化。参见Ma等人(2014)，Scientific Reports[科学报告]，4：4489；Daimon等人(2013)，Development，Growth，and Differentiation[发育，生长和分化]，56(1)：14-25，以及Eggleston等人(2001)BMC Genetics[BMC遗传学]，2：11。目标受体多核苷酸的敲除或突变应该可能导致昆虫具有对Bt毒素或其他杀有害生物剂降低或改变的易感性。所产生的抗性昆虫或其群落可用于筛选潜在的新的活性毒素或新的或不同的作用地点的其他试剂。目前的毒素也可以使用抗性昆虫系进行表征。
在一个实施例中，可以将如SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、或13-15中所示的一种或多种多核苷酸或包括SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、或13-15中所示序列的表达构建体，和包括所述序列的组合物通过使用双链断裂诱导剂如CRISPR/Cas9系统的基因组编辑进行编辑或插入。在一个实施例中，可以将SEQ ID NO：13-15中所示的基因组DNA序列通过使用双链断裂诱导剂如CRISPR/Cas9系统的基因组编辑进行编辑或插入。
CRISPR基因座(规律间隔成簇短回文重复序列)(又称SPIDR--间隔区散在同向重复序列)构成最近描述的DNA基因座的家族。CRISPR基因座由部分回文的短而高度保守的DNA重复序列(通常为24至40bp，重复从1至140次，也称为CRISPR重复序列)组成。重复序列(通常具有物种特异性)由恒定长度的可变序列(通常为20至58，依赖于CRISPR基因座(WO2007/025097，2007年3月1日公布))间隔。
Cas内切核酸酶涉及由Cas基因编码的Cas蛋白，其中所述Cas蛋白能够将双链断裂引入DNA靶序列中。Cas内切核酸酶由引导多核苷酸引导以识别并任选地在特定靶位点向细胞基因组中引入双链断裂(参见美国专利申请公开号2015/0082478)。引导多核苷酸/Cas内切核酸酶系统包括能够将双链断裂引入DNA靶序列的Cas核酸内切酶和引导多核苷酸的复合物。Cas内切核酸酶在基因组靶位点附近解开DNA双链体，并且如果正确的前间区序列邻近基序(PAM)大致定向在靶序列的3’端，则当通过引导RNA识别靶序列时，切割两条DNA链。
在一个实施例中，这些方法包括产生昆虫或其群落，其中编码靶基因，这样使得其不再起作用。靶基因的多核苷酸序列可以用于通过本领域技术人员已知的手段来敲除昆虫中的靶基因多核苷酸，这些手段包括但不限于使用Cas9/CRISPR系统、TALEN、同源重组、和病毒转化。参见Ma等人(2014)，Scientific Reports[科学报告]，4：4489；Daimon等人(2013)，Development，Growth，and Differentiation[发育，生长和分化]，56(1)：14-25；以及Eggleston等人(2001)BMC Genetics[BMC遗传学]，2：11。
在一个实施例中，这些方法涉及导致通过靶受体多核苷酸表达(例如，通过RNAi靶向负调节元件)实现的抗性挽救或逆向突变的方法。
在一个实施例中，这些方法涉及产生抗Cry2 Bt毒素的昆虫群落。可以通过遗传修饰方法制备群落，或者可以使用靶受体多核苷酸筛选突变体、缺少靶受体多核苷酸的昆虫、或任何其他遗传变体。随后对Cry2毒素的筛选和选择应该导致可以如本文所述使用的Cry2抗性群落。方法包括但不限于：喂养昆虫来自玉蜀黍植物(这些玉蜀黍植物表达施用于人工饲料的杀昆虫剂或纯化的杀昆虫剂)的叶物质，并且选择暴露后幸存的个体。这些方法进一步可以涉及将存活的昆虫转移到缺乏杀昆虫剂的标准饲料中，以使幸存者完成发育。这些方法进一步可以涉及通过喂养昆虫来自玉蜀黍植物(这些玉蜀黍植物表达杀昆虫剂或纯化的杀昆虫剂)的叶物质允许存活的昆虫交配来维持群落(其中选择周期性施用于后代)并选择存活的昆虫，并且因此通过消除不携带纯合抗性等位基因的个体来确定抗性。
一个实施例涵盖用于筛选对杀昆虫剂具有改变的易感性水平的昆虫群体的方法，包括抗性监测测定。用于筛选改变的易感性水平的测定包括但不限于：测定靶受体基因DNA序列、RNA转录物、多肽、或靶受体多肽的活性。测定方法包括但不限于：DNA测序、DNA印迹法、RNA印迹法、RNA测序、PCR、RT-PCR、qPCR、qRT-PCR、蛋白质测序、蛋白质印迹、质谱鉴定、抗体制备和检测、以及酶检测。DNA、RNA转录物、或多肽中的序列变化可以指示抗性昆虫。此外，目标受体多肽的RNA、多肽、或酶活性的量或丰度的变化可以指示抗性昆虫。在一个实施例中，该方法包括在选择下筛选昆虫以增加受体介导的抗性的选择效率。在另一个实施例中，该方法包括筛选SEQ ID NO：2、4、6、8、10、或12的所披露多肽受体中的突变或改变的序列，SEQ ID NO：2、4、6、8、10、或12的表达的变化，或SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11或其互补序列的表达的变化，其中该变化指示对毒素的受体介导的的抗性。在另一个实施例中，该方法涉及针对不同于天然非抗性昆虫序列的ABC转运蛋白基因或基因产物、转录物、或多肽序列筛选昆虫。在一个实施例中，将具有改变或突变序列的昆虫进一步暴露于杀昆虫毒素，其中该杀昆虫毒素具有与Cry 2毒素相同的作用位点。筛选受体的使用允许进行有效的受体介导的抗性选择以产生抗性昆虫群落。
在一个实施例中，该方法涉及用于在田间监测对Cry毒素的昆虫抗性或改变的易感性水平的方法，该方法包括测定改变的易感性水平或昆虫抗性，其可以包括但不限于：测定靶受体基因DNA序列、RNA转录物、多肽、或靶受体多肽的活性。测定方法包括但不限于：DNA测序、DNA印迹法、RNA印迹法、RNA测序、PCR、RT-PCR、qPCR、qRT-PCR、蛋白质测序、蛋白质印迹、质谱鉴定、抗体制备和检测、以及酶检测。DNA、RNA转录物、或多肽中的序列变化可以指示抗性昆虫。此外，目标受体多肽的RNA、多肽、或酶活性的量或丰度的变化可以指示抗性昆虫。在另一个实施例中，该方法包括筛选SEQ ID NO：2、4、6、8、10、或12的所披露多肽受体中的突变或改变的序列，SEQ ID NO：2、4、6、8、10、或12的表达的变化，或SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11或其互补序列的表达的变化，其中该变化指示对毒素的受体介导的的抗性。在另一个实施例中，该方法涉及将杀昆虫剂施用于具有不同于天然序列的ABC转运蛋白基因或基因产物序列的昆虫或昆虫群体环境周围的区域，其中与Cry2 Bt毒素相比，该杀昆虫剂具有不同的作用方式。在进一步的实施例中，该方法包括实施昆虫管理抗性(IRM)计划。在一个实施例中，IRM计划可以包括但不限于：添加避难所或额外的避难所，轮作作物，种植额外的自然避难所，并在不同的作用位点施用杀昆虫剂。
在一个实施例中，这些方法包括监测抗性的测定试剂盒。简单的试剂盒可以在田间或实验室中使用，以筛选存在的抗性昆虫。在优选的实施例中，针对SEQ ID NO：2、4、6、8、10、或12产生的抗体可用于确定昆虫群体中SEQ ID NO：2、4、6、8、10、或12的水平、或其存在或不存在或浓度变化。在另一个实施例中，进行SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、或13-15的评估，以评估昆虫或昆虫群体靶受体序列中的序列变化、或相对于对照的表达变化、或序列变异。用来完成试剂盒中的抗性监测的分子技术对于本领域技术人员而言是常见的，这些分子技术如但不限于：PCR、RT-PCR、qRT-PCR、DNA印迹法、RNA印迹法、及其他。
如本文所用，单数形式“一个/种(a/an)”以及“该”包括复数个指示物，除非上下文中另外明确指明。因此，例如，提及“细胞”包括多个这样的细胞，并且提及“蛋白质”包括本领域技术人员已知的一种或多种蛋白质及其等效物等。本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义，除非另有明确说明。
本说明书中提到的所有出版物和专利申请都表明本发明所属领域的技术人员的水平。将所有出版物和专利申请通过引用并入本文，其程度就像明确且个别指出通过引用将每一篇个别出版物或专利申请并入一样。
虽然为了清楚理解的目的，已经通过说明和实例的方式对前述实施例进行了详细描述，但是在所附权利要求的范围内可以实施某些改变和修改。
以下实例是通过说明的方式但不是通过限制的方式来提供的。
实验
实例1：
Bt毒素与鳞翅目昆虫特异性结合
使用Wolfersberger等人(1987)Comp.Biochem.Physiol.86A[比较生物化学与生理学86A]：301-308的方案，分离来自第四龄玉米穗虫、欧洲玉米螟、草地贪夜蛾、和大豆尺蠖幼虫的中肠进行刷状缘膜囊泡(BBMV)制备。使用40μg(蛋白质含量)来自玉米穗虫(玉米穗蛾)和欧洲玉米螟的BBMV和用Alexa-488荧光分子标记的10nM IP2.127(SEQ ID NO：21)来进行溶液内竞争性结合测定，以测量IP2.127与玉米穗虫或欧洲玉米螟的特异性结合。使用20μg(蛋白质含量)来自草地贪夜蛾(秋粘虫)的BBMV和用Alexa-488荧光分子标记的10nMIP2.127来进行溶液内竞争性结合测定，以测量IP2.127与草地贪夜蛾的特异性结合。用于IP2.127结合的结合缓冲液是由50mM碳酸钠/HCl(pH 9.6)、150mM NaCl、0.1％Tween 20组成的碳酸钠缓冲液。使用40μg(蛋白质含量)来自大豆尺蠖(大豆夜蛾)的BBMV和用Alexa-488荧光分子标记的5nM IP2.127来进行溶液内结合竞争性结合测定，以测量IP2.127与大豆尺蠖的特异性结合。用于在大豆尺蠖中的IP2.127结合的结合缓冲液是由20mM CAPS(pH10.5)、150mM NaCl、和0.1％Tween20组成的CAPS缓冲液。图1A显示了IP2.127在玉米穗虫中的同源竞争，图1B显示了IP2.127在欧洲玉米螟中的同源竞争，图1C显示了IP2.127在草地贪夜蛾中的同源竞争，并且图1D显示了IP2.127在大豆尺蠖中的同源竞争。
实例2：
鳞翅目Bt毒素受体的分离
使用玉米穗虫BBMV，用生物素标记的IP2.127(SEQ ID NO：21)进行溶液结合测定。结合测定随后是从与生物素标记的IP2.127结合的BBMV进行蛋白质的洗涤剂(Triton)提取。然后使用结合生物素标记的IP2.127和与生物素标记的IP2.127结合的蛋白质的MyOneTM链霉亲和素T1(生命技术公司(Life Technologies)#65601)“共沉淀”(共分离)与生物素标记的IP2.127结合的蛋白质，而未结合的蛋白质被洗去。然后通过SDS-PAGE分离样品并染色以显现蛋白质条带。图2A显示了分离的蛋白质的凝胶，其中箭头指示在玉米穗虫中选择的用于质谱的独特蛋白质。
使用欧洲玉米螟、草地贪夜蛾、或大豆尺蠖BBMV中的每一个，用IP2.127进行溶液结合测定。结合测定随后是从与IP2.127结合的BBMV进行蛋白质的洗涤剂(Triton)提取。然后使用与IP2.127抗体结合的蛋白质G(生命科技公司(LifeTechnologies)#10007D)“共免疫沉淀”(共分离)与IP2.127结合的蛋白质。与抗体结合的珠粒然后结合IP2.127和与IP2.127结合的蛋白质，且未结合的蛋白质被洗去。然后通过SDS-PAGE分离样品并染色以显现蛋白质条带。图2B显示了来自欧洲玉米螟的共分离蛋白的凝胶，其中箭头指向用于质谱的独特蛋白质。图2C显示了来自草地贪夜蛾的共分离蛋白的凝胶，其中箭头指向用于质谱的独特蛋白质。图2D显示了来自大豆尺蠖的共分离蛋白的凝胶，其中箭头指向用于质谱的独特蛋白质。
从SDS-PAGE凝胶上切下独特条带，用胰蛋白酶消化，并且通过质谱法分析得到的肽来进行鉴定。针对如下鉴定来自蛋白条带的得到的肽序列：针对玉米穗虫作为SEQ IDNO：2具有13％肽序列覆盖率，针对欧洲玉米螟作为SEQ ID NO：4具有9％肽序列覆盖率，针对草地贪夜蛾作为SEQ ID NO：8具有21％肽序列覆盖率，并且针对大豆尺蠖作为SEQ IDNO：10具有9％肽序列覆盖率(分别参见图3a、3b、3c、和3d)。在Suite软件(可从Informax公司，贝塞斯达，马里兰州)中鉴定开放阅读框(ORF)，以确定编码如下各项的核苷酸序列：玉米穗虫的SEQ ID NO：2、和欧洲玉米螟的SEQ ID NO：4、草地贪夜蛾的SEQ ID NO：8、和大豆尺蠖的SEQ ID NO：10。将编码所鉴定区域的cDNA序列对专有玉米穗虫、欧洲玉米螟、草地贪夜蛾和大豆尺蠖转录组进行blast分析。表1指示所鉴定的cDNA序列和来自其他玉米有害生物的同源序列。进行进一步的序列分析以验证cDNA序列并通过从玉米穗虫、欧洲玉米螟、和大豆尺蠖分离cDNA并且使用与转录组序列匹配的物种特异性引物(SEQ IDNO：22-27)将受体序列克隆到大肠杆菌中来分离变体(对于所述方法，参见Maniatis，T.，E.F.Fritsch，and J.Sambrook.Molecular Cloning，a Laboratory Manual，1982[Maniatis，T.、E.F.Fritsch、和J.Sambrook，分子克隆，实验手册，1982])。对克隆的cDNA序列进行测序，并且核苷酸序列如SEQ ID NO：16-19中所示。
表1：通过质谱鉴定玉米穗虫的受体核苷酸编码序列，SEQ ID NO：2。然后将该序列针对专有序列数据库进行blast分析，并且以＞50％同源性鉴定剩余的序列。
序列表
<110> 先锋良种国际有限公司（Pioneer HiBred International）
Becker, James E.
Finke, Catherine J.
Mathis, John P.
Nelson, Nelson E.
<120> 新颖的Bt毒素受体和使用方法
<130> BB2404WOPCT
<160> 27
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 5229
<212> DNA
<213> 玉米穗虫
<400> 1
atgagattag aaacgaggca cgctagtgcc gccaccaagt tccgcctgct catgtggaag 60
aactttctgc agcaatggag acatcggcta caaactgtcg tagagctact attgccagtc 120
gtgacaatgg cgctggtgct catccttcgg tggcagatac cgccttatca aatcgataca 180
ctcacttacc ccgcgttgcc agcgcacaca ctcaactact ctaccaatat cctttttgcc 240
atgaatatgg aagaattatc aattgcatac tccccggcaa gtccagtgtt agatgatgta 300
atgagaactg ctgttattaa tttactaaca gccaatatga aagatctgat tcctattttt 360
attgataact taccaccggg gatagccaat ataacatttc caccagatat gaacttaaat 420
acgtcggcca ttgaggagtt cgtgaagtca cgaatacgag tcgtacctta taacagcagt 480
tatgaaataa gagggatcta cgttgacgaa gaaactacac gcagcattat cgctgccgtc 540
gagtttgacg ataaactata tggagcagaa cagttgtcaa ataatttatc ttattcgcta 600
cgttttcctg agagaccccg tctcaattcg tttttccaaa ctggagggcg cacctggaga 660
tctgacggag tattcccggt tttcgaagtg cctgggccta gatttcctca ctcgtgggaa 720
ggtggtaatg acccaggtta cgttaacgaa atgttcgtgg cacttcaaca agttatttcc 780
atggagctgg tatcaagggc aaccgggttg gacttgaagt catttagggt gaacatacag 840
aggtacccgc acccgccgta ccttcacgac cagtcagtgg atctgctgca atttatgttc 900
cccctgttca tcatgttgag cttcagctac actgctgtca acattgcacg ggcggtcaca 960
gttgagaagg aattgcaatt aaaggaaact atgaaaatta tgggcctccc cacatggttg 1020
cactggacag catggtttgt taaacagttt atctacctat caatcacagc tgttctgcta 1080
gttgtgttgc taaaggtaaa ttggtttact aacgacgatg gcttcagcga atatgctgta 1140
tttactaata caccttggac ggttttgcta ttcttcttga tactgtattt atcttgcgcg 1200
atattttttt ctttcatggt aagcagtata ttttcaaaag gtagtacggc cgcgttgttt 1260
atggcggtgg catggttcct cacttacatc cctgctttcc tcctggccat ggatatcaat 1320
atgtcgactg cggtgcaggt catcacatgc ttcagtatta actctgcgat gtcctatggt 1380
ttccaactaa tgctcgctaa ggaaagcact ggagggctgc agtggggcga cttcatgacg 1440
tcaccaggga cggacaccac gcgcttcgtg ttcggccacg tggtcatcat gctggtagtg 1500
gactgcctca tctacatgct gatcaccctc taccttgaac aagtgctacc aggccccttc 1560
gggactccca aaccttggta cttccccttc cagttgcagt tctggttccc aaattataaa 1620
tcgaaagatg ctggattaat tttcgaaaat gataatagtg aattcgatga tattataaaa 1680
gaaaaggatc ccacagacca cgaagttggt gttaaaatgc aaaatttaac aaaaatcttt 1740
gggaataaca tagctgttaa caatttatct ttgaatatct atgacgacca aatcacagtt 1800
ttacttggtc ataatggtgc tggcaaatca actacaatat ctatgttaac aggaaattta 1860
aaggtaactc gcgggacagt gaacgttgcc ggatatgata tgacttctca aagctccgca 1920
gcccgttccc acattggatt gtgtcctcag cacaatatac tgtttaacga actcacggtc 1980
aaagaacatt tggaattctt tgctagacta aaaggattta aaggcaaaga actgtatgaa 2040
gagatagact cacttattga aaaattggaa ctacaggaga agcgtgacta cccctcaaaa 2100
ggtctgtcag gaggtcagaa gcgtcgtctt tgtgttggta ttgctctgag tggggcggca 2160
cgagtggtct tactcgacga acctacgtct ggcatggatc cttcatctcg tcgagcactg 2220
tgggaactct tacagaagga aaagaaaggt cgctcgatga tcctgacgac tcattttatg 2280
gacgaagcag atattctcgg cgacagagtg gctataatgg caaacggtag actgcaatgc 2340
gtgggctctc cgtatttcct caaacgtcat tatggcgtcg ggtataccct ggtgatcgtt 2400
aaggacacag acttcgactt tgtgaaatgc tccgtactta tcaatagcta tattcctggt 2460
actattgtta aagaagatcg aggaacggaa atcacttata atttggtaaa cgattactca 2520
cacgtttttg aagaaatgtt gaatgatttg gaaagaaata ttgataacat caaatttaaa 2580
aactatggtt tagttgctac tacattagaa gatgtcttta tgtccgttgg tgcagactta 2640
agtccaatta attccgaatc tgacgatgct attactacta ctactgactc gactatcgat 2700
gatatattaa aacaagaaat cgattcatct ttggaagaac tggataagga cgagagtaac 2760
gtgacgggcc tccgcttgtt cggtcagcaa gtgctggctg tatggatgaa gcagtggctg 2820
gtgctgatcc gctcgccatg ggtcatggta ctgcagtttt tggcgccagt ggtactcatc 2880
aactccacgc taggagttct gcgttacgtc atgtctttat caccgaccat tagaactagg 2940
tggttgtcgt tggaagaagg gtatacggaa agcgaaactc tgctcagctt caacggtagt 3000
gtagcgtcat cagtgggtgc cctagccgcg caagcatacc aaagcctgtt cgccaattct 3060
ggtgttatgg acatggaaat caacgctatc ggaagccagc caatagaaga atattatcta 3120
aatagaacaa gtgatcccgt tgtgatgggt tcgctgcggc accgcttgct gataggctcc 3180
acatttgacg acaactctgc taccgcctgg ttcagtaact ttggctacca cgatgttgct 3240
acatcgcttg cggcaatcca ctcagctatt ctcagatcta aaaactctga tgcagtactc 3300
aatgtatata atcatccgtt ggaagcttcg tatatagatc agagtgacgt gcagactatg 3360
atagctatgt tgtccatgca gttgtcctct ggcatcggca gtagtgtgag cattgttagt 3420
gcggttttca tcatgtttta tatcaaggaa cgtatgtcgg gggcaaaact tctacaaaat 3480
gcagcaggcg tggcgccttc tgtgctgtgg ggcggcgcag cgatcttcaa ttggttttgg 3540
ttcctcatca cttgtgtttc catcgtcatc tcgtgcgtcg cttttgatgt catcgggtta 3600
tcgaacgtgc atgaattagg tcgaatgttt ttgtgcgtca tggtatacgg tgcggcgatg 3660
ttgccattag tgtacctttt gtcgcttaag ttcaagggac cagctgtcgg cttcgtgggc 3720
ttctatttcc tcaacgtgct tttcggtatg atgggtgcgc aggtggtgga ggcactatcc 3780
tctcctatgc tggacacaga gcaagccgcc cacatccttg actacttact gcagttctac 3840
ccgctttaca gtcttgtcac ttctatcagg tttttaaatc aagtcggcct acgggagtat 3900
acttgcttac aaggctgtga atacttgcag gcagtatacc cgaatctaga gtgtagcatg 3960
gcaagcatgt gcgaattcca cagtaactgc tgcgttcgtg aaaacccata cttcgattgg 4020
gaggaaccag gcgtcctgag gtacttgctc agtatgtgct tctcctgcct aatcttctgg 4080
ttgctgctta tgaccattga atacagagtg gtgcaaaagg tgttcacatt caagaagact 4140
cctcctccaa tagacgagag cacgttagac gaggacgtga tgacagaggc gaggcgcgcg 4200
cgccaggtgc cgccgacacg ccgcagcgac cacgcgcttc tcgctcacga cctctccaag 4260
tactacggga aacatctcgc cgtagaccaa gtctcgttta gtgtgaacga cggcgaatgc 4320
ttcggtctat tgggtgtgaa tggtgccgga aaaacgacca ccttcaagat gctgatgggt 4380
gatgagtcca tttcaagcgg cgaggcgtat gtctccgggc actcggtgca gaggaatctc 4440
gatagagtac acgagaatat tggatattgt ccgcaatttg acgcattatt tggtgagctg 4500
acgggtcgcc agacactaca catgtttgcg ttgatgcgcg gcttgcgttt acgcactgca 4560
gcaccttcgg ctgaaacact cgcacatgcg cttggcttct tcaaacatct tgataaaagg 4620
gtgcatcagt attcaggcgg cacgaaacgc aagcttaaca cggcgatagc attcatggga 4680
cgaacacggc ttgtgtttgt tgatgagcct accactggag ttgatcccgc cgctaaacgc 4740
cacgtatggc gcgctacccg cggcgtgcag cgagcaggtc gcggcgtggt gctgacgtca 4800
catagtatgg aggagtgcga ggcgttgtgt tcgcgactga ccatcatggt caacggtcgc 4860
ttccagtgtc tgggaacgcc acaacatctc aagaacaaat tttctcaagg ctttacttta 4920
atcattaaaa tgaaaactga cgacagtgac agcgacacgc agtcagtaaa cagcactacc 4980
agcgtagtag atagtgtcaa actatacgtc tctgggaact ttgaaagtcc aaagataatg 5040
gaagagtatc atggtcttct aacttactac ttgcctgacc gtagcatggc atggtcacga 5100
atgtttggta tcatggagcg cgccaaacag atcttacaaa ttgaggacta cagcatatcg 5160
cagactaccc tcgaacaaat attcttgcag ttcaccaaat accaaagaga agaaggaacg 5220
acgttataa 5229
<210> 2
<211> 1742
<212> PRT
<213> 玉米穗虫
<400> 2
Met Arg Leu Glu Thr Arg His Ala Ser Ala Ala Thr Lys Phe Arg Leu
1 5 10 15
Leu Met Trp Lys Asn Phe Leu Gln Gln Trp Arg His Arg Leu Gln Thr
20 25 30
Val Val Glu Leu Leu Leu Pro Val Val Thr Met Ala Leu Val Leu Ile
35 40 45
Leu Arg Trp Gln Ile Pro Pro Tyr Gln Ile Asp Thr Leu Thr Tyr Pro
50 55 60
Ala Leu Pro Ala His Thr Leu Asn Tyr Ser Thr Asn Ile Leu Phe Ala
65 70 75 80
Met Asn Met Glu Glu Leu Ser Ile Ala Tyr Ser Pro Ala Ser Pro Val
85 90 95
Leu Asp Asp Val Met Arg Thr Ala Val Ile Asn Leu Leu Thr Ala Asn
100 105 110
Met Lys Asp Leu Ile Pro Ile Phe Ile Asp Asn Leu Pro Pro Gly Ile
115 120 125
Ala Asn Ile Thr Phe Pro Pro Asp Met Asn Leu Asn Thr Ser Ala Ile
130 135 140
Glu Glu Phe Val Lys Ser Arg Ile Arg Val Val Pro Tyr Asn Ser Ser
145 150 155 160
Tyr Glu Ile Arg Gly Ile Tyr Val Asp Glu Glu Thr Thr Arg Ser Ile
165 170 175
Ile Ala Ala Val Glu Phe Asp Asp Lys Leu Tyr Gly Ala Glu Gln Leu
180 185 190
Ser Asn Asn Leu Ser Tyr Ser Leu Arg Phe Pro Glu Arg Pro Arg Leu
195 200 205
Asn Ser Phe Phe Gln Thr Gly Gly Arg Thr Trp Arg Ser Asp Gly Val
210 215 220
Phe Pro Val Phe Glu Val Pro Gly Pro Arg Phe Pro His Ser Trp Glu
225 230 235 240
Gly Gly Asn Asp Pro Gly Tyr Val Asn Glu Met Phe Val Ala Leu Gln
245 250 255
Gln Val Ile Ser Met Glu Leu Val Ser Arg Ala Thr Gly Leu Asp Leu
260 265 270
Lys Ser Phe Arg Val Asn Ile Gln Arg Tyr Pro His Pro Pro Tyr Leu
275 280 285
His Asp Gln Ser Val Asp Leu Leu Gln Phe Met Phe Pro Leu Phe Ile
290 295 300
Met Leu Ser Phe Ser Tyr Thr Ala Val Asn Ile Ala Arg Ala Val Thr
305 310 315 320
Val Glu Lys Glu Leu Gln Leu Lys Glu Thr Met Lys Ile Met Gly Leu
325 330 335
Pro Thr Trp Leu His Trp Thr Ala Trp Phe Val Lys Gln Phe Ile Tyr
340 345 350
Leu Ser Ile Thr Ala Val Leu Leu Val Val Leu Leu Lys Val Asn Trp
355 360 365
Phe Thr Asn Asp Asp Gly Phe Ser Glu Tyr Ala Val Phe Thr Asn Thr
370 375 380
Pro Trp Thr Val Leu Leu Phe Phe Leu Ile Leu Tyr Leu Ser Cys Ala
385 390 395 400
Ile Phe Phe Ser Phe Met Val Ser Ser Ile Phe Ser Lys Gly Ser Thr
405 410 415
Ala Ala Leu Phe Met Ala Val Ala Trp Phe Leu Thr Tyr Ile Pro Ala
420 425 430
Phe Leu Leu Ala Met Asp Ile Asn Met Ser Thr Ala Val Gln Val Ile
435 440 445
Thr Cys Phe Ser Ile Asn Ser Ala Met Ser Tyr Gly Phe Gln Leu Met
450 455 460
Leu Ala Lys Glu Ser Thr Gly Gly Leu Gln Trp Gly Asp Phe Met Thr
465 470 475 480
Ser Pro Gly Thr Asp Thr Thr Arg Phe Val Phe Gly His Val Val Ile
485 490 495
Met Leu Val Val Asp Cys Leu Ile Tyr Met Leu Ile Thr Leu Tyr Leu
500 505 510
Glu Gln Val Leu Pro Gly Pro Phe Gly Thr Pro Lys Pro Trp Tyr Phe
515 520 525
Pro Phe Gln Leu Gln Phe Trp Phe Pro Asn Tyr Lys Ser Lys Asp Ala
530 535 540
Gly Leu Ile Phe Glu Asn Asp Asn Ser Glu Phe Asp Asp Ile Ile Lys
545 550 555 560
Glu Lys Asp Pro Thr Asp His Glu Val Gly Val Lys Met Gln Asn Leu
565 570 575
Thr Lys Ile Phe Gly Asn Asn Ile Ala Val Asn Asn Leu Ser Leu Asn
580 585 590
Ile Tyr Asp Asp Gln Ile Thr Val Leu Leu Gly His Asn Gly Ala Gly
595 600 605
Lys Ser Thr Thr Ile Ser Met Leu Thr Gly Asn Leu Lys Val Thr Arg
610 615 620
Gly Thr Val Asn Val Ala Gly Tyr Asp Met Thr Ser Gln Ser Ser Ala
625 630 635 640
Ala Arg Ser His Ile Gly Leu Cys Pro Gln His Asn Ile Leu Phe Asn
645 650 655
Glu Leu Thr Val Lys Glu His Leu Glu Phe Phe Ala Arg Leu Lys Gly
660 665 670
Phe Lys Gly Lys Glu Leu Tyr Glu Glu Ile Asp Ser Leu Ile Glu Lys
675 680 685
Leu Glu Leu Gln Glu Lys Arg Asp Tyr Pro Ser Lys Gly Leu Ser Gly
690 695 700
Gly Gln Lys Arg Arg Leu Cys Val Gly Ile Ala Leu Ser Gly Ala Ala
705 710 715 720
Arg Val Val Leu Leu Asp Glu Pro Thr Ser Gly Met Asp Pro Ser Ser
725 730 735
Arg Arg Ala Leu Trp Glu Leu Leu Gln Lys Glu Lys Lys Gly Arg Ser
740 745 750
Met Ile Leu Thr Thr His Phe Met Asp Glu Ala Asp Ile Leu Gly Asp
755 760 765
Arg Val Ala Ile Met Ala Asn Gly Arg Leu Gln Cys Val Gly Ser Pro
770 775 780
Tyr Phe Leu Lys Arg His Tyr Gly Val Gly Tyr Thr Leu Val Ile Val
785 790 795 800
Lys Asp Thr Asp Phe Asp Phe Val Lys Cys Ser Val Leu Ile Asn Ser
805 810 815
Tyr Ile Pro Gly Thr Ile Val Lys Glu Asp Arg Gly Thr Glu Ile Thr
820 825 830
Tyr Asn Leu Val Asn Asp Tyr Ser His Val Phe Glu Glu Met Leu Asn
835 840 845
Asp Leu Glu Arg Asn Ile Asp Asn Ile Lys Phe Lys Asn Tyr Gly Leu
850 855 860
Val Ala Thr Thr Leu Glu Asp Val Phe Met Ser Val Gly Ala Asp Leu
865 870 875 880
Ser Pro Ile Asn Ser Glu Ser Asp Asp Ala Ile Thr Thr Thr Thr Asp
885 890 895
Ser Thr Ile Asp Asp Ile Leu Lys Gln Glu Ile Asp Ser Ser Leu Glu
900 905 910
Glu Leu Asp Lys Asp Glu Ser Asn Val Thr Gly Leu Arg Leu Phe Gly
915 920 925
Gln Gln Val Leu Ala Val Trp Met Lys Gln Trp Leu Val Leu Ile Arg
930 935 940
Ser Pro Trp Val Met Val Leu Gln Phe Leu Ala Pro Val Val Leu Ile
945 950 955 960
Asn Ser Thr Leu Gly Val Leu Arg Tyr Val Met Ser Leu Ser Pro Thr
965 970 975
Ile Arg Thr Arg Trp Leu Ser Leu Glu Glu Gly Tyr Thr Glu Ser Glu
980 985 990
Thr Leu Leu Ser Phe Asn Gly Ser Val Ala Ser Ser Val Gly Ala Leu
995 1000 1005
Ala Ala Gln Ala Tyr Gln Ser Leu Phe Ala Asn Ser Gly Val Met
1010 1015 1020
Asp Met Glu Ile Asn Ala Ile Gly Ser Gln Pro Ile Glu Glu Tyr
1025 1030 1035
Tyr Leu Asn Arg Thr Ser Asp Pro Val Val Met Gly Ser Leu Arg
1040 1045 1050
His Arg Leu Leu Ile Gly Ser Thr Phe Asp Asp Asn Ser Ala Thr
1055 1060 1065
Ala Trp Phe Ser Asn Phe Gly Tyr His Asp Val Ala Thr Ser Leu
1070 1075 1080
Ala Ala Ile His Ser Ala Ile Leu Arg Ser Lys Asn Ser Asp Ala
1085 1090 1095
Val Leu Asn Val Tyr Asn His Pro Leu Glu Ala Ser Tyr Ile Asp
1100 1105 1110
Gln Ser Asp Val Gln Thr Met Ile Ala Met Leu Ser Met Gln Leu
1115 1120 1125
Ser Ser Gly Ile Gly Ser Ser Val Ser Ile Val Ser Ala Val Phe
1130 1135 1140
Ile Met Phe Tyr Ile Lys Glu Arg Met Ser Gly Ala Lys Leu Leu
1145 1150 1155
Gln Asn Ala Ala Gly Val Ala Pro Ser Val Leu Trp Gly Gly Ala
1160 1165 1170
Ala Ile Phe Asn Trp Phe Trp Phe Leu Ile Thr Cys Val Ser Ile
1175 1180 1185
Val Ile Ser Cys Val Ala Phe Asp Val Ile Gly Leu Ser Asn Val
1190 1195 1200
His Glu Leu Gly Arg Met Phe Leu Cys Val Met Val Tyr Gly Ala
1205 1210 1215
Ala Met Leu Pro Leu Val Tyr Leu Leu Ser Leu Lys Phe Lys Gly
1220 1225 1230
Pro Ala Val Gly Phe Val Gly Phe Tyr Phe Leu Asn Val Leu Phe
1235 1240 1245
Gly Met Met Gly Ala Gln Val Val Glu Ala Leu Ser Ser Pro Met
1250 1255 1260
Leu Asp Thr Glu Gln Ala Ala His Ile Leu Asp Tyr Leu Leu Gln
1265 1270 1275
Phe Tyr Pro Leu Tyr Ser Leu Val Thr Ser Ile Arg Phe Leu Asn
1280 1285 1290
Gln Val Gly Leu Arg Glu Tyr Thr Cys Leu Gln Gly Cys Glu Tyr
1295 1300 1305
Leu Gln Ala Val Tyr Pro Asn Leu Glu Cys Ser Met Ala Ser Met
1310 1315 1320
Cys Glu Phe His Ser Asn Cys Cys Val Arg Glu Asn Pro Tyr Phe
1325 1330 1335
Asp Trp Glu Glu Pro Gly Val Leu Arg Tyr Leu Leu Ser Met Cys
1340 1345 1350
Phe Ser Cys Leu Ile Phe Trp Leu Leu Leu Met Thr Ile Glu Tyr
1355 1360 1365
Arg Val Val Gln Lys Val Phe Thr Phe Lys Lys Thr Pro Pro Pro
1370 1375 1380
Ile Asp Glu Ser Thr Leu Asp Glu Asp Val Met Thr Glu Ala Arg
1385 1390 1395
Arg Ala Arg Gln Val Pro Pro Thr Arg Arg Ser Asp His Ala Leu
1400 1405 1410
Leu Ala His Asp Leu Ser Lys Tyr Tyr Gly Lys His Leu Ala Val
1415 1420 1425
Asp Gln Val Ser Phe Ser Val Asn Asp Gly Glu Cys Phe Gly Leu
1430 1435 1440
Leu Gly Val Asn Gly Ala Gly Lys Thr Thr Thr Phe Lys Met Leu
1445 1450 1455
Met Gly Asp Glu Ser Ile Ser Ser Gly Glu Ala Tyr Val Ser Gly
1460 1465 1470
His Ser Val Gln Arg Asn Leu Asp Arg Val His Glu Asn Ile Gly
1475 1480 1485
Tyr Cys Pro Gln Phe Asp Ala Leu Phe Gly Glu Leu Thr Gly Arg
1490 1495 1500
Gln Thr Leu His Met Phe Ala Leu Met Arg Gly Leu Arg Leu Arg
1505 1510 1515
Thr Ala Ala Pro Ser Ala Glu Thr Leu Ala His Ala Leu Gly Phe
1520 1525 1530
Phe Lys His Leu Asp Lys Arg Val His Gln Tyr Ser Gly Gly Thr
1535 1540 1545
Lys Arg Lys Leu Asn Thr Ala Ile Ala Phe Met Gly Arg Thr Arg
1550 1555 1560
Leu Val Phe Val Asp Glu Pro Thr Thr Gly Val Asp Pro Ala Ala
1565 1570 1575
Lys Arg His Val Trp Arg Ala Thr Arg Gly Val Gln Arg Ala Gly
1580 1585 1590
Arg Gly Val Val Leu Thr Ser His Ser Met Glu Glu Cys Glu Ala
1595 1600 1605
Leu Cys Ser Arg Leu Thr Ile Met Val Asn Gly Arg Phe Gln Cys
1610 1615 1620
Leu Gly Thr Pro Gln His Leu Lys Asn Lys Phe Ser Gln Gly Phe
1625 1630 1635
Thr Leu Ile Ile Lys Met Lys Thr Asp Asp Ser Asp Ser Asp Thr
1640 1645 1650
Gln Ser Val Asn Ser Thr Thr Ser Val Val Asp Ser Val Lys Leu
1655 1660 1665
Tyr Val Ser Gly Asn Phe Glu Ser Pro Lys Ile Met Glu Glu Tyr
1670 1675 1680
His Gly Leu Leu Thr Tyr Tyr Leu Pro Asp Arg Ser Met Ala Trp
1685 1690 1695
Ser Arg Met Phe Gly Ile Met Glu Arg Ala Lys Gln Ile Leu Gln
1700 1705 1710
Ile Glu Asp Tyr Ser Ile Ser Gln Thr Thr Leu Glu Gln Ile Phe
1715 1720 1725
Leu Gln Phe Thr Lys Tyr Gln Arg Glu Glu Gly Thr Thr Leu
1730 1735 1740
<210> 3
<211> 5265
<212> DNA
<213> 欧洲玉米螟
<400> 3
gtgagtaggg aaaatatgaa tcggaaaaga gaaagcggaa gggcggccgg atcgtggatg 60
aaattccgtt tgctaatgtg gaagaatttt ctgcaacaat ggaggcatcc tattcaaact 120
atcgtagagg tgttgttgcc agttatcacg atgtctctag tgctactgct tcggtggcag 180
attgaaccta ccgcagaaga tgcgataaac ttttcgccat tacctgcaca atcactgaat 240
aattctatac aaatatttgc tggtctcaac gtaactaatt tctccattgc atactctcca 300
agaagtgaag ccttggagga tgtcttacgt agttccatgg caaacttact gctaaacaat 360
gcgttcgatc taatcagaat tatcactgat ctgtggcctg ctgaaccgcc attcccactg 420
ccagcgaata taacgtggcc tgaaaccccg ccagtcacac tgcctccaga tttagactgg 480
cctgatttag agggtgtaaa caaaactctg atttacgagt ttctcagaac cttaatacga 540
gttcaaccat acaattctag tgttgatctc agaactattt atgcttacga agagagaact 600
aagcaagtaa tagcagctgt ggaatttgat gactctcttt ttggtgctac ggatttgcct 660
ggaagtatat cgtattcctt aaggtttccg gagaggcctc gccttaatgc attatttggt 720
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agatcccgtt cttccgatgg aggctccaat cctggctacg tcagggaaat gtttattgcg 840
cttcagcaag taatatcaac gcaactaata acaagaatta ctggggagcc tatggagtca 900
ttctcagtca atattcagag atatccacac cctgcatatg tcgatgatat ggcagtagag 960
gcactccagt ttctatttcc catgttcatt atgctgacct ttagctacac agccgtgaat 1020
atcaccagag ccatcacagt tgagaaggaa cttcaactta aggaaacatt gaaaattatg 1080
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ctctacttgg catgcgtgat attcttttgt ttcatgctca gtggtatatt ttcgaaaggt 1320
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ctgtccattg acattgctat gtcagtccct atgcaaatat ttacatgtct cagtatcaac 1440
tctgcaatgt cttacggatt ccagctgctt ctgggtagag agagcacagg cggtatgcaa 1500
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gatgtaataa aggagaacga tccggtgggt cacccagttg gagttaaaat gaacaatctg 1800
acaaaagtat tcggcaagaa tactgcagta aataatttga gtttaaatat atacgacgac 1860
caaattacag ttttgctcgg ccataatgga gcaggaaaat ctacaactat atcgatgttg 1920
acaggtaatt tggaggcaac atatgggaca gtgtgggtgg ccggctatga catgacttgg 1980
aacaccagtg atgctcgctc acatatagga ctatgccctc aacataacgt cctgttcaat 2040
gagctcaccg tcagggaaca tttagaattc tttgccagac tgaaaggatt ccaaggcgaa 2100
gaattgaaca atgaaataga cactcttatc gagaaactag agttgacaga gaagcgtgac 2160
taccagtcca aaggcttgtc cggcggacag aagcggaggc tgtgcgttgg cgtggcactg 2220
tgtggcgacg cgcgagtggt gctccttgac gagcctacgt cgggcatgga cccctcctcg 2280
cgccgcgctc tctgggacct attgcagaag gaaaaaaaag gtcgttccat gatattgaca 2340
acgcacttca tggacgaagc tgacatcctg ggggaccgga tcgctattat ggcgagcggg 2400
cagttgcaat gcgtcggctc gccatacttc ctcaagcgac actacggcgt cgggtacact 2460
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gacaccatgt cgttgaccat ggtcaatgaa ccgattgatg aatattatat ggaaagggcg 3180
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gattcggtaa ccgcatggtt cagcaacttc ggctaccacg acattgccac ttcgttagcc 3300
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gaactcggtc gcctatactt gtgcctgatg gtgtacggcg ctgcgatggt gcctctgaac 3720
tacctgtctt ccctcctgtt ccaaggcccg gcacttggct tcgttgtcat attcttcata 3780
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ctcgtaacgt ctgtcagact attgaatcag ttcggcatgt tagagagctc gtgcctacaa 3960
agctgtggat acttacagaa cattatgaac ataccagagt gcaatatgac tgttatgtgc 4020
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ggcaacaaac gcaaattgag cacagcggta gccttactgg gccgcactcg gttggtgttc 4740
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ttcctacaat ttaccaaata tcaacaagag gctgcaattc aataa 5265
<210> 4
<211> 1754
<212> PRT
<213> 欧洲玉米螟
<400> 4
Val Ser Arg Glu Asn Met Asn Arg Lys Arg Glu Ser Gly Arg Ala Ala
1 5 10 15
Gly Ser Trp Met Lys Phe Arg Leu Leu Met Trp Lys Asn Phe Leu Gln
20 25 30
Gln Trp Arg His Pro Ile Gln Thr Ile Val Glu Val Leu Leu Pro Val
35 40 45
Ile Thr Met Ser Leu Val Leu Leu Leu Arg Trp Gln Ile Glu Pro Thr
50 55 60
Ala Glu Asp Ala Ile Asn Phe Ser Pro Leu Pro Ala Gln Ser Leu Asn
65 70 75 80
Asn Ser Ile Gln Ile Phe Ala Gly Leu Asn Val Thr Asn Phe Ser Ile
85 90 95
Ala Tyr Ser Pro Arg Ser Glu Ala Leu Glu Asp Val Leu Arg Ser Ser
100 105 110
Met Ala Asn Leu Leu Leu Asn Asn Ala Phe Asp Leu Ile Arg Ile Ile
115 120 125
Thr Asp Leu Trp Pro Ala Glu Pro Pro Phe Pro Leu Pro Ala Asn Ile
130 135 140
Thr Trp Pro Glu Thr Pro Pro Val Thr Leu Pro Pro Asp Leu Asp Trp
145 150 155 160
Pro Asp Leu Glu Gly Val Asn Lys Thr Leu Ile Tyr Glu Phe Leu Arg
165 170 175
Thr Leu Ile Arg Val Gln Pro Tyr Asn Ser Ser Val Asp Leu Arg Thr
180 185 190
Ile Tyr Ala Tyr Glu Glu Arg Thr Lys Gln Val Ile Ala Ala Val Glu
195 200 205
Phe Asp Asp Ser Leu Phe Gly Ala Thr Asp Leu Pro Gly Ser Ile Ser
210 215 220
Tyr Ser Leu Arg Phe Pro Glu Arg Pro Arg Leu Asn Ala Leu Phe Gly
225 230 235 240
Arg Gly Gly Arg Ser Trp Arg Thr Asp Glu Leu Phe Pro Ala Phe Glu
245 250 255
Leu Pro Gly Pro Arg Ser Arg Ser Ser Asp Gly Gly Ser Asn Pro Gly
260 265 270
Tyr Val Arg Glu Met Phe Ile Ala Leu Gln Gln Val Ile Ser Thr Gln
275 280 285
Leu Ile Thr Arg Ile Thr Gly Glu Pro Met Glu Ser Phe Ser Val Asn
290 295 300
Ile Gln Arg Tyr Pro His Pro Ala Tyr Val Asp Asp Met Ala Val Glu
305 310 315 320
Ala Leu Gln Phe Leu Phe Pro Met Phe Ile Met Leu Thr Phe Ser Tyr
325 330 335
Thr Ala Val Asn Ile Thr Arg Ala Ile Thr Val Glu Lys Glu Leu Gln
340 345 350
Leu Lys Glu Thr Leu Lys Ile Met Gly Leu Pro Thr Trp Ile His Trp
355 360 365
Thr Ala Trp Phe Cys Lys Gln Phe Leu Phe Leu Leu Val Ala Ala Val
370 375 380
Leu Ile Met Ile Leu Leu Lys Val Asn Trp Phe Thr Asn Glu Asp Gly
385 390 395 400
Phe Ser Asp Tyr Ala Val Phe Thr Asn Thr Pro Trp Ser Val Leu Leu
405 410 415
Phe Tyr Leu Thr Leu Tyr Leu Ala Cys Val Ile Phe Phe Cys Phe Met
420 425 430
Leu Ser Gly Ile Phe Ser Lys Gly Ser Thr Ala Ala Leu Phe Ala Gly
435 440 445
Val Val Trp Phe Leu Thr Tyr Val Pro Ala Phe Ile Leu Ser Ile Asp
450 455 460
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Ser Ala Met Ser Tyr Gly Phe Gln Leu Leu Leu Gly Arg Glu Ser Thr
485 490 495
Gly Gly Met Gln Trp Gly Glu Phe Met Ser Ala Pro Val Thr Glu Thr
500 505 510
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Val Leu Tyr Met Leu Ile Ala Leu Tyr Leu Glu Gln Val Leu Pro Gly
530 535 540
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545 550 555 560
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565 570 575
Ala Glu Thr Pro Asp Val Ile Lys Glu Asn Asp Pro Val Gly His Pro
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595 600 605
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Glu Ile Asp Thr Leu Ile Glu Lys Leu Glu Leu Thr Glu Lys Arg Asp
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Tyr Gln Ser Lys Gly Leu Ser Gly Gly Gln Lys Arg Arg Leu Cys Val
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Leu Ala Ser Gly Ile Gly Ser Ser Leu Gly Ile Ala Ser Ala Val
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Phe Val Met Phe Tyr Ile Lys Glu Arg Val Ser Arg Ala Lys Leu
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Leu Gln Lys Ala Ala Gly Ile Gln Pro Ala Val Leu Trp Gly Ser
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Ala Ala Val Phe Asp Trp Leu Trp Phe Leu Val Val Cys Val Thr
1190 1195 1200
Ile Val Ile Ile Cys Ala Ala Phe Asp Val Met Gly Leu Ser Ser
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Gln Phe Phe Pro Leu Tyr Ser Leu Val Thr Ser Val Arg Leu Leu
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Gly Asp Glu Thr Val Ser Ser Gly Asp Ala Phe Val Ser Gly His
1475 1480 1485
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1595 1600 1605
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1610 1615 1620
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Leu Thr Ile Lys Met Arg Gln Glu Glu Glu Gln Ala Ser Thr Ser
1655 1660 1665
Ser Cys Ile Val Gln Arg Pro Val Asp Thr Val Lys Gln Phe Val
1670 1675 1680
Glu Ser Asn Phe Thr Asn Pro Lys Leu Met Glu Glu Tyr Gln Gly
1685 1690 1695
Leu Leu Thr Tyr Tyr Leu Pro Asp Arg Ser Ile Ala Trp Ser Arg
1700 1705 1710
Met Phe Gly Ile Met Glu Gln Ala Lys Arg Asp Leu Gln Val Glu
1715 1720 1725
Asp Tyr Ser Ile Ser Gln Thr Thr Leu Glu Gln Ile Phe Leu Gln
1730 1735 1740
Phe Thr Lys Tyr Gln Gln Glu Ala Ala Ile Gln
1745 1750
<210> 5
<211> 5250
<212> DNA
<213> 欧洲玉米螟
<400> 5
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atgtggaaga attttctgca acaatggagg catcctattc aaactatcgt agaggtgttg 120
ttgccagtta tcacgatgtc tctagtgcta ctgcttcggt ggcagattga acctaccgca 180
gaagatgcga taaacttttc gccattacct gcacaatcac tgaataattc tatacaaata 240
tttgctggtc tcaacgtaac taatttgtcc attgcatact ctccaagaag tgaagccttg 300
gaggatgtct tacgtagttc catggcaaac ttactgctaa acaatgcgtt cgatctaatc 360
agaattatca ctgatctgtg gcctgctgaa ccgccattcc cactgccagc gaatataacg 420
tggcctgaaa ccccgccagt cacactgcct ccagatttag actggcctga tttagagggt 480
gtaaacaaaa ctctgattta cgagtttctc agaaccttaa tacgagttca accatacaat 540
tctagtgttg atctcagaac tatttatgct tacgaagaga gaactaagca agtaatagca 600
gctgtggaat ttgatgactc tctttttgat gctacggatt tgcctggaag tatatcgtat 660
tccttaaggt ttccggagag gcctcgcctt aatgcattat ttggtcgagg cggccgatct 720
tggagaacag acgaattgtt tcctgcattt gaattacctg gaccaagatc ccgttcttct 780
gatggaggct ccaatcctgg ctacgtcagg gaaatgttta ttgcgcttca gcaagtaata 840
tcaacgcaac taataacaag aattactggg gagcctatgg agtcattctc agtcaatatt 900
cagagatatc cacaccctgc atatgtcgat gatatggcag tagaggcact ccagtttcta 960
tttcccatgt tcattatgct gacctttagc tacacagccg tgaatatcac cagagccatc 1020
acagttgaga aggaacttca acttaaggaa acattgaaaa ttatgggctt acccacatgg 1080
atacattgga ctgcatggtt ttgcaaacag ttcctctttt tattggtagc agctgttctt 1140
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gtgatattct tttgtttcat gctcagtggt atattttcga aaggtagtac agcagcgcta 1320
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gctatgtcag tccctatgca aatatttaca tgtctcagta tcaactctgc aatgtcttac 1440
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aacgatccgg tgggtcaccc agttggagtt aaaatgaaca atctgacaaa agtattcggc 1800
aagaatactg cagtaaataa tttgagttta aatatatacg acgaccaaat tacagttttg 1860
ctcggccata atggagcagg aaaatctaca actatatcga tgttgacagg taatttggag 1920
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cgctcacata taggactatg ccctcaacat aacgtcctgt tcaatgagct caccgtcagg 2040
gaacatttag aattctttgc cagactgaaa ggattccaag gcgaagaatt gaacaatgaa 2100
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gtggtgctcc ttgacgagcc tacgtcgggc atggacccct cctcgcgccg cgctctctgg 2280
gacctattgc agaaggaaaa aaaaggtcgt tccatgatat tgacaacgca cttcatggac 2340
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tactcgcaaa cggagagcct tttgagtttc atcggcaatt ccacatcatc gctgggggcg 3060
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ctgttccaag gcccggcact tggcttcgtt gtcatattct tcataaatgt actcttcgga 3780
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tgctgtattc ctgcagaccc atactgggcc tgggacggtg gcattatgcg atatgtaact 4080
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gaggatgtat tggacgaaga gaagcacgtc gcgcgcatcg gctccgacct ctctcagcac 4260
agcctcgtgg cgcgcgggct ctccaagtac tacggcaagc acctggccgt caatcaagtg 4320
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accaccacgt tcaagatgct aatgggcgac gagaccgtct ccagcggaga cgcgttcgtc 4440
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aacaagtttt ctgaaggttt cactttaact attaaaatga gacaagaaga ggaacaagca 4980
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aaatatcaac aagaggctgc aattcaataa 5250
<210> 6
<211> 1749
<212> PRT
<213> 欧洲玉米螟
<400> 6
Met Asn Arg Lys Arg Gly Ser Gly Arg Ala Ala Gly Ser Trp Met Lys
1 5 10 15
Phe Arg Leu Leu Met Trp Lys Asn Phe Leu Gln Gln Trp Arg His Pro
20 25 30
Ile Gln Thr Ile Val Glu Val Leu Leu Pro Val Ile Thr Met Ser Leu
35 40 45
Val Leu Leu Leu Arg Trp Gln Ile Glu Pro Thr Ala Glu Asp Ala Ile
50 55 60
Asn Phe Ser Pro Leu Pro Ala Gln Ser Leu Asn Asn Ser Ile Gln Ile
65 70 75 80
Phe Ala Gly Leu Asn Val Thr Asn Leu Ser Ile Ala Tyr Ser Pro Arg
85 90 95
Ser Glu Ala Leu Glu Asp Val Leu Arg Ser Ser Met Ala Asn Leu Leu
100 105 110
Leu Asn Asn Ala Phe Asp Leu Ile Arg Ile Ile Thr Asp Leu Trp Pro
115 120 125
Ala Glu Pro Pro Phe Pro Leu Pro Ala Asn Ile Thr Trp Pro Glu Thr
130 135 140
Pro Pro Val Thr Leu Pro Pro Asp Leu Asp Trp Pro Asp Leu Glu Gly
145 150 155 160
Val Asn Lys Thr Leu Ile Tyr Glu Phe Leu Arg Thr Leu Ile Arg Val
165 170 175
Gln Pro Tyr Asn Ser Ser Val Asp Leu Arg Thr Ile Tyr Ala Tyr Glu
180 185 190
Glu Arg Thr Lys Gln Val Ile Ala Ala Val Glu Phe Asp Asp Ser Leu
195 200 205
Phe Asp Ala Thr Asp Leu Pro Gly Ser Ile Ser Tyr Ser Leu Arg Phe
210 215 220
Pro Glu Arg Pro Arg Leu Asn Ala Leu Phe Gly Arg Gly Gly Arg Ser
225 230 235 240
Trp Arg Thr Asp Glu Leu Phe Pro Ala Phe Glu Leu Pro Gly Pro Arg
245 250 255
Ser Arg Ser Ser Asp Gly Gly Ser Asn Pro Gly Tyr Val Arg Glu Met
260 265 270
Phe Ile Ala Leu Gln Gln Val Ile Ser Thr Gln Leu Ile Thr Arg Ile
275 280 285
Thr Gly Glu Pro Met Glu Ser Phe Ser Val Asn Ile Gln Arg Tyr Pro
290 295 300
His Pro Ala Tyr Val Asp Asp Met Ala Val Glu Ala Leu Gln Phe Leu
305 310 315 320
Phe Pro Met Phe Ile Met Leu Thr Phe Ser Tyr Thr Ala Val Asn Ile
325 330 335
Thr Arg Ala Ile Thr Val Glu Lys Glu Leu Gln Leu Lys Glu Thr Leu
340 345 350
Lys Ile Met Gly Leu Pro Thr Trp Ile His Trp Thr Ala Trp Phe Cys
355 360 365
Lys Gln Phe Leu Phe Leu Leu Val Ala Ala Val Leu Ile Met Ile Leu
370 375 380
Leu Lys Val Asn Trp Phe Thr Asn Glu Asp Gly Phe Ser Asp Tyr Ala
385 390 395 400
Ile Phe Thr Asn Thr Pro Trp Ser Val Leu Leu Phe Tyr Leu Thr Leu
405 410 415
Tyr Leu Ala Cys Val Ile Phe Phe Cys Phe Met Leu Ser Gly Ile Phe
420 425 430
Ser Lys Gly Ser Thr Ala Ala Leu Phe Ala Gly Val Val Trp Phe Leu
435 440 445
Thr Tyr Val Pro Ala Phe Ile Leu Ser Ile Asp Ile Ala Met Ser Val
450 455 460
Pro Met Gln Ile Phe Thr Cys Leu Ser Ile Asn Ser Ala Met Ser Tyr
465 470 475 480
Gly Phe Gln Leu Leu Leu Gly Arg Glu Ser Thr Gly Gly Met Gln Trp
485 490 495
Gly Glu Phe Met Ser Ala Pro Val Thr Glu Thr Asp Arg Leu Leu Phe
500 505 510
Gly His Val Val Ile Met Leu Val Val Asp Ser Val Leu Tyr Met Leu
515 520 525
Ile Ala Leu Tyr Leu Glu Gln Val Leu Pro Gly Pro Tyr Gly Thr Pro
530 535 540
Arg Pro Trp Tyr Phe Leu Phe Gln Lys Gln Phe Trp Gly Cys Gly Thr
545 550 555 560
Lys Ser Ala Ser Asp Ser Val Leu Leu Asn Val Pro Glu Thr Pro Asp
565 570 575
Val Ile Lys Glu Asn Asp Pro Val Gly His Pro Val Gly Val Lys Met
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Asn Asn Leu Thr Lys Val Phe Gly Lys Asn Thr Ala Val Asn Asn Leu
595 600 605
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Thr Ser Asp Ala Arg Ser His Ile Gly Leu Cys Pro Gln His Asn Val
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Leu Phe Asn Glu Leu Thr Val Arg Glu His Leu Glu Phe Phe Ala Arg
675 680 685
Leu Lys Gly Phe Gln Gly Glu Glu Leu Asn Asn Glu Ile Asp Thr Leu
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Ile Glu Lys Leu Glu Leu Thr Glu Lys Arg Asp Tyr Gln Ser Lys Gly
705 710 715 720
Leu Ser Gly Gly Gln Lys Arg Arg Leu Cys Val Gly Val Ala Leu Cys
725 730 735
Gly Asp Ala Arg Val Val Leu Leu Asp Glu Pro Thr Ser Gly Met Asp
740 745 750
Pro Ser Ser Arg Arg Ala Leu Trp Asp Leu Leu Gln Lys Glu Lys Lys
755 760 765
Gly Arg Ser Met Ile Leu Thr Thr His Phe Met Asp Glu Ala Asp Ile
770 775 780
Leu Gly Asp Arg Ile Ala Ile Met Ala Ser Gly Gln Leu Gln Cys Val
785 790 795 800
Gly Ser Pro Tyr Phe Leu Lys Arg His Tyr Gly Val Gly Tyr Thr Leu
805 810 815
Val Ile Val Lys Asp Val Asp Phe Gln Leu Glu Ala Cys Thr Glu Ile
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Leu Ser Lys Tyr Ile Pro Gly Thr Thr Val Lys Glu Asp Arg Gly Thr
835 840 845
Glu Val Thr Tyr Asn Leu Thr Asn Gly Arg Ser Gln Ile Phe Glu Thr
850 855 860
Met Leu Leu Asp Leu Glu Thr Asn Met Gln Arg Ile Lys Phe Lys Asn
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Tyr Gly Leu Val Ala Thr Thr Leu Glu Asp Val Phe Met Ser Val Gly
885 890 895
Ser Asp Val Ser Ser Thr Gln Ser Glu Ser Asp Glu Val Glu Thr Ala
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915 920 925
Thr Gln Glu Gln Ser Ile Ser Gly Phe Arg Leu Leu Val Gln His Val
930 935 940
Leu Ala Val Trp Leu Lys Leu Ser Leu Val Trp Ile Arg Ser Trp Gly
945 950 955 960
Leu Ile Leu Leu Gln Ile Leu Val Pro Val Leu Gln Met Thr Ala Thr
965 970 975
Leu Gly Val Met Glu Tyr Ile Phe Ser Leu Ile Pro Thr Ile Gln Arg
980 985 990
Arg Ala Leu Ser Phe Ala Val Gly Tyr Ser Gln Thr Glu Ser Leu Leu
995 1000 1005
Ser Phe Ile Gly Asn Ser Thr Ser Ser Leu Gly Ala Leu Ala Thr
1010 1015 1020
Ala Ala Tyr Glu Met Met Ile Asn Ser Ser Val Val Asp Thr Met
1025 1030 1035
Ser Ile Thr Met Val Asn Glu Pro Ile Asp Glu Tyr Tyr Met Glu
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Arg Ala Glu Gln Gly Gly Val Gly Pro Leu Arg His Thr Val Leu
1055 1060 1065
Ser Gly Ala Thr Phe Thr Asp Asp Ser Val Thr Ala Trp Phe Ser
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Asn Phe Gly Tyr His Asp Ile Ala Thr Ser Leu Ala Ala Val His
1085 1090 1095
Thr Ala Leu Ile Lys Ala Lys Asn Ala Ser Tyr Glu Ile Asn Val
1100 1105 1110
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Gln Met Arg Val Thr Met Leu Ala Met Gln Leu Ala Ser Gly Ile
1130 1135 1140
Gly Ser Ser Leu Gly Ile Ala Ser Ala Val Phe Val Met Phe Tyr
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Ile Lys Glu Arg Val Ser Arg Ala Lys Leu Leu Gln Lys Ala Ala
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Gly Ile Gln Pro Ala Val Leu Trp Gly Ser Ala Ala Val Phe Asp
1175 1180 1185
Trp Leu Trp Phe Leu Val Val Cys Val Thr Ile Val Ile Ile Cys
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Ala Ala Phe Asp Val Met Gly Leu Ser Ser Val Asp Glu Leu Gly
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1235 1240 1245
Phe Val Val Ile Phe Phe Ile Asn Val Leu Phe Gly Leu Met Gly
1250 1255 1260
Ala Gln Ile Val Asp Ala Leu Ser Ser Pro Gln Leu Asn Thr Ala
1265 1270 1275
Glu Ala Ala Arg Ile Leu Asp Tyr Ile Leu Gln Phe Phe Pro Leu
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1295 1300 1305
Leu Glu Ser Ser Cys Leu Gln Ser Cys Gly Tyr Leu Gln Asn Ile
1310 1315 1320
Met Asn Ile Pro Glu Cys Asn Met Thr Val Met Cys Asp Leu Tyr
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Ile Met Val Asn Gly Arg Phe Gln Cys Leu Gly Thr Pro Gln His
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Leu Lys Asn Lys Phe Ser Glu Gly Phe Thr Leu Thr Ile Lys Met
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Arg Gln Glu Glu Glu Gln Ala Ser Thr Ser Ser Cys Ile Val Gln
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Arg Pro Val Asp Thr Val Lys Gln Phe Val Glu Ser Asn Phe Thr
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Asn Pro Lys Leu Met Glu Glu Tyr Gln Gly Leu Leu Thr Tyr Tyr
1685 1690 1695
Leu Pro Asp Arg Ser Ile Ala Trp Ser Arg Met Phe Gly Ile Met
1700 1705 1710
Glu Gln Ala Lys Arg Asp Leu Gln Val Glu Asp Tyr Ser Ile Ser
1715 1720 1725
Gln Thr Thr Leu Glu Gln Ile Phe Leu Gln Phe Thr Lys Tyr Gln
1730 1735 1740
Gln Glu Ala Ala Ile Gln
1745
<210> 7
<211> 5900
<212> DNA
<213> 草地贪夜蛾
<400> 7
agtgaatatg ccgtactcta ttgttaagtg aaaacgttat tcgttcaaat ataaatcggt 60
ctaaaaatat aaaaggaggc agacgccatc gccttaaaaa tgcggctggt accgaagcag 120
gcgagcccct tcgcaaagtt ccggctgctg atgtggaaga acttcctgca gcaatggagg 180
cacagaacgc aaacagtcct cgaaattcta ctcccagttc tcaccatgac gctggtgcta 240
atcctacgat ggcagataga accagcagaa agagaaacac aaacctatcc gcctttcaga 300
gcaaacacgc tcaacttttc cactgttgta ctgtttggtc tggattgtcc taatgtatct 360
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gatcaaatca cagtattact tggacataat ggtgctggga aatcgaccac aatatcaatg 1920
ttgacaggca atttggaggt aacccggggt acagtgactg tcgcgggata tgacatgaca 1980
cacgaaactt atgcggctcg tgcccatatc ggcttatgtc cccaacacaa tgtactgttt 2040
aacgaactca ctgtcagaga acatttggaa ttctttgcca ggttgaaagg atttagggga 2100
gcagagctca agtctgagat tgatactctt atcgaaaagt tggaactaca agacaagcga 2160
gactatccct ctaatggttt gtctggaggt caaaagcgac gtttatgtgt tggaatagct 2220
ttaagtggag cagcacgtgt agtactactc gatgaaccta cttctggaat ggatccttct 2280
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aaccttcagt gcaccatgga aagcttatgt tcacgctacg aagaatgctg tgtcgagccg 4080
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gaagactaca gcatctcaca gactacacta gaacaaatat tcttacagtt tacaaagtac 5280
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<211> 1735
<212> PRT
<213> 草地贪夜蛾
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Leu Met Trp Lys Asn Phe Leu Gln Gln Trp Arg His Arg Thr Gln Thr
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Val Leu Glu Ile Leu Leu Pro Val Leu Thr Met Thr Leu Val Leu Ile
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Leu Arg Trp Gln Ile Glu Pro Ala Glu Arg Glu Thr Gln Thr Tyr Pro
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Pro Phe Arg Ala Asn Thr Leu Asn Phe Ser Thr Val Val Leu Phe Gly
65 70 75 80
Leu Asp Cys Pro Asn Val Ser Ile Ala Tyr Ser Pro Thr Ser Pro Val
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Leu Glu Asp Val Val Arg Asn Ala Ile Thr Asn Leu Leu Ile Gln Asn
100 105 110
Met Glu Asp Leu Ile Ala Arg Leu Pro Ile Glu Ile Glu Leu Pro Pro
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Thr Ile Glu Ile Asn Ser Thr Ala Ile Leu Asp Trp Ile Lys Ser Arg
130 135 140
Ile Arg Val Gln Ala Tyr Asn Asn Ser His Glu Thr Arg Gly Ile Tyr
145 150 155 160
Ile Glu Glu Glu Asn Thr Arg Arg Val Ile Ala Val Val Glu Phe Asp
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Asp Lys Leu Tyr Gly Ala Glu Ser Leu Ser Asn Asn Leu Ser Tyr Ser
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Leu Arg Phe Pro Glu Arg Pro Arg Leu Asn Ser Leu Phe Gln Thr Gly
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210 215 220
Gly Pro Arg Phe Ser Lys Ser Trp Glu Gly Gly Asn Asp Pro Gly Tyr
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Val Asn Glu Met Phe Ile Ala Leu Gln Gln Val Ile Ser Thr Glu Leu
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Ile Ser Arg Ser Thr Gly Val Asn Met Ser Glu Phe Thr Val Phe Leu
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Gln Arg Tyr Pro His Pro Pro Tyr Ile Arg Asp Met Ala Leu Asp Leu
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Lys Glu Thr Met Lys Ile Met Gly Leu Pro Thr Trp Leu His Trp Thr
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Ala Trp Thr Cys Lys Gln Phe Val Phe Leu Leu Val Ser Ala Ser Leu
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Ser Ser Phe Phe Ser Lys Ala Ser Thr Ala Ala Leu Cys Thr Val Val
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Arg Phe Val Phe Gly His Val Val Ile Met Leu Val Val Asp Cys Phe
485 490 495
Val Tyr Met Leu Val Thr Leu Tyr Phe Glu Gln Val Met Pro Gly Pro
500 505 510
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Phe Pro His Tyr Lys Pro Gly Thr Val Leu Val Leu Glu Asn Glu Asn
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Leu Leu Gly His Asn Gly Ala Gly Lys Ser Thr Thr Ile Ser Met Leu
595 600 605
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Glu Phe Phe Ala Arg Leu Lys Gly Phe Arg Gly Ala Glu Leu Lys Ser
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Glu Ile Asp Thr Leu Ile Glu Lys Leu Glu Leu Gln Asp Lys Arg Asp
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Gly Ile Ala Leu Ser Gly Ala Ala Arg Val Val Leu Leu Asp Glu Pro
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Tyr Tyr Phe Met Asn Val Leu Phe Gly Met Met Gly Ala Gln Ile
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<212> DNA
<213> 大豆尺蠖
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tag 5283
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<213> 大豆尺蠖
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<213> 玉米穗虫
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Met Asn Met Glu Glu Leu Ser Ile Ala Tyr Ser Pro Ala Ser Pro Val
85 90 95
Leu Asp Asp Val Met Arg Thr Ala Val Ile Asn Leu Leu Thr Ala Asn
100 105 110
Met Lys Asp Leu Ile Pro Ile Phe Ile Asp Asn Leu Pro Pro Gly Ile
115 120 125
Ala Asn Ile Thr Phe Pro Pro Asp Met Asn Leu Asn Thr Ser Ala Ile
130 135 140
Glu Glu Phe Val Lys Ser Arg Ile Arg Val Val Pro Tyr Asn Ser Ser
145 150 155 160
Tyr Glu Ile Arg Gly Ile Tyr Val Asp Glu Glu Thr Thr Arg Ser Ile
165 170 175
Ile Ala Ala Val Glu Phe Asp Asp Lys Leu Tyr Gly Ala Glu Gln Leu
180 185 190
Ser Asn Asn Leu Ser Tyr Ser Leu Arg Phe Pro Glu Arg Pro Arg Leu
195 200 205
Asn Ser Phe Phe Gln Thr Gly Gly Arg Thr Trp Arg Ser Asp Gly Val
210 215 220
Phe Pro Val Phe Glu Val Pro Gly Pro Arg Phe Pro His Ser Trp Glu
225 230 235 240
Gly Gly Asn Asp Pro Gly Tyr Val Asn Glu Met Phe Val Ala Leu Gln
245 250 255
Gln Val Ile Ser Met Glu Leu Val Ser Arg Ala Thr Gly Leu Asp Leu
260 265 270
Lys Ser Phe Arg Val Asn Ile Gln Arg Tyr Pro His Pro Pro Tyr Leu
275 280 285
His Asp Gln Ser Val Asp Leu Leu Gln Phe Met Phe Pro Leu Phe Ile
290 295 300
Met Leu Ser Phe Ser Tyr Thr Ala Val Asn Ile Ala Arg Ala Val Thr
305 310 315 320
Val Glu Lys Glu Leu Gln Leu Lys Glu Thr Met Lys Ile Met Gly Leu
325 330 335
Pro Thr Trp Leu His Trp Thr Ala Trp Phe Val Lys Gln Phe Ile Tyr
340 345 350
Leu Ser Ile Thr Ala Val Leu Leu Val Val Leu Leu Lys Val Asn Trp
355 360 365
Phe Thr Asn Asp Asp Gly Phe Ser Glu Tyr Ala Val Phe Thr Asn Thr
370 375 380
Pro Trp Thr Val Leu Leu Phe Phe Leu Ile Leu Tyr Leu Ser Cys Ala
385 390 395 400
Ile Phe Phe Ser Phe Met Val Ser Ser Ile Phe Ser Lys Gly Ser Thr
405 410 415
Ala Ala Leu Phe Met Ala Val Ala Trp Phe Leu Thr Tyr Ile Pro Ala
420 425 430
Phe Leu Leu Ala Met Asp Ile Asn Met Ser Thr Ala Val Gln Val Ile
435 440 445
Thr Cys Phe Ser Ile Asn Ser Ala Met Ser Tyr Gly Phe Gln Leu Met
450 455 460
Leu Ala Lys Glu Ser Thr Gly Gly Leu Gln Trp Gly Asp Phe Met Thr
465 470 475 480
Ser Pro Gly Thr Asp Thr Thr Arg Phe Val Phe Gly His Val Val Ile
485 490 495
Met Leu Val Val Asp Cys Leu Ile Tyr Met Leu Ile Thr Leu Tyr Leu
500 505 510
Glu Gln Val Leu Pro Gly Pro Phe Gly Thr Pro Lys Pro Trp Tyr Phe
515 520 525
Pro Phe Gln Leu Gln Phe Trp Phe Pro Asn Tyr Lys Ser Lys Asp Ala
530 535 540
Gly Leu Ile Phe Glu Asn Asp Asn Ser Glu Phe Asp Asp Ile Ile Lys
545 550 555 560
Glu Lys Asp Pro Thr Asp His Glu Val Gly Val Lys Met Gln Asn Leu
565 570 575
Thr Lys Ile Phe Gly Asn Asn Ile Ala Val Asn Asn Leu Ser Leu Asn
580 585 590
Ile Tyr Asp Asp Gln Ile Thr Val Leu Leu Gly His Asn Gly Ala Gly
595 600 605
Lys Ser Thr Thr Ile Ser Met Leu Thr Gly Asn Leu Lys Val Thr Arg
610 615 620
Gly Thr Val Asn Val Ala Gly Tyr Asp Met Thr Ser Gln Ser Ser Ala
625 630 635 640
Ala Arg Ser His Ile Gly Leu Cys Pro Gln His Asn Ile Leu Phe Asn
645 650 655
Glu Leu Thr Val Lys Glu His Leu Glu Phe Phe Ala Arg Leu Lys Gly
660 665 670
Phe Lys Gly Lys Glu Leu Tyr Glu Glu Ile Asp Ser Leu Ile Glu Lys
675 680 685
Leu Glu Leu Gln Glu Lys Arg Asp Tyr Pro Ser Lys Gly Leu Ser Gly
690 695 700
Gly Gln Lys Arg Arg Leu Cys Val Gly Ile Ala Leu Ser Gly Ala Ala
705 710 715 720
Arg Val Val Leu Leu Asp Glu Pro Thr Ser Gly Met Asp Pro Ser Ser
725 730 735
Arg Arg Ala Leu Trp Glu Leu Leu Gln Lys Glu Lys Lys Gly Arg Ser
740 745 750
Met Ile Leu Thr Thr His Phe Met Asp Glu Ala Asp Ile Leu Gly Asp
755 760 765
Arg Val Ala Ile Met Ala Asn Gly Arg Leu Gln Cys Val Gly Ser Pro
770 775 780
Tyr Phe Leu Lys Arg His Tyr Gly Val Gly Tyr Thr Leu Val Ile Val
785 790 795 800
Lys Asp Thr Asp Phe Asp Phe Val Lys Cys Ser Val Leu Ile Asn Ser
805 810 815
Tyr Ile Pro Gly Thr Ile Val Lys Glu Asp Arg Gly Thr Glu Ile Thr
820 825 830
Tyr Asn Leu Val Asn Asp Tyr Ser His Val Phe Glu Glu Met Leu Asn
835 840 845
Asp Leu Glu Arg Asn Ile Asp Asn Ile Lys Phe Lys Asn Tyr Gly Leu
850 855 860
Val Ala Thr Thr Leu Glu Asp Val Phe Met Ser Val Gly Ala Asp Leu
865 870 875 880
Ser Pro Ile Asn Ser Glu Ser Asp Asp Ala Ile Thr Thr Thr Thr Asp
885 890 895
Ser Thr Ile Asp Asp Ile Leu Lys Gln Glu Ile Asp Ser Ser Leu Glu
900 905 910
Glu Leu Asp Lys Asp Glu Ser Asn Val Thr Gly Leu Arg Leu Phe Gly
915 920 925
Gln Gln Val Leu Ala Val Trp Met Lys Gln Trp Leu Val Leu Ile Arg
930 935 940
Ser Pro Trp Val Met Val Leu Gln Phe Leu Ala Pro Val Val Leu Ile
945 950 955 960
Asn Ser Thr Leu Gly Val Leu Arg Tyr Val Met Ser Leu Ser Pro Thr
965 970 975
Ile Arg Thr Arg Trp Leu Ser Leu Glu Glu Gly Tyr Thr Glu Ser Glu
980 985 990
Thr Leu Leu Ser Phe Asn Gly Ser Val Ala Ser Ser Val Gly Ala Leu
995 1000 1005
Ala Ala Gln Ala Tyr Gln Ser Leu Phe Ala Asn Ser Gly Val Met
1010 1015 1020
Asp Met Glu Ile Asn Ala Ile Gly Ser Gln Pro Ile Glu Glu Tyr
1025 1030 1035
Tyr Leu Asn Arg Thr Ser Asp Pro Val Val Met Gly Ser Leu Arg
1040 1045 1050
His Arg Leu Leu Ile Gly Ser Thr Phe Asp Asp Asn Ser Ala Thr
1055 1060 1065
Ala Trp Phe Ser Asn Phe Gly Tyr His Asp Val Ala Thr Ser Leu
1070 1075 1080
Ala Ala Ile His Ser Ala Ile Leu Arg Ser Lys Asn Ser Asp Ala
1085 1090 1095
Val Leu Asn Val Tyr Asn His Pro Leu Glu Ala Ser Tyr Ile Asp
1100 1105 1110
Gln Ser Asp Val Gln Thr Met Ile Ala Met Leu Ser Met Gln Leu
1115 1120 1125
Ser Ser Gly Ile Gly Ser Ser Val Ser Ile Val Ser Ala Val Phe
1130 1135 1140
Ile Met Phe Tyr Ile Lys Glu Arg Met Ser Gly Ala Lys Leu Leu
1145 1150 1155
Gln Asn Ala Ala Gly Val Ala Pro Ser Val Leu Trp Gly Gly Ala
1160 1165 1170
Ala Ile Phe Asn Trp Phe Trp Phe Leu Ile Thr Cys Val Ser Ile
1175 1180 1185
Val Ile Ser Cys Val Ala Phe Asp Val Ile Gly Leu Ser Asn Val
1190 1195 1200
His Glu Leu Gly Arg Met Phe Leu Cys Val Met Val Tyr Gly Ala
1205 1210 1215
Ala Met Leu Pro Leu Val Tyr Leu Leu Ser Leu Lys Phe Lys Gly
1220 1225 1230
Pro Ala Val Gly Phe Val Gly Phe Tyr Phe Leu Asn Val Leu Phe
1235 1240 1245
Gly
<210> 13
<211> 11229
<212> DNA
<213> 玉米穗虫
<400> 13
atgagattag aaacgaggca cgctagtgcc gccaccaagt tccgcctgct catgtggaag 60
aactttctgc agcaatggag acatcggcta caaactgtcg tagagctact attgccagtc 120
gtgacaatgg cgctggtgct catccttcgg tggcagatac cgccttatca aatcgataca 180
ctcacttacc ccgcgttgcc agcgcacaca ctcaactact ctaccaatat cctgtaagtt 240
accacaaaat attcttcttt taaattgcta atatccaacg tttttcatct ttggttggat 300
gacaaccaat ttcatcaact cgtatgctta tttatcttaa tccatcctaa aaaatctgtc 360
aagcttcttg cccggtaatc aatatttaag gcaatcagat tcagttgtgt gcctttaaat 420
attacagata ttgtaaagat agcgcattta tagttatagc taggtcctac taacttgctc 480
cactataaac attttataac ataaacaaac atttattcac gaacatttta ttcacagaca 540
gcattcgttt tatatatttt ctaaaataat ttctagagag gtatattcag gataggatgt 600
gtgtttatca aataatcttt gaagttcata catatccttt atcatatcta aaagctaatt 660
cttttgctaa acatactgta aaattataag tggtaatctg tatgtttagt caattttggt 720
gactaagcaa tagataaaac agagatgttt tattgattag gtacagttaa agattgccga 780
agttacaatc gcggtaattt atgaaagcat caaataaaca taaggattcg atgatttcct 840
cagaacatta aatgcaaata ttaggtacct acttgtcgcc ttcaatcatt gcagattttc 900
atttctagag actatagctg ctgaaagttt tctttaaata ttgctacaat aaatacattt 960
caaatatgag aatttccgtt tattattcaa agttatgaaa tttaaataat atacaatgag 1020
catctgtatt attaaaactc atagttactc ttatgtctat gcactctagg tatatgtttt 1080
cattcgtgaa cacatttgct atttgtactc actccataag ccgagataag gcgataatat 1140
tacatctcgt ggttataatc gtccctaatg tttaatgaaa ttcatttttc aggtttgcca 1200
tgaatatgga agaattatca attgcatact ccccggcaag tccagtgtta gatgatgtaa 1260
tgagaactgc tgttattaat ttactaacag ccaatatgaa agatctgatt cctattttta 1320
ttgataactt accaccgggg atagccaata taacatttcc accagatatg aacttaaata 1380
cgtcggccat tgaggagttc gtgaagtcac gaatacgagt cgtaccttat aacagcagtt 1440
atgaaataag agggatctac gttgacgaag aaactacacg cagcattatc gctgccgtcg 1500
agtttgacga taaactatat ggtatgaata aactcattgc ttacacaatt ttttgtgcct 1560
atttccagct attgatattc aggtaatgtt acaaacagcg gcttctaatc tatttcagga 1620
gcagaacagt tgtcaaataa tttatcttat tcgctacgtt ttcctgagag accccgtctc 1680
aattcgtttt tccaaactgg agggcgcacc tggagatctg acggagtatt cccggttttc 1740
gaagtgcctg ggcctagatt tcctcactcg tgggaaggtg gtaatgaccc aggtaaatat 1800
atttattcgc tttaggacgt ctggcaaaca ctaattaaaa aatatattaa ctttgtttaa 1860
aataaaaaca agtaaggtat cgaaactaac gaaaataagg tattgttagg attaggtaca 1920
tactgaaatt aatcaagtat tgtgttaact acaataaata ttgtgcacag gttacgttaa 1980
cgaaatgttc gtggcacttc aacaagttat ttccatggag ctggtatcaa gggcaaccgg 2040
gttggacttg aagtcattta gggtgaacat acagaggtac ccgcacccgc cgtaccttca 2100
cgaccagtca gtggatctgc tgcaatttat gttccccctg ttcatcatgt tgagcttcag 2160
ctacactgcc gtcaacattg cacgggcggt cacagttgag aaggaattgc aattaaaggt 2220
acctagatag taattccaag gtacaatgtt ggaggatacc aattaaataa ccttgctaat 2280
ttttattatg ttgttttagg aaactatgaa aattatgggc ctccccacat ggttgcactg 2340
gacagcatgg tttgttaaac agtttatcta cctatcaatc acagctgttc tgctagttgt 2400
gttgctaaag gtgagatttt caaaattagt acacagattc ttacgtagtt tagatttaat 2460
aataacttat gtattgtact gtacttattg tttttaggta aattggttta ctaacgacga 2520
tggcttcagc gaatatgctg tatttactaa tacaccttgg acggttttgc tattcttctt 2580
gatactgtat ttatcttgcg cgatattttt ttctttcatg gtaagcagta tattttcaaa 2640
aggtatgctt tcttcttatt tctttttaat ttaacaacct acattaacat atttaacaat 2700
atattatttt tgtggtaaag gtagtacggc cgcgttgttt atggcggtgg catggttcct 2760
cacttacatc cctgctttcc tcctggccat ggatatcaat atgtcgactg cggtgcaggt 2820
catcacatgc ttcagtatta actctgcgat gtcctatggt ttccaactaa tgctcgctaa 2880
ggaaagcact ggaggtaaat tattacgaga gtttattata cgagccactt aaaataatta 2940
caatataaat gctctgctcc aaagtttgtt tgatccgaat cagggaatag aaaaattatg 3000
cccaataatt ataattttcc taatttgttg caccgcttca cacgtaacac gattcgaaca 3060
agacggagtg cgagtggcgg taattgaagt cgatgtgcca cattagcgta ggagaataaa 3120
ttctaacata gcgactggtc taagtgctaa attgctttac tgaacgtatt cgctcaatta 3180
gggctgcagt ggggcgactt catgacgtca ccagggacgg acaccacgcg cttcgtgttc 3240
ggccacgtgg tcatcatgct ggtagtggac tgcctcatct acatgctgat caccctctac 3300
cttgaacaag tgctaccagg ccccttcggg actcccaaac cttggtactt ccccttccag 3360
ttgcagttct ggttcccaaa ttataaatcg aaaggtaaga tattttgtag agttgtactc 3420
tacctaattt atgaatcaaa ttagtaattt aaaatagtca ttgttacaag cattaatgtc 3480
atagcaataa tcattatgct acaaagtcga attaggtatc tttgtaataa aatccaatga 3540
ctcaaaaatg ctatgatttt ttttagatgc tggattaatt ttcgaaaatg ataatagtga 3600
attcgatgat attataaaag aaaaggatcc cacagaccac gaagttggtg ttaaaatgca 3660
agtaagttta tcatcactta aaagtaacat taagtactta cacactaata tattatgtga 3720
aaatatattt gttaattcat taaaaaaaat atttgtacgt atttatttac agaatttaac 3780
aaaaatcttt gggaataaca tagctgttaa caatttatct ttgaatatct atgacgacca 3840
aatcacagtt ttacttggtc ataatggtgc tggcaaatca actacaatat ctatgttaac 3900
aggtttgtaa taaaatattt tttatttatg ctcttcttta accatgtttt taaatataat 3960
taacaaggat taagtgcttg tatttagttt gtacccggga gcttcgttga ttttcaatga 4020
cattattaga tggagattag ggataagagt actttttgat agccttgtca ctatctatgt 4080
ctatatcctc cgtatgcaaa gttgcgataa aatgcaattc attcaagttt tacttaaaat 4140
actaggatga gtgaagatgt aacatacgtt gcagagtggg tgcaagtcaa ttgattcact 4200
actatgaagt cttgtttctg gtaataagca aagaccggaa ctattgcgca acattgttat 4260
tgtcaagtgg gcactagctt taatgtaacg atgccggtca gtgtgttaat ctatctaaat 4320
agagttgaag gttcttcaaa catttttctg tctaacgacg aacacacatt atatgtaatt 4380
tcagcggcac gcggaaacca ttttataaaa gagtatgaat tgtcccagtt attatggtcc 4440
gtttttacca cccatttaaa aaaaaaagca gttgacgact cgtattgtcc gaggttttac 4500
atgggcggaa agatgtaaat aaaatcgaaa tcatatacat atgtcataac atactttaat 4560
ttttgaatat attgtgtttc aggaaattta aaggtaactc gcgggacagt gaacgttgcc 4620
ggatatgata tgacttctca aagctccgca gcccgttccc acattggatt gtgtcctcag 4680
cacaatatac tgtttaacga actcacggtc aaagaacatt tggaattctt tgctagacta 4740
aaaggattta aaggcaaaga actgtatgaa gagatagact cacttattga aaaattggaa 4800
ctacaggaga aggtatctac aatttatgat tatttggaat ttgtcagttc agttctgtct 4860
ctatcaatta gagagatttt tttaattaga gcggcctcat atcatatttc ttcaagttac 4920
aaatggaact agaaagtgat tgggcgtacc tgcaatataa gacatgttat ttgtttcaca 4980
gcgtgactac ccctcaaaag gtctgtcagg aggtcagaag cgtcgtcttt gtgttggtat 5040
tgctctgagt ggggcggcac gagtggtctt actcgacgaa cctacgtctg gcatggatcc 5100
ttcatctcgt cgagcactgt gggaactctt acagaaggaa aagaaaggta ggtcgaaatt 5160
caatcgttag aacagagaat taggtatttc tttgtataaa gtatttttgt tttaaattat 5220
tattaatata aagggaccga catataaacc taatagtgat ggctatagtc gcatgttaat 5280
atgtttatta tatcgttagg tcgctcgatg atcctgacga ctcattttat ggacgaagca 5340
gatattctcg gcgacagagt ggctataatg gcaaacggta gactgcaatg cgtgggctct 5400
ccgtatttcc tcaaacgtca ttatggcgtc gggtataccc tggtgatcgt taaggacaca 5460
gacttcgact ttgtgaaatg ctccgtactt atcaatagct atattcctgg tactattgtt 5520
aaagaagatc gaggtaagtt tttactggtt aaaatgttgt ctgatatatg atccatcaaa 5580
ctataattgc gtccttttat tgagaatact agcttttgcc cgcggcttcg ctcccgtcaa 5640
ctgacttctc tactttaccc tatttttttt tcataagaac cttctcctga caataacaaa 5700
cacaacaaaa aaagaattag ccaaattggt ccaggttgag ttatgcgctt accaacacat 5760
tttgcgattc atttttatat tatagattaa atataaacaa atatttcttt tttaaggaac 5820
ggaaatcact tataatttgg taaatgatta ctcacacgtt tttgaagaaa tgttgaatga 5880
tttggaaaga aatattgata acatcaaatt taaaaactat ggtttagttg ctactacatt 5940
agaagatgtc tttatgtcgt aagtattttc tataaatgtt tagttgttag tacgttagcc 6000
taattttggt aagtggggtg ataacaaagt acttatgttg cagcgttggt gcagacttaa 6060
gtccaattaa ttccgaatct gacgatgcta ttactactac tactgactcg actatcgatg 6120
atatattaaa acaagaaatc gattcatctt tggaagaacg taagttgtcc aaagatattg 6180
ggtattttaa acgaaaaaaa aaaaaatcat tagatatcct ttttacaact tgattacaaa 6240
aacggtcctt gttttctagt ggataaggac gagagtaacg tgacgggtct ccgcttgttc 6300
ggtcagcaag tgctggctgt atggatgaag cagtggctgg tgctgatccg ctcgccatgg 6360
gtcatggtac tgcagttttt ggcgccagtg gtactcatca actccacgct aggagttctg 6420
cgttacgtca tgtctttatc accgaccatt agaactaggt ggttgtcgtt ggaagaaggg 6480
tgagttaaat agtaaaatca ctttattgac atcggaaggc gcaacgccta ttgaccggtt 6540
aagttcgtga aattctttta tctattatat catcaagtaa atctaggtac ttatattggg 6600
aatcgatcgt atcgacgcct aagtagtatc tgctaggaca taaaatactt acctacatat 6660
tgcttgacat caacaatcta cctaaatgca ataggactct tgtgtcagag actgcgaatc 6720
ttatggaact tacagtacct aaatacataa catacctaca tacatataac atcataaatt 6780
attttcaggt atatggaaag cgaaactctg ctcagcttca acggcagtat agcgtcatca 6840
gtgggtgccc tagccgcgca agcataccaa agcctgttcg ccaattctgg tgttatggac 6900
atggaaatca acgctatcgg aagccagcca atagaagaat attatctaaa tagagtgagt 6960
cactatacaa tttcgaagtc ggcaaccgat atatcatgat ttcgataaag acataaacag 7020
ggatcaaaac ttcgataaat aaataatcac ctgctatatc ataattacaa gtcattatga 7080
gtgagattca tacattattg tcatgatgga tggatggatt tacattttta caaatttaaa 7140
tgaactcatc cataaaaaaa aaactcaatc cttaggctat aaatactcaa tcagattgca 7200
ctgaaacgga gagctgtgga gtttttaaac atctttcgtt aggtattttc gttatactga 7260
aatatccttt ctccatccac tcagtaaatc tattggttat ataaaaacct ctaacttgta 7320
ggtacttgct aataagagat tttttgctta cacagacaag tgatcccgtt gtgatgggtt 7380
cgctgcggca ccgcttgctg ataggctcca catttgacga caactctgct accgcctggt 7440
tcagtaactt tggctaccac gatgttgcta catcgcttgc ggcaatccac tcagctattc 7500
tcagatctaa aaactctgat gcagtactca atgtatataa tcatccgttg gaagcttcgt 7560
atatagatca ggtaagtttt acagacgaac tgtctatatc tttgtactct ttctttttaa 7620
cctatacagc ttagtcgtag caattagaat taatcgctaa tgtcttcaat gaatgttttc 7680
agagtgacgt gcagactatg atagctatgt tgtccatgca gttgtcctct ggcatcggca 7740
gtagtgtgag cattgttagt gcggttttca tcatgtttta tatcaaggta agtacattat 7800
ttaacctcga aaagtatttt ctgctcttat gtaccgattc tttcaaagtt ttgtgacttc 7860
ttcaggttat aacggttcgt ttttgttttc gcaggaacgt atgtcggggg caaaacttct 7920
acaaaatgca gcaggcgtgg cgccttctgt gctgtggggc ggcgcagcga tcttcaattg 7980
gttttggttc ctcatcactt gtgtttccat cgtcatctcg tgcgtcgctt ttgatgtcat 8040
cgggttatcg aacgtgcatg aattaggtta tatggtattt cctagtagca gtccttttaa 8100
ataatgttta aaagaaactg attaaatgtg acttgtacct ttataggctg gtactaatta 8160
ataattgcaa tttttatttc aggtcgaatg tttttgtgcg tcatggtata cggtgcggcg 8220
atgttgccat tagtgtacct tttgtcgctt aagttcaagg gaccagctgt cggcttcgtg 8280
ggcttctatt tcctcaacgt gcttttcggt aagttgtagg atagccaaaa gggttcaagt 8340
atatatataa gtattgagta ttgtatactt aaattaagtt tcagagtcac ccataatgaa 8400
tctctgcttt ctttttccct ttttgtagtg accgtattat tactgaatcg ggtaggttcc 8460
tgaaaattca cttgtgttgt attctacagg tatgatgggt gcgcaggtgg tggaggcact 8520
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ctacccgctt tacagtcttg tcacttctat caggtaggta ctcgctgcaa caagcccaat 8640
atcctacgtt ctaaaccata taagttaaag taataacaca ttatattttc atttgggtgg 8700
tgatctcaat ccgtataatt tcgatttgca ggtttttaaa tcaggtcggc ctacgggagt 8760
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tgtccgcaat ttgacgcatt atttggtgag ctgacgggtc gccagacact acacatgttt 9840
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aactttctgc agcaatggag acatcggcta caaactgtcg tagagctact attgccagtc 120
gtgacaatgg cgctggtgct catccttcgg tggcagatac cgccttatca aatcgataca 180
ctcacttacc ccgcgttgcc agcgcacaca ctcaactact ctaccaatat cctgtaagtt 240
accacaaaat attcttcttt taaattgcta atatccaacg tttttcatct ttggttggat 300
gacaaccaat ttcatcaact cgtatgctta tttatcttaa tccatcctaa aaaatctgtc 360
aagcttcttg cccggtaatc aatatttaag gcaatcagat tcagttgtgt gcctttaaat 420
attacagata ttgtaaagat agcgcattta tagttatagc taggtcctac taacttgctc 480
cactataaac attttataac ataaacaaac atttattcac gaacatttta ttcacagaca 540
gcattcgttt tatatatttt ctaaaacagt ttctagagag gtatattcag tacaggatgt 600
gtgtttatca aataatcttt gaagttcata catatccttt atcatatcta aaagctaatt 660
cttttgctaa acatactgta aaattataag tggtaatctg tatgtttagt caattttggt 720
gactaagcaa tagataaaac agagatgttt tattgattag gtacagttaa agattgccga 780
agttacaatc gcggtaattt atgaaagcat taaataaaca taaggattcg atgatttcct 840
cagaacatta aatgcaaata taaaggtaga attccgtggg tcgcggctta cgcagccgcg 900
cgcggcttac gacagtcgtc ggccgcgcgc ggctgtcgta gccgctatcc acggaattct 960
acctttaggt acctacttgt cgccttcaat cattgcagat tttcatttct agagactata 1020
gctgctgaaa gttttcttta aatattgcta caataaatac atttcaaata tgagaatttc 1080
cgtttattat tcaaagttat gaaatttaaa taatatacaa tgagcatctg tattattaaa 1140
actcatagtt actcttatgt ctatgcactc taggtatatg ttttcattcg tgaacacatt 1200
tgctatttgt actcactcca taagccgaga taaggcgata atattacatc tcgtggttat 1260
aatcgtccct aatgtttaat gaaattcatt tttcagtttt gccatgaata tggaagaatt 1320
atcaattgca tactccccgg caagtccagt gttagatgat gtaatgagaa ctgctgttat 1380
taatttacta acagccaata tgaaagatct gattcctatt tttattgata acttaccacc 1440
ggggatagcc aatataacat ttccaccaga tatgaactta aatacgtcgg ccattgagga 1500
gttcgtgaag tcacgaatac gagtcgtacc ttataacagc agttatgaaa taagagggat 1560
ctacgttgac gaagaaacta cacgcagcat tatcgctgcc gtcgagtttg acgataaact 1620
atatggtatg aataaactcg attgcttaca caattttttg tgcctatttc cagctactga 1680
tattcaggta atgttacaaa cagcggcttc taatctattt caggagcaga acagttgtca 1740
aataatttat cttattcgct acgttttcct gagagacccc gtctcaattc gtttttccaa 1800
actggagggc gcacctggag atctgacgga gtattcccgg ttttcgaagt gcctgggcct 1860
agatttcctc actcgtggga aggtggtaat gacccaggta aatatattta ttcgctttag 1920
gacgtctggc aaacactaat taaaaaatat attaactttg tttaaaataa aaacaagtaa 1980
ggtatcgaaa ctaacgaaaa taaggtattg ttaggattag gtacatactg aaattaatca 2040
agtattgtgt taactacaat aaatattgtg cacaggttac gttaacgaaa tgttcgtggc 2100
acttcaacaa gttatttcca tggagctggt atcaagggca accgggttgg acttgaagtc 2160
atttagggtg aacatacaga ggtacccgca cccgccgtac cttcacgacc agtcagtgga 2220
tctgctgcaa tttatgttcc ccctgttcat catgttgagc ttcagctaca ctgctgtcaa 2280
cattgcacgg gcggtcacag ttgagaagga attgcaatta aaggtaccta gatagtaatt 2340
ccaaggtaca atgttggagg ataccaatta aataaccttg ctaattttta ttatgttgtt 2400
ttaggaaact atgaaaatta tgggcctccc cacatggttg cactggacag catggtttgt 2460
taaacagttt atctacctat caatcacagc tgttctgcta gttgtgttgc taaaggtgag 2520
attttcaaaa ttagtacaca gattcttacg tagtttagat ttaataataa cttatgtatt 2580
gtactgtact tattgttttt aggtaaattg gtttactaac gacgatggct tcagcgaata 2640
tgctgtattt actaatacac cttggacggt tttgctattc ttcttgatac tgtatttatc 2700
ttgcgcgata tttttttctt tcatggtaag cagtatattt tcaaaaggta tgctttcttc 2760
ttatttcttt ttaatttaac aacctacatt aacatattta acaatatatt atttttgtgg 2820
taaaggtagt acggccgcgt tgtttatggc ggtggcatgg ttcctcactt acatccctgc 2880
tttcctcctg gccatggata tcaatatgtc gactgcggtg caggtcatca catgcttcag 2940
tattaactct gcgatgtcct atggtttcca actaatgctc gctaaggaaa gcactggagg 3000
taaattatta cgagagttta ttatacgagc cacttaaaat aattacaata taaatgctct 3060
gctccaaagt ttgtttgatc cgaatcaggg aatagaaaaa ttatgcccaa taattataat 3120
tttcctaatt tgttgcaccg cttcacacgt aacacgattc gaacaagacg gagtgcgagt 3180
ggcggtaatt gaagtcgatg tgccacatta gcgtaggaga ataaattcta acatagcgac 3240
tggtctaagt gctaaattgc tttactgaac gtattcgctc aattagggct gcagtggggc 3300
gacttcatga cgtcaccagg gacggacacc acgcgcttcg tgttcggcca cgtggtcatc 3360
atgctggtag tggactgcct catctacatg ctgatcaccc tctaccttga acaagtgcta 3420
ccaggcccct tcgggactcc caaaccttgg tacttcccct tccagttgca gttctggttc 3480
ccaaattata aatcgaaagg taagatattt tgtagagttg tactctacct aatttatgaa 3540
tcaaattagt aatttaaaat agtcattgtt acaagcatta atgtcatagc aataatcatt 3600
atgctacaaa gtcgaattag gtatctttgt aataaaatcc aatgactcag aaatgctatg 3660
atttttttta gatgctggat taattttcga aaatgataat agtgaattcg atgatattat 3720
aaaagaaaag gatcccacag accacgaagt tggtgttaaa atgcaagtaa gtttatcatc 3780
acttaaaagt aacattaagt acttacacac taatatatta tgtgaaaata tatttgttaa 3840
ttcattaaaa aaaatatttg tacgtattta tttacagaat ttaacaaaaa tctttgggaa 3900
taacatagct gttaacaatt tatctttgaa tatctatgac gaccaaatca cagttttact 3960
tggtcataat ggtgctggca aatcaactac aatatctatg ttaacaggtt tgtaataaaa 4020
tattttttat ttatgctctt ctttaaccat gtttttaaat ttaattaaca aggattaagt 4080
gcttgtattt agtttgtacc cgggagcttc gttgattttc aatgacatta ttagatggag 4140
attagggata agagtacttt ttgatgcctt gtcactatct atgtctatat cctccgtatg 4200
caaagttgcg ataaaatgca attcattcaa gttttactta aaatactagg atgagtgaag 4260
atgtaacata cgttgcagag tgggtgcaag tcaattgatt cactactatg aagtcttgtt 4320
tctggtaata agcaaagacc ggaactattg cgcaacattg ttattgtcaa gtgggcacta 4380
gctttaatgt aacgatgccg gtcagtgtgt taatctatct aaatagagtt gaaggttctt 4440
caaacatttt tctgtctaac gacgaacaca cattatatgt aatttcagcg gcacgcggaa 4500
accattttat aaaagagtat gaattgtccc agttattatg gtccgttttt accacccatt 4560
taaaaaaaaa agcagttgac gactcgtatt gtccgaggtt ttacatgggc ggaaagatgt 4620
aaataaaatc gaaatcatat acatatgtca taacatactt taatttttga atattttgtg 4680
tttcaggaaa tttaaaggta actcgcggga cagtgaacgt tgccggatat gatatgactt 4740
ctcaaagctc cgcagcccgt tcccacattg gattgtgtcc tcagcacaat atactgttta 4800
acgaactcac ggtcaaagaa catttggaat tctttgctag actaaaagga tttaaaggca 4860
aagaactgta tgaagagata gactcactta ttgaaaaatt ggaactacag gagaaggtat 4920
ctacaattta tgattatttg gaatttgtca gttcagttct gtctctatca attagagaga 4980
tttttttaat tagagcggcc tcatatcata tttcttcaag ttacaaatgg aactagaaag 5040
tgattgggcg tacctgcaat acaagggcgg atccagcttc ggcgccaggg gggggtcaca 5100
cagtcgtggt caagtcacaa aaaatattat attgtagcgt atacttcttt taatattaaa 5160
agtagtagta taaatacaat aagcgcgatc gtagcgagct cgaaattttt acgaatgttt 5220
aagaaaagtg ttttcatgta gaaaatggcc cgagcagagt gagcgcaatt tctcgtattt 5280
atactacaca cacgcgccaa acaaaaaagc gcgagcgaag cgagcccgaa aatttttgtt 5340
ctggtcgagg actaaggtta aaaaagtgtt gttatgtaga aaatggtccg agctgagcga 5400
acgcgatttc ttggacataa tcacagacgc gaaactgaaa aaagcgcgag cgaagcgagc 5460
gcgaaaattt tttttcagtt cgaggactaa aagtagatga aaacgctttc ttgatgtata 5520
acaaatatac agcacaaata caagaaagcg cgatgttcat gagatcaggg ccgtctagct 5580
tatgtagcgc ctgggtgcaa tcatcaccca agcgccacac atagtacata ttgatatcga 5640
agtactttac aaggaatata aataagaacg ttcgaacgaa aatcactttt ttggactaag 5700
aaaaaatgtt tccaaatcat cgtaggctca attttaggct cactgttggc cagatttaag 5760
ttatgaaagt cgagacggga caacataatt gtaaaaatta gcgcgatcga agcgagcgcg 5820
caaatttttt aattttggga cacaaaaagt tcataagttt taaaaagcgc tgtaaagtaa 5880
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ctatatttga cttatgaagt tatcaaggga aggcatatat aatattgcgc gagcgaagcg 6000
agcgcgaaat tttttgaccc tacgacacaa aagcacctga ttaagtacat tgtaaagcaa 6060
caagtagccg caagcgcagc gaacgcgaac tttttaaaat tatttgtttg aagactcaca 6120
aatcagactg ggaattacgt acaattaaaa aggaaccgtg attagagcga gtgccatttg 6180
tgttcgttga ttcggtgcgt caataaaaat aataaacaat cagaaataca gtacctacag 6240
acatagtcat ttactcgcga gcgtagtgag ctagcatttt ttcacttagt tggaggatgt 6300
taaaagttaa aaaaaaataa tcaaaatgat caatccaaca aagcgaaggc gacttttttg 6360
tcagtatcat gatacaatgt ggaacttcct tatccaacgg gtgtaatttc ttcgaaattt 6420
cctggtggtg gggcgtctcg ctgcgcccct gatatcgagg cgcccgggtt attcgcacac 6480
cctgcactta ggttaagacg gccctgcatg agactaatac attacagcat gtaatgtaga 6540
caacccggac agcggattct tagtaacagg gtcccgcttc ctccttttgg gtacggataa 6600
agagtaaata aagaatagag agcgagcgtt gcgagcacga attcttcagc aaaactactc 6660
tacctgtaac tatgtaggta tctacctatt cactcgaaat aaaaattatc ttatacttat 6720
aacaaaaaca taaaacatcg tgtttaacca tttcaattat tggtcctctt aggtcctgaa 6780
ccaggcccag gggggggtca tgaccttgtg acctaccccc tggatccgcc gttgctgcaa 6840
tataagacat gttatttgtt tcacagcgtg actacccctc aaaaggtctg tcaggaggtc 6900
agaagcgtcg tctttgtgtt ggtattgctc tgagtggggc ggcacgagtg gtcttactcg 6960
acgaacctac gtctggcatg gatccttcat ctcgtcgagc actgtgggaa ctcttacaga 7020
aggaaaagaa aggtaggtcg aaattcaatc gttagaacag agaattaggt atttctttgt 7080
ataaagtatt tttgttttaa attattatta atataaaggg accgacatat aaacctaata 7140
gtgatggcta tagtcgcatg ttaatatgtt tattatatcg ttaggtcgct cgatgatcct 7200
gacgactcat tttatggacg aagcagatat tctcggcgac agagtggcta taatggcaaa 7260
cggtagactg caatgcgtgg gctctccgta tttcctcaaa cgtcattatg gcgtcgggta 7320
taccctggtg atcgttaagg acacagactt cgactttgtg aaatgctccg tacttatcaa 7380
tagctatatt cctggtacta ttgttaaaga agatcgaggt aagtttttac tggttaaaat 7440
gttgtctgat atatgatcca tcaaactata attgcgtcct tttattgaga atactagctt 7500
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aagaaccttc tcctgacaat aacaaacaca acaaaaaaag aattagccaa attggtccag 7620
gttgagttat gcgcttacca acacattttg cgattcattt ttatattata gattaaatat 7680
aaacaaatat ttctttttta aggaacggaa atcacttata atttggtaaa cgattactca 7740
cacgtttttg aagaaatgtt gaatgatttg gaaagaaata ttgataacat caaatttaaa 7800
aactatggtt tagttgctac tacattagaa gatgtcttta tgtcgtaagt attttctata 7860
aatgtttagt tgttagtacg ttagcctaat tttggtaagt ggggtgataa caaagtactt 7920
atgttgcagc gttggtgcag acttaagtcc aattaattcc gaatctgacg atgctattac 7980
tactactact gactcgacta tcgatgatat attaaaacaa gaaatcgatt catctttgga 8040
agaacgtaag ttgtccaaag atattgggta ttttaaacga aaaaaaaaat cattagatat 8100
cctttttaca acttgattac aaaaacggtc cttgttttct agtggataag gacgagagta 8160
acgtgacggg cctccgcttg ttcggtcagc aagtgctggc tgtatggatg aagcagtggc 8220
tggtgctgat ccgctcgcca tgggtcatgg tactgcagtt tttggcgcca gtggtactca 8280
tcaactccac gctaggagtt ctgcgttacg tcatgtcttt atcaccgacc attagaacta 8340
ggtggttgtc gttggaagaa gggtgagtta aatagtaaaa tcactttatt gacatcggaa 8400
ggcgcaacgc ctattgaccg gttaagttcg tgaaattctt ttatctctta tatcatcaag 8460
taaatctagg tacttatatt gggaatcgat cgtatcgacg cctagtatct gcaaggacat 8520
aaaatactta cctacatatt gcttcacatc aacaatctac ctaaatgcaa taggactctt 8580
gtgtcagaga ctgcgaatct tatggaactt acagtaccta aatacataac atacatacat 8640
acttataaca tcataaatta ttttcaggta tacggaaagc gaaactctgc tcagcttcaa 8700
cggtagtgta gcgtcatcag tgggtgccct agccgcgcaa gcataccaaa gcctgttcgc 8760
caattctggt gttatggaca tggaaatcaa cgctatcgga agccagccaa tagaagaata 8820
ttatctaaat agagtgagtc actatacaat ttcgaagtcg gcaaccgata tatcatgatt 8880
tcgataaaga caaacaggga tcaaaacttc gataaataaa taatcacctg ctatatcata 8940
attacaagtc attatgagtg agattcatac attattgtca tgatggatgg atggatttac 9000
atttttacaa atttaaatga actcatccat aaaaaaaaat actcaatcct taggctataa 9060
atactataaa tactcaatca gattccactg aaacggagag ctgtggagtt tttaaacatc 9120
tttcgttagg tattttagtt atactgaaat atcctttctc catccactca gtaaatctat 9180
tggttatata aaaacctcta acttgtaggt acttgctaat aagagatttt ttgcttacac 9240
agacaagtga tcccgttgtg atgggttcgc tgcggcaccg cttgctgata ggctccacat 9300
ttgacgacaa ctctgctacc gcctggttca gtaactttgg ctaccacgat gttgctacat 9360
cgcttgcggc aatccactca gctattctca gatctaaaaa ctctgatgca gtactcaatg 9420
tatataatca tccgttggaa gcttcgtata tagatcaggt aagttttaca gacgaactgt 9480
ctatatcttt ttactctttc tttttaacct atacagctta gtcgtagcaa ttagaattaa 9540
tcgctaatct cttcaatgaa tgttttcaga gtgacgtgca gactatgata gctatgttgt 9600
ccatgcagtt gtcctctggc atcggcagta gtgtgagcat tgttagtgcg gttttcatca 9660
tgttttatat caaggtaagt acattattta acctcgaaaa gtattttctg ctcttttttt 9720
tttttttttt tttttttata atttcgggac acctttttca cacacggtcg gttaacccca 9780
tggtaagtta tttattaact tgtgttatgg gtgctaacac aactgataaa ctacatatag 9840
ctacatatat acatatttat aaatacatat cataacaccc agacaacggc caacaagcat 9900
gctcatcaca caaatgtcga ccgaaccggg aatcgaaccc gggacctcag gttcggcggt 9960
ccggcatgat gaccattgcg ccatcgaggt cgtcttatgt accgattctt tcaaactttt 10020
gtgacttctt caggttataa cggttcgttt ttgttttcgc aggaacgtat gtcgggggca 10080
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ttcaattggt tttggttcct catcacttgt gtttccatcg tcatctcgtg cgtcgctttt 10200
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agcccatacg aaaaactgag acatatgtag ttatcaattt gcgcgagcga agcgagcgcg 10380
aattctgttt ttatagttaa caagtcaaag caaaaattaa gtaaaatgta gcccaatcgt 10440
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taaataatgt ttaaaagaaa ctgattaaat gtgacttgta cctttatagg ctggtactaa 11940
ttaataattg caattattat ttcaggtcga atgtttttgt gcgtcatggt atacggtgcg 12000
gcgatgttgc cattagtgta ccttttgtcg cttaagttca agggaccagc tgtcggcttc 12060
gtgggcttct atttcctcaa cgtgcttttc ggtaagttat aggatagcca aaagggttca 12120
agtatatata taagtattga gtattgtata ctaaaattaa gtttcagagt cacccataat 12180
gaatctctgc tttctttttc cctttttgta atgaccgtat tattcctgaa tcgggtaggt 12240
tcctgaaaat tcacttgtgt tgtattctac aggtatgatg ggtgcgcagg tggtggaggc 12300
actatcctct cctatgctgg acacagagca agccgcccac atccttgact acttactgca 12360
gttctacccg ctttacagtc ttgtcacttc tatcaggtag gtactcgctg caacaagccc 12420
aatatcctac gttctaaacc atataagtta aagtaatcac acattatatt ttcatttggg 12480
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attcattcgt gttttgcata accgaatgta gagcaggccc ctaccaatgt tttacatagg 14340
tctgtctaat aagaaaaccc ctttgtaagt ttaatggtat accagtcgtt gatttacaaa 14400
tgacaccctg tgacaaagtc tttttgcgtt ttcccagtca cgcagagacc tactgtcatt 14460
aaaagatggt cacccattct cccattcaca ccaggacaga gcgcgttaac ggcttattga 14520
taaataactt taatttgttt caggctttac tttaatcatt aaaatgaaaa ctgacgacag 14580
tgacagcgac acgcagtcag taaacagcac taccagcgta gtagatagtg tcaaactata 14640
cgtctctggg aactttgaaa gtccaaagat aatgtaagta acaaaatcta tttcaagttc 14700
tggagctata taggataagt tctaattcta tattagaact taaaaactga atttatcact 14760
atcgtttcaa taggcatgat gacagtaatc aaaaatcatt aaaataatat atttattaaa 14820
ttaaacttga agcttggtat ataaaacgcg cattgttttc tttattaata atgtgattaa 14880
tatgtatttt tataaaataa aattacgaaa tagggcaatc cgccatgata tcttgaacac 14940
caatcagagc tcgtgacgtc atttctcaaa acaactcgcg cgaaagcgcg cgaacgtcac 15000
atttcgttat tgtgaacttc cactgcgatc tttgttttta attaattagt tgtttataac 15060
acgagttatg gagcccggat ttatcaatgc aaacagcgct agcattgata tgcagcctag 15120
aattgatatc ataatgctgg gaaagttttt ggcatcaaat aaagattttt gttcagctga 15180
atttagaaat cttaaaactt ccatgtaagt atactagttt aattaaaaaa caatgagaga 15240
tgaaacctaa cctcgaaata gttatttaca ttataaacta tgctagaatc tagagaacta 15300
cgtaataact tacatcaaag tgatcttcac aaaaataaag ttgtaccctg ggcaatattg 15360
cttttgaatc tcgccttgca agtttaagcc gcttgtttcg tatttttgta ggtattgtga 15420
ggaacgtaca caaataactg accccacaac acctatgccc tttcgaattc atatttaata 15480
acacaaaaaa cttaattatc gcacgagcgt tgttcacttg cgtcttgtaa tttcagtcgt 15540
gacgtcacaa gtgacaccat gacgctgaca agcgttttcg cgccggattc aaagtggaca 15600
gagaaaaatg caattatttg ataaaaaatc ttcgcatttt cttaaaatta ataatttttc 15660
atataaaata gacgtatacc tacattatac aaaggaattt aaaaatttgt catcatgcct 15720
attagaattc cagcagtggt gtgctttatt ggggtaattg gctgctcttt atatagataa 15780
ttctattttt cagggaagag tatcatggtc ttctaactta ctacttgcct gaccgtagca 15840
tggcatggtc acgaatgttt ggtatcatgg agcgcgccaa acagatctta caaattgagg 15900
actacagcat atcgcagact accctcgaac aaatattctt gcagttcacc aaataccaaa 15960
gagaagaagg aacgacgtta taa 15983
<210> 16
<211> 5229
<212> DNA
<213> 玉米穗虫
<400> 16
atgagattag aaacgaggca cgctagtgcc gccaccaagt tccgcctgct catgtggaag 60
aactttctgc agcaatggag acatcggcta caaactgtcg tagagctact attgccagtc 120
gtgacaatgg cgctggtgct catccttcgg tggcagatac cgccttatca aatcgataca 180
ctcacttacc ccgcgttgcc agcgcacaca ctcaactact ctaccaatat cctttttgcc 240
atgaatatgg aagaattatc aattgcatac tccccggcaa gtccagtgtt agatgatgta 300
atgagaactg ctgttattaa tttactgaca gccaatatga aagatctgat tcctattttt 360
attgataact taccaccggg gatagccaat ataacatttc caccagatat gaacttaaat 420
acgtcggcca ttgaggagtt cgtgaagtca cgaatacgag tcgtacctta taacagcagt 480
tatgagataa gagggatcaa cgttgacgaa gaaactacac gcagcattat cgctgccgtc 540
gagtttgacg ataaactata tggagcagaa cagttgtcaa ataatttatc ttattcgcta 600
cgttttcctg agagaccccg tctcaattcg tttttccaaa ctggagggcg cacctggaga 660
tctgacggag tattcccggt tttcgaagtg cctgggccta gatttcctca ctcgtgggaa 720
ggtggtaatg acccaggtta cgttaacgaa atgttcgtgg cacttcaaca agttatttcc 780
atggagctgg tatcaagggc aaccgggttg gacttgaagt catttagggt gaacatacag 840
aggtacccgc acccgccgta ccttcacgac cagtcagtgg atctgctgca atttatgttc 900
cccctgctca tcatgttgag cttcagctac actgctgtca acattgcacg ggcggtcaca 960
gttgagaagg aattgcaatt aaaggaaact atgaaaatta tgggcctccc cacatggttg 1020
cactggacag catggtttgt taaacagttt atctacctat caatcacagc tgttctgcta 1080
gttgtgttgc taaaggtaaa ttggtttact aacgacgatg gcttcagcga atatgctgta 1140
tttactaata caccttggac ggttttgcta ttcttcttga tactgtattt atcttgcgcg 1200
atattttttt ctttcatggt aagcagtata ttttcaaaag gtagtacggc cgcgttgttt 1260
atggcggtgg catggttcct cacttacatc cctgctttcc tcctggccat ggatatcaat 1320
atgtcgactg cggtgcaggt catcacatgc ttcagtatta actctgcgat gtcctatggt 1380
ttccaactaa tgctcgctaa ggaaagcact ggagggctgc agtggggcga cttcatgacg 1440
tcaccaggga cggacaccac gcgcttcgtg ttcggccacg tggtcatcat gctggtagtg 1500
gactgcctca tctacatgct gatcaccctc taccttgaac aagtgctacc aggccccttc 1560
gggactccca aaccttggta cttccccttc cagttgcagt tctggttccc aaattataaa 1620
tcgaaagatg ctggattaat tttcgaaaat gataatagtg aattcgatga tattataaaa 1680
gaaaaggatc ccacagacca cgaagttggt gttaaaatgc aaaatttaac aaaaatcttt 1740
gggaataaca tagctgttaa caatttatct ttgaatatct atgacgacca aatcacagtt 1800
ttacttggtc ataatggtgc tggcaaatca actacaatat ctatgttaac aggaaattta 1860
aaggtaactc gcgggacagt gaacgttgcc ggatatgata tgacttctca aagctccgca 1920
gcccgttccc acattggatt gtgtcctcag cacaatatac tgtttaacga actcacggtc 1980
aaagaacatt tggaattctt tgctagacta aaaggattta aaggcaaaga actgtatgaa 2040
gagatagact cacttattga aaaattggaa ctacaggagg agcgtgacta cccctcaaaa 2100
ggtctgtcag gaggtcagaa gcgtcgtctt tgtgttggta ttgctctgag tggggcggca 2160
cgagtggtct tactcgacga acctacgtct ggcatggatc cttcatctcg tcgagcactg 2220
tgggaactct tacagaagga aaagaaaggt cgctcgatga tcctgacgac tcattttatg 2280
gacgaagcag atattctcgg cgacagagtg gctataatgg caaacggtag actgcaatgc 2340
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aaggacacag acttcgactt tgtgaaatgc tccgtactta tcaatagcta tattcctggt 2460
actattgtta aagaagatcg aggaacggaa atcacttata atttggtaaa tgattactca 2520
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tggttgtcgt tggaagaagg gtatatggaa agcgaaactc tgctcagctt caacggcagt 3000
atagcgtcat cagtgggtgc cctagccgcg caagcatacc aaagcctgtt cgccaattct 3060
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cagactaccc tcgaacaaat attcttgcag ttcaccaaat accaaagaga agaaggaacg 5220
acgttataa 5229
<210> 17
<211> 1742
<212> PRT
<213> 玉米穗虫
<400> 17
Met Arg Leu Glu Thr Arg His Ala Ser Ala Ala Thr Lys Phe Arg Leu
1 5 10 15
Leu Met Trp Lys Asn Phe Leu Gln Gln Trp Arg His Arg Leu Gln Thr
20 25 30
Val Val Glu Leu Leu Leu Pro Val Val Thr Met Ala Leu Val Leu Ile
35 40 45
Leu Arg Trp Gln Ile Pro Pro Tyr Gln Ile Asp Thr Leu Thr Tyr Pro
50 55 60
Ala Leu Pro Ala His Thr Leu Asn Tyr Ser Thr Asn Ile Leu Phe Ala
65 70 75 80
Met Asn Met Glu Glu Leu Ser Ile Ala Tyr Ser Pro Ala Ser Pro Val
85 90 95
Leu Asp Asp Val Met Arg Thr Ala Val Ile Asn Leu Leu Thr Ala Asn
100 105 110
Met Lys Asp Leu Ile Pro Ile Phe Ile Asp Asn Leu Pro Pro Gly Ile
115 120 125
Ala Asn Ile Thr Phe Pro Pro Asp Met Asn Leu Asn Thr Ser Ala Ile
130 135 140
Glu Glu Phe Val Lys Ser Arg Ile Arg Val Val Pro Tyr Asn Ser Ser
145 150 155 160
Tyr Glu Ile Arg Gly Ile Asn Val Asp Glu Glu Thr Thr Arg Ser Ile
165 170 175
Ile Ala Ala Val Glu Phe Asp Asp Lys Leu Tyr Gly Ala Glu Gln Leu
180 185 190
Ser Asn Asn Leu Ser Tyr Ser Leu Arg Phe Pro Glu Arg Pro Arg Leu
195 200 205
Asn Ser Phe Phe Gln Thr Gly Gly Arg Thr Trp Arg Ser Asp Gly Val
210 215 220
Phe Pro Val Phe Glu Val Pro Gly Pro Arg Phe Pro His Ser Trp Glu
225 230 235 240
Gly Gly Asn Asp Pro Gly Tyr Val Asn Glu Met Phe Val Ala Leu Gln
245 250 255
Gln Val Ile Ser Met Glu Leu Val Ser Arg Ala Thr Gly Leu Asp Leu
260 265 270
Lys Ser Phe Arg Val Asn Ile Gln Arg Tyr Pro His Pro Pro Tyr Leu
275 280 285
His Asp Gln Ser Val Asp Leu Leu Gln Phe Met Phe Pro Leu Leu Ile
290 295 300
Met Leu Ser Phe Ser Tyr Thr Ala Val Asn Ile Ala Arg Ala Val Thr
305 310 315 320
Val Glu Lys Glu Leu Gln Leu Lys Glu Thr Met Lys Ile Met Gly Leu
325 330 335
Pro Thr Trp Leu His Trp Thr Ala Trp Phe Val Lys Gln Phe Ile Tyr
340 345 350
Leu Ser Ile Thr Ala Val Leu Leu Val Val Leu Leu Lys Val Asn Trp
355 360 365
Phe Thr Asn Asp Asp Gly Phe Ser Glu Tyr Ala Val Phe Thr Asn Thr
370 375 380
Pro Trp Thr Val Leu Leu Phe Phe Leu Ile Leu Tyr Leu Ser Cys Ala
385 390 395 400
Ile Phe Phe Ser Phe Met Val Ser Ser Ile Phe Ser Lys Gly Ser Thr
405 410 415
Ala Ala Leu Phe Met Ala Val Ala Trp Phe Leu Thr Tyr Ile Pro Ala
420 425 430
Phe Leu Leu Ala Met Asp Ile Asn Met Ser Thr Ala Val Gln Val Ile
435 440 445
Thr Cys Phe Ser Ile Asn Ser Ala Met Ser Tyr Gly Phe Gln Leu Met
450 455 460
Leu Ala Lys Glu Ser Thr Gly Gly Leu Gln Trp Gly Asp Phe Met Thr
465 470 475 480
Ser Pro Gly Thr Asp Thr Thr Arg Phe Val Phe Gly His Val Val Ile
485 490 495
Met Leu Val Val Asp Cys Leu Ile Tyr Met Leu Ile Thr Leu Tyr Leu
500 505 510
Glu Gln Val Leu Pro Gly Pro Phe Gly Thr Pro Lys Pro Trp Tyr Phe
515 520 525
Pro Phe Gln Leu Gln Phe Trp Phe Pro Asn Tyr Lys Ser Lys Asp Ala
530 535 540
Gly Leu Ile Phe Glu Asn Asp Asn Ser Glu Phe Asp Asp Ile Ile Lys
545 550 555 560
Glu Lys Asp Pro Thr Asp His Glu Val Gly Val Lys Met Gln Asn Leu
565 570 575
Thr Lys Ile Phe Gly Asn Asn Ile Ala Val Asn Asn Leu Ser Leu Asn
580 585 590
Ile Tyr Asp Asp Gln Ile Thr Val Leu Leu Gly His Asn Gly Ala Gly
595 600 605
Lys Ser Thr Thr Ile Ser Met Leu Thr Gly Asn Leu Lys Val Thr Arg
610 615 620
Gly Thr Val Asn Val Ala Gly Tyr Asp Met Thr Ser Gln Ser Ser Ala
625 630 635 640
Ala Arg Ser His Ile Gly Leu Cys Pro Gln His Asn Ile Leu Phe Asn
645 650 655
Glu Leu Thr Val Lys Glu His Leu Glu Phe Phe Ala Arg Leu Lys Gly
660 665 670
Phe Lys Gly Lys Glu Leu Tyr Glu Glu Ile Asp Ser Leu Ile Glu Lys
675 680 685
Leu Glu Leu Gln Glu Glu Arg Asp Tyr Pro Ser Lys Gly Leu Ser Gly
690 695 700
Gly Gln Lys Arg Arg Leu Cys Val Gly Ile Ala Leu Ser Gly Ala Ala
705 710 715 720
Arg Val Val Leu Leu Asp Glu Pro Thr Ser Gly Met Asp Pro Ser Ser
725 730 735
Arg Arg Ala Leu Trp Glu Leu Leu Gln Lys Glu Lys Lys Gly Arg Ser
740 745 750
Met Ile Leu Thr Thr His Phe Met Asp Glu Ala Asp Ile Leu Gly Asp
755 760 765
Arg Val Ala Ile Met Ala Asn Gly Arg Leu Gln Cys Val Gly Ser Pro
770 775 780
Tyr Phe Leu Lys Arg His Tyr Gly Val Gly Tyr Thr Leu Val Ile Val
785 790 795 800
Lys Asp Thr Asp Phe Asp Phe Val Lys Cys Ser Val Leu Ile Asn Ser
805 810 815
Tyr Ile Pro Gly Thr Ile Val Lys Glu Asp Arg Gly Thr Glu Ile Thr
820 825 830
Tyr Asn Leu Val Asn Asp Tyr Ser His Val Phe Glu Glu Met Leu Asn
835 840 845
Asp Leu Glu Arg Asn Ile Asp Asn Ile Lys Phe Lys Asn Tyr Gly Leu
850 855 860
Val Ala Thr Thr Leu Glu Asp Val Phe Met Ser Val Gly Ala Asp Leu
865 870 875 880
Ser Pro Ile Asn Ser Glu Ser Asp Asp Ala Ile Thr Thr Thr Thr Asp
885 890 895
Ser Thr Ile Asp Asp Ile Leu Lys Gln Glu Ile Asp Ser Ser Leu Glu
900 905 910
Glu Leu Asp Lys Asp Glu Ser Asn Val Thr Gly Leu Arg Leu Phe Gly
915 920 925
Gln Gln Val Leu Ala Val Trp Met Lys Gln Trp Leu Val Leu Ile Arg
930 935 940
Ser Pro Trp Val Met Val Leu Gln Phe Leu Ala Pro Val Val Leu Ile
945 950 955 960
Asn Ser Thr Leu Gly Val Leu Arg Tyr Val Met Ser Leu Ser Pro Thr
965 970 975
Ile Arg Thr Arg Trp Leu Ser Leu Glu Glu Gly Tyr Met Glu Ser Glu
980 985 990
Thr Leu Leu Ser Phe Asn Gly Ser Ile Ala Ser Ser Val Gly Ala Leu
995 1000 1005
Ala Ala Gln Ala Tyr Gln Ser Leu Phe Ala Asn Ser Gly Val Met
1010 1015 1020
Asp Met Glu Ile Asn Ala Ile Gly Ser Gln Pro Ile Glu Glu Tyr
1025 1030 1035
Tyr Leu Asn Arg Thr Ser Asp Pro Val Val Met Gly Ser Leu Arg
1040 1045 1050
His Arg Leu Leu Ile Gly Ser Thr Phe Asp Asp Asn Ser Ala Thr
1055 1060 1065
Ala Trp Phe Ser Asn Phe Gly Tyr His Asp Val Ala Thr Ser Leu
1070 1075 1080
Ala Ala Ile His Ser Ala Ile Leu Arg Ser Lys Asn Ser Asp Ala
1085 1090 1095
Val Leu Asn Val Tyr Asn His Pro Leu Glu Ala Ser Tyr Ile Asp
1100 1105 1110
Gln Ser Asp Val Gln Thr Met Ile Ala Met Leu Ser Met Gln Leu
1115 1120 1125
Ser Ser Gly Ile Gly Ser Ser Val Ser Ile Val Ser Ala Val Phe
1130 1135 1140
Ile Met Phe Tyr Ile Lys Glu Arg Met Ser Gly Ala Lys Leu Leu
1145 1150 1155
Gln Asn Ala Ala Gly Val Ala Pro Ser Val Leu Trp Gly Gly Ala
1160 1165 1170
Ala Ile Phe Asn Trp Phe Trp Phe Leu Ile Thr Cys Val Ser Ile
1175 1180 1185
Val Ile Ser Cys Val Ala Phe Asp Val Ile Gly Leu Ser Asn Val
1190 1195 1200
His Glu Leu Gly Arg Met Phe Leu Cys Val Met Val Tyr Gly Ala
1205 1210 1215
Ala Met Leu Pro Leu Val Tyr Leu Leu Ser Leu Lys Phe Lys Gly
1220 1225 1230
Pro Ala Val Gly Phe Val Gly Phe Tyr Phe Leu Asn Val Leu Phe
1235 1240 1245
Gly Met Met Gly Ala Gln Val Val Glu Ala Leu Ser Ser Pro Met
1250 1255 1260
Leu Asp Thr Glu Arg Ala Ala His Ile Leu Asp Tyr Leu Leu Gln
1265 1270 1275
Phe Tyr Pro Leu Tyr Ser Leu Val Thr Ser Ile Arg Phe Leu Asn
1280 1285 1290
Gln Val Gly Leu Arg Glu Tyr Thr Cys Leu Gln Gly Cys Glu Tyr
1295 1300 1305
Leu Gln Ala Val Tyr Pro Asn Leu Glu Cys Ser Met Ala Ser Met
1310 1315 1320
Cys Glu Phe His Ser Asn Cys Cys Val Arg Glu Asn Pro Tyr Phe
1325 1330 1335
Asp Trp Glu Glu Pro Gly Val Leu Arg Tyr Leu Leu Ser Met Cys
1340 1345 1350
Phe Ser Cys Leu Ile Phe Trp Leu Leu Leu Met Thr Ile Glu Tyr
1355 1360 1365
Arg Val Val Gln Lys Val Phe Thr Phe Lys Lys Thr Pro Pro Pro
1370 1375 1380
Ile Asp Glu Ser Thr Leu Asp Glu Asp Val Met Thr Glu Ala Arg
1385 1390 1395
Arg Ala Arg Gln Val Pro Pro Thr Arg Arg Ser Asp His Ala Leu
1400 1405 1410
Leu Ala His Asp Leu Ser Lys Tyr Tyr Gly Lys His Leu Ala Val
1415 1420 1425
Asp Gln Val Ser Phe Ser Val Asn Asp Gly Glu Cys Phe Gly Leu
1430 1435 1440
Leu Gly Val Asn Gly Ala Gly Lys Thr Thr Thr Phe Lys Met Leu
1445 1450 1455
Met Gly Asp Glu Ser Ile Ser Ser Gly Glu Ala Tyr Val Ser Gly
1460 1465 1470
His Ser Val Gln Arg Asn Leu Asp Arg Val His Glu Asn Ile Gly
1475 1480 1485
Tyr Cys Pro Gln Phe Asp Ala Leu Phe Gly Glu Leu Thr Gly Arg
1490 1495 1500
Gln Thr Leu His Met Phe Ala Leu Met Arg Gly Leu Arg Leu Arg
1505 1510 1515
Thr Ala Ala Arg Ser Ala Glu Thr Leu Ala His Ala Leu Gly Phe
1520 1525 1530
Phe Lys His Leu Asp Lys Arg Val His Gln Tyr Ser Gly Gly Thr
1535 1540 1545
Lys Arg Lys Leu Asn Thr Ala Ile Ala Phe Met Gly Arg Thr Arg
1550 1555 1560
Leu Val Phe Val Asp Glu Pro Thr Thr Gly Val Asp Pro Ala Ala
1565 1570 1575
Lys Arg His Val Trp Arg Ala Thr Arg Gly Val Gln Arg Ala Gly
1580 1585 1590
Arg Gly Val Val Leu Thr Ser His Ser Met Glu Glu Cys Glu Ala
1595 1600 1605
Leu Cys Ser Arg Leu Thr Ile Met Val Asn Gly Arg Phe Gln Cys
1610 1615 1620
Leu Gly Thr Pro Gln His Leu Lys Asn Lys Phe Ser Gln Gly Phe
1625 1630 1635
Thr Leu Ile Ile Lys Met Lys Thr Asp Asp Ser Glu Ser Asp Thr
1640 1645 1650
Gln Ser Val Asn Ser Thr Thr Ser Val Val Asp Ser Val Lys Leu
1655 1660 1665
Tyr Val Ser Gly Asn Phe Glu Ser Pro Lys Ile Met Glu Glu Tyr
1670 1675 1680
His Gly Leu Leu Thr Tyr Tyr Leu Pro Asp Arg Ser Met Ala Trp
1685 1690 1695
Ser Arg Met Phe Gly Ile Met Glu Arg Ala Lys Gln Ile Leu Gln
1700 1705 1710
Ile Glu Asp Tyr Ser Ile Ser Gln Thr Thr Leu Glu Gln Ile Phe
1715 1720 1725
Leu Gln Phe Thr Lys Tyr Gln Arg Glu Glu Gly Thr Thr Leu
1730 1735 1740
<210> 18
<211> 5232
<212> DNA
<213> 大豆尺蠖
<400> 18
atgaagatga ggcgagaggc taagcccgcg ggcgcgttca tgaagttccg cctgctgatg 60
tggaagaact tcctgcagca gtggcggcac cggctgcaga cggtgacgga gctgctgctg 120
cccgtgctca ccatgacgct ggtgctggtg ctgcgctggc agatggagcc cagcatggtc 180
ggcaccctca cgtacccgcc gataccagca cacacactca actattctac agccatttta 240
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gacgtggtca gaactggaat tacaaactta ttagttgcga atgcaaaaga tctgcttcca 360
atttttgaaa atatttcaat acctggttta ccagaaatag aacttccatc tattcctgaa 420
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aacaatagtc atgatctaag aggactgtac atccgcgagg agtccactcg cgtggttatc 540
gctggcattg agtttgatga caaactatat gatgcggaaa gcttgtcaaa caatttatca 600
tttgcactac ggtttcctga aaggcctcga atgaactcgt ttttccaacg aggggggcgt 660
acttggcgaa ccgatatagt gttcccatta tttgaaatgc caggaccaag atatccatgg 720
tcatgggaag gcggcagaga tccaggctac gtcaacgaaa tgtttatcgc gctgcaaaac 780
gctatctcta atgagttgat atccagggct accggggagg acttgaaaaa gttcagggtt 840
aacgtccaga gattccctca cccgccttac atactcgaca tggcggtgga tttactgcag 900
ttcatgttcc cgatgttcat catgctcagc ttcagttaca ctgctgttaa catagccaga 960
gcagtcaccg tagaaaaaga attgcagctg aaggaaacga tgaggatcat gggtctaccc 1020
acatggctac actggacagc gtggttttgc aagcagtttc tctatcttct aattacagcg 1080
attctaatta tagtcctttt aaagatacat tggtttacta acgaagaggg cttttctgaa 1140
tacgcagtgt ttactaatac cccgtggacg gtgctgttct ttttcatggt tttgtactta 1200
tcatgcgcta tatttttctg ttttatgata agcagtttct tttcaaaagg tagtacagcg 1260
gctttgtgca tgggagtggt ctggttccta tcttacgtcc ccgctgtcct cttggctatg 1320
gacatcgata tgtcgacagc aatgcaagtc ttcacgtgcc ttagcataaa ttcagcgatg 1380
tcttacgggt tccaacttct actggccaaa gaagccgttg gaggtttgca gtggggcgac 1440
ttcatgtcgt caccggcggc ggagaccaac cgcttcgtgt tcggccacgt ggtcatcatg 1500
ctggtggtcg actgtgtgct gtacatgctc gtcactctgt acctggagca ggtcatgcca 1560
gggccctttg gcacgcccaa accctggtat ttccccttcc aattgaaatt ctggttccct 1620
aattatagtt cagatgtcgg ttttattttg gaaaacgaag ttagtgagtc tgaagatata 1680
attaaagaga aagacccaat tgaccataca atcggtgtca aaatgcatga tctaacaaaa 1740
atttacggaa ataatgtagc ggtcaatcat ttatctttga atatttacaa cgatcagatt 1800
accgtgctct tggggcacaa tggtgcgggg aaatctacca ccatatctat gttgacagga 1860
aatttaaagg caactcgcgg gtctatgagc gtggctgggt acgacatgag ctcgcaagcc 1920
gcggccgctc gcgcacacat cggcttgtgt ccacaacaca acgtcttgtt caacgaactc 1980
accgtcaagg aacatctcca atttttcgcc cgcctcaaag gattcaaagg ccaacaattg 2040
aaagacgaaa ttgatactct tatcgctaaa ttggagttgg aagaaaagcg tgattatcct 2100
tctaaaggtc tttctggcgg tcagaagcgt cggttatgcg ttggtatagc tttaagcggg 2160
gcagctcgtg tcgtgctcct ggacgaacca acctcgggca tggaccctgc atcccgacga 2220
gctctctggg accttttgca acgggagaag aaaggtcgct caatgatcct gacgacccac 2280
tttatgaacg aggcagacat tctcggcgac agagtggcca ttatggcgaa cggtcgcctg 2340
cagtgcgtgg gctccccgta cttcctcaag cgtcactatg gcgtcgggta caccctggtc 2400
gttgtcaagg atgatgactt cgacttcgag gaatgctcta agctgattca taaatatgtc 2460
ccaggcagta ttatgaagga agatcgcggt tccgaaatcg cgtatagtct cgacaatgat 2520
tactctcaca ctttcgaaaa tatgttaaat gatcttgaaa agaatattgg cacaattaaa 2580
ctgaaaaatt atggcttggt tgcaactact ctggaagatg tatttatgtc tgttggcgcg 2640
gacctggcac ctgtacagtc agagtcggac gacactgcca ccacaaccac cgactcctca 2700
atggacgata tactcaaaca tgaaatcgat tcttctttag aacaattgga tagagacgag 2760
agcagcgtca aaggtttcag tctattgtac cagcacgttc tagcggtgtg gatgaagttg 2820
gccttagtct ggatccgatc ttggtggctg gtgctattgc agtttgccgc ccctgtagtc 2880
ctgataaacg ccacgcttgg agtcttgcaa tacgttatgt cgttcgcgcc tatcattaca 2940
agcagggttt tagatcttac agaaggttat gttctcaccg aggccctgtt gagctacaac 3000
ggttcttcgt cgacgtcgct cggagctctc gcagcacaag cctatgaaac gatgttcaaa 3060
acctccggag tcaacagtat ggagctcacg ttgattggca gtcgaccagt cgaagattat 3120
tatctagaga gggcaaacga cacagtggca atggctaacc tacgtcaccg cctgctgatc 3180
ggctccactt tcgatgaaaa ctcagctacg gcctggttca gtaactttgg ctaccacgac 3240
gtagccacgt cgctagcaac tgtctactca gctatactca aagccaagaa ctcaaccgct 3300
tttatgaacg tttacaatca tcccctggaa gccacgtatt cggatcaaag tgacttgcag 3360
acgatgatag cgatgttgtc catgcagctg gcgtctggca tcggcagcag tgtgggcatc 3420
gtgagcgctg tgttcatcat gttctatatc aaggagcgtg tatcgggcgc caagttgctg 3480
cagaaggcgg cgggcgtgca gccggccgtg ctgtggggcg cggccgctgt gttcgactgg 3540
acgtgcttct tactcacctg catatctata gtcatctcct gtgcggcctt ccaggtcata 3600
ggcctgtcta cagcttccga gttgggccgc atgtacctgt gtgcgatggt gtacggcgcg 3660
gcgatgttgc cgttcagcta catcatgtcg cacgtgttca gaggaccagc cgtcggcttc 3720
gttagcttct tcttcatgaa tgtcatcttt ggtatgatgg gcccgcaagt ggtggaggcg 3780
ctgtcttcgc cgacgctcac cacgcagcac gtggcgcaca ttatggacaa cgtgctgcag 3840
ttcttcccgc tctacagtct tgttacatca gtcaggtatt tgaaccagat cggcctccgt 3900
gagtacacgt gcctgcaaag ctgtgaatac ttgcaggcgg tgtaccctaa cgtcgagtgc 3960
acgatggcca gcatgtgcga attctccagt aactgttgcg ttcgagataa cccgtacttc 4020
gactgggagg agcctggcgt tctgcggtac ttggtcgcca tgacaggcac ctgcgccgtt 4080
ctatggacga ttctgatggt catcgagtac agactcttcc aaaaggtatt aagattccgc 4140
aagaccccgc cgccagtgga cgagagctcg ttagacgagg acgtggcgcg cgaggctgag 4200
agcgcgcgtc acacgcacta cgccgaccgc gcgaaccatg ccctcctcgc cacggacctc 4260
gccaagtact acgggaaaca tctcgcggtg ggccaagtgt ccttcagtgt aagcgacggc 4320
gaatgtttcg gtctgctggg cgtgaacggc gcgggcaaga ccacgacctt caagatgctg 4380
atgggcgacg agtccatctc cagcggcgag gcctacgtca gcggacactc tgtgcggaag 4440
aacctgaaca gggtgcatga gaatattggt tactgtccgc aattcgacgc gttattcggc 4500
gagctgactg gtcgcgagac gctccgcatg ttcgccctga tgcgaggact tcgcctcagc 4560
acggccgcgc ccgctgtgga gacgctctca cacgcactcg gcttcttaag acatctcgat 4620
aagagggtgg atcaatattc aggaggcact aagcgaaagc tgaacacagc gatagcgttc 4680
ttaggaaaga cgagacttgt gttcgtcgac gaacctacca ccggcgtaga ccctgctgct 4740
aaacgacatg tatggcgagc cacgcggggc gtgcagcgcg caggccgtgg cgtggtgctg 4800
acgtcacaca gcatggagga gtgcgaagcg ctgtgctcac gactcaccat catggtcaac 4860
ggacggttcc aatgccttgg aacaccacaa catctcaaga ataaattctc tgaaggtttt 4920
acgttaacta tcaaaatgaa aatggaggat aatcctgaaa catcgtcgaa cagcagcgca 4980
atcagtaaag tggaccttgt caaggaatac gtcgaagcta atttccagac tcctaggata 5040
atggaggaat accaaggtct actaacatac tacctaccag accggacaat ggcgtggtca 5100
cgaatgttcg gtatcatgga gcgagcgaaa cgagacttag aaatcgagga ttacagcata 5160
tcacagacga cattagaaca gatattccta caattcacaa agtaccagcg acaagaaggc 5220
gatgaatcat ag 5232
<210> 19
<211> 1743
<212> PRT
<213> 大豆尺蠖
<400> 19
Met Lys Met Arg Arg Glu Ala Lys Pro Ala Gly Ala Phe Met Lys Phe
1 5 10 15
Arg Leu Leu Met Trp Lys Asn Phe Leu Gln Gln Trp Arg His Arg Leu
20 25 30
Gln Thr Val Thr Glu Leu Leu Leu Pro Val Leu Thr Met Thr Leu Val
35 40 45
Leu Val Leu Arg Trp Gln Met Glu Pro Ser Met Val Gly Thr Leu Thr
50 55 60
Tyr Pro Pro Ile Pro Ala His Thr Leu Asn Tyr Ser Thr Ala Ile Leu
65 70 75 80
Ala Gly Met Asn Leu Thr Gln Met Ser Ile Ala Tyr Ser Pro Arg Ser
85 90 95
Pro Val Leu Asp Asp Val Val Arg Thr Gly Ile Thr Asn Leu Leu Val
100 105 110
Ala Asn Ala Lys Asp Leu Leu Pro Ile Phe Glu Asn Ile Ser Ile Pro
115 120 125
Gly Leu Pro Glu Ile Glu Leu Pro Ser Ile Pro Glu Asp Phe Asn Ser
130 135 140
Thr Leu Ile Val Glu Phe Leu Lys Ser Arg Ile Lys Ile Glu Ala Tyr
145 150 155 160
Asn Asn Ser His Asp Leu Arg Gly Leu Tyr Ile Arg Glu Glu Ser Thr
165 170 175
Arg Val Val Ile Ala Gly Ile Glu Phe Asp Asp Lys Leu Tyr Asp Ala
180 185 190
Glu Ser Leu Ser Asn Asn Leu Ser Phe Ala Leu Arg Phe Pro Glu Arg
195 200 205
Pro Arg Met Asn Ser Phe Phe Gln Arg Gly Gly Arg Thr Trp Arg Thr
210 215 220
Asp Ile Val Phe Pro Leu Phe Glu Met Pro Gly Pro Arg Tyr Pro Trp
225 230 235 240
Ser Trp Glu Gly Gly Arg Asp Pro Gly Tyr Val Asn Glu Met Phe Ile
245 250 255
Ala Leu Gln Asn Ala Ile Ser Asn Glu Leu Ile Ser Arg Ala Thr Gly
260 265 270
Glu Asp Leu Lys Lys Phe Arg Val Asn Val Gln Arg Phe Pro His Pro
275 280 285
Pro Tyr Ile Leu Asp Met Ala Val Asp Leu Leu Gln Phe Met Phe Pro
290 295 300
Met Phe Ile Met Leu Ser Phe Ser Tyr Thr Ala Val Asn Ile Ala Arg
305 310 315 320
Ala Val Thr Val Glu Lys Glu Leu Gln Leu Lys Glu Thr Met Arg Ile
325 330 335
Met Gly Leu Pro Thr Trp Leu His Trp Thr Ala Trp Phe Cys Lys Gln
340 345 350
Phe Leu Tyr Leu Leu Ile Thr Ala Ile Leu Ile Ile Val Leu Leu Lys
355 360 365
Ile His Trp Phe Thr Asn Glu Glu Gly Phe Ser Glu Tyr Ala Val Phe
370 375 380
Thr Asn Thr Pro Trp Thr Val Leu Phe Phe Phe Met Val Leu Tyr Leu
385 390 395 400
Ser Cys Ala Ile Phe Phe Cys Phe Met Ile Ser Ser Phe Phe Ser Lys
405 410 415
Gly Ser Thr Ala Ala Leu Cys Met Gly Val Val Trp Phe Leu Ser Tyr
420 425 430
Val Pro Ala Val Leu Leu Ala Met Asp Ile Asp Met Ser Thr Ala Met
435 440 445
Gln Val Phe Thr Cys Leu Ser Ile Asn Ser Ala Met Ser Tyr Gly Phe
450 455 460
Gln Leu Leu Leu Ala Lys Glu Ala Val Gly Gly Leu Gln Trp Gly Asp
465 470 475 480
Phe Met Ser Ser Pro Ala Ala Glu Thr Asn Arg Phe Val Phe Gly His
485 490 495
Val Val Ile Met Leu Val Val Asp Cys Val Leu Tyr Met Leu Val Thr
500 505 510
Leu Tyr Leu Glu Gln Val Met Pro Gly Pro Phe Gly Thr Pro Lys Pro
515 520 525
Trp Tyr Phe Pro Phe Gln Leu Lys Phe Trp Phe Pro Asn Tyr Ser Ser
530 535 540
Asp Val Gly Phe Ile Leu Glu Asn Glu Val Ser Glu Ser Glu Asp Ile
545 550 555 560
Ile Lys Glu Lys Asp Pro Ile Asp His Thr Ile Gly Val Lys Met His
565 570 575
Asp Leu Thr Lys Ile Tyr Gly Asn Asn Val Ala Val Asn His Leu Ser
580 585 590
Leu Asn Ile Tyr Asn Asp Gln Ile Thr Val Leu Leu Gly His Asn Gly
595 600 605
Ala Gly Lys Ser Thr Thr Ile Ser Met Leu Thr Gly Asn Leu Lys Ala
610 615 620
Thr Arg Gly Ser Met Ser Val Ala Gly Tyr Asp Met Ser Ser Gln Ala
625 630 635 640
Ala Ala Ala Arg Ala His Ile Gly Leu Cys Pro Gln His Asn Val Leu
645 650 655
Phe Asn Glu Leu Thr Val Lys Glu His Leu Gln Phe Phe Ala Arg Leu
660 665 670
Lys Gly Phe Lys Gly Gln Gln Leu Lys Asp Glu Ile Asp Thr Leu Ile
675 680 685
Ala Lys Leu Glu Leu Glu Glu Lys Arg Asp Tyr Pro Ser Lys Gly Leu
690 695 700
Ser Gly Gly Gln Lys Arg Arg Leu Cys Val Gly Ile Ala Leu Ser Gly
705 710 715 720
Ala Ala Arg Val Val Leu Leu Asp Glu Pro Thr Ser Gly Met Asp Pro
725 730 735
Ala Ser Arg Arg Ala Leu Trp Asp Leu Leu Gln Arg Glu Lys Lys Gly
740 745 750
Arg Ser Met Ile Leu Thr Thr His Phe Met Asn Glu Ala Asp Ile Leu
755 760 765
Gly Asp Arg Val Ala Ile Met Ala Asn Gly Arg Leu Gln Cys Val Gly
770 775 780
Ser Pro Tyr Phe Leu Lys Arg His Tyr Gly Val Gly Tyr Thr Leu Val
785 790 795 800
Val Val Lys Asp Asp Asp Phe Asp Phe Glu Glu Cys Ser Lys Leu Ile
805 810 815
His Lys Tyr Val Pro Gly Ser Ile Met Lys Glu Asp Arg Gly Ser Glu
820 825 830
Ile Ala Tyr Ser Leu Asp Asn Asp Tyr Ser His Thr Phe Glu Asn Met
835 840 845
Leu Asn Asp Leu Glu Lys Asn Ile Gly Thr Ile Lys Leu Lys Asn Tyr
850 855 860
Gly Leu Val Ala Thr Thr Leu Glu Asp Val Phe Met Ser Val Gly Ala
865 870 875 880
Asp Leu Ala Pro Val Gln Ser Glu Ser Asp Asp Thr Ala Thr Thr Thr
885 890 895
Thr Asp Ser Ser Met Asp Asp Ile Leu Lys His Glu Ile Asp Ser Ser
900 905 910
Leu Glu Gln Leu Asp Arg Asp Glu Ser Ser Val Lys Gly Phe Ser Leu
915 920 925
Leu Tyr Gln His Val Leu Ala Val Trp Met Lys Leu Ala Leu Val Trp
930 935 940
Ile Arg Ser Trp Trp Leu Val Leu Leu Gln Phe Ala Ala Pro Val Val
945 950 955 960
Leu Ile Asn Ala Thr Leu Gly Val Leu Gln Tyr Val Met Ser Phe Ala
965 970 975
Pro Ile Ile Thr Ser Arg Val Leu Asp Leu Thr Glu Gly Tyr Val Leu
980 985 990
Thr Glu Ala Leu Leu Ser Tyr Asn Gly Ser Ser Ser Thr Ser Leu Gly
995 1000 1005
Ala Leu Ala Ala Gln Ala Tyr Glu Thr Met Phe Lys Thr Ser Gly
1010 1015 1020
Val Asn Ser Met Glu Leu Thr Leu Ile Gly Ser Arg Pro Val Glu
1025 1030 1035
Asp Tyr Tyr Leu Glu Arg Ala Asn Asp Thr Val Ala Met Ala Asn
1040 1045 1050
Leu Arg His Arg Leu Leu Ile Gly Ser Thr Phe Asp Glu Asn Ser
1055 1060 1065
Ala Thr Ala Trp Phe Ser Asn Phe Gly Tyr His Asp Val Ala Thr
1070 1075 1080
Ser Leu Ala Thr Val Tyr Ser Ala Ile Leu Lys Ala Lys Asn Ser
1085 1090 1095
Thr Ala Phe Met Asn Val Tyr Asn His Pro Leu Glu Ala Thr Tyr
1100 1105 1110
Ser Asp Gln Ser Asp Leu Gln Thr Met Ile Ala Met Leu Ser Met
1115 1120 1125
Gln Leu Ala Ser Gly Ile Gly Ser Ser Val Gly Ile Val Ser Ala
1130 1135 1140
Val Phe Ile Met Phe Tyr Ile Lys Glu Arg Val Ser Gly Ala Lys
1145 1150 1155
Leu Leu Gln Lys Ala Ala Gly Val Gln Pro Ala Val Leu Trp Gly
1160 1165 1170
Ala Ala Ala Val Phe Asp Trp Thr Cys Phe Leu Leu Thr Cys Ile
1175 1180 1185
Ser Ile Val Ile Ser Cys Ala Ala Phe Gln Val Ile Gly Leu Ser
1190 1195 1200
Thr Ala Ser Glu Leu Gly Arg Met Tyr Leu Cys Ala Met Val Tyr
1205 1210 1215
Gly Ala Ala Met Leu Pro Phe Ser Tyr Ile Met Ser His Val Phe
1220 1225 1230
Arg Gly Pro Ala Val Gly Phe Val Ser Phe Phe Phe Met Asn Val
1235 1240 1245
Ile Phe Gly Met Met Gly Pro Gln Val Val Glu Ala Leu Ser Ser
1250 1255 1260
Pro Thr Leu Thr Thr Gln His Val Ala His Ile Met Asp Asn Val
1265 1270 1275
Leu Gln Phe Phe Pro Leu Tyr Ser Leu Val Thr Ser Val Arg Tyr
1280 1285 1290
Leu Asn Gln Ile Gly Leu Arg Glu Tyr Thr Cys Leu Gln Ser Cys
1295 1300 1305
Glu Tyr Leu Gln Ala Val Tyr Pro Asn Val Glu Cys Thr Met Ala
1310 1315 1320
Ser Met Cys Glu Phe Ser Ser Asn Cys Cys Val Arg Asp Asn Pro
1325 1330 1335
Tyr Phe Asp Trp Glu Glu Pro Gly Val Leu Arg Tyr Leu Val Ala
1340 1345 1350
Met Thr Gly Thr Cys Ala Val Leu Trp Thr Ile Leu Met Val Ile
1355 1360 1365
Glu Tyr Arg Leu Phe Gln Lys Val Leu Arg Phe Arg Lys Thr Pro
1370 1375 1380
Pro Pro Val Asp Glu Ser Ser Leu Asp Glu Asp Val Ala Arg Glu
1385 1390 1395
Ala Glu Ser Ala Arg His Thr His Tyr Ala Asp Arg Ala Asn His
1400 1405 1410
Ala Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ala Lys Tyr Tyr Gly Lys His Leu
1415 1420 1425
Ala Val Gly Gln Val Ser Phe Ser Val Ser Asp Gly Glu Cys Phe
1430 1435 1440
Gly Leu Leu Gly Val Asn Gly Ala Gly Lys Thr Thr Thr Phe Lys
1445 1450 1455
Met Leu Met Gly Asp Glu Ser Ile Ser Ser Gly Glu Ala Tyr Val
1460 1465 1470
Ser Gly His Ser Val Arg Lys Asn Leu Asn Arg Val His Glu Asn
1475 1480 1485
Ile Gly Tyr Cys Pro Gln Phe Asp Ala Leu Phe Gly Glu Leu Thr
1490 1495 1500
Gly Arg Glu Thr Leu Arg Met Phe Ala Leu Met Arg Gly Leu Arg
1505 1510 1515
Leu Ser Thr Ala Ala Pro Ala Val Glu Thr Leu Ser His Ala Leu
1520 1525 1530
Gly Phe Leu Arg His Leu Asp Lys Arg Val Asp Gln Tyr Ser Gly
1535 1540 1545
Gly Thr Lys Arg Lys Leu Asn Thr Ala Ile Ala Phe Leu Gly Lys
1550 1555 1560
Thr Arg Leu Val Phe Val Asp Glu Pro Thr Thr Gly Val Asp Pro
1565 1570 1575
Ala Ala Lys Arg His Val Trp Arg Ala Thr Arg Gly Val Gln Arg
1580 1585 1590
Ala Gly Arg Gly Val Val Leu Thr Ser His Ser Met Glu Glu Cys
1595 1600 1605
Glu Ala Leu Cys Ser Arg Leu Thr Ile Met Val Asn Gly Arg Phe
1610 1615 1620
Gln Cys Leu Gly Thr Pro Gln His Leu Lys Asn Lys Phe Ser Glu
1625 1630 1635
Gly Phe Thr Leu Thr Ile Lys Met Lys Met Glu Asp Asn Pro Glu
1640 1645 1650
Thr Ser Ser Asn Ser Ser Ala Ile Ser Lys Val Asp Leu Val Lys
1655 1660 1665
Glu Tyr Val Glu Ala Asn Phe Gln Thr Pro Arg Ile Met Glu Glu
1670 1675 1680
Tyr Gln Gly Leu Leu Thr Tyr Tyr Leu Pro Asp Arg Thr Met Ala
1685 1690 1695
Trp Ser Arg Met Phe Gly Ile Met Glu Arg Ala Lys Arg Asp Leu
1700 1705 1710
Glu Ile Glu Asp Tyr Ser Ile Ser Gln Thr Thr Leu Glu Gln Ile
1715 1720 1725
Phe Leu Gln Phe Thr Lys Tyr Gln Arg Gln Glu Gly Asp Glu Ser
1730 1735 1740
<210> 20
<211> 1932
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 改组变体
<400> 20
gcgaaagccc agcgttccgg taccagatcc atgggaaact ctgtccttaa ttccggtcgt 60
accacaatat gtgatgcata caacgtggca gctcacgacc ctttctcatt ccagcacaaa 120
tcactagaca ctgttcagag ggaatggact gagtggaaga agaacaatca ttcgctatat 180
ctcgacccga tcgtcggaac cgtggcttca ttcttgctca agaaggtggg ttctctcgtt 240
ggtaagagga ttctctcgga actaaggaat ttgatcttcc cctccggtag cacaaatctc 300
atgcaggata tactccgtga gaccgagcaa ttcctgaacc agcgactgga cacggacacc 360
ttggcacgag ttaatgctga attgacaggt ctacaggcaa atgtcgagga gttcaatcgc 420
caagttgaca acttcctaaa tcccaatcgt aacgccgtgc ctttgtctat tacgtcgtcc 480
gtcaacacga tgcagcagct attcttgaac cggttacctc aattccagat gcaaggctac 540
caattgttgt tactcccgtt attcgcccaa gctgctaatc ttcacctgag cttcatcagg 600
gatgtcatcc tgaatgcaga cgagtggggc atatcggcag ctacactacg tacttatagg 660
gattacctga agaactacac gcgtgactac tcaaactact gtatcaacac ctatcagtcc 720
gccttcaaag gcctgaatac aaggctccac ggtacgttgg agtttcggac atacatgttc 780
ctgaacgtgt tcgagtatgt ctccatctgg tcgcttttca agtaccagtc attgctggtc 840
tcgtcaggtg ctaacctata cgcaagtgga agtggacctc agcaaaccca atcgttcacg 900
agtcaagact ggccattcct gtatagcttg ttccaggtca actccaacta cgtgctgaac 960
ggcttctcag gtgctcgatt gtccaacact ttcccaaaca tcggtggact tccaggaagc 1020
actacgactc atgccctgct ggctgcacga gtcaactact ctggtggaat ctcaagtggc 1080
gatattggag cttcaccatt caaccagaac ttcaactgca gcacattcct gcctcctttg 1140
cttacgccat tcgttagatc ctggctcgac agtggaagtg atcgagaagg agtcgctact 1200
gtgaccaact ggcagacaga gagtttcgag acaacactcg gtctacgatc aggagcattc 1260
acagcaagag gaaacagcaa ctacttccca gactacttca ttcgaaacat ctctggagta 1320
cctctagtcg ttaggaacga agaccttcgt cgtcctctgc actacaatga gatcaggaac 1380
attgcctcac cttcaggtac acctggtgga gcacgagcat acatggtctc agttcacaac 1440
cgtaagaaca acatccatgc agttcatgag aacggatcaa tgatccactt ggctccaaac 1500
gactacaccg gatttacaat cagtcctatc cacgccactc aggtgaacaa ccagactcga 1560
acgttcatca gtgagaagtt tggaaaccaa ggcgattctc tgaggtttga gcagaacaat 1620
accacggcaa ggtacactct caggggtaat ggaaactctt acaacctata cttgcgtgtc 1680
tccagcatag gcaattcaac tatcagggtt accatcaacg gtcgagtgta cacagctaca 1740
aacgtcaata ccaccactaa caacgatggt gtaaacgaca atggtgctcg cttcagcgac 1800
atcaacatcg gaaacgtagt cgcaagcagt aacagtgacg tacctctgga cattaacgtt 1860
acgttcaact caggcacaca gttcgatttg atgaacacca tgctggtacc gacaaacatt 1920
agcccattgt at 1932
<210> 21
<211> 644
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 改组变体
<400> 21
Ala Lys Ala Gln Arg Ser Gly Thr Arg Ser Met Gly Asn Ser Val Leu
1 5 10 15
Asn Ser Gly Arg Thr Thr Ile Cys Asp Ala Tyr Asn Val Ala Ala His
20 25 30
Asp Pro Phe Ser Phe Gln His Lys Ser Leu Asp Thr Val Gln Arg Glu
35 40 45
Trp Thr Glu Trp Lys Lys Asn Asn His Ser Leu Tyr Leu Asp Pro Ile
50 55 60
Val Gly Thr Val Ala Ser Phe Leu Leu Lys Lys Val Gly Ser Leu Val
65 70 75 80
Gly Lys Arg Ile Leu Ser Glu Leu Arg Asn Leu Ile Phe Pro Ser Gly
85 90 95
Ser Thr Asn Leu Met Gln Asp Ile Leu Arg Glu Thr Glu Gln Phe Leu
100 105 110
Asn Gln Arg Leu Asp Thr Asp Thr Leu Ala Arg Val Asn Ala Glu Leu
115 120 125
Thr Gly Leu Gln Ala Asn Val Glu Glu Phe Asn Arg Gln Val Asp Asn
130 135 140
Phe Leu Asn Pro Asn Arg Asn Ala Val Pro Leu Ser Ile Thr Ser Ser
145 150 155 160
Val Asn Thr Met Gln Gln Leu Phe Leu Asn Arg Leu Pro Gln Phe Gln
165 170 175
Met Gln Gly Tyr Gln Leu Leu Leu Leu Pro Leu Phe Ala Gln Ala Ala
180 185 190
Asn Leu His Leu Ser Phe Ile Arg Asp Val Ile Leu Asn Ala Asp Glu
195 200 205
Trp Gly Ile Ser Ala Ala Thr Leu Arg Thr Tyr Arg Asp Tyr Leu Lys
210 215 220
Asn Tyr Thr Arg Asp Tyr Ser Asn Tyr Cys Ile Asn Thr Tyr Gln Ser
225 230 235 240
Ala Phe Lys Gly Leu Asn Thr Arg Leu His Gly Thr Leu Glu Phe Arg
245 250 255
Thr Tyr Met Phe Leu Asn Val Phe Glu Tyr Val Ser Ile Trp Ser Leu
260 265 270
Phe Lys Tyr Gln Ser Leu Leu Val Ser Ser Gly Ala Asn Leu Tyr Ala
275 280 285
Ser Gly Ser Gly Pro Gln Gln Thr Gln Ser Phe Thr Ser Gln Asp Trp
290 295 300
Pro Phe Leu Tyr Ser Leu Phe Gln Val Asn Ser Asn Tyr Val Leu Asn
305 310 315 320
Gly Phe Ser Gly Ala Arg Leu Ser Asn Thr Phe Pro Asn Ile Gly Gly
325 330 335
Leu Pro Gly Ser Thr Thr Thr His Ala Leu Leu Ala Ala Arg Val Asn
340 345 350
Tyr Ser Gly Gly Ile Ser Ser Gly Asp Ile Gly Ala Ser Pro Phe Asn
355 360 365
Gln Asn Phe Asn Cys Ser Thr Phe Leu Pro Pro Leu Leu Thr Pro Phe
370 375 380
Val Arg Ser Trp Leu Asp Ser Gly Ser Asp Arg Glu Gly Val Ala Thr
385 390 395 400
Val Thr Asn Trp Gln Thr Glu Ser Phe Glu Thr Thr Leu Gly Leu Arg
405 410 415
Ser Gly Ala Phe Thr Ala Arg Gly Asn Ser Asn Tyr Phe Pro Asp Tyr
420 425 430
Phe Ile Arg Asn Ile Ser Gly Val Pro Leu Val Val Arg Asn Glu Asp
435 440 445
Leu Arg Arg Pro Leu His Tyr Asn Glu Ile Arg Asn Ile Ala Ser Pro
450 455 460
Ser Gly Thr Pro Gly Gly Ala Arg Ala Tyr Met Val Ser Val His Asn
465 470 475 480
Arg Lys Asn Asn Ile His Ala Val His Glu Asn Gly Ser Met Ile His
485 490 495
Leu Ala Pro Asn Asp Tyr Thr Gly Phe Thr Ile Ser Pro Ile His Ala
500 505 510
Thr Gln Val Asn Asn Gln Thr Arg Thr Phe Ile Ser Glu Lys Phe Gly
515 520 525
Asn Gln Gly Asp Ser Leu Arg Phe Glu Gln Asn Asn Thr Thr Ala Arg
530 535 540
Tyr Thr Leu Arg Gly Asn Gly Asn Ser Tyr Asn Leu Tyr Leu Arg Val
545 550 555 560
Ser Ser Ile Gly Asn Ser Thr Ile Arg Val Thr Ile Asn Gly Arg Val
565 570 575
Tyr Thr Ala Thr Asn Val Asn Thr Thr Thr Asn Asn Asp Gly Val Asn
580 585 590
Asp Asn Gly Ala Arg Phe Ser Asp Ile Asn Ile Gly Asn Val Val Ala
595 600 605
Ser Ser Asn Ser Asp Val Pro Leu Asp Ile Asn Val Thr Phe Asn Ser
610 615 620
Gly Thr Gln Phe Asp Leu Met Asn Thr Met Leu Val Pro Thr Asn Ile
625 630 635 640
Ser Pro Leu Tyr
<210> 22
<211> 26
<212> DNA
<213> 玉米穗虫
<400> 22
atgagattag aaacgaggca cgctag 26
<210> 23
<211> 28
<212> DNA
<213> 玉米穗虫
<400> 23
ttataacgtc gttccttctt ctctttgg 28
<210> 24
<211> 23
<212> DNA
<213> 欧洲玉米螟
<400> 24
atgaatcgga aaagaggaag cgg 23
<210> 25
<211> 29
<212> DNA
<213> 欧洲玉米螟
<400> 25
ttattgaatt gcagcctctt gttgatatt 29
<210> 26
<211> 23
<212> DNA
<213> 大豆尺蠖
<400> 26
atgaagatga ggcgagaggc taa 23
<210> 27
<211> 24
<212> DNA
<213> 大豆尺蠖
<400> 27
ctatgattca tcgccttctt gtcg 24

Claims (25)

1.一种异源多核苷酸，其包含：
a)SEQ ID NO：1、3、5、7、或9中所示的核苷酸序列；
b)编码SEQ ID NO：2、4、6、8、或10中所示的氨基酸序列的核苷酸序列；
c)与SEQ ID NO：1、3、5、7、或9中所示的核苷酸序列具有至少约90％序列同一性的核苷酸序列，其中所述与SEQ ID NO：1、3、5、7、或9中所示的核苷酸序列具有至少约90％序列同一性的核苷酸序列编码具有Bt毒素结合活性的多肽；
d)在严格条件下与SEQ ID NO：1、3、5、7、或9中所示的核苷酸序列的互补序列杂交的核苷酸序列，其中所述在严格条件下与SEQ ID NO：1、3、5、7、或9中所示的核苷酸序列的互补序列杂交的核苷酸序列编码具有Bt毒素结合活性的多肽；或
e)与a)、b)、c)、和d)中所示的至少一个核苷酸序列互补的核苷酸序列。
2.如权利要求1所述的异源多核苷酸，其中所述异源多核苷酸包含编码具有Cry毒素结合活性的多肽的核苷酸序列。
3.如权利要求2所述的异源多核苷酸，其中所述异源多核苷酸包含编码具有Cry2A结合活性的多肽的核苷酸序列。
4.一种异源多肽，具有包含以下项的氨基酸序列：
a)SEQ ID NO：2、4、6、8、或10中所示的氨基酸序列；或
b)SEQ ID NO：2、4、6、8、或10中所示的氨基酸序列的变体，其中所述序列变体具有Bt毒素结合活性并与SEQ ID NO：2、4、6、8、或10中所示的氨基酸序列共有至少约90％的序列同一性。
5.一种包含如权利要求4所述的异源多肽的多肽复合物，其中所述异源多肽与Cry毒素结合。
6.如权利要求5所述的异源多肽，其中所述异源多肽与Cry2A毒素结合。
7.一种抗体制剂，针对如权利要求4所述的多肽具有特异性。
8.一种表达盒，其包含与启动子可操作地连接的如权利要求1所述的核苷酸序列。
9.一种宿主细胞，其包含如权利要求8所述的表达盒。
10.如权利要求9所述的宿主细胞，其中所述细胞是微生物。
11.如权利要求10所述的宿主细胞，其中所述微生物选自由以下各项组成的组：酵母和细菌。
12.如权利要求9所述的宿主细胞，其中所述细胞是昆虫细胞。
13.如权利要求9所述的宿主细胞，其中所述细胞是哺乳动物细胞。
14.一种感兴趣的转化细胞，其在基因组内稳定并入异源核苷酸序列，该异源核苷酸序列包含：
a)SEQ ID NO：1、3、5、7、或9中所示的核苷酸序列；
b)编码SEQ ID NO：2、4、6、8、或10中所示的氨基酸序列的核苷酸序列；
c)与SEQ ID NO：1、3、5、7、或9中所示的核苷酸序列具有至少约90％序列同一性的核苷酸序列，其中所述与SEQ ID NO：1、3、5、7、或9中所示的核苷酸序列具有至少约90％序列同一性的核苷酸序列编码具有Bt毒素结合活性的多肽；
d)在严格条件下与SEQ ID NO：1、3、5、7、或9中所示的核苷酸序列的互补序列杂交的核苷酸序列，其中所述在严格条件下与SEQ ID NO：1、3、5、7、或9中所示的核苷酸序列的互补序列杂交的核苷酸序列编码具有Bt毒素结合活性的多肽；或
e)与a)、b)、c)、或d)中所示的至少一个核苷酸序列互补的核苷酸序列。
15.如权利要求14所述的转化细胞，其中所述细胞是植物细胞。
16.如权利要求15所述的转化细胞，其中所述植物细胞是单子叶植物细胞。
17.一种用于鉴定与如权利要求4所述的多肽结合的化合物的方法，所述方法包括：
a)将如权利要求4所述的多肽与一种或多种测试化合物接触；并且
b)确定该测试化合物是否与该多肽结合。
18.一种用于筛选测试化合物以鉴定与如权利要求4所述的多肽结合的化合物的方法，所述方法包括：
a)将如权利要求9所述的宿主细胞与一种或多种测试化合物接触；并且
b)确定该测试化合物是否与如权利要求4所述的多肽结合。
19.一种用于产生SEQ ID NO：1、3、5、7、或9的变体的方法，该方法包括通过转基因技术修饰昆虫中的SEQ ID NO：1、3、5、7、或9的内源序列。
20.如权利要求19所述的方法，其中该昆虫表达SEQ ID NO：2、4、6、8、或10的突变的变体多肽。
21.一种用于选择昆虫的改变的易感性的方法，所述方法包括：
a)在昆虫中鉴定以下各项：
i)SEQ ID NO：1、3、5、7、或9的核苷酸序列的改变；
ii)SEQ ID NO：2、4、6、8、或10的氨基酸序列的改变；或
iii)SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10的表达的变化；并且
b)对所述昆虫的改变的易感性进行选择。
22.如权利要求21所述的方法，其中该昆虫是转基因昆虫。
23.一种用于改变昆虫对杀昆虫剂的易感性的方法，该方法包括用沉默元件喂养昆虫，其中该沉默元件包含以下各项的至少19个连续核苷酸：
a)SEQ ID NO：1、3、5、7、或9中所示的核苷酸序列；
b)编码SEQ ID NO：2、4、6、8、或10中所示的氨基酸序列的核苷酸序列；
c)与SEQ ID NO：1、3、5、7、或9中所示的核苷酸序列具有至少约90％序列同一性的核苷酸序列，其中所述与SEQ ID NO：1、3、5、7、或9中所示的核苷酸序列具有至少约90％序列同一性的核苷酸序列编码具有Bt毒素结合活性的多肽；
d)在严格条件下与SEQ ID NO：1、3、5、7、或9中所示的核苷酸序列的互补序列杂交的核苷酸序列，其中所述在严格条件下与SEQ ID NO：1、3、5、7、或9中所示的核苷酸序列的互补序列杂交的核苷酸序列编码具有Bt毒素结合活性的多肽；或
e)与a)、b)、c)、和d)中所示的至少一个核苷酸序列互补的核苷酸序列，
其中用沉默元件喂养该昆虫改变了该昆虫对杀昆虫剂的易感性。
24.一种用于筛选昆虫群体的试剂盒，其中所述试剂盒包含用于测定ABC转运蛋白基因或基因产物的序列的改变的表达水平的装置，其中该改变指示对杀昆虫剂有抗性的昆虫。
25.一种用于分离昆虫中肠毒素的受体的方法，该方法包括：
a)解剖昆虫以收集中肠组织；
b)对该中肠组织进行膜富集步骤，如BBMV制备；
b)在所富集的膜上进行溶液内结合测定；并且
c)进行亲和纯化，其中该毒素是亲和纯化靶标。
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