CN105960593A - 用于慢性肾病进展预测的生物标记物和方法 - Google Patents

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Abstract

本发明的主题是用于鉴定增加的慢性肾病（CKD）进展风险或用于监测慢性肾病疗法的生物标记物和方法，所述方法包括检测NTproBNP、EGF、ApoH、GDF‑15以及白蛋白与肌酸酐的比率中的一者或多者的水平。

Description

用于慢性肾病进展预测的生物标记物和方法
政府利益
本发明是在美国政府支持的在由国家卫生研究院资助的DK081943下完成的。政府享有本发明的某些权利。
发明领域
本公开涉及诊断测量领域。
背景
虽然流行病学研究和临床登记注册已经报道了慢性肾病（CKD）的发病率呈不连续的增长，但很明显，CKD患者是一个复杂(heterogeneous)的群体，其具有不同的诊断、多样化的病因、可变的预后和明显不同的进行性衰退率 (1, 2) (3)。传统上，CKD被认为随时间推移而发生不间断的进行性衰退，其通常具有变化的衰退率，并且甚至连基线肾功能（肾小球滤过率 （GFR））的增加也可能是常见的(4) (5)。多项研究鉴定出了CKD进展或肾功能丧失增加的风险因素，然而也认识到，仅有相对小百分比的患有CKD的个体最终发展成终末期肾病（ESRD）。
肾病进展可能遵循线性和非线性轨迹，而仅有少数迅速加速至终末期肾病 (6)。对疾病进展速度或变化的预测是具有挑战性的疾病特征的预测。然而，从那些处于低风险而免于不必要的干预的个体中鉴定出那些处于最高进展风险而可能需要强化标准疗法的个体的能力很可能会是克服肾病临床发展中的现有局限的基石策略。从临床和治疗的角度，对快速进展的患者的早期检测使得能够更密切地监测依从性和疗效，并可指导对标准疗法的强化 (7-9)。从药物开发的角度来看，能够从那些具有更低风险的患者中辨别出具有增大的疾病进展风险的患者，对于提高新型治疗方法的成功率和影响是至关重要的一步。此类患者分层方案将导致在理想的开发时间表内得到具有可接受的安全性的提高的功效。到目前为止，临床肾病学已经饱受缺乏那些鉴定不同的疾病动态变化的具体工具的困扰，这些工具不可避免地将帮助临床决策制定、促进新型治疗方法并且将创新引入到概念证明（PoC）性临床研究的设计中。
因此，在临床上迫切需要新型的风险评分、临床预测因子和/或生物标记物以在尽可能早的阶段鉴定出具有增加的CKD疾病进展风险的个体 (11) (12)。在一般人群或初级护理的患者中，对CKD中风险分层的需求特别大，因为大多数CKD患者是在这种背景下被初次鉴定出的，并且大部分从未被转诊到肾病专家。
发明简述
本公开提供了用于鉴定增加的慢性肾病（CKD）进展风险或用于监测慢性肾病疗法的生物标记物和方法。
本发明的一个方面提供了用于鉴定患有慢性肾病的主体为具有增加的疾病进展风险的方法，所述方法包括：a）检测所述主体的样品中一种、两种、三种、四种或五种生物标记物的量，所述生物标记物选自GDF-15、EGF、NT-proBNP、ApoH以及白蛋白与肌酸酐的比率（AUCR）；b）将所述一种、两种、三种、四种或五种生物标记物的量与所述一种、两种、三种、四种或五种生物标记物的参考量进行比较；以及c）如果样品中所述一种、两种、三种、四种或五种生物标记物的量大于所述一种、两种、三种、四种或五种生物标记物的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。
在一个实施方案中，所述方法包括：a）检测主体的样品中GDF-15的量；b）将所述GDF-15的量与GDF-15的参考量进行比较；以及c）如果样品中所述GDF-15的量大于GDF-15的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。在一个实施方案中，所述方法包括：a）检测主体的样品中EGF的量；b）将所述EGF的量与EGF的参考量进行比较；以及c）如果样品中所述EGF的量大于EGF的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。在一个实施方案中，所述方法包括：a）检测主体的样品中NT-proBNP的量；b）将所述NT-proBNP的量与NT-proBNP的参考量进行比较；以及c）如果样品中所述NT-proBNP的量大于NT-proBNP的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。在一个实施方案中，所述方法包括：a）检测主体的样品中ApoH的量；b）将所述ApoH的量与ApoH的参考量进行比较；以及c）如果样品中所述ApoH的量大于ApoH的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。在一个实施方案中，所述方法包括：a）检测主体的样品中AUCR的量；b）将所述AUCR的量与AUCR的参考量进行比较；以及c）如果样品中所述AUCR的量大于AUCR的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。
本发明的另一个方面提供了用于鉴定患有慢性肾病的主体为具有增加的疾病进展风险的方法，所述方法包括：a）检测所述主体的样品中ApoH和一种或多种另外的生物标记物的量，所述另外的生物标记物选自GDF-15、EGF、NT-proBNP以及白蛋白与肌酸酐的比率（AUCR）；b）将所述ApoH和一种或多种另外的生物标记物的量与ApoH和一种或多种另外的生物标记物的参考量进行比较；以及c）如果所述样品中ApoH的量和所述一种或多种另外的生物标记物的量大于所述ApoH和一种或多种另外的生物标记物的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。
在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为AUCR。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和EGF。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和NT-proBNP。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和AUCR。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和NT-proBNP。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和AUCR。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP和AUCR。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和AUCR。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15、NT-proBNP和AUCR。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、NT-proBNP和AUCR。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、GDF-15和AUCR。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、GDF-15和NT-proBNP。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、GDF-15、NT-proBNP和AUCR。
本发明的另一个方面提供了用于鉴定患有慢性肾病的主体为具有增加的疾病进展风险的方法，所述方法包括：a）检测所述主体的样品中白蛋白与肌酸酐的比率（AUCR）和一种或多种另外的生物标记物的量，所述另外的生物标记物选自GDF-15、EGF、NT-proBNP以及ApoH；b）将所述AUCR和一种或多种另外的生物标记物的量与AUCR和一种或多种另外的生物标记物的参考量进行比较；以及c）如果所述样品中AUCR的量和所述一种或多种另外的生物标记物的量大于所述AUCR和一种或多种另外的生物标记物的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。
在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和EGF。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和NT-proBNP。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和NT-proBNP。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15、NT-proBNP和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、NT-proBNP和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、GDF-15和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、GDF-15和NT-proBNP。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、GDF-15、NT-proBNP和ApoH。
本发明的另一个方面提供了用于鉴定患有慢性肾病的主体为具有增加的疾病进展风险的方法，所述方法包括：a）检测所述主体的样品中NT-proBNP和一种或多种另外的生物标记物的量，所述另外的生物标记物选自GDF-15、EGF、白蛋白与肌酸酐的比率（AUCR）以及ApoH；b）将所述NT-proBNP和一种或多种另外的生物标记物的量与NT-proBNP和一种或多种另外的生物标记物的参考量进行比较；以及c）如果所述样品中NT-proBNP的量和所述一种或多种另外的生物标记物的量大于所述NT-proBNP和一种或多种另外的生物标记物的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。
在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为AUCR。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和EGF。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和AUCR。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和AUCR。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为AUCR和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15、AUCR和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、AUCR和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、GDF-15和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、GDF-15和AUCR。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、GDF-15、AUCR和ApoH。
本发明的另一个方面提供了用于鉴定患有慢性肾病的主体为具有增加的疾病进展风险的方法，所述方法包括：a）检测所述主体的样品中GDF-15和一种或多种另外的生物标记物的量，所述另外的生物标记物选自NT-proBNP、EGF、白蛋白与肌酸酐的比率（AUCR）以及ApoH；b）将所述GDF-15和一种或多种另外的生物标记物的量与GDF-15和一种或多种另外的生物标记物的参考量进行比较；以及c）如果所述样品中GDF-15的量和所述一种或多种另外的生物标记物的量大于所述GDF-15和一种或多种另外的生物标记物的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。
在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为AUCR。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP和EGF。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP和AUCR。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和AUCR。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为AUCR和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP、AUCR和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、AUCR和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、NT-proBNP和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、NT-proBNP和AUCR。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、NT-proBNP、AUCR和ApoH。
本发明的另一个方面提供了用于鉴定患有慢性肾病的主体为具有增加的疾病进展风险的方法，所述方法包括：a）检测所述主体的样品中EGF和一种或多种另外的生物标记物的量，所述另外的生物标记物选自NT-proBNP、GDF-15、白蛋白与肌酸酐的比率（AUCR）以及ApoH；b）将所述EGF和一种或多种另外的生物标记物的量与EGF和一种或多种另外的生物标记物的参考量进行比较；以及c）如果所述样品中EGF的量和所述一种或多种另外的生物标记物的量大于所述EGF和一种或多种另外的生物标记物的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。
在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为AUCR。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP和GDF-15。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP和AUCR。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和AUCR。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为AUCR和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP、AUCR和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15、AUCR和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15、NT-proBNP和ApoH。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15、NT-proBNP和AUCR。在一个实施方案中，所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15、NT-proBNP、AUCR和ApoH。
在以上方面的某些实施方案中，所述检测包括使样品与检测试剂的组合体外接触，每一试剂对所述生物标记物之一具有特异性结合亲和力。在某些实施方案中，所述试剂为抗体或其片段。
在以上方面的某些实施方案中，样品为血清或尿液样品。
在以上方面的某些实施方案中，当样品中生物标记物的量大于参考量的中位数时，所述主体被鉴定为具有增加的疾病进展风险。在以上方面的某些实施方案中，当样品中生物标记物的量处于参考量的第四四分位数范围内时，所述主体被鉴定为具有增加的疾病进展风险。
在某些实施方案中，所述方法还包括如果所述主体被鉴定为具有增加的疾病进展风险，则推荐治疗慢性肾病的疗法的步骤。
在某些实施方案中，所述方法还包括如果所述主体被鉴定为具有增加的疾病进展风险，则向主体施用治疗慢性肾病的药剂的步骤。所述疗法可包括，例如，试验中新药的疗法。
本发明的另一个方面提供了适配于进行前述权利要求中任一项的方法的装置，其包括：a）分析单元，其包括特异性结合生物标记物的检测试剂的组合，所述分析单元适配于使来自主体的样品与检测试剂体外接触；b）评价单元，其包括具有数据库以及该数据库中的计算机实现的算法的计算装置，当所述计算装置执行所述计算机实现的算法时，该算法测定来自主体的样品中生物标记物的量，并将所述测定的生物标记物的量与生物标记物的参考量进行比较，并且如果在测定步骤中所测定的生物标记物的量大于生物标记物的参考量，则提供处于增加的疾病进展风险的诊断。在一个实施方案中，所述数据库还包含生物标记物的参考量。
本发明的另一个方面提供了适配于进行前述权利要求中任一项的方法的试剂盒，其包含针对生物标记物的检测试剂和用于进行所述方法的说明书。在一个实施方案中，所述试剂盒还包含针对生物标记物的检测试剂的组合。
附图简述
图1-2示出了每种生物标记物及其组合相对于CKD事件的时间(time to CKD event)的统计分析结果。
图3示出了表A，其提供了从C-PROBE研究组的患者所评价的CKD事件的列表。
图4示出了表B，其提供了从C-PROBE研究组的患者所评价的患者特性和汇总统计的列表。
图5示出了GDF-15的示例性氨基酸序列（SEQ ID NO: 1）。
图6示出了EGF的示例性氨基酸序列（SEQ ID NO: 2）。
图7示出了NT-proBNP的示例性氨基酸序列（SEQ ID NO: 3）。
图8示出了ApoH的示例性氨基酸序列（SEQ ID NO: 4）。
图9示出了白蛋白的示例性氨基酸序列（SEQ ID NO: 5）。
发明详述
定义
术语“慢性肾病”（CKD）指代如下定义的状况：持续数月、牵涉到健康的肾结构或功能异常，其可突然出现，并且要么消退，要么变成慢性的（慢性肾病评价与管理指南之临床实践指南（KDIGO 2012））。CKD是影响肾结构和功能的异质性疾病的通用术语，这类疾病具有各种各样的临床表现，部分与成因、严重程度和进展率有关（Kidney InternationalSupplements (2013) 3, vii）。
CKD的定义和鉴定由下列标准界定：
1. 对于处于更高的进展风险的个体，和/或其中测量结果将影响治疗决定
2. 认识到，GFR中的小幅波动是常见的，并且不必然反映进展。
3. 根据下列中的一项或多项（排名不分先后）来定义CKD进展：
a. GFR类别的下降（Z90 [G1]、60–89 [G2]、45–59 [G3a]、30–44 [G3b]、15–29 [G4]、o15 [G5] ml/min/1.73 m2）。将一定的eGFR下跌定义为GFR类别的下跌，其伴随着eGFR从基线下跌50%或以上或终末期肾病（ESRD，eGFR<15 ml/min/1.73 m2，肾脏替代疗法或死亡或以上参数的组合。
b. 将快速进展定义为eGFR持续下降，超过-3.3%/年。
c. 评估进展的置信度随着血清肌酸酐测量结果的数量以及随访持续时间的增加而提高。
这种损伤可以引起体内废物累积并导致其它健康问题，包括心血管疾病（CVD）、贫血和骨病。CKD通常是不可逆的进行性疾病，并且如果不进行治疗，随着时间推移可导致肾衰竭，也称为终末期肾病（ESRD）。
术语“GDF-15”指代生长分化因子-15，也称为MIC-1（巨噬细胞抑制细胞因子1），是转化生长因子β（TGF-β）细胞因子超家族的成员，以SEQ ID NO:1为例，示于图5中（SwissProt 登录号 NP_004855, Gene ID NCBI 9518）；WO99/06445、WO00/70051、WO2005/113585。“GDF-15”涵盖了具有SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的蛋白质以及GDF-15的变体、同源物及其同工型。此类变体、同源物和同工型与特定的GDF-15具有至少相同的基本生物学和免疫学特性。例如，如果它们可以通过本说明书中提及的相同的特定测定法（例如，通过使用特异性识别GDF-15多肽的多克隆或单克隆抗体的ELISA测定法）被检测到，则其共享相同的基本生物学和免疫学特性。示例性测定法在所附实施例中有述。上文所指的变体可以是等位基因变体或任何其它物种特异性的同源物、旁系同源物或直系同源物。此外，本文提及的变体包括特定的GDF-15多肽或上述类型的变体的片段，只要这些片段具有如上文所指的基本免疫学和生物学特性。此类片段可能是，例如，GDF-15多肽的降解产物。还包括了由于翻译后修饰（如磷酸化或十四烷基化）而有所不同的变体。
术语“EGF”指代肽生长因子，以SEQ ID NO: 2为例，示于图6中（Swiss Prot 登录号 NP_001954, Gene ID NCBI 1950）。“EGF”涵盖了具有SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的蛋白质及其变体、同源物和同工型。此类变体、同源物和同工型与特定的EGF具有至少相同的基本生物学和免疫学特性。例如，如果它们可以通过本说明书中提及的相同的特定测定法（例如，通过使用特异性识别EGF多肽的多克隆或单克隆抗体的ELISA测定法）被检测到，则其共享相同的基本生物学和免疫学特性。示例性测定法在所附实施例中有述。上文所指的变体可以是等位基因变体或任何其它物种特异性的同源物、旁系同源物或直系同源物。此外，本文提及的变体包括特定的EGF多肽或上述类型的变体的片段，只要这些片段具有如上文所指的基本免疫学和生物学特性。此类片段可能是，例如，EGF多肽的降解产物。还包括了由于翻译后修饰（如磷酸化或十四烷基化）而有所不同的变体。
术语“NT-proBNP”指代氨基末端proBNP，以SEQ ID NO: 3为例，示于图7中（SwissProt 登录号 NP_002512.1, Gene ID NCBI 4879），WO 02/089657、WO 02/083913、EP 0648 228。“NT-proBNP”涵盖了具有SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的蛋白质及其变体、同源物和同工型。此类变体、同源物和同工型与特定的NT-proBNP具有至少相同的基本生物学和免疫学特性。例如，如果它们可以通过本说明书中提及的相同的特定测定法（例如，通过使用特异性识别NT-proBNP多肽的多克隆或单克隆抗体的ELISA测定法）被检测到，则其共享相同的基本生物学和免疫学特性。示例性测定法在所附实施例中有述。上文所指的变体可以是等位基因变体或任何其它物种特异性的同源物、旁系同源物或直系同源物。此外，本文提及的变体包括特定的NT-proBNP多肽或上述类型的变体的片段，只要这些片段具有如上文所指的基本免疫学和生物学特性。此类片段可能是，例如，NT-proBNP多肽的降解产物。还包括了由于翻译后修饰（如磷酸化或十四烷基化）而有所不同的变体。
术语“ApoH”指代载脂蛋白H，以SEQ ID NO: 4为例，示于图8中（Swiss Prot 登录号 NP_000033, Gene ID NCBI 350）。“ApoH”涵盖了具有SEQ ID NO: 4的氨基酸序列的蛋白质及其变体、同源物和同工型。此类变体、同源物和同工型与特定的ApoH具有至少相同的基本生物学和免疫学特性。例如，如果它们可以通过本说明书中提及的相同的特定测定法（例如，通过使用特异性识别ApoH多肽的多克隆或单克隆抗体的ELISA测定法）被检测到，则其共享相同的基本生物学和免疫学特性。示例性测定法在所附实施例中有述。上文所指的变体可以是等位基因变体或任何其它物种特异性的同源物、旁系同源物或直系同源物。此外，本文提及的变体包括特定的ApoH多肽或上述类型的变体的片段，只要这些片段具有如上文所指的基本免疫学和生物学特性。此类片段可能是，例如，ApoH多肽的降解产物。还包括了由于翻译后修饰（如磷酸化或十四烷基化）而有所不同的变体。
术语“AUCR”指代样品中白蛋白与肌酸酐的比率。这一比率是已知的肾功能的量度（KDIGO 2012），白蛋白SEQ ID NO: 5，示于图9中（Swiss Prot 登录号 NP_000468；Gene IDNCBI 213）。“白蛋白”涵盖了具有SEQ ID NO: 5的氨基酸序列的蛋白质及其变体、同源物和同工型。此类变体、同源物和同工型与特定的白蛋白具有至少相同的基本生物学和免疫学特性。例如，如果它们可以通过本说明书中提及的相同的特定测定法（例如，通过使用特异性识别白蛋白多肽的多克隆或单克隆抗体的ELISA测定法）被检测到，则其共享相同的基本生物学和免疫学特性。示例性测定法在所附实施例中有述。上文所指的变体可以是等位基因变体或任何其它物种特异性的同源物、旁系同源物或直系同源物。此外，本文提及的变体包括特定的白蛋白多肽或上述类型的变体的片段，只要这些片段具有如上文所指的基本免疫学和生物学特性。此类片段可能是，例如，白蛋白多肽的降解产物。还包括了由于翻译后修饰（如磷酸化或十四烷基化）而有所不同的变体。
如本文中所用的术语“增加的疾病进展风险”意指，将待通过本公开的方法进行分析的主体划分到具有正常的（即，未升高的）疾病进展风险的人群的主体的组中或具有显著升高的风险的主体的组中。根据本公开所提及的增加的风险意指，在预定的预测窗口内主体的疾病进展风险相对于主体人群中的平均疾病进展风险显著升高。
如本文中所用的术语“诊断”或“鉴定”或“评估”意指，在患有慢性肾病的主体中预测疾病进展风险是否增加。如本领域技术人员将会理解的那样，通常不会期望此类预测针对100%的待诊断主体是正确的。然而，该术语要求对是否处于增加的疾病进展风险的预测针对主体的统计上显著的部分（例如群组研究中的一群）是正确的。一个部分是否是统计上显著的可以由本领域技术人员使用各种熟知的统计评价工具（例如，确定置信区间、确定p值、Student's t检验、Mann-Whitney检验等）而干脆地确定。在Dowdy 与 Wearden,Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983中有详述。实例置信区间为至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%。p值包括0.1、0.05、0.01、0.005或0.0001。
如本文中所用的短语“提供诊断/评估”指代，使用所生成的与患者样品中生物标记物的水平或存在相关的信息或数据来诊断/评估该患者的CKD疾病进展风险。所述信息或数据可以是任何形式，书面的、口头的或电子化的。在一些实施方案中，使用所生成的信息或数据包括交流、展示、报告、存储、发送、转移、提供、传输、分配或其组合。在一些实施方案中，交流、展示、报告、存储、发送、转移、提供、传输、分配或其组合是由计算装置、分析单元或其组合进行的。在一些另外的实施方案中，交流、展示、报告、存储、发送、转移、提供、传输、分配或其组合是由实验室或医疗专业人员进行的。在一些实施方案中，信息或数据包括生物标记物水平与参考水平的比较。在一些实施方案中，信息或数据包括样品中生物标记物存在与否的指示。在一些实施方案中，信息或数据包括患者被诊断/评估为具有增加的CKD疾病进展风险的指示。
如本文中所用的术语“主体”涉及动物，如哺乳动物（例如，人）。根据本公开的主体应当患有如本文中别处所述的慢性肾病。
术语“样品”指代体液样品、分离细胞样品或来自于组织或器官的样品。体液样品可以通过熟知的技术获得并且包括，血液、血浆、血清、尿液、淋巴液、痰液、腹水、支气管灌洗液或任何其它身体分泌物或其衍生物的样品。组织或器官样品可通过例如活检从任何组织或器官获得。分离细胞可通过分离技术（如离心或细胞分选）从体液或组织或器官获得。例如，细胞样品、组织样品或器官样品可从那些表达或产生生物标记物的细胞、组织或器官获得。样品可以是冷冻的、新鲜的、固定的（例如福尔马林固定的）、经过离心的和/或包埋的（例如石蜡包埋的）等。理所应当地，在评估样品中标记物的量之前，细胞样品可以经受多种熟知的采集后制备和保存技术（例如，核酸和/或蛋白质提取、固定、保存、冷冻、超滤、浓缩、蒸发、离心等）。同样，活检样品也可经受采集后制备和保存技术，例如，固定。
如本文中所用的术语“检测”生物标记物肽或多肽的量指代例如半定量或定量地测量所述量或浓度。测量可以直接或间接完成。直接测量涉及根据得自肽或多肽自身的信号测量该肽或多肽的量或浓度，并且所述信号的强度与样品中存在的该肽分子的数量直接相关。此类信号（在本文中有时称为强度信号）可例如通过测量肽或多肽的特定物理或化学特性的强度值而获得。间接测量包括测量得自二级组分（即并非肽或多肽本身的组分）或生物读出系统的信号，例如，可测量的细胞应答、配体、标记或酶促反应产物。
如本文中所用的术语“比较”指代将来自个体或患者的样品中生物标记物的水平与在本说明书中别处指定的该生物标记物的参考水平进行比较。应当理解，如本文中所用的比较通常指代对应的参数或值的比较，例如，当比较浓度与参考浓度或比较得自样品中的生物标记物的强度信号与得自参考样品的相同类型的强度信号时，将绝对量与绝对参考量进行比较。比较可以手动或计算机辅助进行。因此，比较可由（例如，本文中公开的系统的）计算装置进行。可以例如将在来自个体或患者的样品中测得或检测到的生物标记物水平的值与参考水平彼此进行比较，并且所述比较可以由执行针对该比较的算法的计算机程序自动进行。进行所述评价的计算机程序将以合适的输出格式提供所需的评估结果。对于计算机辅助的比较而言，可将所测定的量的值与对应合适参考的值进行比较，所述值由计算机程序存储在数据库中。计算机程序可进一步评价比较结果，即以合适的输出格式自动提供所需的评估结果。对于计算机辅助的比较而言，可将所测定的量的值与对应合适参考的值进行比较，所述值由计算机程序存储在数据库中。计算机程序可进一步评价比较结果，即以合适的输出格式自动提供所需的评估结果。
因此，如本文中所用的术语“参考量”指代允许评估患有CKD的主体是否具有增加的疾病进展风险的量。参考可以例如来源于患有CKD的主体的库或来自普通人群的主体的库。此外，参考量可规定阈值量或范围，从而根据参考的类型，所测定的量相对于该阈值的变化会指示增加的疾病进展风险或正常风险。或者，如果使用了合适的参考量，那么基本上相同的量也可指示增加的疾病进展风险或正常风险。适用于单独主体的参考量可根据各种生理参数（如年龄、性别或亚群）以及根据用于测定本文中所指的多肽或肽的方法而有差别。合适的参考量可从待与测试样品一起分析（即同时或依序地）的参考样品测定。
上文所指的术语“监测”涉及记录疾病（即慢性肾病）状态。监测包括将由在第一时间点采集的第一样品中生物标记物的量所反映的疾病状态与由在第二时间点采集的第二样品中生物标记物的量所反映的疾病状态进行比较。如果生物标记物的量增加，则疾病状态可能变得更糟，因而将会出现疾病的进展，反之，如果生物标记物减少，则会出现改善，因而疾病状态好转。如果未观察到变化，即在第一和第二样品中测得基本上相同的量，则疾病状态未改变，因而疾病未发展。如果确定第一和第二样品之间在量上没有统计上显著的变化，则确定为基本上相同的量。量是否基本上相同可以由技术人员毫不费力地确定。如果量相差至少约5%、至少约10%、至少约15%、至少约20%、至少约25%或至少约50%，则变化（即增加或减少）是统计上显著的。同样，应当理解，上述方法使得能够监测待研究主体的统计上显著的部分而不必监测所有经分析的主体。
术语“结合剂”指代包含结合部分的分子，所述结合部分特异性结合对应的靶生物标记物分子。“结合剂”的实例为核酸探针、核酸引物、DNA分子、RNA分子、适体、抗体、抗体片段、肽、肽核酸（PNA）或化合物。
术语“适体”指代寡核苷酸，包括RNA、DNA以及RNA/DNA分子或肽分子，其具有所需生物活性，具体地讲，结合对应的靶分子。
术语“探针”或“核酸探针”指代能够与靶核酸分子（例如，基因组靶核酸分子）杂交并且当杂交至靶标时，能够被直接或间接检测到的核酸分子。因此，探针允许对靶核酸分子进行检测，并且在一些实例中，进行定量。在具体的实例中，探针包括多个核酸分子，其包含源自靶核酸分子的结合区并因而能够特异性杂交至该靶核酸分子的至少一部分。探针可被称为“标记的核酸探针”，表明该探针直接或间接偶联至可检测的部分或“标记”，其使得该探针可被检测到。
术语“引物”或“核酸引物”指代通常具有游离的3’-OH基团的、短的单链多核苷酸，其通过与靶序列杂交而结合可能存在于目标样品中的靶分子，并由此促进与该靶标互补的多核苷酸的聚合。
术语“特异性结合”或“特异性地结合”指代结合反应，其中结合对分子在其不会显著地结合其它分子的条件下表现出彼此结合。
术语“特异性结合”或“特异性地结合”，当涉及蛋白质或肽作为结合剂时，指代结合反应，其中结合剂以至少10-7 M的亲和力结合对应的靶分子。术语“特异性结合”或“特异性地结合”优选地指代针对其靶分子的至少10-8 M或甚至更优选地至少10-9 M的亲和力。术语“特异性的”或“特异性地”用于表明存在于样品中的其它分子不会显著地结合对靶分子有特异性的结合剂。优选地，与除靶分子以外的分子结合的水平所导致的结合亲和力为与靶分子亲和力的仅10%或更低、更优选地仅5%或更低。
术语“特异性结合”或“特异性地结合”，当涉及核酸作为结合剂时，指代杂交反应，其中结合剂或探针含有与目标靶序列完全或基本上互补的杂交区。在足够严格的杂交条件下使用结合剂或探针进行的杂交测定使得能够对特定的靶序列进行选择性检测。杂交区的长度优选为从约10至约35个核苷酸、更优选从约15至约35个核苷酸。使用本领域熟知的、影响杂交稳定性的、经修饰的碱基或碱基类似物，可以使得能够使用具有相当的稳定性的更短或更长的探针。结合剂或探针可以整个由杂交区组成或可以包含额外的特征，所述额外的特征使得能够检测或固定探针，但不会显著改变杂交区的杂交特征。
术语“特异性结合”或“特异性地结合”，当涉及核酸适体作为结合剂时，指代结合反应，其中核酸适体以在低nM至pM范围内的亲和力结合对应的靶分子。
本文中的术语“抗体”采用的是最广泛的意义并且涵盖了各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体（例如，双特异性抗体）和抗体片段，只要其展示所需的抗原结合活性。
如本文中所用的术语“量”涵盖了多肽或肽的绝对量、所述多肽或肽的相对量或浓度以及与之相关的或可以由之衍生出的任何值或参数。此类值或参数包括通过直接测量而得自所述肽的所有特定物理或化学性质的强度信号值，例如，质谱或NMR谱中的强度值。此外，还涵盖了通过在本说明书的别处详述的间接测量而获得的所有值或参数，例如，从生物读出系统测得的响应于所述肽的应答水平或得自特异性结合的配体的强度信号。应当理解，与上述量或参数相关的值也可以通过一切标准的数学运算获得。
如本文中所用的术语“装置”涉及包括上述单元的系统，所述单元操作性地彼此连接以允许根据本公开的方法进行诊断或监测。在本文别处公开了可用于分析单元的实例检测试剂。分析单元可包含以固体支持物上的固定形式的所述检测试剂，其将与包含生物标记物（其量待测定）的样品接触。此外，分析单元也可包括检测器，其测定特异性结合至生物标记物的检测试剂的量。测定的量可以被传输至评价单元。所述评价单元包括数据处理元件（如计算机），其具有用于在测定的量与合适的参考之间进行比较的实现的算法。
如本文中所用的术语“试剂盒”指代上述组件的集合，这些组件可以分开提供或在单个容器中提供。该容器还包括用于实施本公开的方法的说明书。这些说明书可以是手册的形式或可以由计算机程序代码提供，当其在计算机或数据处理装置上实现时，所述计算机程序代码能够进行本公开的方法中所指的比较并由此建立起诊断。计算机程序代码可以在数据存储介质或装置如光学存储介质（例如，光盘）上提供，或直接在计算机或数据处理装置上提供。
示例性实施方案
临床风险预测模型结合了多个变量以预测个体患者的不良事件的风险，并且应当能够预测CKD患者的肾脏终点以及全死因死亡率和心血管疾病。蛋白尿、高血压、糖尿病、人种和族裔是从CKD进展至ESRD的强风险因子 (13)。本文所述的生物标记物方法反映了涉及CKD发病机制的各种途径，并且提供了疾病进程的替代表示以及对长期结果的预测。此方法的使用和实施可用于鉴定出将从新型疗法中获益最多的CKD人群的部分。本文所述的生物标记物和方法的临床使用可用于鉴定出哪些患者可能需要更积极的治疗并且在具有最低的进展风险的患者中避免额外的治疗选项或剂量递增。本公开的实施方案还涵盖了用于实施上述方法的诊断装置和试剂盒。
本公开的一个方面涉及用于诊断患有慢性肾病（CKD）的主体是否处于增加的疾病进展风险的方法。在一个实施方案中，所述方法包括检测主体样品中一种或多种生物标记物（GDF-15、EGF、NT-proBNP、ApoH以及白蛋白与肌酸酐的比率（AUCR））的量，并将所述量与参考进行比较。如果样品中一种、两种、三种、四种或全部五种生物标记物的量大于所述一种、两种、三种、四种或五种生物标记物的参考量，则该主体被鉴定为具有增加的疾病进展风险。
本公开的另一个方面涉及用于监测患有慢性肾病（CKD）的主体在CKD疗程期间是否处于增加的疾病进展风险的方法。在一个实施方案中，所述方法包括检测主体样品中一种或多种生物标记物（GDF-15、EGF、NT-proBNP、ApoH以及白蛋白与肌酸酐的比率（AUCR））的量，并将所述量与参考进行比较。如果样品中一种、两种、三种、四种或全部五种生物标记物的量大于所述一种、两种、三种、四种或五种生物标记物的参考量，则该主体被鉴定为具有增加的疾病进展风险。在一个实施方案中，所述参考来自患有CKD的主体的样品。在另一个实施方案中，所述参考是在开始CKD治疗前取自主体的样品或在治疗过程中的时间点取自主体的样品。可根据此方法的结果来更改治疗。例如，如果与参考相比，主体表现出生物标记物的量减少，则可继续所述治疗。相反地，如果与参考相比，主体表现出生物标记物的量增加，则可用替代治疗替换所述治疗。
本发明的另一个方面涉及适配于进行以上提供的方法的装置，并且在本文中提供了这种装置。所述装置的示例性实施方案包括：a）分析单元，其包含特异性结合本发明的生物标记物的检测试剂，所述分析单元适配于使来自主体的样品的一部分与所述检测试剂体外接触；b）评价单元，其包括具有数据库以及该数据库中的计算机实现的算法的计算装置，当所述计算装置执行所述计算机实现的算法时，该算法测定来自主体的样品中生物标记物的量，并将所述测定的生物标记物的量与生物标记物的参考量进行比较，并且如果在所述测定步骤中所测定的生物标记物的量大于生物标记物的参考量，则提供处于增加的疾病进展风险的诊断。根据一些实施方案，所述数据库还包含生物标记物的参考量。
本发明的另一个方面提供了适配于进行以上公开的本公开的方法的试剂盒，其包含针对生物标记物的检测试剂以及用于进行所述方法的说明书。在一个实施方案中，所述试剂盒用于诊断患有慢性肾病（CKD）的主体是否处于增加的疾病进展风险。
在任何以上方面和方法中，所述一种生物标记物或多种生物标记物选自GDF-15、EGF、NT-proBNP、ApoH以及白蛋白与肌酸酐的比率（AUCR）。在所述方面和方法的一个实施方案中，一种、两种、三种、四种或五种生物标记物选自GDF-15、EGF、NT-proBNP、ApoH和AUCR。在某些实施方案中，特别设想了下列组合：
在一个实施方案中，在测试样品中所测定的至少一种、至少两种、至少三种、至少四种或全部五种生物标记物的量相比所述生物标记物的参考量增加，表明主体具有增加的疾病进展风险。
在一个实施方案中，在测试样品中所测定的全部生物标记物的量相比所述生物标记物的参考量增加，表明主体具有增加的疾病进展风险。
在一个实施方案中，如果在测试样品中所测定的至少一种、至少两种、至少三种、至少四种或全部五种生物标记物的量大于参考量，则该主体被鉴定为具有增加的疾病进展风险。在一个实施方案中，参考量是源自患有CKD的患者群组的中位数的量。
在一个实施方案中，如果在测试样品中所测定的至少一种、至少两种、至少三种、至少四种或全部五种生物标记物的量处于或大于第二、第三或第四四分位数（基于源自患有CKD的患者群组的四分位数），则该主体被鉴定为具有增加的疾病进展风险。在一个实施方案中，参考量处于第四四分位数（基于源自患有CKD的患者群组的四分位数）中。
检测生物标记物的方法
可使用本领域众所周知的方法检测生物标记物（包括蛋白质或核酸）。检测方法通常涵盖了对样品中生物标记物水平进行定量（定量方法）或确定样品中是否存在生物标记物（定性方法）的方法。技术人员众所周知下列方法中的哪些适合用于定性和/或用于定量检测生物标记物。可以例如，针对蛋白质，使用Western印迹和免疫测定法（如ELISA、RIA、基于荧光的免疫测定法）以及针对目标遗传生物标记物的mRNA或DNA，使用Northern印迹、斑点印迹、聚合酶链式反应（PCR）分析、阵列杂交、RNase保护测定法或使用市售的DNA SNP芯片微阵列（包括DNA微阵列快照(microarray snapshots)），而便利地测定样品。另外的合适的检测生物标记物的方法包括测量肽或多肽特有的物理或化学性质（如其精确的分子质量或NMR谱）。所述方法包括，例如，生物传感器、与免疫测定耦联的光学装置、生物芯片、分析装置（如质谱仪、NMR分析仪或层析装置）。方法还包括：基于微量板ELISA的方法、全自动或机器化免疫测定法（例如在ElecsysTM分析仪上可用）、CBA（酶促钴结合测定法，例如在Roche-HitachiTM分析仪上可用）和乳胶凝集测定法（例如在Roche-HitachiTM分析仪上可用）。
对于检测生物标记物蛋白质而言，广泛的使用此类测定形式的免疫测定技术是可用的，参见，例如，美国专利号4,016,043、4,424,279和4,018,653。这些既包括非竞争型的单位点和双位点或“夹心”测定法，也包括传统的竞争性结合测定中的此类测定法。这些测定法还包括标记抗体直接结合至靶生物标记物。
夹心测定法是最有用和最常用的免疫测定法之一。
用于测量电化学发光现象的方法是熟知的。此类方法利用特殊金属络合物的能力，通过氧化达到激发态，它们从其衰减至基态，发射电化学发光。综述参见Richter,M.M., Chem.Rev. 104 (2004) 3003-3036。
生物标记物还可以通过众所周知的方法来检测，这些方法包括磁共振波谱（NMR波谱）、气相层析-质谱法（GC-MS）、液相层析-质谱法（LC-MS）、高效和超效HPLC HPLC (Highand ultra-HPLC HPLC)（如反相HPLC，例如，具有双UV波长检测的离子配对HPLC）、具有激光诱导的荧光检测的毛细管电泳、阴离子交换层析法和荧光检测、薄层层析法。
根据本公开，检测生物标记物肽或多肽的量可以通过所有已知的用于测定样品中肽的量的方法来实现。此类方法的实例包括免疫测定装置和方法，其可以以各种夹心、竞争或其它测定形式来利用标记分子。这些测定法将产生信号以指示肽或多肽的存在与否。此外，信号强度可以与样品中存在的多肽的量直接或间接相关（例如，成反比例）。另外的合适的方法包括测量肽或多肽特有的物理或化学性质（如其精确的分子质量或NMR谱）。这些方法可包括生物传感器、与免疫测定耦联的光学装置、生物芯片、分析装置（如质谱仪、NMR分析仪或层析装置）。方法还包括：基于微量板ELISA的方法、全自动或机器化免疫测定法（例如在Elecsys.TM.分析仪上可用）、CBA（酶促钴结合测定法，例如在Roche-Hitachi.TM.分析仪上可用）和乳胶凝集测定法（例如在Roche-Hitachi.TM.分析仪上可用）。
根据本公开，测定生物标记物肽或多肽的量可包括步骤：（a）使能够诱发细胞应答的细胞与所述肽或多肽接触足够长的时间，所述细胞应答的强度指示了所述肽或多肽的量，（b）测量所述细胞应答。为了测量细胞应答，可将样品或经过处理的样品加入细胞培养中并测量内部或外部细胞应答。细胞应答可包括报告基因的可测量表达或物质（例如肽、多肽或小分子）的分泌。所述表达或物质将会生成与所述肽或多肽的量相关的强度信号。
检测生物标记物肽或多肽的量还包括测量可得自样品中所述肽或多肽的特定强度信号的步骤。如上所述，此类信号可能是在对于所述肽或多肽特定的质谱或NMR谱中观测到的在对于所述肽或多肽特定的m/z变量下观测到的信号强度。
检测生物标记物肽或多肽的量可包括步骤：（a）使所述肽与特定配体接触，（b）（任选地）移除未结合的配体，（c）测量结合的配体的量。结合的配体将生成强度信号。根据本公开的结合既包括共价结合也包括非共价结合。根据本公开的配体可以是结合至本文所述的肽或多肽的任何化合物，例如，肽、多肽、核酸或小分子。示例性配体包括抗体、核酸、肽或多肽（如所述肽或多肽及其片段的受体或结合配偶体，其包含针对所述肽的结合域）以及适体（例如，核酸或肽适体）。制备此类配体的方法是本领域熟知的。例如，合适的抗体或适体的鉴定和生产也由商业供应商提供。本领域技术人员熟悉开发具有更高亲和力或特异性的此类配体的衍生物的方法。例如，可以向核酸、肽或多肽中引入随机突变。然后可以根据本领域已知的筛选程序（例如噬菌体展示）测试这些衍生物的结合。本文所指的抗体既包括多克隆抗体也包括单克隆抗体，还包括其片段，如能够结合抗原或半抗原的Fv、Fab和F(ab)2 (F(ab).sub.2)片段。
本公开还包括单链抗体和人源化杂交抗体（其中展示所需的抗原特异性的非人供体抗体的氨基酸序列与人类受体抗体的序列结合）。该供体序列将通常包含至少该供体的抗原结合氨基酸残基，但也可包含该供体抗体的其它结构上和/或功能上相关的氨基酸残基。此类杂交物可通过本领域熟知的若干方法制备。配体或试剂特异性地结合肽或多肽。根据本公开的特异性结合意指配体或试剂应当基本上不结合存在于待分析样品中的另一种肽、多肽或物质（与之“交叉反应”）。相比任何其它相关的肽或多肽，被特异性结合的肽或多肽应当以高于至少3倍，并且在一些实施方案中高于至少10倍或甚至高于至少50倍的亲和力被结合。如果非特异性结合依然可以被明确地区分和测量（例如根据其在Western印迹上的大小或通过其在样品中相对更高的丰度），则其是可以容许的。配体的结合可以通过本领域中任何已知的方法测量。所述方法可以是半定量或定量的。合适的方法在下文中有述。
首先，配体的结合可以直接测量，例如通过NMR或表面等离子体共振。其次，如果配体还充当了目标肽或多肽的酶活性的底物，则可测量酶促反应产物（例如可以通过测量例如Western印迹上经裂解底物的量来测量蛋白酶的量）。或者，配体本身可能表现出酶的性质并且“配体/肽或多肽”复合物或由肽或多肽分别结合的配体可以与合适的底物接触而使得能够通过生成强度信号来检测。为了测量酶促反应产物，底物的量可以是饱和的。还可以在反应前用可检测标记对底物进行标记。例如，使样品与底物接触足够长的时间。足够长的时间指代对于产生可检测的、并且在一些实施方案中可测量的产物的量所必需的时间。可以测量给定（例如可检测的）量的产物出现所必需的时间，来代替测量产物的量。第三，配体可与标记共价地或非共价地偶联，使得能够检测和测量该配体。可通过直接或间接的方法完成标记。直接标记涉及将标记直接（共价地或非共价地）偶联至配体。间接标记涉及将二级配体结合（共价地或非共价地）至该一级配体。该二级配体应当特异性地结合该一级配体。所述二级配体可与合适的标记偶联，和/或作为与该二级配体结合的三级配体的靶标（受体）。二级、三级或甚至更高级配体的使用常用于增加信号。合适的二级和更高级配体可包括抗体、二级抗体以及熟知的链霉亲和素-生物素系统（Vector Laboratories, Inc.）。
还可以用本领域已知的一种或多种标签来“标签化”配体或底物。此类标签可随后作为更高级配体的靶标。合适的标签包括生物素、地高辛、组氨酸标签、谷胱甘肽-S-转移酶、FLAG、GFP、myc标签、甲型流感病毒血凝素（HA）、麦芽糖结合蛋白等。就肽或多肽而言，标签可以位于N末端和/或C末端。合适的标记是可通过适当的检测方法检测到的任何标记。典型的标记包括金颗粒、乳胶小珠、9,10-二氢吖啶酯(acridan ester)、鲁米诺、钌、具有酶活性的标记、放射性标记、磁性标记（“例如磁珠”，包括顺磁性和超顺磁性标记）和荧光标记。具有酶活性的标记包括例如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、萤光素酶及其衍生物。合适的检测底物包括二氨基联苯胺（DAB）、3,3'-5,5'-四甲基联苯胺、NBT-BCIP（氯化4-硝基四氮唑蓝和5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸盐，可作为现成的储备溶液得自RocheDiagnostics）、CDP-Star.TM.（Amersham Biosciences）、ECF.TM.（AmershamBiosciences）。合适的酶-底物组合可导致有颜色的反应产物、荧光或化学发光，其可根据本领域已知的方法测量（例如使用光敏胶片或合适的照相系统）。至于测量酶促反应，以上给出的标准类似地适用。典型的荧光标记包括荧光蛋白（如GFP及其衍生物）、Cy3、Cy5、得克萨斯红、荧光素和Alexa染料（例如Alexa 568）。另外的荧光标记可得自例如MolecularProbes（Oregon）。还设想了量子点作为荧光标记的用途。典型的放射性标记包括35S(.sup.35S)、125I (.sup.125I)、32P (.sup.32P)、33P (.sup.33P)等。放射性标记可以通过任何已知且适当的方法（例如光敏胶片或磷相仪(phosphor imager)）检测。根据本公开的合适的测量方法还包括沉淀（特别是免疫沉淀）、电化学发光（电生成的化学发光）、RIA（放射性免疫测定）、ELISA（酶联免疫吸附测定）、夹心酶免疫测试、电化学发光夹心免疫测定（ECLIA）、解离增强镧系元素荧光免疫测定（DELFIA）、闪烁迫近分析法（SPA）、浊度法（turbidimetry）、比浊法（nephelometry）、乳胶增强浊度法或比浊法、或固相免疫测试。本领域已知的另外的方法（如凝胶电泳、2D凝胶电泳、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、Western印迹以及质谱法）可单独使用或与标记或如上所述的其它检测方法结合使用。
根据本公开的实施方案，肽或多肽的量可以如下检测：（A）使包含如上所述的肽或多肽的配体的固体支持物与包含所述肽或多肽的样品接触并（b）测量结合至所述支持物的肽或多肽的量。配体可选自核酸、肽、多肽、抗体和适体。在一些实施方案中，配体以被固定的形式存在于固体支持物上。制造固体支持物的材料是本领域熟知的并且包括，尤其是，市售的柱材料、聚苯乙烯小珠、乳胶小珠、磁珠、胶体金属颗粒、玻璃和/或硅片以及表面、硝化纤维带、膜、片材、duracytes、反应盘的孔和壁、塑料管等。配体或试剂可结合至许多不同的载体。熟知的载体的实例包括玻璃、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、聚碳酸酯、葡聚糖、尼龙、直链淀粉、天然及改性的纤维素、聚丙烯酰胺、琼脂糖和磁铁。对于本公开的目的而言，载体的性质可以是可溶的或不可溶的。合适的用于使所述配体定位/固定的方法是熟知的并且包括但不限于离子相互作用、疏水相互作用、共价相互作用等。还设想了使用“悬浮阵列”作为根据本公开的阵列（Nolan 2002, Trends Biotechnol.20(1):9-12）。在此类悬浮阵列中，载体，例如微珠或微球，存在于悬浮液中。阵列由不同的、可能经过标记的、携带不同配体的微珠或微球组成。生产此类阵列例如基于固相化学和光不稳定保护基团的方法是众所周知的（美国专利号5,744,305）。
参考量
可以针对主体群组（即已知患有CKD的主体），通过运用标准的统计方法，根据给定生物 标记物的平均值或均值计算参考量。在一个实施方案中，参考是在患有CKD的主体群组中使 用多变量比例风险（Cox）回归分析而测定的（Cox DR.Regression models and life tables.J R Stat Soc (B).1972; 34(series B):187–220）。可用于此类分析的技术和测 定法在其引用的实施例和附图中有述。
在患者群组中所测得的生物标记物的中位数值也可用作基准以用于确立参考水平。
在某些实施方案中，本文中的术语“参考水平”指代预定值。在此上下文中，“水平”涵盖了绝对量、相对量或浓度以及与之相关的或可以由之衍生出的任何值或参数。正如技术人员将认识到的，参考水平是预定的并且被设定为满足常规要求（在例如特异性和/或灵敏度方面）。这些要求可以在例如不同的监管机构之间存在差异。例如，可能必须将测定法的灵敏度或特异性分别设定为某些限度，例如分别为80%、90%、95%或98%。这些要求还可根据正的或负的预测值来规定。然而，根据本发明所给出的教导，技术人员将总有可能达到符合那些要求的参考水平。在一个实施方案中，参考水平是在来自健康个体的参考样品中测定的。在一个实施方案中，参考水平已经在来自患者所属的疾病实体的参考样品中被预先测定。在某些实施方案中，参考水平可以例如被设定为所研究的疾病实体中的值的总体分布的25%至75%之间的任何百分比。在其它的实施方案中，参考水平可以例如被设定为由来自所研究的疾病实体的参考样品中的值的总体分布所确定的中位数、三分位数或四分位数。
在一个实施方案中，参考水平被设定为由来自所研究的疾病实体中的值的总体分布所确定的中位数值。参考水平可根据各种生理参数（如年龄、性别或亚群）以及根据用于测定本文中所指的生物标记物Y的方法而有差别。在一个实施方案中，参考样品来自与来自经受了本发明的方法的个体或患者的样品基本上相同类型的细胞、组织、器官或体液来源，例如如果根据本发明，血液被用作样品以测定个体中生物标记物Y的水平，则参考水平也在血液或其部分中测定。
在某些实施方案中，术语“处于参考水平”指代来自个体或患者的样品中生物标记物的水平与参考水平基本相同，或指代所述水平与参考水平相差至多1%、至多2%、至多3%、至多4%、至多5%。
在某些实施方案中，术语“大于参考水平”指代来自个体或患者的样品中生物标记物的水平高于参考水平，或指代由本文所述的方法测定，相比参考水平，总体升高了5%、10%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、100%或更高。在某些实施方案中，术语升高指代来自个体或患者的样品中生物标记物的水平升高，其中相比参考水平（例如从参考样品中预先测定的），升高至少约1.5、1.75、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、60、70、75、80、90或100倍。
在某些实施方案中，本文中的术语“降低”或“低于”指代来自个体或患者的样品中生物标记物的水平低于参考水平，或指代由本文所述的方法测定，相比参考水平，总体降低了5%、10%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或更高。在某些实施方案中，术语来自个体或患者的样品中生物标记物的水平降低，其中所述降低的水平为参考水平（例如从参考样品中预先测定的）的至多约0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.05或0.01倍，或更低。
治疗方法
本发明的一些方法还包括向具有增加的疾病进展风险的主体施用用于治疗慢性肾病的药剂或药物组合物。此类药剂包括例如血管紧张素转化酶抑制剂（ACEi）类或血管紧张素受体阻断剂（ARBs）类的药剂。另外的药剂包括正在与监管机构（如FDA或EMA）经历临床试验研究的那些药剂。可调整剂量方案以提供最佳的所需响应（例如，治疗反应）。例如，可施用一个剂量，可随时间推移施用若干个分剂量或可根据治疗情况的急切需要所指示按比例地减少或增加剂量。
具备本领域普通技术水平的医生可以容易地确定并开具所需药物组合物的有效量。给定剂量或治疗方案的拮抗剂的有效性可以例如通过使用标准（方法）评估患者的体征和症状来确定。
在又另一个方面，本发明提供了，在鉴定步骤之后，确定是否向诊断为患有CKD的主体继续施用药剂或药物组合物的方法，所述方法包括通过标准技术（如GFR）测量CKD疾病的当前状态。
实施例
样品采集
患者群组说明
以下研究中用到的患者和样品来自NIH资助的George M. O'Brien Renal Center（C-PROBE）研究内的临床表型分型资源和生物银行（Clinical Phenotyping Resource andBiobank）研究核心，其在clinicaltrials.gov上标示为NCT01016613。
C-Probe是一项观测型时间前瞻性、多中心、主动报名的研究，其中已经同时记录了221名患者的临床和人口统计参数、临床化学分析以及纵向的定期医疗随访。
此群组的393名患者的临床和生物标记物数据是可用的。221名患者的测量结果数据和结果发生的时间是可用的。根据表A（图3），基于现有的结果类别定义CKD事件。此群组的患者特性和汇总统计见表B（图4）。
测定患者样品以评价若干种生物标记物的实用性，从而有助于向诊断为患有CKD的患者分配增加的CKD进展可能性以及增加的结果发生率。
得自每名患者的样品经过免疫测定法分析以测定每种生物标记物的水平。免疫测定法以夹心测定形式进行或，对于NT-proBNP而言，使用Elecsys® proBNP平台（Elecsys20.10 免疫分析仪）进行。
测定
使用商购的酶联免疫吸附测定法试剂盒，根据制造商的方案，一式两份测量尿液样品中ApoH（目录号 ab108814, Abcam, Cambridge, United Kingdom）和EGF（目录号 DEG00,R&D Systems, Minneapolis, MN, U.S.A.）的浓度。将尿液样品分别稀释16倍和150倍。确定定量下限并分别设为0.96 pg/ml和4.5 pg/ml。
使用商购的酶联免疫吸附测定法试剂盒，根据制造商的方案，一式两份测量EDTA-血浆样品中GDF-15（目录号 DGD150, R&D Systems, Minneapolis, MN, U.S.A.）的浓度。将血浆样品稀释10倍。确定定量下限并设为93.8 pg/ml。
使用商购的CE认证的测试试剂盒，按照制造商的说明，分别在尿液中和EDTA-血浆中测量白蛋白浓度（目录号 11970569216, Roche Diagnostics, Mannheim, Germany）和NT-proBNP（目录号 04842464190, Roche Diagnostics, Mannheim, Germany）。
评价了以下特性：
动态浓度范围；定量下限和上限；基质效应；精确度；准确性；稳定性；选择性和特异性；稀释并行性；以及干扰剂。
统计分析
时间事件分析
通过多变量比例风险（Cox）回归进行五种生物标记物GDF-15、EGF、NT-proBNP、ApoH以及白蛋白与肌酸酐的比率（AUCR）中的每一种及其组合与CKD事件风险的关联。对定量的协变量进行精简和缩放。在可用的临床参数（年龄、性别和基线eGFR水平，以下称为基础模型）之上添加每种生物标记物。对所有可能的生物标记物组合（在基础模型之上）进行拟合并比较其各自的预测模型。各个模型的汇总统计示于图1-2中。（拟合优度信息准则）AIC（Akaike信息准则）和BIC（贝叶斯信息准则）是对一组数据的统计模型质量的两种量度，其代表了当使用给定模型来代表数据时，丢失信息的量。因此，值越小越好。其应对的是模型的拟合优度与复杂度的权衡。BIC是调整了模型中参数数量的版本的AIC；因此BIC对（具有更多数量的预测因子的）复杂模型有惩罚。
本说明书中所引用的所有参考文献均关于其整个公开内容和在本说明书中具体提到的公开内容均通过引用并入本文。
虽然本公开已被描述为具有示例性设计，但本公开可以在本公开的精神和范围内进行进一步修改。因此，本申请旨在覆盖本公开的使用其一般性原理的任何变化、用途或改变。另外，本申请还旨在覆盖偏离本公开但仍归属于本公开所属领域中已知或习惯实践的那些内容。
参考文献
。
序列表
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The Regents of the University of Michigan
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Thr Leu Arg Ala Pro Arg Ser Pro Lys Met Val Gln Gly Ser Gly Cys
100 105 110
Phe Gly Arg Lys Met Asp Arg Ile Ser Ser Ser Ser Gly Leu Gly Cys
115 120 125
Lys Val Leu Arg Arg His
130
<210> 4
<211> 345
<212> PRT
<213> 智人
<400> 4
Met Ile Ser Pro Val Leu Ile Leu Phe Ser Ser Phe Leu Cys His Val
1 5 10 15
Ala Ile Ala Gly Arg Thr Cys Pro Lys Pro Asp Asp Leu Pro Phe Ser
20 25 30
Thr Val Val Pro Leu Lys Thr Phe Tyr Glu Pro Gly Glu Glu Ile Thr
35 40 45
Tyr Ser Cys Lys Pro Gly Tyr Val Ser Arg Gly Gly Met Arg Lys Phe
50 55 60
Ile Cys Pro Leu Thr Gly Leu Trp Pro Ile Asn Thr Leu Lys Cys Thr
65 70 75 80
Pro Arg Val Cys Pro Phe Ala Gly Ile Leu Glu Asn Gly Ala Val Arg
85 90 95
Tyr Thr Thr Phe Glu Tyr Pro Asn Thr Ile Ser Phe Ser Cys Asn Thr
100 105 110
Gly Phe Tyr Leu Asn Gly Ala Asp Ser Ala Lys Cys Thr Glu Glu Gly
115 120 125
Lys Trp Ser Pro Glu Leu Pro Val Cys Ala Pro Ile Ile Cys Pro Pro
130 135 140
Pro Ser Ile Pro Thr Phe Ala Thr Leu Arg Val Tyr Lys Pro Ser Ala
145 150 155 160
Gly Asn Asn Ser Leu Tyr Arg Asp Thr Ala Val Phe Glu Cys Leu Pro
165 170 175
Gln His Ala Met Phe Gly Asn Asp Thr Ile Thr Cys Thr Thr His Gly
180 185 190
Asn Trp Thr Lys Leu Pro Glu Cys Arg Glu Val Lys Cys Pro Phe Pro
195 200 205
Ser Arg Pro Asp Asn Gly Phe Val Asn Tyr Pro Ala Lys Pro Thr Leu
210 215 220
Tyr Tyr Lys Asp Lys Ala Thr Phe Gly Cys His Asp Gly Tyr Ser Leu
225 230 235 240
Asp Gly Pro Glu Glu Ile Glu Cys Thr Lys Leu Gly Asn Trp Ser Ala
245 250 255
Met Pro Ser Cys Lys Ala Ser Cys Lys Val Pro Val Lys Lys Ala Thr
260 265 270
Val Val Tyr Gln Gly Glu Arg Val Lys Ile Gln Glu Lys Phe Lys Asn
275 280 285
Gly Met Leu His Gly Asp Lys Val Ser Phe Phe Cys Lys Asn Lys Glu
290 295 300
Lys Lys Cys Ser Tyr Thr Glu Asp Ala Gln Cys Ile Asp Gly Thr Ile
305 310 315 320
Glu Val Pro Lys Cys Phe Lys Glu His Ser Ser Leu Ala Phe Trp Lys
325 330 335
Thr Asp Ala Ser Asp Val Lys Pro Cys
340 345
<210> 5
<211> 609
<212> PRT
<213> 智人
<400> 5
Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala
1 5 10 15
Tyr Ser Arg Gly Val Phe Arg Arg Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala
20 25 30
His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu
35 40 45
Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val
50 55 60
Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp
65 70 75 80
Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp
85 90 95
Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala
100 105 110
Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln
115 120 125
His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val
130 135 140
Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys
145 150 155 160
Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro
165 170 175
Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys
180 185 190
Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys
210 215 220
Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val
225 230 235 240
Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser
245 250 255
Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Thr Glu Cys Cys His Gly
260 265 270
Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile
275 280 285
Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu
290 295 300
Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp
305 310 315 320
Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser
325 330 335
Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly
340 345 350
Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val
355 360 365
Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys
370 375 380
Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu
385 390 395 400
Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys
405 410 415
Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu
420 425 430
Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val
435 440 445
Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His
450 455 460
Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val
465 470 475 480
Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg
485 490 495
Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe
500 505 510
Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala
515 520 525
Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu
530 535 540
Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys
545 550 555 560
Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala
565 570 575
Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe
580 585 590
Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly
595 600 605
Leu

Claims (103)

1.用于鉴定患有慢性肾病的主体为具有增加的疾病进展风险的方法，所述方法包括：
a）检测所述主体的样品中一种、两种、三种、四种或五种生物标记物的量，所述生物标记物选自GDF-15、EGF、NT-proBNP、ApoH以及白蛋白与肌酸酐的比率（AUCR）；
b）将所述一种、两种、三种、四种或五种生物标记物的量与所述一种、两种、三种、四种或五种生物标记物的参考量进行比较；以及
c）如果所述样品中的一种、两种、三种、四种或五种生物标记物的量大于所述一种、两种、三种、四种或五种生物标记物的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。
2.根据权利要求1的方法，其中所述方法包括：a）检测所述主体的样品中GDF-15的量；b）将所述GDF-15的量与GDF-15的参考量进行比较；以及c）如果所述样品中GDF-15的量大于GDF-15的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。
3.根据权利要求1或2的方法，其中所述方法包括：a）检测所述主体的样品中EGF的量；b）将所述EGF的量与EGF的参考量进行比较；以及c）如果所述样品中EGF的量大于EGF的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。
4.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述方法包括：a）检测所述主体的样品中NT-proBNP的量；b）将所述NT-proBNP的量与NT-proBNP的参考量进行比较；以及c）如果所述样品中NT-proBNP的量大于NT-proBNP的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。
5.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述方法包括：a）检测所述主体的样品中ApoH的量；b）将所述ApoH的量与ApoH的参考量进行比较；以及c）如果所述样品中ApoH的量大于ApoH的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。
6.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述方法包括：a）检测所述主体的样品中AUCR的量；b）将所述AUCR的量与AUCR的参考量进行比较；以及c）如果所述样品中AUCR的量大于AUCR的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。
7.用于鉴定患有慢性肾病的主体为具有增加的疾病进展风险的方法，所述方法包括：
a）检测所述主体的样品中ApoH和一种或多种另外的生物标记物的量，所述另外的生物标记物选自GDF-15、EGF、NT-proBNP以及白蛋白与肌酸酐的比率（AUCR）；
b）将所述ApoH和所述一种或多种另外的生物标记物的量与ApoH和所述一种或多种另外的生物标记物的参考量进行比较；以及
c）如果所述样品中ApoH的量和一种或多种另外的生物标记物的量大于所述ApoH和所述一种或多种另外的生物标记物的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。
8.根据权利要求7的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15。
9.根据权利要求7的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF。
10.根据权利要求7的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP。
11.根据权利要求7的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为AUCR。
12.根据权利要求7的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和EGF。
13.根据权利要求7的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和NT-proBNP。
14.根据权利要求7的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和AUCR。
15.根据权利要求7的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和NT-proBNP。
16.根据权利要求7的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和AUCR。
17.根据权利要求7的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP和AUCR。
18.根据权利要求7的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和AUCR。
19.根据权利要求7的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15、NT-proBNP和AUCR。
20.根据权利要求7的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、NT-proBNP和AUCR。
21.根据权利要求7的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、GDF-15和AUCR。
22.根据权利要求7的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、GDF-15和NT-proBNP。
23.根据权利要求7的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、GDF-15、NT-proBNP和AUCR。
24.用于鉴定患有慢性肾病的主体为具有增加的疾病进展风险的方法，所述方法包括：
a）检测所述主体的样品中白蛋白与肌酸酐的比率（AUCR）和一种或多种另外的生物标记物的量，所述另外的生物标记物选自GDF-15、EGF、NT-proBNP以及ApoH；
b）将所述AUCR和所述一种或多种另外的生物标记物的量与AUCR和所述一种或多种另外的生物标记物的参考量进行比较；以及
c）如果所述样品中AUCR的量和一种或多种另外的生物标记物的量大于所述AUCR和所述一种或多种另外的生物标记物的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。
25.根据权利要求24的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15。
26.根据权利要求24的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF。
27.根据权利要求24的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP。
28.根据权利要求24的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为ApoH。
29.根据权利要求24的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和EGF。
30.根据权利要求24的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和NT-proBNP。
31.根据权利要求24的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和ApoH。
32.根据权利要求24的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和NT-proBNP。
33.根据权利要求24的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和ApoH。
34.根据权利要求24的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP和ApoH。
35.根据权利要求24的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和ApoH。
36.根据权利要求24的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15、NT-proBNP和ApoH。
37.根据权利要求24的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、NT-proBNP和ApoH。
38.根据权利要求24的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、GDF-15和ApoH。
39.根据权利要求24的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、GDF-15和NT-proBNP。
40.根据权利要求24的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、GDF-15、NT-proBNP和ApoH。
41.用于鉴定患有慢性肾病的主体为具有增加的疾病进展风险的方法，所述方法包括：
检测所述主体的样品中NT-proBNP和一种或多种另外的生物标记物的量，所述另外的生物标记物选自GDF-15、EGF、白蛋白与肌酸酐的比率（AUCR）以及ApoH；b）将所述NT-proBNP和所述一种或多种另外的生物标记物的量与NT-proBNP和所述一种或多种另外的生物标记物的参考量进行比较；以及c）如果所述样品中NT-proBNP的量和一种或多种另外的生物标记物的量大于所述NT-proBNP和所述一种或多种另外的生物标记物的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。
42.根据权利要求41的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15。
43.根据权利要求41的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF。
44.根据权利要求41的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为AUCR。
45.根据权利要求41的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为ApoH。
46.根据权利要求41的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和EGF。
47.根据权利要求41的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和AUCR。
48.根据权利要求41的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和ApoH。
49.根据权利要求41的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和AUCR。
50.根据权利要求41的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和ApoH。
51.根据权利要求41的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为AUCR和ApoH。
52.根据权利要求41的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和ApoH。
53.根据权利要求41的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15、AUCR和ApoH。
54.根据权利要求41的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、AUCR和ApoH。
55.根据权利要求41的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、GDF-15和ApoH。
56.根据权利要求41的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、GDF-15和AUCR。
57.根据权利要求41的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、GDF-15、AUCR和ApoH。
58.用于鉴定患有慢性肾病的主体为具有增加的疾病进展风险的方法，所述方法包括：
a）检测所述主体的样品中GDF-15和一种或多种另外的生物标记物的量，所述另外的生物标记物选自NT-proBNP、EGF、白蛋白与肌酸酐的比率（AUCR）以及ApoH；
b）将所述GDF-15和所述一种或多种另外的生物标记物的量与GDF-15和所述一种或多种另外的生物标记物的参考量进行比较；以及
c）如果所述样品中GDF-15的量和一种或多种另外的生物标记物的量大于所述GDF-15和所述一种或多种另外的生物标记物的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。
59.根据权利要求58的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP。
60.根据权利要求58的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF。
61.根据权利要求58的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为AUCR。
62.根据权利要求58的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为ApoH。
63.根据权利要求58的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP和EGF。
64.根据权利要求58的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP和AUCR。
65.根据权利要求58的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP和ApoH。
66.根据权利要求58的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和AUCR。
67.根据权利要求58的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和ApoH。
68.根据权利要求58的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为AUCR和ApoH。
69.根据权利要求58的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF和ApoH。
70.根据权利要求58的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP、AUCR和ApoH。
71.根据权利要求58的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、AUCR和ApoH。
72.根据权利要求58的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、NT-proBNP和ApoH。
73.根据权利要求58的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、NT-proBNP和AUCR。
74.根据权利要求58的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为EGF、NT-proBNP、AUCR和ApoH。
75.用于鉴定患有慢性肾病的主体为具有增加的疾病进展风险的方法，所述方法包括：
a）检测所述主体的样品中EGF和一种或多种另外的生物标记物的量，所述另外的生物标记物选自NT-proBNP、GDF-15、白蛋白与肌酸酐的比率（AUCR）以及ApoH；
b）将所述EGF和所述一种或多种另外的生物标记物的量与EGF和所述一种或多种另外的生物标记物的参考量进行比较；以及
c）如果所述样品中EGF的量和一种或多种另外的生物标记物的量大于所述EGF和所述一种或多种另外的生物标记物的参考量，则将所述主体鉴定为具有增加的疾病进展风险。
76.根据权利要求75的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP。
77.根据权利要求75的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15。
78.根据权利要求75的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为AUCR。
79.根据权利要求75的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为ApoH。
80.根据权利要求75的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP和GDF-15。
81.根据权利要求75的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP和AUCR。
82.根据权利要求75的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP和ApoH。
83.根据权利要求75的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和AUCR。
84.根据权利要求75的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和ApoH。
85.根据权利要求75的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为AUCR和ApoH。
86.根据权利要求75的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15和ApoH。
87.根据权利要求75的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为NT-proBNP、AUCR和ApoH。
88.根据权利要求75的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15、AUCR和ApoH。
89.根据权利要求75的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15、NT-proBNP和ApoH。
90.根据权利要求75的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15、NT-proBNP和AUCR。
91.根据权利要求75的方法，其中所述一种或多种另外的生物标记物为GDF-15、NT-proBNP、AUCR和ApoH。
92.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述检测包括使所述样品与检测试剂的组合体外接触，每一试剂对所述生物标记物之一具有特异性结合亲和力。
93.根据权利要求92的方法，其中所述试剂为抗体或其片段。
94.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述样品为血清或尿液样品。
95.根据前述权利要求中任一项的方法，其中当所述样品中所述生物标记物的量大于所述参考量的中位数时，所述主体被鉴定为具有增加的疾病进展风险。
96.根据前述权利要求中任一项的方法，其中当所述样品中所述生物标记物的量处于所述参考量的第四四分位数范围内时，所述主体被鉴定为具有增加的疾病进展风险。
97.根据前述权利要求中任一项的方法，所述方法还包括如果所述主体被鉴定为具有增加的疾病进展风险，则推荐治疗慢性肾病的疗法的步骤。
98.根据前述权利要求中任一项的方法，所述方法还包括如果所述主体被鉴定为具有增加的疾病进展风险，则向所述主体施用治疗慢性肾病的药剂的步骤。
99.根据权利要求97或98的方法，其中所述疗法包括试验中新药的疗法。
100.适配于进行前述权利要求中任一项的方法的装置，所述装置包括：
a）分析单元，其包括特异性结合生物标记物的检测试剂的组合，所述分析单元适配于使来自所述主体的样品与所述检测试剂体外接触；
b）评价单元，其包括具有数据库以及所述数据库中的计算机实现的算法的计算装置，当所述计算装置执行所述计算机实现的算法时，所述算法测定来自所述主体的样品中所述生物标记物的量，并将测定的所述生物标记物的量与生物标记物的参考量进行比较，并且如果在所述测定步骤中所测定的所述生物标记物的量大于所述生物标记物的参考量，则提供处于增加的疾病进展风险的诊断。
101.根据权利要求100的装置，其中所述数据库还包含所述生物标记物的参考量。
102.适配于进行前述权利要求中任一项的方法的试剂盒，其包含针对生物标记物的检测试剂和用于进行所述方法的说明书。
103.根据权利要求102的试剂盒，其还包含针对生物标记物的检测试剂的组合。
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